FR2902290A1 - Nouvel agent conservateur anti bacterien et son procede d'obtention - Google Patents
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Abstract
L'invention se rapporte aux domaines des nécessités de la vie et plus particulièrement au domaine de la cosmétique.La présente invention a plus particulièrement pour objet l'obtention d'un agent conservateur qui permet une excellente protection anti microbienne, bactériostatique et antifongique.La présente invention consiste en une association d'acide salicylique et d'un extrait de Lonicera japonica variété Caprifolium, dans une zone de pH bien déterminée permettant d'obtenir un très bon effet de conservation.Utilisation de l'agent conservateur dans toute forme cosmétique, dans des compositions destinées à l'usage cutané, notamment dans les gels, les émulsions, les lotions, les crèmes, les pommades, les laits ou les masques, dans les produits solaires, les gels solaires, les sprays solaires ou dans tout type de shampoing. Ils peuvent être également utilisés dans les gels douche, dans les produits vétérinaires, les produits pharmaceutiques, pour la conservation des aliments, dans les produits d'entretien et de désinfection.
Description
NOUVEL AGENT CONSERVATEUR ANTI BACTERIEN ET SON PROCEDE D'OBTENTION La
présente invention se rapporte aux domaines des nécessités de la vie et plus particulièrement au domaine de la cosmétique.
La présente invention a plus particulièrement pour objet l'obtention d'un agent conservateur qui permet une excellente protection anti microbienne, bactériostatique et antifongique.
Des conservateurs chimiques destinés à lutter contre le développement des micro-organismes sont couramment utilisés. Les compositions alimentaires et cosmétiques doivent être protégées contre les micro-organismes susceptibles de se développer à l'intérieur de la composition et également contre ceux introduits par l'utilisateur lors de l'application des produits conditionnés. La conservation et la protection antimicrobienne peuvent dépendre de plusieurs facteurs déjà connus tels que le pH ou l'aw... • Les produits présentant des pH très acides ou très basiques nécessitent peu ou pas de conservateurs chimiques comparés à des formules similaires à pH neutre mais ils présentent l'inconvénient majeur d'être très irritants pour la peau. De plus, des pH acides peuvent favoriser la croissance des levures et des moisissures moins sensibles à ce phénomène que les bactéries.
• L' aw ou activité de l'eau influence également la croissance et le métabolisme bactérien. En effet, les micro-organismes ont besoin d'eau pour se développer. Dans les solutions concentrées, les molécules d'eau ne sont pas disponibles pour les micro- organismes car elles sont complexées par des liaisons hydrogène avec des molécules en solution. La plupart des bactéries, y compris les bactéries pathogènes, présentent une croissance à des valeurs d'aw comprises entre 0.60 et 1.00. Lorsque l'aw est inférieur à 0.60, la croissance des micro-organismes s'annule. L'addition de certaines matières premières telles que le sorbitol peuvent abaisser l'aw.
Il existe plusieurs limites de protection par la diminution de l'aw. En effet, une aw faible permet de protéger la formulation contre la multiplication des micro-organismes mais n'entraîne pas une réduction de la population contaminante comme peuvent le faire les conservateurs chimiques.
De plus, des études ont montré qu'améliorer la protection de formules par le biais de l'aw n'était réellement possible que sur des formules présentant déjà une aw faible car les composés utilisés pour diminuer l'aw entraînent des conséquences trop importantes au niveau du toucher tel que un effet collant ou poisseux.
Par ailleurs, des films d'eau peuvent se former sur des produits qui présentent une aw faible par apport d'eau lors de l'utilisation, à cause de l'humidité ambiante ou à cause des cycles de températures quotidiens. Un tel film représente une porte d'entrée pour une future attaque microbienne car l'aw augmente et la pression osmotique diminue.
Ces facteurs présentent des inconvénients et ne sont pas aussi efficaces que les agents conservateurs.
Les conservateurs chimiques couramment utilisés sont les parabens, ou les composés libérateurs de formol, le trichlosan, la chlorhexidine et ses sels, l'acide undécylénique et ses 15 sels, l'octopirox, le phenoxyéthanol, l'hexamidine, les dérivés de kétoconazole et tous les conservateurs faisant partie de la liste autorisée par la communauté Européenne. Les conservateurs habituellement utilisés peuvent présenter des risques majeurs d'allergie ou 20 d'irritation et sont alors associés à une image négative dans l'esprit des consommateurs. L'invention réside dans le fait que l'association d'acide salicylique (dont la propriété principale est d'être un excellent kératolytique et un faible agent antiseptique autorisé par la réglementation européenne) et d'un extrait sous forme liquide en phase aqueuse de la plante Lonicera japonica variété Caprifolium, dans une zone de pH bien déterminée permet d'obtenir 25 un excellent effet conservateur, par effet de potentialisation notamment sur des souches microbiennes, sur des champignons et sur les levures.
Les propriétés astringentes, antifébriles de l'extrait de Lonicera japonica ont servi au traitement de différentes infections. 30 L'extraction en phase aqueuse de Lonicera japonica permet d'obtenir un produit vendu sous le nom commercial de Campo Plantservative WSr. Campo Plantservative Wsr est un conservateur possédant un large spectre d'activité (Bactéries gram +, bactéries Gram -, Pseudomonas aeruginosa, levures et moisissures).
L'extrait de Lonicera japonica a notamment été décrit en cosmétique, dans le brevet WO 2005/000262 pour le traitement de l'acné. La composition permet d'améliorer l'élasticité, l'hydratation et la diminution des pores de la peau. Elle permet également un traitement antiride.
D'autres brevets ont montré les utilisations de l'extrait de Lonicera japonica dans les soins cosmétiques pour traiter les peaux sèches.
L'acide salicylique principalement connu pour ses propriétés kératolytiques, anti inflammatoires, analgésiques, antipyrétiques est réservé à l'usage externe comme kératolytique en raison de ses propriétés irritantes. Pour des préparations de 1 à 4 %, les effets kératolytiques et épidermolytiques sont superficiels. Pour des préparations à 5 % et plus, l'acide salicylique entraîne une kératolyse rapide du stratum cornéum (décapage), entraînant une macération de la peau et une épidermolyse.
L'acide salicylique est également anti bactérien par inhibition de l'utilisation de l'acide panthothénique par les germes, et par inhibition de la hyaluronidase secrétée par certains germes à des doses élevées. L'acide salicylique sert généralement à traiter le psoriasis, la pityriasis rubra pilaire, l'ichtyose, l'hyperkératose palmoplantaire, les cors et les durillons.
L'acide salicylique agit également comme antipyrétique en réduisant la production de prostaglandines dans l'hypothalamus qui est régulateur de la température corporelle. Il agit comme antalgique en bloquant la production des hormones responsables des messages transmis aux récepteurs de la douleur dans le cerveau, d'où son efficacité sur les migraines et les douleurs d'origines diverses.
Par le même mode d'action, il réduit les inflammations résultant d'une dilatation vasculaire, comme les coups de chaleur, qui ne s'accompagnent pas forcément de coup de soleil. De plus, il détruit la balance chimiosmétique à travers la membrane cytoplasmique par perturbation du potentiel électrique de la membrane à travers la dissociation de protons des composés dans le cytoplasme de la cellule. Il peut également dénaturer quelques enzymes.
Selon la présente invention, l'extrait de Lonicera japonica utilisé est sous forme liquide au départ de la solution commerciale et l'acide salicylique sous forme de poudre.
Les agents conservateurs selon l'invention sont utilisés dans des compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou alimentaires à une dose s'échelonnant de 0.1 à 10% rapporté au volume total et de préférence de 1 à 5% du volume total de la préparation.
Les essais ont permis de vérifier l'activité antimicrobienne et antifongique des agents de conservation selon l'invention ajoutés à des préparations cosmétiques et de constater que les résultats étaient conformes aux critères A de la Pharmacopée Européenne selon la méthode du challenge test.
Les souches utilisées étaient des bacilles gram +, des bacilles gram -, des champignons, des levures et des moisissures et plus particulièrement Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans et Aspergillus piger.
L'essai selon la méthode du challenge test a consisté en une contamination artificielle d'un produit, au moyen d'un inoculum de micro-organismes et donné pour se placer dans le produit entre 10s et 106 unités/g ou ml. Les produits ensemencés sont maintenus à température ambiante et à l'abri de la lumière pendant 28 jours. Un dénombrement de micro-organismes est effectué aux temps suivants : T0, J2, J7, J14, J28 après neutralisation des conservateurs.
L'essai ainsi que les résultats de celui-ci pour les différents produits sont indiqués dans l'exemple 1.
Tous les produits donnent un résultat conforme hormis ceux qui contiennent uniquement soit l'acide salicylique soit l'extrait de plante.
Les résultats obtenus sont d'autant plus intéressants que les formules sont riches en huiles végétales naturelles dont on connaît la complexité pour avoir une bonne protection antimicrobienne. En effet, le demandeur a constaté sur plusieurs types d'émulsions dont la phase grasse se situait entre 10 et 50 % de la masse totale et dont la concentration en eau se situait entre 10 et 50% selon le principe de l'aw, qu'il obtenait toujours des résultats conformes aux critères A de la Pharmacopée Européenne. Le tableau suivant montre les résultats obtenus selon les critères de la Pharmacopée Européenne que ce soit pour une émulsion, une lotion ou pour un masque pour des compositions selon l'invention. 2902290 s Formules Essai Lotion Masque Acide salicylique 0.3% 0.428% 0.3% Extrait de Lonicera 0.5% 0.75% 0.5% japonica % de phase aqueuse 87% 95.5% 60% pH 5.7 5.25 5.3 Résultats Conforme critère A Conforme critère A Conforme critère A Ces résultats sont d'autant plus probants que la formule du masque contient un extrait de miel, 5 et aussi une poudre d'argile dont on connaît les propriétés d'absorption des éléments actifs.
Afin de montrer l'effet synergique de l'acide salicylique et de l'extrait de Lonicera japonica et de prouver qu'un seul des ingrédients ne permettait pas de couvrir la totalité du spectre anti microbien, une étude comparative entre trois formules a été effectuée. Elle est présentée dans 10 le tableau ci-dessous. L'essai a tenu compte des concentrations minimales d'inhibition (CMI) de l'acide salicylique et de l'extrait de Lonicera japonica. Formules Témoin Acide salicylique Extrait de plante Acide salicylique 0.3% 0.3% 0% Extrait de Lonicera 0.5% 0% 0.5% japonica % de phase aqueuse 73% 73% 73% pH 5.4 5.4 5.4 Résultats Conforme critère A Non conforme sur Non conforme sur toutes les souches Candida albicans à 15 testées jours, repousse à 28 jours 15 L'acide salicylique et l'extrait de Lonicera japonica sont utilisées à de faibles concentrations afin de montrer la synergie d'action.
Les essais montrent que l'association de l'acide salicylique et de l'extrait de Lonicera japonica conduit à un résultat conforme au critère A de la Pharmacopée Européenne. Par contre, l'acide salicylique seul ou l'extrait de plante seul conduisent à un résultat non conforme ; plus particulièrement l'extrait de plante seul conduit à des résultats positifs sur Candida albicans à 15 jours et à une repousse à 28 jours et l'acide salicylique seul conduit à des résultats non conformes sur toutes les souches testées.
Selon la présente invention, on pourra remplacer l'acide salicylique par des sels d'acide 10 salicylique. Selon la présente invention, on obtient une préparation finale en solution. Les agents conservateurs selon l'invention peuvent entrer dans des compositions destinées à l'usage cutané, notamment dans des gels, des émulsions, par exemple, une émulsion huiledans-eau ou eau-dans-huile, ou d'une émulsion huile dans silicones ou eau dans des silicones. 15 Ils peuvent être utilisés dans les lotions, les crèmes, les pommades, les laits ou les masques, dans les produits solaires, les gels solaires, les sprays solaires ou dans tout type de shampoing. Ils peuvent être également utilisés dans les gels douche, dans les produits vétérinaires, les produits pharmaceutiques, pour la conservation des aliments, dans les produits d'entretien et de désinfection, ou pour toute autre forme cosmétique. L'utilisation dans des fards à 20 paupières est peu recommandée. En moyenne les agents conservateurs contiennent de 0.01 à 3% d'acide salicylique et de 0.01% à 10 % en extrait de Lonicera japonica et de préférence de 0.2% à 0.8% d'acide salicylique et de 0.3% à 1.5% en extrait de Lonicera japonica. 25 Les agents conservateurs selon l'invention présentent un pH pour produits finis, compris entre 4.0 et 6. 5 afin de garder une proportion d'acide salicylique libre qui permet une activité plus importante sur certaines souches. Les exemples et les préparations suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. 30 Exemplel : Etude de l'efficacité de la conservation antimicrobienne selon l'invention : - Les souches microbiennes et antifongiques utilisées selon l'invention sont les suivantes : • Pseudomonas aeruginosa CIP 82.118 (ATCC 9027) • Staphylococcus aureus CIP 4.83 (ATCC 6538) • Candida albicans IP 48.72 (ATCC 10231) • Aspergillus piger IP 1431.83 (ATCC 16404) La préparation des souches s'effectue par repiquage d'une cryobille sur gélose B pour les bactéries (incubation 24 h), sur gélose C pour Candida albicans et Aspergillus piger (incubation respective de 48 h et de 7 à 12 jours). Les suspensions sont ajoutées à une concentration mesurée entre 107 et 108 au spectrophotomètre à 620 nm pour les bactéries et Candida albicans. Aspergillus piger est récupéré par une solution à 9g/1 NaCl, 0.5 g/1 Tween 80 puis ajusté entre 107 et 108 par mesure au spectrophotomètre à 620 nm.
Un dénombrement sur gélose est réalisé après dilutions successives au 1/10 en tryptone- sel jusqu'à 10-6. - Les milieux de culture ainsi que les proportions de leurs différents constituants sont • les suivants : Solution de tryptone-sel (diluant simple) : Peptone de caséine trypsique 1 g Chlorure de sodium 8.6 g Eau déminéralisée Q.S.P 1000 ml • Solution NaCl-Tween 80 (récupération des spores d'Aspergillus piger) Tween 80 0.5 ml NaCl 9 g Eau déminéralisée Q.S.P 1000 ml • Gélose B ( milieu de culture des bactéries) Peptone de caséine 15 g Peptone de farine de soja 5 g Chlorure de sodium 5g Agar-agar 15 g Eau déminéralisée Q.S.P 1000 ml • Gélose C (milieu de culture de Candida albicans. Aspergillus niger)
Peptone 10 g D(+)-glucose 40 g 10 Agar-agar 15 g Eau déminéralisée Q.S.P 1000 ml • Diluant neutralisant pharmacopée (inhibant l'activité antibactérienne des 15 conservateurs, permet la numération des germes) Tween 80 30 g Lécithine de jaune d'oeuf 3 g Histidine, HC1 1 g Peptone de caseine 1 g Chlorure de sodium 4.3 g Phosphate monopotassique 3.56 g Phophate disodique dihydraté 7.23 g Eau déminéralisée Q.S.P 1000 ml On ensemence avec 100 l de chaque suspension dans des flacons stériles contenant 10 g de produit à tester pour obtenir une concentration théorique de 105 à 106 unités/g ou ml. Le produit ainsi ensemencé est placé à température ambiante et à l'abri de la lumière. 30 On dénombre à T0, J2, J7, J14, J28 par dilution de 1 ml de produit dans 9 ml de neutralisant pour inhiber l'action des conservateurs puis on fait des dilutions successives en diluant simple. On ensemence 1 ml en double de chaque dilution sur gélose B ou gélose C et on fait incuber à 33 C 1 pendant 48 h pour les bactéries, à 23 C + 1 pendant 5 jours pour les levures et les 35 moisissures.
L'inhibition de l'activité antibactérienne par le diluant neutralisant est vérifié en inoculant 1 ml d'une dilution 103 de chaque germe dans une préparation contenant 1 g de produit à tester additionné de 8 ml de diluant neutralisant. On obtient ainsi une dilution au 1/10 sur laquelle 40 est effectué un dénombrement qui doit correspondre à l'inoculum théorique. 20 25 - Les résultats sont donnés pour une lotion calmante, un lait démaquillant, un masque au miel et un soin contour des yeux. • Résultat sur la lotion calmante : Résultats en Staphylococcus Pseudomonas Candida Aspergillus log CFU/ml aureus aeruginosa albicans piger Inoculum 5.83 5.88 5.15 5.34 théorique TO 5.80 5.11 5.36 5.28 J2/ 2 jours <1 <1 - - J7/7 jours <1 <1 - - J14/14 jours <1 <1 <1 <1 J28/28 jours <1 <1 <1 <1 Ce tableau montre qu'on obtient un résultat conforme aux critères de la Pharmacopée Européenne par inhibition complète de la pousse microbienne ou fongique. 15 • Résultat sur le lait démaquillant : Résultats en Staphylococcus Pseudomonas Candida Aspergillus log CFU/ml aureus aeruginosa albicans piger Inoculum 5.63 5.41 5.48 5.48 théorique TO 5.78 4.82 5.52 5.60 J2/ 2 jours <1 <1 _ -J7/7 jours <1 <1 - - J14/14 jours <1 <1 <1 <1 J28/28 jours <1 <1 <1 <1 Ce tableau montre qu'on obtient un résultat conforme aux critères de la Pharmacopée Européenne par inhibition totale des souches. • Résultat pour le masque au miel : Résultats en Staphylococcus Pseudomonas Candida Aspergillus log CFU/ml aureus aeruginosa albicans piger Inoculum 5.63 5. 41 5.48 5.48 théorique TO 5.80 4.88 5.53 5.45 J2/ 2 jours <1 <1 _ - J7/7 jours <1 <1 _ -J14/14 jours <1 <1 <1 <1 J28/28 jours <1 <1 <1 <15 Ce tableau montre qu'on obtient un résultat conforme aux critères de la Pharmacopée Européenne. • Résultat sur le soin contour des yeux : Système conservateur Résultats Acide salicylique+ campo plantservative WSr Conforme pharmacopée européenne Acide salicylique Non conforme pharmacopée européenne- croissance lors du contrôle pollution campo plantservative WSr Non conforme pharmacopée européenne- recroissance de candida albicans Cette étude montre l'effet synergique important de l'acide salicylique associé à l'extrait de Lonicera Japonica. Sans cette association, les résultats sont non conformes à la Pharmacopée Européenne.
10 Exemple 2 : exemples de compositions contenant l'association d'acide salicylique et l'extrait de Lonicera Japonica et modes opératoires: > Exemples de compositions : • Lotion calmante: eau 15 Extrait de lavande angustifolia Extrait de fleur d' Anthemis nobilis Glycerol Lonicera japonica variété Caprifolium Acide Salicylique qsp 100 9.500% 4.500% 3.000% 0.750% 0.428% 20 12 • Lait démaquillant : Eau Huile de graines de sésame Huile de tournesol Huile de graines de noisette Alc000l Cetearylique Extrait de Lonicera japonica Succinate de tocophéryle Cetearyl Glucoside Acide salicylique Gomme Xanthane parfum Acide citrique • Masque au miel : 15 Eau Miel Huile de graines de noisette Huile d'olive Kaolin 20 Alcool Cetearylique Huile d'amande d'arganier (Argania Spinosa) Acide stearique alcool cetylique Cetearyl Glucoside 25 Gomme Xanthane Extrait de Lonicera japonica qsp 100 5.000% 2.500% 2.500% 1.600% 0.500% 0.500% 0.400% 0.288% 0.200% 0.140% 0.005% qsp 100 10.000% 9.000% 5.000% 4.000% 4.000% 2.000% 2.000% 1.700% 1.000% 0.800% 0.500% Acide Salicylique Succinate de Tocophéryle Acide Phytique parfum hydroxyde de sodium 0.285% 0.150% 0. 100% 0.140% 0.051% • Soin contour des yeux : Eau Huile de noyau d'abricot Alcool cetylique Huile de graines de bourrache Miel Kaolin Cetearyl Glucoside Extrait de Lonicera japonica Gomme Xanthane Alcool Cetylique Acide Salicylique Succinate de Tocopheryle parfum qsp 100 8.000% 4.000% 3.000% 3.000% 1.000% 1.000% 0.500% 0.500% 0.500% 0.3025% 0.150% 0.140% 20 - Modes opératoires : • Lotion calmante: Dans une cuve remplie d'eau déminéralisée, on disperse sous agitation l'extrait de Lonicera japonica jusqu'à complète solubilisation, puis on ajoute la solution d'acide salicylique préalablement dispersée dans de la glycérine. Puis on ajoute successivement les hydrolats et les autres composants. L'ensemble est ensuite neutralisé par une solution de soude. • Contour des yeux, masque au miel, lait démaquillant : Dans une cuve principale, on disperse le gel de gomme Xanthane. La solution doit être limpide puis on chauffe à 70 C. En parallèle, on prépare la phase grasse en mélangeant sous agitation les différentes huiles, l'émulsionnant et l'acide salicylique jusqu'à complète dispersion, en chauffant à 70 C. L'émulsion est réalisée en versant sous agitation la phase grasse dans la phase gel. Le mélange total est refroidi après un temps d'agitation approprié. A 50 C on ajoute l'anti oxydant préalablement dispersé dans une fraction d'huile puis l'argile préalablement dispersée dans une fraction d'eau. A température ambiante, on ajoute sous agitation l'extrait de Lonicera japonica, le miel préalablement dispersé dans de l'eau, puis les huiles essentielles. 14 25
Claims (11)
- REVENDICATIONS: 1. Nouvel agent conservateur bactériostatique caractérisé en ce qu'il est constitué par l'association d'acide salicylique ou d'un de ses sels et d'extrait de Lonicera japonica 5 dans un véhicule aqueux.
- 2. Agent conservateur selon la revendication 1 caractérisé en ce que la préparation finale est sous forme d'une dispersion d'acide salicylique dans l'extrait de Lonicera japonica ou de l'extrait de Lonicera japonica dans une solution d'acide salicylique déjà solubilisé. 10
- 3. Agent conservateur selon la revendication 1 caractérisé en ce que la concentration d'acide salicylique varie de 0.01% à 3 % dans l'agent conservateur.
- 4. Agent conservateur selon la revendication 3 caractérisé en ce que la concentration d'acide salicylique varie de 0.2 % à 0.8 % dans l'agent conservateur.
- 5. Agent conservateur selon la revendication 1 caractérisé en ce que la concentration en 15 extrait de Lonicera japonica varie de 0.01% à 10% dans l'agent conservateur.
- 6. Agent conservateur selon la revendication 5 caractérisé en ce que la concentration en extrait de Lonicera japonica varie de 0.3% à 1.5% dans l'agent conservateur.
- 7. Agent conservateur selon la revendication 1 caractérisé en ce que le pH des produits finis est compris entre 4.0 et 6.5. 20
- 8. Procédé d'obtention d'une lotion calmante contenant l'agent conservateur selon la revendication 1, qui consiste en ce que dans une cuve remplie d'eau, on disperse sous agitation l'extrait de Lonicera japonica jusqu'à complète solubilisation, puis on ajoute la solution d'acide salicylique préalablement dispersée dans le glycérol, on ajoute successivement les hydrolats et les autres composants, et l'ensemble est ensuite 25 neutralisé par une solution basique.
- 9. Procédé d'obtention d'une crème contour des yeux, un masque au miel ou d'un lait démaquillant contenant un agent conservateur selon la revendication 1 qui consiste en ce qu'on disperse un gel de gomme Xanthane, jusqu'à ce que la solution soit limpide puis on chauffe à 70 C, en parallèle on prépare la phase grasse en mélangeant sousagitation les différentes huiles, l'émulsionnant et l'acide salicylique jusqu'à complète dispersion, en chauffant à 70 C, on réalise l'émulsion en versant sous agitation la phase grasse dans la phase gel, on laisse reposer tout en refroidissant après un temps d'agitation approprié, on ajoute un anti oxydant préalablement dispersé dans une fraction d'huile puis l'argile préalablement dispersée dans une fraction d'eau, enfin à température ambiante, on ajoute sous agitation l'extrait de Lonicera japonica, le miel préalablement dispersé dans l'eau, puis les huiles essentielles et on homogénéise l'émulsion ainsi formée.
- 10. Utilisation de l'agent conservateur selon les revendications 1 à 7, dans des gels, des émulsions, des lotions, des crèmes, des pommades, des laits, des masques, dans les produits solaires, les gels solaires, les sprays solaires, dans tout type de shampoing, dans les gels douches, dans les produits vétérinaires, pharmaceutiques, pour la conservation des aliments, dans les produits d'entretien et de désinfection, à une dose allant de 0.1 à 10% du volume total .
- 11. Utilisation de l'agent conservateur selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il est utilisé dans les compositions cosmétiques à la dose de 1 à 5% du volume total.
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- 2005-04-28 FR FR0504278A patent/FR2902290A1/fr active Pending
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