FR2825632A1

FR2825632A1 - Polyphenol-containing active agent for promoting heat shock protein 72 synthesis, useful in cosmetics for combating skin aging, obtained by hydrolyzing aqueous Salix extract with protease

Info

Publication number: FR2825632A1
Application number: FR0107587A
Authority: FR
Inventors: Jean Jacques Paufique
Original assignee: Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Current assignee: Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Priority date: 2001-06-11
Filing date: 2001-06-11
Publication date: 2002-12-13
Anticipated expiration: 2021-06-11
Also published as: FR2825632B1; WO2002100423A1

Abstract

Extraction of an active agent (A) involves: extracting Salix (specifically Salix alba, Salix purpurea, Salix viminalis, Salix daphnoides, Salix fragilis or Salix pentandra) with water; hydrolyzing in presence of a protease; separating the soluble and insoluble phases ; and sterile filtering to give a total mesophilic flora content of less than 100 germs per g. Extraction of an active agent (A), rich in polyphenols of phenolic acid type, involves: (a) extracting Salix (specifically Salix alba, Salix purpurea, Salix viminalis, Salix daphnoides, Salix fragilis or Salix pentandra) with water; (b) hydrolyzing at pH 20-50degreesC and pH 1.0-4.0 in presence of a protease; (c) separating the soluble and insoluble phases (e.g. by decantation, filtration and/or centrifugation); and (d) sterile filtering to give a total mesophilic flora content of less than 100 germs per g, yeasts and molds being absent. An Independent claim is included for the active agent (A), obtained as above and having a dry solids content (determined by oven drying at 105 deg C for 16 h) of 20-200 (preferably 40-100) g/l, a pH (measured potentiometrically at room temperature) of 3.0-7.0 (preferably 4.0-7.0) and an overall polyphenol content (expressed in gallic acid equivalents) of 1.0-20.0 (preferably 1.0-10.0, especially 1.0-5.0) g/l.

Description

PROCEDE D'EXTRACTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE SALIT,
PRINCIPE ACTIF OBTENU ET TRAITEMENTS COSMETIQUES
La présente invention concerne un procédé d'extraction d'un principe actif à partir de Salix, salix alba ou sali purpura ou salix viminalis ou salix

daphnoides ou salix fragilis ou salix pentandra et couvre aussi le principe actif obtenu permettant d'assurer la protection des cellules cutanées et donc un effet anti-âge. L'invention couvre aussi les traitements cosmétiques associés. PROCESS FOR EXTRACTING AN ACTIVE INGREDIENT FROM SALIT,
ACTIVE INGREDIENT OBTAINED AND COSMETIC TREATMENTS
The present invention relates to a method for extracting an active principle from Salix, salix alba or sali purpura or salix viminalis or salix

daphnoides or salix fragilis or salix pentandra and also covers the active ingredient obtained, ensuring the protection of skin cells and therefore an anti-aging effect. The invention also covers associated cosmetic treatments.

La peau est soumise à de nombreux stress et notamment ceux engendrés par la chaleur et les rayonnements UV, au cours d'expositions au soleil de trop longue durée et/ou de trop forte intensité. The skin is subjected to numerous stresses, in particular those caused by heat and UV radiation, during sun exposure that is too long and / or too intense.

Toutes les cellules des organismes vivants (hommes, animaux, plantes, bactéries) répondent notamment à ce type de stress par la synthèse de protéines spécifiques appelées protéines de choc thermique ou Heat Shock Proteins (HSP). Ces protéines constituent un système important de la protection cellulaire en biologie cutanée. All the cells of living organisms (humans, animals, plants, bacteria) respond in particular to this type of stress by the synthesis of specific proteins called heat shock proteins or Heat Shock Proteins (HSP). These proteins constitute an important system of cellular protection in skin biology.

Les HSP sont classées en 5 classes selon leur poids moléculaire et leur homologie de séquence : HSP 110, HSP 90, HSP 70, HSP 60 et HSP 27. HSPs are classified into 5 classes according to their molecular weight and their sequence homology: HSP 110, HSP 90, HSP 70, HSP 60 and HSP 27.

La première fonction de ces protéines est celle de thermotolérance. The first function of these proteins is that of thermotolerance.

Ainsi, lorsque l'on soumet des kératinocytes à un traitement thermique d'une heure à 40 C ou 41 C, on provoque une augmentation du taux d'ARNm et de la synthèse des HSP. Thus, when keratinocytes are subjected to a one hour heat treatment at 40 ° C. or 41 ° C., an increase in the level of mRNA and of the synthesis of HSPs is caused.

Une telle réaction permet de limiter la dénaturation pendant le stress. Such a reaction makes it possible to limit denaturation during stress.

Ces protéines jouent un rôle prépondérant dans la construction et même la réparation des dommages induits. These proteins play a major role in building and even repairing the damage caused.

Ces protéines assurent non seulement un rôle de protection mais aussi la reproduction de protéines fonctionnelles, le maintien des fonctions cellulaires et la restauration des fonctions métaboliques basiques, tout en permettant l'élimination des radicaux délétères. These proteins not only provide a protective role but also the reproduction of functional proteins, the maintenance of cellular functions and the restoration of basic metabolic functions, while allowing the elimination of deleterious radicals.

Les HSP 70 représentent les protéines les plus étudiées car elles sont majoritairement synthétisées par les cellules eucaryotes. HSP 70s represent the most studied proteins because they are mainly synthesized by eukaryotic cells.

On distingue dans cette catégorie deux formes l'une constitutive, HSP 73 ou 70 et une forme inductible, notamment sous les effets de stress, HSP 72. We distinguish in this category two forms one constitutive, HSP 73 or 70 and an inducible form, in particular under the effects of stress, HSP 72.

On retrouve cette forme inductible dans les fibroblastes et les kératinocytes. This inducible form is found in fibroblasts and keratinocytes.

Les HSP 72 sont induites par la chaleur mais aussi par les UVB. HSP 72 is induced by heat but also by UVB.

On sait aussi (Muramatsu. T & al, 1966, British Journal of Dermatology, 134 : 1035-1038) que l'inductibilité des HSP 72 diminue avec l'âge. Des études immunohistochimiques ont montré un niveau d'induction plus faible sur des explants de peau de donneurs âgés que sur des explants de donneurs Jeunes. We also know (Muramatsu. T & al, 1966, British Journal of Dermatology, 134: 1035-1038) that the inducibility of HSP 72 decreases with age. Immunohistochemical studies have shown a lower level of induction on explants of skin from older donors than on explants from younger donors.

Dans le cas plus spécifique des fibroblastes, une étude récente (ConradGutsmann & al, 1998, Experimental cell research 241 : 404-413) a montré également que les fibroblastes de jeunes donneurs expriment des taux de HSP 72 plus élevés que des donneurs âgés, que ce soit avant ou après le stress thermique. In the more specific case of fibroblasts, a recent study (ConradGutsmann & al, 1998, Experimental cell research 241: 404-413) also showed that fibroblasts from young donors express higher HSP 72 levels than older donors, than either before or after heat stress.

La présente invention a pour but de proposer un procédé d'extraction d'un principe actif à partir de salix qui est riche en polyphénols (type acides phénoliques), pour stimuler l'induction de HSP 72 avec un effet anti-âge et pour assurer la protection des cellules cutanées. The present invention aims to provide a method of extracting an active principle from salix which is rich in polyphenols (phenolic acid type), to stimulate the induction of HSP 72 with an anti-aging effect and to ensure protection of skin cells.

A cet effet, le procédé d'extraction d'un principe actif riche en polyphénols, notamment pour augmenter la production de HSP 72 face à des stress engendrés par la chaleur et/ou les rayonnements UVB, se caractérise en

ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : - solubilisation de Salix, salix alba ou salix purpurea ou salix viminalis ou salix daphnoides ou salix fragilis ou salix pentandra dans de l'eau, To this end, the process for extracting an active principle rich in polyphenols, in particular for increasing the production of HSP 72 in the face of stresses generated by heat and / or UVB radiation, is characterized by

what it includes the succession of the following stages: - solubilization of Salix, salix alba or salix purpurea or salix viminalis or salix daphnoides or salix fragilis or salix pentandra in water,

- hydrolyse entre 200C et 50 C et à pH acide en présence d'une- protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par tout moyen ou toute combinaison de moyens, par exemple : décantation, filtration ou centrifugation, - filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/g, et une absence de levures et de moisissures. - hydrolysis between 200C and 50 C and at acidic pH in the presence of a protease, - separation of the soluble and insoluble phases by any means or any combination of means, for example: decantation, filtration or centrifugation, - sterilizing filtration to achieve total mesophilic flora less than 100 germs / g, and an absence of yeasts and molds.

Le principe actif obtenu est caractérisé par les paramètres suivants : - un taux de matière sèche obtenu par passage dans une étuve à 105 C pendant 16 heures, compris entre 20 et 200 g/l, plus particulièrement compris entre 40 et 100 g/l. The active ingredient obtained is characterized by the following parameters: - a dry matter content obtained by passing through an oven at 105 ° C. for 16 hours, between 20 and 200 g / l, more particularly between 40 and 100 g / l.

- un pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante, compris entre 3,0 et 7,0, plus particulièrement entre 4,0 et 7,0. - a pH measured by the potentiometric method at room temperature, between 3.0 and 7.0, more particularly between 4.0 and 7.0.

- un taux de polyphénols totaux, exprimés en équivalent d'acide gallique compris entre 1,0 et 20,0 g/l, plus particulièrement entre 1,0 et 10,0 g/l et spécifiquement entre 1,0 et 5,0 g/l. - a rate of total polyphenols, expressed in gallic acid equivalent between 1.0 and 20.0 g / l, more particularly between 1.0 and 10.0 g / l and specifically between 1.0 and 5.0 g / l.

L'invention couvre aussi des traitements cosmétiques. The invention also covers cosmetic treatments.

La description qui va suivre est faite en regard des dessins annexés sur lesquels les différentes figures représentent : - figure 1, un tableau de l'expression d'HSP 72 obtenu en présence du principe actif selon la présente invention, - figure 2, un tableau comparatif de l'expression d'HSP 72 en fonction de l'âge, - figure 3, un tableau des résultats des effets anti-rides - figure 4, un tableau des résultats de fatigabilité de la peau, - figure 5, un tableau de l'activité anti-radicalaire, - figure 6, un tableau du taux de protection vis-à-vis des agressions
UVA/UVB, et - figure 7, un tableau des résultats obtenus par action du principe actif vis-à-vis des interleukines relâchées. The following description is made with reference to the appended drawings in which the various figures represent: - FIG. 1, a table of the expression of HSP 72 obtained in the presence of the active principle according to the present invention, - FIG. 2, a table comparison of the expression of HSP 72 as a function of age, - FIG. 3, a table of the results of the anti-wrinkle effects - FIG. 4, a table of the results of fatigability of the skin, - FIG. 5, a table of anti-radical activity, - Figure 6, a table of the rate of protection against attacks
UVA / UVB, and - Figure 7, a table of the results obtained by the action of the active principle vis-à-vis the released interleukins.

11 PROCEDE D'EXTRACTION : 11 EXTRACTION PROCESS:

Le procédé selon la présente invention consiste à réaliser la successiondes étapes suivantes :

- solubilisation de Salix, salix alba ou salix purpura ou salix viminalis ou salix daphnoides ou salix fragiles ou salix pentandra dans de l'eau, - hydrolyse à 20 C environ et à pH acide, en présence d'une protéase, - décantation, - séparation des phases soluble et insoluble par tout moyen ou toute combinaison de moyens, par exemple : décantation, filtration ou centrifugation. The method according to the present invention consists in carrying out the following steps:

- solubilization of Salix, salix alba or salix purpura or salix viminalis or salix daphnoides or fragile salix or salix pentandra in water, - hydrolysis at around 20 C and at acid pH, in the presence of a protease, - decantation, - separation of the soluble and insoluble phases by any means or any combination of means, for example: decantation, filtration or centrifugation.

- concentration éventuelle de la fraction active d'au moins 30%, et - filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/g, et une absence de levures et de moisissures, notamment par passage sur une membrane microporeuse à 0, 22 um. - possible concentration of the active fraction of at least 30%, and - sterilizing filtration to reach a total mesophilic flora of less than 100 germs / g, and an absence of yeasts and molds, in particular by passing over a microporous membrane at 0, 22 um.

2/CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF OBTENU
Taux de matière sèche :
La matière sèche est obtenue par passage du principe actif extrait dans une étuve à 105 C pendant 16 heures. La quantité de matière sèche obtenue est comprise entre 20 et 200 g/l, plus particulièrement comprise entre 40 et lOOg/L
Mesure du pH :
Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante. Le pH est compris entre 3,0 et 7,0, plus particulièrement entre 4,0 et 7,0. 2 / CHARACTERIZATION OF THE ACTIVE PRINCIPLE OBTAINED
Dry matter rate:
The dry matter is obtained by passing the active ingredient extracted in an oven at 105 ° C. for 16 hours. The amount of dry matter obtained is between 20 and 200 g / l, more particularly between 40 and lOOg / L
PH measurement:
The pH is measured by the potentiometric method at room temperature. The pH is between 3.0 and 7.0, more particularly between 4.0 and 7.0.

Polyphénols totaux :
La détermination est réalisée par réaction des polyphénols en présence de ferricyanure de potassium et par une détection consécutive des complexes colorés formés, à 715 nm. Total polyphenols:
The determination is carried out by reaction of the polyphenols in the presence of potassium ferricyanide and by subsequent detection of the colored complexes formed, at 715 nm.

On compare ensuite par rapport à un étalon d'acide gallique couvrant la plage concernée de mesures. It is then compared against a gallic acid standard covering the relevant range of measurements.

On obtient les résultats suivants exprimés en équivalent d'acide gallique : taux de polyphénols totaux compris entre 1,0 et 20,0 g/t, plus The following results are obtained expressed in gallic acid equivalent: total polyphenol content between 1.0 and 20.0 g / t, plus

particulièrement entre 1,0 et 10,0 g/l et spécifiquement un taux compris entre 1, 0 et 5, 0 g/1. particularly between 1.0 and 10.0 g / l and specifically a rate of between 1.0 and 5.0 g / l.

Stabilité :
De plus, le principe actif, à des dosages compris entre 1 et 5 % en volumes, est tout à fait stable dans des milieux ayant un pH compris entre 2,0 et 10,0 et stable en température jusqu'à 80 C pendant plusieurs heures. Stability:
In addition, the active principle, at dosages of between 1 and 5% by volume, is quite stable in media having a pH between 2.0 and 10.0 and stable in temperature up to 80 C for several hours.

3/EFFETS DU PRINCIPE ACTIF SUR LA SYNTHESE DES HSP 72
L'étude est conduite sur des kératinocytes humains avec induction thermique et sans induction thermique. 3 / EFFECTS OF THE ACTIVE INGREDIENT ON THE SYNTHESIS OF HSP 72
The study is conducted on human keratinocytes with thermal induction and without thermal induction.

Etude de la synthèse des HSP 72 avec et sans induction thermique. Study of the synthesis of HSP 72 with and without thermal induction.

Pour se protéger rapidement des dommages thermo et UV-induits, les cellules cutanées produisent des protéines de stress. Pour le vérifier et l'analyser, on soumet des kératinocytes à un stress thermique évolutif. Un témoin positif est réalisé par chauffage à 44 C, pendant 1 h sans principe actif. To quickly protect themselves from thermal and UV-induced damage, skin cells produce stress proteins. To verify and analyze it, keratinocytes are subjected to an evolving thermal stress. A positive control is produced by heating to 44 ° C. for 1 hour without active principle.

Le stress thermique consiste à porter les kératinocytes humains à 44 C pendant 15 minutes, puis toujours à 440C mais pendant 30 minutes, en l'absence et en présence du principe actif tel qu'extrait précédemment, à raison de 0,5 ; 1,0 et 2,0 % en volume. The thermal stress consists in bringing the human keratinocytes to 44 C for 15 minutes, then always to 440 C but for 30 minutes, in the absence and in the presence of the active principle as extracted previously, at a rate of 0.5; 1.0 and 2.0% by volume.

Parallèlement, en sorte de permettre un comparatif et de vérifier que les polyphénols sont bien à l'origine de l'activité recherchée, on teste un mélange modèle composé principalement d'acide chlorogénique et d'acide p. coumarique, avec une concentration de 2% en volume. At the same time, in order to allow a comparison and to verify that the polyphenols are indeed at the origin of the desired activity, we test a model mixture composed mainly of chlorogenic acid and p acid. coumaric, with a concentration of 2% by volume.

Afin de visualiser les protéines de stress ainsi produites, on les révèle par une coloration marron à l'aide d'un système péroxydase. Plus la coloration est intense et plus le niveau d'expression HSP 72 est important. Le niveau est estimé au microscope à l'aide d'une échelle colorimétrique qualitative, au sein d'une même étude pour ne pas fausser les interprétations. In order to visualize the stress proteins thus produced, they are revealed by a brown coloring using a peroxidase system. The more intense the coloration, the higher the level of HSP 72 expression. The level is estimated under a microscope using a qualitative colorimetric scale, within the same study so as not to distort the interpretations.

Les résultats sont exprimés par des-ou + sachant que l'échelle est la suivante : - pas de présence d'HSP 72 : - The results are expressed by -or + knowing that the scale is as follows: - no presence of HSP 72: -

- faible présence d'HSP 72 : + - moyenne présence d'HSP 72 : + + - forte présence d'HSP 72 : + + + - très forte présence d'HSP 72 : + + + + ou + + + + +
Les résultats sont exprimés dans le tableau de la figure 1. - weak presence of HSP 72: + - medium presence of HSP 72: + + - strong presence of HSP 72: + + + - very strong presence of HSP 72: + + + + or + + + + +
The results are expressed in the table in FIG. 1.

Sans induction thermique, le principe actif stimule la synthèse de ces HSP 72, dès 1%. Without thermal induction, the active principle stimulates the synthesis of these HSP 72, from 1%.

On obtient avec le principe actif selon la présente invention, sensiblement les mêmes résultats qu'avec le mélange modèle de polyphénols. With the active principle according to the present invention, substantially the same results are obtained as with the model mixture of polyphenols.

On note aussi que plus le traitement thermique est important et plus l'expression des HSP 72 est élevée. It is also noted that the greater the heat treatment, the higher the expression of HSP 72.

On remarque aussi que, en présence de principe actif selon la présente invention, les cellules traitées expriment de façon plus intense ces HSP 72. It is also noted that, in the presence of active principle according to the present invention, the treated cells express these HSPs 72 more intensely.

De plus, on constate une accélération de la réponse puisque le taux d'HSP 72 obtenu pendant 30 minutes sans principe actif est semblable à celui obtenu en 15 minutes dès la présence de 1 % de principe actif. In addition, there is an acceleration of the response since the rate of HSP 72 obtained for 30 minutes without active principle is similar to that obtained in 15 minutes from the presence of 1% of active principle.

Etude de l'expression des HSP 72 en fonction de l'âge :
On vient de noter, que plus le stress thermique est important, plus l'expression des HSP 72 est significative. Study of the expression of HSP 72 as a function of age:
We have just noted that the greater the thermal stress, the more significant the expression of HSP 72.

On peut aussi comparer l'intensité de cette réponse en fonction de l'âge du donneur. We can also compare the intensity of this response as a function of the donor's age.

Les essais sont menés de la même façon que précédemment mais les explants de peau ont deux provenances, celle d'un sujet jeune (19 ans) et celle d'un sujet âgé (77 ans). The tests are carried out in the same way as previously but the skin explants have two origins, that of a young subject (19 years) and that of an elderly subject (77 years).

Les essais sont menés avec trois durées croissantes d'induction thermique et une même température 44 C. The tests are carried out with three increasing durations of thermal induction and the same temperature 44 C.

Les résultats de la figure 2 montrent que l'expression est améliorée dans les deux cas, ce qui est particulièrement satisfaisant pour le sujet âgé sur lequel on montre que le principe actif a bien un effet. The results of FIG. 2 show that the expression is improved in both cases, which is particularly satisfactory for the elderly subject on whom it is shown that the active principle does indeed have an effect.

Cette expression est amplifiée sur le jeune sujet. This expression is amplified on the young subject.

Plus le stress thermique est important, plus la réponse en HSP 72 est intense, toutefois l'intensité de cette réponse HSP 72 est plus rapide pour les kératinocytes du jeune donneur. The greater the heat stress, the more intense the HSP 72 response, however the intensity of this HSP 72 response is faster for the keratinocytes of the young donor.

Le principe actif permet de doper l'activité de synthèse et la vitesse d'induction des HSP 72 pour les kératinocytes du donneur âgé. The active principle makes it possible to boost the activity of synthesis and the speed of induction of HSP 72 for the keratinocytes of the elderly donor.

Le principe actif compense la baisse d'activité due au vieillissement cellulaire. The active ingredient compensates for the drop in activity due to cell aging.

4/ETUDE DE L'EFFET ANTI-RIDES DU PRINCIPE ACTIF
La quantification in vivo sur 12 volontaires de l'efficacité anti-rides du principe actif de la présente invention a été évaluée dans une formule cosmétique contenant 5 % de principe actif. On effectue une prise d'empreintes au niveau des pattes d'oie avant et après le traitement biquotidien pendant 28 jours contre placebo. Le test statistique utilisé est le test de Student sur données appariées. 4 / STUDY OF THE ANTI-WRINKLE EFFECT OF THE ACTIVE INGREDIENT
The in vivo quantification on 12 volunteers of the anti-wrinkle efficacy of the active principle of the present invention was evaluated in a cosmetic formula containing 5% of active principle. Footprints are taken before and after the twice-daily treatment for 28 days against placebo. The statistical test used is the Student test on paired data.

Les résultats sont analysés en ce qui concerne les paramètres suivants : surface totale ridée, longueur totale des rides, nombre de rides, profondeur moyenne des rides. Ces résultats figurent dans le tableau de la figure 3. The results are analyzed with regard to the following parameters: total wrinkled surface, total length of wrinkles, number of wrinkles, average depth of wrinkles. These results are shown in the table in Figure 3.

On constate une diminution significative de chacun des paramètres surface totale ridée, longueur des rides et nombre de rides. There is a significant reduction in each of the parameters total wrinkled surface, length of wrinkles and number of wrinkles.

A titre d'exemples non limitatifs, on indique ci-après un produit ou composition cosmétique comprenant le principe actif de la présente invention, seul ou associé à au moins un autre principe actif. By way of nonlimiting examples, the following is a cosmetic product or composition comprising the active principle of the present invention, alone or combined with at least one other active principle.

Exemple 1 : Emulsion de jour anti-rides - Montanov 68 3,0% (cire de glucoside) - Cetiol SB45 1, 0% (beurre de karité) - Tween 80 2,0% (polysorbate 80) - Stearic acid 1, 0% - Emutgin Bt 1, 0% (cétéareth-12) - Lanol 1688 10% (cétéaryl octanoate) - Miglyol 812 2,0% (caprylic/capric triglycéride) - Isohexadecane 3,0% Example 1: Anti-wrinkle daytime emulsion - Montanov 68 3.0% (glucoside wax) - Cetiol SB45 1.0% (shea butter) - Tween 80 2.0% (polysorbate 80) - Stearic acid 1.0 % - Emutgin Bt 1, 0% (ceteareth-12) - Lanol 1688 10% (cetearyl octanoate) - Miglyol 812 2.0% (caprylic / capric triglyceride) - Isohexadecane 3.0%

- IPP 2, 0% (palmitate d'isopropyl) - Sepigel 305 0, 1% (polyacrylamide/isoparaffineC14/laureth7) - Carbopol ETD2020 0, 1% (carbomère) - Butylène glycol 10% - Conservateur 0, 5% - Principe actif 5,0% - Eau qsp 100% 5/ETUDES DES PROPRIETES BIOMECANIQUES DE LA PEAU
Le test est conduit sur 20 volontaires, de sexe féminin et âgées de 31 à 62 ans. Ce test est réalisé avec une émulsion contenant 5% du principe actif contre placebo.

- IPP 2.0% (isopropyl palmitate) - Sepigel 305 0.1% (polyacrylamide / isoparaffinC14 / laureth7) - Carbopol ETD2020 0.1% (carbomer) - Butylene glycol 10% - Preservative 0.5% - Active ingredient 5.0% - Water qs 100% 5 / STUDIES OF BIOMECHANICAL PROPERTIES OF THE SKIN
The test is conducted on 20 volunteers, female and aged 31 to 62. This test is carried out with an emulsion containing 5% of the active principle against placebo.

On mesure la fatigabilité de la peau avant et après un traitement biquotidien. L'analyse statistique utilisée est le test de Student sur données appariées. The fatigability of the skin is measured before and after a twice-daily treatment. The statistical analysis used is the Student test on paired data.

Les résultats sont présentés dans le tableau de la figure 4. The results are presented in the table in FIG. 4.

On constate une diminution significative de la fatigabilité de la peau. There is a significant decrease in the fatigability of the skin.

A titre d'exemple non limitatif, on indique ci-après un produit ou composition cosmétique comprenant comme seul principe actif, celui de la présente invention. By way of nonlimiting example, a cosmetic product or composition is indicated below comprising, as the only active principle, that of the present invention.

Exemple 2 : Lait corporel raffermissant - Montanov 202 3,0% (cire de glucoside) - Ceteth 20 1, 0%

- Sepigel 501 2, 0% (isoparaffineC13 14/isostéaryl/isostéarate/sodium polyacrylate/polyacrylamide/polysorbate 60) - Butylène glycol 5,0% - DC 200 1,0% (diméthicone) - Lanol 1688 3,0% (cetearyl octanoate) - Lanol 99 5,0% (isononyl isononanoate) - Conservateur 1,0% Example 2 Firming Body Milk - Montanov 202 3.0% (Glucoside Wax) - Ceteth 20 1.0%

- Sepigel 501 2.0% (isoparaffin C13 14 / isostearyl / isostearate / sodium polyacrylate / polyacrylamide / polysorbate 60) - Butylene glycol 5.0% - DC 200 1.0% (dimethicone) - Lanol 1688 3.0% (cetearyl octanoate ) - Lanol 99 5.0% (isononyl isononanoate) - Preservative 1.0%

- Principe actif 5,0% - Eau qsp 100%
6/ACTIVITE PHOTOPROTECTRICE DU PRINCIPE ACTIF
Activité anti-radicalaire :
Les tests sont conduits sur des cultures cellulaires de kératinocytes humains afin de déterminer si le principe actif présente une action protectrice vis-à-vis des radiations UVA et UVB. - Active ingredient 5.0% - Water qs 100%
6 / PHOTOPROTECTOR ACTIVITY OF THE ACTIVE INGREDIENT
Anti-radical activity:
The tests are carried out on cell cultures of human keratinocytes in order to determine whether the active principle has a protective action against UVA and UVB radiation.

A cet effet, les cellules sont soumises à une irradiation avec une intensité de 5 à 20 joules/cm2 pour les UV A et de 0,05 à 0,40 joules/cm2 pour les UVB, préférentiellement 9 joules/cm2 pour les UVA et 0,17 joules/cm2 pour les UVB. To this end, the cells are subjected to irradiation with an intensity of 5 to 20 joules / cm2 for UV A and from 0.05 to 0.40 joules / cm2 for UVB, preferably 9 joules / cm2 for UVA and 0.17 joules / cm2 for UVB.

On mesure ensuite la viabilité cellulaire de ces kératinocytes par une mesure de densité optique suite à une coloration au M. T. T, ledit colorant n'étant susceptible d'être absorbé que par les cellules vivantes. The cell viability of these keratinocytes is then measured by an optical density measurement following staining with M. T. T, said dye being capable of being absorbed only by living cells.

Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 5. The results are grouped in the table in Figure 5.

On constate une forte activité anti-radicalaire, bien supérieure à celle obtenue avec le modèle polyphénolique, vis-à-vis des radicaux libres UVA et UVB induits. Cet effet est dose-dépendant. There is a strong anti-radical activity, much higher than that obtained with the polyphenolic model, vis-à-vis the induced free UVA and UVB radicals. This effect is dose dependent.

Activité anti-apoptose :
L'étude est conduite sur des explants de peau et montre l'activité photoprotectrice du principe actif selon l'invention vis-à-vis de l'apparition des cellules épidermiques"coup de soleil"ou dites"sunburn cells". Anti-apoptosis activity:
The study is carried out on skin explants and shows the photoprotective activity of the active principle according to the invention with respect to the appearance of epidermal cells "sunburn" or called "sunburn cells".

Ces cellules présentent des lésions de l'ADN et les caractéristiques des cellules en apoptose, avec notamment un cytoplasme éosinophile. These cells have DNA damage and the characteristics of apoptotic cells, including an eosinophilic cytoplasm.

Après irradiation aux UVB, on assure un comptage des cellules"coup de soleil"au microscope, après coloration des coupes histologiques des explants. After irradiation with UVB, a "sunburn" cell count is ensured under a microscope, after staining of the histological sections of the explants.

On obtient les résultats mentionnés dans le tableau de la figure 6. The results mentioned in the table in FIG. 6 are obtained.

Le principe actif présente une forte activité protectrice et limite fortement l'apparition de cellules"coup de soleil". The active principle has a strong protective activity and strongly limits the appearance of "sunburn" cells.

Activité anti-irritante :
Une telle activité peut être avantageusement mesurée par dosage du taux d'interleukine-1 a libérées dans un milieu de culture de kératinocytes humains soumis à un stress oxydatif provoqué par les rayons UVA + UVB. Anti-irritant activity:
Such activity can be advantageously measured by assaying the level of interleukin-1a released in a culture medium for human keratinocytes subjected to oxidative stress caused by UVA + UVB rays.

Le dosage du taux d'Interleukine-1 a libérées dans le surnageant de culture de kératinocytes soumis à des UVA et UVB est réalisé par la méthode ELISA. Les valeurs sont données en pug/ !. The assay of the level of Interleukin-1a released in the culture supernatant of keratinocytes subjected to UVA and UVB is carried out by the ELISA method. Values are given in pug /!.

La comparaison est de nouveau effectuée avec un mélange modèle polyphénolique. The comparison is again carried out with a polyphenolic model mixture.

Le principe actif selon la présente invention provoque une diminution du taux d'interleukine-1 a. The active principle according to the present invention causes a decrease in the level of interleukin-1 a.

Les résultats sont mentionnés dans le tableau de la figure 7. The results are shown in the table in Figure 7.

Cet effet est également dose-dépendant. This effect is also dose-dependent.

Exemple 3 : Gel de protection solaire - Lanol 99 3,0% (isononyl isononanoate) - Allantoïne 0, 1 % - Carbomer 0,5% - Triethanolamine 3,0% - TEA salicylate 5,0% - Glycerol 5,0% - DMDM hydantoïne 0,3% - Principe actif 3,0% - Conservateur 1,0% - Eau Qsp 100%
Le procédé a permis d'extraire un principe actif particulier et ce principe actif tel qu'il vient d'être caractérisé peut être utilisé pour des traitements cosmétiques pour assurer une protection cellulaire anti-âge. Example 3 Sunscreen Gel - Lanol 99 3.0% (isononyl isononanoate) - Allantoin 0.1% - Carbomer 0.5% - Triethanolamine 3.0% - TEA salicylate 5.0% - Glycerol 5.0% - DMDM hydantoin 0.3% - Active ingredient 3.0% - Preservative 1.0% - Water Qsp 100%
The process has made it possible to extract a particular active principle and this active principle as it has just been characterized can be used for cosmetic treatments to ensure anti-aging cellular protection.

Dans ce cas, on mélange de 0,5% à 10,0% de principe actif dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou In this case, 0.5% to 10.0% of active principle is mixed in a suitable galenical form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or

solution avec des excipients adaptés, éventuellement et on applique cettepréparation sur la peau. solution with suitable excipients, if necessary and this preparation is applied to the skin.

Plus particulièrement, on peut réaliser un traitement cosmétique avec 1, 0 à 3, 0 % de principe actif dans une même forme galénique que précédemment. More particularly, a cosmetic treatment can be carried out with 1.0 to 3.0% of active principle in the same dosage form as above.

On peut ainsi assurer un traitement cosmétique pour stimuler la synthèse des protéines de stress HSP 72 et assurer la protection contre les dommage photo-induits au moyen de ce même principe actif en associant de 0, 5% à 10,0% de principe actif et plus particulièrement de 1 à 3% dans une forme galénique adaptée : crème, gel, onguent, lotion, lait ou émulsion ou solution avec des excipients adaptés, éventuellement et on applique cette préparation sur la'peau. It is thus possible to provide a cosmetic treatment to stimulate the synthesis of HSP 72 stress proteins and to provide protection against photo-induced damage by means of this same active principle by associating from 0.5% to 10.0% of active principle and more particularly from 1 to 3% in a suitable dosage form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution with suitable excipients, optionally and this preparation is applied to the skin.

Claims

1. Method for extracting an active principle rich in polyphenols, of the phenolic acid type, in particular for increasing the production of HSP 72 in the face of stresses generated by heat and / or UVB radiation, characterized in that it comprises the succession of the following stages: - solubilization of Salix, salix alba or salix purpurea or salix viminalis or salix daphnoides or salix fragilis or salix pentandra, in water, - hydrolysis between 20 C and 50 C and at acid pH between 1, 0 and 4.0 in the presence of a protease, - separation of the soluble and insoluble phases by any means or any combination of means, for example: decantation, filtration or centrifugation, and - sterilizing filtration to reach a total mesophilic flora less than 100 germs / g, and an absence of yeasts and molds.

2. Active ingredient obtained by aqueous solubilization of Salix, salix alba or

salix purpura or salix viminalis or salix daphnoides or salix fragilis or salix pentandra, and hydrolyzes in the presence of a protease from this solution, characterized in that it has: - a dry matter content obtained by passing through an oven at 105 ° C. for 16 hours, between 20 and 200 g / l, more particularly between 40 and 1 00 g / l.

- a pH measured by the potentiometric method at room temperature, between 3.0 and 7.0, more particularly between 4.0 and 7.0.

- a rate of total polyphenols, expressed in gallic acid equivalents between 1.0 and 20.0 g / t, more particularly between 1.0 and 10.0 g / t and specifically between 1.0 and 5.0 g / t.

3. Cosmetic treatment to stimulate the synthesis of stress proteins HSP 72 and ensure an anti-aging action by means of the active principle of claim 3, characterized in that it consists in mixing from 0.5% to 10.0% active ingredient in a suitable dosage form: cream, gel, ointment,

lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, - optionally and to apply this preparation on the skin.

4. Cosmetic treatment according to claim 3, characterized in that it consists in mixing 2.0 to 5.0% of active principle in a suitable dosage form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and to apply it to the skin.

5. Cosmetic treatment to ensure cellular protection against photo-induced damage, by means of the active principle of claim 2, characterized in that it consists in mixing from 0.5% to 10% of active principle in a galenical form suitable: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and to apply this preparation on the skin.

6. Cosmetic treatment according to claim 5, characterized in that it consists in mixing 2 to 5% of active principle in a suitable galenical form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and apply this preparation on the skin.

7. Cosmetic treatment to combat cellular aging of the skin by means of the active principle of claim 2, characterized in that it consists in mixing from 0.5% to 10.0% of active principle in a galenical form suitable: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and to apply this preparation on the skin.

8. Cosmetic treatment according to claim 7, characterized in that it consists in mixing 2.0 to 5.0% of active principle in a suitable dosage form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and to apply it to the skin.

9. Cosmetic treatment for reducing wrinkles, by means of the active principle of claim 2, characterized in that it consists in mixing

0.5% to 10.0% of active ingredient in a suitable dosage form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with possibly suitable excipients and to apply this preparation to the skin.

10. Cosmetic treatment according to claim 9, characterized in that it consists in mixing 2 to 5% of active principle in a suitable dosage form: cream, gel, ointment, lotion, milk or emulsion or solution and with suitable excipients, possibly and apply it on the skin.