FR2915394A1 - Composition pharmaceutique et/ou cosmetique contenant des peptides - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, et notamment dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, des peptides dérivés du cytochrome c, en tant qu'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif. L'invention est également relative à l'utilisation de peptides dérivés du cytochrome c, en tant qu'agent actif, dans une composition cosmétique destinée à stimuler les défenses et la protection de la peau, en particulier vis-à-vis des dommages oxydatifs. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané.

Description

-1- La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et

pharmaceutique, et plus particulièrement dans le domaine de la dermatologie. La présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, et notamment dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, des peptides dérivés du cytochrome c, en tant qu'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif. L'invention est également relative à l'utilisation cosmétique d'une composition stimulant les défenses et la protection de la peau, en particulier vis-à-vis des dommages oxydatifs. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané. L'agent actif, dérivé du cytochrome c, peut également être utilisé pour préparer des compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou lutter contre les pathologies liées à des processus d'oxydation ou encore, certaines pathologies du vieillissement. Le terme phanères selon l'invention englobe l'ensemble des annexes kératiniques présentes à la surface du corps, en particulier les poils, les cils. les sourcils, les ongles et les cheveux.

La peau est un organe vital qui recouvre toute la surface du corps et assure des fonctions protectrices, sensitives, immunitaires, métaboliques ou encore thermorégulatrices. La peau, comme les autres organes, est soumise au vieillissement. Or, un des mécanismes majeurs impliqués dans les processus du vieillissement est l'accumulation de dommages oxydatifs dans des molécules essentielles telles que les lipides membranaires, les protéines, l'ADN et tout particulièrement l'ADN mitochondrial (ADNmt). Les dommages oxydatifs sont provoqués par les radicaux libres, des espèces chimiquement instables et très réactionnelles générées par le métabolisme intracellulaire ou les agressions extérieures. Parmi ces agressions extérieures, on peut citer : les rayonnements UV, les toxines, les polluants atmosphériques, les oxydants alimentaires. Dans la peau, on observe un vieillissement prématuré survenant dans les zones exposées aux rayonnements, caractérisé par des phénomènes d'altérations des macromolécules (péroxydation lipidique, carbonylation des protéines) touchant en particulier l'élastine, le collagène ou la fibronectine. On a également pu montrer un déclin progressif des fonctions mitochondriales avec l'âge, probablement lié à l'accumulation de mutations sur l'ADNmt (K. Singh, Ann. N.Y. Acad. Sei. 1019, 2004). -2- L'organisme possède des mécanismes de défense capables de piéger ou de transformer les radicaux libres (enzymes, glutathion, vitamines A et E, coenzyme Q10, etc.). Cependant, ces systèmes de défense antioxydants s'averent souvent insuffisants devant les nombreux stress et agressions extérieures auxquels sont soumis les organismes et la peau en particulier. Dans ce contexte, les propriétés particulières du cytochrome c apparaissent comme particulièrement intéressantes : Le cytochrome c est une petite protéine soluble de 15 kDa qui joue un rôle essentiel dans la fonction mitochondriale et dans la survie cellulaire. Le cytochrome c est une molécule hautement conservée chez la plupart des eucaryotes ; on la trouve dans les mitochondries des plantes, des animaux et de nombreux organismes unicellulaires. Le cytochrome c présente une structure protéique organisée autour d'une porphyrine, constituée de quatre noyaux pyrrol, eux-mêmes liés à un atome de fer. Le rôle principal du cytochrome c est d'assurer le transfert d'électrons, grâce au changement de valence de l'atome de fer. Le cytochrome c, qui est soluble, transporte ainsi les électrons depuis le complexe III (coenzyme QH2-cytochrome c réductase) jusqu'au complexe IV (cytochrome oxydase). Les électrons, qui sont le substrat de la cytochrome oxydase, sont alors transférés par l'enzyme vers l'oxygène.

La recherche de composés pouvant stimuler les défenses de la peau ou protéger cette dernière afin de prévenir ou de lutter contre les signes du vieillissement cutané, ou les dommages causés par les agressions extérieures, telles que les rayonnements UV, les radiations, ou les expositions à des toxines ou à des polluants, est une préoccupation importante de la recherche médicale et de la cosmétique. A cet égard, il a été proposé des compositions cosmétiques ou thérapeutiques contenant du cytochrome c modifié, rendu soluble ou stabilisé (GB990082, CAl272958), ou encore des polypeptides de grande taille, dérivés de domaines structuraux du cytochrome c (WO0212320). Mais à la connaissance de la demanderesse, aucune composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant des peptides dérivés du cytochrome c, tels que divulgués dans la présente invention, n'a encore été décrite.

La présente invention a pour principal objectif de fournir un nouvel agent actif, capable de protéger la peau des agressions extérieures et de lutter contre le vieillissement -3- cutané. Les inventeurs ont en effet mis en évidence une activité cosmétique et thérapeutique, notamment dermatologique, des peptides dérivés du cytochrome c. Il a en particulier été mis en évidence que ces peptides, lorsqu'ils sont appliqués sur la peau, ont une forte activité protectrice vis-à-vis des agressions extérieures subies par la peau, démontrée par une protection vis-à-vis des dommages oxydatifs et une diminution de l'apoptose. Ces nouveaux agents actifs capables de protéger la peau des agressions extérieures permettent ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques et cosmétiques. On entend par agent actif capable de protéger la peau de'; agressions extérieures , toute substance capable de présenter des propriétés protectrices ou de diminuer l'apoptose dans des cellules ou des tissus soumis à un stress d'origine physico-chimique ou environnementale.

Ainsi, l'invention a pour objet premier une composition cosmétique ou pharmaceutique, et notamment dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, des peptides dérivés du cytochrome c, en tant qu'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif. Préférentiellement, selon la présente invention, lesdits peptides dérivés du cytochrome c ou leurs dérivés biologiquement actifs sont des peptides dont le nombre d'acides aminés 20 est compris entre 3 et 50, et plus particulièrement entre 3 et 8. L'expression peptides dérivés du cytochrome c désigne tout fragment peptidique biologiquement actif dont la séquence en acides aminés est, entièrement ou partiellement, analogue ou homologue des séquences peptidiques du cytochrome c. Par l'expression biologiquement actif , on entend qui possède une activité in vivo ou in vitro 25 caractéristique de l'activité de l'agent actif selon l'invention .

Selon une méthode particulièrement avantageuse de réalisation de l'invention, le peptide possède une séquence qui répond en tout ou en partie à la formule générale (I)

30 Ri-(AA)ä- XI-X2- X3- X4-X;- X6-(AA)p-R2 Dans laquelle XI est la glutamine, l'asparagine, la tyrosine ou la proline, X2 est la cystéine, la proline, la leucine, l'isoleucine ou la glycine, -4- X3 est l'histidine, la lysine, la thréonine ou l'arginine, X4 est la thréonine, la sérine, la lysine, l'arginine ou aucun acide aminé, X5 est la valine, l'alanine, la tyrosine, la méthionine ou aucun acide aminé, X6 est l'acide glutamique, l'isoleucine ou aucun acide aminé.

AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, absent de la séquence du cytochrome c, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4. RI représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. RI représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de Cl à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C 1 à C4.

Selon une méthode de réalisation de l'invention tout particulièrement préférée, le peptide biologiquement actif est de séquence :

(SEQ ID n 1) Gln-Cys-His-Thr-Val-Glu-Lys (SEQ ID n 2) Gln-Cys-His-Ser-Ala-Glu-Arg (SEQ ID n 3) Asn-Pro-Lys-Lys-Tyr-lle (SEQ ID n 4) Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala (SEQ ID n 5) Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala -NH2 (SEQ ID n 6) Pro-Gly-Thr-Lys-Met (SEQ ID n 7) Tyr-Ile-Lys-Arg-Ala-NH2 (SEQ ID n 8) Tyr-LeurArg-Arg-Val (SEQ ID n 9) Tyr-Leu-Lys-Lys-NH2 (SEQ ID n 10) Tyr-Leu-Lys Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide biologiquement actif correspond à la séquence SEQ ID n 4. Selon un autre mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide biologiquement actif correspond à la séquence SEQ ID n 5. -5- L'invention concerne aussi des formes homologues de ces séquences. Le terme homologue désigne, selon l'invention, toute séquence peptidique identique à au moins 50%, ou de préférence au moins 80%, et encore plus préférentiellement à au moins 90% de ladite séquence peptidique, choisie parmi les séquences SEQ ID n 1 à SEQ ID n 10.

Par séquence peptidique identique à au moins X% , on entend désigner un pourcentage d'identité entre les résidus d'acides aminés des deux séquences à comparer, obtenu après l'alignement optimal des deux séquences. L'alignement optimal est obtenu à l'aide d'algorithmes d'homologies locales tels que ceux utilisés par les logiciels informatiques BLAST P ou T BLAST N disponibles sur le site NCBI.

Le terme homologue peut également désigner un peptide qui diffère de la séquence d'un peptide de séquence SEQ ID n 1 à SEQ ID n 10 par la substitution d'acides aminés chimiquement équivalents, c'est-à- dire par la substitution d'un résidu par un autre possédant les mêmes caractéristiques. Ainsi, les substitutions classiques se font entre Ala, Val, Leu et Ile ; entre Ser et Thr ; entre les résidus acides Asp et Glu ; entre Asn et Gln ; et entre les résidus basiques Lys et Arg ; ou entre les résidus aromatiques Phe et Tyr. Dans l'invention, le terme acide aminé se réfère ici à tout acide organique naturel ou non naturel ayant la formule : -NHR-CR-C(0)-O- où chaque -R est indépendamment sélectionné entre un hydrogène et un groupement alkyl ayant entre 1 et 12 atomes de carbone. Préférentiellement, au moins un groupement -R de chaque acide aminé est un hydrogène. Par le terme alkyl , on entend ici une chaîne carbonée pouvant être linéaire ou ramifiée, substituée (mono- ou poly-) ou non-substituée ; saturée, mono-saturée (une double ou triple liaison dans la chaîne) ou poly- insaturée (deux ou plusieurs doubles liaisons, deux ou plusieurs triples liaisons, une ou plusieurs doubles liaisons et une ou plusieurs triples liaisons dans la chaîne). Le terme peptide désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées. Par peptide , il faut entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel que décrit ci-dessus ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide précédemment décrit. -6- De façon à améliorer la résistance à la dégradation, il peut être nécessaire d'utiliser une forme protégée du peptide selon l'invention. La forme de protection doit évidemment être une forme biologiquement compatible et doit être compatible avec une utilisation dans le domaine des cosmétiques ou de la pharmacie.

De nombreuses formes de protection biologiquement compatibles peuvent être envisagées, elles sont bien connues de l'homme du métier comme, par exemple, l'acylation ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale, ou l'amidation ou l'estérification de l'extrémité carboxy-terminale. Ainsi, l'invention concerne une composition telle que définie précédemment, caractérisée par le fait que le peptide de séquence SEQ ID n 1 à SEQ ID n 10 est sous forme protégée ou non. On peut utiliser une protection basée sur une substitution sur l'extrémité amino-terminale par un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. De préférence, on utilise une protection basée sur l'amidation de la fonction hydroxyle de l'extrémité carboxy-terminale par un goupement NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de CI à C4, ou l'estérification par un groupement alkyle. Il est également possible de protéger les deux extrémités du peptide. Les dérivés de peptides concernent aussi les acides aminés et les peptides reliés entre eux par une liaison pseudo-peptidique. On entend par liaison pseudo-peptidique , tous les types de liaisons susceptibles de remplacer les liaisons peptidiques classiques .

Dans le domaine des acides aminés, la géométrie des molécules est telle qu'elles peuvent théoriquement se présenter sous la forme d'isomères optiques différents. Il existe, en effet, une conformation moléculaire de l'acide aminé (AA) telle qu'elle dévie à droite le plan de polarisation de la lumière (conformation dextrogyre ou D-aa), et une conformation moléculaire de l'acide aminé (aa) telle qu'elle dévie à gauche le plan de polarisation de la lumière (conformation lévogyre ou L-aa). Les acides aminés naturels sont toujours de conformation lévogyre, en conséquence, un peptide d'origine naturelle ne sera constitué que d'acides aminés de type L-aa. Cependant, la synthèse chimique en laboratoire permet de préparer des acides aminés ayant les deux conformations possibles. A partir de ce matériel de base, il est ainsi possible d'incorporer lors de la synthèse de peptide aussi bien des acides aminés sous forme d'isomères optiques dextrogyre ou lévogyre. Ainsi, les acides aminés constituant le peptide selon l'invention peuvent être sous configuration L- et D- ; de manière préférentielle, les acides aminés sont sous forme L. Le peptide selon l'invention peut donc être sous forme L-, D- ou DL-. -7- Le peptide de formule générale (I) selon l'invention peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 225, 8234), à partir d'acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés.

Le peptide selon l'invention peut également être obtenu par fermentation d'une souche de bactéries modifiées ou non, par génie génétique, ou encore par extraction de protéines d'origine animale ou végétale, préférentiellement d'origines végétale, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des fragments peptidiques correspondant totalement ou partiellement aux peptides de formule générale (I).

De très nombreuses protéines trouvées dans les plantes sort susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces fragments peptidiques. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les fragments peptidiques ensuite. Il est également possible d'utiliser certains extraits hydrolysés sans en purifier les fragments peptidiques correspondant aux peptides de formule générale I selon l'invention, mais en s'assurant toutefois de la présence desdits fragments par des moyens analytiques appropriés. D'autres procédés plus simples ou plus complexes peuvent être envisagés par l'homme du métier connaissant le métier de synthèse, d'extraction et: de purification des protéines et des peptides. Ainsi le peptide selon l'invention peut être d'origine naturelle ou synthétique. Préférentiellement selon l'invention, le peptide est obtenu par synthèse chimique. Selon l'invention, l'agent actif peut être un mélange de dérivés peptidiques et/ou constitués de dérivés d'acides aminés.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme du métier, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. -8- Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. La composition utilisable selon l'invention peut en particulier consister en une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée notamment dans les traitements mettant en oeuvre une application qui est suivie ou non suivie d'un rinçage, ou encore sous forme de shampooing. Elle peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou los cheveux.

Il est bien entendu que l'agent actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec au moins un autre agent actif, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique et/ou dermatologique.

Les compositions selon l'invention pourront être appliquées par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique externe, et leur formulation sera adaptée par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à une administration par voie topique cutanée. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore de poudres, adaptés à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, anti-oxydants, colorants, conservateurs, parfums. -9- Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent en outre divers agents actifs destinés, notamment, à la prévention et/ou au traitement des désordres liés au photo-vieillissement. Ainsi, la composition selon l'invention peut associer, à l'agent actif selon l'invention, d'autres agents actifs favorisant son action. Par exemple, il peut être ajouté des agents actifs ayant une action anti-radicalaire ou antioxydante, choisis parmi la vitamine C, la vitamine E, le coenzyme Q10 et les extraits polyphénoliques de plantes. La composition selon l'invention peut encore associer, à l'agent actif selon l'invention, des agents actifs stimulant les synthèses des macromolécules dermiques (laminine, fibronectine, collagène), par exemple le peptide de collagène commercialisé sous le nom Collaxyl par la société Vincience. La composition selon l'invention peut également associer, à l'agent actif selon l'invention, des agents actifs stimulant le métabolisme énergétique, comme l'agent actif commercialisé sous la dénomination GP4G par la société Vincience.

Selon un autre aspect. la composition selon l'invention peut être une composition solaire, c'est-à-dire une composition aidant à la protection contre le rayonnement solaire. Ainsi, il peut être avantageusement ajouté, à la composition selon l'invention, des actifs aidant à la protection solaire tels que, par exemple, des filtres solaires. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus particulièrement aux êtres humains. La quantité efficace d'agent actif correspond à la quantité nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir, stimuler les défenses de la peau et protéger cette dernière vis-à-vis des agressions extérieures, en particulier les dommages oxydatifs, et plus généralement, protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et lutter contre le vieillissement cutané. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif selon l'invention est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm (parties par million) environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm environ par rapport au poids total de la composition finale.

Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, -10- les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des an-fi-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30' % en poids, par rapport au poids total de la composition. Par ses activités particulières, l'agent actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique.

En particulier, l'agent actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique destinée à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané et, plus spécifiquement, afin de lutter contre et/ou de prévenir le vieillissement photo-induit (photo-vieillissement). Par manifestations cutanées du vieillissement, on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau -11- qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV). L'agent actif selon l'invention, ou la composition le contenant, permettra de lutter, en particulier, contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau. L'agent actif selon l'invention permet de protéger la peau et les phanères contre tous types d'agressions extérieures. L'utilisation de l'agent actif, ou d'une composition le contenant, va permettre à la peau et aux phanères d'être protégés et de mieux résister aux stress environnementaux.

Ainsi, un aspect particulier de l'invention est l'utilisation de l'agent actif selon l'invention, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, à usage topique, destinée, notamment, à obtenir une activité protectrice vis-à-vis des dommages oxydatifs. Ledit agent actif étant avantageusement utilisé en tant qu'agent antioxydant et/ou en tant qu'agent anti-radicalaire et, ou en tant qu'agent anti- glycation. Par agent anti-radicalaire, on entend tout composé capable de piéger les radicaux libres avant les étapes ultimes de dégradation des constituants biologiques de la peau, on parle alors de composés antioxydants. Par agent anti• glycation, on entend tout composé capable de limiter les dommages cellulaires causés par les réactions de glycation ou de glycoxydation. Ainsi, l'agent actif selon l'invention permettra de lutter contre les dommages esthétiques provoqués sur la peau et/ou les cheveux par les radicaux libres.

On entend par l'expression agression extérieure , les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution extérieure due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution intérieure qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehyde), ou bien encore la fumée de cigarette.

L'agent actif selon l'invention peut être avantageusement utilisé dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, en tant qu'agent photo-protecteur et, plus particulièrement, en tant qu'agent photo-protecteur dit secondaire . On distingue, en effet, les agents photo-protecteurs primaires des -12agents photo-protecteurs secondaires. Les agents photo-protecteurs primaires sont des substances qui exercent un pouvoir physique : ils sont en mesure d'absorber les rayonnements UV et de les restituer sous forme de chaleur afin de protéger la peau. Les agents photo-protecteurs secondaires sont des substances qui ont généralement un effet biologique ; ce sont, par exemple, les agents capables de limiter les dommages causés à l'ADN et aux membranes par la pénétration des rayonnements LEV dans la peau.

L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace d'agent actif tel que décrit précédemment, l'agentactif, ou la composition le contenant, étant destiné à prévenir les dommages causés à la peau par une exposition au soleil ou une exposition à des rayonnements ionisants lors de radiothérapies.

L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace d'agent actif tel que décrit précédemment, l'agent actif, ou la composition le contenant, étant destiné à protéger les mitochondries, en particulier sur les zones du corps exposées aux rayonnements UV.

L'invention consiste encore en une composition pharmaceutique caractérisée en ce que l'agent actif selon l'invention est formulé pour atténuer une pathologie liée à des processus d'oxydation ou encore, certaines pathologies du vieillissement.

L'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à stimuler les défenses et à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé par l'application, sur la peau ou les phanères à traiter, d'une composition contenant une quantité efficace de l'agent actif selon l'invention.

Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. -13-Exemple 1 : Evaluation de l'effet protecteur du peptide SEO ID n 5 vis-à-vis des dommages oxydatifs Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du peptide SEQ ID n 5 vis-à- vis de fibroblastes dermiques soumis à un stress oxydatif provoqué par des rayonnements UVB. Pour évaluer les dommages oxydatifs subis par les cellules, des dosages de la carbonylation des protéines ont été réalisés. La carbonylation des protéines résulte du clivage oxydatif des protéines ou d'une oxydation des résidus argini.ne, lysine, proline ou thréonine. Le dosage de la 10 carbonylation des protéines s'effectue par une technique EIA (Enzyme Immuno Assay). Protocole : Des fibroblastes en culture ont été mis en présence du peptide SEQ ID n 5 à 1 %, à partir d'une solution mère à 50 ppm, 72 heures avant, pendant, et encore 24 heures après l'irradiation aux UVB à 100 mJ/cm2. Des contrôles non traités sont réalisés. 15 La mesure de la carbonylation consiste à utiliser du DNI' (dinitrophényl) qui a la propriété de se fixer spécifiquement sur les groupements carbonyles des protéines. Le DNP fixé sera ensuite dosé par une méthode ELISA, grâce à un anticorps anti-DNP biotinylé (DNP-KLH, Molecular Probes). Une gamme de BSA (bovine sérum albumine) oxydée (dont on connaît la concentration en groupements carbonyles) est utilisée pour 20 l'étalonnage. Résultats : Les résultats obtenus montrent une diminution de 39% de la carbonylation des protéines lorsque les cellules sont traitées avec le peptide SEQ ID n 5 selon l'invention, en comparaison avec les cellules non traitées. 25 On observe plus particulièrement une diminution de 21 % de la carbonylation lorsque les cellules traitées avec le peptide SEQ ID n 5 sont soumises à une irradiation par les UVB, par comparaison aux cellules irradiées mais non traitées avec l'agent actif. Conclusions : Le peptide SEQ ID n 5 limite la carbonylation de cellules non stressées et protège 30 efficacement les cellules cutanées contre les dommages oxydatifs provoqués par des rayonnements UVB. -14- Exemple 2 : Evaluation de l'effet protecteur du peptide SEO ID n 5 vis-à-vis d'un stress induit par la glycation Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du peptide SEQ ID n 5, vis- à-vis de culture d'épiderme ex vivo soumises à un stress par un agent glycant . Protocole Des biopsies de peau humaine sont maintenues en culture .'x vivo, traitées avec une solution à 1 %, d'une solution mère à 50 ppm de peptide SEQ Il) n 5, 24 heures avant, et encore 24 heures après la mise en présence avec un agent glycant (méthyl glyoxal à 5 ou 10 mM). Des coupes et des colorations histologiques hématoxyline-éosine (H&E) permettent d'évaluer la qualité des structures cutanées. Résultats L'observation des coupes de peau montrent une nette diminution des signes de stress cellulaire et une meilleure préservation des structures cutanées dans les biopsies de peau traitées par le peptide SEQ ID n 5, comparées aux biopsies de peau non traitées. Conclusions : Le peptide SEQ ID n 5 protège efficacement la peau du stress induit par la glycation.

Exemple 3 : Evaluation de l'effet protecteur et anti-apoptotique du peptide SEO ID n 5 sur les cellules cutanées soumises à un stress oxydatif ou à une irradiation UVB Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du peptide SEQ ID n 5 vis-à-vis de fibroblastes dermiques soumis à un stress oxydatif, provoqué par de l'eau oxygénée (H2O2) ou à une irradiation UV13. On utilise pour ce test l'annexine V, un marqueur des modifications de la membrane cellulaire qui apparaissent précocement dans l'apoptose : l'asymétrie des lipides membranaires est perturbée et la phosphatidyl-sérine se retrouve exposée à la surface de la cellule. L'annexine V fluorée peut alors se fixer sur la phosphatidyl sérine et marquer les cellules apoptotiques. Protocole Les fibroblastes dermiques humains sont traités avec une solution à 1 %, d'une solution mère à 50 ppm de peptide SEQ ID n 5, pendant 72 heures, puis soumis à un stress oxydatif provoqué par de l'H2O2 à 2 mM, pendant 30 minutes ou à une irradiation UVB à 50 mJ/cm2. Des contrôles non traités par le peptide ou par de l'H2O2. ou non -15- irradiés, ainsi que des contrôles traités seulement par le peptide, sont réalisés dans les mêmes conditions. A la fin de l'expérimentation, les cellules sont lavées, fixées et soumises à un marquage par de l'annexine V fluorée, afin de révéler la perturbation des membranes, signe précoce de l'apoptose.

Résultats : Dans les conditions de contrôle, les fibroblastes non irradiés ou non soumis à un stress oxydatif, présentent une fluorescence très faible. Dans les conditions de stress (UVB et H2O2) la fluorescence est nettement visible dans une majorité de fibroblastes. Au contraire, dans les mêmes conditions de stress, les fibroblastes traités par le peptide SEQ ID n 5 présentent une fluorescence très inférieure. Conclusions : Le peptide SEQ ID n 5, protège les cellules cutanées vis-à-vis des stress oxydatifs et de l'irradiation par des UVB et diminue sensiblement le nombre de cellules apoptotiques.

Exemple 4 : Préparation de compositions 1 - Crème protection solaire:, Noms commerciaux Noms INCI % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0,40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3,00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0,15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3,00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4, 00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) 5,00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben 4ù 0,15 Propylparaben 4 -16- Noms commerciaux Noms INCI % massique Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA I Triethanolamine J 0,20 PHASE D Peptide SEQ ID n 5 3 ppm Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70 C et 75 C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45 C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40 C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C sous vive agitation.

2 ûLait après-soleil : Noms commerciaux Noms INCI % massique PHASE A Montanov L C 14-22 Alcohols (and) C 12-20 3,00 Alkyl Glucoside Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4,00 Tegosoft TN C12-15 Alkyl Benzoate 3,00 Huile de Noyaux d'Abricot Prunus Armeniaca (Apricot) Kernel 2,00 Oil Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,00 Ahil 350 Dimethicone 1,00 PHASE B Eau déminéralisée [.qua (Water) qsp PHASE C -17- Noms commerciaux Noms INCI % massique Simulgel EG Sodium Acrylate/Acryloyldimethyl 0,4 T'aurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D Phenonip Phenoxyethanol (and) 0,30 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Ethylparaben and Propylparaben and Buthylparaben Germall 115 I:midazolidinyl Urea 0,20 PHASE E Peptide SEQ ID n 5 0,1 ppm Préparer la phase A sous agitation. Incorporer la gomme xanthane progressivement, sous agitation défloculeuse. Les phases C et D seront incorporées une fois le gel terminé. La phase E, préparée préalablement jusqu'à parfaite dissolution de la DHA, sera rajoutée ensuite. Ajuster le pH si nécessaire à 4 - 4,5. Colorer et parfumer.

3 ùCrème anti-âge : Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrosperrnum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 -18- Noms Noms INCI % commerciaux massique Abil 350 Dirnethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Coenzyme Q10 Ubiquinone 0,10 Phase B Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam El0 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 Phase D TEA Triethanolamine 0,18 Phase E Peptide SEQ ID n 5 0,5 ppm GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3,00 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70 C. Chauffer la phase C à 65-70 C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45 C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère -19- agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C. La phase F est alors additionnée si souhaité.

4 ûCrème protectrice de jour_ Noms commerciaux Noms INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG- 4,00 75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Lanette O Cetearyl Alcohol 1,50 D C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0,70 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xarrthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide (sol.à Sodium Hydroxide 0,30 10%) Phase D -20- Eau déminéralisée Aqua 5, 00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Peptide SEQ ID n 5 5 ppm Préparer la phase A et chauffer à 75 C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75 C. A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40 C, additionner la phase D, puis la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée.

Claims (16)

REVENDICATIONS

1. Composition cosmétique ou pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient en tant qu'agent actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un peptide dérivé du cytochrome c ou un dérivé biologiquement actif de celui-ci, comprenant de 3 à 50 résidus d'acides aminés et plus particulièrement de 3 à 8 résidus d'acides aminés, et dont la séquence répond en tout ou en partie à la formule générale (I) : R1-(AA)ä- X1-X2- X3- X4-X5- X6-(AA)p R2 Dans laquelle XI est la glutamine, l'asparagine, la tyrosine ou la proline, X2 est la cystéine, la proline, la leucine, l'isoleucine ou la glycine, X3 est l'histidine, la lysine, la thréonine ou l'arginine, X4 est la thréonine, la sérine, la lysine, l'arginine ou aucun acide aminé, Xs est la valine, l'alanine, la tyrosine, la méthionine ou aucun acide aminé X6 est l'acide glutamique, l'isoleucine ou aucun acide aminé AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, absent de la séquence du cytochrome c, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, RI représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de Cl à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de Cl à C4.

2. Composition cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) correspond à une des séquences suivantes : (SEQ ID n 1) Gln-Cys-His-Thr-Val-Glu-Lys (SEQ ID n 2) Gln-Cys-His-Ser-Ala-Glu-Arg (SEQ ID n 3) Asn-Pro--Lys-Lys-Tyr-Ile (SEQ ID n 4) Tyr-Leu--Lys-Lys-Ala-22- (SEQ ID n 5) Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala -NH2 (SEQ ID n 6) Pro-Gly-Thr-Lys-Met (SEQ ID n 7) Tyr-Ile-Lys-Arg-Ala-NH2 (SEQ ID n 8) Tyr-Leu-Arg-Arg-Val (SEQ ID n 9) Tyr-Leu-Lys-Lys-NH2 (SEQ ID n 10) Tyr-Leu-Lys

3. Composition selon la revendication 2 caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) correspond à la séquence SEQ ID n 4.

4. Composition selon la revendication 2 caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) correspond à la séquence SEQ ID n 5.

5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en 15 ce que le peptide de formule générale (I) possède au moins ion groupement fonctionnel protégé par un groupement protecteur, ce groupement protecteur étant soit une acylation ou une acétylation de l'extrémité amino-terminale, soit une amidation ou une estérification de l'extrémité carboxy-terminale, soit les deux. 20

6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm. 25

7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile 30 végétale ou tout mélange de ces solvants.10-23-

8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.

9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient, en outre., au moins un agent actif antioxydant et/ou au moins un agent actif stimulant la synthèse de la matrice extracellulaire, et/ou au moins un agent actif stimulant le métabolisme cellulaire énergétique.

10. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique. 15

11. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à protéger la peau et les phanères contre tous les types d'agressions extérieures. 20

12. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les dommages causés à la peau et aux phanères par les rayonnements UV. 25

13. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à protéger la peau et les phanères des dommages oxydatifs. 10 3010-24-

14. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les signes cutanés 5 du vieillissement et/ou du photo-vieillissement.

15. Utilisation d'une quantité efficace d'agent actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour préparer des compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou à lutter contre les pathologies liées aux processus d'oxydation.

16. Procédé de traitement cosmétique destiné à stimuler les défenses et à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures, caractérisé eu ce que l'on applique topiquement sur la peau ou les phanères à traiter une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 15