FR2947180A1 - Methodes et compositions pour le traitement de cancers - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne des utilisations ou des méthodes pour le traitement de pathologies prolifératives, en particulier des cancers, mettant en oeuvre des composés du ruthénium, ainsi que des compositions les contenant.

Description

METHODES ET COMPOSITIONS POUR LE TRAITEMENT DE CANCERS La présente invention concerne des utilisations ou des méthodes pour le traitement de pathologies prolifératives, en particulier des cancers, mettant en oeuvre des 5 composés du ruthénium et des compositions les contenant.

Il est connu que les complexes du platine présentent des activités antitumorales importantes. Le plus connu d'entre eux est le cisplatine, qui est couramment utilisé pour le traitement clinique de nombreux cancers. La résistance de certaines io cellules cancéreuses et la toxicité intrinsèque du platine font partie des problèmes rencontrés lors de l'utilisation de ce composé. Depuis les années 70, les recherches s'intensifient pour trouver des molécules susceptibles de se substituer au cisplatine et depuis quelques années des composés contenant du ruthénium sont apparus comme pouvant être une alternative intéressante à ceux qui 15 contiennent du platine. Certains complexes du ruthénium ont ainsi déjà été décrits comme pouvant être une alternative lors de traitements anticancéreux.

Il existe donc un besoin de nouveaux agents anti-cancéreux qui pourraient être une alternative à ceux actuellement utilisés, et avantageusement plus efficaces, et/ou 20 qui présenteraient des effets secondaires indésirables moindres.

La présente invention décrit ainsi des composés du ruthénium qui présentent des propriétés anti-tumorales particulièrement intéressantes. Ces composés sont des composés organométalliques, c'est-à-dire qu'ils contiennent au moins une liaison 25 covalente Carbone-Métal (C-M, M étant le ruthénium). De plus, cette liaison C-Ru est stabilisée par deux autres liaisons intramoléculaires azote-ruthénium (N-Ru), les atomes d'azote étant des éléments de la partie organique liée au ruthénium par l'atome de carbone.

Dans ce type d'arrangement d'atomes, le ruthénium fait donc partie d'une entité cyclique et cette classe de composés est communément appelée par les chimistes de la discipline la classe des composés cyclométallés. L'entité cyclique contenant le ruthénium est appelée un métallocycle. Dans un tel métallocycle, le ruthénium est donc lié à un ligand organique à la fois par une liaison covalente carbone-ruthénium et par deux liaisons de type donneur-accepteur (acide-base de Lewis, ou liaison de coordination) azote-ruthénium. L'existence d'un tel métallocycle dans une molécule organométallique confère à celle-ci des propriétés particulières en termes de réactivité et de stabilité thermodynamique. Divers types d'atomes de carbone (aromatiques, benzyliques ou aliphatiques) peuvent être métallés et la nature du lien entre l'atome donneur (l'azote) et l'atome de carbone peut être modifiée de multiples façons.

Selon un premier aspect, la présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé complexe de ruthénium, de formule générale suivante : m+ (I), formule (I) dans laquelle : LI, L2, L3, identiques ou différents, représentent chacun soit un ligand donneur de 2 électrons par un atome d'azote, d'oxygène, de phosphore ou de soufre, soit un atome d'halogène, Y- est un contre-ion (lorsque m = 1), m est 0 ou 1, XI et X2, différents l'un de l'autre, représentent l'un, un atome d'azote et l'autre, un atome de carbone, entre X1 et X2, représentée par une ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec XI, X2 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes, et entre N et XI, représentée par l'autre ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec l'atome d'azote, XI et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes.

Dans le contexte de l'invention, le terme support acceptable sur le plan pharmaceutique désigne des substances telles que les excipients, les véhicules, les adjuvants, les tampons qui sont classiquement utilisés, en combinaison avec le(s) principe(s) actif(s), pour la préparation d'un médicament. Le choix de tels io supports dépend essentiellement de la voie d'administration envisagée.

Les composés de l'invention peuvent être sous forme de sels, solvates et/ou de pro-drogues pharmaceutiquement acceptables. Les pro-drogues sont des variants des composés de l'invention qui peuvent être transformés in vivo en composés de 15 formule générale selon l'invention.

Par atome d'halogène , on entend un atome de fluor, de chlore, de brome ou d'iode. Avantageusement, l'atome d'halogène est un atome de chlore.

20 Les ligands donneurs de deux électrons par un atome d'azote, d'oxygène ou de soufre incluent, par exemple, H2O, di((C1_6)alkyl)O, di((C1_6)alkyl)S, di((C,_ 6)alkyl)S(0), (C1_6)alkylSO3 , di((C1_6)alkyl)C=O, (C1_6)alkylCO2-.

D'autres ligands incluent notamment des ligands nitriles, comme par exemple des 25 ligands de formule (C,_6)alkylCN (en particulier CH3CN) et des ligands pyridines, éventuellement substitués, sur un ou plusieurs atomes de carbone des cycles pyridines, par un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine (N(alkyle ou 30 aryle)XH2_X où x est un entier pouvant varier de 0 à 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3_y+ où y est un entier pouvant varier de 0 à 3), hydroxylamine (N(OH)Z(alkyle ou aryle)2_Z où z est un entier pouvant varier de 1 à 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-NI,(alkyle ou aryle)2_, où w est un entier pouvant varier de 0 à 2) ou cyano. Les définitions des radicaux chimiques données dans ce paragraphe valent pour l'ensemble des utilisations de ces termes dans la présente demande.

Parmi d'autres ligands, on peut notamment citer les amines primaires (C,_ 6)alkylNH2, telles que la méthylamine ou l'éthylamine. io Les ligands donneurs de deux électrons par un atome de phosphore incluent les ligands de type phosphine. Avantageusement, ils sont de formule P(Ph)3_X(alkyle)X, avec x représentant 0, 1 ou 2, de préférence x représente 2, et Ph représentant le groupe phényle. Parmi ces ligands, on peut notamment citer P(Ph)(CH3)2.

15 Selon l'invention, le terme alkyle désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, ayant avantageusement de 1 à 6 atomes de carbone, tel que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle, etc. Les groupes ayant de 1 à 4 atomes de carbone sont préférés. Les groupes alkyles peuvent être substitués par un groupe aryle, auquel 20 cas on parle de groupe arylalkyle. Des exemples de groupes arylalkyles sont notamment benzyle et phénéthyle. Les groupes alkyles ou arylalkyles peuvent éventuellement présenter un ou plusieurs substituants, choisis notamment parmi un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide 25 sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.

Les groupes aryles sont des systèmes hydrocarbonés aromatiques mono-, bi- 30 ou tri-cycliques, éventuellement interrompus par au moins un hétéroatome (en particulier O, S ou N). Préférentiellement, les groupes aryles incluent les systèmes hydrocarbonés aromatiques monocycliques ou bi-cycliques ayant de 6 à 18 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 6 atomes de carbone. On peut citer par exemple les groupes phényle, naphtyle et bi-phényle. Lorsqu'ils sont interrompus par des hétératomes, les groupes aryles incluent les cycles pyridyle, imidazoyle, pyrrolyle et furanyle. Les groupes aryles peuvent éventuellement présenter un ou plusieurs substituants, choisis notamment parmi un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, io nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.

Selon un mode particulier, deux ou trois des groupements LI, L2, et L3 peuvent être reliés entre eux par au moins une liaison covalente. Dans ce cadre, on peut 15 notamment citer les motifs bipyridine, phénanthroline ou terpyridine, éventuellement substitués, notamment par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, 20 trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.

De manière préférentielle, les composés de l'invention présentent un, deux ou trois groupements LI, L2, et L3 représentant un ligand donneur de deux électrons par 25 atome d'azote.

LI, L2, et/ou L3, en particulier, peuvent représenter, pris seuls, deux à deux, ou par trois, un groupement pyridine, bipyridine, phénanthroline, ou terpyridine, lesdits groupements étant éventuellement substitués, en particulier par au moins un atome 30 d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (O- aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.

De manière plus spécifique, les composés selon l'invention sont tels que les groupements LI, L2, et L3 forment à eux trois un ligand donneur de deux électrons par atome d'azote, par exemple les groupements LI, L2, et L3 peuvent former ensemble la terpyridine ou la 2-(2-pyridyle)-1,10-phénanthroline, éventuellement substituée, sur un ou plusieurs io atomes de carbone de ses cycles pyridines, par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou 15 cyano. De préférence, le substituant est un radical aryle, de préférence le phényle, avantageusement lui-même substitué par un radical méthyle ou méthoxyle.

Selon l'invention, les termes bipyridine , phénanthroline , terpyridine et 2-(2-pyridyle)-1,10-phénanthroline sont tels que définis ci-après, correspondant 20 respectivement aux ligands 5, 6, 7 et 8 : (5) (6) (7) (8)

Y- dans les composés de l'invention est un contre-ion et est seulement présent 25 dans le composé lorsque le complexe du ruthénium porte une charge positive. Y-est de préférence un anion peu nucléophile, tel que par exemple BF4-, B(C6H5)4 , PF6 , CF3S03 , tosylate (p-toIyISO3-), mésylate (MeSO3-), SO42-, CF3CO2-, CH3CO2-, bicarbonate (HCO3 ), CI04-, ou NO3 , en particulier PF6 .

Selon un mode particulier de l'invention, m est égal à 1.

La ligne courbe, avec XI, X2 et Ru dans la formule générale, représente un cycle. Ce cycle est généralement constitué de 5 à 8 atomes (incluant les atomes représentés par XI, X2 et Ru dans la formule (I)), de préférence de 5 à 6 atomes, et de manière encore plus préférée 5 atomes. Typiquement, les atomes dudit cycle io (autres que ceux représentés dans la formule générale) sont choisis parmi les atomes de carbone, d'azote, d'oxygène et de soufre. De préférence, ces atomes ne sont que des atomes de carbone. Chacun de ces atomes peut indépendamment dudit cycle former des structures linéaires ou cycliques, saturées ou non, pour lesquelles il n'existe pas de limitations particulières. 15 La ligne courbe, avec XI, N et Ru dans la formule générale, représente un autre cycle dont la liaison Ru-XI est commune au premier cycle. Ce cycle est généralement constitué de 5 à 8 atomes (incluant les atomes représentés par XI, N et Ru dans la formule (I)), de préférence de 5 à 6 atomes, et de manière encore 20 plus préférée 5 atomes. Typiquement, les atomes dudit cycle (autres que ceux représentés dans la formule générale) sont choisis parmi les atomes de carbone, d'azote, d'oxygène et de soufre. De préférence, ces atomes ne sont que des atomes de carbone. Chacun de ces atomes peut indépendamment dudit cycle former des structures linéaires ou cycliques, saturées ou non, pour lesquelles il 25 n'existe pas de limitations particulières.

Ainsi, parmi les unités structurales incluant les deux lignes courbes, on peut notamment citer les deux groupements représentés ci-dessous: avec R=HetR'=-OMe ou R = -Ph(p-Me) et R' = Me Les composés de l'invention incluent également les isomères optiques et géométriques, pris individuellement ou en mélange (notamment les racémates), des composés de formule (I). Parmi les composés inclus dans la formule générale (I), on peut citer notamment les composés représentés à la figure 1 (composés numérotés (1), (2) et (3)). Selon un aspect particulier, la composition selon l'invention comprend au moins un des

io composés (1), (2) et (3). Méthodes de préparation

Il existe plusieurs méthodes de synthèse des composés de l'invention. La plus avantageuse est celle qui utilise la réaction dite d'activation CH intramoléculaire ou

15 réaction de cyclométallation (cf. A. D. Ryabov, Chem. Rev. 1990, 90, 403-424) qui conduit directement à la formation d'une liaison C-Ru à partir d'une liaison C-H.

Une autre méthode comprend la métallation préalable du carbone destiné à être lié au ruthénium, en faisant réagir, par exemple, le ligand correspondant avec une base forte, comme le n-BuLi, ce qui conduit à un organo-lithien, dont le lithium est

20 ensuite substitué par le ruthénium. Cette deuxième voie de synthèse a été utilisée avec succès pour obtenir des composés analogues au composé (1) mais pour lesquels les groupements pyridiniques du ligand bis(2-pyridyl)-1,3-benzène ont été remplacés par une entité CH2NMe2 (voir Organometallics, 1996, 15, 941-948). Le composé (1) a été obtenu par la première voie d'après l'équation suivante : PF6 (1) en suivant le protocole décrit dans les publications suivantes: J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 8521-8522 et Inorg. Chem. 1993, 32, 4539-4543. Les composés (2) et (3) ont également été synthétisés grâce à la première voie, en suivant le protocole décrit dans Eur. J. Inorg. Chem. 2000, 113-119. Les schémas réactionnels sont représentés ci-dessous : MeO (2) OMe PF6 e PF6 (3), Ar = p-OMePh, Ar' = p-MePh

Comme spécifié ci-dessus, les compositions selon l'invention sont particulièrement 15 avantageuses pour traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire, en particulier des cancers. Les cancers incluent ceux à tumeurs solides ou liquides. 25 2947180 i0 Les cancers correspondent notamment à des glioblastomes, des neuroblastomes, des leucémies promyélocytaires, les cancers de la prostate, des ovaires, des poumons, des seins, des voies digestives, en particulier du foie, du pancréas, de la tête et du cou, du colon, les lymphomes non-Hodgkiniens et les mélanomes. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un composé de formule (I), tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire, en particulier des cancers. Les composés de l'invention présentent un effet antiprolifératif vis-à-vis de cellules tumorales. Ils sont particulièrement utiles pour traiter des cancers par accumulation des cellules tumorales en phase GO/G1, ou G2/M et éventuellement par induction d'apoptose ou d'un autre type de mort cellulaire des cellules tumorales.

En effet, sans vouloir se lier à une quelconque théorie de l'invention, les composés de l'invention semblent notamment capables d'accumuler les cellules tumorales en phase GO/G1, ou G2/M et donc en bloquant leur cycle cellulaire, mais semblent également capables de générer leur mort rapidement, en particulier lorsque leur concentration est augmentée, signe d'une toxicité dose-dépendante.

En outre, les compositions selon l'invention sont particulièrement avantageuses pour traiter des tumeurs résistantes au cisplatine ou à d'autres drogues anticancéreuses. Les compositions selon l'invention peuvent être administrées de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, elles peuvent être administrées de manière systémique, par voie orale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, intra-musculaire, sous-cutanée, trans-dermique, 5 i0 Il intra-artérielle, etc., les voies intraveineuse, intra-musculaire, sous-cutanée, orale et par inhalation étant préférées. Pour les injections, les compositions sont généralement sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. A cet égard, les composés sont généralement dissous dans des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Ainsi, les compositions selon l'invention peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des io formulations liquides et/ou injectables sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l'acacia, etc.

Les compositions peuvent également être administrées sous forme de gels, huiles, 15 comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que de la cellulose, des carbonates ou des amidons.

20 Il est entendu que le débit d'injection et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie concernée, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés de l'invention sont administrés à des doses pouvant varier entre 0,1 pg et 100 mg/kg de poids corporel, plus généralement entre 0,01 et 10 mg/kg, typiquement entre 0,1 et 10 mg/kg. En outre, 25 des injections répétées peuvent être réalisées. D'autre part, pour des traitements chroniques, des systèmes à libération prolongée et/ou retardée peuvent être avantageux.

L'invention concerne également une méthode de traitement d'une pathologie liée à une hyperprolifération cellulaire, en particulier un cancer, par l'administration à un sujet atteint d'une telle pathologie d'une composition selon l'invention.

Dans le contexte de l'invention, le terme traitement désigne le traitement préventif, curatif, palliatif, ainsi que la prise en charge des patients (réduction de la souffrance, amélioration de la durée de vie, ralentissement de la progression de la maladie, réduction de la croissance tumorale, etc.). Le traitement peut en outre être réalisé en combinaison avec d'autres agents ou traitements chimiques ou physiques (chimiothérapie, radiothérapie, thérapie génique, etc.). Les traitements et médicaments de l'invention sont tout particulièrement destinés aux humains.

Ainsi, les composés selon l'invention peuvent être utilisés de manière avantageuse en combinaison avec un traitement anti-cancéreux mettant en oeuvre des rayonnements, tel que la radiothérapie.

Selon un autre aspect de l'invention, les compositions selon l'invention peuvent être utilisées avec d'autres agents chimiques ou traitements thérapeutiques anticancéreux, tel que les agents chimiques thérapeutiques suivants : le cisplatine, le carboplatine, le taxotère ou le taxol, avantageusement le taxol. Les composés de l'invention sont de préférence conditionnés et administrés de façon combinée, séparée ou séquentielle par rapport à d'autres agents ou traitements thérapeutiques.

La présente invention concerne aussi une méthode pour inhiber in vivo, in vitro ou ex vivo la prolifération de cellules tumorales, comprenant la mise en contact desdites cellules tumorales avec une composition selon l'invention. Les cellules tumorales peuvent être notamment celles des pathologies spécifiées ci-dessus. 15 LEGENDE DES FIGURES

Dans les figures et les exemples qui suivent, le terme RDC signifie composé dérivé du ruthénium (Ruthenium Derived Compound) .

FIGURE 1 : Exemples de composés de formule (I). FIGURE 2 : Résultats du test MTT pour les cellules A172. Les graphiques sont une moyenne de 8 points avec les écarts-types sur une expérience représentative sur 4 effectuées. La ligne horizontale et épaisse indique I'IC50 pour chaque graphique.

D'autres aspects et avantages de la présente demande apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.

EXEMPLES Analyse des effets cytostatiques et cvtotoxiques des composés dérivés du ruthénium sur des cultures de lignées cellulaires humaines de _glioblastome et de cancer du colon

20 La première étape dans la caractérisation des effets anticancéreux des composés dérivés du ruthénium consiste à tester leur activité sur des lignées tumorales maintenues en culture et de comparer ces effets sur des lignées qui présentent des caractéristiques différentes de résistance aux traitements anticancéreux. Une lignée de glioblastome humain (A172) et une lignée de cancer du colon (HCT116) 25 ont été utilisées afin de tester les effets cytostatiques des composés selon l'invention. Le cisplatine a été choisi comme agent cytotoxique de comparaison. En première approche, un test MTT a été utilisé pour mesurer l'activité d'une enzyme mitochondriale, ce qui donne une estimation du nombre de cellules. 13 30 Résultats

Plusieurs composés dérivés du ruthénium diminuent le nombre de cellules tumorales sur l'ensemble des lignées testées, A172, HCT116. Pour les composés les plus actifs (composés (1), (2), (3)), cet effet est observé à une concentration similaire ou inférieure à celle du cisplatine. En se basant sur ces expériences, il a été estimé des valeurs d'IC50 correspondant à la concentration nécessaire pour diminuer de moitié la quantité de cellules tumorales présentes par rapport à la condition contrôle. Ces résultats sont résumés dans le tableau 1.

IC50 pM A-172 HCT-116 Composé (1) 0,1-1 0,1-1 Composé (3) 0,1-1 0,1-1 Composé (2) 1-5 1- 5 Tableau 1 Méthodes : test MTT Les expériences sont réalisées sous une hotte à flux laminaire vertical. Le milieu de croissance cellulaire est composé de DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), HEPES, 10% FCS (Fetal Calf Serum), 5% PS (Pénicilline, Streptomycine) et est stocké à + 4 °C, ainsi que le PBS (Phosphate Buffer Saline, pH= 7,4). La Trypsine-EDTA (0,25 % trypsine dans 1 mM Na4(EDTA)) et le FCS sont stockés à -15 °C et décongelés avant utilisation. Le MTT (bromure de 4,5-diméthylthiazol-2-diphényltétrazolium) est un solide jaune produit par la marque Aldrich. Il est mis en solution aqueuse stérile à la concentration de 5 mg/mL et conservé à + 4°C. Il est dilué à 10% dans du milieu de culture cellulaire lors de son utilisation comme agent de coloration de cellules vivantes.

Les cellules humaines cancéreuses du colon (HCT-116) ou gliales (A-172) ont été achetées auprès de European Type Culture Collection, et placées dans un incubateur à 37°C, 5% CO2 dans des boîtes de Pétri rondes (diamètre 10 cm) avec 14 10 mL de milieu. Quand elles sont assez nombreuses (confluence de 70%), elles sont lavées au PBS à température ambiante puis mélangées avec 1,5 mL de Trypsine-EDTA pour les décrocher de la boîte de Pétri. Cette suspension cellulaire est placée dans du milieu de culture chauffé à 37°C, puis cette solution est étalée dans des plaques de culture cellulaire de 96 puits (100 pL/puits) qu'on laisse incuber pendant 24 à 48 heures, jusqu'à atteindre une confluence cellulaire de 50 %. Le milieu est renouvelé par du milieu cellulaire contenant différentes concentrations de RDCs et cisplatine à 37°C, qu'on laisse incuber. Au bout de 48 heures, le milieu est remplacé par une solution à 37°C de MTT dans du milieu, io qu'on place dans l'incubateur pendant au moins une heure ou jusqu'à ce que des cristaux violets issus de la complexation du MTT soient formés quantitativement au fond de chaque puits. Finalement, ce milieu est remplacé par 100 pL/puits d'une solution HCl/ 'PrOH 0,04 M à température ambiante pour dissoudre les cristaux. Une lecture de la densité optique des solutions obtenues est faite. On compare les 15 densités optiques des puits traités aux RDCs ou cisplatine à celles des puits non traités (contrôles). Une manipulation consiste à traiter 4 plaques (3 X RDC et le cisplatine). Chaque plaque contient un seul produit à différentes concentrations. 9 colonnes sont traitées à 50, 20, 15, 10, 7,5, 5, 2,5, 1 et 0,2 pM et 3 colonnes sont laissées comme 20 contrôles. La colonne contrôle située à chaque extrémité de la plaque n'est pas prise en compte. La troisième colonne contrôle est prise en compte pour les calculs. La détermination de l'IC50 et les tests statistiques de variance et Newmann-Keuls sont effectués à l'aide du logiciel Prism GraphPad v. 4. 25 Résultats des tests MTT: Les résultats des tests MTT sont donnés sur la figure 2 pour les A172.

Les cellules A172 ont été cultivées en plaques de 96 puits en milieu DMEM avec 30 10% de sérum de veau. A 50% de confluence, les cellules ont été traitées pendant 48 h avec le cisplatine (cisp) ou les divers composés dérivés du ruthénium aux concentrations indiquées (1, 5, 15, 50 pM). La quantité de cellules présentes dans les puits a été évaluée par un test MTT (MTT, Sigma) dont les produits de la réaction sont quantifiés avec un lecteur de plaque Elisa (Metertech, USA) (490-650 nm). Les résultats obtenus ont été rapportés aux valeurs de la condition contrôle (100 % de viabilité).

Claims (18)

1. REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé complexe de ruthénium de formule 5 générale suivante : m+ (I) formule dans laquelle : 10 LI, L2, L3, identiques ou différents, représentent soit un ligand donneur de 2 électrons par un atome d'azote, d'oxygène, de phosphore ou de soufre, soit un atome d'halogène, Y- est un contre-ion (lorsque m = 1), m est 0 ou 1, 15 XI et X2, différents l'un de l'autre, représentent l'un, un atome d'azote et l'autre, un atome de carbone, entre XI et X2, représentée par une ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec XI, X2 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes, et 20 entre N et XI, représentée par l'autre ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec l'atome d'azote, X1 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes.
2. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce 25 que LI, L2, et/ou L3 représentent un groupement pyridine, bipyridine, phénanthroline 25ou terpyridine, éventuellement substitué, en particulier par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.
3. 3. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les groupements LI, L2, et L3 forment à eux trois un ligand donneur de deux électrons par atome d'azote, en particulier la terpyridine ou la 2-(2-pyridyle)-1,10-phénanthroline, éventuellement substituée sur un ou plusieurs atomes de carbone de ses cycles pyridines, par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (0-alkyle), aryloxyle (0-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, amine, monoalkylamine, dialkylamine, trialkylammonium, mono- ou dihydroxylamine, hydrazine, azo, diazonium, amide ou cyano.
4. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisé en ce que le substituant porté par la terpyridine ou la 2-(2-pyridyle)-1,10-phénanthroline est un radical aryle, en particulier un phényle substitué par un méthyle ou un méthoxyle.
5. 5. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que Y- est BF4-, B(C6H5)4 , PF6-, CF3SO3-, tosylate (p-tolylSO3-), mésylate (MeSO3 ), SO42 , CF3CO2 , CH3CO2 , bicarbonate (HCO3 ), CI04, ou NO3 .
6. 6. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que m est égal à 1.
7. 7. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la ligne courbe, avec XI, X2 et Ru et/ou avec XI, N et Ru dans la formule générale, représente un cycle constitué de 5 à 6 atomes.
8. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisé en ce que les atomes du ou des cycles sont tous des atomes de carbone.
9. 9. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'ensemble contenant les deux lignes courbes de la formule générale (I) représente 10 l'une des unités structurales suivantes : avec R=HetR'=-OMe ou R = -Ph(p-Me) et R' = Me
10. 10. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les complexes (1) à (3) suivants:+ + _ [PF6l [PF6-] (1) (2) + [PF61 (3)
11. 11. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que le composé est le complexe de formule (1).
12. 12. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire. io
13. 13. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des cancers.
14. 14. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des glioblastomes, des leucémies promyélocytaires, des cancers de la prostate, des ovaires, des poumons, des seins, des voies digestives, en particulier du foie, du pancréas, de la tête et du cou, du colon, des lymphomes non-Hodgkiniens ou des mélanomes.
15. 15. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des cancers par accumulation des cellules tumorales en phase GO/G1 ou G2/M, et éventuellement par induction d'apoptose ou d'un autre type de mort cellulaire.
16. 16. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des tumeurs résistantes au cisplatine ou à d'autres drogues anticancéreuses.
17. 17. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des 15 cancers en combinaison avec un traitement anti-cancéreux mettant en oeuvre des rayonnements, tel que la radiothérapie.
18. 18. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, destinée à traiter des cancers en combinaison avec au moins un autre agent chimique anti-cancéreux, 20 conditionné et administré de façon combinée, séparée ou séquentielle.10