FR2891146A1 - Utilisation d'un extrait de vanille dans une composition cosmetique ou dermatologique pour la prevention et/ou le traitement du vieillissement de la peau. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'un extrait de vanille provenant d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées), dans une composition cosmétique ou dermatologique, en tant qu'agent améliorant l'atrophie cutanée et/ou agent dépigmentant et/ou agent améliorant la microcirculation cutanée et/ou agent de régénération de l'épiderme et/ou agent émollient.

Description

L'invention concerne l'utilisation d'au moins un extrait de vanille

provenant d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées) en tant qu'agent actif polyfonctionnel dans une composition cosmétique ou dermatologique, pour la prévention et/ou le traitement d'altérations de la peau dus, notamment, au vieillissement ou à des mécanismes physiologiques liés au

vieillissement ou à des troubles apparentés à ces mécanismes.

La peau est principalement constituée de trois couches, à savoir, en partant de la plus superficielle, l'épiderme, le derme et l'hypoderme.

L'épiderme contribue largement à assurer la protection de la peau et à en maintenir la trophicité.

Le vieillissement et le photoviellissement de la peau et les altérations qui y sont associées peuvent se manifester de différentes manières, parmi lesquelles on peut citer: - la perte de fermeté et d'élasticité dues à une perte tissulaire au niveau de l'épiderme et/ou du derme; - la perte d'éclat due à la réduction de la microcirculation et à un ralentissement du renouvellement cellulaire au niveau de l'épiderme; -l'apparition de taches pigmentaires associées à un dysfonctionnement de la synthèse de la mélanine (ou mélanogénèse) ; - la sécheresse cutanée résultant d'une diminution de la fonction barrière de la couche cornée et à un ralentissement du renouvellement épidermique.

Il existe, de ce fait, un besoin de fournir un agent actif polyfonctionnel susceptible d'agir sur un ensemble de causes d'altérations de la peau dues au vieillissement et/ou à une modification des mécanismes physiologiques liés au vieillissement ou apparentés.

La demande FR 2 837 384 décrit l'utilisation d'extrait de vanille pour la préparation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques pour la protection de la peau contre les radiations solaires ou contre la génération de radicaux libres, ces activités étant liées à la présence de polyphénols contenus dans cet extrait.

On a maintenant trouvé qu'un extrait d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées) présentaient, par le biais de stimulation ou d'inhibition de mécanismes physiologiques, des activités susceptibles d'agir sur les symptômes dus au vieillissement, ou à des mécanismes physiologiques liés au vieillissement, ou à des troubles apparentés à ces mécanismes au niveau de l'épiderme et/ou du derme.

L'extrait utilisable selon l'invention peut provenir d'au moins une des espèces de vanillier choisies, par exemple, parmi Vanilla planifolia, Vanilla tahitensis et Vanilla pompona.

Il peut être obtenu par des techniques usuelles dans le domaine des extraits végétaux; on peut citer par exemple l'infusion, qui consiste à verser sur le végétal le solvant bouillant et à laisser refroidir; la macération, qui consiste à maintenir le végétal en contact avec le solvant à température ambiante; la digestion, qui consiste à maintenir le végétal en contact avec le solvant à une température inférieure à la température d'ébullition mais supérieure à la température ambiante; ou encore la décoction, qui consiste à maintenir le végétal en contact avec le solvant à température d'ébullition.

Après extraction, les solutions sont récupérées par une séparation liquide:solide adéquate, telle que, par exemple, : filtration, ultrafiltration tangentielle, décantation, centrifugation, essorage etc., selon des techniques usuelles dans le domaine.

La matière première mise en oeuvre consiste, par exemple, en des gousses de vanille d'une espèce de Vanillier, que l'on peut broyer ou réduire en morceaux de manière usuelle.

Pour obtenir un extrait utilisable aux fins de l'invention, on peut également soumettre les gousses de vanille, éventuellement broyées, à une extraction par un ou plusieurs solvants, par exemple choisis parmi l'eau, les alcools en C1-C4 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol, etc,. .. les solvants organiques tels que le propylène glycol, le dipropylène glycol etc, ..., ou encore l'acétate d'éthyle, I'hexane, le cyclohexane ou tout autre solvant usuel dans le domaine. Une extraction par fluide supercritique et, de préférence, par CO2 supercritique peut également être utilisé pour obtenir un extrait.

L'extraction peut être, par exemple, réalisée en immergeant ou en agitant doucement le broyat dans un ou plusieurs des solvants cités ci-dessus à des températures allant, par exemple, de la température ambiante à 100 C, pendant une durée d'environ 30 min à 12 h. Le chauffage peut être réalisé grâce à des moyens classiques ou par micro-ondes.

La solution est alors filtrée afin d'éliminer les substances insolubles de la plante. On élimine également, le cas échéant, le solvant s'il s'agit d'un solvant volatile tel que, par exemple, l'éthanol, le méthanol, I'hexane, le cyclohexane ou l'acétate d'éthyle.

Cette étape d'extraction est usuelle dans le domaine des extraits 15 de plantes, et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels, sur la base de ses connaissances générales.

L'invention concerne donc l'utilisation d'au moins un extrait de vanille tel que décrit plus haut dans une composition cosmétique, en tant qu'agent améliorant l'atrophie cutanée et/ou agent dépigmentant et/ou agent améliorant la microcirculation cutanée et/ou agent de régénération de l'épiderme et/ou agent émollient.

L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un extrait de vanille tel que décrit plus haut en tant qu'agent dépigmentant et/ou agent améliorant l'atrophie cutanée et/ou agent améliorant la microcirculation cutanée, et/ou agent de régénération de l'épiderme et /ou du derme, et/ou agent émollient, pour la préparation d'une composition dermatologique.

En effet, de manière avantageuse, on a trouvé que les extraits de vanille possédaient plusieurs activités d'intérêt vis-à-vis de mécanismes physiologiques préventifs ou réparateurs liés aux altérations de la peau, dues notamment au vieillissement.

L'invention concerne donc également l'utilisation d'au moins un extrait de vanille en tant qu'agent inhibiteur de la synthèse de mélanine, notamment en tant qu'agent inhibiteur de la synthèse d'endothéline.

On a également trouvé que, de manière avantageuse, les extraits 5 de vanille présentaient une activité activatrice à l'égard de la synthèse de plusieurs familles de facteurs de croissance par les kératinocytes.

En particulier, cette activité s'exerce vis-à-vis des facteurs de croissance suivants: - Le FGF-b (facteur de croissance des fibroblastes basique ou en anglais basic fibroblast growth factor ) également dénommé FGF(3, b-FGF ou FGF-2, qui joue un rôle important dans la maintenance et la réparation de nombreux tissus, du fait de sa capacité à induire la prolifération cellulaire, notamment celle des fibroblastes, la migration des kératinocytes indispensable lors de la cicatrisation ou lors du vieillissement (Ashcroft GS et al., J. Anat, 1997, 190 ( Pt 3) :351 -65) ainsi que I'angiogénèse (Bikfalvi et al., Endocrine review, 1997, Vol 18 n 1) ou en réponse aux irradiations UV (Kramer M et al., J. Biol. Chem., 1993, 268(9):6734-41).

Le FGF-b est sécrété et stocké dans la matrice extra-cellulaire pour assurer toute réparation tissulaire. De plus, il joue un rôle dans la prolifération et la différenciation des mélanocytes (Tada A et al. Cell, Growth Differ., 1998, 9(7):575-84).

- Le PDGF ou facteur de croissance dérivé des plaquettes (en anglais platelet-derived growth factor ), qui exerce, notamment, une activité mitogène sur la plupart des cellules dérivées du mésenchyme (Lepisto J et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Commun, 209(2):393-9) et stimule la synthèse de collagène et de collagènase par ces cellules, jouant ainsi un rôle dans des processus physiologiques tels que la cicatrisation et la réparation tissulaire (Tan EM et al, Biochem. J. 1995, 310 (Pt 2):585-8) ; il a également été montré que le niveau d'induction des PDGF et la capacité réplicative des cellules étaient liés à l'âge: des fibroblastes sénescents ont leur taux de PDGF qui diminue (Karlsson C et al., J. Cell Physiol., 1994, 158(2):256-62). Egalement, il a été montré que la quantité et le type des différents facteurs de croissance pouvait expliquer les différences de capacité des tissus à se réparer avec l'âge. (Ashcroft GS et al., J. Anat, 190, 1997, (Pt 3):351-65).

- le TGF8 ou facteur de croissance transformant (3 (en anglais transforming growth factor [3 ), qui est une cytokine intervenant dans la régulation de la croissance cellulaire, et qui joue un rôle dans la régulation de la croissance des kératinocytes (Yin L et al., J. Invest. Dermatol., 2003, 120(4):703-5; Rittie L et al., Ageing Res. Rev., 2002, 1(4):705-20), et dans la synthèse de la matrice extracellulaire (Reed MJ et al., J. Cell Physiol, 1994, 158(1):169-79; Schiller M and al., J. Dermatol. Sci, 2004, 35(2):83-92).

- le VEGF ou facteur de croissance endothélial vasculaire (en anglais vascular endothelial growth factor ) qui représente dans la peau un facteur majeur de l'angiogénèse cutanée. L'épiderme est une source importante de VEGF, secrété en grande quantité par les kératinocytes en prolifération. L'ARNm du VEGF est exprimé par les kératinocytes normaux, à la fois dans un tissu in situ et en culture cellulaire. Il a été montré que le VEGF maintiendrait l'homéostasie des cellules endothéliales et leur capacité à répondre à une stimulation angiogénique, même chez le sujet âgé (Watanabe Y et al., 1997, Oncogene 14: 2025-2032).

D'autre part une diminution du VEGF a été observée suite à une 20 exposition aux radiations UV, (Mildner M et al., Photochem. Photobiol., 1999; 70(4):674-9).

- le HB-EGF ou facteur de croissance épidermique se liant à ('héparine (en anglais heparin-binding epidermal growth factor ), qui joue un rôle important dans la régulation et la différenciation des kératinocytes (Iwamoto et al., Cytokine and Growth Factors Rewiews, 2000, 11:335-344), ainsi que dans la sénescence de cellules jeunes dont la croissance dépend de ce facteur (JID Suppl.24: S46-S50; Kanzaki Y et al., Exp. Cell. Res., 2002, 279(2):321-329); L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un extrait de vanille en tant qu'agent activateur de la synthèse d'au moins un facteur de croissance cellulaire par les kératinocytes, notamment en tant qu'agent activateur d'au moins un facteur de croissance choisi parmi FGF-b, PDGF, TGF8., VEGF et HB-EGF.

L'invention concerne également, l'utilisation d'au moins un extrait de vanille en tant qu'agent inhibiteur de l'activité des métalloprotéinases de la matrice 5 (dénommées MMP pour matrix metalloprotease ).

Les métalloprotéinases de la matrice sont des enzymes qui dégradent la matrice extracellulaire dans le cadre du remodelage physiologique de la peau, mais l'âge et l'exposition aux irradiations UV ont pour conséquence d'augmenter l'activité de ces MMP, en particulier celle de la MMP1, de la MMP3 et de la MMP9. De ce fait, la matrice extracellulaire est dégradée de façon accrue, avec pour résultante l'affaissement des tissus de la peau et la formation de rides (Rittie L et al., Ageing Res. Rev., 2002, 1(4) :705-20; Chung JH et al., J. Invest. Dermatol, 2001, 117(5):1218-24).

De préférence, ledit extrait est présent dans la composition cosmétique ou dermatologique à raison de 0,001 à 10% en poids total de la composition, en particulier à raison de 0,01 à 10%, de préférence de 0,1 à 10% en poids total de la composition.

Ladite composition cosmétique ou dermatologique peut notamment, être adaptée à une application par voie topique.

Avantageusement, ladite composition cosmétique ou dermatologique peut se présenter sous la forme d'une poudre, d'une émulsion, d'une microémulsion, d'une nanoémulsion, d'une suspension, d'une solution d'une lotion, d'une crème, d'un gel aqueux ou hydroalcoolique, d'une mousse, d'un sérum, d'une solution ou d'une dispersion pour aérosol, ou d'une dispersion de vésicules lipidiques.

Dans le cas d'une émulsion, il peut s'agir d'une émulsion eau dans huile ou huile dans eau.

La composition cosmétique ou dermatologique comprend également un solvant choisi en fonction des différents ingrédients et de la forme 30 d'administration.

A titre d'exemples, on peut citer l'eau (de préférence de l'eau déminéralisée), un alcool tel que l'éthanol, ou un éther de diéthylène glycol tel que I'éthoxydiglycol ou l'éther monométhylique de diéthylène glycol.

Ladite composition cosmétique peut également comprendre au moins un additif usuel dans le domaine, tel que par exemple au moins un composé choisi parmi un agent émollient ou humectant, un agent gélifiant et/ou épaississant, un agent tensioactif, une huile, un agent actif, un colorant, un conservateur, un agent antioxydant, un agent actif, une poudre organique ou inorganique, un filtre solaire et un parfum.

Notamment, ladite composition peut contenir: - Un ou plusieurs agent(s) émollient(s) ou humectant(s), qui peuvent être choisi(s) par exemple parmi la glycérine, les glycols, le silicone hydrosoluble tel que celui vendu sous la dénomination KF6011 (Shin Etsu) et le Jojoba hydrosoluble, tel que celui vendu sous la dénomination Resplanta jojoba (Res pharma).

Ledit agent émollient ou humectant sera présent dans la composition à une teneur de l'ordre de 0 à 30%, de préférence 2 à 10% en poids total de la composition.

- Un ou plusieurs agent(s) gélifiants(s) et/ou épaississant(s) de la phase aqueuse, choisi par exemple parmi les dérivés cellulosiques, gommes d'origine végétale (guar, caroube, alginates, carraghenanes, pectine), d'origine microbienne (xanthane), les argiles (laponite), les ammonium acryloyldiméthyltaurate/vp copolymer et ammonium acryloyldiméthyltaurate/beheneth-25 méthacrylate copolymer (tel que par exemple ceux vendus sous les dénominations Aristoflex AVC et HMB de Clariant).

Des agents gélifiants non filmogènes peuvent être par exemple choisis parmi les argiles (laponite), les ammoniums acryloyldiméthyltaurate/vp copolymer et ammonium acryloyldiméthyltaurate/beheneth-25 méthacrylate copolymer (tel que par exemple ceux vendus sous les dénominations Aristoflex AVC et HMB de Clariant).

Ledit agent gélifiant et/ou épaississant sera présent dans la composition à une teneur de l'ordre de 0 à 10% en poids total de la composition.

- Un ou plusieurs agent(s) tensioactif(s), de préférence non ionique, 5 présent dans une teneur de l'ordre de 0 à 8%, de préférence 0,5 à 3% en poids total de la composition.

- Un ou plusieurs corps gras liquide(s) à température ambiante, communément dénommé(s) huiles(s), volatile(s) ou non volatile(s), hydrocabroné(s), siliconé(s), linéaire(s), cyclique(s) ou ramifié(s), par exemple, I'isododécane, le cyclopentadimethylsiloxane, les diméthicone, l'isononanoate d'isononyle, le pentaerythrityl tetraisostéarate, etc., de préférence à raison de 0 à environ 10%, de préférence 0,5 à 5% en poids total de la composition.

- Un ou plusieurs agent(s) actif(s) d'origine naturelle, biotechnologique ou synthétique ayant une activité biologique et ayant une efficacité sur la peau via des sites biologiques, par exemple choisi parmi les vitamines, les oligo éléments, I'allantoïne, les protéines végétales, les extraits végétaux, etc. - Un ou plusieurs colorant(s) hydrosoluble(s) tels que, par exemple, le sel disodique de ponceau, le sel disodique du vert d'alizarine, le jaune de quinoléine, le sel trisodique d'amarante, le sel disodique de tartrazine, le sel monosodique de rhodamine, le sel disodique de fuchsine ou la xanthophylle de préférence à raison de 0 à environ 2% en poids total de la composition.

D'autres additifs habituellement utilisés en cosmétique peuvent également être présents dans la composition selon l'invention, notamment des conservateurs, des agents antioxydants ou des parfums bien connus dans le domaine technique.

L'homme du métier est en mesure de choisir, parmi l'ensemble de ces éventuels additifs, aussi bien la composition que la quantité de ceux qui seront ajoutés à la composition, de telle sorte que celle-ci conserve l'ensemble de ses propriétés.

L'invention est illustrée de manière non limitative par les exemples cidessous.

Exemple 1: préparation d'un extrait de vanille par extraction alcoolique On broie 0,5 kg de gousses de Vanilla plan/fo/la à l'aide d'un broyeur à couteaux (RETSCH) et on charge dans un réacteur en verre de 5 5 I équipé d'un reflux.

On ajoute 2,5 I d'éthanol à 96,3% et on chauffe pendant une heure. On laisse macérer à froid pendant une nuit.

Au matin, on filtre et on vidange le réacteur.

Le solvant chargé est conservé. Le broyat de vanille est de 10 nouveau chargé dans le réacteur avec 2,5 I d'éthanol à 96,3 %. On chauffe pendant 4 h au reflux à environ 80 C.

On filtre et on vidange le réacteur. Les deux filtrats sont rassemblés.

On évapore ensuite le solvant avec un évaporateur rotatif sous vide.

On récupère ainsi 0,155 kg d'extrait de vanille. Rendement: 31 %.

Exemple 2: étude de l'activité d'un extrait de vanille vis-à-vis du 20 facteur de croissance HB-EGF On a testé l'extrait de vanille obtenu dans l'exemple 1.

Il Préparation des cultures de kératinocytes Ce protocole est commun à tous les essais d'activité biologique.

Des kératinocytes dérivés de prépuces néonataux (Clonetics, San Diego, USA) ont été ensemencés dans des plaques à 6 puits et cultivés dans du milieu de culture pour la croissance des kératinocytes (KBM, Clonetics), à savoir un milieu de culture modifié supplémenté en EGF humain recombinant, insuline, hydrocortisone, extrait hypophysaire bovin, gentamycine et amphotéricine b.

Après 24 h de culture dans un étuve à 37 C, les cellules confluentes sont lavées avec du tampon PBS (Gibco) et incubées avec du milieu spécifique basique (KBM, Clonetics) contenant les produits à tester, pendant 24 h, à des concentrations de 500, 10, 1 ou 0,1 pg/mI. Après étude de la cytotoxicité de l'extrait, son activité est évaluée. Toutes les concentrations n'ont pas nécessairement été testées dans tous les essais.

2/ Mesure de l'expression de l'ARN messager (ARNm) du HB-

EGF

Principe de l'essai: On utilise l'amplification en chaîne par polymérase en temps réel (en anglais RT-PCR pour real time-polymerase chain reaction ) pour quantifier l'expression de l'ARN messager du HB-EGF dans un échantillon traité par rapport à un échantillon non traité. Les résultats sont normalisés par rapport à l'expression de gènes domestiques dans ces échantillons et corrigés en ce qui concerne les différences d'efficacité de PCR.

Les résultats sont exprimés en nombre de fois d'augmentation ou de diminution d'expression du gène cible (HB-EGF) dans l'échantillon traité, et non en nombre absolu de copies.

Les séquences des ADNc/ARNm des gènes investigués ont été obtenues chez GenBank.

Gène cible: HB-EGF Gène domestique:PBDG Toutes les amorces de PCR ont été obtenues en utilisant le logiciel PRIMER3 du Whitehead Institute for Biomedical Resarch.

Protocole de l'essai: L'ARNm a été isolé en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen) selon les recommandations du fabricant. La transcription inverse a été effectuée à l'aide du kit gene Amp RNA PCR (Applied Biosystems) selon les recommandations du fabricant.

La mesure de PCR en temps réel a été effectuée en utilisant l'appareil iCYCLER IQ (Biorad) avec détection SYBR Green I. Dans tous les essais, l'ADNc a été amplifié en utilisant un programme standardisé. Chaque 30 échantillon a été chargé avec du supermixe IQ SYBR Green I, de l'eau et de l'amorce (stock) ; la quantité finale d'ADNc par réaction correspondait à 25 ng d'ARN total utilisé pour la transcription inverse.

La spécificité de la PCR a été testée par électrophorèse sur gel 5 d'agarose et évaluée pour chaque échantillon en utilsant une analyse de point de fusion incluse dans le programme de PCR.

La quantification relative de l'expression du gène cible a été réalisée en utilisant le modèle mathématique de Pfaffl (Pfaffl, MW, Nucleic Acids Res. 29(9), p. E45, 2001).

Les résultats sont rapportés dans le tableau 1 ci-dessous:

Tableau 1

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (stimulation) extrait de vanille de 10 non détectable

l'exemple 1 100 3,8

500 16,9 Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède une activité stimulatrice de la synthèse du facteur de croissance HBEGF.

Exemple 3: étude de l'activité d'un extrait de vanille vis-à-vis du 20 facteur de croissance TGF-l1 L'évaluation quantitative des concentrations du facteur de croissance TGF-81 activé dans les cultures de cellules a été effectuée à l'aide de la méthode ELISA en utilisant le kit d'immunoessai Quantikine (n DB100, R&D Systems) . Les conditions de culture des kératinocytes et les échantillons testés sont tels que décrits dans l'exemple 2.

Les résultats sont rapportés dans le tableau 2 ci-dessous:

Tableau 2

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (stimulation) extrait de vanille de 1 145,5% l'exemple 1 10 123,7% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 5 possède une activité stimulatrice de la synthèse du facteur de croissance TGF-131.

Exemple 4: étude de l'activité d'un extrait de vanille vis-à-vis du facteur de croissance VEGF L'évaluation quantitative des concentrations du facteur de croissance VEGF dans les cultures de cellules a été effectuée à l'aide de la méthode ELISA en utilisant le kit d'immunoessai Quantikine (n DVE00, R&D Systems) . Les conditions de culture des kératinocytes et les échantillons 15 testés sont tels que décrits dans l'exemple 3.

Les résultats sont rapportés dans le tableau 3 ci-dessous: Tableau 3 Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (stimulation) Extrait de vanille de 0,1 137,9% l'exemple 1 1 152,4% 188,8% 166% 500 178,2% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 de vanille possède une activité stimulatrice de la synthèse du facteur de croissance VEGF.

Exemple 5: étude de l'activité d'extraits de vanille selon l'invention vis-à-vis du facteur de croissance PDGF-AA L'évaluation quantitative des concentrations du facteur de croissance PDGF-AA humain dans les cultures de cellules a été effectuée à l'aide de la méthode ELISA en utilisant le kit d'immunoessai Quantikine (n DAA00, R&D Systems) . Les conditions de culture des kératinocytes et les échantillons testés sont tels que décrits dans l'exemple 2.

Les résultats sont rapportés dans le tableau 4 ci-dessous:

Tableau 4

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (stimulation) Extrait de vanille de 0,1 127,2%

l'exemple 1 1 140,0%

138,1% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède une activité stimulatrice de la synthèse du facteur de croissance PDGF-AA.

Exemple 6: étude de l'activité d'un extrait de vanille vis-à-vis du 20 facteur de croissance FGF-b L'évaluation quantitative des concentrations du facteur de croissance FGF-b humain dans les cultures de cellules a été effectuée à l'aide de la méthode ELISA en utilisant le kit d'immunoessai Quantikine (n DFB50, R&D Systems) . Les conditions de culture des kératinocytes et les échantillons testés sont tels que décrits dans l'exemple 2.

Les résultats sont rapportés dans le tableau 5 ci-dessous:

Tableau 5

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (stimulation) Extrait de vanille de 10 non détectable l'exemple 1 100 187,9% 500 193,9% Les résultats montrent l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède 5 une activité stimulatrice de la synthèse du facteur de croissance FGF-b.

Exemple 7: étude de l'activité d'un extrait de vanille vis-à-vis de l'endothéline-1 L'évaluation quantitative des concentrations d'endothéline-1 humaine dans les cultures de cellules a été effectuée à l'aide de la méthode ELISA en utilisant le kit d'immunoessai Quantikine (n BBE5, R&D Systems) . Les conditions de culture des kératinocytes et les échantillons testés sont tels que décrits dans l'exemple 2.

Les résultats sont rapportés dans le tableau 6 ci-dessous: 15 Tableau 6 Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (inhibition) Extrait de vanille de 10 non détectable l'exemple 1 100 28,5% 500 62% Les résultats montrent l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède une activité inhibitrice de la synthèse d'endothéline-1.

Exemple 8: étude de l'activité d'extraits de vanille selon l'invention vis-à-vis des métalloprotéinases de la matrice (MMP) Principe de l'essai Les produits à tester sont incubés avec les MMP activées L'activité enzymatique est contrôlée par l'addition d'un substrat enzymatique fluorescent spécifique de chaque MMP.

Protocole de l'essai La pro-MMP1, la pro-MMP2 ou la pro-MMP9 sont incubées dans les plaques avec une solution d'APMA (acétate paminophénylmercurique) à température ambiante, sous légère agitation, pendant 1 h. Différentes concentrations des différents inhibiteurs potentiels sont ajoutées. On incube ensuite le mélange à température ambiante sous légère agitation. La réaction enzymatique est provoquée en ajoutant le substrat fluorescent solubilisé dans du DMSO.

La réaction enzymatique est suivie pendant 1 h à l'aide d'un spectrofluorimètre et la fluorescence est mesurée à une longueur d'onde d'excitation de 360 nm et une longueur d'onde d'émission de 460 nm pour MMP1; à une longueur d'onde d'excitation de 320 nm et une longueur d'onde d'émission de 405 nm pour MMP2 et MMP9.

Les résultats sont exprimés en unité de fluorescence émise (RFU) qui représente la quantité de substrat hydrolysé par min. Le spectrofluorimètre Microwin 2000 calcule la variation d'absorbance A, qui représente la vitesse initiale (Vi) de la réaction enzymatique. Dans chaque essai, on fait la moyenne des 3 valeurs de Vi obtenues pour chaque concentration d'inhibiteur potentiel. Les résultats de 10 expériences ont été exprimés en moyenne SD, puis présentés en pourcentage d'activité résiduelle.

Les résultats sont rapportés dans les tableaux 7-9 ci-dessous:

Tableau 7

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (inhibition) Extrait de vanille de 100 48%

l'exemple 1 500 94%

1000 99% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 5 possède une activité inhibitrice des MMP1.

Tableau 8

Produit testé Concentration (pg /ml) Activité (inhibition) Extrait de vanille de 100 37%

l'exemple 1 500 85%

1000 97% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède une activité inhibitrice des MMP2.

Tableau 9

Produit testé Concentration (pg /mi) Activité (inhibition) Extrait de vanille de 100 39%

l'exemple 1 500 78%

1000 94% Les résultats montrent que l'extrait de vanille de l'exemple 1 possède une activité inhibitrice des MMP9.

Claims (14)

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'au moins un extrait de vanille provenant d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées) en tant qu'agent actif polyfonctionnel dans une composition cosmétique ou dermatologique, pour la prévention et/ou le traitement d'altérations de la peau dus au vieillissement ou à des mécanismes physiologiques liés au vieillissement ou à des troubles apparentés à ces mécanismes.

2. Utilisation selon la revendication 1 d'au moins un extrait de vanille provenant d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées), dans une composition cosmétique, en tant qu'agent améliorant l'atrophie cutanée et/ou agent dépigmentant et/ou agent améliorant la microcirculation cutanée et/ou agent de régénération de l'épiderme et/ou agent émollient.

3. Utilisation selon la revendication 1 d'au moins un extrait de vanille provenant d'au moins une espèce de Vanillier (famille des Orchidacées), en tant qu'agent dépigmentant et/ou agent améliorant l'atrophie cutanée, et/ou agent améliorant la microcirculation cutanée, et/ou agent de régénération de l'épiderme et /ou du derme, et/ou agent émollient, pour la préparation d'une composition dermatologique.

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'espèce de Vanillier est choisie parmi Vanilla planifolia, Vanilla tahitensis et Vanilla pompona.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit extrait est un agent inhibiteur de la synthèse de 25 mélanine.

6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ledit extrait est un agent inhibiteur de la synthèse d'endothéline.

7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en 30 ce que ledit extrait est un agent activateur de la synthèse d'au moins un facteur de croissance cellulaire par les kératinocytes.

8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit facteur de croissance est choisi parmi FGF-b, PDGF, TGFI3, VEGF et HBEGF.

9. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée 5 en ce que ledit extrait est un agent inhibiteur de l'activité des métalloprotéinases de la matrice (MMP).

10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que ledit extrait est présent dans la composition cosmétique ou dermatologique à raison de 0,001 à 10% en poids total de la composition.

11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que ledit extrait est présent dans la composition cosmétique ou dermatologique à raison de 0,01 à 10%, de préférence de 0,1 à 10% en poids total de la composition.

12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, 15 caractérisée en ce que ladite composition cosmétique ou dermatologique est adaptée à une application par voie topique.

13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que ladite composition cosmétique ou dermatologique se présente sous la forme d'une poudre, d'une émulsion, d'une microémulsion, d'une nanoémulsion, d'une suspension, d'une solution, d'une lotion, d'une crème, d'un gel aqueux ou hydroalcoolique, d'une mousse, d'un sérum, d'une solution ou d'une dispersion pour aérosol, ou d'une dispersion de vésicules lipidiques.

14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 3 à 13, caractérisée en ce que ladite composition cosmétique comprend également au moins un composé choisi parmi un agent émollient ou humectant, un agent gélifiant et/ou épaississant, un agent tensioactif, une huile, un agent actif, un colorant, un conservateur, un agent antioxydant, un agent actif, une poudre organique ou inorganique, un filtre solaire et un parfum.