FR2946059A1

FR2946059A1 - Inoculating substrate with liquid sample, comprises tracing homothetic pattern comprising two parallel straight lines on substrate with the sample, where the lines form two groups each having a linear density different from other groups

Info

Publication number: FR2946059A1
Application number: FR0902645A
Authority: FR
Inventors: Emmanuel Jalenques
Original assignee: INTERLAB
Current assignee: INTERLAB
Priority date: 2009-06-02
Filing date: 2009-06-02
Publication date: 2010-12-03
Anticipated expiration: 2029-06-02
Also published as: CN101928665B; JP2011050375A; CN101928665A; DE102010022355B4; DE102010022355A1; FR2946059B1

Abstract

The process comprises tracing a homothetic pattern comprising two parallel straight lines consisting of edges on a substrate (2) with the sample. The lines form two groups each having a linear density different from other groups. The pattern comprise two concentric arcs, or group of arcs of radial circles (99), where each group is radially distant from each other. The arcs form a complete circle, and are concentric around an axis. The substrate is rotated around the axis so that all arcs of the pattern are traced at a constant/identical angular/linear speed.

Description

to La présente invention se rapporte au domaine des automates permettant l'ensemencement d'un substrat de culture avec un échantillon à analyser, généralement un échantillon sensiblement liquide. Elle se rapporte plus particulièrement à un procédé d'ensemencement, plus particulièrement à un motif d'ensemencement d'un échantillon sur un 15 substrat. Chaque échantillon est prélevé par l'automate dans un bac d'échantillon, à l'aide d'un stylet, puis réparti à la surface du substrat à l'aide du même stylet. Dans les automates de l'art antérieur l'échantillon est ensemencé selon 20 un motif formant une spirale sur le substrat. Le motif est réalisé en déplaçant radialement le stylet à vitesse linéaire constante, alors que la boite de Pétri tourne sur elle-même à vitesse angulaire constante. Une telle méthode est particulièrement avantageuse en ce qu'elle permet de faire diminuer progressivement la densité surfacique en échantillon à mesure ou l'on s'éloigne 25 du centre de la boîte. Cependant, l'interprétation des résultats est compliquée et nécessite des abaques particuliers à l'ensemenceur utilisé. Les risques d'erreur d'interprétation sont importants. L'invention a pour but de proposer un procédé qui permette d'obtenir un résultat plus facilement et plus surement. 30 Selon l'invention, un procédé, pour ensemencer un substrat avec un échantillon sensiblement liquide est caractérisé en ce qu'avec l'échantillon, on trace sur le substrat un motif comprenant au moins deux lignes parallèles entre elles. Ces lignes peuvent êtres droites ou courbes. Elles peuvent composer des formes, de préférence des formes homothétiques entre elles. Ces formes peuvent être des carrés. Ces lignes peuvent en outre former au moins deux groupes, chaque groupe de lignes ayant une densité linéaire différente de chacun des autres groupes. The present invention relates to the field of automata allowing the seeding of a culture substrate with a sample to be analyzed, generally a substantially liquid sample. It relates more particularly to a seeding process, more particularly to a pattern of seeding a sample onto a substrate. Each sample is taken by the automaton in a sample tray, using a stylus, and then spread on the surface of the substrate using the same stylus. In prior art machines the sample is seeded in a spiral pattern on the substrate. The pattern is achieved by moving the stylus radially at a constant linear velocity, while the Petri dish turns on itself at constant angular velocity. Such a method is particularly advantageous in that it makes it possible gradually to reduce the surface density in sample as one moves away from the center of the box. However, the interpretation of the results is complicated and requires particular charts to the seed used. The risks of misinterpretation are important. The object of the invention is to propose a method that makes it possible to obtain a result more easily and more surely. According to the invention, a method for seeding a substrate with a substantially liquid sample is characterized in that with the sample, a pattern comprising at least two lines parallel to each other is drawn on the substrate. These lines can be straight or curved. They can compose shapes, preferably homothetic forms between them. These shapes can be squares. These lines may further form at least two groups, each group of lines having a linear density different from each of the other groups.

Les lignes peuvent aussi comprendre des arcs de cercle l'un concentrique à l'autre. Avantageusement, le motif comprend des groupes de un ou plusieurs arcs de plusieurs cercles radialement voisins, chaque groupe étant radialement éloigné l'un de l'autre. Selon un premier mode de mise en oeuvre, les arcs sont concentriques autour d'un axe on fait tourner le substrat autour de l'axe de sorte que tous les arcs de cercle du motif sont tracés à une vitesse angulaire identique et constante. Selon un deuxième mode de mise en oeuvre du procédé, les arcs sont concentriques autour d'un axe on fait tourner le substrat autour de l'axe de sorte que tous les arcs de cercle d'un même groupe sont tracés à une vitesse linéaire identique et constante. Chaque arc de cercle peut former un cercle complet. Plusieurs modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, en référence aux dessins annexés dans lesquels : la figure 1 illustre schématiquement le fonctionnement d'un automate d'ensemencement selon l'invention; la figure 2 est une coupe qui illustre schématiquement un dispositif selon l'invention pour l'approvisionnement de l'automate de la figure 1, ce dispositif comprenant un bras monté sur une tourelle rotative; la figure 3 est une demi-coupe qui illustre des moyens pour fixer un stylet à l'extrémité du bras de la figure 2; les figures 4 et 5 illustrent deux modes de mise en oeuvre d'un procédé d'ensemencement selon l'invention; la figure 6 est une vue en coupe d'une zone stockage et de prélèvement pour un produit à ensemencer, dans l'automate de la figure 1; la figure 7 est une vue en coupe de moyens de nettoyage pour le stylet de la figure 3; La figure 8 est une vue similaire à celles des figures 4 et 5, dans to laquelle la boite de Pétri est carrée et l'ensemencement a la forme de lignes droites parallèles entre elles; et, la figure 9 est une vue similaire à celle de la figure 8, dans laquelle l'ensemencement a la forme de carrés sensiblement homothétiques. La figure 1 illustre un système d'automate pour ensemencer un substrat 15 2 avec un échantillon 3 à tester. Dans l'exemple illustré, le substrat est contenu dans une boîte de Pétri 4, sous forme d'un gel, et le produit 3 est sensiblement liquide. Le système illustré comprend une zone d'approvisionnement 11 pour l'échantillon à tester et une zone d'ensemencement 12. Il comprend des moyens 20 10 pour prélever l'échantillon 3 dans la zone d'approvisionnement et le déposer, au moins en partie, à la surface du substrat 2. L'automate comprend un plateau 6, tournant autour d'un axe vertical X6. Le plateau 6 constitue un support pour la boite de Pétri 4. Il est au moins indirectement entraîné en rotation autour de son axe X6 par un moteur 7. 25 Un procédé d'ensemencement selon l'invention sera plus particulièrement décrit en référence aux figures 4 et 5. Les moyens de prélèvement comprennent une tourelle 13, mobile en rotation autour d'un axe vertical X13, sous l'action d'un moteur 15. La tourelle est munie d'un bras 14. Le bras 14 est mobile dans un plan vertical, 30 relativement à la tourelle 13, en rotation autour d'un axe X14 sensiblement horizontal porté par la tourelle 13. Une extrémité distale 16 du bras 14 porte un tube 17, souple, dont une extrémité 18, s'étendant vers le bas depuis le bras 16, forme un stylet 18. La tourelle sera décrite plus en détails en référence aux figures 2 et 3. De préférence, le tube est réalisé en un matériau peu adhérant, par exemple du polytétrafluoroéthylène (PTFE). Cette disposition est particulièrement avantageuse en ce qu'elle limite les adhérences, notamment lorsqu'un échantillon a une consistance relativement épaisse et collante. L'automate de la figure 1 comprend en outre des moyens de nettoyage 20 pour le stylet. Dans l'exemple illustré, les moyens de nettoyage 20 Io comprennent un bac à déversement 21, des moyens de vidange 22, pour l'évacuation des effluents de nettoyage depuis le bac à déversement 21 et un vase de rétention 23 pour les effluents ainsi évacués par pompage. Dans l'exemple illustré, les moyens de vidange 22 comprennent une pompe à membrane. Le vase de rétention est fermé par un bouchon 24. Le bouchon est 15 percé d'un évent 25, ayant la forme d'un tube. Ce tube 25 est muni d'un filtre 26 de 0,2 m, de sorte que l'atmosphère est protégée de toute éventuelle contamination microbienne. Le bac à déversement 21 et son utilisation seront plus particulièrement décrits en référence à la figure 7. L'automate de la figure 4 comprend aussi des réserves 31 et 32 20 prévues pour contenir des liquides pour le nettoyage du stylet 18. De préférence chacune de ces réserves est amovible et peut être remplacée par une pleine, chaque fois que nécessaire. Chaque réserve 31,32 a la forme d'une bouteille fermée par un bouchon 33 muni d'une prise d'air 34 pour maintenir l'intérieur de la bouteille à la pression atmosphérique à mesure du prélèvement 25 du liquide qu'elle contient. Chaque prise d'air 34 est munie d'un filtre 35, par exemple d'un filtre 0,2 m, afin d'assurer la stérilité du liquide contenue dans la réserve correspondante. Une première réserve 31, parmi les deux réserves contient un produit désinfectant 36, de l'alcool 36 dans l'exemple illustré. La deuxième réserve 37 contient un liquide de rinçage 37, de l'eau distillée 37 30 dans l'exemple illustré. The lines may also include arcs of a circle concentric to each other. Advantageously, the pattern comprises groups of one or more arcs of several radially adjacent circles, each group being radially distant from each other. According to a first embodiment, the arcs are concentric about an axis, the substrate is rotated about the axis so that all the arcs of the pattern are drawn at an identical and constant angular velocity. According to a second embodiment of the method, the arcs are concentric about an axis, the substrate is rotated about the axis so that all the arcs of the same group are drawn at an identical linear speed. and constant. Each arc of a circle can form a complete circle. Several embodiments of the invention will be described below, by way of non-limiting examples, with reference to the accompanying drawings in which: Figure 1 schematically illustrates the operation of a seeding machine according to the invention; FIG. 2 is a section which diagrammatically illustrates a device according to the invention for supplying the automaton of FIG. 1, this device comprising an arm mounted on a rotating turret; Fig. 3 is a half-section illustrating means for attaching a stylet to the end of the arm of Fig. 2; Figures 4 and 5 illustrate two embodiments of a seeding process according to the invention; FIG. 6 is a sectional view of a storage and sampling zone for a product to be seeded, in the automaton of FIG. 1; Fig. 7 is a sectional view of cleaning means for the stylet of Fig. 3; Figure 8 is a view similar to those of Figures 4 and 5, in which the petri dish is square and the seeding has the form of straight lines parallel to each other; and, FIG. 9 is a view similar to that of FIG. 8, in which the seeding is in the form of substantially homothetic squares. Figure 1 illustrates an automated system for seeding a substrate 2 with a sample 3 to be tested. In the illustrated example, the substrate is contained in a Petri dish 4, in the form of a gel, and the product 3 is substantially liquid. The illustrated system comprises a supply zone 11 for the sample to be tested and a seeding zone 12. It comprises means 10 for taking the sample 3 from the supply zone and depositing it, at least in part. at the surface of the substrate 2. The automaton comprises a plate 6, rotating about a vertical axis X6. The plate 6 constitutes a support for the Petri dish 4. It is at least indirectly rotated about its axis X6 by a motor 7. A seeding method according to the invention will be more particularly described with reference to FIGS. and 5. the sampling means comprise a turret 13, mobile in rotation about a vertical axis X13, under the action of a motor 15. The turret is provided with an arm 14. The arm 14 is movable in a vertical plane, relative to the turret 13, in rotation about a substantially horizontal axis X14 carried by the turret 13. A distal end 16 of the arm 14 carries a tube 17, flexible, one end 18, extending towards the down from the arm 16, forms a stylet 18. The turret will be described in more detail with reference to Figures 2 and 3. Preferably, the tube is made of a poorly adherent material, for example polytetrafluoroethylene (PTFE). This arrangement is particularly advantageous in that it limits the adhesions, especially when a sample has a relatively thick and sticky consistency. The automaton of FIG. 1 further comprises cleaning means 20 for the stylet. In the illustrated example, the cleaning means 20 Io comprise a discharge tank 21, emptying means 22, for discharging the cleaning effluents from the discharge tank 21 and a holding tank 23 for the effluents thus discharged. by pumping. In the illustrated example, the emptying means 22 comprise a diaphragm pump. The retention vessel is closed by a plug 24. The plug is pierced with a vent 25, having the shape of a tube. This tube 25 is provided with a filter 26 of 0.2 m, so that the atmosphere is protected from any microbial contamination. The spill tray 21 and its use will be more particularly described with reference to FIG. 7. The automaton of FIG. 4 also comprises reserves 31 and 32 intended to contain liquids for cleaning the stylet 18. these reserves are removable and can be replaced with a full one, whenever necessary. Each reserve 31, 32 is in the form of a bottle closed by a plug 33 provided with an air intake 34 to maintain the inside of the bottle at atmospheric pressure as the liquid 25 it contains is withdrawn. Each air intake 34 is provided with a filter 35, for example a 0.2 m filter, to ensure the sterility of the liquid contained in the corresponding reserve. A first reserve 31, among the two reserves contains a disinfectant 36, alcohol 36 in the example shown. The second reserve 37 contains a rinsing liquid 37, distilled water 37 in the illustrated example.

L'automate comprend en outre des moyens de pompage 40 et des moyens de distribution 41 pour les différents fluides 3, 36, 37 manipulés par l'automate 1. Dans l'exemple illustré, les moyens de pompage comprennent une seringue 40 formée d'un cylindre 42 dans lequel coulisse un piston 43. Le piston est entrainé par un moteur 44, de préférence un moteur pas à pas. Les moyens de distribution sont ici schématisés par trois vannes 50, 51. Une première vanne 50 parmi les trois vannes comprend deux positions, la première position, illustrée à la figure, permet d'aspirer ou de rejeter un fluide au travers du tube 17. La deuxième position de la première vanne 50 permet de io mettre en prise la seringue 40 avec une conduite 52 d'approvisionnement en liquide de nettoyage 36,37. La conduite 52 comprend deux branches 521 et 522, chacune en prise avec une réserve respective 31,32 de liquide de nettoyage. Chacune des deuxième et troisième vannes 51 est affectée à une 15 réserve respective 31,32 de liquide de nettoyage 36,37. Dans une première position ouverte 51A chaque vanne 51 permet l'écoulement du liquide respectif dans la conduite 52. Dans une deuxième position fermée 51B, illustrée à la figure 1, chaque vanne 51 empêche l'écoulement du liquide respectif dans la conduite 52. 20 Un capteur 55 est disposé sur chacune des branches 521,522. Le capteur 55 est prévu pour détecter l'absence ou la présence du liquide correspondant dans la branche. L'absence de liquide dans l'une des branches impose l'arrêt de l'automate 1 et le remplacement ou le remplissage de la réserve correspondante. 25 Il est préférable que l'échantillon prélevé dans le tube soit maintenu suffisamment en aval de la seringue 40, de sorte que celle-ci ne puisse être contaminée par l'échantillon. Ainsi, le tube est prévu d'une longueur suffisante pour que son volume intérieur puisse contenir un échantillon suffisant pour l'ensemencement. Pour permettre l'arrangement de cette longueur de tube à 30 l'intérieur de l'automate 1, celui-ci comprend un rouleau 57 autour duquel est enroulée une portion 17A du tube 17. De préférence, le rouleau 57 comprend une forme en pas de vis le long de laquelle la portion 17A de tube est disposée, et, de préférence fixée par encliquetage à l'intérieur du pas de vis. Ainsi disposé, le tube (17) est apparent et accessible sur toute sa longueur. Il est monté par emboitement et encliquetage, de sorte qu'il est démontable sans outillage. Dans l'exemple illustré, l'automate comprend un corps en tôle inoxydable, sur laquelle sont montés les différents éléments qui le composent. Le corps n'est pas représenté à la figure 1. Le corps comprend notamment une Io plateforme sensiblement horizontale 62, notamment visible aux figures 2, 6, 7 et 8. On va maintenant décrire, de façon générale un cycle d'ensemencement. Un échantillon est d'abord approvisionné dans la zone 15 d'approvisionnement, par exemple dans un récipient 60. Le bras 14 est amené dans une position de prélèvement 14A de sorte que le stylet 18 soit au-dessus du récipient 60. Le bras 14 est ensuite abaissé pour que le stylet plonge d'une profondeur PA dans l'échantillon. La vanne 50 étant dans la position 50A, une partie suffisante de l'échantillon est aspirée 20 dans le tube à l'aide de la seringue 40. Le bras est ensuite relevé, puis amené dans une position 14B par une rotation de la tourelle 13 autour de son axe X13, particulièrement illustrée à la figure 1, pour l'ensemencement du substrat 2. Le bras 14 est rabaissé de sorte que la pointe du stylet soit suffisamment proche du substrat pour y déposer 25 l'échantillon avec la précision souhaitée. Par une combinaison de mouvements rotatifs de la tourelle 13 autour de son axe X13 et du plateau 6 autour de son axe X6, l'échantillon est automatiquement déposé selon un motif préalablement défini. Le motif peut être une spirale ou une combinaison de points et/ou de cercles ou d'arcs de cercle concentriques, tel que cela est 30 illustré en référence aux figures 4 et 5. The automaton further comprises pumping means 40 and dispensing means 41 for the various fluids 3, 36, 37 handled by the automaton 1. In the example illustrated, the pumping means comprise a syringe 40 formed of a cylinder 42 in which a piston 43 slides. The piston is driven by a motor 44, preferably a stepping motor. The distribution means are shown schematically by three valves 50, 51. A first valve 50 among the three valves comprises two positions, the first position, illustrated in the figure, makes it possible to suck or reject a fluid through the tube 17. The second position of the first valve 50 allows the syringe 40 to be engaged with a cleaning fluid supply line 36,37. The pipe 52 comprises two branches 521 and 522, each engaged with a respective reserve 31, 32 of cleaning liquid. Each of the second and third valves 51 is assigned to a respective reserve 31, 32 of cleaning fluid 36, 37. In a first open position 51A, each valve 51 allows the flow of the respective liquid in line 52. In a second closed position 51B, illustrated in FIG. 1, each valve 51 prevents the flow of the respective liquid in line 52. A sensor 55 is disposed on each of the branches 521, 522. The sensor 55 is provided to detect the absence or the presence of the corresponding liquid in the branch. The absence of liquid in one of the branches requires the shutdown of the controller 1 and the replacement or filling of the corresponding reserve. It is preferred that the sample taken from the tube is maintained sufficiently downstream of the syringe 40 so that it can not be contaminated by the sample. Thus, the tube is provided of sufficient length so that its interior volume can contain a sample sufficient for seeding. To allow the arrangement of this length of tube inside the automaton 1, it comprises a roll 57 around which is wound a portion 17A of the tube 17. Preferably, the roll 57 comprises a shape in steps of screw along which the portion 17A of tube is disposed, and preferably fixed by snapping inside the thread. Thus arranged, the tube (17) is visible and accessible throughout its length. It is mounted by interlocking and snapping, so that it is removable without tools. In the illustrated example, the automaton comprises a stainless steel body, on which are mounted the various elements that compose it. The body is not shown in FIG. 1. The body comprises in particular a substantially horizontal platform 62, particularly visible in FIGS. 2, 6, 7 and 8. A seeding cycle will now generally be described. A sample is first supplied in the supply area, for example in a container 60. The arm 14 is brought into a picking position 14A so that the stylet 18 is above the container 60. The arm 14 is then lowered so that the stylet plunges a PA depth into the sample. With the valve 50 in the 50A position, a sufficient portion of the sample is sucked into the tube using the syringe 40. The arm is then raised and then brought into a position 14B by rotation of the turret 13. around its axis X13, particularly illustrated in Figure 1, for seeding the substrate 2. The arm 14 is lowered so that the tip of the stylet is close enough to the substrate to deposit the sample with the desired accuracy. By a combination of rotating movements of the turret 13 about its axis X13 and the plate 6 about its axis X6, the sample is automatically deposited according to a previously defined pattern. The pattern may be a spiral or a combination of points and / or concentric circles or arcs, as illustrated with reference to Figures 4 and 5.

Une fois l'ensemencement terminé, le bras est relevé, puis amené dans une position de nettoyage 14C par une rotation de la tourelle 13 autour de son axe X13, pour le nettoyage du stylet. Le surplus d'échantillon encore présent dans le tube en est expulsé dans le bac à déversement 21, à l'aide de la seringue 40, la première vanne 50 étant toujours dans la position 50A. On abaisse le bras 14, de sorte que le stylet 18 plonge dans le bac à déversement. La vanne 50 est mise dans la position 50 B, la troisième vanne 51 est maintenue fermée, en position 51B, la deuxième vanne 51 est mise dans la position 51A, et la seringue est actionnée de sorte qu'elle se remplit d'alcool 36. Ensuite, les positions de la première vanne 50 et de la deuxième vanne 51 sont inversées, et le piston 43 est repoussé à l'intérieur du cylindre 42, de sorte que l'alcool 36 est expulsé dans le bac 21, en parcourant toute la longueur du tube 17. L'intérieur du tube 17 est ainsi entièrement désinfecté. L'extérieur du tube, à l'endroit du stylet est lui-même désinfecté à mesure où le bac 21 se remplit d'alcool. La vanne 50 est remise dans la position 50 B, la deuxième vanne 51 est maintenue fermée, en position 51B, la troisième vanne 51 est mise dans la position 51A, et la seringue est actionnée de sorte qu'elle se remplit d'eau distillée 37. Ensuite, les positions de la première vanne 50 et de la troisième vanne 51 sont inversées, et le piston 43 est repoussé à l'intérieur du cylindre 42, de sorte que l'eau distillée est expulsé dans le bac 21, en parcourant toute la longueur du tube 17. L'intérieur du tube 17 est ainsi entièrement rincé. L'extérieur du tube, à l'endroit du stylet est lui-même rincé à mesure où le bac 21 se remplit d'eau distillée 37. Once seeding is complete, the arm is raised and then brought into a cleaning position 14C by rotating the turret 13 about its axis X13, for cleaning the stylet. The surplus sample still present in the tube is expelled into the discharge tank 21, using the syringe 40, the first valve 50 is still in the position 50A. The arm 14 is lowered so that the stylet 18 is immersed in the spill tray. The valve 50 is put in the position 50 B, the third valve 51 is kept closed, in position 51B, the second valve 51 is placed in the position 51A, and the syringe is actuated so that it fills with alcohol 36 Then, the positions of the first valve 50 and the second valve 51 are reversed, and the piston 43 is pushed back inside the cylinder 42, so that the alcohol 36 is expelled into the tank 21, traversing any the length of the tube 17. The interior of the tube 17 is thus completely disinfected. The outside of the tube at the location of the stylet is itself disinfected as the tray 21 fills with alcohol. The valve 50 is returned to the position 50 B, the second valve 51 is kept closed, in position 51B, the third valve 51 is placed in the position 51A, and the syringe is actuated so that it fills with distilled water 37. Then, the positions of the first valve 50 and the third valve 51 are reversed, and the piston 43 is pushed back inside the cylinder 42, so that the distilled water is expelled into the tank 21, by traversing the entire length of the tube 17. The interior of the tube 17 is thus completely rinsed. The outside of the tube at the location of the stylet is itself rinsed as the tray 21 fills with distilled water 37.

Un nouveau cycle peut alors être entamé. L'échantillon étant maintenu en aval de la seringue, celle-ci et la partie amont du tube ne contiennent alternativement que de l'alcool 36 ou de l'eau 37. C'est l'eau résiduelle qui sert de piston liquide entre le piston 43 de la seringue 40 et l'échantillon, lorsque l'échantillon est manipulé, d'abord pour le prélever et ensuite pour l'ensemencer. A new cycle can then be started. The sample being kept downstream of the syringe, the latter and the upstream part of the tube contain alternately only alcohol 36 or water 37. It is the residual water which serves as a liquid piston between the piston 43 of the syringe 40 and the sample, when the sample is handled, first to take it and then to sow it.

On va maintenant décrire la tourelle 13 en référence à la figure 2. La tourelle comprend une base 61 sensiblement en forme de disque et équipée d'une jupe 610 périphérique. La plateforme 62 comprend un orifice circulaire 63. Un relevé 64 est formé dans la plateforme 62 en périphérie de l'orifice 63. Turret 13 will now be described with reference to FIG. 2. The turret comprises a substantially disc-shaped base 61 and equipped with a peripheral skirt 610. The platform 62 comprises a circular orifice 63. A survey 64 is formed in the platform 62 at the periphery of the orifice 63.

La jupe 610 est prévue pour venir en recouvrement du relevé 63, de sorte qu'ils contribuent ensemble à éviter la pénétration de liquide et/ou de solide, à l'intérieur 65 du corps de l'automate 1. Des moyens d'entrainement 66 s'étendent sous la base vers l'intérieur du corps. Ils sont liés, au moins indirectement, au moteur 15 de la tourelle 13. The skirt 610 is provided to overlap the raised portion 63, so that they together contribute to preventing the penetration of liquid and / or solid, inside the body 65 of the automaton 1. Training means 66 extend below the base towards the interior of the body. They are linked, at least indirectly, to the engine 15 of the turret 13.

La base porte en outre une chape 67 définissant l'axe horizontal X14 de basculement du bras 14, et portant le bras. A l'opposé de son extrémité distale 16, relativement à l'axe X14, l'arbre comprend une extrémité proximale 68 sur laquelle est fixé un contrepoids 69, de sorte que le basculement du bras se fait sensiblement sans effort. L'extrémité proximale 68 et le contrepoids 69 sont à l'aplomb de la base 61. Un vérin 71 s'étend verticalement vers le haut depuis la base 61. Le vérin est disposé à proximité de la chape 67, entre la chape et l'extrémité distale 16. Le bras repose par son propre poids sur l'extrémité supérieure 72, mobile verticalement, du vérin 71. Ainsi, le bras 14 est mobile dans un plan vertical porté par la tourelle 13. L'extrémité distale 16 du bras 14 se relève ou s'abaisse avec l'extrémité 72 du vérin 71. Un capot hémisphérique 73 vient recouvrir et protéger l'intérieur de la tourelle 73. La figure 3 décrit un montage particulier pour fixer le tube à l'extrémité 16 du bras 14. Ce montage comprend les éléments suivants, chacun 25 sensiblement de révolution, et montés coaxialement les uns aux autres: - un logement 75 traversant de haut en bas l'extrémité 16; - une bague 76 prévue pour être collée, sur le tube, la partie du tube dépassant en aval de la bague formant le stylet 18; un écrou 77 pour maintenir la bague dans le logement. 2946059 -9- Le logement 75 comprend, de bas en haut, une portion cylindrique 81 de petit diamètre, suffisant pour y passer le stylet 12, puis une portion conique allant en s'élargissant 82, et une portion cylindrique de grand diamètre 84 formant avec la portion conique un épaulement 85. L'intérieur de la portion 85 5 est taraudé. La bague 76 comprend, d'aval en amont, une portion conique 81 allant en s'élargissant progressivement selon un angle identique à la portion 82 du logement 75. Les portions coniques sont prévues pour coopérer entre elles afin de positionner transversalement et longitudinalement la bague dans le 10 logement 75, donc le stylet relativement à l'extrémité 16 du bras 14. Le plus grand diamètre de la portion 91 est supérieur au plus grand diamètre de la portion 82, de sorte que la portion 91 s'étende au-delà de la portion 82, à l'intérieur de la portion cylindrique 84. Au-delà de la portion conique 91, la bague comprend une nervure annulaire 92 s'étendant radialement au-delà de la 15 portion conique, puis une portion cylindrique 93, radialement en retrait de la nervure 92. L'écrou 77 comprend un percement cylindrique axial 96, prévu pour le passage de la portion cylindrique 94 de la bague 76, et une face antérieure 97 prévue pour venir en appui sur la nervure 93 de la bague. Ainsi, lorsque le 20 montage est réalisé, l'écrou étant en prise avec le taraudage du logement 75, la face antérieure de l'écrou vient en appui contre la nervure et maintient la bague en position dans le logement. De ce fait, le stylet est alors maintenu dans une position fixe et définie relativement à l'extrémité 16 du bras. On va maintenant décrire des motifs améliorés pour l'ensemencement 25 d'une boîte de Pétri 4. Dans les automates de l'art antérieur l'échantillon est ensemencé selon un motif formant une spirale sur le substrat. Le motif est réalisé en déplaçant radialement le stylet à vitesse linéaire constante, alors que la boite de Pétri tourne sur elle-même à vitesse angulaire constante. Une telle méthode est 30 particulièrement avantageuse en ce qu'elle permet de faire diminuer 2946059 - 10- progressivement la densité surfacique en échantillon à mesure ou l'on s'éloigne du centre de la boîte. Cependant, l'interprétation des résultats est compliquée et nécessite des abaques particuliers à l'ensemenceur utilisé. Les risques d'erreur d'interprétation sont importants.The base also carries a yoke 67 defining the horizontal axis X14 tilting arm 14, and carrying the arm. Opposite its distal end 16, relative to the axis X14, the shaft comprises a proximal end 68 on which is fixed a counterweight 69, so that the tilting of the arm is substantially effortless. The proximal end 68 and the counterweight 69 are in line with the base 61. A jack 71 extends vertically upwardly from the base 61. The jack is disposed near the yoke 67, between the yoke and the yoke. distal end 16. The arm rests by its own weight on the upper end 72, vertically movable cylinder 71. Thus, the arm 14 is movable in a vertical plane carried by the turret 13. The distal end 16 of the arm 14 is raised or lowered with the end 72 of the cylinder 71. A hemispherical cap 73 covers and protects the inside of the turret 73. Figure 3 describes a particular arrangement for attaching the tube to the end 16 of the arm 14. This assembly comprises the following elements, each substantially of revolution, and mounted coaxially with each other: a housing 75 traversing from top to bottom the end 16; - A ring 76 provided to be glued on the tube, the portion of the tube projecting downstream of the ring forming the stylet 18; a nut 77 to hold the ring in the housing. The housing 75 comprises, from bottom to top, a cylindrical portion 81 of small diameter, sufficient to pass the stylet 12, then a widening conical portion 82, and a cylindrical portion of large diameter 84 forming with the conical portion a shoulder 85. The interior of the portion 85 is threaded. The ring 76 comprises, downstream upstream, a conical portion 81 widening progressively at an identical angle to the portion 82 of the housing 75. The conical portions are provided to cooperate with each other in order to position the ring transversely and longitudinally. in the housing 75, therefore the stylet relative to the end 16 of the arm 14. The largest diameter of the portion 91 is greater than the largest diameter of the portion 82, so that the portion 91 extends beyond of the portion 82, inside the cylindrical portion 84. Beyond the conical portion 91, the ring comprises an annular rib 92 extending radially beyond the conical portion, and a cylindrical portion 93, radially recessed from the rib 92. The nut 77 comprises an axial cylindrical bore 96, provided for the passage of the cylindrical portion 94 of the ring 76, and an anterior surface 97 provided to bear on the rib 93 of the bag ue. Thus, when the mounting is carried out, the nut being engaged with the thread of the housing 75, the anterior face of the nut bears against the rib and holds the ring in position in the housing. As a result, the stylet is then held in a fixed position and defined relative to the end 16 of the arm. Improved patterns for inoculating a Petri dish 4 will now be described. In prior art machines the sample is seeded in a spiral pattern on the substrate. The pattern is achieved by moving the stylus radially at a constant linear velocity, while the Petri dish turns on itself at constant angular velocity. Such a method is particularly advantageous in that it makes it possible to progressively decrease the surface density in sample as one moves away from the center of the box. However, the interpretation of the results is complicated and requires particular charts to the seed used. The risks of misinterpretation are important.

5 Il est proposé selon l'invention de réaliser des motifs sous forme de cercles concentriques 99. La densité varie selon la distance au centre de la boîte, comme pour les spirales de l'art antérieur, mais elle reste constante sur un même cercle, l'interprétation est simplifiée, puisqu'elle ne dépend plus de l'angle sous lequel est regardé le résultat de la culture. Dans l'exemple illustré à lo la figure 4, le motif comprend trois groupes de trois cercles rapprochés. Les cercles de chaque groupe étant très rapprochés, ils ont une densité très proche. Ainsi, chaque groupe correspond sensiblement à une concentration donnée. Pour améliorer la précision des résultats, l'automate comprend avantageusement des moyens pour faire varier la vitesse de rotation de la boîte 15 de Pétri, de sorte que la densité est sensiblement identique pour les cercles d'un même groupe. Dans le mode de réalisation de la figure 5, représentée à une échelle réduite, les cercles ont été limités à des arcs de cercles 99. Ce motif produit des résultats similaires. Cependant, il permet d'éviter de déposer de l'échantillon 20 sur une partie déjà ensemencée, lors de la fermeture d'un cercle. On va maintenant décrire la zone de prélèvement 11, en référence à la coupe de la figure 6. La zone 11 comprend un orifice circulaire 101 dans la plateforme 62, le bord périphérique de l'orifice a la forme d'un relevé 102. Un récipient cylindrique 103 est disposé dans l'orifice 101. Une jupe 104 s'étend depuis le bord supérieur 105 du récipient et vient reposer sur la plateforme 62, autour du relevé 102. La jupe 104 vient en recouvrement du relevé 102, de sorte qu'ils contribuent ensemble à éviter la pénétration de liquide et/ou de solide, à l'intérieur 65 du corps de l'automate 1. Le produit à ensemencer, c'est-à-dire l'échantillon 3 est contenu dans 30 un gobelet 106 dont le bord supérieur 107 repose sur le bord supérieur 105 du 2946059 -11- récipient 103. Ainsi, un échantillon 3 peut être approvisionné ou retiré de l'automate sans risque de renversement dans le corps de l'appareil qui reste protégé par le récipient 103. En outre, si du produit 3 se renverse dans le récipient, ce dernier est amovible et peut être retiré pour être nettoyé.It is proposed according to the invention to produce patterns in the form of concentric circles 99. The density varies according to the distance at the center of the box, as for the spirals of the prior art, but it remains constant on the same circle, the interpretation is simplified, since it no longer depends on the angle at which the result of the culture is viewed. In the example shown in FIG. 4, the pattern comprises three groups of three close circles. The circles of each group being very close together, they have a very close density. Thus, each group corresponds substantially to a given concentration. To improve the accuracy of the results, the automaton advantageously comprises means for varying the rotational speed of the petri dish, so that the density is substantially identical for the circles of the same group. In the embodiment of Figure 5, shown on a reduced scale, the circles have been limited to arcs of circles 99. This pattern produces similar results. However, it makes it possible to avoid depositing sample 20 on an already seeded part, when closing a circle. The sampling zone 11 will now be described, with reference to the cross-section of FIG. 6. The zone 11 comprises a circular orifice 101 in the platform 62, the peripheral edge of the orifice has the shape of a record 102. cylindrical container 103 is disposed in the orifice 101. A skirt 104 extends from the upper edge 105 of the container and comes to rest on the platform 62, around the record 102. The skirt 104 overlaps the record 102, so that they together contribute to preventing the penetration of liquid and / or solid within the body of the automaton 1. The product to be seeded, that is to say the sample 3, is contained in a cup 106 whose upper edge 107 rests on the upper edge 105 of the container 103. Thus, a sample 3 can be supplied or removed from the automat without risk of overturning in the body of the device which remains protected by container 103. In addition, if product 3 is spills into the container, the container is removable and can be removed for cleaning.

5 Lors du prélèvement de l'échantillon, le stylet 18 est prévu pour s'enfoncer de la profondeur PA, mesurée sous le bord 107 du gobelet 106. On va maintenant décrire le fonctionnement du bac à déversement, et le procédé de nettoyage, en référence à la figure 7. Le bac à déversement 21 a sensiblement une forme de révolution io autour d'un axe vertical. Il comprend deux bols 111,112 coaxiaux, ayant une base commune 113. Le bol intérieur 111 est destiné plus particulièrement à recevoir le stylet 18 et les liquides de nettoyage 36,37. Il est de forme étroite, de sorte qu'il y offre radialement, une place suffisante, mais sans excès, pour y loger le stylet et permettre un écoulement des liquides 36,37 autour du stylet.When sampling the sample, the stylet 18 is provided to sink the depth PA, measured under the edge 107 of the cup 106. The operation of the spill tray, and the cleaning process, will now be described. Referring to Figure 7. The spill tray 21 has substantially a shape of revolution io about a vertical axis. It comprises two 111,112 coaxial bowls, having a common base 113. The inner bowl 111 is intended more particularly to receive the stylet 18 and the cleaning liquids 36,37. It is narrow in shape, so that it offers radially sufficient space, but not excessively, to accommodate the stylet and allow a flow of liquids 36,37 around the stylet.

15 Le bol extérieur 112 est destiné à récupérer les liquides qui se déversent du bol intérieur 11 lorsque celui-ci déborde. Les deux bols 35,36 comprennent des conduites de vidange 114,115 respectives, formées dans la base 113, et qui s'y rejoignent pour n'en former qu'une 116, reliée à la pompe de vidange 22. Comme la tourelle 13 et le récipient 103, le bac à déversement 21 est 20 inséré dans un orifice 117 de la plateforme 62. Le bac 21 comprend une jupe 119 qui s'étend depuis un bord supérieur 121 du bol extérieur 112 et vient en recouvrement d'un relevé périphérique 118 de l'orifice 117. Cette disposition comme expliqué précédemment pour le récipient 103, protège l'intérieur 65 et permet de rendre le bac 21 aisément amovible, notamment en vue de son 25 nettoyage. Lorsque l'ensemencement du substrat 2 est terminé, comme précédemment expliqué, l'extrémité du bras 14 est amenée dans une position 14C dans laquelle le stylet 18 est au-dessus du bac 21, de préférence au-dessus du bol extérieur 112, pour que le tube 17 y soit purgé du reste d'échantillon qui n'aurait pas été utilisé pour l'ensemencement. 2946059 - 12 - Ensuite, le bras est déplacé dans une position 14C1, dans laquelle le stylet 18 est enfoncé d'une profondeur PB dans le bol intérieur 111. Le stylet est maintenu dans cette position pendant l'opération de désinfection. Comme précédemment décrit, lors de cette opération, l'alcool 36 parcours le tube 5 jusqu'à s'écouler du stylet 18. L'alcool remplit alors le bol intérieur jusqu'à déborder dans le bol extérieur, par-dessus son bord supérieur 120. Ainsi, le niveau de l'alcool dans le bol intérieur 111 est toujours le même, sensiblement égal à celui du bord supérieur 120 du bol 11. La profondeur PB est choisie supérieure à la profondeur PA de prélèvement de l'échantillon dans le gobelet io 106. Cette étape garantit que la désinfection extérieure du stylet 18, sur toute la hauteur susceptible d'avoir été souillée lors du prélèvement. Ensuite, le bras est déplacé dans une position 14C2, dans laquelle le stylet 18 est enfoncé d'une profondeur PC dans le bol intérieur 111. Le stylet est maintenu dans cette position pendant l'opération de rinçage. Comme 15 précédemment décrit, lors de cette opération, l'eau 37 parcourt le tube jusqu'à s'écouler du stylet 18. L'eau remplit alors le bol intérieur jusqu'à déborder dans le bol extérieur, par-dessus son bord supérieur 120. Ainsi, le niveau de l'eau dans le bol intérieur 111 est toujours le même, sensiblement égal à celui du bord supérieur 120 du bol 11. La profondeur PC est choisie supérieure à la 20 profondeur PB précédemment utilisée pour la désinfection. Ce procédé garantit que l'alcool précédemment utilisée pour le nettoyage extérieur du stylet 18, est entièrement rincé et ne risque pas de stériliser accidentellement un futur ensemencement. Les figures 8 et 9 illustrent deux autres modes de mise en oeuvre pour 25 un procédé d'ensemencement selon l'invention. Dans ces exemples, les boîtes de Pétri 4 sont carrées. Dans l'exemple illustré à la figure 8, l'ensemencement est réalisé sous une forme de lignes droites 131 parallèles entre elles, ayant sensiblement la même longueur. Les lignes 131 sont regroupées en trois groupes de trois 30 lignes. Les lignes d'un même groupe ont une densité sensiblement identique 2946059 - 13 - entre elles. Le groupe représenté le plus à gauche comprend trois lignes de forte densité, le groupe le plus à droite comprend trois lignes de faible densité, et, le groupe du milieu comprend trois lignes de densité intermédiaire. Dans l'exemple illustré à la figure 9, l'ensemencement est réalisé sous 5 une forme de lignes droites regroupées en carrés 132. Les carrés sont homothétiques entre eux autour de même centre. Les carrés 132 sont regroupés en trois groupes de deux carrés. Les lignes de tous les carrés d'un même groupe ont une densité sensiblement identique entre elles. Le groupe représenté le plus à l'intérieur comprend des lignes de forte densité, le groupe io le plus à l'extérieur comprend des lignes de faible densité, et, le groupe intermédiaire comprend des lignes de densité intermédiaire. Bien sûr, l'invention n'est pas limitée aux exemples qui viennent d'être décrits. Ainsi, plutôt qu'une tourelle, il peut être prévu des moyens de 15 préplacement linéaires pour le stylet. Aussi, au lieu d'être prévu amovible, le bac à déversement, ou le récipient de la zone de prélèvement, peuvent être prévus fixes et formés par emboutissage directement dans la plateforme de l'automate. Le bac de déversement, comme schématiquement illustré à la figure 1, 20 peut avoir une forme parallélépipédique, et comprendre deux compartiments séparés par une paroi pour le déversement d'un compartiment vers l'autre. Au lieu de motifs uniquement circulaires, il peut en outre être prévu des motifs ayant notamment des formes de points plus ou moins épais. The outer bowl 112 is intended to collect the liquids that flow from the inner bowl 11 when it overflows. The two bowls 35,36 comprise respective drain lines 114,115, formed in the base 113, and which join to form only one 116, connected to the drain pump 22. Like the turret 13 and the 103, the spill tray 21 is inserted into an orifice 117 of the platform 62. The tray 21 comprises a skirt 119 which extends from an upper edge 121 of the outer bowl 112 and overlaps a peripheral record 118 117. This arrangement as explained above for the container 103, protects the interior 65 and makes the tray 21 easily removable, especially for cleaning. When the seeding of the substrate 2 is finished, as previously explained, the end of the arm 14 is brought into a position 14C in which the stylet 18 is above the tray 21, preferably above the outer bowl 112, for that the tube 17 is purged from the remainder of the sample which would not have been used for seeding. Then, the arm is moved to a position 14C1, in which the stylet 18 is depressed to a depth PB in the inner bowl 111. The stylet is held in this position during the disinfection operation. As previously described, during this operation, the alcohol 36 travels the tube 5 to flow from the pen 18. The alcohol then fills the inner bowl until it overflows into the outer bowl, over its upper edge 120. Thus, the level of the alcohol in the inner bowl 111 is always the same, substantially equal to that of the upper edge 120 of the bowl 11. The depth PB is chosen greater than the sampling depth PA in the sample. cup 106. This step ensures that the outer disinfection of the stylet 18, the full height may have been contaminated during sampling. Then, the arm is moved to a position 14C2, in which the stylet 18 is depressed from a PC depth into the inner bowl 111. The stylet is held in this position during the rinsing operation. As previously described, during this operation, the water 37 travels through the tube until it flows from the stylet 18. The water then fills the inner bowl until it overflows into the outer bowl, over its upper edge. 120. Thus, the level of the water in the inner bowl 111 is always the same, substantially equal to that of the upper edge 120 of the bowl 11. The PC depth is chosen higher than the depth PB previously used for disinfection. This method ensures that the alcohol previously used for external cleaning of the stylet 18 is fully rinsed and does not risk accidentally sterilizing future seeding. Figures 8 and 9 illustrate two other embodiments for a seeding process according to the invention. In these examples, Petri dishes 4 are square. In the example illustrated in FIG. 8, the seeding is carried out in the form of straight lines 131 parallel to each other, having substantially the same length. Lines 131 are grouped into three groups of three lines. The lines of the same group have a density substantially identical to each other. The leftmost group has three high density lines, the rightmost group has three low density lines, and the middle group has three intermediate density lines. In the example illustrated in FIG. 9, the seeding is carried out in the form of straight lines grouped in squares 132. The squares are homothetic to each other around the same center. The squares 132 are grouped into three groups of two squares. The lines of all the squares of the same group have a density substantially identical to each other. The innermost group comprises high density lines, the outermost group comprises low density lines, and the intermediate group comprises intermediate density lines. Of course, the invention is not limited to the examples which have just been described. Thus, rather than a turret, there may be provided linear preplacement means for the stylet. Also, instead of being removable, the spill tray, or the container of the sampling area, can be provided fixed and formed by stamping directly into the platform of the controller. The spill tray, as schematically illustrated in FIG. 1, can have a parallelepipedal shape, and comprise two compartments separated by a wall for spilling from one compartment to the other. Instead of only circular patterns, it may further be provided with patterns including more or less thick point shapes.

Claims

Revendications1. A method for seeding a substrate (2) with a sample (3) substantially liquid, characterized in that with the sample is drawn on the substrate a pattern comprising at least two lines (99,131,132) parallel to each other.

2. Method according to claim 1, characterized in that the lines of the pattern consist of shapes (99, 132), preferably substantially homothetic between them.

3. Method according to one of claims 1 or 2, characterized in that the lines form at least two groups, each group of rows having a linear density different from each of the other groups.

4. Method according to claim 1, characterized in that the lines of the pattern comprise at least two circular arcs (99) one concentric to the other. 20

5. Method according to claim 4, characterized in that the pattern comprises groups of one or more arcs of several radially adjacent circles, each group being radially distant from each other 25

6. Method according to claim 4 or 5, characterized in that the arcs are concentric about an axis (X6) and in that the substrate is rotated about the axis (X6) so that all Pattern arcs are drawn at an identical and constant angular velocity. 30

7. Method according to claim 5, characterized in that the arcs are concentric about an axis (X6) and in that the substrate is rotated around the axis (X6) so that all the arcs of the same group are drawn at an identical and constant linear velocity.

8. Method according to one of claims 4 to 7, characterized in that each arc of a circle forms a complete circle.

9. The method of claim 2 or 3, characterized in that the lines make up squares. io

10. The method of claim 1, characterized in that the lines are straight lines.