FR2945532A1 - Derives de tri-amino-pyrimidine comme inhibiteurs de phosphatases cdc25 - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de triamino-pyrimidine de formule (I) dans laquelle R1, X, R2, W, R3, R4a, R5a, R5a, R5b, n et q sont des variables. Ces produits ont une activité inhibitrice de phosphatases Cdc25. L'invention concerne également un procédé de synthèse de ces composés ainsi que des compositions thérapeutiques contenant ces produits et leur utilisation comme médicament.

Description

DERIVES DE TRI-AMINO-PYRIMIDINE COMME INHIBITEURS DE PHOSPHATASE CDC25 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de triamino-pyrimidine. Ces produits ont une activité inhibitrice de phosphatases Cdc25. L'invention concerne également un procédé de synthèse de ces composés ainsi que des compositions thérapeutiques contenant ces produits et leur utilisation comme médicament. Le contrôle de la transition entre les différentes phases du cycle cellulaire durant la mitose ou de la méiose est assuré par un ensemble de protéines dont les activités enzymatiques sont associées à des états différents de phosphorylation. Ces états sont contrôlés par deux grandes classes d'enzymes : les kinases et les phosphatases. La synchronisation des différentes phases du cycle cellulaire permet ainsi la réorganisation de l'architecture cellulaire à chaque cycle dans l'ensemble du monde vivant (microorganismes, levures, vertébrés, plantes). Parmi les kinases, les kinases dépendantes des cyclines (CDKs) jouent un rôle majeur dans ce contrôle du cycle cellulaire. L'activité enzymatique de ces différentes CDKs est contrôlée par deux autres familles d'enzymes qui travaillent en opposition (Jessus et Ozon, Prog. C'ell Cycle Res. (1995), 1, 215-228). La première regroupe des kinases telles que Weel et Miki qui désactivent les CDKs en phosphorylant certains acides aminés (Den Haese et coll., Mol. Biol. Cell (1995), 6. 371-385). La seconde regroupe des phosphatases telles que Cdc25 qui activent les CDKs en déphosphorylant des résidus tyrosine et thréonine de CDKs (Gould et coll., Science (1990), 250, 1573-1576). Les phosphatases sont classifiées en 3 groupes : les sérines/thréonines phosphatases (PPases), les tyrosines phosphatases (PTPases) et les phosphatases à double spécificité (DSPases). Ces phosphatases jouent un rôle important dans la régulation de nombreuses fonctions cellulaires. En ce qui concerne les phosphatases Cdc25 humaines, 3 gènes (Cdc25-A, Cdc25-B et Cdc25-C) codent pour les protéines Cdc25. De plus, des variants issus de splicing alternatif du gène Cdc25B ont été identifiés : il s'agit de Cdc25B1, Cdc25B2 et Cdc25B3 (Baldin et coll., Oncogene (1997), 14 , 2485-2495).

Le rôle des phosphatases Cdc25 dans l'oncogénèse est maintenant mieux connu et les mécanismes d'action de ces phosphatases sont illustrés en particulier dans les références suivantes : Galaktionov et coll., Science (1995), 269, 1575-1577 ; Galaktionov et coll., Nature (1996), 382, 511-517 et Mailand et coll., Science (2000), 288, 1425-1429.

La surexpression des différentes formes de Cdc25 est maintenant rapportée dans de nombreuses séries de tumeurs humaines, par exemple : - Cancer du sein : cf. Cangi et coll., Résumé 2984, AACR meeting San Francisco, 2000) ; - Lymphomes : cf. Hernandez et coll., Int. J. Cancer (2000), 89, 148-152 et Hernandez et coll., Cancer Res. (1998), 58, 1762-1767 ; - Cancers du cou et de la tête : cf. Gasparotto et coll., Cancer Res. (1997), 57, 2366-2368 ; - Cancers du pancréas : cf. Junchao Guo et coll., Oncogene (2004), 23, 71-81. Par ailleurs, le groupe de E. Sausville rapporte une corrélation inverse entre le niveau d'expression de Cdc25-B dans un panel de 60 lignées et leurs sensibilités aux inhibiteurs de CDK, suggérant que la présence de Cdc25 puisse apporter une résistance à certains agents antitumoraux et plus particulièrement aux inhibiteurs de CDK (Hose et coll., Proceeclings of AACR, Abstract 3571, San Francisco, 2000). Parmi d'autres cibles, on recherche donc à présent des composés capables d'inhiber les phosphatases Cdc25 afin de les utiliser notamment comme agents anti-cancéreux. Les phosphatases Cdc25 jouent également un rôle dans les maladies neurodégénératives (cf. Zhou et coll., Cell Mol. Lite Sci. (1999), 56(9-10), 788-806 ; Ding et coll., Am. J. Pathol. (2000), 157(6), 1983-90 ; Vincent et coll., Neuroscience (2001), 105(3). 639-50) de sorte que l'on peut aussi envisager d'utiliser des composés possédant une activité d'inhibition de ces phosphatases pour traiter ces maladies. Un autre problème auquel s'adresse l'invention est la recherche de médicaments destinés à prévenir ou traiter le rejet de greffes d'organes ou encore à traiter des maladies auto-immunes. Dans ces désordres et/ou maladies, l'activation non appropriée des lymphocytes et des monocytes/macrophages est impliquée. Or les médicaments immunosuppresseurs connus à ce jour ont des effets secondaires qui pourraient être diminués ou modifiés par des produits ciblant spécifiquement les voies de signalisation dans les cellules hématopoïétiques qui initient et maintiennent l'inflammation.

Les dérivés de triamino-pyrimidine tels que définis ci-après sont de nouveaux inhibiteurs de phosphatases Cdc25. Ils sont susceptibles d'être utilisés comme médicaments, en particulier dans le traitement et / ou la prévention des maladies ou désordres suivants : • l'inhibition de la prolifération tumorale seule ou en combinaison avec d'autres traitements ; • les cancers ; • l'inhibition de la prolifération des cellules normales seule ou en combinaison avec d'autres traitements ; • les maladies neurodégénératives ; • la prévention de l'alopécie spontanée ; • la prévention de l'alopécie induite par des produits exogènes ; • la prévention de l'alopécie radio-induite ; • la prévention de l'apoptose spontanée ou induite des cellules normales ; • la prévention de la méiose et / ou la fécondation ; • la prévention de la maturation des ovocytes ; • toutes les maladies et/ou tous les désordres correspondant à des utilisations rapportées pour les inhibiteurs de CDKs, et notamment les maladies prolifératives non tumorales (par exemple : angiogénèse, psoriasis ou resténose), maladies prolifératives tumorales, les maladies parasitaires (prolifération de protozoaires), infections virales, maladies neurodégénératives, myopathies ; et / ou • toutes les maladies et/ou tous les désordres correspondant à des applications cliniques de la vitamine K et de ses dérivés. Par ailleurs, les composés de la présente invention sont également, du fait de leurs propriétés d'inhibition des phosphatases Cdc25, susceptibles d'être utilisés pour inhiber ou prévenir la prolifération des microorganismes, notamment des levures. L'un des avantages de ces composés consiste en leur faible toxicité sur les cellules saines.

Ainsi, la présente invention a pour objet un composé de formule générale (Ia), R5b / R4b N O R5a,NNNL R4a R3/\,--X /> R1 R2~\N O sous forme racémique. d'énantiomère ou toute combinaison de ces formes dans laquelle. RI représente un atome d'hydrogène ou l'un des radicaux suivants : • alkyle, cycloalkyle, ou cycloalkylalkyle, • cyano, • aryle, araikyle, hétéroaryle ou hétéroarylalkyle, ces radicaux étant éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements identiques ou différents choisis parmi halo, alkyle, haloalkyle, alkoxy, haloalkoxy, hydroxy, nitro, cyano, -SO-NHR10 ou 10 -NR10R11, • un radical de formule : dans lequel r représente 1 ou 2. • -(CH2)p-(CO)n,-NR8R9, • -(CH2)p-(CO)n,-OR8 ; 15 X représente un atome d'oxygène ou de soufre ; R2 représente un atome d'hydrogène, ou un radical alkyle ; R8 et R9 représentent indépendamment un atome d'hydrogène, ou un radical choisi parmi : • alkyle, haloalkyle. alkoxyalkyle, cycloalkyle, cycloalkylalkyle, • aryle, aralkyle, hétéroaryle ou hétéroarylalkyle, ces radicaux étant éventuellement 20 substitués par un ou plusieurs groupements identiques ou différents choisis parmi halo, alkyle, haloalkyle, alkoxy, haloalkoxy, hydroxy, nitro, cyano, -SO2NHR10 ou -NR1OR11, • un radical de formule : dans lequel r représente 1 ou 2, ou bien R8 et R9 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent, un radical hétérocycloalkyle ou un radical de formule ou m et p représentent indépendemment 0 ou l étant entendu que m et p ne sont pas 0 en même temps ; RIO et R11 représentent indépendamment un atome d'hydrogène, ou un radical alkyle, ou bien R10 et R11 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical hétérocycloalkyle ; R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ; R4a, R4b, R5a et R5b représentent indépendamment un atome d'hydrogène, un radical alkyle, aminoalkyle, alkylaminoalkyle ou dialkylaminoalkyle ; ou bien R4a et R5a et/ou R4b et R5b forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical hétérocycloalkyle ; L représente un linker hydrocarboné comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé. Par alkyle, lorsqu'il n'est pas donné plus de précision, on entend un radical alkyle linéaire ou ramifié comptant de l à 18 atomes de carbone, de préférence de 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle, pentyle, ou hexyle.

Par radical halo on entend un atome d'halogène tel que le fluor, le chlore, le brome ou l'iode. Par haloalkyle, on entend un radical alkyle tel que défini précédemment substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène identiques ou différents comme par exemple le trifluorométhyle ou pentafluoroéthyle. Par alkoxy, on entend, au sens de la présente invention, un radical ûOûalkyle dans lequel le radical alkyle est tel que précédemment défini, comme par exemple le radical méthoxy ou éthoxy. Par haloalkyloxy, on entend un radical ûOû(haloalkyle) dans lequel le radical haloalkyle est tel que précédemment défini, comme par exemple le radical trifluorométhoxy. Par cycloalkyle, lorsqu'il n'est pas donné plus de précision, on entend un radical cyclique carboné saturé comprenant 3 à 6 chaînons tel que le cyclopropyle, le cyclobutyle, le cyclopentyle ou le cyclohexyle et de préférence le cyclopentyle et le cyclohexyle. Par cycloalkylalkyle, on entend un radical alkyle substitué par un cycloalkyle tel que défini ci-dessus. Par hétérocycloalkyle, au sens de la présente invention, on entend un cycle ayant de 3 à 6 chaînons et comprenant un ou plusieurs hétéroatomes identiques ou différents choisis parmi O. N et S comme par exemple un radical azéridinyle, azétidinyle, pyrrolidinyle, pipéridinyle, morpholinyle, pipérazinyle ; ces radicaux étant potentiellement eux-mêmes substitués par un groupement alkyle ou aralkyle. Par aryle, on entend un système carbocyclique insaturé comprenant au moins un cycle aromatique, et de préference un radical choisi parmi phényle, naphtyle et fluorényle. Par arylalkyle, on entend un radical alkyle tel que défini précédemment substitué par un radical aryle tel que défini précédemment comme par exemple le radical benzyle ou le radical phénéthyle. Par hétéroaryle au sens de la présente invention, on entend un cycle insaturé aromatique comprenant un ou plusieurs hétéroatomes identiques ou différents choisis parmi N, O et S tels que furyle, thiènyle isoxazolyle, benzothiadiazolyle, pyridinyle, oxazolyle, pyrazolyle, pyrimidinyle ou quinoxalyle.

Par hétéroarylalkyle. on entend un radical alkyle substitué par un hétéroaryle tel que défini ci-dessus comme par exemple le radical furylméthyle. Par linker hydrocarboné, on entend une chaîne comportant des atomes de carbone et d'hydrogène, et potentiellement, des atomes d'halogène, des cycles aromatiques ou non, et des hétéroatomes, liant les deux radicaux auxquels elle est liée par des liaisons covalentes. De préférence le linker comporte de 1 à 15 atomes de carbone, et éventuellement un atome d'azote. Par sel d'un composé, on entend les sels d'addition dudit composé avec un acide organique ou inorganique et notamment les sels pharmaceutiquement acceptables dudit composé.

Par sel pharmaceutiquement acceptable, on entend notamment des sels d'addition d'acides inorganiques tels que chlorhydrate, bromhydrate, iodhydrate, sulfate, phosphate, diphosphate et nitrate ou d'acides organiques tels que acétate, maléate, fumarate, tartrate, succinate, citrate, lactate, méthanesulfonate, p-toluènesulfonate, pamoate et stéarate. Pour d'autres exemples de sels pharmaceutiquement acceptables, on peut se référer à "Salt selection for basic drugs". Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217. Dans certains cas, les composés selon la présente invention peuvent comporter des atomes de carbone asymétriques. Par conséquent, les composés selon la présente invention ont deux formes énantiomères possibles, c'est-à-dire les configurations "R" et "S". La présente invention inclut les deux formes énantiomères et toutes combinaisons de ces formes, y compris les mélanges racémiques "RS". Dans un souci de simplicité, lorsqu'aucune configuration spécifique n'est indiquée dans les formules de structure, il faut comprendre que les deux formes énantiomères et leurs mélanges sont représentés. Préférentiellement, l'invention a pour objet un composé tel que défini ci-dessus dans lequel L est un linker hydrocarboné comportant éventuellement un atome d'azote.

Plus préférentiellement. l'invention a pour objet un composé tel que défini ci-dessus qui consiste en un composé de formule générale (I) R5b _R4b N R5a, N N 1 R4a R3 O nW R1 (I) sous forme racémique, d'énantiomère ou toute combinaison de ces formes, dans laquelle : W représente -NR6-, -CR6R7-, un atome d'oxygène ou un atome de soufre ; R6 et R7 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ; n et q sont des nombres entiers compris entre 0 et 6 inclus étant entendu que n et q ne sont pas 0 en même temps ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé. Préférentiellement également, l'invention a pour objet un composé tel que défini ci-dessus dans lequel RI représente un radical alkyle ou un radical aryle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants halo identiques ou différents. De manière préférentielle, l'invention a pour objet un composé tel que défini ci-dessus dans lequel R4a et R5a, et R4b et R5b forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical hétérocycloalkyle. De manière préférentielle également, l'invention a pour objet un composé tel que défini ci- dessus dans lequel W représente -NR6- et R6 représente un radical alkyle. Très préférentiellement. l'invention a pour objet un composé tel que défini ci-dessus dans lequel l'une ou plusieurs des propositions suivantes est satisfaite : - le terme hétérocycloalkyle désigne une pyrrolidine ou une pipéridine, - le terme aryle représente le radical phényle.

Plus particulièrement, l'invention a pour objet un composé de formule générale (I) choisi parmi : 5-({ 2-[ {2-[(2,6-dipyrrolidin- l -ylpyrimidin-4-yl)amino]ethyl } (methyl)amino]ethyl } amino)-2-methyl-2,3-dihydro-1,3-benzothiazole-4,7-dione ; et 2-(2,5-difluorophenyl)-6-({2-[ 't2-[(2,6-dipyrrolidin-1-ylpyrimidin-4-yl)amino]ethyl}(methyl)amino]ethyl} amino)-1,3-benzoxazole-4,7-dione ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. Selon la nature des variables R1, X, R2, W, R3, R4a, R4b, R5a, R5b, n et q, les composés de formule générale (I) selon l'invention peuvent être préparés selon les méthodes décrites ci-dessous. Les réactifs utilisés dont la synthèse n'est pas décrite ci-dessous sont soit disponibles dans le commerce, soit synthétisés à partir de ces derniers selon des techniques connues de l'homme de l'art.

La synthèse passe par un intermédiaire clef de formule générale (IV), R4a R5b 1 1 NNNR4b R5a Nom/ z" qui peut être synthétisé de deux façons selon la nature des groupements R4a, R5a, R4b. R5b: a) Lorsque les groupements ùNR4aR5a et ùNR4bR5b sont différents, les amines HNR4aR5a et HNR4bR5b réagissent successivement pour obtenir le composé de formule générale (IV) selon le schéma réactionnel Al suivant, dans lequel z, z' et z" représentent un atome d'halogène et de préférence un atome de chlore. z~ N z R5bR4bNH R4b R5aR4aNH N R4b R5b N R4a R5b NNN~ R5a Nom/ z" z" z" (IV) schéma Al Ainsi, les dérivés di-aminopyrimidine de formule générale (IV) peuvent être préparés en deux étapes de synthèse en faisant réagir par exemple le composé (II) avec le composé amine de formule générale R5bR4bNH dans lequel R4b et R5b ont été définis précédemment, à une température comprise entre -5°C et 5°C (de préférence 0°C), dans un solvant inerte tel que par exemple le tetrahydrofurane. Le composé (III) ainsi obtenu réagit avec le composé amine de formule générale R5aR4aNH dans lequel R4a et R5a ont été définis précédemment, à une température comprise entre 50°C et 70°C (de préférence 65°C) dans un solvant polaire et inerte tel que le tetrahydrofurane. b) Lorsque le groupement ûNR4aR5a est identique au groupement ûNR4bR5b, la même amine HNR4aR5a ou HNR4bR5b permet d'obtenir le composé IV selon le schéma réactionnel A2 suivant dans lequel z, z' et z" représentent un atome d'halogène et de préférence un atome de chlore. R4a R5b zN~z 1 NN N ~ N~ R5aR4aNH R5a I R4b / z" (IV) R5bR4bNH z" ou schéma A2 Ainsi, les dérivés di-aminopyrimidine de formule générale (IV) peuvent être préparés selon la méthode décrite par Bundy et collaborateurs dans Journal of Medicinal Chemistry, 1995, 35, 4161-4163 en faisant réagir par exemple le composé (II) avec le composé amine de formule générale R5aR4aNH ou R5bR4bNH dans lequel R4a, R5a, R4b et R5b ont été définis précédemment, à une température comprise entre -5°C et 5°C (de préférence 0°C). dans un solvant inerte tel que par exemple le tetrahydrofurane. Dans le cas particulier où R4a, R5a, R4b et R5b représentent tous les quatre un radical méthyle et dans le cas particulier où les groupements -NR4aR5a et NR4bR5b représentent un groupement éthylamino, les conditions de préparation des dérivés de formule (IV) sont telles que décrites par Atri et collaborateurs dans Journal of Medicinal Chemistry, 1984, 27, 1621-1629. La réaction s'effectue à une température comprise entre 30°C et 50°C (de préférence 40°C) dans un solvant polaire et inerte tel que par exemple l'éthanol.

Préparation des intermédiaires de formule générale (I int) : R4a R5b R3\ N i R5a R4b z" R5b R4b N N" \\ R5a ~ (V) N N N'

R4a R3 N H n W -q NH R2 -w- - q NH R2 (1 int) schéma B Comme décrit dans le schéma B ci-dessus, les composés de formule générale (I int) dans laquelle R2, R3, R4a, R4b. R5a, R5b, W, n et q sont tels que définis précédemment peuvent être obtenus, par exemple, par chauffage à une température comprise entre 150°C et 250°C (de préférence 190°C) ou par traitement aux micro-ondes, du composé de formule (IV) dans lequel représente un atome d'halogène et de préférence un atome de chlore, avec un large excès du composé diamine (V).

Préparation des composés de formule générale (I) : R5b / R4b X o % F /~R1 o nW-~lq N I /> R2 R5b R4b N R4a N N 1 R3 N R5a, N N N 1 R4a R3 (I int) o (I) R1 q NH R2 n w N o (VI) schéma C Comme décrit dans le schéma C ci-dessus, les composés de formule générale (I) dans laquelle R1, R2, R3, R4a. R4b, R5a, R5b, R6, W, X , n et q sont tels que définis précédemment peuvent être obtenus, par exemple, par chauffage à une température comprise entre 60°C et 80°C (de préférence 60°C) dans un solvant protique polaire tel que par exemple l'éthanol du composé de formule générale I int dans laquelle R2, R3, R4a, R4b, R5a, R5b, R6, W, n et q sont tels que définis précédemment avec le composé de formule générale (VI) dans laquelle RI et X sont tels que définis précédemment.

Préparation des intermédiaires de formule générale (VI) : Selon la nature de RI telle que définie ci-dessus, les composés de formule générale (VI) sont synthétisés comme décrit dans les demandes de brevet WO 2003/055868. WO 2005/000843 ou WO 2006/051202.

Ainsi l'invention concerne également un procédé de préparation d'un composé de formule générale (I) tel que défini ci-dessus, à partir du composé de formule générale (I int), R5b R4b N (I int) dans lequel R2, R3, R4a. R5a, R4b, R5b, W, n et q sont tels que définis ci-dessus et avec lequel on fait réagir un composé de formule générale (VI), o q NH R2 N" \\ R5a NN R4a R3 O (VI) dans laquelle X et RI sont tels que définis ci-dessus. Les composés de formule générale (I) selon la présente invention possèdent d'intéressantes propriétés pharmacologiques : ils ont une activité inhibitrice de phosphatase Cdc25. Ils peuvent donc être utilisés dans différentes applications thérapeutiques.

La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, un composé de formule générale (I) telle que définie ci-dessus, ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé, avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La présente invention a également pour objet, à titre de médicament, un composé de 20 formule générale (I) telle que définie ci-dessus, ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé.

La présente invention a également pour objet l'utilisation d'un composé de formule générale (I) telle que définie ci-dessus ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables d'un tel composé, pour préparer un médicament destiné à traiter ou prévenir une maladie ou un désordre choisi parmi les maladies suivantes ou les désordres suivants : les cancers, les maladies prolifératives tumorales, les maladies prolifératives non tumorales, les maladies neurodégénératives, les maladies parasitaires, les infections virales, l'alopécie spontanée, l'alopécie induite par des produits exogènes, l'alopécie radio-induite, les maladies auto-immunes, les rejets de greffes, les maladies inflammatoires ou les allergies. De préférence, la présente invention concerne l'utilisation d'un composé de formule 10 générale (I) telle que définie ci-dessus ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables d'un tel composé, pour préparer un médicament destiné à traiter ou prévenir les cancers. De manière très préférentielle la présente invention concerne l'utilisation d'un composé de formule générale (I) telle que définie ci-dessus ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables d'un tel composé. pour préparer un médicament destiné à traiter ou prévenir le 15 cancer, ledit cancer étant choisi parmi les cancers du colon, du rectum, de l'estomac, des poumons. du pancréas. du rein, des testicules, du sein, de l'utérus, de l'ovaire, de la prostate, de la peau, des os, de la moelle épinière, du cou, de la langue, de la tête ainsi que les sarcomes, les carcinomes, les fibroadénomes, les neuroblastomes, les leucémies, les mélanomes. 20 Le composé de formule générale (I) ou son sel utilisé selon l'invention peut être sous forme d'un solide, par exemple des poudres, des granules, des comprimés, des gélules, des liposomes ou des suppositoires. Les supports solides appropriés peuvent être, par exemple, le phosphate de calcium. le stéarate de magnésium, le talc, les sucres, le lactose, la dextrine, l'amidon, la gélatine, la cellulose, la cellulose de méthyle, la cellulose carboxyméthyle de 25 sodium, la polyvinylpyrrolidine et la cire. Le composé de formule générale (I) ou son sel utilisé selon l'invention peut aussi se présenter sous forme liquide, par exemple, des solutions, des émulsions, des suspensions ou des sirops. Les supports liquides appropriés peuvent être, par exemple, l'eau, les solvants organiques tels que le glycérol ou les glycols, de même que leurs mélanges, dans des 30 proportions variées, dans l'eau.

L'administration d'un composé de formule générale (I) ou son sel utilisé selon l'invention ou l'association selon l'invention pourra se faire par voie topique, orale, parentérale, par injection intramusculaire, sous-cutanée etc. La dose d'un produit selon la présente invention, à prévoir pour le traitement des maladies ou troubles mentionnés ci-dessus, varie suivant le mode d'administration, l'âge et le poids corporel du sujet à traiter ainsi que l'état de ce dernier, et il en sera décidé en définitive par le médecin ou le vétérinaire traitant. Une telle quantité déterminée par le médecin ou le vétérinaire traitant est appelée ici "quantité thérapeutiquement efficace". A titre indicatif, la dose d'administration envisagée pour un médicament selon l'invention est comprise entre 0,1 mg et 10 g suivant le type de composé actif utilisé.

PARTIE EXPÉRIMENTALE Les analyses RMN des exemples 1 et 2 ont été réalisées sur un spectromètre Bruker-Avance II de 400 MHz. Les composés sont caractérisés par leur pic moléculaire (MH+) déterminé par spectrométrie de masse (SM), un spectromètre de masse simple quadripôle (Micromass, modèle Platform) équipé d'une source d'électrospray est utilisé avec une résolution de 0,8 da à 50% de vallée. Pour les exemples 1 à 90 ci-après, les conditions d'élution correspondant aux résultats indiqués sont les suivantes : élution avec le mélange acétonitrile-eau-acide trifluoroacétique 50-950-0,2 (A) pendant 1 minute puis passage du mélange (A) à un mélange acétonitrile- eau 950-50 (B) par un gradient linéaire sur une période de 7,5 minutes, puis élution avec le mélange B pur pendant 2 minutes. Suivant les définitions précédentes des variables RI, X, R2, W, R3, R4a, R5a, R5a, R5b, n et q, les composés selon l'invention peuvent être préparés selon les différentes procédures décrites précédemment.

Les exemples sont présentés pour illustrer les procédures ci-dessus et ne doivent en aucun cas être considérés comme une limite à la portée de l'invention. La terminologie utilisée pour la nomenclature des composés ci-dessous et des exemples est la terminologie IUPAC.

Exemple 1 : 5-({2-[{2-{(2,6-dipyrrolidin-1-ylpyrimidin-4-yl)aminoiethyl}(methyl) aminolethyl}amino)-2-methyl-2,3-dihydro-1,3-benzothiazole-4,7-dione Le composé N-(2-aminoethyl)-N'-(2,6-dipyrrolidin-l-ylpyrimidin-4-yl)-N-methylethane- 1,2-diamine (0,133g ; 0,0004mo1), préparé selon le mode opératoire décrit dans la demande de brevet WO 2008/152223, et le composé 5-methoxy-2-methyl-1,3-benzothiazole-4,7-dione (0,084g ; 0,0004mol) préparé selon le mode opératoire décrit dans la demande de brevet WO 2003/055868 sont dissous dans 20 ml d'éthanol à température ambiante. Le mélange réactionnel est chauffé durant 30 minutes au reflux puis ramené à température ambiante. Après évaporation du solvant à l'évaporateur rotatif, l'huile résiduelle est chromatographiée sur colonne de silice (éluant : dichloromethane-methanol-amoniaque 7N : 90-10 à 80-20) afin d'obtenir une poudre noiratre. Après séchage sous vide à 50°C. le solide obtenu est sous forme d'une poudre de couleur noir violette, avec un rendement de 32%.

RMN-'H (8 ppm, DMSO) : 1.80-1,95 (m, 8H) ; 2,86 (s, 6H) ; 3,20-3,40 (m, 16H) ; 4,70 (sé. 1H) ; 5,46 (s, 1H) ; 7,40 (sé, 1H) ; 11 (sé, 1H) MH+ expérimental = 511.16 M théorique = 510,25 Point de fusion : 89-94°C Exemple 2 : chlorhydrate de 2-(2,5-difluorophenyl)-6-({2-[{2-[(2,6-dipyrrolidin-1- ylpyrimidin-4-yl)aminojethyl}(methyl)aminolethyl}amino)-1,3-benzoxazole-4, 7-dione Le composé 2 décrit ci-dessous a été synthétisé selon une méthode analogue à celle décrite à l'exemple 1 en utilisant comme réactif de départ le 2-(2,4-difluorophenyl)-6-methoxy-2,3-dihydro-1,3-benzoxazole-4,7-dione préparé selon le mode opératoire décrit dans la demande de brevet WO 2005/000843 en remplacement du 5-methoxy-2-methyl-1,3- benzothiazole-4,7-dione. RMN-IH (8 ppm, DMSO) : 1,70-1,90 (m, 8H) ; 2,86 (s, 3H) ; 3,27-3,73 (m, 16H) ; 5,14 (s, 1H) ; 5,48 (s, 1H) ; 7,3-7.9 (m 5H) ; 11,18 (sé, 1H) ; 11,58 (sl, 1H). MH+ expérimental = 593,11: M théorique = 592,27 ETUDE DES COMPOSÉS SELON L'INVENTION : A- Etude pharmacologique Protocoles des tests i) Mesure de l'activité phosphatase de l'enzyme recombinante Cdc25C purifiée : L'activité phosphatase de la protéine MBP-Cdc25C est évaluée par la déphosphorylation du 3-O-méthylfluorescéine-phosphate (OMFP) en 3-O-méthylfluorescéine (OMF) avec une détermination de la fluorescence à 475 nm du produit de la réaction. Cet essai permet d'identifier des inhibiteurs de l'enzyme recombinante Cdc25. La préparation de la protéine de fusion MBP-Cdc25C est décrite dans la demande de brevet WO 2001/44467.

La réaction est réalisée en format de plaque 384 puits sous un volume final de 50 pl. La protéine MBP-Cdc25C (préparée comme décrit ci-dessus) est conservée dans le tampon d'élution suivant : 20 mM Tris-HC1 pH 7,4 ; 250 mM NaCl ; 1 mM EDTA : 1 mM de dithiothréitol (DTT) ; 10 mM maltose. Elle est diluée à la concentration de 60 M dans le tampon de réaction suivant : 50 mM Tris-HC1 pH 8,2 ; 50 mM NaCl ; 1 mM DTT ; 20% glycérol. La mesure du bruit de fond est effectuée avec le tampon sans addition de l'enzyme. Les produits sont testés à des concentrations décroissantes à partir de 40 M. La réaction est initiée par l'ajout d'une solution OMFP à 500 pM finale (préparée extemporanément à partir d'une solution stock 12,5 mM dans du DMSO 100% (Sigma #M2629)). Après 4 heures à 30 °C dans une plaque 384 puits à usage unique, la fluorescence mesurée à DO 475 nm est lue à l'aide d'un lecteur de plaque Victor2 (EGGWallac). La détermination de la concentration inhibant de 50% la réaction enzymatique est calculée à partir de trois expériences indépendantes. Seules les valeurs contenues dans la partie linéaire de la sigmoïde sont retenues pour l'analyse de régression linéaire. ii) Caractérisation de l'activité anti-proliférative : A titre d'exemple, on étudiera l'effet d'un traitement sur deux lignées de cellules humaines Mia-Paca2 et DU145 par les composés des exemples décrits précédemment. Les lignées cellulaires DU145 (cellules humaines de cancer de la prostate) et Mia-Paca2 (cellules humaines de cancer du pancréas) ont été acquises auprès de American Tissue Culture Collection (Rockville, Maryland, USA). Les cellules placées dans 80 l de milieu Eagle modifié de Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) complété avec 10% de sérum foetal de veau inactivé par chauffage (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50000 unités/l de pénicilline et 50 mg/l streptomycine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). et 2 mM de glutamine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) ont été ensemencées sur une plaque de 96 puits au jour 0. Les cellules ont été traitées au jour 1 pendant 96 heures avec des concentrations croissantes de chacun des composés à tester jusqu'à 10 .iM. A la fin de cette période, la quantification de la prolifération cellulaire est évaluée par test colorimétrique en se basant sur le clivage du sel de tétrazolium WST1 par les déhydrogénases mitochondriales dans les cellules viables conduisant à la formation de formazan (Boehringer Mannheim, Meylan, France). Ces tests sont effectués en double avec 8 déterminations par concentration testée. Pour chaque composé à tester, les valeurs incluses dans la partie linéaire de la sigmoïde ont été retenues pour une analyse en régression linéaire et utilisées pour estimer la concentration inhibitrice CI50. Les produits sont solubilisés dans le diméthylsulfoxide (DMSO) à 10-2 M et utilisés en culture avec 0.1% DMSO en final. Résultats des tests : Résultats sur l'enzyme CDC25 Les composés des exemples 1 et 2 présentés ci-dessus présentent une CI50 inférieure ou égale à 500 nM sur l'activité de l'enzyme recombinante Cdc25-C purifiée.

Parmi ces composés, l'exemple 1 présente une CI50 inférieure ou égale à 20 nM.

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1. Composé de formule générale (Ia), R5b / R4b N L N I I /> R1 R5a, i NN~ 1 R2 R4a R3 O sous forme racémique. d'énantiomère ou toute combinaison de ces formes dans laquelle. R1 représente un atome d'hydrogène ou l'un des radicaux suivants : • alkyle, cycloalkyle. ou cycloalkylalkyle, • cyano, • aryle, aralkyle, hétéroaryle ou hétéroarylalkyle, ces radicaux étant éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements identiques ou différents choisis parmi halo. alkyle, haloalkyle, alkoxy, haloalkoxy, hydroxy, nitro, cyano, -SO2NHR10 ou -NR1OR11, O (Ia) • un radical de formule : dans lequel r représente 1 ou
2. 2. • -(CH2)p-(CO),,-NR8R9, • -(CH2)p-(CO),,,-OR8 X représente un atome d'oxygène ou de soufre ; R2 représente un atome d'hydrogène, ou un radical alkyle; R8 et R9 représentent indépendamment un atome d'hydrogène, ou un radical choisi parmi :• alkyle, haloalkyle, alkoxyalkyle, cycloalkyle, cycloalkylalkyle, • aryle, aralkyle, hétéroaryle ou hétéroarylalkyle, ces radicaux étant éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements identiques ou différents choisis parmi halo, alkyle, haloalkyle, alkoxy, haloalkoxy, hydroxy, nitro, cyano, -SO-,NHR10 ou 5 -NR10R11, • un radical de formule : dans lequel r représente 1 ou 2, ou bien R8 et R9 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent, un radical hétérocycloalkyle ou un radical de formule 10 ou m et p représentent indépendamment 0 ou 1 étant entendu que m et p ne sont pas 0 en même temps R10 et R11 représentent indépendamment un atome d'hydrogène, ou un radical alkyle, ou bien R10 et R11 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical 15 hétérocycloalkyle ; R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ; R4a, R4b, R5a et R5b représentent indépendamment un atome d'hydrogène, un radical alkyle, aminoalkyle, alkylaminoalkyle ou dialkylaminoalkyle ; ou bien R4a et R5a et/ou R4b et R5b forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical 20 hétérocycloalkyle ; L représente un linker hydrocarboné comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé.2. Composé selon la revendication 1 caractérisé en ce que L est un linker hydrocarboné comportant éventuellement un atome d'azote.
3. 3. Composé selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un composé de formule générale (I) nW R5b ,R4b N R5a, N N 1 R4a R3O q N 1 R2~\N O R1 (I) sous forme racémique, d'énantiomère ou toute combinaison de ces formes, dans laquelle : W représente -NR6-, -CR6R7-, un atome d'oxygène ou un atome de soufre ; R6 et R7 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ; n et q sont des nombres entiers compris entre 0 et 6 inclus étant entendu que n et q ne sont 10 pas 0 en même temps : ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé.
4. 4. Composé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que RI représente un radical alkyle ou un radical aryle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants halo identiques ou différents. 15
5. 5. Composé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que R4a et R5a, et R4b et R5b forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent un radical hétérocycloalkyle.
6. 6. Composé selon l'une des revendications 3 à 5 caractérisé en ce que W représente - NR6- et R6 représente un radical alkyle. 20
7. 7. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que l'une ou plusieurs des propositions suivantes est satisfaite : - le terme hétérocycloalkyle désigne une pyrrolidine ou une pipéridine,- le terme aryle représente le radical phényle.
8. 8. Composé de formule générale (I) choisi parmi : 5-(}2-[{2-[(2,6-dipyrrolidin-l-ylpyrimidin-4-yl)amino]ethyl}(methyl)amino] ethyl}amino)-2-methyl-2,3-dihydro-1,3-benzothiazole-4,7-dione ; et 2-(2,5-difluorophenyl)-6-({2-[{2-[(2,6-dipyrrolidin-l-ylpyrimidin-4-yl) amino]ethyl } (methyl)amino]ethyl } amino)-1,3-benzoxazole-4,7-dione ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.
9. 9. Procédé de préparation d'un composé de formule générale (I) tel que défini à la revendication 3, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule générale (I int), R5b R4b N N" \\ R5a N N N R4a R3 (1 int) dans lequel R2, R3, R4a, R5a, R4b, R5b, W, n et q sont tels que définis à la revendication 3 avec un composé de formule générale (VI), O p N> R1 O (VI) dans lequel X et R1 sont tels que définis à la revendication 3.
10. 10. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, un composé de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 8 ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé, avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
11. 11. A titre de médicament, un composé de formule générale (I) selon l'une des 20 revendications 1 à 8 ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé. 21 q NH R2. Utilisation d'un composé de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 8 ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé, pour préparer un médicament destiné à traiter ou prévenir une maladie ou un désordre choisi parmi les maladies suivantes ou les désordres suivants : les cancers, les maladies prolifératives tumorales, les maladies prolifératives non tumorales, les maladies neurodégénératives, les maladies parasitaires, les infections virales, l'alopécie spontanée, l'alopécie induite par des produits exogènes, l'alopécie radio-induite, les maladies auto-immunes, les rejets de greffes, les maladies inflammatoires ou les allergies. 13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que le médicament préparé est destiné à traiter ou prévenir les cancers. 14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que les cancers destinés à être traités ou prévenus sont choisis parmi les cancers du colon, du rectum, de l'estomac, des poumons, du pancréas, du rein, des testicules, du sein, de l'utérus, de l'ovaire, de la prostate, de la peau, des os, de la moelle épinière, du cou, de la langue, de la tête ainsi que les sarcomes, les carcinomes, les fibroadénomes, les neuroblastomes, les leucémies, les mélanomes.