FR2757060A1

FR2757060A1 - Product for acceleration of the scarring of skin wounds

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Publication number: FR2757060A1
Application number: FR9615919A
Authority: FR
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1996-12-18
Filing date: 1996-12-18
Publication date: 1998-06-19
Anticipated expiration: 2016-12-18
Also published as: FR2757060B1

Abstract

Product (I) to accelerate the scarring of skin wounds comprises sterilised sea water diluted in a solvent (II) to give an osmolarity of 350-400 mosmols/l. (I) is prepared by taking sea water, sterilising it and treating it to obtain an osmolarity of 350-400 mosmol/l.

Description

La présente invention concerne un produit destiné à accélérer la cicatrisation de plaies de l'épiderme une composition cosmétique contenant ledit produit. un procédé d'élaboration dudit produit et son utilisation. The present invention relates to a product for accelerating the healing of wounds of the epidermis a cosmetic composition containing said product. a method of producing said product and its use.

On sait décrire d'une manière relativement satisfaisante les mécanismes de cicatrisation qui interviennent chez l'homme. On a par exemple noté que la surface d'une plaie humaine évolue généralement suivant les étapes suivantes, entre l'apparition de ladite plaic et son comblement naturel. It is known to describe in a relatively satisfactory manner the healing mechanisms that occur in humans. For example, it has been noted that the surface of a human wound generally evolves according to the following steps, between the appearance of said plague and its natural filling.

La première étape n'est observée que pour une plaie présentant à l'origine une surface minimale Il s'agit d'une dilatation de la plaie qui est connue sous le nom de dilatation post-traumatique. The first step is only observed for a wound with a minimal surface area at the outset. It is a dilatation of the wound that is known as post-traumatic dilatation.

La seconde etape s'étend sur une durée de deux à trois jours en moyenne. II s'agit d'une contraction de la plaie, au terme de laquelle la surface de ladite plaie est réduite de 20 à 30 % Cette seconde étape est connue sous le nom de contraction initiale. The second stage lasts for an average of two to three days. It is a contraction of the wound, at the end of which the surface of said wound is reduced by 20 to 30%. This second stage is known as the initial contraction.

La troisième étape consiste en une contraction ralentie de la plaie qui s'étend sur une durée de deux à quatre jours. The third step is a slow contraction of the wound that lasts for two to four days.

La quatrième et dernière étape consiste en une contraction régulière de la plaie, au terme de laquellc sa surface est en moyenne égale à 35 % de sa surface initiale. Cette dernière étape est connue sous le nom de contraction terminale. The fourth and final stage consists of a regular contraction of the wound, after which its surface is on average equal to 35% of its initial surface. This last step is known as terminal contraction.

Ces deux dernières étapes de contraction constituent le phénomène essentiel de la cicatrisation physiologique. Elles sont notamment activées par les macrophages tissulaires, les monocytes sanguins et les cellules épithéliales du milieu cellulaire, et elles permettent ainsi la r estmcturation des tissus épidermiques. These last two contraction stages constitute the essential phenomenon of physiological healing. In particular, they are activated by tissue macrophages, blood monocytes and epithelial cells of the cell medium, and they thus allow the ruturation of the epidermal tissues.

Depuis une quinzaine d'années, la recherche scientifique a largement utilisé un modèle pennettant d'évaluer 1el vilro I'effet de produits censés accélérer ces mécanismes de contraction intervenant dans la cicatrisation. Ce modèle est généralement connu sous le nom de modèle de la lattice ou matrice de collagène. Over the last fifteen years, scientific research has widely used a model to evaluate the effects of products intended to accelerate these contraction mechanisms involved in wound healing. This model is generally known as the lattice model or collagen matrix.

Ledit modèle est obtenu en mélangeant dans des proportions adéquates des fibroblastes à une solution de collagène, de manière à former un gel. Les fibroblastes interagissent avec la matrice de collagène en émettant de longs prolongements cytoplasmi(lues. Ces derniers provoquent une compartimentation de ladite matrice qui aboutit à la formation de faisceaux orientés de collagène. Il en résulte une contraction naturelle du gel après quelques jours. Said model is obtained by mixing in suitable proportions fibroblasts to a collagen solution, so as to form a gel. Fibroblasts interact with the collagen matrix by emitting long cytoplasmic prolongations (read), which cause a compartmentalization of the matrix that results in the formation of oriented collagen bundles, resulting in a natural contraction of the gel after a few days.

L'expérience a montré que ce gel contracté présente l'aspect macroscopique et la consistance de l'épiderme
A l'heure actuelle, divers produits de synthèse destinés à accélérer la contraction de ladite matrice de collagène sont présents sur le marché.Experience has shown that this contracted gel has the macroscopic appearance and the consistency of the epidermis
At present, various synthetic products intended to accelerate the contraction of said collagen matrix are present on the market.

Un inconvénient majeur de ces produits de synthèse réside dans leur prix de revient élevé. A major disadvantage of these synthetic products lies in their high cost.

Le but de la présente invention est de proposer un produit destiné à accélérer la cicatrisation de plaies de l'épiderme, qui soit élaboré à partir de constituants largement répandus dans la nature et qui remédie par conséquent à l'inconvénient précité. The object of the present invention is to provide a product for accelerating the healing of wounds of the epidermis, which is developed from constituents widely used in nature and which therefore remedies the aforementioned drawback.

A cet effet, le produit selon l'invention comprend de l'eau de mer stérilisée et diluée dans un solvant, de telle manière que l'osmolarité dudit produit soit au moins voisine de 350 mosmll et au plus voisine de 400 mosm/l. For this purpose, the product according to the invention comprises sterilized seawater and diluted in a solvent, such that the osmolarity of said product is at least about 350 mosmll and at most 400 mosm / l.

De préférence, losmolarité dudit produit est voisine de 350 mosm/l. Preferably, the molarity of said product is close to 350 mosm / l.

Avantageusement, ledit solvant est constitué d'eau pure déminéralisée. Advantageously, said solvent consists of pure demineralized water.

La composition cosmétique selon l'invention est telle qu'elle comprend ledit produit. The cosmetic composition according to the invention is such that it comprises said product.

Le procédé d'élaboration d'un produit destiné à accélérer la cicatrisation de plaies de l'épiderme selion l'invention est tel qu'il consiste essentiellement à utiliser de l'eau de mer, à la soumettre à un traitement de stérilisation et à traiter l'eau de mer stérilisée de manière que l'osmolarité du produit obtenu suite à ce traitement soit au moins voisine de 350 mosm/l et au plus voisine de 400 mosm/l. The process for producing a product for accelerating the healing of wounds of the epidermis according to the invention is such that it consists essentially of using sea water, subjecting it to a sterilization treatment and treat the sterilized seawater so that the osmolarity of the product obtained following this treatment is at least close to 350 mosm / l and at most close to 400 mosm / l.

De préférence, ledit procédé d'élaboration est tel que l'osmolarité du produit obtenu suite audit traitement est proche de 350 mosmll. Preferably, said production method is such that the osmolarity of the product obtained following said treatment is close to 350 mosmll.

De préférence, I'utilisation dudit produit selon l'invention consiste à le pulvériser sur la peau. Preferably, the use of said product according to the invention consists in spraying it on the skin.

Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres. apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation, ladite description étant faite en relation avec le dessin joint, dans lequel
la Fig unique est un graphique illustrant l'action sur les lattices de collagène de trois produits, dont deux seulement sont selon l'invention
Le produit selon l'invention est constitué d'eau de mer stérilisée et traitée de telle manière que son osmolarité soit au moins voisine de 350 mosll et au plus voisine de 400 mosrn"l
Dans la suite de la présente description, on entendra par osmolarité d'une solution la grandeur qui est classiquement définie comme étant égale à la molarité du nombre total de particules dissoutes dans ladite solution. Plus précisément. l'osmolarité d'une solution est égale à la somme des molarités des molécules neutres et ioniques à l'état dissout dans ladite solution.The features of the invention mentioned above, as well as others. will appear more clearly on reading the following description of an exemplary embodiment, said description being made in relation to the attached drawing, in which
FIG. 1 is a graph illustrating the action on collagen lattices of three products, only two of which are according to the invention
The product according to the invention consists of sterilized seawater and treated in such a way that its osmolarity is at least close to 350 mils and at most 400 mils.
In the remainder of the present description, the osmolarity of a solution will be understood to mean the quantity which is conventionally defined as being equal to the molarity of the total number of particles dissolved in said solution. More precisely. the osmolarity of a solution is equal to the sum of the molarities of the neutral and ionic molecules dissolved in said solution.

Si l'on appelle: m (mol/l) la molarité de ladite solution,
o son coefficient de dissociation,
et p le nombre d'ions que forme une molécule à l'état dissocié constituant ladite solution, I'on a:
osmolarité (mol/l ou osm/l) = m (1-α)+ map
=m[l +o(p-l)]. If we call: m (mol / l) the molarity of said solution,
o its dissociation coefficient,
and p the number of ions which form a molecule in the dissociated state constituting said solution, one has:
osmolarity (mol / l or osm / l) = m (1- α) + map
= m [l + o (pl)].

Selon un exemple préférentiel de réalisation, on stérilise l'eau de mer par filtration à 0,22 m, de telle sorte qu'elle ne contienne plus aucune bactérie, levure ou moisissure. De plus, ledit traitement postérieur à la stérilisation consiste de préférence en une dilution de l'eau de mer filtrée et stérilisée au moyen d'un solvant constitué d'eau distillée déminéralisée, par exemple. According to a preferred embodiment, the seawater is sterilized by filtration at 0.22 m, so that it no longer contains any bacteria, yeast or mold. In addition, said post-sterilization treatment preferably consists of a dilution of the filtered and sterilized seawater by means of a solvent consisting of distilled demineralized water, for example.

Afin de mettre en évidence l'action du produit selon l'invention sur la lattice de collagène de l'épiderme, on a procédé à des expériences i)? vîllo dont on trouvera ci-dessous le compte-rendu détaillé. In order to demonstrate the action of the product according to the invention on the lattice of collagen of the epidermis, experiments have been carried out i)? The following is the detailed report.

Pour ces expériences, on a procédé à des mesures d'osmolarité de diverses solutions au moyen d'un micro-osmomètre numérique. For these experiments, osmolarity measurements of various solutions were made using a digital micro osmometer.

On a d'abord mélangé une solution de collagène à des fibroblastes épidermiques humains en suspension dans un milieu de culture cellulaire standard (connu sous la dénomination DMEM ou Milieu d'Eagle Modifié par Dulbecco, voir annexe). Collagen solution was first mixed with human epidermal fibroblasts suspended in standard cell culture medium (known as DMEM or Modified Eagle Medium by Dulbecco, see Appendix).

A titre indicatif, la concentration de collagène dans ce mélange était de 0,88 mg/ml. Quant au nombre de fibroblastes présents par unité de volume dudit mélange, il était de 50000 /ml. De plus, l'osmolarité dudit mélange était de 300 mosm/l, ce qui est la caractéristique d'un milieu isotonique. As an indication, the concentration of collagen in this mixture was 0.88 mg / ml. As for the number of fibroblasts present per unit volume of said mixture, it was 50000 / ml. In addition, the osmolarity of said mixture was 300 mosm / l, which is the characteristic of an isotonic medium.

On a ensuite prélevé une première partie du mélange ainsi obtenu pour le mélanger à un premier produit selon l'invention. Dans cette étude @@@ l ilro, ce dernier était constitué d'eau de mer préfiltrée à I um et diluée dans de l'eau pure déminéralisée, en sone que l'osmoiarité de la solution finale constituée dudit mélange et dudit premier produit soit de 350 mosll On a alors ensemencé la solution obtenue dans les puits d'une première micro-plaque de culture, de manière a pouvoir procéder à une première série d'observations. A first part of the mixture thus obtained was then taken to mix with a first product according to the invention. In this study ilro, the latter consisted of seawater prefiltered to I um and diluted in pure demineralized water, in that the osmolarity of the final solution consisting of said mixture and said first product is The resulting solution was then inoculated into the wells of a first culture microplate so that a first series of observations could be made.

On a également prélevé une seconde partie dudit mélange de fibroblastes en culture et de collagène pour le mélanger à un second produit selon l'invention Ce dernier est constitué d'eau de mer diluée dans de l'eau pure déminéralisée dans une moindre mesure que précédemment, en sorte que l'osmolarité de la solution finale soit de 400 mosnl. On a alors ensemencé la solution obtenue dans les puits d'une seconde micro-plaque de culture, de manière à pouvoir procéder à une seconde série d'observations. A second part of said mixture of fibroblasts in culture and of collagen was also taken to mix with a second product according to the invention. The latter consists of seawater diluted in deionized pure water to a lesser extent than previously so that the osmolarity of the final solution is 400 mosnl. The solution obtained was then inoculated into the wells of a second micro-culture plate, so that a second series of observations could be carried out.

On a enfin prélevé une troisième partie dudit mélange pour le mélanger à de l'eau de mer qui est diluée dans de l'eau pure déminéralisée dans une mesure encore moindre que précédemment, en sorte que l'osmolarité de la solution finale soit de 560 mosm/l. On a alors ensemencé la solution obtenue dans les puits d'une troisième micro-plaque de culture, de manière à pouvoir procéder à une troisième série d'observations. Finally, a third part of said mixture was taken to mix with seawater which is diluted in pure demineralized water to a still lower extent than before, so that the osmolarity of the final solution is 560.degree. mosm / l. The resulting solution was then inoculated into the wells of a third culture microplate, so that a third series of observations could be made.

Pour chacune de ces trois expériences, on notera que l'apport de solvant au milieu de culture permet de diluer suffisamment ce dernier. de telle sone que ledit milieu de culture puisse apporter aux fibroblastes tous les éléments nutritifs nécessaires à leur métabolisme. Pour chaque expérience. la concentration desdits éléments nutritifs dans la solution finale a été divisée par quatre du fait de la dilution opérée. For each of these three experiments, it will be noted that the addition of solvent to the culture medium makes it possible to sufficiently dilute the latter. such that said culture medium can provide the fibroblasts with all the nutrients necessary for their metabolism. For each experience. the concentration of said nutrients in the final solution was divided by four due to the dilution performed.

De plus, on a également utilisé ledit mélange constitué uniquement de la solution de collagène et du milieu de culture contenant les fibroblastes pour l'ensemencer dans une quatrième micro-plaque, afin de procéder à une quatrieme série d'observations, encore appelée série témoin dans la suite de la présente description
A titre simplement indicatif, on a utilisé pour chacune-des quatre series une micro-plaque de six puits, le diamètre de chaque puits étant de 35 mm
On a ensuite procédé à l'incubation en atmosphère humide de chacune des quatre micro-plaques ensemencées, ladite atmosphère contenant 5 'o de GO2 et étant égalemement caractérisée par une température de 37 C Au bout de quelques heures d'incubation, chacune des quatre solutions ensemencées a forme un gel. et l'on a mesuré à partir de ce moment-là et à des dates diflèrentes pour trois des six pciitz de chaque micro-plaque, le diamètre des quatre lattices de collagene respectivement constituées par lesdits gels. On en a déduit par une méthode d'analyse d'image la surface de la lattice contenue dans chacun de ces puits auxdites dates. de manière à pouvoir rendre compte de l'éventuelle contraction de chaque lattice au cours du temps.In addition, the mixture consisting solely of the collagen solution and the fibroblast-containing culture medium for inoculating into a fourth microplate was also used to carry out a fourth series of observations, also called a control series. in the following description
By way of indication, for each of the four series, a six-well micro-plate was used, the diameter of each well being 35 mm.
Each of the four micro-plates inoculated was then incubated in a humid atmosphere, said atmosphere containing 5% GO 2 and being also characterized by a temperature of 37 C. After a few hours of incubation, each of the four seeded solutions form a gel. and the diflerent times for three of the six pciits of each microplate were measured from that time and the diameter of the four collagen lattices respectively constituted by said gels. The surface of the lattice contained in each of these wells at said dates was deduced by an image analysis method. so as to be able to account for the possible contraction of each lattice over time.

Les tableaux présentés ci-dessous détaillent les résultats obtenus à six dates différentes La première d'entre elles ou date de référence (t0 = heure) correspond au moment même où les micro-plaques sont placées dans l'incubateur Pour chaque série d'expériences, on a fait figurer auxdites dates la surface de la lattice mesurée en mm2 pour chacun des trois puits sélectionnés dans une même micrn-plaque la valeur moyenne des trois surfaces obtenues et l'écart type en résultant, ainsi que le pourcentage de contraction du gel par rapport à ladite date de référence t0 (voir tableaux I à IV). The tables presented below detail the results obtained on six different dates The first of them or date of reference (t0 = hour) corresponds to the very moment when the micro-plates are placed in the incubator For each series of experiments the lattice area measured in mm2 for each of the three selected wells in the same micrn-plate, the average value of the three surfaces obtained and the resulting standard deviation, as well as the percentage of contraction of the gel, were given on said dates. with respect to said reference date t0 (see Tables I to IV).

On a enfin fait figurer au tableau V en fonction du temps et pour chaque série d'expériences, d'une part, lesdits taux de contraction par rapport à la date t0 et, d'autre part, des gains de contraction relatifs à chaque série et défnis par le quotient:
(taux de contraction par rapport à t0 à la date t)séries 1, 2 ou 3 1
(taux de contraction par rapport à t0 à la date t)série témoin
TABLEAU I
SERIE TEMOIN
SURFACE DES LATTICES (en mm2) EN FONCTION DU TEMPS
ET POURCENTAGE DE CONTRACTION PAR RAPPORT à f0

Lastly, in Table V, as a function of time, and for each series of experiments, on the one hand, said contraction rates with respect to the date t0, and on the other hand, contraction gains relative to each series, and defended by the quotient:
(contraction rate compared to t0 at date t) series 1, 2 or 3 1
(contraction rate vs. t0 at date t) sample series
TABLE I
SERIE WITNESS
SURFACE OF LATTICES (in mm2) according to the weather
AND PERCENTAGE OF CONTRACTION IN RELATION TO f0

<tb> <SEP> Temps(h) <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb> <SEP> Puits <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 907 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572
<tb> <SEP> Puits <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 615 <SEP> 530
<tb> <SEP> Puits <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 615 <SEP> 572
<tb> <SEP> Moyenne <SEP> 962 <SEP> 773 <SEP> 675 <SEP> 630 <SEP> 615 <SEP> 558
<tb> <SEP> Ecart-type <SEP> 0 <SEP> 116 <SEP> 27 <SEP> 26 <SEP> 0 <SEP> 24
<tb> % <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 35 <SEP> 36 <SEP> 42
<tb> <SEP> à <SEP> f0
<tb>
TABLEAU II
PREMIERE SERIE D'EXPERIENCES

<tb><SEP> Time (h) <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb><SEP> Wells <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 907 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572
<tb><SEP> Wells <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 615 <SEP> 530
<tb><SEP> Wells <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 615 <SEP> 572
<tb><SEP> Mean <SEP> 962 <SEP> 773 <SEP> 675 <SEP> 630 <SEP> 615 <SEP> 558
<tb><SEP> Standard Deviation <SEP> 0 <SEP> 116 <SEP> 27 <SEP> 26 <SEP> 0 <SEP> 24
<tb>% <SEP> of <SEP> contraction
<tb><SEP> by <SEP> report <SEP> 0 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 35 <SEP> 36 <SEP> 42
<tb><SEP> to <SEP> f0
<Tb>
TABLE II
FIRST SERIES OF EXPERIENCES

<tb> Temps(@) <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb> <SEP> Puits <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 379
<tb> <SEP> Puits <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb> <SEP> Puits <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb> <SEP> Moyenne <SEP> 962 <SEP> 675 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 403
<tb> <SEP> Ecart-type <SEP> 0 <SEP> 27 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 21
<tb> % <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 30 <SEP> 36 <SEP> 41 <SEP> 49 <SEP> 58
<tb> <SEP> à <SEP> f0
<tb>
TABLEAU III:
DEUXIEME SERIE D'EXPERIENCES

<tb> Time (@) <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb><SEP> Wells <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 379
<tb><SEP> Wells <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb><SEP> Wells <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb><SEP> Medium <SEP> 962 <SEP> 675 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEQ> 490 <SEP> 403
<tb><SEP> Standard Deviation <SEP> 0 <SEP> 27 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 21
<tb>% <SEP> of <SEP> contraction
<tb><SEP> by <SEP> report <SEP> 0 <SEP> 30 <SEP> 36 <SEP> 41 <SEP> 49 <SEP> 58
<tb><SEP> to <SEP> f0
<Tb>
TABLE III:
SECOND SERIES OF EXPERIENCES

<tb> <SEP> Temps(@)@ <SEP> <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb> <SEP> Puits <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb> <SEP> Puits <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb> <SEP> Puits <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 490 <SEP> 415 <SEP>
<tb> <SEP> Ecart-type <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 26 <SEP> 25 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> % <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 27 <SEP> 33 <SEP> 38 <SEP> 49 <SEP> 57
<tb> <SEP> à <SEP> f0
<tb>
TABLEAU IV
TROISIEME SERIE D'EXPERIENCES

<tb><SEP> Time (@) @ <SEP><SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb><SEP> Wells <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 615 <SEP> 572 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb><SEP> Wells <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 490 <SEP> 415
<tb><SEP> Wells <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 706 <SEP> 660 <SEP> 615 <SEP> 490 <SEP> 415 <SEP>
<tb><SEP> Standard Deviation <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 26 <SEP> 25 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>% <SEP> of <SEP> contraction
<tb><SEP> by <SEP> report <SEP> 0 <SEP> 27 <SEP> 33 <SEP> 38 <SEP> 49 <SEP> 57
<tb><SEP> to <SEP> f0
<Tb>
TABLE IV
THIRD SERIES OF EXPERIENCES

<tb> <SEP> Temps(@): <SEP> <SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb> <SEP> Puits <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb> <SEP> Puits <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb> <SEP> Puits <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb> <SEP> Moyenne <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb> <SEP> Ecart-type <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> % <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> <SEP> à <SEP> f0
<tb>
TABLEAU V: RESUME

<tb><SEP> Time (@): <SEP><SEP> 0 <SEP> 21 <SEP> 30 <SEP> 45 <SEP> 74 <SEP> 147
<tb><SEP> Wells <SEP> 1 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb><SEP> Wells <SEP> 2 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb><SEP> Wells <SEP> 3 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb><SEP> Medium <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962 <SEP> 962
<tb><SEP> Standard Deviation <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>% <SEP> of <SEP> contraction
<tb><SEP> by <SEP> report <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb><SEP> to <SEP> f0
<Tb>
TABLE V: SUMMARY

<tb> <SEP> Témoin <SEP> % <SEP> de <SEP> contraction <SEP> 0 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 35 <SEP> 36 <SEP> 42
<tb> <SEP> sans <SEP> produit <SEP> par <SEP> rapport <SEP> à <SEP> f0
<tb> <SEP> % <SEP> de <SEP> contraction <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> <SEP> 3ème <SEP> par <SEP> rapport <SEP> à <SEP> f0
<tb> <SEP> Produit
<tb> <SEP> Gain <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> (en <SEP> %) <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> <SEP> au <SEP> témoin <SEP> sans <SEP> produit
<tb> <SEP> % <SEP> de <SEP> contraction <SEP> 0 <SEP> 27 <SEP> 33 <SEP> 38 <SEP> 49 <SEP> 57
<tb> <SEP> 2ème <SEP> par <SEP> rapport <SEP> à <SEP> f0
<tb> <SEP> Produit
<tb> <SEP> Gain <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> (en <SEP> %) <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 35 <SEP> 10 <SEP> 9 <SEP> 36 <SEP> 36
<tb> <SEP> au <SEP> témoin <SEP> sans <SEP> produit
<tb> <SEP> % <SEP> de <SEP> contraction <SEP> 0 <SEP> 30 <SEP> 36 <SEP> 41 <SEP> 49 <SEP> 58
<tb> 1er <SEP> par <SEP> rapport <SEP> à <SEP> f0
<tb> Produit
<tb> <SEP> Gain <SEP> de <SEP> contraction
<tb> <SEP> (en <SEP> %) <SEP> par <SEP> rapport <SEP> 0 <SEP> 50 <SEP> 20 <SEP> 17 <SEP> 36 <SEP> 38
<tb> <SEP> au <SEP> témoin <SEP> sons <SEP> produit
<tb>
Le graphique de li FI- unlque illustre les résultats consignés dans le tableau
V ci-dessus
Comme on peut le voir sur cette Fig., le premier produit selon l'invention relatif à la première série d'expériences (osmolarité de 350 mosm/l) accélère très nettement la contraction de la lattice de collagène pendant toute la durée de l'expérience. par rapport à It contraction naturelle observée avec la solution "témoin" (osmolarité de 300 mosm/l) ()n notera en particulier que le gain de contraction moyen obtenu avec ledit premier produit selon l'invention avoisine 50 %
Quant au second produit selon l'invention (osmolarité de 400 mosm/l), il accélère un peu moins nettement la contraction de la lattice de collagène que ledit premier produit, notamment au cours des 45 premières heures d'expérience. De plus, il procure un gain de contraction moyen de la lattice avoisinant 36 %
On notera par contre que le produit correspondant à la troisième série d'expériences exerce une inhibition totale de la contraction des lattices.<tb><SEP> Control <SEP>% <SEP> of <SEP> Contraction <SEP> 0 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 35 <SEP> 36 <SEP> 42
<tb><SEP> without <SEP> product <SEP> by <SEP> report <SEP> to <SEP> f0
<tb><SEP>%<SEP> of <SEP> contraction <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb><SEP> 3rd <SEP> by <SEP> report <SEP> to <SEP> f0
<tb><SEP> Product
<tb><SEP> Gain <SEP> of <SEP> contraction
<tb><SEP> (in <SEP>%) <SEP> by <SEP> report <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
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<tb><SEP> 2nd <SEP> by <SEP> report <SEP> to <SEP> f0
<tb><SEP> Product
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<tb> Product
<tb><SEP> Gain <SEP> of <SEP> contraction
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<tb><SEP> at <SEP> witness <SEP> sounds <SEP> product
<Tb>
The graph of the FI-Llack illustrates the results shown in the table
V above
As can be seen in this FIG., The first product according to the invention relating to the first series of experiments (osmolarity of 350 mosm / l) very sharply accelerates the contraction of the lattice of collagen throughout the duration of the experience. compared with the natural contraction observed with the "control" solution (osmolarity of 300 mosm / l) (), it will be noted in particular that the average contraction gain obtained with said first product according to the invention is approximately 50%
As for the second product according to the invention (osmolarity of 400 mosm / l), it accelerates slightly less contraction of collagen lattice than said first product, especially during the first 45 hours of experience. In addition, it provides a mean contraction gain of the lattice of around 36%
It should be noted that the product corresponding to the third series of experiments exerts a total inhibition of the contraction of the lattices.

Il résulte de ces expériences que l'ajout d'eau de mer stérilisée additionnée d'eau pure déminéralisée audit milieu de culture cellulaire contenant les fibroblastes et la solution de collagène permet d'accélérer la contraction naturelle de la lattice de collagène, lorsque l'osmolarité de l'ensemble est comprise entre 350 et 400 mosm/l
Comme le milieu de culture contenant les fibroblastes et la solution de collagène est isotonique, on en déduit que l'eau de mer stérilisée et diluée a une telle action sur les lattices de collagène lorsque son osmolarité est comprise dans le domaine précité.As a result of these experiments, the addition of sterilized seawater with deionized pure water to said cell culture medium containing the fibroblasts and the collagen solution accelerates the natural contraction of the collagen lattice when the osmolarity of the set is between 350 and 400 mosm / l
Since the culture medium containing the fibroblasts and the collagen solution is isotonic, it can be deduced that sterilized and diluted seawater has such an effect on collagen lattices when its osmolarity is within the aforementioned range.

On notera que les produits selon l'invention à base d'eau de mer stérilisée pourraient également être obtenus par un traitement autre qu'une dilution, pourvu que leur osmolarité suite audit traitement vérifie la condition ci-dessus
ANNEXES
1. Composition du milieu de culture DMEM (en mg/l):
SELS INORGANIQUES:
CaCl2 + 2H20 264,00
CaCl2 (anhydre)
Fe(NO3) + 9H20 0,10
KCI 400,00
MgSO4(anhydre)
MgSO4 + 7H20 200,00
NaCI 6400,00
NaHC03 3700,00
NAH2PO4 + 2H20 141,00
NAH2PO4 + H20
AUTRES COMPOSANTS:
D-Glucose 1000,00
Rouge de Phénol 15,00
HEPES
Pyruvate de Sodium 110,00
Aminoptérine
Hypoxanthine
Thymidine
ACIDES AMINES:
L-Alanine
L-Asparagine
L-Arginine + HCl 84,00
Acide L-Aspartique
L-Cystine 48,00 L-Cystine + 2HCl
Acide l -Glutamique
L-Glutamine 580,00
L-Alanyl-L-Glutamine
Glycyl-L-Glutamine
Glycine 30,00
L-Histidine HCl + H20 42,00 L-lsoleucine 105,00
L-Leucine 105,00
L-Lysine + HCl 146,00
L-Méthionine 30,00
L-Phénylalanine 66,00
L-Proline
L-Sérine 42,00
L-Thréonine 95,00
L-Tryptophane 16,00
L-Tyrosine 72,00
L-Tyrosine (sel disodique)
L-Valine 94,00
VITAMINES:
Pantothénate de Calcium 4,00
Chlorure de Choline 4,00
Acide Folique 4,00 i-lnositol 7,20 Nicotinamide 4,00
Pyridoxal + HCI 4,00
Riboflavine 0,40
Thiamine + HCI 4,00
ll. Etude de la cytotoxicité du premier et du second produit selon l'invention:
On a ensemencé dans un premier temps dans les puits d'une micro-plaque des fibroblastes épidermiques humains en suspension dans ledit milieu de culture cellulaire
DMEM, à raison de 2000 fibroblastes par puits. A titre indicatif on a utilisé une micro-plaque de 96 puits, le diamètre de chaque puits étant de 6 mm
Après une incubation de 24 heures, on a retiré de la micro-plaque deux prélèvements dudit milieu de culture auxquels on ajoute respectivement le premier et le second produit selon l'invention.It will be noted that the products according to the invention based on sterilized seawater could also be obtained by a treatment other than a dilution, provided that their osmolarity following said treatment verifies the above condition.
NOTES
1. Composition of the DMEM culture medium (in mg / l):
INORGANIC SALTS:
CaCl2 + 2H20 264.00
CaCl2 (anhydrous)
Fe (NO3) + 9H20 0.10
KCI 400.00
MgSO4 (anhydrous)
MgSO4 + 7H20 200.00
NaCI 6400.00
NaHCO3 3700.00
NAH2PO4 + 2H20 141.00
NAH2PO4 + H20
OTHER COMPONENTS:
D-Glucose 1000.00
Phenol Red 15,00
HEPES
Sodium Pyruvate 110.00
aminopterin
hypoxanthine
thymidine
AMINO ACIDS:
L-Alanine
L-asparagine
L-Arginine + HCl 84.00
L-Aspartic acid
L-Cystine 48.00 L-Cystine + 2HCl
L-Glutamic acid
L-Glutamine 580.00
L-Alanyl-L-Glutamine
Glycyl-L-Glutamine
Glycine 30,00
L-Histidine HCl + H20 42.00 L-lsoleucine 105.00
L-Leucine 105.00
L-Lysine + HCl 146.00
L-Methionine 30,00
L-Phenylalanine 66.00
L-Proline
L-Serine 42,00
L-Threonine 95.00
L-Tryptophan 16.00
L-Tyrosine 72.00
L-Tyrosine (disodium salt)
L-Valine 94.00
VITAMINS:
Calcium pantothenate 4.00
Choline Chloride 4.00
Folic acid 4.00 i-lnositol 7.20 Nicotinamide 4.00
Pyridoxal + HCI 4.00
Riboflavin 0.40
Thiamine + HCI 4.00
ll. Study of the cytotoxicity of the first and second products according to the invention:
Firstly, in the wells of a microplate, human epidermal fibroblasts suspended in said cell culture medium were seeded.
DMEM, at a rate of 2000 fibroblasts per well. As a guide, a 96-well micro-plate was used, the diameter of each well being 6 mm.
After a 24-hour incubation, two samples of said culture medium were withdrawn from the microplate to which the first and second products according to the invention were respectively added.

On a ensuite disposé chacun de ces deux produits mélangés au milieu de culture dans plusieurs puits distincts appartenant à ladite micro-plaque et l'on a soumis cette dernière à une nouvelle incubation pour une période de 4S heures
A titre indicatif, les conditions relatives à chaque Incubation effectuée dans ce protocole ont été, d'une part, une température de 37 C et. d'autre part, un taux de CO2 de 5 %.Each of these two mixed products was then placed in the culture medium in several separate wells belonging to said micro-plate and the latter was subjected to a new incubation for a period of 45 hours.
As an indication, the conditions relating to each incubation carried out in this protocol were, on the one hand, a temperature of 37 C and. on the other hand, a CO2 level of 5%.

Après ce laps de temps, on a éliminé lesdits produits selon l'invention, et on les a remplacés par un produit connu sous la dénomination MTT et dont le nom développé est le 3-[4, 5-diméthylthiazol-2-yl]-2, 5-diphényltétrazolium bromide. Le
MTT est couramment utilisé pour révéler la viabilité des cellules en culture ou dans les tissus, c'est-à-dire pour évaluer la cytotoxicité d'un produit vis-à-vis du milieu cellulaire. On pourra se reporter à l'article suivant pour une description détaillée de cette méthode:
MOSSMANN, Journal ofImmunological Methods. 1983, 65, pp. 55-63
On a procédé à nouveau à l'incubation de ladite micro-plaque pendant 3 heures, de manière que le MTT puisse pénétrer dans les cellules Au contact des déshydrogénases mitochondriales, qui sont des enzymes uniquement produites par les cellules vivantes, le MTT est réduit en cristaux bleus de formazan Ces cristaux permettent donc de révéler les cellules vivantes.After this time, said products according to the invention were eliminated and replaced by a product known under the name MTT and whose developed name is 3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl] - 2,5-diphenyltetrazolium bromide. The
MTT is commonly used to reveal the viability of cells in culture or tissues, i.e., to evaluate the cytotoxicity of a product to the cell environment. We can refer to the following article for a detailed description of this method:
MOSSMANN, Journal of Immunological Methods. 1983, 65, pp. 55-63
The micro-plate was incubated again for 3 hours, so that MTT could penetrate the cells. In contact with mitochondrial dehydrogenases, which are enzymes only produced by living cells, MTT is reduced in size. formazan blue crystals These crystals thus make it possible to reveal living cells.

Puis on a dissout les cristaux de formazan obtenus dans du diméthylsulfoxyde (DMSO), de manière à disposer d'une solution homogène
On a ensuite procédé à des mesures de densité optique pour chaque puits ainsi que pour un puits de référence n'ayant pas reçu de produit selon l'invention. en partant du fait que l'intensité de coloraticru blcue due au fi,rniazan est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes dans chacjtie puits
On a calculé un taux de mortalité cellulaire pour chaque puits defini par la relation suivante:
DO moy (puits avec produits)
Taux de mortalité cellulaire = 1 - -
DO moy (puits témoin)
où DO moy (puits avec produits) est la moyenne des densités optiques mesurées pour plusieurs puits ayant reçu l'un des produits selon l'invention,
et DO moy (puits témoin) est la moyenne des densités optiques mesurées pour plusieurs puits "témoin" n'ayant pas reçu de produit particulier.Then the formazan crystals obtained were dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) so as to have a homogeneous solution
Optical density measurements were then made for each well as well as for a reference well that did not receive a product according to the invention. starting from the fact that the intensity of bluish color due to fi, rniazan is directly proportional to the number of living cells in each well
A cell death rate was calculated for each well defined by the following relationship:
DO avg (wells with products)
Cell death rate = 1 - -
DO avg (control well)
where DO av (well with products) is the average of the optical densities measured for several wells having received one of the products according to the invention,
and DO avg (control well) is the average of the optical densities measured for several "control" wells that did not receive a particular product.

Comme on peut le voir à la relation ci-dessus, on a ainsi attribué un taux de mortalité nul aux cellules desdits puits "témoin"
On a fait figurer dans le tableau ci-dessous les valeurs qui ont été obtenues pour les taux de mortalité cellulaire relatifs à l'adjonction de chacun des deux produits selon l'invention précités, cela dans six puits de ladite micro-plaque.

As can be seen in the relation above, a zero mortality rate has thus been attributed to the cells of said "control" wells.
The values obtained for the cell death rates relating to the addition of each of the above two products according to the invention were given in the table below in six wells of said micro-plate.

<SEP> Mesures <SEP> ler <SEP> 2nd
<tb> <SEP> sur <SEP> les <SEP> produit <SEP> selon <SEP> produit <SEP> selon
<tb> <SEP> puits <SEP> l'invention <SEP> I'invention
<tb> <SEP> témoin <SEP> (350mosm/l) <SEP> (400 <SEP> mosm/l)
<tb> <SEP> Puits <SEP> 1 <SEP> 0,500 <SEP> 0,534 <SEP> 0,480
<tb> <SEP> Puits <SEP> 2 <SEP> 0,505 <SEP> 0,483 <SEP> 0,498
<tb> <SEP> Puits <SEP> 3 <SEP> 0,519 <SEP> 0,538 <SEP> 0,517
<tb> <SEP> Puits <SEP> 4 <SEP> 0,488 <SEP> 0,544 <SEP> 0,462
<tb> <SEP> Puits <SEP> 5 <SEP> 0,475 <SEP> 0,517 <SEP> 0,558 <SEP>
<tb> <SEP> Puits <SEP> 6 <SEP> 0,516 <SEP> 0,538 <SEP> 0,514 <SEP>
<tb> <SEP> DO <SEP> moy <SEP> 0,501 <SEP> 0,526 <SEP> @ <SEP> 0,505
<tb> <SEP> Ecart-type <SEP> 0,017 <SEP> 0,023
<tb> <SEP> Taux <SEP> de <SEP> O <SEP> - <SEP> 5 <SEP> @0 <SEP> - <SEP> <SEP> 0,8 <SEP> O <SEP>
<tb> mortalité <SEP> (en <SEP> %)
<tb>
On remarquera que les produits selon l'invention ne sont pas du tout toxiques pour les cellules. Quant aux quelques cellules supplémentaires mises en évidence par ces mesures (taux de mortalité négatifs), leur nombre n'est pas significatif. <SEP> Measures <SEP> ler <SEP> 2nd
<tb><SEP> on <SEP><SEP> product <SEP> according to <SEP> product <SEP> according to
<tb><SEP> wells <SEP> the invention <SEP>l'invention
<tb><SEP> control <SEP> (350mosm / l) <SEP> (400 <SEP> mosm / l)
<tb><SEP> Wells <SEP> 1 <SEP> 0.500 <SEP> 0.534 <SEP> 0.480
<tb><SEP> Wells <SEP> 2 <SEP> 0.505 <SEP> 0.483 <SEQ> 0.498
<tb><SEP> Wells <SEP> 3 <SEP> 0.519 <SEP> 0.538 <SEP> 0.517
<tb><SEP> Wells <SEP> 4 <SEP> 0.488 <SEP> 0.544 <SEQ> 0.462
<tb><SEP> Wells <SEP> 5 <SEP> 0.475 <SEP> 0.517 <SEP> 0.558 <SEP>
<tb><SEP> Wells <SEP> 6 <SEP> 0.516 <SEP> 0.538 <SEW> 0.514 <SEP>
<tb><SEP> DO <SEP>Avg>SEP> 0.501 <SEP> 0.526 <SEP> @ <SEP> 0.505
<tb><SEP> Standard Deviation <SEP> 0.017 <SEP> 0.023
<tb><SEP> Rate <SEP> of <SEP> O <SEP> - <SEP> 5 <SEP> @ 0 <SEP> - <SEP><SEP> 0.8 <SE> O <SEP>
<tb> mortality <SEP> (in <SEP>%)
<Tb>
It will be noted that the products according to the invention are not at all toxic for the cells. As for the few additional cells evidenced by these measures (negative mortality rates), their number is not significant.

Claims

REVENDICA7IONS

1) A product for accelerating the healing of wounds of the epidermis, characterized in that it comprises sterilized seawater and diluted in a solvent. such that the osmolarity of said product is at least about 350 mosnil and at most 400 mosm / l.

2) Product according to claim t characterized in that its osmolarity is close to 350 mosnVl

3) Product according to claim t or 2. characterized in that said solvent is pure demineralized water.

4) Cosmetic composition, characterized in that it comprises a product according to one of the preceding claims.

5) Process for producing a product intended to accelerate the healing of wounds of the epidermis, characterized in that it essentially consists of using sea water, subjecting it to a sterilization treatment and treating seawater sterilized so that the osmolarity of the product obtained following this treatment is at least close to 350 mosm / l and at most close to 400 mosnVl.

6) A method of producing a product for accelerating the healing of wounds of the epidermis according to claim 5, characterized in that the osmolarity of the product obtained following this treatment is close to 350 mosm / l.

7) Use of a product according to one of claims 1 to 3, characterized in that it consists in spraying said product on the skin