FR2799935A1

FR2799935A1 - Stimulating natural defenses of plants, especially against fungal or bacterial infections, by application of fungal or bacterial enzymes and/or other peptides

Info

Publication number: FR2799935A1
Application number: FR9913483A
Authority: FR
Inventors: Olivier Besnard; Christelle Martinez; Jean Claude Bacou
Original assignee: MYCOS
Current assignee: MYCOS
Priority date: 1999-10-25
Filing date: 1999-10-25
Publication date: 2001-04-27
Also published as: WO2001030160A1; AU1034701A

Abstract

Stimulating the natural defenses of plants, by production of phytoallexins and peroxidases under the action of elicitors, involves applying (to the foliage or leaves or by injection) at least one protein (I) selected from proteases, lipases, pectinases, beta -1,3-glucanases, xylanases, galactanases, mannanases, chitinases and non-enzyme peptides, produced by fungal or bacterial microorganisms. An Independent claim is included for the use of (I) for stimulating the natural defenses of plants, where (I) is formulated with conventional agricultural supports or carriers of the wetting/penetrating type,

Description

PROCEDE DE STIMULATION DES DEFENSFS NATURELLES DES PLANTS, UTILISATIONS ET COMPOSITIONS CORRESPONDANTES L'invention concerne un procédé de stimulation des défenses naturelles des plantes par la production par celles-ci de phytoalexines et de péroxydases sous l'action d'éliciteurs. The invention relates to a method of stimulating the natural defenses of plants by producing therefrom phytoalexins and peroxidases under the action of elicitors.

L'invention concerne également l'utilisation desdits éliciteurs spéci fiques aux différentes cultures ainsi que les compositions correspondantes. Les recherches de moyens de protection des plantes contre les maladies étaient jusqu'à nos jours plutôt dirigés vers une lutte directe contre les pathogènes par l'utilisation de différents produits phytosani taires, la plante étant considérée comme un support plus qu'un être vivant pouvant se défendre. The invention also relates to the use of said specific elicitors for the different cultures as well as the corresponding compositions. Research into the protection of plants against disease was, until now, rather directed towards direct control of pathogens by the use of different phytosanitary products, the plant being considered as a medium more than a living being to defend oneself.

Malheureusement, l'utilisation de ces produits ne sont pas sans conséquence sur l'environnement et sur l'alimentation à cause des résidus subsistant dans la plante. Unfortunately, the use of these products are not without consequences on the environment and the diet because of residues remaining in the plant.

Aujourd'hui, on s'intéresse davantage aux moyens de déclencher au sein de la plante elle même des réactions de défense efficaces ou celles existant déjà. Today, we are more interested in how to trigger within the plant itself effective defense reactions or those already existing.

La stimulation des défenses naturelles se traduit par le développement d'un ensemble de modifications biologiques qui confèrent à cette plante une résistance immédiate et une présensibilisation grâce à laquelle elle devient capable de réagir plus efficacement à une nouvelle attaque. Cette présensibilisation est désignée par l'expression "résistance systématique acquise". The stimulation of natural defenses results in the development of a set of biological modifications that give this plant immediate resistance and presensitization thanks to which it becomes able to react more effectively to a new attack. This presensitization is referred to as "systematic acquired resistance".

On connait des produits appelés éliciteurs ou sensibilisateurs qui, mis au contact de la plante, sont capables de provoquer préventivement dans celle-ci, la résistance immédiate et la présensibilisation ou résistance systématique acquise dont il vient d'être question. Products known as elicitors or sensitizers are known which, when brought into contact with the plant, are capable of provoking prevention therein, the immediate resistance and the presensitization or acquired systematic resistance of which it has just been mentioned.

On observe une stimulation très rapide de métabolismes secondaires qui conduisent par exemple : - à la production de phytoalexines (Chappel et al., Plant Physiology (1991) 97, 693-698): - à un renforcement de la paroi cellulaire (Glazener, Physiological Plant Pathology (1982) 20,11-25); - à la production de protéines de défense (Kim et al., Physiological Plant Pathology (1994) 45,195-209). There is a very rapid stimulation of secondary metabolisms which lead, for example: - to the production of phytoalexins (Chappel et al., Plant Physiology (1991) 97, 693-698): - to a strengthening of the cell wall (Glazener, Physiological Plant Pathology (1982) 20, 11-25); the production of defense proteins (Kim et al., Physiological Plant Pathology (1994) 45, 195-209).

Une autre possibilité d'induire cette résistance est de modifier le patrimoine génétique de la plante pour qu'elle produise elle même les composés responsables de la mise en place des mécanismes de défense (Schülein et al., brevet FR-9611262). Another possibility of inducing this resistance is to modify the genetic inheritance of the plant so that it itself produces the compounds responsible for the introduction of the defense mechanisms (Schülein et al., Patent FR-9611262).

Cette technologie est assez répandue de nos jours. Elle donne naissance à de nouvelles variétés appelées couramment "organismes génétiquement modifiés" (OGM). Pour l'instant, l'impact sur l'environnement et la sécurité alimentaire de ces OGM sont méconnus. This technology is quite common nowadays. It gives birth to new varieties commonly called "genetically modified organisms" (GMOs). For the moment, the impact on the environment and the food security of these GMOs are unknown.

Dans le souci d'abaisser les coûts de production agricole par la diminution de l'usage de produits phytosanitaires, le déposant s'est donné comme programme de recherche la découverte et la mise en exploi tation de nouveaux éliciteurs. In order to reduce the costs of agricultural production by reducing the use of plant protection products, the applicant has set himself the search program for the discovery and exploitation of new elicitors.

I1 ressort de nombreuses recherches bibliographiques effectuées, que différents composés sont décrits comme éliciteurs. Ils sont d'origines chimiques, biochimiques, fongiques ou enzymatiques. Numerous bibliographic researches have shown that various compounds are described as elicitors. They are of chemical, biochemical, fungal or enzymatic origin.

Les éliciteurs chimiques De nombreux produits sont connus comme éliciteurs. En effet, outre les ions mercuriques, l'acide arachidonique, l'acide phosphoreux sont aussi connus comme stimulateurs des mécanismes naturels de défense des végétaux sensibles aux phycomycètes. Chemical Elicitors Many products are known as elicitors. In fact, besides the mercuric ions, arachidonic acid, phosphorous acid are also known as stimulators of the natural mechanisms of defense of plants sensitive to phycomycetes.

Le cuivre sous la forme d'hydroxyde ou de sulfate des bouillies borde laises déclenche des réactions de défense de la vigne. De même le chlorure d'aluminium (AlC1,) déclenche la synthèse du resveratrol dans la vigne. The copper in the form of hydroxide or sulphate of the bordered bouquets triggers defensive reactions of the vine. Similarly aluminum chloride (AlC1) triggers the synthesis of resveratrol in the vineyard.

De nombreux dérivés de l'acide salicylique ont été testés pour leur potentialité d'éliciteurs, les acides oxi-fulviques sont commercialisés comme éliciteurs sachant que les acides fulviques et humiques sont des macromolécules constituées de motifs monomères carboxy-phénoliques rappelant l'acide salicylique. Des tests en laboratoire ont été effectués sur des jeunes plants de melon et les résultats sont satisfaisants. Many salicylic acid derivatives have been tested for their potential elicitors, oxi-fulvic acids are marketed as elicitors knowing that fulvic and humic acids are macromolecules consisting of carboxy-phenolic monomer units reminiscent of salicylic acid. Laboratory tests were conducted on young melon seedlings and the results are satisfactory.

Les éliciteurs biochimiques Des composés naturels tels que les oligosaccharides sont connus pour leur activité d'éliciteurs. En effet, le chitosan (dérivé de la chitine) polymère de 1,4-B-D-glycosamine est employé pour accroître la résistance de plantes au stress environne- mental et aux agents pathogènes. Biochemical Elicitors Natural compounds such as oligosaccharides are known for their eliciting activity. Indeed, the chitosan (chitin derivative) polymer of 1,4-B-D-glycosamine is used to increase the resistance of plants to environmental stress and pathogens.

L'utilisation de fragments de polysaccharides de tout genre comme stimu lateurs de mécanisme de défense des plantes a ainsi fait l'objet de nombreuses expérimentations. The use of polysaccharide fragments of all kinds as stimulators of plant defense mechanisms has thus been the subject of numerous experiments.

Les éliciteurs fongiques Le brevet Fiedler et al., W0-8906687 est une référence incontournable pour ces genres d'éliciteurs. Dans celui-ci, les auteurs revendiquent le procédé d'accroître les activités enzymatiques responsables de la synthèse de colorants, alcaloides ou phytoalexines lorsque l'on met des micro-organismes et les bactéries inactivées, leurs fragments ou leurs excrétions contenant des éliciteurs en contact avec des cultures cellu laires de plantes. Fungal electors The Fiedler et al., WO-8906687 patent is an essential reference for these kinds of elicitors. In it, the authors claim the process of increasing the enzymatic activities responsible for the synthesis of dyes, alkaloids or phytoalexins when micro-organisms and inactivated bacteria, their fragments or their excretions containing elicitors in contact are put in contact with each other. with cellu lar cultures of plants.

Une liste exhaustive de micro-organismes et de bactéries y est donnée; beaucoup n'y figurent pas y compris le trichoderma. An exhaustive list of microorganisms and bacteria is given; many are not included including trichoderma.

De plus ils revendiquent la mise en contact de fragments de micro organismes ou bactéries avec des cultures cellulaires alors que le programme de recherche du déposant s'est orienté vers une composition pour application foliaire ou racinaire sur une plante entière. In addition, they claim that fragments of microorganisms or bacteria are brought into contact with cell cultures while the applicant's research program is oriented towards a composition for foliar or root application on an entire plant.

Les éliciteurs enzymatiques Par rapport aux composés chimiques, très peu d'enzymes sont utilisées comme éliciteurs. Les premiers travaux décrivent la synthèse de phyto- alexines, notamment du capsidiol par les cellules de plants de tabac lorsque l'on ajoute de la cellulase produite par du Trichoderma viride dans le milieu de culture. Enzymatic electors Compared to chemical compounds, very few enzymes are used as elicitors. The first works describe the synthesis of phyto-alexines, in particular capsidiol by tobacco plant cells, when cellulase produced by Trichoderma viride is added to the culture medium.

D'autres travaux ont confirmé cette découverte sur des cellules de pomme de terre ou de poivre. Other works have confirmed this discovery on potato or pepper cells.

Par ailleurs, sur des cellules de vigne on observe la synthèse d'autres types de phytoalexines et notamment du resveratrol. In addition, on vine cells, the synthesis of other types of phytoalexins, and in particular resveratrol, is observed.

Des découvertes similaires ont été faites lorsque l'on utilise de la xylanase produite par le Trichoderma viride. Similar findings have been made when xylanase produced by Trichoderma viride is used.

Tous les travaux en question ont été effectués in vitro, sur des suspensions de cellules de plantes. I1 n'a jamais été question d'appli cation ou de pulvérisation directe d'une composition à base de cellulase ou de toute autre enzyme de la classe des hydrolases sur des plantes pour déclencher des réactions de défense de la plante. All the work in question was carried out in vitro on plant cell suspensions. There has never been any question of application or direct spraying of a cellulase or any other hydrolase enzyme on plants to trigger plant defense reactions.

Seules, des applications à base de compositions fongicides contenant des produits phytosanitaires connus en combinaison avec des enzymes chitinolytiques et glucanolytiques En effet, la présence de ces enzymes dans la composition augmente l'activité de ces fongicides car les chitanases sont connues pour dégrader la paroi des champignons constituée de chitine (polymère de N-acétyl- 1,4-B-D-glycosamine) et les glucanases quant à elles, sont capables d'hydrolyser des polymères de 1,3(4)-B-glucanes, constituants essentiels de la paroi de certains champignons. Elles agissent en synergie avec les chitinases pour dégrader les cellules des agents pathogènes et permettre aux fongicides d'agir plus efficacement. Only applications based on fungicidal compositions containing known phytosanitary products in combination with chitinolytic and glucanolytic enzymes Indeed, the presence of these enzymes in the composition increases the activity of these fungicides because chitanases are known to degrade the wall of the fungicides. fungi consisting of chitin (polymer of N-acetyl-1,4-BD-glycosamine) and glucanases are able to hydrolyze polymers of 1,3 (4) -B-glucans, essential constituents of the wall some mushrooms. They act synergistically with chitinases to degrade pathogen cells and allow fungicides to act more efficiently.

Dans ces applications, i1 n'est pas également question de stimulation des mécanismes naturels de défense des végétaux mais plutôt d'accroître l'efficacité de produits phytosanitaires déjà existants. In these applications, it is not also a question of stimulating the natural mechanisms of plant defense but rather of increasing the efficacy of existing plant protection products.

A titre d'exemple, la production de cellulases et autres enzymes par le Trichoderma harzianum déposé par le déposant (PRE1 Institut Pasteur) peut se faire sur culture sur support solide ou en milieu liquide. By way of example, the production of cellulases and other enzymes by Trichoderma harzianum deposited by the applicant (PRE1 Institut Pasteur) can be done on a solid support medium or in a liquid medium.

Exemple n 1 : Production d'enzymes en milieu solide La souche de trichoderma harzianum A1, obtenue par sélection, est cultivée de façon industrielle, selon la technique de fermentation en milieu solide sur de la pulpe de betterave (source carbonnée). Example n 1 : Production of enzymes in solid medium The trichoderma harzianum A1 strain, obtained by selection, is cultivated industrially, according to the technique of fermentation in solid medium on beet pulp ( carbon source).

En effet, le trichoderma harzianum Al cultivé en boite de Pétri sur milieu potato-dextrose-agar (PDA) est inoculé à une concentration de 2.107 spores/g (de substrat sec) dans le milieu nutritif suivant : (NH4)2S04 : 4,85 g; urée : 1,20g; KH2P04 : 2,50g; pulpes de betterave : 80g et eau 100 ml. Le milieu de culture de départ est à pH 4,5. Indeed, trichoderma harzianum Al grown in petri dishes on potato-dextrose-agar medium (PDA) is inoculated at a concentration of 2.10 7 spores / g (dry substrate) in the following nutrient medium (NH4) 2SO4: 4.85 g; urea: 1.20g; KH 2 PO 4: 2.50 g; beet pulp: 80g and water 100ml. The starting culture medium is at pH 4.5.

Après 3 jours d'incubation à la température de 28 C, le milieu contenant le mycélium du champignon et les substrats solides, est traité à la presse hydraulique (1 mn à 230 bars). Nous obtenons ainsi deux fractions - la fraction soluble (le jus) contenant les protéines solubles et les sels minéraux; - la fraction insoluble composée essentiellement de substrat non utilisé et du mycélium. After incubation for 3 days at a temperature of 28 ° C., the medium containing the mycelium of the fungus and the solid substrates is treated with a hydraulic press (1 min at 230 bar). We thus obtain two fractions - the soluble fraction (the juice) containing the soluble proteins and the mineral salts; the insoluble fraction composed essentially of unused substrate and mycelium.

La fraction soluble est centrifugée à 15000 RPM pendant 30 mn, à la température ambiante pour éliminer les particules solides. La phase liquide recueillie, est ensuite soumise à une microfiltration tangentielle sur une membrane de coupure à 30 kDa. Le mélange d'enzymes retenues sur la membrane est lyophilisé. The soluble fraction is centrifuged at 15,000 RPM for 30 minutes at room temperature to remove solid particles. The collected liquid phase is then subjected to tangential microfiltration on a 30 kDa cutoff membrane. The enzyme mixture retained on the membrane is lyophilized.

Des dosages d'activités enzymatiques sont faits sur la fraction liquide issue de la centrifugation, les résultats suivants sont obtenus - Une activité cellulasique de 0,95 U par ml de solution a été trouvée. L'unité d'activité cellulasique est définie comme la quantité pouvant libérer un micromole de glucose de la cellulose en une heure à pH 5,0 et à la température de 37 C. Assays of enzymatic activities are made on the liquid fraction resulting from the centrifugation, the following results are obtained. A cellulase activity of 0.95 U per ml of solution was found. The unit of cellulase activity is defined as the amount that can release one micromole of glucose from the cellulose in one hour at pH 5.0 and at 37 C.

- Une activité chitinasique de 0,017 U par ml de solution a été trouvée. L'unité d'activité chitinasique est définie comme la quantité pouvant libérer un mg de N-acetyl-D-glucosamine de cm-chitin-rbv pendant 48 heures à pH 6,0 et à la température de 25 C. - A chitinase activity of 0.017 U per ml of solution was found. The unit of chitinasic activity is defined as the amount that can release one mg of N-acetyl-D-glucosamine from cm-chitin-rbv for 48 hours at pH 6.0 and at 25 C.

- Une activité protéasique de 1,79 U par ml de solution a été trouvée. L'unité d'activité protéasique est définie comme étant la quantité pouvant hydrolyser de la caséine pour générer un micromole de tyrosine par mm à pH 7,5 et à la température de 37 C. A protease activity of 1.79 U per ml of solution was found. The unit of protease activity is defined as the amount able to hydrolyze casein to generate one micromole of tyrosine per mm at pH 7.5 and at 37 C.

- Une activité de 1,5 U de B-1,3-glucanase par ml de solution a été trouvée. L'unité d'activité enzymatique est définie comme la quantité pouvant libérer un micromole de glucose par mm à partir de la laminarine 0,1% (W/w) à pH 6,7 et à la température de 30 C. - A 1.5 U activity of B-1,3-glucanase per ml of solution was found. The unit of enzymatic activity is defined as the amount that can release one micromole of glucose per mm from laminarin 0.1% (w / w) at pH 6.7 and at 30 C.

Exemple n 2 : Production d'enzymes en milieu liquide Le Trichoderma harzianum A1 cultivé en boite de Pétri sur milieu PDA, est inoculé à une concentration de 107 spores par litre dans le milieu synthétique suivant . (NH4)2S04 1,00 g; urée 0,30g; Na2HP04 0,12g; MgS04 0,30g; CaC12 0,30g; sucrose 2,00g; solution d'oligo-éléments et de vitamines : 2 ml; eau distillée : 1000 ml. Le milieu de départ, à pH 5,6, est mis sous agitation à 200 rpm pendant 66 h à la température de 28 C. Example # 2 : Production of Enzymes in a Liquid Medium Trichoderma harzianum A1 grown in Petri dishes on PDA medium is inoculated at a concentration of 107 spores per liter in the following synthetic medium. (NH4) 2SO4 1.00 g; urea 0.30g; Na2HPO4 0.12g; MgSO4 0.30g; CaCl2 0.30g; sucrose 2.00g; solution of trace elements and vitamins: 2 ml; distilled water: 1000 ml. The starting medium, at pH 5.6, is stirred at 200 rpm for 66 hours at a temperature of 28 ° C.

Après centrifugation à 15000 RPM pendant 30 mn, à la température ambiante pour éliminer les particules solides (mycélium...) la phase liquide recueillie est ensuite soumise à une microfiltration tangentielle sur une membrane de coupure à 30 kDa. Le mélange d'enzymes retenues sur la menbrane est lyophilisé. After centrifugation at 15000 RPM for 30 minutes, at room temperature to remove solid particles (mycelium ...), the collected liquid phase is then subjected to tangential microfiltration on a 30 kDa cutoff membrane. The enzyme mixture retained on the menbrane is lyophilized.

Des dosages d'activités cellulasiques, chitinasiques, protéasiques et de B-1,3-glucanasiques ont été réalisés et les résultats suivants sont obtenus : cellulase (5,64 U/ml), chitinase (0,2 U:ml), protéase (2 U/ml), B-1,3-glucanase (2,3 U/ml). Assays of cellulase, chitinase, protease and B-1,3-glucanase activities were performed and the following results were obtained: cellulase (5.64 U / ml), chitinase (0.2 U: ml), protease (2 U / ml), B-1,3-glucanase (2.3 U / ml).

Exemple n 3 Pour mettre en évidence les propriétés élicitrices des cellulases et des protéases, quelle que soit leur origine, sur les plantes, diverses expériences ont été réalisées sur différentes espèces végétales afin de mesurer l'induction de la résistance contre les agents pathogènes (melon, vigne, tomate, concombre...). Example n 3 In order to demonstrate the elicitrices properties of cellulases and proteases, whatever their origin, on plants, various experiments were carried out on different plant species in order to measure the induction of resistance against pathogens (melon, vine, tomato, cucumber ...).

Compte tenu de l'importance des peroxydase et des chinitases (enzymes endogènes aux plantes) dans la résistance des plantes (protéines liées à la pathogénèse), nous avons utilisé ces activités comme marqueur de la résistance. Given the importance of peroxidase and chinitases (endogenous enzymes to plants) in plant resistance (pathogenesis-related proteins), we used these activities as a marker of resistance.

L'infiltration d'une solution de cellulase (à 5 U/ml) dans les feuilles des jeunes plants de melon agés de 15 jours, provoque l'augmentation de l'activité peroxydasique 5 fois supérieure à celle détectée dans les plans témoins infiltrés avec l'eau. Afin de doser les activités peroxy- dasiques, les feuilles sont broyées en milieu tampon tris-maléate pH 6. L'extrait est ensuite mis en présence de gaacol et de l'eau oxygénée et une réaction rapide se fait : le gaacol est transformé en tétra- gaïacol.L'apparition du tétragafacol dans le milieu, nous permet de calculer l'activité péroxydasique. The infiltration of a cellulase solution (at 5 U / ml) into the leaves of young 15-day-old melon plants causes an increase in peroxidase activity 5-fold greater than that detected in the control diets infiltrated with the water. In order to determine the peroxidase activities, the leaves are crushed in buffer medium tris-maleate pH 6. The extract is then placed in the presence of gaacol and hydrogen peroxide and a rapid reaction is made: the gaacol is transformed into tetra-guaiacol. The appearance of tetragafacol in the medium allows us to calculate the peroxidase activity.

Les dosages sont effectués dans ce même tampon en utilisant le gaacol comme substrat. Les résultats sont exprimés en QDO/mn/gMF. Assays are performed in this same buffer using gaacol as substrate. The results are expressed in QDO / min / gMF.

La pulvérisation sur les feuilles de cellulase associée à des mouillants provoque une augmentation d'activité peroxydasique et chitinasique 4 fois supérieure aux plants traités sans cellulase. The wetting on cellulase sheets associated with wetting agents causes an increase in peroxidase and chitinase activity 4 times higher than plants treated without cellulase.

Exemple n 4 Des résultats similaires sont obtenus à grande échelle sur plants développant le fruit en serre. Example No. 4 Similar results are obtained on a large scale on plants developing the fruit in a greenhouse.

Suite à une infiltration ou pulvérisation de cellulase, les plants de melons sont inoculés parle fusarium oxysporum fsp melonis. Parallèlement, les feuilles d'un lot de plantule ont été infiltrées ou pulvérisées avec de l'eau. Dix jours après l'inoculation, les symptômes apparaissent uniquement chez les plants inoculés traités avec de l'eau. Trois semaines après l'infection, les jeunes plants infectés se dessèchent et meurent. Les plants inoculés et traités avec la cellulase ne présentent pas de symptômes avant 6 semaines et continuent ensuite à se développer norma lement. Following infiltration or pulverization of cellulase, the melon plants are inoculated with fusarium oxysporum fsp melonis. At the same time, the leaves of a seedling lot were infiltrated or sprayed with water. Ten days after inoculation, symptoms occur only in inoculated plants treated with water. Three weeks after infection, infected seedlings dry out and die. Plants inoculated and treated with cellulase do not show symptoms for 6 weeks and then continue to grow normally.

Ces résultats expriment clairement le pouvoir d'éliciteur de la cellulase sur la résistance des plants de melon vis à vis du fusarium sp. These results clearly express the eluting power of cellulase on the resistance of melon plants to fusarium sp.

Exemple n 5 En infiltrant ou pulvérisant de la cellulase sur les plants de melon, on observe un effet similaire de protection par rapport à l'oiodium. En effet, 5 jours après l'inoculation par Podium, les symptômes apparaissent sur les plants traités préalablement avec de l'eau, et jaunissent peu à peu. Les plants traités avec la cellulase ne présentent que peu ou pas de symptômes et continuent de se développer normalement 3 semaines après l'inoculation. Example # 5 By infiltrating or spraying cellulase on melon plants, a similar protective effect is observed with respect to the oiodium. Indeed, 5 days after inoculation with Podium, the symptoms appear on the previously treated plants with water, and turn yellow little by little. Plants treated with cellulase show little or no symptoms and continue to develop normally 3 weeks after inoculation.

Exemple n 6 L'infiltration et la pulvérisation de la cellulase sur les feuilles de vigne provoque également une forte augmentation d'activité peroxydasique. Le procédé selon l'invention se caractérise en ce qu'il comprend l'application foliaire, racinaire ou par injection d'au moins une protéine du type enzymatique appartenant aux cellulases, au B-1,3-glucanases, aux xylanases, aux galactanases, aux mannanases, aux chitinases ou du type peptide non enzymatique et en ce que l'une ou l'autre est produite à partir de tout micro-organisme fongique ou bactérien. Example # 6 Infiltration and spraying of cellulase on grape leaves also causes a sharp increase in peroxidase activity. The method according to the invention is characterized in that it comprises the foliar, root or foliar application of at least one protein of the enzymatic type belonging to cellulases, to B-1,3-glucanases, to xylanases, to galactanases. , mannanases, chitinases or nonenzymatic peptide type and in that one or the other is produced from any fungal or bacterial microorganism.

La substance active du type peptide non enzymatique comprend des peptides dont le nombre d'acides animés est au moins égal à 2. The active substance of the non-enzymatic peptide type comprises peptides whose number of active acids is at least equal to 2.

Les protéines enzymatiques et peptides non enzymatiques sont obtenues à partir de tout type de champignon et plus particulièrement de champi gnons filamenteux choisis parmi les Trichoderma, les Penicillium et les Aspergilus. The enzymatic proteins and non-enzymatic peptides are obtained from any type of fungus and more particularly from filamentous fungi selected from Trichoderma, Penicillium and Aspergilus.

Les protéines en question sont utilisées incorporées à un support ou véhicule autorisé en agriculture des types mouillant et pénétrant. The proteins in question are used incorporated in a support or vehicle authorized in agriculture of wetting and penetrating types.

La composition précitée peut se présenter sous la forme liquide, notamment sous forme de solution aqueuse. The abovementioned composition may be in the liquid form, especially in the form of an aqueous solution.

Elle peut se présenter également sous la forme solide, notamment de poudres ou de granulés ou en enrobage de semences. It can also be in the solid form, especially powders or granules or seed coating.

Les protéines en question ont pour effet de réduire considérablement, lorsqu'elles sont appliquées - à la vigne, l'attaque de l'oidium, du mildiou, du Botrytis, des maladies du bois, des maladies telluriques; - aux arbres fruitiers, notamment le poirier et le pommier, l'attaque des odiums, des tavelures, les monilioses, les maladies bactériennes; - aux céréales, notamment le blé, le maïs et le riz, l'attaque des odiums, des septorioses, des rouilles, des fusarioses,des pyricula- rioses et des maladies bactériennes; - aux oléagineux, notamment le soja, le tournesol et le colza, l'attaque des odiums, du Phoma, des maladies bactériennes; - aux plantes légumières, notamment les tomates, les melons, les carottes, le chou-fleur et les pommes de terre, l'attaque des odiums, des mildious, des pythiacées (P hytophtora, Pythium), des champignons à sclérotes (Rhizoctonia, Sclerotinia, Pyrenochaeta, des champignons vasculaires (Fusarium, Verticillium), les maladies bactériennes; - aux gazons et en horticulture, les attaques des pythiacés, champignons à sclérotes, fusarioses, oidiums, maladies bactériennes.The proteins in question have the effect of considerably reducing, when applied to the vine, the attack of oidium, mildew, Botrytis, wood diseases, telluric diseases; - fruit trees, especially the pear and apple, the attack of odiums, scab, monilia, bacterial diseases; - cereals, especially wheat, maize and rice, the attack of odium, septoria, rust, fusariosis, pyruvicosis and bacterial diseases; - oilseeds, especially soybean, sunflower and rapeseed, the attack of odiums, Phoma, bacterial diseases; - vegetable plants, including tomatoes, melons, carrots, cauliflower and potatoes, attack of odiums, mildews, pythiaceae (P hytophtora, Pythium), mushrooms with sclerotia (Rhizoctonia, Sclerotinia, Pyrenochaeta, vascular fungi (Fusarium, Verticillium), bacterial diseases, - turfgrass and horticulture, attacks of pythiaceae, sclerotia fungi, fusariosis, oidiums, bacterial diseases.

La composition selon l'invention se caractérise donc en ce qu'elle comporte - au moins une protéine du type enzymatique appartenant à la classe des hydrolases; - et/ou au moins une protéine du type peptide non enzymatique. The composition according to the invention is therefore characterized in that it comprises - at least one protein of the enzymatic type belonging to the class of hydrolases; and / or at least one non-enzymatic peptide type protein.

Claims

CLAIMS 1- A method of stimulating the natural defenses of plants by the production by them of phytoalexins and of peroxidases under the action of elicitors; characterized in that it comprises foliar, root application or by injecting said plants with at least one enzymatic protein belonging to cellulases, B-1,3-glucanases, xylanases, galactanases, mannanases, to chitinases or nonenzymatic peptide type and that one or the other is produced from any fungal or bacterial microorganism. 2. Process according to claim 1, characterized in that the active substance of the non-enzymatic peptide type comprises peptides whose number of active acids is at least 2. 3- Process according to claim 1 or claim 2 , characterized in that the enzymatic proteins and the non-enzymatic peptides are obtained from any type of fungus and more particularly filamentous fungi chosen from Trichoderma, Penicillium and Aspergilus. 4- Use of a protein as defined in any one of the preceding claims, characterized in that it is incorporated in a support or vehicle authorized in agriculture wetting and penetrating types. 5- Use of a protein according to claim 4, characterized in that the aforementioned composition is in the liquid form, especially in the form of aqueous solution. Use of a protein according to claim 4, characterized in that the aforementioned composition is in the solid form, in particular powders or granules or in seed coating. 7- The use of a protein as defined in any one of the preceding claims, characterized in that it has the effect of considerably reducing, when applied to the vine, the attack of Podium, mildew, Botrytis, wood diseases, telluric diseases; - fruit trees, especially the pear and apple, the attack of odiums, scab, monilia, bacterial diseases; - cereals, especially wheat, maize and rice, the attack of odium, septoria, rust, fusariosis, pyruvicosis and bacterial diseases; - oilseeds, especially soybean, sunflower and rapeseed, the attack of odiums, Phoma, bacterial diseases; - vegetable plants, including tomatoes, melons, carrots, cauliflower and potatoes, attack of odiums, mildew, pythiaceae (P hytophtora, Pythium), mushrooms with sclerotia (R hizoctonia) , Sclerotinia, Pyrenochaeta, vascular fungi (Fusarium, Verticillium), bacterial diseases, - turfgrass and horticulture, attacks of pythiids, sclerotia fungi, fusariosis, oidiums, bacterial diseases 8- Composition for the implementation of Process according to any one of Claims 1 to 3 and for the uses according to any one of Claims 4 to 7, characterized in that it comprises at least one protein of the enzymatic type belonging to the class of hydrolases. for carrying out the method according to any one of claims 1 to 3 and for uses according to any one of claims 4 to 7, characterized in that it comprises at least one non-enzymatic peptide type protein.