FR2912313A1 - Combination, useful for the preparation of cosmetic or dermatological composition to prevent and/or treat skin aging, comprises wheat germ extract and esculin - Google Patents
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Abstract
Description
COMPOSITION D'EXTRAIT DE BLE ET D'ESCULINE ET UTILISATION EN COSMETIQUECOMPOSITION OF WHEAT AND ESCULIN EXTRACT AND USE IN COSMETICS
DESCRIPTION 5DESCRIPTION 5
Domaine technique La présente invention se rapporte à une association comprenant un extrait de germe de blé et de l'esculine, à une composition 1 o cométique ou dermatologique, ainsi qu'à un procédé de fabrication de ces compositions. On entend par association, un mélange d'un extrait de germe de blé et d'esculine. TECHNICAL FIELD The present invention relates to a combination comprising a wheat germ extract and esculin, to a comet or dermatological composition, and to a method of making such compositions. By association is meant a mixture of wheat germ extract and esculin.
Les compositions de la présente invention permettent 15 notamment de protéger les cellules épidermiques face à des agressions externes et de prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané. The compositions of the present invention make it possible in particular to protect the epidermal cells against external aggression and to prevent and / or treat skin aging.
Art antérieur L'esculine est une molécule naturelle appartenant à la catégorie 20 des coumarines, plus particulièrement des 7 hydroxy coumarines. L'esculine ou esculoside est une coumarine, benzo pyrone naturelle de la structure suivante : OH HO .. OH HOC"` O 25 L'esculine se retrouve dans nombre d'espèces végétales mais une des sources les plus connues est l'écorce de marronnier d'inde O HO Background Art Esculin is a natural molecule belonging to the category of coumarins, more particularly 7 hydroxy coumarins. Esculin or esculoside is a coumarin, a natural benzopyrone of the following structure: A HOH. OH HOC "O 25 Aesculin is found in many plant species, but one of the best known sources is the bark of horse chestnut O HO
(Aesculus hippocastanum). La molécule est connue pour ses capacités de fluorescence sous lumière UV et ses propriétés azurantes. Il est connu depuis longtemps que l'esculine possède une action sur la microcirculation et pour ce fait est fréquemment retrouvée dans des préparations pharmaceutiques pour les jambes lourdes ou pour les hémorroïdes. En cosmétique, très peu de brevets liés à l'utilisation d'esculine ont été détectés. On peut citer par exemple la demande JP6145035, ayant pour titre Composition cosmétique protégeant des rayons ultraviolets ( ULTRAVIOLET RAY PREVENTING COSMETIC ), ou la demande JP5000934, ayant pour titre Péparation externe pour la peau ( EXTERNAL PREPARATION FOR SKIN ) où l'esculine est utilisée en tant qu'inhibiteur de synthèse de mélanine. L'extrait de germe de blé, par sa richesse en nutriments, protéines , vitamines , oligoéléments, ou lipides et vitamine E pour un extrait de type huileux, est très utilisé en cosmétique pour ses propriétés nourrissantes. En revanche, les inventeurs n'ont détecté aucun art antérieur divulguant une composition associant à la fois de l'esculine et un extrait de germe de blé. Cette association est à la base de la présente invention. Elle présente de nombreux effets inattendus sur les cellules de la peau, effets qui sont exposés ci-dessous et démontrés au travers des résultats expérimentaux fournis dans la présente demande. (Aesculus hippocastanum). The molecule is known for its fluorescence capabilities under UV light and its brightening properties. It has long been known that esculin has an action on microcirculation and for this reason is frequently found in pharmaceutical preparations for heavy legs or for hemorrhoids. In cosmetics, very few patents related to the use of esculin have been detected. For example, there may be mentioned the application JP6145035, entitled Ultraviolet Protection Cosmetic Composition (ULTRAVIOLET RAY PREVENTING COSMETIC), or the application JP5000934, entitled External Skin Preparation (EXTERNAL PREPARATION FOR SKIN) where esculin is used. as a melanin synthesis inhibitor. Wheat germ extract, rich in nutrients, proteins, vitamins, trace elements, or lipids and vitamin E for an oily extract, is widely used in cosmetics for its nourishing properties. In contrast, the inventors have not detected any prior art disclosing a composition associating both esculin and a wheat germ extract. This association is the basis of the present invention. It has many unexpected effects on skin cells, effects which are discussed below and demonstrated through the experimental results provided in the present application.
Exposé de l'invention L'association de la présente invention comprend donc un extrait de germe de blé et de l'esculine. Cette composition, comme décrit dans la présente, peut être une composition cosmétique. Lors de différents tests in vitro réalisés à partir de cette association, les inventeurs ont montré l'intérêt de cette association, bénéfique notamment dans le domaine de l'anti-âge. En particulier, les inventeurs ont démontré que l'association de l'extrait de germe de blé et de l'esculine présente in vitro d'intéressantes activités sur plusieurs mécanismes biologiques. Cette association montre d'ailleurs une certaine synergie d'action pour ces activités. Ces activités sont décrite ci-après : Premièrement, une activité sur la prolifération des kératinocytes en culture monocouche : l'association de la présente invention stimule de façon significative la prolifération de kératinocytes en culture monocouche. Deuxièmement, une activité sur la protection des cellules épidermiques face à certaines agressions : l'association de la présente 1 o invention possède d'une part des propriétés de lutte contre des agressions appliquées à la peau, notamment les agressions UVB et les agressions thermiques par application de chaud ou de froid, on entend par température chaude ou froide, des températures des climats tempérés, et d'autre part permet de protéger les kératinocytes et d'en augmenter leur 15 viabilité dans des conditions d'agression par UVB et d'agressions thermiques. L'association de l'invention présente un rôle préventif, puisque son apport avant les agressions permet, in vitro, d'augmenter la viabilité cellulaire, ainsi qu'un pouvoir curatif, puisque son apport après les agressions permet aux cellules de retrouver plus rapidement une bonne 20 viabilité. Aussi, l'association de la présente invention permet une protection immédiate et totale puisque sa présence, respectivement pendant les agressions, ou avant, pendant et après les agressions (correspondant à un traitement total) permet aux cellules épidermiques de retrouver une viabilité cellulaire nécessaire. L'association de l'extrait de 25 germe de blé avec l'esculine peut donc être présentée comme un actif anti-agression ou anti-stress . Aussi, cette association permet d'obtenir non seulement des effets additionnels, mais aussi des effets synergiques sur la viabilité des cellules épidermiques soumises à des agressions UVB et/ou thermique par application de chaleur ou de froid. 30 Troisièmement, une activité sur l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermo-épidermique : Les intégrines sont des SUMMARY OF THE INVENTION The combination of the present invention thus comprises an extract of wheat germ and esculin. This composition, as described herein, can be a cosmetic composition. During various in vitro tests carried out from this combination, the inventors have shown the interest of this combination, beneficial in particular in the field of anti-aging. In particular, the inventors have demonstrated that the combination of the wheat germ extract and esculin has in vitro interesting activities on several biological mechanisms. This association also shows a certain synergy of action for these activities. These activities are described below: First, an activity on the proliferation of keratinocytes in monolayer culture: the combination of the present invention significantly stimulates the proliferation of keratinocytes in monolayer culture. Secondly, an activity on the protection of epidermal cells against certain aggressions: the combination of the present invention has, on the one hand, properties for combating aggressions applied to the skin, in particular UVB aggressions and thermal aggressions by application of hot or cold, is meant by hot or cold temperature, temperatures of temperate climates, and secondly protects the keratinocytes and increase their viability under conditions of UVB aggression and thermal aggressions. The combination of the invention has a preventive role, since its contribution before the attacks allows, in vitro, to increase the cell viability, as well as a curative power, since its contribution after the attacks allows the cells to recover more quickly good viability. Also, the combination of the present invention allows immediate and complete protection since its presence, respectively during the aggressions, or before, during and after the attacks (corresponding to a total treatment) allows the epidermal cells to find a necessary cell viability. The combination of wheat germ extract with esculin may therefore be presented as an anti-aggression or anti-stress active. Also, this combination makes it possible to obtain not only additional effects, but also synergistic effects on the viability of the epidermal cells subjected to UVB and / or thermal attacks by application of heat or cold. Third, an activity on the expression of α2131 integrins at the dermoepidermal junction: The integrins are
récepteurs membranaires constitués de deux sous unités a et R. Elles assurent, d'une part, une fonction d'adhésion cellules-cellules ou cellules-matrice extracellulaire (MEC) et d'autre part, une fonction de transduction du signal. Associées à leurs ligands de la MEC, elles jouent un rôle important pour la différenciation, la migration et l'adhésion des kératinocytes basaux à la jonction dermo-épidermique (JDE). Les intégrines et leur rôle(s) sont décrits dans les documents Role of integrins in regulating epidermal adhesions, growth and differenciation û F.M. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No 15 : 3919-3926 [1], Laminin 5 deposition promotes kératinocytes motility û K. Zhangé and R.H. Kramer, Experimental Oeil Research 1996, 227: 309-322 [2], et Keratinocyte migration requires intégrine a2131 mediated interaction with the laminine 5 y2 chain û F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114 : 811-823 [3]. L'ancrage des kératinocytes à la JDE régule le phénomène de différenciation kératinocytaire. Particulièrement, les isotypes a2131, a3131 et a6134 sont les 3 principales intégrines exprimées de façon constitutive par les kératinocytes. Les intégrines a2131, comme toutes les intégrines pl sont localisées sur les membranes des cellules. Les intégrines a2131 ont un rôle prépondérant dans l'adhésion intercellulaire, elles ont pour ligands extracellulaires le collagène principalement. Des études sur des cultures de kératinocytes humains normaux (KHN) in vitro sur subsrat de collagène ont permis de réaliser des immnunomarquages de différentes intégrines. Les résultats ont montré que le traitement des KHN par l'association entre l'extrait de germe de blé et de l'esculine permet une augmentation de l'expression des intégrines a2131. Ceci se traduit par une augmentation des cohésions intercellulaires et inter-tissulaires entre l'épiderme et le derme, cohésions qui ont tendance à diminuer lors du vieillissement et du photo-vieillissement. Il ressort de ces études que l'association d'un extrait de germe de blé et d'esculine conforme à la présente invention, incorporée dans une formule cosmétique, peut être utilisée pour lutter contre le vieillissement cutané. Membrane receptors consisting of two subunits a and R. They provide, on the one hand, a cell-cell or extracellular matrix-cell (ECM) adhesion function and, on the other hand, a signal transduction function. Associated with their MEC ligands, they play an important role in the differentiation, migration and adhesion of basal keratinocytes to the dermal-epidermal junction (DEJ). Integrins and their role (s) are described in F. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No.15: 3919-3926 [1], Laminin 5 Deposition Promotes Motility Keratinocytes - K. Zhang and RH Kramer, Experimental Eye Research 1996, 227: 309-322 [2], and Keratinocyte Migration requires integrin a2131 mediated interaction with the laminin 5 y 2 chain - F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114: 811-823 [3]. The anchoring of keratinocytes to JDE regulates the phenomenon of keratinocyte differentiation. In particular, the isotypes a2131, a3131 and a6134 are the 3 main integrins constitutively expressed by keratinocytes. The integrins a2131, like all the integrins p1 are localized on the membranes of the cells. The a2131 integrins have a predominant role in intercellular adhesion, they have for extracellular ligands mainly collagen. Studies in normal human keratinocyte cultures (KHN) in vitro on collagen subsets have allowed immunolabelling of different integrins. The results showed that the treatment of KHN by the association between wheat germ extract and esculin allows an increase in expression of α2131 integrins. This results in an increase in intercellular and inter-tissue cohesions between the epidermis and the dermis, cohesions that tend to decrease during aging and photo-aging. These studies show that the combination of a wheat germ and esculin extract according to the present invention, incorporated in a cosmetic formula, can be used to combat cutaneous aging.
Plus précisément, cette association peut intégrer des compositions cosmétiques à visé anti-âge. L'association de la présente invention peut donc être utilisée pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique. Il peut s'agir par exemple d'une composition destinée à augmenter la prolifération des kératinocytes, et/ou d'une composition destinée à protéger des cellules épidermiques face à une agression par UV et/ou d'une composition destinée à protéger des cellules épidermiques face à une agression thermique par application de chaleur ou de froid et/ou d'une 1 o composition destinée à améliorer la cohésion intercellulaire et inter-tissulaire entre l'épiderme et le derme et/ou d'une composition destinée à augmenter l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermoépidermique et/ou d'une composition destinée à prévenir et/ou à traiter le vieillissement cutané. 15 Dans la présente invention, l'esculine utilisée peut être extraite par exemple de l'écorce de marronnier d'inde Aesculus hippocastanum. On peut se procurer cette esculine par exemple auprès de la société INDENA (France) Selon l'invention, de préférence, l'extrait de germe de blé est 20 obtenu par un procédé permettant l'extraction des protéines, vitamines, oligoéléments et des acides nucléiques dudit germe de blé. Les procédés d'extraction utilisés dans le domaine de la fabrication des produits cosmétiques et connus de l'homme du métier peuvent être utilisés pour mettre en oeuvre la présente invention. On peut par exemple utiliser 25 l'extrait de germe de blé commercialisé par la société ALBAN MULLER (France) De préférence, dans la présente invention, on utilise un extrait issu d'un procédé d'extraction tel que décrit dans la demande FR 2 831 161 déposée par les laboratoires de biologie végétale YVES ROCHER. En 30 effet, ce procédé d'extraction favorise l'extraction des acides nucléiques présents dans les cellules par une double action enzymatique lors du More specifically, this combination can incorporate cosmetic compositions targeted anti-aging. The combination of the present invention can therefore be used for the preparation of a cosmetic or dermatological composition. This may be, for example, a composition intended to increase the proliferation of keratinocytes, and / or of a composition intended to protect epidermal cells against UV aggression and / or a composition intended to protect cells. epidermis against a thermal attack by application of heat or cold and / or a composition intended to improve the intercellular and inter-tissue cohesion between the epidermis and the dermis and / or a composition intended to increase the expression of α2131 integrins at the dermoepidermal junction and / or a composition for preventing and / or treating skin aging. In the present invention, the esculin used can be extracted from, for example, horse chestnut bark Aesculus hippocastanum. This esculin can be obtained for example from the company INDENA (France). According to the invention, preferably, the wheat germ extract is obtained by a process allowing the extraction of proteins, vitamins, trace elements and acids. nucleic acid of said wheat germ. The extraction processes used in the field of the manufacture of cosmetic products and known to those skilled in the art can be used to implement the present invention. For example, it is possible to use the wheat germ extract marketed by ALBAN MULLER (France). Preferably, in the present invention, an extract obtained from an extraction process such as described in application FR 2 is used. 831 161 filed by the plant biology laboratories YVES ROCHER. In fact, this extraction method promotes the extraction of the nucleic acids present in the cells by a double enzymatic action during the
procédé. Ce procédé comprend les étapes suivantes : extraire en milieu aqueux la matière végétale, en présence d'enzymes cellulolytiques à pH initial de 9 à 13, séparer la matière végétale pour récupérer un extrait aqueux, traiter l'extrait par une protéase, et séparer les insolubles pour récupérer un extrait aqueux purifié du germe de blé. On se réfèrera à la description de FR 2 831 161 pour les détails de mise en oeuvre de ce procédé d'extraction. Selon l'invention, l'extrait de germe de blé comprend les éléments suivants, en % en poids/poids (en g /100 g d'extrait) - 55 à 65 % de glucides, - 25 à 35 % de protéines, - 0,25 à 1 % d'acides nucléiques, - 6à10%de cendres. Selon l'invention, l'extrait de germe de blé peut comprendre en outre une ou plusieurs vitamine(s) choisie(s) dans le groupe comprenant les vitamines B1, B2, B6 et B9. Ces vitamines peuvent être celles présentes dans le germe de blé à l'origine de l'extrait de germe de blé utilisé ou être ajoutées dans l'extrait. Leur concentration correspond donc à celle qui peut être obtenue par extraction à partir du germe de blé et du procédé d'extraction utilisés. L'association de la présente invention peut être obtenue simplement par mélange d'esculine et d'extrait de germe de blé, avantageusement dans des proportions telles que : - esculine : 0,1 à 5,0 % en poids par rapport à la composition et - extrait de germe de blé : 10 à 30% en poids par rapport à la composition L'association de la présente invention peut être utilisée par exemple pour la fabrication d'une composition cosmétique. La composition cosmétique peut être par exemple sous la forme d'une lotion, d'une crème ou d'un lait. Lorsqu'elle est sous forme de lotion, elle peut être appliquée process. This process comprises the steps of: extracting the plant material in an aqueous medium, in the presence of cellulolytic enzymes at an initial pH of 9 to 13, separating the plant material to recover an aqueous extract, treating the extract with a protease, and separating the insoluble to recover a purified aqueous extract of wheat germ. Reference will be made to the description of FR 2 831 161 for the details of implementation of this extraction method. According to the invention, the wheat germ extract comprises the following elements, in% w / w (in g / 100 g of extract) - 55 to 65% of carbohydrates, - 25 to 35% of proteins, - 0.25 to 1% nucleic acids, - 6 to 10% ash. According to the invention, the wheat germ extract may further comprise one or more vitamins selected from the group comprising vitamins B1, B2, B6 and B9. These vitamins can be those present in the wheat germ at the origin of the wheat germ extract used or be added to the extract. Their concentration therefore corresponds to that which can be obtained by extraction from the wheat germ and the extraction process used. The combination of the present invention can be obtained simply by mixing esculin and wheat germ extract, advantageously in proportions such that: esculin: 0.1 to 5.0% by weight with respect to the composition and - wheat germ extract: 10 to 30% by weight relative to the composition The combination of the present invention can be used for example for the manufacture of a cosmetic composition. The cosmetic composition can be, for example, in the form of a lotion, a cream or a milk. When in the form of lotion, it can be applied
directement sur la peau au moyen d'un applicateur, par exemple de coton, ou être pulvérisée. Pour la fabrication de ces compositions cosmétiques, on peut utiliser par exemple un des procédés tels que ceux décrits dans les documents décrits dans exemple 6. directly on the skin by means of an applicator, for example cotton, or be sprayed. For the manufacture of these cosmetic compositions, one can use for example one of the processes such as those described in the documents described in Example 6.
De préférence, l'association de la présente invention telle que définie ci-dessus sera utilisée en une quantité allant de 0,5 à 10 % en poids de la composition cosmétique. L'association de la présente invention 1 o peut alors constituer le principe actif de la composition cosmétique. Preferably, the combination of the present invention as defined above will be used in an amount ranging from 0.5 to 10% by weight of the cosmetic composition. The combination of the present invention can then constitute the active ingredient of the cosmetic composition.
Selon l'invention, l'association de la présente invention peut par exemple être encapsulée dans des liposomes ou des sphérulites en utilisant les procédés connus de l'homme du métier. On obtient ainsi une 15 composition cosmétique selon l'invention. L'encapsulation a pour intérêt de protéger les molécules extraites et permettre une pénétration séperieure dans les couches de l'épiderme. According to the invention, the combination of the present invention may for example be encapsulated in liposomes or spherulites using methods known to those skilled in the art. A cosmetic composition according to the invention is thus obtained. The purpose of encapsulation is to protect the extracted molecules and to allow penetration into the layers of the epidermis.
D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du 20 métier à la lecture des exemples qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif. Other advantages may still be apparent to those skilled in the art upon reading the examples which follow, given by way of illustration and not limitation.
EXEMPLESEXAMPLES
25 Tests d'efficacité in vitro : Les inventeurs de la présente ont testé l'efficacité de l'extrait de germe de blé, seule ou en association avec de l'esculoside, sur des cultures monocouches de kératinocytes humains normaux (KHN). Dans les exemples qui suivent, les concentrations qui sont 30 exprimées en % sont des % en poids/volume (p/v). Il s'agit de grammes pour 100 mL. Les proportions utilisées dans ces exemples peuvent bien entendu être étendues à des quantités plus importantes tout en restant proportionnelles à celles indiquées. In Vitro Efficacy Tests: The inventors herein tested the efficacy of wheat germ extract, alone or in combination with esculoside, on normal human keratinocyte monolayer (KHN) cultures. In the examples which follow, the concentrations which are expressed in% are% by weight / volume (w / v). These are grams per 100 mL. The proportions used in these examples can of course be extended to larger quantities while remaining proportional to those indicated.
Exemple 1 : test sur la prolifération des KHN : Les KHN sont ensemencés (passage 2) en plaque 24 puits, à raison de 9100 cellules / puits / mL milieu KBM (Cambrex, référence commerciale CC-3101) complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone (SIGMA) et extrait de glande pituitaire bovine (BPE pour bovine pituitary extract commercialisé par la société Cambrex (Etats unis). Les cellules sont incubées pendant 24 heures à 37 C, sous atmosphère 5% CO2 et à saturation en humidité. Elles sont ensuite traitées dans le milieu KBM complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone et BPE, le traitement a lieu pendant 1 à 6 jours (J), avec un renouvellement du traitement au bout du 3ème jour. Un témoin positif est réalisé, il est constitué du milieu KBM complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone, BPE et en facteur de croissance épidermique. Les concentrations finales testées des actifs sont les suivantes, exprimées en g / 100 ml : - Extrait de Germe de blé (GDB) à 0,05% et 0,010/0 -Esculoside à 25.10-4% et 5.10-4% - association selon la présente invention : GDB ù esculoside : 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside et 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside. EXAMPLE 1 Test on the Proliferation of KHNs: The KHNs are inoculated (passage 2) in a 24-well plate, at a rate of 9100 cells / well / ml KBM medium (Cambrex, commercial reference CC-3101) supplemented with gentamycin / amphotericin B, insulin, hydrocortisone (SIGMA) and bovine pituitary extract extract (BPE) for the bovine pituitary extract marketed by the company Cambrex (United States) The cells are incubated for 24 hours at 37 ° C., under a 5% CO 2 atmosphere and at saturation with humidity. They are then treated in the KBM medium supplemented with gentamycin / amphotericin B, insulin, hydrocortisone and BPE, the treatment takes place for 1 to 6 days (J), with a renewal of the treatment at the end of the third day. it consists of the KBM medium supplemented with gentamycin / amphotericin B, insulin, hydrocortisone, BPE and epidermal growth factor.The final tested concentrations of the active ingredients are as follows: ivantes, expressed in g / 100 ml: - 0.05% wheat germ extract (GDB) and 0.010% - 25.10-4% esculoside and 5.10-4% - combination according to the present invention: GDB ù esculoside: 0.05% GDB + 25.10-4% esculoside and 0.01% GDB + 5.10-4% esculoside.
Tableau 1 : résultats des tests de prolifération de KHN Actifs testés seuls Gain de GDB Esculoside croissance 0,05% - 0,01 % 25.10-4% û 5.10-4% (%) J2 24-/ /-/ J3 33-28 /-/ J6 66-42 /-/ Association de la présente invention Gain de Association de l'invention Association de l'invention croissance 0,05% GDB + 0,01% GDG + (%) 25.10-4% esculoside 5.10-4% esculoside J2 28 / J3 41 34 J6 68 43 J2 = 2 jours, J3 = 3 jours, etc. Table 1: KHN Proliferation Assay Results Assets tested alone GDB Gain Esculoside Growth 0.05% - 0.01% 25.10-4% - 5.10-4% (%) J2 24- / - - / J3 33-28 ## STR2 ## Association of the Present Invention Gain Association of the Invention Association of the Invention Growth 0.05% GDB + 0.01% GDG + (%) 25.10-4% Esculoside 5.10- 4% esculoside J2 28 / J3 41 34 J6 68 43 J2 = 2 days, J3 = 3 days, etc.
Dans les conditions expérimentales précitées, les inventeurs ont pu mettre en évidence que : - l'extrait de germe de blé permet d'augmenter significativement la prolifération de KHN en culture monocouche, tout au long de la durée du traitement, - l'association de l'extrait de germe de blé avec de l'esculoside permet d'augmenter significativement la prolifération de KHN en culture monocouche, tout au long de la durée du traitement, de façon additionnelle. Under the aforementioned experimental conditions, the inventors have been able to demonstrate that: the wheat germ extract makes it possible to significantly increase the proliferation of KHN in monolayer culture, throughout the duration of the treatment, the combination of the wheat germ extract with esculoside significantly increases the proliferation of KHN in monolayer culture, throughout the duration of the treatment, additionally.
Exemple 2 : test sur la protection des KHN face à différentes aqressions : Une agression (ou stress en anglais) est l'ensemble des perturbations biologiques provoquées par une intervention chimique et/ou physique sur un organisme. Une agression intense ou prolongée serait source de différents troubles, par exemple un vieillissement prématuré de la peau. Dans cet exemple, les KHN sont ensemencés (passage 2 ou 3) en plaque 24 puits, à raison de 30000 cellules / puits / mL de milieu K-SFM (In vitrogen, référence commerciale 17005075) complémenté en extrait de glande pituitaire bovine (BPE) et en facteur de croissance épidermique (EGF pour Epidermal Growth Factor ). Les cellules sont incubées pendant 24 heures à 37 C, 5% 002 et à saturation en humidité. Example 2: test on the protection of KHN against different aqressions: An aggression (or stress in English) is the set of biological disturbances caused by a chemical and / or physical intervention on an organism. An intense or prolonged aggression could cause various disorders, for example premature aging of the skin. In this example, the KHNs are seeded (passage 2 or 3) in a 24-well plate, at the rate of 30,000 cells / well / ml of K-SFM medium (In vitrogen, commercial reference 17005075) supplemented with bovine pituitary gland extract (BPE). ) and epidermal growth factor (EGF for Epidermal Growth Factor). The cells are incubated for 24 hours at 37 ° C., 5% and at saturation with humidity.
Après 24 heures de culture (J1), les actifs sont appliqués pendant 24 heures (J2) soit en conditions préventives (traitement avant les agressions), soit en conditions curatives (traitement après les agressions). Les actifs sont aussi appliqués soit en conditions immédiates (pendant les agressions), soit en conditions totales, c'est à dire en conditions préventives pendant 24 heures, puis immédiates pendant l'agression puis curatives pendant 24 heures. Les concentrations finales testées des actifs sont les suivantes, les dilutions ayant été réalisées dans le milieu K-SFM complet : - extrait de germe de blé : 0,05% et 0,01 % p/v - esculoside : 25.10-4% et 5.10-4% p/v - association de la présente invention : 0,05% GDB + 25.10- 4% esculoside, et 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside Le témoin non traité milieu KSFM complémenté est aussi réalisé. After 24 hours of culture (D1), the active ingredients are applied for 24 hours (D2) either under preventive conditions (treatment before the aggressions) or under curative conditions (treatment after the aggressions). The assets are also applied either in immediate conditions (during the aggressions), or in total conditions, that is to say under 24 hours preventive conditions, then immediately during the aggression then curative during 24 hours. The final concentrations tested for the active ingredients are the following, the dilutions having been carried out in the complete K-SFM medium: wheat germ extract: 0.05% and 0.01% w / v - esculoside: 25.10-4% and 5.10-4% w / v - combination of the present invention: 0.05% GDB + 25.10-4% esculoside, and 0.01% GDB + 5.10-4% esculoside The untreated control KSFM complemented medium is also carried out.
Une plaque témoin pour chacune des conditions est réalisée de la même façon, mais ne subit aucune agression. A control plate for each of the conditions is carried out in the same way, but does not undergo any aggression.
Les différentes agressions sont réalisées de la façon suivante : -agression UVB (312 nm): rinçage des cellules par HBSS (Invitrogen, référence commerciale 14025050) puis irradiation des cellules à 50mJ/cm2 (irradiateur Vilmer Lourbat, référence commerciale RMX 3W), les cellules étant incubées dans 1 mL/puits de tampon HBSS (avec ou sans traitement) -agression thermique par application de chaleur : rinçage des cellules par HBSS puis incubation des cellules pendant 30 minutes à +45 C, 1 mL/ puits milieu KSFM complémenté (avec ou sans traitement) - agression thermique par application de froid : rinçage des cellules par HBSS puis incubation des cellules pendant 30 minutes à +4 C, 1 mL/ puits milieu KSFM complémenté (avec ou sans traitement) The different aggressions are carried out as follows: UVB aggression (312 nm): rinsing of the cells with HBSS (Invitrogen, commercial reference 14025050) then irradiation of the cells at 50 mJ / cm 2 (Vilmer Lourbat irradiator, commercial reference RMX 3W), the cells being incubated in 1 ml / well of HBSS buffer (with or without treatment) -heat aggression by application of heat: rinsing of the cells with HBSS then incubation of the cells for 30 minutes at +45 ° C., 1 ml / well supplemented KSFM medium ( with or without treatment) - thermal attack by application of cold: rinsing cells with HBSS then incubation of the cells for 30 minutes at +4 C, 1 mL / well KSFM medium supplemented (with or without treatment)
Après les agressions, les cellules sont rincées par la solution tampon HBSS. A J2 (2ème jour), la viabilité cellulaire est évaluée par le test au 20 MTT (Sigma, référence commerciale M5655). 10 15 Tableau 2 : résultats des tests sur la protection des KHN face à différentes agressions Actifs testés seuls Association de la préser Agression û û 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside 0,01 0,05% 0GDB4O1/0 0 25. 10Es-/o 4% 5losi.10- 10- /o -UVB /-/ /-/ 23 Curatif -Froid /- / /- / 25 -Chaud / - / / - / 35 -UVB /û/ /û/ 23 Préventif -Froid /- / /- / 12 -Chaud /- / /- / 21 -UVB / û/ / û/ 30 Immédiat -Froid /- / /- / 23 -Chaud /- / /- / 25 -UVB 19- / 25- / 51 Total -Froid 16 - / 17 - / 31 -Chaud 12 - / 25 - / 47 Dans ces conditions expérimentales, les inventeurs ont pu observer que : - l'extrait de germe de blé à 0,05% en traitement total, permet une protection des KHN face aux agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid - l'esculoside à 25.10-4% en traitement total, permet une protection des KHN face aux agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid - l'association de la présente invention à la concentration de 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside permet une protection curative, préventive, immédiate et totale pourtoutes les agressions, - l'association de la présente invention à la concentration de 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside permet une protection curative, immédiate et totale pour toutes les agressions et préventive pour l'agression UVB - - l'association de l'extrait de germe de blé avec l'esculoside permet de protéger de façon additionnelle voire synergique les KHN soumis à des agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid et ce pour tous les types de traitement. After the aggression, the cells are rinsed with the HBSS buffer solution. At day 2 (day 2), cell viability is assessed by the MTT test (Sigma, commercial reference M5655). Table 2: KHN protection test results for different assays Assays tested alone Association of Presence Aggression 0,0 0.05% GDB + 25.10-4% esculoside 0.01 0.05% 0GDB4O1 / 0 0 25 10Es- / o 4% 5losi.10- 10- / o -UVB / - / / - / 23 Curative -Chill / - / / - / 25 -Hot / - / / - / 35 -UVB / û / / û / 23 Preventative -Chilling / - / / - / 12 -Heat / - / / - / 21 -UVB / û / / û / 30 Immediate -Chilling / - / / - / 23 -Hot / - / / - / 25 - In these experimental conditions, the inventors were able to observe that: the 0 wheat germ extract, 05% in total treatment, allows a protection of the KHN vis-a-vis the aggressions UVB, thermal by application of heat and thermal by application of cold - the esculoside with 25.10-4% in total treatment, allows a protection of the KHN vis-à-vis the aggressions UVB, thermal by application of heat and thermal by application of cold - the association of the present i concentration at a concentration of 0.05% GDB + 25.10-4% esculoside provides curative, preventive, immediate and total protection for all aggressions, - the combination of the present invention at the concentration of 0.01% GDB + 5.10- 4% esculoside allows a curative, immediate and total protection for all aggressions and preventive for the UVB aggression - - the association of wheat germ extract with esculoside makes it possible to protect the submitted KHNs in an additional or even synergistic way to UVB aggressions, thermal by application of heat and thermal by application of cold and this for all types of treatment.
Exemple 3 : test sur l'expression des intéqrines : La jonction dermo-épidermique (JDE), localisée entre le derme et l'épiderme, assure la compartimentation et joue un rôle important sur le 30 comportement des cellules qui lui sont adjacentes, les KHN basaux de l'épiderme. 10 15 20 25 EXAMPLE 3 Test on the Expression of Integrins: The dermal-epidermal junction (DEJ), located between the dermis and the epidermis, ensures compartmentalization and plays an important role on the behavior of cells adjacent thereto, the KHNs. Basal epidermis. 10 15 20 25
La JDE est une membrane constituée de collagènes et de laminines. Les hémidesmosomes, structures kératinocytaires particulières, permettent l'adhésion des KHN à la JDE. Les hémidesmosomes sont constitués de la plaque dense intracellulaire et de protéines transmembranaires telles que les intégrines. Les intégrines sont des récepteurs transmembranaires constitués de deux sous unités a et R. Elles assurent, d'une part, une fonction d'adhésion cellules-cellules ou cellules-matrice extracellulaire (MEC) et d'autre part, une fonction de transduction du signal. Associées à leurs ligands de la JDE, elles jouent un rôle important pour la différenciation, la migration et l'adhésion des KHN basaux à la JDE. Particulièrement, les isotypes a2131, a3131 et a6134 sont les 3 principales intégrines exprimées de façon constitutive par les KHN. Les intégrines a2131 et a3131, comme toutes les intégrines (31 sont localisées sur la périphérie des KHN. Les intégrines a2131 ont un rôle prépondérant dans l'adhésion inter cellulaire, elles ont pour ligands extracellulaires le collagène principalement. Les intégrines a3131 ont un rôle dans l'adhésion des cellules entre elles mais aussi avec la matrice extracellulaire et permettent la migration des KHN. Leur principal ligand est la laminine. Les KHN sont ensemencés (passage 2 ou 3) dans des chambres de culture ( Lab Tech en anglais) à 4 compartiments (Becton Dickinson, référence commerciale 354114) 1 compartiment = 1,7 cm2), à raison de 7000 cellules / compartiment / mL milieu K-SFM (In vitrogen, référence commerciale 17005075) complémenté en extrait de glande pituitaire bovine (BPE) et en facteur de croissance épidermique. Préalablement à l'ensemencement, les surfaces des compartiments ont été pré traitées ou non, soit par une solution de collagène IV (Becton Dickinson, référence commerciale 354233) à 3pg/cm2 ou 7pg/cm2 soit par une solution de laminine V (Becton Dickinson, référence commerciale 354232) à 3pg/cm2 ou 7pg/cm2. Ces pré traitements permettent d'obtenir JDE is a membrane made of collagens and laminins. The hemidesmosomes, particular keratinocyte structures, allow the adhesion of the KHN to the JDE. Hemidesmosomes consist of intracellular dense plaque and transmembrane proteins such as integrins. Integrins are transmembrane receptors consisting of two subunits a and R. They provide, on the one hand, a cell-cell or extracellular matrix-cell (ECM) adhesion function and, on the other hand, a transduction function. signal. Associated with their JDE ligands, they play an important role in the differentiation, migration, and adhesion of basal KHN to JDE. In particular, the isotypes a2131, a3131 and a6134 are the 3 main integrins expressed constitutively by the KHNs. The integrins a2131 and a3131, like all the integrins (31 are localized on the periphery of the KHNs, the integrins a2131 have a preponderant role in the inter-cellular adhesion, they have as extracellular ligands collagen mainly.The integrins a3131 have a role in the adhesion of the cells to each other but also to the extracellular matrix and allow the migration of KHN, their main ligand is laminin KHN are seeded (passage 2 or 3) in culture chambers (Lab Tech in English). compartments (Becton Dickinson, commercial reference 354114) 1 compartment = 1.7 cm 2), at a rate of 7000 cells / compartment / ml K-SFM medium (In vitrogen, commercial reference 17005075) supplemented with bovine pituitary gland extract (BPE) and in epidermal growth factor. Prior to seeding, the surfaces of the compartments were pre-treated or not, either with a solution of collagen IV (Becton Dickinson, commercial reference 354233) at 3 μg / cm 2 or 7 μg / cm 2 or with a solution of laminin V (Becton Dickinson 354232) at 3pg / cm2 or 7pg / cm2. These pre-treatments make it possible to obtain
un substrat de collagène IV ou un substrat de laminine V sur lesquels les KHN peuvent être ensemencés. Ces substrats déposés ont pour rôle de mimer la JDE. Les cellules sont incubées pendant 7 jours à 37 C, sous atmosphère 5% CO2 et à saturation en humidité, avec un renouvellement du milieu à 4 jours de culture. Les cellules sont ensuite traitées pendant 3 jours avec soit l'extrait de germe de blé à 0,01% (p/v), soit l'esculoside à 5.10-4% (p/v), soit une l'association selon l'invention des deux (0,01% GDB + 5.10-4% 1 o esculoside), les dilutions étant réalisées dans le milieu K-SFM complet. Un témoin milieu K-SFM complet non traité est aussi réalisé. Après des étapes de fixation et de perméabilisation, les cultures sont immunomarquées avec l'anticorps primaire anti a2131 (Tebu-bio, mouse monoclonal IgG, réf : sc-13546) puis l'anticorps secondaire (Tebu- 15 bio, goat anti-mouse IgG, rhodamine conjugated, réf : sc-2092). L'observation des immunomarquages se fait grâce à un microscope couplé à un système de fluorescence (Olympus U-RFL-T). Un filtre adapté permet de sélectionner la longueur d'onde d'excitation pour la rhodamine à 550 nm. La fluorescence émise est de couleur rouge. Plus 20 l'expression des intégrines recherchées est augmentée et plus il y aura de cellules dont les membranes émettront une fluorescence rouge et / ou plus l'intensité de la fluorescence rouge sera élevée. Pour cela, nous avons défini une légende faite de signe "-" signifiant "absence d'expression des intégrines recherchées", de signe "-/+" signifiant "légère augmentation de 25 l'expression des intégrines recherchées" ou de signe(s) "+".signifiant "une augmentation d'autant plus significative de l'expression des intégrines recherchées" qu'il y a de signe "+". 30 Tableau 3 : augmentation de l'expression des intégrines a2R1 dans les conditions suivantes : Sans Substrat Substrat substrat collagène IV laminine V Sans traitement - -1+ -1+ Extrait GDB (0,01%) + +++ +++ Esculoside -1+ + + (5.10-4%) Association de l'invention + ++++ ++++ 0,01% extrait germe de blé + 5.10-4% esculoside Dans les conditions expérimentales précitées, les inventeurs ont pu observer que : - extrait de germe de blé, - l'esculoside - l'association de l'extrait de germe de blé et del' esculoside permettent l'augmentation de l'expression des intégrines a2131 dans une culture monocouche de kératinocytes humains normaux et plus particulièrement l'association de l'extrait de germe de blé et de l'esculine. Ceci se traduit par une augmentation des cohésions intercellulaires et inter tissulaires entre l'épiderme et le derme, cohésions qui ont tendance à diminuer lors du vieillissement et du photo- vieillissement. De plus, l'augmentation de l'expression des intégrines implique aussi une meilleure adhésion à la jonction dermo-épidermique, donc une meilleure différenciation et une fonction barrière de l'épiderme améliorée. a collagen IV substrate or a laminin V substrate on which the KHNs can be seeded. These deposited substrates have the role of mimicking the JDE. The cells are incubated for 7 days at 37 ° C. under an atmosphere of 5% CO 2 and at saturation with humidity, with a renewal of the medium at 4 days of culture. The cells are then treated for 3 days with either the 0.01% (w / v) wheat germ extract or the 5.10-4% (w / v) esculoside or the invention of both (0.01% GDB + 5.10-4% 1 esculoside), the dilutions being carried out in complete K-SFM medium. An untreated complete K-SFM control is also performed. After fixing and permeabilization steps, the cultures are immunostained with the primary antibody a2131 (Tebu-bio, mouse monoclonal IgG, ref: sc-13546) and then the secondary antibody (Tebuc bio, goat anti-mouse IgG, rhodamine conjugated, ref: sc-2092). Observation of the immunolabeling is done using a microscope coupled to a fluorescence system (Olympus U-RFL-T). A suitable filter makes it possible to select the excitation wavelength for rhodamine at 550 nm. The fluorescence emitted is red. The more the expression of the desired integrins is increased, the more cells will emit red fluorescent membranes and / or the higher the red fluorescence intensity. For this, we have defined a legend made of sign "-" meaning "absence of expression of the desired integrins", of sign "- / +" meaning "slight increase in the expression of the desired integrins" or sign (s). ) "+" signifying "an increase all the more significant in the expression of the searched integrins" that there is a sign "+". Table 3: Increased Expression of α2R1 Integrins under the Following Conditions: Without Substrate Substrate Collagen IV Laminin V Without Treatment - -1+ -1+ GDB Extract (0.01%) + +++ +++ Esculoside -1+ + + (5.10-4%) Association of the invention + ++++ ++++ 0.01% wheat germ extract + 5.10-4% esculoside Under the aforementioned experimental conditions, the inventors were able to observe that: - wheat germ extract, - esculoside - the combination of wheat germ extract and esculoside allow increased expression of α2131 integrins in a monolayer culture of normal human keratinocytes and more particularly the combination of wheat germ extract and esculin. This results in an increase in intercellular and inter-tissue cohesions between the epidermis and the dermis, cohesions that tend to decrease during aging and photoaging. In addition, the increase in integrin expression also implies better adhesion to the dermal-epidermal junction, thus a better differentiation and an improved epidermal barrier function.
Exemple 4 : préparation d'une association selon l'invention Dans cet exemple, on réalise une association comprenant 20% d'extrait de germe de blé et 1% d'esculine, envue de son encapsulation. L'extrait de germe de blé utilisé est un extrait sec réalisé selon le protocole du brevet FR 2 831 161 déposée par les laboratoires de biologie végétale YVES ROCHER. L'esculine utilisée est commercialisée par la société INDENA sous la référence 3030600. Le protocole suivant est utilisé : a) Faire chauffer de l'eau déminéralisée à 50 C, 1 o b) Ajouter l'extrait sec de germe de blé à raison de 20% d'extrait sec dans l'eau en poids/poids, c) Solubiliser l'extrait 30 minutes à 50 C sous agitation, d) Ajouter l'esculine à raison de 1% en poids/poids dans dans la solution obtenue en c), et 15 e) Solubiliser l'esculine dans l'extrait 30 minutes sous agitation. On obtient une association selon la présente invention. Cette association est de préférence utilisée extemporanément pour la préparation d'une composition cosmétique. 20 Exemple 5 : encapsulation d'une association selon l'inveniton Dans cet exemple, on encapsule l'association préparée dans l'exemple 4. On décrit ici les étapes classiques des procédés d'encapsulation pemrettant d'obtenir des liposomes : 25 1 ù Solubilisation des conservateurs utilisés pour le produit une fois encapsulé 2 ù Dispersion / Solubilisation des actifs, c'est à dire de l'association selon la présente invention à encapsuler, dans l'eau 3 ù Ajout de Lécithines pour former des premières vésicules. 30 4 ù Microfluidisation à haute pression pour réduire la taille des vésicules formées. - Ajout d'un agent réticulant pour éviter la sédimentation des liposomes. CREME N ligne Phase Description Quantité 1 A EAU PURIFIEE 52.099 2 A TALC 1.000 3 A PROPYLENE GLYCOL 3.000 4 A D PANTHENOL 0.150 5 A ALLANTOINE 0.100 6 A POTASSIUM SORBATE 0.200 7 A NA 4 EDTA 0.100 8 B GOMME XANTHANE 0.200 9 B BUTYLENE GLYCOL 2.000 C ACETATE DE TOCOPHEROL 0.100 11 C STEARETH-2 2.000 12 C MONOSTEARATE DE GLYCEROL 40 OV 2.500 13 C BMDBM 0.500 14 C ALCOOL STEARYLIQUE OV 3.000 C COCOATE ETHYL HEXYL 2.000 16 C ALCOOL STEARYLIQUE 210E 2.600 17 C HUILE MINERALE 15 1.500 18 C DIMETHICONE 20 CST 2.000 19 D VEGETOSTEROL 0.100 E HUILE DE TOURNESOL 3.000 21 E ETHYLHEXYLE STEARATE 3.000 22 E HUILE DE SESAME VIERGE BIO 3.000 23 F PHENOXYETHANOL 0.200 24 F CONSERVATEURS 1.500 G L ARGININE 1.000 26 G EAU PURIFIEE 5.000 27 G ACIDE LACTIQUE 90% INODORE 0.700 28 H VITAMINE A PALMITATE 1M 0.300 29 H PARFUM 0.350 H VITAMINE F ETHYL ESTER O 0.300 31 I EAU PURIFIEE 4.000 32 I UREE 0.500 33 J ASSOCIATION GERME DE BLE / ESCULINE SELON L'INVENTION 2.000 Exemple 6 : compositions et obtention de compositions cosmétiques 5 Total 100.000 Mode OPERATOIRE EXAMPLE 4 Preparation of an Association According to the Invention In this example, an association comprising 20% of wheat germ extract and 1% of esculin is carried out, relative to its encapsulation. The wheat germ extract used is a dry extract produced according to the protocol of patent FR 2 831 161 filed by the plant biology laboratories YVES ROCHER. The esculin used is marketed by the company INDENA under the reference 3030600. The following protocol is used: a) Heat demineralized water at 50 C, 1 ob) Add the dry extract of wheat germ at a rate of 20 % dry extract in water by weight / weight, c) Solubilize the extract for 30 minutes at 50 ° C. with stirring, d) Add esculin at a rate of 1% w / w in the solution obtained in c. ) and e) Solubilize esculin in the extract for 30 minutes with stirring. An association according to the present invention is obtained. This combination is preferably used extemporaneously for the preparation of a cosmetic composition. Example 5: Encapsulation of a combination according to the invention In this example, the combination prepared in Example 4 is encapsulated. The conventional steps of the encapsulation methods for obtaining liposomes are described here: Solubilization of the preservatives used for the product once encapsulated 2 - Dispersion / Solubilization of the active ingredients, that is to say of the combination according to the present invention to be encapsulated, in water 3 - Addition of Lecithins to form first vesicles. 4 Microfluidization at high pressure to reduce the size of the vesicles formed. - Addition of a crosslinking agent to prevent sedimentation of liposomes. CREAM N line Phase Description Quantity 1 TO PURIFIED WATER 52.099 2 TO TALC 1.000 3 TO PROPYLENE GLYCOL 3.000 4 AD PANTHENOL 0.150 5 TO ALLANTOIN 0.100 6 TO POTASSIUM SORBATE 0.200 7 TO NA 4 EDTA 0.100 8 B XANTHANE GUM 0.200 9 B BUTYLENE GLYCOL 2,000 C TOCOPHEROL ACETATE 0.100 11 C STEARETH-2 2.000 12 C GLYCEROL MONOSTEARATE 40 OV 2.500 13 C BMDBM 0.500 14 C ALCOHOL STEARYL OV 3.000 C COCOATE ETHYL HEXYL 2.000 16 C ALCOHOL STEARYL 210E 2.600 17 C MINERAL OIL 15 1.500 18 C DIMETHICONE 20 CST 2.000 19 D VEGETOSTEROL 0.100 E SUNFLOWER OIL 3.000 21 E ETHYLHEXYL STEARATE 3.000 22 E ORGANIC VIRGIN SESAME OIL 3.000 23 F PHENOXYETHANOL 0.200 24 F PRESERVATIVES 1.500 GL ARGININE 1.000 26 G PURIFIED WATER 5.000 27 G LACTIC ACID 90% ODOR FREE 0.700 28 H VITAMIN A PALMITATE 1M 0.300 29 H PERFUME 0.350 H VITAMIN F ETHYL ESTER O 0.300 31 I PURIFIED WATER 4.000 32 I UREE 0.500 33 J ASSOCIATION OF WHEAT GERM / ESCULIN ACCORDING TO THE INVENTION 2.000 Example 6: compositions and obte cosmetic compositions 5 Total 100,000 OPERATIVE
Préparation d'une phase aqueuse "AB" : 1) Dans le mélangeur, introduire les composants de la phase A, (voir ci-dessus, tableau de l'exemple 6) chauffer à 80 C, turbiner à vitesse moyenne. 2) Ajouter la gomme de xanthane préalablement dispersé dans le butylene glycol. 3) Mettre sous vide partiel, agiter pales+racleur vitesse rapide, turbine 1 o grande vitesse jusqu'à ce que le gel soit lisse (10 minutes environ). Preparation of an aqueous phase "AB": 1) In the mixer, introduce the components of phase A, (see above, table of example 6), heat to 80 ° C, turbinate at medium speed. 2) Add xanthan gum previously dispersed in butylene glycol. 3) Partial vacuum, shake blades + scraper fast speed, turbine 1 o high speed until the gel is smooth (about 10 minutes).
Préparation d'une phase grasse "CDE": 4) Dans un fondoir, chauffer ensemble les composants C à 80 -85 C en agitant lentement jusqu'à fusion complète. 15 5) Agiter et disperser le VEGETOSTEROL (phase D) dans le vortex. Maintenir la température et l'agitation jusqu'à fusion complète. Ajouter la phase E. Préparation d'une émulsion 20 6) Aspirer le phase CDE dans AB. Ajouter Preparation of a fat phase "CDE": 4) In a melter, heat the components C together at 80 ° -85 ° C. while stirring slowly until complete melting. 5) Shake and disperse the VEGETOSTEROL (phase D) in the vortex. Maintain temperature and agitation until complete melting. Add the E phase. Preparation of an emulsion 6) Aspirate the CDE phase in AB. Add
ensuite la phase F. Turbiner (15 minutes sur MCD 1000), pales+racleur vitesse moyenne. 7) Arrêter la turbine et refroidir sous vide. 8) Vers 40 ajouter G ,puis H puis I. 9) Turbiner à grande vitesse (15 minutes sur MCD 1000). 25 10) Vers 35 C, introduire la phase J. Turbiner (15 minutes sur MCD 1000). 11) A 25 C, arrêter et contrôler. 19 30 SERUM A NA 4 EDTA 0.025 A ALLANTOINE 0.200 A BUTYLENE GLYCOL 3.000 A POBM 0.200 A EXTRAIT DE SHIITAKE 6.000 A BETA ESCINE 0.100 A EAU PURIFIEE 57.97 B PEMULEN TR2 0.100 B COCOATE ETHYL HEXYL 0.500 C GOMME XANTHANE 0.100 C PROPYLENE GLYCOL 3.000 D VASELINE NON LEVRES 1.000 D ALCOOL C16/C18 AE 1.000 D ACETATE DE TOCOPHEROL 0.100 E 5 CYCLOMETHICONE 65% 5.000 F HYDROXYDE DE SODIUM 0.015 F EAU PURIFIEE 0.985 G GLUADINE AGP 1.000 G UREE 3.000 G EAU PURIFIEE 5.000 H PVP/ACRYLATE 845 0.400 H ASSOCIATION GERME DE BLE 5.000 / ESCULINE SELON L'INVENTION I VITAMINE A PALMITATE 1M 0.100 I PARFUM 0.300 I VITAMINE F ETHYL ESTER 0.300 J AMIDON DE MAIS 1.000 J ALCOOL 95% AGRICOLE 4.000 K EAU PURIFIEE 0.005 K HYDROXYDE DE SODIUM L COLORANT 0.100 Total 100.00040 Mode Opératoire then phase F. Turbiner (15 minutes on MCD 1000), blade + scraper medium speed. 7) Stop the turbine and cool under vacuum. 8) To 40 add G, then H then I. 9) Turbiner at high speed (15 minutes on MCD 1000). 10) To 35 C, introduce the J. Turbiner phase (15 minutes on MCD 1000). 11) At 25 C, stop and check. 19 30 SERUM A NA 4 EDTA 0.025 A ALLANTOIN 0.200 A BUTYLENE GLYCOL 3.000 A POBM 0.200 A SHIITAKE EXTRACT 6.000 A BETA ESCINE 0.100 A PURIFIED WATER 57.97 B PEMULEN TR2 0.100 B COCOATE ETHYL HEXYL 0.500 C XANTHANE GUM 0.100 C PROPYLENE GLYCOL 3.000 D VASELINE NO 1.000 D ALCOHOL C16 / C18 AE 1.000 D ACETATE OF TOCOPHEROL 0.100 E 5 CYCLOMETHICONE 65% 5.000 F SODIUM HYDROXIDE 0.015 F PURIFIED WATER 0.985 G GLUADINE AGP 1.000 G UREE 3.000 G PURIFIED WATER 5.000 H PVP / ACRYLATE 845 0.400 H GERM ASSOCIATION DE BLE 5.000 / ESCULIN ACCORDING TO THE INVENTION I VITAMIN A PALMITATE 1M 0.100 I PERFUME 0.300 I VITAMIN F ETHYL ESTER 0.300 J STARCH OF MAIZE 1.000 J ALCOHOL 95% AGRICULTURAL 4.000 K PURIFIED WATER 0.005 K SODIUM HYDROXIDE L COLOR 0.100 Total 100.00040 Operating Mode
P+R = PALES+RACLEUR 5 T = TURBINE PV, MV, GV = PETITE, MOYENNE, GRANDE VITESSE P + R = BLADES + RACLEUR 5 T = TURBINE PV, MV, GV = SMALL, MEDIUM, HIGH SPEED
Dans cet exemple, la fabrication s'effectue sous vide. In this example, the manufacturing takes place under vacuum.
10 ^ PHASE AQUEUSE "ABC" : 1) Introduire l'EAU DEMINERALISEE CHAUDE A dans le mélangeur (75 C). Ajouter les autres composants A en vérifiant leur dissolution. Agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10). 2) A 75 C, introduire la dispersion B dans A sous TMV. 15 3) Mettre sous vide partiel, agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10) jusqu'à ce que le gel soit lisse. 4) Sous TGV, ajouter ensuite la dispersion C homogène. 5) Mettre sous vide partiel, agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10) jusqu'à ce que le gel soit lisse. Vérifier le gel (TM204). 20 • PHASE GRASSE "D": 7) Dans un fondoir, chauffer ensemble les composants D à 70-75 C en agitant lentement jusqu'à fusion complète. 25 ^ EMULSION : 8) A 70-75 C, P+R PV, aspirer D dans ABC en filtrant sur toile inox 80 à 200 microns. Remettre sous vide et agiter P+R MV+TGV (3 min sur MCD10). 30 8) A la suite, ajouter la dispersion E sous agitation P+R MV + TGV (5 min). 21 10 ^ AQUEOUS PHASE "ABC": 1) Introduce the HOT DEMINERALIZED WATER A into the mixer (75 C). Add the other components A by checking their dissolution. Shake P + R MV + TGV (3min on MCD10). 2) At 75 ° C, introduce the dispersion B into A under TMV. 3) Put under partial vacuum, agitate P + R MV + TGV (3min on MCD10) until the gel is smooth. 4) Under TGV, then add the homogeneous dispersion C. 5) Put under partial vacuum, agitate P + R MV + TGV (3min on MCD10) until the gel is smooth. Check the gel (TM204). • FATTY PHASE "D": 7) In a melter, heat the D components together at 70-75 ° C while stirring slowly until complete melting. EMULSION: 8) At 70-75 ° C, P + R PV, aspirate D in ABC by filtering on stainless steel cloth 80 to 200 microns. Vacuum and stir P + R MV + TGV (3 min on MCD10). 8) Next, add dispersion E with stirring P + R MV + TGV (5 min). 21
• REFROIDISSEMENT : 9) Refroidir à 60 C sous vide avec P+R MV. 10) Vers 60 C, neutraliser en ajoutant la phase F sous P+R MV. 11) Continuer le refroidissement jusqu'à 40 C sous vide maxi avec P+R MV. 12) A 40 C, introduire le mélange G sous P+R MV. Continuer à refroidir avec P+R MV jusqu'à 35 C. 13) A 35 C, ajouter la solution limpide H sous P+R MV. 14) A 30 C, ajouter la phase I sous P+R MV + TPV (3min). 15) Poursuivre le refroidissement et ajouter doucement J sous P+R MV. 16) Ajuster le pH à l'aide de la phase K. • COOLING: 9) Cool to 60 C under vacuum with P + R MV. 10) At 60 C, neutralize by adding phase F under P + R MV. 11) Continue cooling up to 40 C under maximum vacuum with P + R MV. 12) At 40 C, introduce the mixture G under P + R MV. Continue cooling with P + R MV to 35 ° C. 13) At 35 ° C add the clear solution H under P + R MV. 14) At 30 C, add phase I under P + R MV + TPV (3min). 15) Continue cooling and slowly add J under P + R MV. 16) Adjust the pH using phase K.
Mesure préventive: Dans cet exemple, la quantité de NaOH peut aller de 0.001 à 0.005%. 17) Introduire K en cuve et agiter P+R MV. 18) Se référer au témoin et faire un essai couleur au laboratoire à l'aide de la phase L avant de teinter le vrac. Bien agiter P+R MV 19) A 25 C, arrêter et contrôler. Preventive measure: In this example, the amount of NaOH can range from 0.001 to 0.005%. 17) Introduce K in the tank and shake P + R MV. 18) Refer to the control and do a color test in the laboratory using phase L before staining the bulk. Shake well P + R MV 19) At 25 C, stop and check.
20 25 30 Références bibliographiques [1] Role of integrins in regulating epidermal adhesions, growth and differenciation ù F.M. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No 15 : 3919-3926. [2] Laminin 5 deposition promotes kératinocytes motility ù K. Zhang and R.H. Kramer, Experimental Oeil Research 1996, 227: 309-322. [3] Keratinocyte migration requires intégrine a2131 mediated interaction with the laminine 5 y2 chain ù F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114: 811-823. 5Bibliographical references [1] F. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No. 15: 3919-3926. [2] Laminin 5 Deposition Promotes Motility Keratinocytes to K. Zhang and R. H. Kramer, Experimental Eye Research 1996, 227: 309-322. [3] Keratinocyte migration requires integrin a2131 mediated interaction with the laminin 5 y2 chain. F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114: 811-823. 5
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