FR2907783A1 - Nouveaux composes chimiques, leurs procedes de synthese et leur utilisation a titre de medicament, particulierement a titre de medicament cytoprotecteur, neuroprotecteur ou cardioprotecteur - Google Patents

Abstract

La présente invention se place dans le domaine de la pharmacie, particulièrement dans le domaine de la cytoprotection.Elle concerne une famille de composés chimiques nouveaux, le 4-azacholest-4-ène N-oxide et certains de ces dérivés, leurs procédés de synthèse ainsi que certains intermédiaires de synthèse.La présente invention concerne également l'utilisation desdits composés à titre de médicaments, particulièrement dans la préparation d'un médicament cytoprotecteur, particulièrement neuroprotecteur ou cardioprotecteur.

Description

1 La présente invention se place dans le domaine de la pharmacie,

particulièrement dans le domaine de la cytoprotection. Elle concerne une famille de composés chimiques nouveaux, le 4-azacholest-4-ène N-oxide et certains de ces dérivés, leurs procédés de synthèse 5 ainsi que certains intermédiaires de synthèse. La présente invention concerne également l'utilisation desdits composés à titre de médicaments, particulièrement dans la préparation d'un médicament cytoprotecteur. Les processus dégénératifs cellulaires sont caractérisés par le 10 dysfonctionnement des cellules entraînant souvent des activités cellulaires indésirables ou des pertes de fonction, et la mort cellulaire. Les cellules ont développé des mécanismes d'adaptation, en réponse au stress, qui allongent leur durée de vie ou retardent ou empêchent la mort cellulaire (mécanismes cytoprotecteurs). 15 Cependant, ces mécanismes cytoprotecteurs sont parfois insuffisants, inadéquats, ou induits trop tard pour être efficaces et les cellules meurent. Il peut donc s'avérer intéressant de disposer de nouveaux médicaments, cytoprotecteurs, qui favoriseraient la cytoprotection. C'est un des buts de la présente invention. 20 Le terme cytoprotecteur fait référence à la capacité d'agents, par exemple des composés chimiques, naturels ou non, à maintenir les interactions des cellules entre elles ou avec les autres tissus, à protéger les cellules contre les phénomènes de dégénérescence conduisant à une perte de fonction cellulaire ou à des activités cellulaires indésirables, avec ou sans mort cellulaire, 25 et/ou contre les dysfonctionnements cellulaires et/ou contre les maladies ou affections dégénératives conduisant à ces dysfonctionnements cellulaires, lesdits dysfonctionnements ou lesdites maladies ou affections conduisant ou non à la mort cellulaire. Les termes "neuroprotecteur" ou cardioprotecteur" font référence aux 30 mêmes propriétés desdits agents mais spécifiquement pour les cellules du système nerveux ("neuroprotecteur") soit spécifiquement pour les cellules du système cardiaque ("cardioprotecteur"). On comprend donc qu'un composé cytoprotecteur ou neuroprotecteur ou 2907783 2 cardioprotecteur est un composé qui présente les propriétés précédemment décrites. Ces dysfonctionnements cellulaires peuvent être par exemple d'origine mitochondriale, comme une réduction de la capacité à générer de l'ATP, une 5 incapacité à capter et/ou retenir le calcium, ou la génération de radicaux libres. Parmi les mécanismes principaux de mort cellulaire, on distingue essentiellement la nécrose, l'apoptose et la nécroptose. La nécrose est une mort cellulaire dite "accidentelle" qui survient lors d'un dommage tissulaire. C'est la membrane plasmique de la cellule qui est la plus 10 touchée, entraînant une modification de l'homéostasie de la cellule. Les cellules vont se gorger d'eau au point que cela va entraîner la lyse de leur membrane plasmique. Cette lyse cellulaire conduit au largage dans le milieu environnant du contenu cytoplasmique. La nécrose est à l'origine du processus inflammatoire. La nécrose peut toucher un ensemble de cellules ou un tissu alors que les 15 autres parties de voisinage restent vivantes. La transformation qui en résulte est une mortification des cellules ou des tissus. Autrement dit, la nécrose se définit par des modifications morphologiques survenant lorsqu'une cellule arrive en fin de vie à la suite d'événements tels qu'un traumatisme important comme un arrêt ou une diminution de la circulation 20 sanguine au niveau d'un organe, l'hyperthermie (élévation importante de la température), une intoxication par un produit chimique, un choc physique, etc... Une des nécroses les plus connues est celle du myocarde lors de l'infarctus (arrêt d'apport circulatoire au niveau du muscle cardiaque) due à une oblitération (obstruction) d'une artère coronaire. 25 L'apoptose fait partie intégrante de la physiologie normale d'un organisme. C'est une forme physiologique de mort cellulaire hautement régulée et elle est nécessaire à la survie des organismes multicellulaires. L'apoptose est un processus qui joue un rôle primordial au cours de l'embryogenèse. Les cellules en apoptose ou apoptotiques vont s'isoler des autres cellules. 30 L'apoptose implique habituellement des cellules individuelles dans un tissu et ne provoque pas l'inflammation. L'un des points morphologiques caractéristiques de l'apoptose est l'importante condensation à la fois du noyau et du cytoplasme ce qui induit une diminution significative du volume cellulaire. Le noyau se 2907783 3 fragmente ensuite, chaque fragment est entouré d'une double enveloppe. Des corps apoptotiques (éléments cytoplasmiques et nucléaires) sont ensuite libérés et vont être absorbés par phagocytose par les cellules voisines. L'apoptose peut être induite de différentes façons. Par exemple, une radiation, la présence d'un composé chimique ou d'une hormone sont des stimuli susceptibles d'induire une cascade d'événements apoptotiques dans la cellule. Des signaux intracellulaires comme une mitose incomplète ou un dommage à l'ADN peuvent aussi induire l'apoptose. L'apoptose intervient aussi après l'action d'un génotoxique ou au cours d'une maladie. Certaines pathologies sont caractérisées par une apoptose anormale, entrainant la perte de certaines populations cellulaires, comme par exemple l'hépatotoxicité, les rétinopathies, la cardiotoxicité. On distingue donc l'apoptose physiologique et l'apoptose pathologique. L'invention s'adresse essentiellement à l'apoptose pathologique.

II existe d'autres mécanismes de mort cellulaire, comme par exemple la nécroptose, qui présente des caractéristiques de la nécrose et de l'apoptose. Une cellule mourant par nécroptose présente des caractéristiques similaires à celles d'une cellule mourant par nécrose, mais les étapes biochimiques de ce mécanisme s'assimilent plus à celles de l'apoptose. Ce mécanisme de mort cellulaire intervient par exemple dans l'ischémie. C'est donc aussi un des buts de la présente invention que de disposer de nouveaux médicaments qui pourraient permettre de prévenir et/ou traiter la nécrose et/ou l'apoptose pathologique et/ou la nécroptose (médicaments antinécrotiques et/ou antiapoptotiques et/ou antinécroptotiques).

Les processus dégénératifs cellulaires peuvent résulter, entre autres, de situations pathologiques regroupées sous le terme de maladies ou affections dégénératives, de traumatismes, ou d'exposition à divers facteurs. Ces traumatismes et facteurs peuvent inclure, par exemple, l'exposition aux radiations (UV, gamma), l'hypoxie ou la privation d'oxygène, une exposition 3o prolongée à un taux élevé de calcium, la privation de nutriments, la privation de facteurs de croissance, des poisons, des toxines cellulaires, des déchets, des toxines environnementales, des radicaux libres, des oxygènes réactifs ou encore certains événements et/ou procédures médicaux comme par exemple les 2907783 4 traumatismes chirurgicaux incluant les transplantations. On peut citer également des agents chimiques ou biologiques utilisés comme agents thérapeutiques dans le contexte de traitements médicaux comme par exemple des agents cytostatiques ou des agents anti-inflammatoires.

5 Les mitochondries sont les cibles de nombreux stress cellulaires, conduisant entre autres à une diminution de la synthèse d'ATP, ou encore à une augmentation de la production de radicaux libres. Parmi les situations pathologiques caractérisées par un processus dégénératif les plus importantes, on trouve : 10 ^ les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et du cartilage, telles que l'ostéoporose, l'ostéomyélite, les arthrites dont par exemple l'ostéoarthrite, l'arthrite rhumatoïde et l'arthrite psoriatique, la nécrose avasculaire, la fibrodysplasie ossifiante progressive, le rachitisme, le syndrome de Cushing ; 15 ^ les maladies musculaires telles que la dystrophie musculaire, comme par exemple la dystrophie musculaire de Duchenne, les dystrophies myotoniques, les myopathies et les myasthénies ; ^ les maladies de la peau, telles que les dermatites, l'eczéma, le psoriasis, le vieillissement, ou encore les altérations de la cicatrisation ; 20 ^ les maladies cardiovasculaires telles que l'ischémie cardiaque et/ou vasculaire, l'infarctus du myocarde, la cardiopathie ischémique, l'insuffisance cardiaque chronique ou aigue, la dysrythmie cardiaque, la fibrillation auriculaire, la fibrillation ventriculaire, la tachycardie paroxystique, l'insuffisance cardiaque, l'anoxie, l'hypoxie, les effets secondaires dus à des thérapies avec des agents 25 anticancéreux ; ^ les maladies circulatoires telles que l'athérosclérose, les scléroses artérielles, et les maladies vasculaires périphériques, les accidents vasculaires cérébraux, les anévrismes ; ^ les maladies hématologiques et vasculaires telles que : l'anémie, l'amyloïdose vasculaire, les hémorragies, la drépanocytose, le syndrome de la fragmentation des globules rouges, la neutropénie, la leucopénie, l'aplasie médullaire, la pancytopénie, la thrombocytopénie, l'hémophilie ; ^ les maladies du poumon incluant la pneumonie, l'asthme ; les maladies 2907783 5 chroniques obstructives des poumons comme par exemple les bronchites chroniques et l'emphysème ; ^ les maladies du tractus gastro-intestinal, telles que les ulcères ; ^ les maladies du foie incluant les hépatites virales et les cirrhoses, les 5 maladies du foie dues à des toxines ou des médicaments ; ^ les maladies du pancréas comme par exemple les pancréatites aigues ou chroniques ; ^ les maladies métaboliques telles que les diabètes mellitus et insipide, les thyroïdites ; 10 ^ les maladies des reins telles que par exemple les désordres rénaux aigus ou la glomérulonéphrite ; ^ les infections virales et bactériennes telle que la septicémie ; ^ les intoxications sévères par des agents chimiques, des toxines ou des médicaments ; 15 ^ les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire Acquis (SIDA) ; ^ les désordres associés au vieillissement, tel que le syndrome du vieillissement accéléré ; ^ les maladies inflammatoires, telles que la maladie de Crohn, la 20 polyarthrite rhumatoïde ; ^ les maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux ; ^ les cancers ; ^ les désordres dentaires tels que ceux aboutissant à la dégradation des tissus comme par exemple les périodontites ; 25 ^ les maladies ou désordres ophtalmiques incluant les rétinopathies diabétiques, le glaucome, les dégénérescences maculaires, la dégénérescence rétinienne, la rétinite pigmentaire, les trous ou déchirures rétiniennes, le décollement rétinien, l'ischémie rétinienne, les rétinopathies aigues associées à un traumatisme, les dégénérescences inflammatoires, les complications post 30 chirurgicales, les rétinopathies médicamenteuses, la cataracte ; ^ les désordres des voies auditives, tels que I'otosclérose et la surdité induite par des antibiotiques ; ^ les maladies associées aux mitochondries (pathologies 2907783 6 mitochondriales), telles que l'ataxie de Friedrich, la dystrophie musculaire congénitale avec anomalie mitochondriale structurelle, certaines myopathies (syndrome des MELAS, syndrome de MERFF, syndrome de Pearson), le syndrome de MIDD (diabètes mitochondriaux et surdité), le syndrome de 5 Wolfram, la dystonie ; ^ les affections neurologiques ou neurodégénératives caractérisées par la mort ou le dysfonctionnement des neurones entraînant la perte des fonctions neurologiques médiées par le cerveau (système nerveux central, SNC), la moelle épinière et le système nerveux périphérique (SNP), telles que 10 - les maladies chroniques neurodégénératives, héréditaires ou sporadiques, notamment la maladie d'Alzheimer, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la sclérose latérale amyotrophique, les amyotrophies spinales, la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la sclérose en plaque, l'adrénoleucodystrophie, l'épilepsie, les démences, la schizophrénie, et les 15 syndromes neurologiques associés au SIDA ; - les lésions neuronales liées au vieillissement ; - les neuropathies périphériques héréditaires ou lésionnelles, comme les maladies de Fabry, de Charcot-Marie-Tooth, de Krabbe, les leucodystrophies, les neuropathies diabétiques et celles induites par les traitements anti-cancéreux 20 et anti-rétroviraux ; - les traumatismes du cerveau, des nerfs périphériques ou de la moelle epiniere ; - les ischémies du cerveau ou de la moelle épinière suite à un accident cérébro-vasculaire, ou induites par un manque d'irrigation sanguine ; 25 -les dégénérescences, héréditaires, lésionnelles ou liées au vieillissement des neurones sensoriels de la vision, comme les dégénérescences maculaires, les rétinites pigmentaires, ou les dégénérescences du nerf optique induites par les glaucomes ; - les dégénérescences, héréditaires, traumatiques ou liées au 3o vieillissement des neurones sensoriels de l'ouïe entraînant une diminution ou une perte de l'audition. Dans le cadre du système nerveux, une approche thérapeutique pour protéger les neurones contre les phénomènes de dégénérescence est l'apport de 2907783 7 protéines neurotrophiques. Ces protéines, telles que BDNF (brain-derived neurotrophic factor), CNTF (ciliary neurotrophic factor), NGF (nerve growth factor), GDNF (glia-derived neurotrophic factor), IGF-1 (insulin-like growth factor), sont synthétisées au cours 5 du développement embryonnaire ou après lésion chez l'adulte. Ces facteurs de croissance favorisent la survie, la maturation et la différentiation des cellules neuronales. De plus, ils inhibent les mécanismes apoptotiques, activent de multiples voies de survie et protègent un grand nombre de populations neuronales. Leur utilisation est proposée dans la plupart des dégénérescences lo neuronales. De même, une protection des cellules non-neuronales dans l'environnement des neurones peut permettre de protéger les neurones en réduisant la toxicité extracellulaire et en augmentant la production de facteurs trophiques.

15 Des composés qui activeraient l'expression de facteurs neurotrophiques ou qui mimeraient l'action de ces facteurs, ont un potentiel thérapeutique pour le traitement des syndromes neurodégénératifs. Ces composés présenteraient donc un effet bénéfique dans un grand nombre de pathologies en particulier dans les pathologies touchant les systèmes 20 nerveux périphérique et central. Par ailleurs, dans le cadre ci-dessus, les motoneurones sont des neurones notamment présents dans la moelle épinière et le tronc cérébral. Leur dégénérescence ou leur mort peut conduire à une faiblesse progressive des muscles des membres, puis à une atrophie et éventuellement à une spasticité 25 (c'est à dire une contraction permanente) du muscle. Les pathologies les plus importantes qui résultent de la dégénérescence et de la mort des motoneurones spinaux et/ou bulbaires sont la sclérose latérale amyotrophique, (SLA ou ALS pour Amyotrophic Lateral Sclerosis), également connue sous le nom de maladie de Charcot ou encore maladie de Lou Gehrig, et 30 les amyotrophies spinales infantiles, également connues sous les noms de maladie de Werdnig-Hoffmann ou maladie de Kugelberg-Welander. En outre, on observe une dégénérescence des motoneurones dans les cas de traumatismes avec écrasement et/ou section de la moelle épinière ou des 2907783 8 nerfs moteurs périphériques. Plus généralement, on parle d'amyotrophies spinales pour les maladies où est impliquée la dégénérescence ou la mort des motoneurones de la moelle épinière.

5 La sclérose latérale amyotrophique est une maladie neurodégénérative associée à différents types d'inclusions tels les corps de Lewis et caractérisée par une dégénérescence des motoneurones spinaux et corticaux dont l'issue fatale est parfois associée à une démence frontale. Au cours du développement de I'ALS, les phénomènes dégénératifs se produisent non seulement dans le 10 cerveau mais également dans la moelle épinière et en conséquence dans le muscle, par défaut d'innervation. Sans toutefois dénigrer les traitements connus actuellement, il n'existe pas à ce jour de traitement efficace pour enrayer les dégénérescences cellulaires, particulièrement les dégénérescences neuronales. Ainsi il existe toujours une 15 demande de composés cytoprotecteurs, particulièrement de composés neuroprotecteurs ou cardioprotecteurs, actifs. La présente invention répond à cette demande de composés cytoprotecteurs, particulièrement neuroprotecteurs ou cardioprotecteurs. En effet, la demanderesse a découvert que le 4-azacholest-4-ène N-oxide et certains de 20 ces dérivés sont doués de remarquables propriétés cytoprotectrices, particulièrement des propriétés neuroprotectrices ou cardioprotectrices. Ainsi l'invention a pour objet des composés chimiques nouveaux répondant à la formule 1 0 (I) 25 dans laquelle R représente un groupement choisi parmi 2907783 9 R4 = soit le 4-azacholest-4-ène N-oxide, le 4-azacholest-4,24-diène N-oxide, s le 4-aza-24-éthylcholest-4-ène N-oxide, le 4-azacholest-4,21-diène N-oxide, le 4-aza-24-éthylcholest-4,21-diène N-oxide, le 4-aza-24-méthylcholest-4,21-diène N-oxide ou l'un de leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement 1 o acceptables. Selon l'invention, les sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables peuvent être par exemple des sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique, propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, tartrique, 15 citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcane sulfoniques tels que les acides méthane ou éthane sulfoniques, arylsulfoniques, tels que les acides benzène ou paratoluène sulfoniques, ou carboxyliques. Parmi les composés ci-dessus décrits on retient préférentiellement le composé de formule I pour lequel R représente une chaîne RI, ainsi que ses sels 20 d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, c'est-à-dire le 4-azacholest-4-ène N-oxide. R1 = R2 = R5 R6 = 2907783 io La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des composés de formule I tels que définis ci-dessus ainsi que de leurs sels, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule II (II) 5 dans laquelle R peut avoir les significations précédemment décrites, avec un halogénure d'hydroxylamine comme le chlorhydrate d'hydroxylamine pour obtenir le composé de formule I attendu. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit, le composé de formule II est solubilisé dans un minimum de solvant adapté io comme par exemple la pyridine. On fait réagir un excès d'halogénure d'hydroxylamine, comme par exemple le chlorhydrate d'hydroxylamine en une quantité comprise entre 1, 1 et 10 équivalents, sous agitation pendant environ 16h à température ambiante (20-30 C). Les composés de formule Il, qui servent d'intermédiaires de synthèse, sont 15 nouveaux. Ainsi l'invention a aussi pour objet les composés nouveaux répondant à la formule II dans lesquels R peut avoir les significations précédemment indiquées, leur utilisation en synthèse chimique ainsi que leur procédé de synthèse. Ledit procédé de synthèse des composés de formule II, est caractérisé en ce 20 que l'on fait réagir un composé répondant à la formule I I I R HO (III) dans laquelle R peut avoir les significations précédemment décrites, R O /// s-o o 2907783 Il avec un halogénure de tosyle comme le chlorure de tosyle, en présence d'une base pour obtenir le composé de formule II attendu. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit, le composé de formule III est solubilisé dans un minimum de solvant 5 adapté comme par exemple le dichlorométhane. On fait réagir - un excès d'halogénure de tosyle comme le chlorure de tosyle, en une quantité comprise entre 1,01 et 5 équivalents, - en présence d'une base comme la triéthylamine, en une quantité comprise entre 1,01 et 5 équivalents, 10 -sous agitation pendant environ 16h à température ambiante (20-30 C). Les composés de formule III, qui servent d'intermédiaires de synthèse sont connus, leur synthèse est décrite dans la littérature. Les intéressantes propriétés cytoprotectrices des composés de formule I, particulièrement du 4-azacholest-4-ène N-oxide, justifient leur utilisation comme 15 médicament, particulièrement pour la préparation d'un médicament cytoprotecteur, très particulièrement neuroprotecteur ou cardioprotecteur. Avantageusement, ces composés peuvent être utilisés pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention de la nécrose et/ou de l'apoptose et/ou la nécroptose (médicaments antinécrotiques et/ou 20 antiapoptotiques et/ou antinécroptotique) ou encore des affections comme les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et du cartilage, les maladies musculaires, les maladies de la peau, les maladies cardiovasculaires, 25 les maladies circulatoires, les maladies hématologiques et vasculaires, les maladies du poumon, les maladies du tractus gastro-intestinal, les maladies du foie, 3o les maladies du pancréas, les maladies métaboliques, les maladies des reins, les infections virales et bactériennes, 2907783 12 les intoxications sévères, les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire Acquis (SIDA), les désordres associés au vieillissement, 5 les maladies inflammatoires, les maladies auto-immunes, les cancers, les désordres dentaires, les maladies ou désordres ophtalmiques, lo les maladies des voies auditives, les maladies associées aux mitochondries (pathologies mitochondriales), les maladies neurologiques et neurodégénératives, Les médicaments selon la présente invention trouvent leur emploi en raison de leurs propriétés neuroprotectrices par exemple dans le traitement ou la 15 prévention des affections neurodégénératives, comme par exemple la maladie de Huntington, les maladies chroniques neurodégénératives, héréditaires ou sporadiques, les lésions neuronales liées au vieillissement, les neuropathies périphériques héréditaires ou lésionnelles, les neuropathies diabétiques ou induites par les traitements anticancéreux ou anti-rétroviraux, les traumatismes 20 du cerveau, des nerfs périphériques ou de la moelle épinière, les ischémies du cerveau ou de la moelle épinière, les dégénérescences héréditaires, lésionnelles ou liées au vieillissement des neurones sensoriels de la vision ou les dégénérescences du nerf optique, les dégénérescences héréditaires, traumatiques ou liées au vieillissement des neurones sensoriels de l'ouïe, les 25 atrophies lobaires et les démences vasculaires, et notamment les amyotrophies spinales, la sclérose latérale amyotrophique et les pathologies dues aux traumatismes de la moelle épinière ou des nerfs moteurs périphériques. Ils trouvent notamment en raison de leurs propriétés neuroprotectrices vis à vis des motoneurones, leur emploi particulièrement dans le traitement des 30 amyotrophies spinales, notamment de la sclérose latérale amyotrophique ou des amyotrophies spinales infantiles, et dans le traitement des traumatismes de la moelle épinière ou des nerfs moteurs périphériques comme évoqué ci-dessus. Ces propriétés sont illustrées ci-après dans la partie expérimentale. Elles 2907783 13 justifient l'utilisation des composés selon l'invention, ainsi que de leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, à titre de médicament. Avantageusement, les composés de formule I, particulièrement le 4- 5 azacholest-4-ène N-oxide, peuvent être utilisés dans la préparation d'un médicament destiné à la protection des neurones (médicament neuroprotecteur), des cellules cardiaques (médicament cardioprotecteur) ou d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention des maladies associées aux mitochondries. 1 o Selon l'invention le composé de formule I est avantageusement présent dans le médicament cytoprotecteur à des doses physiologiquement efficaces ; lesdits médicaments renferment notamment une dose cytoprotectrice efficace d'au moins un des composés de formule I. A titre de médicaments, les composés répondant à la formule I, leurs esters, 15 leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables ainsi que les sels d'additions avec les acides pharmaceutiquement acceptables desdits esters peuvent être formulés pour la voie digestive ou parentérale. Les médicaments selon l'invention peuvent comprendre en outre au moins un autre ingrédient thérapeutiquement actif, pour une utilisation simultanée, 20 séparée ou étalée dans le temps, notamment lors d'un traitement chez un sujet atteint d'une affection telle que définie ci-dessus. Selon l'invention, le composé de formule I peut être utilisé dans le médicament, en mélange avec un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes, c'est à dire pharmaceutiquement inactifs et non toxiques. On peut citer par 25 exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou 3o solides) sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, les cyclodextrines, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales ou animales, l'acacia, etc. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspension injectable, de 2907783 14 gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.

5 L'administration peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme du métier, de préférence par voie orale ou par injection, typiquement par voie intra-péritonéale, intra-cérébrale, intra-thécale, intra-veineuse, intra-artérielle ou intra-musculaire. L'administration par voie orale est préférée. S'agissant d'un traitement à long terme, la voie d'administration préférée sera sublinguale, orale 10 ou transcutanée. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. II est entendu que le débit et/ou la dose injectée, ou de manière générale la dose à administrer, peuvent être 15 adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie, du mode d'administration, etc.. II est entendu que des administrations répétées peuvent être réalisées, éventuellement en combinaison avec d'autres ingrédients actifs ou tout véhicule acceptable sur le plan pharmaceutique (tampons, solutions saline, isotonique, en présence d'agents stabilisants, etc.).

20 L'invention est utilisable chez les mammifères, notamment chez l'être humain. En général la dose journalière du composé sera la dose minimale pour obtenir l'effet thérapeutique souhaité. Les doses des composés ci-dessus décrits et par exemple du 4-azacholest-4-ène N-oxide, seront en général comprises 25 entre 0,001 à 100 mg par kilo par jour pour l'homme. Si nécessaire, la dose journalière peut être administrée en deux, trois, quatre, cinq, six ou plus, prises par jour ou par sous-doses multiples administrées par intervalles appropriés pendant la journée. La quantité choisie dépendra de multiples facteurs, en particulier de la voie 30 d'administration, de la durée d'administration, du moment de l'administration, de la vitessed'élimination du composé, du ou des différents produits utilisés en combinaison avec le composé, de l'âge, du poids et de la condition physique du patient, ainsi que de son histoire médicale, et de toute autre information connue 2907783 15 en médecine. La prescription du médecin traitant pourra commencer à des doses inférieures à celles généralement utilisées, puis ces doses seront progressivement augmentées afin de mieux maîtriser l'apparition d'éventuels 5 effets secondaires. Les exemples qui suivent illustrent la présente demande sans toutefois la limiter. Exemple 1 : préparation du 4-azacholest-4-ène N-oxide Exemple 1A : synthèse de l'acide 3,5-seco-4-nor-5-oxocholestane-3-10 toluenesulfonique 200 mg de 3,5-seco-4-nor-5-oxocholestane-3-ol (0,51 mmol) (Ring-chain tautomerism of 5-oxo-3,5-seco-A-norcholestan-3-ol. Edward, J.T.; Kaufman, M.; Wojtowski, R. K.; Wheeler, D. M. S.; Barrett, T. M., Canadian Journal of Chemistry 1973, 51(10), 1610-16) sont mis en solution dans 1,7 mL de 15 dichlorométhane. De la triéthylamine (1.1 éq., 78 L, 0,56 mmol) et du chlorure de tosyle (1.1 éq., 107mg, 0,56 mmol) sont ajoutés à 0 C, puis le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant une nuit. Le milieu réactionnel est alors dilué par du dichlorométhane, lavé à l'eau, puis par une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur sulfate de magnésium 20 anhydre, filtré et concentré sous vide pour obtenir une huile. Une chromatographie (éther de pétrole / acétate d'éthyle 95/5 à 9/1) sur gel de silice conduit à l'obtention de 86mg d'acide 3,5-seco-4-nor-5-oxocholestane-3-toluenesulfonique (composé B) attendu sous forme d'huile (rdt = 31%).

25 HPLC (détection DEDL) : colonne Thermo Betabasic RP C4, 5 pm, 150 x 4,6 mm; Gradient : eau (+0,05% TFA) / acétonitrile (+0,05% TFA) ; t = 0 min : 80% acétonitrile, 20% H2O ; t = 5 min : 100% acétonitrile, 0% H2O ; 30 t = 9 min : 100% acétonitrile, 0% H2O ; TR = 6,72 min, m/z = 562 [M+NH4]+, 1111 [2M+Na]+ ; RMN-1H (CDCI3, 250 MHz) 8 0,71 (s, 3H, 18-CH3), 0,85-0,88 (dd, 6H, 26- 2907783 16 CH3, 27-CH3), 0,92 (d, 1H, 25-CH), 1,04 (s, 3H, 19-CH3), 2,45 (s, 3H, tos-CH3), 3,97-4,09 (m, 2H, 3-CH2), 7,33 (d, 2H, tos-Ar), 7,78 (d, 2H, tos-Ar). Exemple 1B : synthèse du 4-azacholest-4-ène N-oxide 86 mg du composé céto-tosylate (0,157 mmol) (composé B) préparé à 5 l'étape 1A sont mis en solution dans 0,5 ml de pyridine. 86 mg de chlorhydrate d'hydroxylamine (1.24 mmol) sont ajoutés en une fois à température ambiante. Le milieu réactionnel est agité durant environ 16h (suivi CCM CH2Cl2 / MeOH 95/5), puis concentré sous vide. Le résidu est repris dans de l'éther diéthylique, la phase organique est lavée 2 fois à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium 10 anhydre, filtrée et concentrée. On obtient ainsi 39 mg de 4-azacholest-4-ène N-oxide sous la forme d'un solide blanc (rdt = 64%). HPLC (détection DEDL) : colonne Thermo Betabasic RP C4, 5 pm, 150 x 4,6 mm; Gradient : eau (+0,05% TFA) / acétonitrile (+0,05% TFA) ; 15 t = 0 min : 80% acétonitrile, 20% H2O ; t = 5 min : 100% acétonitrile, 0% H2O ; t = 9 min : 100% acétonitrile, 0% H2O ; TR = 3,10 min, m/z = 388 [M+H]+, 775 [2M+H]+.

20 RMN 1H : CDCI3 5 0.65 (s, 3H, 18-CH3), 0,81-0,83 (dd, 6H, 26-CH3, 27-CH3), 0,86 (d, 1H, 25-CH), 1,11 (s, 3H, 19-CH3), 3,70-3,85 (m, 3H, 3-CH2, 6-CH). RMN 13C : CDCI3 S 12,34 (C18), 19,02 (C21), 19,43 (Cl), 19,50 (C19), 21,77 (C11), 22,90 (C6), 22,92 (C26), 23,19 (C27), 24,16 (C23), 24,48 (C15), 28,38 (C25), 28,52 (C16), 30,69 (C7), 33,66 (C2), 35,26 (C8), 36,09 (C20), 36,47 25 (C22), 39,86 (C12, C24), 40,20 (C10), 42,74 (C13), 54,17 (C9), 56,12 (C14), 56,39 (C17), 58,78 (C3), 155,50 (C5). Exemple 2 à 6 : synthèses des composés 4-azacholest-4,24-diène N-oxide, 4-aza-24-éthylcholest-4-ène N-oxide, 4-azacholest-4,21-diène N-oxide, 4-aza-24- 30 éthylcholest-4,21-diène N-oxide et 4-aza-24-méthylcholest-4,21-diène N-oxide. Selon les mêmes protocoles que ceux décrits aux exemples 1A et 1B, il est possible de synthétiser le 4-azacholest-4,24-diène N-oxide, le 4-aza-24-éthylcholest-4-ène N-oxide, le 4-azacholest-4,21-diène N-oxide, le 4-aza-24- 2907783 17 éthylcholest-4,21-diène N-oxide, le 4-aza-24-méthylcholest-4,21-diène N-oxide. Le tableau suivant indique les composés utilisés à chaque étape pour ces synthèses. Exemple Synthèse du Composé A utilisé à Composé B obtenu à l'étape l'étape 1A 1A et utilisé à l'étape 1B 2 4-azacholest-4,24- 3,5-seco-4-nor-5- Acide 3,5-seco-4-nor-5diène N- oxide oxocholest-24-ène-3- oxocholest-24-ène-3- ol toluenesulfonique 3 4-aza-24-24-éthyl-3,5-seco-4- Acide 24-éthyl-3,5-seco-4- éthylcholest-4-ène nor-5-oxocholestanenor-5-oxocholestane-3- N -oxide 3-ol toluenesulfonique 4 4-azacholest-4,21- 3,5-seco-4-nor-5- Acide 3,5-seco-4-nor-5- diène N-oxide oxocholest-21-ène-3- oxocholest-21-ène-3-ol toluenesulfonique 5 4-aza-2424-éthyl-3,5-seco-4- Acide 24-éthyl-3,5-seco-4- éthylcholest-4,21nor-5-oxocholest-21-nor-5-oxocholest-21-ène-3- diène N-oxide ène-3-ol toluenesulfonique 6 4-aza-24- 24-méthyl-3,5-seco-4- Acide 24-méthyl-3,5-seco-4-méthylcholest-4,21- nor-5-oxocholest-21nor-5-oxocholest-21-ène-3- diène N-oxide ène-3-ol toluenesulfonique 5 Exemple 7. Effet des composés de formule I sur la survie des motoneurones Pour mettre en évidence l'action neuroprotectrice des composés de formule I, la demanderesse a étudié leur activité sur un modèle in vitro de privation trophique de motoneurones de rats. On pourra se référer utilement à la demande de brevet WO0142784 de la demanderesse sur la mise en culture des 10 motoneurones de moelle épinière. La moelle épinière d'embryons E14 de rat est disséquée et la partie ventrale est dissociée par trituration après trypsination. Les motoneurones sont séparés des autres cellules spinales par une méthode connue (Camu et aI, 1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and rat embryos by 15 immunopanning. In Immunoselection Strategies for Neural cela culture , Neuroprotocols: A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199; Henderson et al., 1993, Neutrophins promote motor neuron survival and are present in embryonic limb bud. Nature 363 (6426) : 266-70). Les cellules sont centrifugées sur un gradient de densité. Les motoneurones sont enrichis dans la 20 fraction des grandes cellules (les moins denses). Les cellules de cette fraction sont incubées avec un anticorps anti-p75, un antigène de surface présent sur les motoneurones. Des anticorps secondaires couplés à des billes magnétiques sont 2907783 18 ajoutés et le mélange de cellules est passé à travers une colonne dans un aimant (Arce et al, 1999, Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique. J. Neurosci Res 55(1) : 119-26). Seuls les motoneurones sont retenus : leur pureté est de l'ordre de 5 90%. Les motoneurones sont ensemencés à faible densité dans des puits de culture sur un substrat de polyornithine-laminine dans un milieu Neurobasal (GIBCO) supplémenté selon Raoul et al, 1999, (Programmed cell death of embryonic motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol 10 147(5) :1049-62). Des contrôles négatifs (absence de facteurs trophiques) et positifs (en présence de BDNF (Brain-Derived Neurotrophic Factor) à 1 ng/ml, GDNF (Glial-Derived Neurotrophic Factor) à 1 ng/ml et CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) à 10 ng/ml, commercialisés par la société PEPROTECH, Inc. USA et la société 15 Sigma-Aldrich), sont inclus dans chaque série. Les composés à tester sont ajoutés au milieu de culture 60 minutes après l'ensemencement et les cultures sont maintenues à 37 C sous 5% de CO2 pendant 3 jours. Les motoneurones ont une tendance spontanée à mourir en l'absence de 20 facteurs neurotrophiques (Pettmann et Henderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20(4) :633-47). Après 3 jours, la survie est évaluée par une mesure de fluorescence après incubation des cellules en présence de calcéine qui devient fluorescente dans les cellules vivantes. Après 3 jours en culture à 37 C, sous 5% de CO2 et en humidité saturante, 25 jusqu'à 50% des motoneurones ensemencés initialement survivent dans le milieu additionné de facteurs neurotrophiques, alors que moins de 15% des motoneurones survivent en milieu de culture non additionné de facteurs neurotrophiques. L'activité neuroprotectrice des composés à tester a été évaluée par leur 30 capacité à empêcher la mort des motoneurones quand ils sont ajoutés au milieu Neurobasal (GIBCO) en comparaison avec la survie des motoneurones en milieu additionné de facteurs neurotrophiques. Les composés de formule 1 selon l'invention ont montré une activité 2907783 19 neuroprotectrice à une concentration capable de permettre un meilleur taux de survie des motoneurones dans le milieu Neurobasal. Ce taux de survie est exprimé par le nombre de cellules vivantes après traitement avec le composé à tester, rapporté au nombre de cellules vivantes lorsque cultivées en milieu s additionné de facteurs neurotrophiques. Ce rapport représente donc le pourcentage de survie due au composé testé par rapport à la survie induite par les facteurs neurotrophiques. Si le rapport est supérieur à 0, l'effet des composés est positif sur la survie des motoneurones. Les résultats obtenus sont les suivants : Composé n Concentration en pM Rapport 1 1 0,57 lo De par leur effet trophique sur les motoneurones spinaux, les composés de formule I selon l'invention présentent des propriétés qui permettent d'envisager leur utilisation comme médicament cytoprotecteur, notamment comme médicament neuroprotecteur, utilisable avantageusement dans le traitement des amyotrophies, en particulier dans le traitement de la sclérose latérale 15 amyotrophique ou des amyotrophies spinales infantiles, et dans le traitement des traumatismes de la moelle épinière.

Claims (13)

REVENDICATIONS

1. O (I) dans laquelle R représente un groupement choisi parmi R1 = R2 = R3 = R4 = ainsi que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

2.) Composé de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du 4-azacholest-4-ène N-oxide.

3.) Procédé de préparation d'un composé de formule I, tel que décrit à la revendication 1, dans lequel on fait réagir un composé de formule Il 1.) Composés chimiques nouveaux répondant à la formule I R 2907783 (Il) dans laquelle R peut avoir les significations précédemment décrites, avec un halogénure d'hydroxylamine comme le chlorhydrate d'hydroxylamine pour obtenir le composé de formule I attendu. 5

4.) Composés chimiques nouveaux de formule Il R5= 21

5.) Utilisation d'un composé de formule II tel que décrit à la revendication dans laquelle R représente un groupement choisi parmi R1 = R2 = R3 = 2907783 22 4, comme intermédiaire de réaction chimique.

6.) Procédé dé préparation d'un composé de formule Il, tel que décrit à la revendication 4, dans lequel on fait réagir un composé de formule III R HO O (III) 5 dans laquelle R peut avoir les significations précédemment décrites, avec un halogénure de tosyle, en présence d'une base pour obtenir le composé de formule Il attendu.

7.) Composés de formule I tels que décrits dans l'une quelconque des revendications 1 ou 2, ou de leurs sels d'addition avec les acides 10 pharmaceutiquement acceptables, pour leur utilisation à titre de médicament.

8.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament est un médicament cytoprotecteur.

9.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement ou à la prévention de la nécrose et/ou de l'apoptose pathologique et/ou de la nécroptose (médicaments antinécrotiques et/ou antiapoptotiques et/ou antinécroptotique) ou encore des affections comme les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et/ou du cartilage ; les maladies musculaires ; les maladies de la peau ; les maladies cardiovasculaires ; les maladies circulatoires ; les maladies hématologiques et vasculaires ; les maladies du poumon ; les maladies du tractus gastro-intestinal ; les maladies du foie ; les maladies du pancréas ; les maladies métaboliques ; les maladies des reins ; 2907783 23 les infections virales et bactériennes ; les intoxications sévères ; les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire Acquis (SIDA) ; 5 les désordres associés au vieillissement ; les maladies inflammatoires ; les maladies auto-immunes ; les cancers ; les désordres dentaires ; 10 les maladies ou désordres ophtalmiques ; les maladies des voies auditives ; les maladies associées aux mitochondrie ; les maladies neurologiques et neurodégénératives.

10.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le 15 médicament est destiné à la protection des neurones (médicament neuroprotecteur).

11.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament est destiné à la protection des cellules cardiaques (médicament cardioprotecteur). 20

12.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement ou à la prévention des maladies associées aux mitochondries.

13.) Composés selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement ou à la prévention des amyotrophies, en 25 particulier dans le traitement de la sclérose latérale amyotrophique ou des amyotrophies spinales infantiles, ou dans le traitement des traumatismes de la moelle épinière.