FR2749322A1 - Sequences d'adn codant pour des laccases, et leurs applications dans le domaine de la regulation des teneurs en lignines des plantes - Google Patents

Sequences d'adn codant pour des laccases, et leurs applications dans le domaine de la regulation des teneurs en lignines des plantes Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne toute séquence d'ADN comprenant à titre de région codante, tout ou partie de la séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant pour une laccase, ou tout ou partie de la séquence nucléotidique complémentaire de cette dernière et codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné. L'invention vise également l'utilisation des séquences susmentionnées pour la mise en oeuvre de procédés de régulation de la biosynthèse de lignines chez les plantes.

Description

SEQUENCES D'ADN CODANT POUR DES LACCASES, ET LEURS
APPLICATIONS DANS LE DOMAINE DE LA REGULATION DES
TENEURS EN LIGNINES DES PLANTES.
La présente invention a pour objet l'utilisation de séquences d'ADN codant pour des laccases chez les plantes, ou de tout fragment de ces séquences, ou encore de toute séquence dérivée de ces dernières, ou de leurs séquences complémentaires, dans le cadre de la mise en oeuvre de procédés de régulation du taux de lignine chez les plantes.
Les laccases (p. diphénol : 2 oxydoreductase, EC 1.10.3.2) oxydent des substrats phénoliques en utilisant l'oxygène en tant qu'accepteur d'électron. Ce sont des glycoprotéines fixant quatre ions cuivre, qui constituent avec l'ascorbate oxydase et la céruloplasmine, un groupe de métallo-enzymes appelé les "oxydases bleues, à cuivre" (Messerschmidt and
Huber, 1990 ; Ryden and Hunt, 1993).
Tout d'abord identifiées dans l'arbre à laque du Japon (Rhus vernicifera), il a ensuite été montré que les laccases sont réparties dans de nombreux organismes (champignons, plantes supérieures, insectes et bactéries), et beaucoup de fonctions différentes leur ont été attribuées (Dean and Eriksson, 1994).
Chez les plantes, I'unique fonction attribuée aux laccases est celle de leur probable implication dans la polymérisation oxydative de composés phénoliques dans le cadre de la biosynthèse de lignine.
Bien que l'implication des laccases dans la lignification a été remise en question pendant des années, plusieurs études récentes ont abouti à reconsidérer leur rôle dans ce processus (Driouich et al., 1992 ; O'Malley et al., 1993 ; Dean and Eriksson, 1994).
A l'heure actuelle, le mécanisme enzymatique exact de la polymérisation des monolignols lors de la formation des lignines, demeure inconnu. Une approche possible permettant de clarifier le rôle de ces enzymes est de réguler (soit dans le sens d'une diminution, soit dans le sens d'une augmentation),
I'expression des gènes correspondants dans des plantes transgéniques et de rechercher les différences résultantes en teneur et/ou en composition des lignines chez ces plantes transformées par rapport à des plantes non transformées.
Une telle approche a déjà été expérimentée avec le gène d'une peroxydase anionique et avec différents gènes codant pour des enzymes impliquées dans la biosynthèse des lignines (Boudet et al., 1995).
Ces enzymes susmentionnées impliquées dans la biosynthèse des lignines, sont principalement l'O-méthyl transférase (OMT), la cinnamyl alcool deshydrogénase (CAD) et la cinnamoyl CoA réductase (CCR).
Les lignines sont des polymères de monolignols, et les trois enzymes citées ci-dessus sont impliquées dans la biosynthèse des monolignols.
Ces approches ont été réalisées au cours des dernières années dans la perspective de modifier qualitativement et/ou quantitativement les lignines dans les plantes fourragères et les espèces ligneuses utilisées pour la production de pâte à papier. Les objectifs principaux de ces études étaient respectivement d'améliorer la digestibilité des fourrages et de réduire les pollutions liées au blanchiment des pâtes à papier.
Les laccases quant à elles, agissent sur les étapes ultérieures extracellulaires d'assemblage de ces monolignols.
Toutefois, aucune approche tentant de vérifier l'influence que pourrait avoir un procédé de diminution ou d'augmentation de l'expression de gènes codant pour des laccases sur la quantité et la qualité des lignines produites par des plantes transformées, n'a été effectuée jusqu'à maintenant.
Seuls des ADNc codant pour des laccases ont été isolés à partir de sycomore (Delaunay et al., 1994 ; La Fayette et al., 1995).
Mais la transformation génétique du sycomore n'étant pas encore réalisable, aucune conclusion n'a pu être apportée par ces travaux sur l'influence possible de la régulation de l'expression du gène de ces laccases sur la teneur et la qualité des lignines produites.
L'un des buts de la présente invention est celui de fournir un procédé permettant de modifier les lignines des plantes, cette modification intervenant au niveau de la composition et/ou de la quantité des lignines produites.
La présente invention a plus particulièrement pour but de fournir un procédé permettant de réguler efficacement les teneurs en lignines dans les plantes, soit dans le sens d'une diminution sensible de ces teneurs par rapport aux teneurs normales dans les plantes, soit dans le sens d'une augmentation de ces teneurs.
Un autre but de la présente invention est de fournir les outils pour la mise en oeuvre d'un tel procédé, et plus particulièrement des constructions utilisables pour la transformation de plantes.
Un autre but de la présente invention est de fournir des plantes transformées génétiquement, notamment des plantes fourragères susceptibles d'être mieux digérées que les plantes non transformées, ou encore des plantes ou arbres transformés pour la production de la pâte à papier, et dont
I'extraction des lignines serait facilitée et moins polluante que dans le cas d'arbres non transformés.
Un autre but de la présente invention est celui de fournir des plantes transformées davantage résistantes à des attaques de l'environnement, notamment à des attaques parasitaires, que ne le sont les plantes non transformées, ou encore des plantes transformées de plus grande taille, ou de taille plus réduite (que celle des plantes non transformées).
La présente invention a pour objet l'utilisation de séquences nucléotidiques recombinantes contenant une (ou plusieurs) région(s) codante(s), cette (ces) région(s) codante(s) étant constituée(s)
- d'une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou d'un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou d'une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- d'une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-meme pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique ante sens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
pour la transformation de cellules végétales en vue de l'obtention de plantes transgéniques au sein desquelles la biosynthèse des lignines est régulée soit dans le sens d'une augmentation, soit dans le sens d'une diminution des teneurs en lignines produites, par rapport aux teneurs normales en lignines produites chez les plantes non transformées, et/ou dans le sens d'une modification de la composition (et donc des caractéristiques physicochimiques de ces dernières, telles que l'extraction par les solvants habituellement utilisés dans l'industrie papetière) des lignines produites par lesdites plantes transgéniques par rapport aux lignines produites chez les plantes non transformées.
Par l'expression "séquence nucléotidique dérivée", dans ce qui précède et ce qui suit, on entend toute séquence présentant au moins environ 60 % (et plus particulièrement au moins environ 80 %) de nucléotides identiques à ceux de la séquence dont elle dérive.
Par "protéine dérivée" dans ce qui précède et ce qui suit, on entend toute protéine présentant au moins environ 50 % (et plus particulièrement au moins environ 70 %) d'acides aminés homologues à ceux de la protéine dont elle dérive.
Parmi les séquences nucléotidiques susceptibles d'être utilisées à titre de régions codantes dans les séquences nucléotidiques recombinantes, on peut citer principalement:
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 1, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour la laccase de tabac représentée par SEQ ID NO 2,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 3, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 4,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 5, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 6,
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, et plus particulièrement avec 1' ARNm codé par les séquences SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, et
SEQ ID NO 5 respectivement,
- la séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant soit pour un ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou pour les fragments de laccase représentés par SEQ ID NO 4, ou SEQ ID NO 6, soit pour une protéine dérivée de la laccase ou fragments de laccase susmentionnés,
- la séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique complémentaire susmentionnée, par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un
ARNm codant pour une laccase chez les plantes, et plus particulièrement avec un des ARNm susmentionnés.
La présente invention a plus particulièrement pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante:
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 1, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par
SEQ ID NO 2, ou
- un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 1 susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ci-dessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par
SEQ ID NO 2, ou pour une protéine dérivée de cette dernière.
La présente invention a plus particulièrement pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante:
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 3, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 4, ou
- un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 4, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 3, susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ci-dessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour le fragment de laccase représenté par
SEQ ID NO 4, ou pour une protéine dérivée de ce dernier.
La présente invention a plus particulièrement pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante:
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 5, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 6, ou
- un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 6, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 5, susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ciaessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour le fragment de laccase représenté par
SEQ ID NO 6, ou pour une protéine dérivée de ce dernier.
Par les expressions "fragments de laccase" ou "protéines dérivées" dans ce qui précède et ce qui suit, on entend toute protéine possédant une activité de polymérisation des monolignols en l'absence de peroxyde d'hydrogène telle que mesurée selon la méthode de Sterjiades et al. (1992) publiée dans Plant
Physiology, 99; 1162 - 1168.
L'invention a également pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, à savoir avec 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 1, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec 1' ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, tel que défini ci-dessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné.
La présente invention a plus particulièrement pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante:
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 3, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s 'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 4, à savoir 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 3, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec 1' ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 4, telle que définie cidessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné.
La présente invention a plus particulièrement pour objet toute séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante:
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 5, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 6, à savoir 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 5, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec 1 'ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 6, telle que définie cidessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné.
Il va de soi que les séquences représentées par SEQ ID NO 1,
SEQ ID NO 3, et SEQ ID NO 5, les séquences complémentaires, les séquences dérivées et les fragments de séquences de l'invention mentionnées ci-dessus, doivent être pris en considération comme étant représentées dans le sens 5' 3'.
Ainsi, le premier nucléotide d'une séquence complémentaire dans le sens 5' o 3' telle que décrite ci-dessus, est le complément du dernier nucléotide de la séquence dans le sens 5' o 3' codant pour une laccase (ou fragment de laccase ou protéine dérivée), le second nucléotide de cette séquence complémentaire est le complément de l'avant-dernier nucléotide de la séquence codant pour une laccase, et ainsi de suite, jusqu'au dernier nucléotide de ladite séquence complémentaire qui est le complément du premier nucléotide de la séquence codant pour une laccase.
L'ARNm codé par la séquence complémentaire susmentionnée est tel que, lorsque cet ARNm est représenté dans le sens 5' o 3', son premier nucléotide correspond au dernier nucléotide de la séquence codant pour une laccase, et donc s'hybride avec le dernier nucléotide de l'ARNm codé par cette dernière, tandis que son dernier nucléotide correspond au premier nucléotide de la séquence codant pour une laccase, et donc s'hybride avec le premier nucléotide de 1' ARNm codé par cette dernière.
Ainsi, on entend par ARNm antisens dans ce qui précède et ce qui suit, tout ARNm codé par la susdite séquence complémentaire et représenté dans le sens inverse (3' o 5') du sens dans lequel est représenté l'ARNm codé par la séquence codant pour une laccase (ou fragment de laccase ou protéine dérivée), ce dernier ARNm étant encore désigné ARNm sens (5' o 3').
Le terme d'ARN antisens s'adresse donc à une séquence d'ARN complémentaire de la séquence en bases de l'ARN messager, le terme complémentaire devant être compris en ce sens que chaque base (ou une majorité de bases) de la séquence antisens (lue dans le sens 3' o 5') est capable de s'apparier avec les bases correspondantes (G avec C, A avec U) de l'ARN messager (séquence lue dans le sens 5' o 3').
La stratégie des ARN antisens, dans le cadre de la présente invention, est une approche moléculaire particulièrement adaptée à l'objectif d'une modulation des taux de lignines des plantes. L'ARN antisens est un ARN produit par la transcription du brin d'ADN non codant (brin non-sens).
Cette stratégie antisens est plus particulièrement décrite dans le brevet européen n" 240 208.
L'invention concerne également tout ARNm codé par une séquence d'ADN selon l'invention, et plus particulièrement:
- 1'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 1, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ci-dessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour la laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 2, ou pour un fragment de cette laccase ou une protéine dérivée tels que définis ci-dessus,
- 1' ARNm codé par la séquence d 'ADN représentée par SEQ ID NO 3, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ci-dessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour le fragment d'une laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 4, ou pour un fragment de ce dernier ou une protéine dérivée tels que définis cidessus,
- I'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 5, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ciaessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour le fragment d'une laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 6, ou pour un fragment de ce dernier ou une protéine dérivée tels que définis cidessus.
L'invention a également pour objet tout ARNm antisens, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend des nucléotides complémentaires de la totalité ou d'une partie seulement des nucléotides constituant un ARNm tel que décrit ci-dessus selon l'invention, ledit ARNm antisens étant susceptible de s'hybrider (ou de s'apparier) avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment avec un ARNm tel que décrit ci-dessus.
A ce titre, l'invention vise plus particulièrement les ARNm antisens codés par des séquences d'ADN selon l'invention, comprenant au moins une région de 100 bases homologues à celles d'une région des séquences complémentaires des séquences d'ADN susmentionnées de l'invention.
Il n'y a pas de limite supérieure de taille pour les séquences d'ADN codant pour un ARN antisens selon l'invention; elles peuvent être aussi longues que celles du messager normalement produit dans les cellules, voire aussi longues que la séquence d'ADN génomique codant pour l'ARNm d'une laccase.
L'invention a plus particulièrement pour objet:
- tout ARNm antisens, tel que décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il est codé par la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, ledit ARNm antisens étant susceptible de s'hybrider avec un
ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment l'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 1,
- tout ARNm antisens, tel que décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il est codé par la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 3, ledit ARNm antisens étant susceptible de s'hybrider avec un
ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment l'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 3,
- tout ARNm antisens, tel que décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il est codé par la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 5, ledit ARNm antisens étant susceptible de s'hybrider avec un
ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment l'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 5.
L'invention concerne également les polypeptides recombinants codés par les séquences d'ADN de l'invention, lesdits polypeptides recombinants présentant, le cas échéant, une activité de polymérisation des monolignols chez les plantes, et plus particulièrement les polypeptides recombinants représentés par SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 4, et SEQ ID NO 6, codés respectivement par les séquences représentées par SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, et SEQ ID NO 5, ou par des séquences dérivées de ces dernières selon l'invention.
L'invention a plus particulièrement pour objet les polypeptides recombinants, et notamment les laccases recombinantes, tels qu'obtenus par transformation de cellules végétales en intégrant de façon stable dans leur génome, une séquence nucléotidique recombinante telle que définie ci-après, contenant une séquence d'ADN selon l'invention, notamment à l'aide d'un vecteur tel que décrit ci-après.
Par l'expression "polypeptides recombinants", on doit entendre toute molécule possédant une chaîne polypeptidique susceptible d'être produite par génie génétique, par l'intermédiaire d'une phase de transcription de l'ADN du gène correspondant, ce qui conduit à l'obtention d'ARN qui est par la suite transformé en ARNm (par suppression des introns), ce dernier étant ensuite traduit par les ribosomes, sous forme de protéines, le tout étant effectué sous contrôle d'éléments de régulation appropriés à l'intérieur d'une cellule hôte.
Par conséquent, l'expression "polypeptides recombinants" utilisée n'exclut pas la possibilité que lesdits polypeptides comprennent d'autres groupements, tels que les groupements glycosylés.
Bien entendu, le terme "recombinant" indique que le polypeptide a été produit par génie génétique, car il résulte de l'expression, dans un hôte cellulaire approprié, de la séquence nucléotidique correspondante qui a été auparavant introduite dans un vecteur d'expression utilisé pour transformer ledit hôte cellulaire. Toutefois, ce terme "recombinant" n'exclut pas la possibilité que le polypeptide soit produit par un procédé différent, par exemple par synthèse chimique classique selon les méthodes connues utilisées pour la synthèse de protéines, ou par clivage protéolytique de molécules de plus grande taille.
L'invention concerne plus particulièrement les laccases de tabac telles qu'obtenues sous forme essentiellement pure par extraction et purification à partir de tabac, et plus particulièrement la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou celle comprenant le polypeptide représenté par SEQ ID NO 4, ou encore celle comprenant le polypeptide représenté par SEQ ID NO 6, ou toute protéine dérivée de ces dernières, notamment par addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés, ou tout fragment issu desdites laccases ou de leurs séquences dérivées.
L'invention a également pour objet les séquences nucléotidiques codant pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou pour les polypeptides représentés par SEQ ID NO 4, et SEQ ID NO 6, ou toute séquence dérivée ou fragment de ces derniers, tels que définis ci-dessus, lesdites séquences nucléotidiques étant caractérisées en ce qu'elles correspondent à tout ou partie des séquences représentées par SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, respectivement, ou à toute séquence dérivée de ces dernières par dégénérescence du code génétique, et étant néanmoins susceptibles de coder pour les laccases ou séquence dérivée ou fragment de ces dernières, tels que définis ci-dessus.
L'invention vise également les complexes formés entre les ARNm antisens, tels que décrits ci-dessus, et les ARNm selon l'invention, susceptibles de coder pour tout ou partie d'une laccase chez les plantes.
L'invention a plus particulièrement pour objet le complexe formé entre 1' ARNm codé par la séquence SEQ ID NO 1 et 1' ARNm antisens codé par la séquence complémentaire de la séquence SEQ ID NO 1, celui formé entre l'ARNm codé par la séquence SEQ ID NO 3 et l'ARNm antisens codé par la séquence complémentaire de la séquence SEQ ID NO 3, ainsi que celui formé entre l'ARNm codé par la séquence SEQ ID NO 5 et l'ARNm antisens codé par la séquence complémentaire de la séquence SEQ ID NO 5.
L'invention a également pour objet toute séquence nucléotidique recombinante contenant une (ou plusieurs) région(s) codante(s), cette (ces) région(s) codante(s) étant constituée(s):
- d'une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou d'un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase chez les plantes, ou d'une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée de la laccase, ou
- d'une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s 'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes.
L'invention a plus particulièrement pour objet toute séquence nucléotidique recombinante (ou ADN recombinant), caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'ADN selon l'invention, choisie parmi celles décrites ci-dessus, ladite séquence d'ADN étant insérée dans une séquence hétérologue.
L'invention concerne plus particulièrement toute séquence nucléotidique recombinante telle que décrite ci-dessus, comprenant, à titre de région codante, la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 1, ou par
SEQ ID NO 3, ou par SEQ ID NO 5, ou tout fragment ou une séquence nucléotidique dérivée de ces dernières, tels que définis ci-dessus, lesdites séquences nucléotidiques ou ledit fragment étant insérés dans une séquence hétérologue, et étant susceptibles de coder pour le polypeptide représentée par
SEQ ID NO 2, ou par SEQ ID NO 4, ou par SEQ ID NO 6, respectivement, ou pour un fragment de ces polypeptides, ou pour une protéine dérivée de ces derniers, tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne plus particulièrement encore, toute séquence nucléotidique recombinante comprenant, à titre de région codante, une séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, ou par SEQ ID NO 3, ou par SEQ ID NO 5, ou tout fragment ou toute séquence nucléotidique dérivée de cette séquence complémentaire, tels que définis ci-dessus, lesdites séquences complémentaires ou ledit fragment étant insérés dans une séquence hétérologue, et étant susceptibles de coder pour un ARNm antisens capable de s'hybrider avec tout ou partie de l'ARNm codant pour une laccase chez les plantes, et plus particulièrement avec tout ou partie de I'ARNm codant pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou pour les fragments de laccase représentés par SEQ ID NO 4, ou par SEQ ID
NO 6, respectivement.
Les ADN recombinants selon l'invention sont davantage caractérisés en ce qu'ils comprennent les éléments nécessaires pour réguler l'expression de la séquence nucléotidique codant pour tout ou partie d'une laccase selon l'invention, ou de sa séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens selon l'invention, notamment un promoteur et un terminateur de la transcription de ces séquences.
Parmi les différents promoteurs susceptibles d'être utilisés dans les constructions d'ADN recombinants selon l'invention, on peut citer:
- le promoteur endogène contrôlant l'expression de la laccase chez une plante, notamment le promoteur situé en amont de la séquence représentée par
SEQ ID NO 1, ou SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5 chez le tabac, ou
- des promoteurs de type constitutif à forte expression, tels que, par exemple, le promoteur 35S du CAMV (décrit dans Benfey et al. (1990),
EMBO J., 9 (6), 1677-1684),
- des promoteurs de type spécifique à expression particulière dans des tissus individuels.
L'invention concerne également toute séquence nucléotidique recombinante telle que décrite ci-dessus, et comprenant également à titre de région codante au moins une séquence nucléotidique codant pour tout ou partie d'un ARNm codant lui-même pour une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment l'ARNm codant pour l'alcool cinnamylique deshydrogénase (CAD), et/ou l'ARNm codant pour la cinnamoyl CoA réductase (CCR), et/ou l'ARNm codant pour l'O-méthyltransférase (OMT), ou comprenant également à titre de région codante au moins une séquence nucléotidique codant pour tout ou partie d'un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné, notamment avec l'ARNm codant pour la CAD, la CCR ou l'OMT.
L'invention a également pour objet tout vecteur recombinant, utilisable pour la transformation de plantes, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique recombinante choisie parmi celles décrites ci-dessus, selon l'invention, intégrée dans l'un des sites de son génome non essentiels pour sa réplication.
La présente invention a également pour objet un procédé de régulation de la biosynthèse des lignines chez les plantes, soit par diminution, soit par augmentation des quantités de lignines produites, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez ces plantes, ledit procédé comprenant une étape de transformation de cellules de ces plantes à l'aide d'un vecteur contenant:
- une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-meme pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un
ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s 'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
ladite transformation étant effectuée notamment à l'aide d'un vecteur tel que décrit ci-dessus.
La présente invention a plus particulièrement pour objet un procédé de diminution des quantités de lignines produites chez les plantes, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez ces plantes, ledit procédé comprenant une étape de transformation de cellules de ces plantes à l'aide d'un vecteur contenant
- une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un
ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation, et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
ladite transformation étant effectuée notamment à l'aide d'un vecteur tel que décrit ci-dessus.
La présente invention a plus particulièrement pour objet un procédé de diminution des quantités de lignines produites chez les plantes, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez ces plantes, ledit procédé comprenant une étape de transformation de cellules de ces plantes à l'aide d'un vecteur contenant une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
ladite transformation étant effectuée notamment à l'aide d'un vecteur tel que décrit ci-dessus.
A ce titre, invention a plus particulièrement pour objet un procédé de diminution de la quantité de lignines produite par biosynthèse chez les plantes, ce procédé étant effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant:
- au moins une séquence d'ADN selon l'invention telle que décrite cidessus, codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec tout ou partie de 1 'ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou pour un fragment de laccase représenté par SEQ ID NO 4, ou SEQ ID NO 6, ou pour une protéine dérivée de ces derniers telle que définie ci-dessus,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour un
ARNm antisens capable de s'hybrider à un ARNm codant pour une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment l'ARNm codant pour la
CAD, la CCR ou l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant tel que décrit ci-dessus, contenant une séquence d'ADN codant pour un ARNm antisens capable de s'hybrider avec l'ARNm codant pour une laccase ou pour une protéine dérivée, telle que définie ci-dessus, et, le cas échéant, contenant une ou plusieurs séquence(s) d'ADN codant pour un ARNm antisens capable de s'hybrider à un ARNm codant pour une autre enzyme que la laccase telle que définie ci-dessus,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence d'ADN codant pour un ARNm antisens capable de s 'hybrider avec l'ARNm codant pour une laccase ou pour une protéine dérivée, telle que définie ci-dessus, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour un ARNm antisens capable de s'hybrider à un ARNm codant pour une autre enzyme que la laccase, telle que définie ci-dessus.
Un autre procédé de diminution de la quantité de lignines produites par biosynthèse chez les plantes, est celui réalisé par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager ARN(m), cet ARN(m) codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase.
Cette dernière méthode fait appel au mécanisme de co-suppression. La co-suppression a été observée quand des copies du gène endogène ont été introduites dans le génome. Bien que le mécanisme de la co-suppression soit actuellement inconnu, une des hypothèses les plus fréquemment retenue est que la régulation négative de l'expression du gène viendrait de la production d'une faible proportion d'ARN antisens dérivée d'un transgène à travers une lecture du "mauvais" brin du transgène (Grierson et al., Trends Biotech., 9: 122-123).
A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de diminution de la quantité de lignines produites par biosynthèse chez les plantes, ce procédé étant effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant
- au moins une séquence d'ADN selon l'invention représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment une séquence d'ADN codant pour tout ou partie de la CAD, ou de la CCR, ou de l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant tel que décrit ci-dessus, contenant la séquence d'ADN selon l'invention susmentionnée, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus, et, le cas échéant, contenant une ou plusieurs séquence(s) d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence d'ADN selon l'invention susmentionnée, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus.
Il est important de noter que les méthodes susmentionnées permettent d' aboutir à des plantes transformées présentant des niveaux différents de réduction de l'activité des laccases (selon le niveau d'insertion de la séquence d'ADN codant pour l'ARNm antisens, le nombre de copies de cette séquence d'ADN intégrée dans le génome...), et donc des teneurs en lignines.
Le choix des transformants permettra donc une modulation contrôlée des teneurs en lignines compatible avec un développement normal de la plante.
D'une manière générale, si l'on considère que la teneur moyenne normale en lignines d'une plante varie entre environ 15% et environ 35% en poids de matière sèche, la réduction de la teneur en lignines résultant de la mise en oeuvre d'un des procédés susmentionnés, est avantageusement telle que les plantes ainsi transformées présentent une teneur moyenne en lignines réduite d'au moins environ 2 à 3 % par rapport à la teneur moyenne normale en lignines d'une plante non transformée.
A titre d'illustration, la teneur en lignines d'une plante peut être mesurée selon les méthodes décrites par Effland (1977) dans Tappi, 60, 143-144, ou par Iiyama et Wallis (1990) dans J. Sci. Food Agric., 51,145-161.
L'invention vise plus particulièrement l'application des procédés susmentionnés de diminution des teneurs en lignines dans les plantes, à l'obtention de plantes fourragères transformées génétiquement, présentant des teneurs en lignines réduites par rapport aux teneurs normales en lignines chez ces plantes, et dont la digestibilité se trouve être ainsi améliorée par rapport à ces mêmes plantes non transformées.
Parmi les principales plantes fourragères susceptibles d'être transformées dans le cadre de la présente invention, on peut citer: la luzerne, la fétuque, le maïs destiné à l'ensilage, etc...
L'invention concerne également l'application des procédés susmentionnés de diminution des teneurs en lignines chez les plantes, à l'obtention de plantes, et plus particulièrement d'arbres, transformés génétiquement, présentant des teneurs en lignines réduites par rapport aux teneurs normales en lignines chez ces plantes, ces plantes ou arbres étant particulièrement avantageux à utiliser dans le cadre de la production de la pâte à papier.
Un troisième domaine potentiel d'application des procédés susmentionnés de régulation négative de l'expression du gène de la laccase, concerne la stimulation de la croissance des plantes transformées. Il semble en effet qu'une lignification précoce et rapide soit un frein au grandissement cellulaire et donc à la croissance des végétaux. Ainsi la mise en oeuvre des procédés susmentionnés est susceptible de permettre pour les plantes ainsi transformées à lignification réduite une meilleure croissance et donc de meilleurs rendements.
L'invention concerne également un procédé d'augmentation de la quantité de lignines produites par biosynthèse chez les plantes, ce procédé étant effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet
ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase.
A ce titre, l'invention concerne plus particulièrement un procédé d'augmentation de la quantité de lignines produites par biosynthèse chez les plantes, ce procédé étant effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant
- au moins une séquence d'ADN selon l'invention représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment une séquence d'ADN codant pour tout ou partie de la CAD, et/ou de la CCR, et/ou de l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant tel que décrit ci-dessus, contenant la séquence d'ADN selon l'invention susmentionnée, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus, et, le cas échéant, contenant une ou plusieurs séquence(s) d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence d'ADN selon l'invention susmentionnée, ou un fragment ou une séquence dérivée de cette dernière, tels que définis ci-dessus, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus.
D'une manière générale, toujours si l'on considère que la teneur moyenne normale en lignines d'une plante varie entre environ 15% et environ 35% en poids de matière sèche, l'augmentation de la teneur en lignines résultant de la mise en oeuvre du procédé susmentionné, est avantageusement telle que les plantes ainsi transformées présentent une teneur moyenne en lignines augmentée d'au moins environ 2 à 5 % par rapport à la teneur moyenne normale d'une plante non transformée.
L'invention vise plus particulièrement l'application du procédé susmentionné d'augmentation des teneurs en lignines dans les plantes (encore désigné procédé de surexpression du gène de la laccase), à l'obtention de plantes transformées génétiquement, présentant des teneurs en lignifies augmentées par rapport aux teneurs normales en lignines chez ces plantes, et dont les propriétés de résistance à des attaques de l'environnement, notamment à des attaques parasitaires, se trouvent être ainsi améliorées par rapport à ces mêmes plantes non transformées. Il est particulièrement avantageux dans ce dernier cas, d'utiliser en association avec le gène de la laccase, ou une séquence dérivée, dans les vecteurs susmentionnés, des promoteurs spécifiques particulièrement exprimés dans les tissus de surface et/ou en réponse à la blessure.
Par ailleurs, l'invention concerne également l'application du procédé susmentionné de surexpression du gène de la laccase, à l'amélioration de la croissance des plantes ainsi transformées génétiquement, notamment dans certains domaines tels que l'horticulture ou l'arboriculture, où il est souhaitable d'obtenir des plantes de dimension réduite.
Enfin, les cycles benzéniques de la lignine ont une plus grande énergie intrinsèque que les chaînes aliphatiques des résidus glucose de la cellulose.
Ainsi, l'augmentation de la proportion de lignines chez les végétaux utilisés comme combustibles, selon le procédé susmentionné de l'invention, permet d'améliorer le potentiel énergétique de ces végétaux combustibles ainsi transformés.
La présente invention a également pour objet un procédé de modification de la composition, et donc des caractéristiques physicochimiques, des lignines produites par les plantes transformées, par rapport aux lignines normalement produites chez ces plantes, ledit procédé comprenant une étape de transformation de cellules de ces plantes à l'aide d'un vecteur contenant:
- une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un
ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
ladite transformation étant effectuée notamment à l'aide d'un vecteur tel que décrit ci-dessus.
S'agissant des techniques de transformation utilisées pour la mise en oeuvre d'un des procédés décrits ci-dessus de l'invention, on aura avantageusement recours aux techniques suivantes:
A) La technologie de transformation par l'intermédiaire du plasmide Ti d 'Agrobacterium tumefaciens décrite par Bevan (1984) Nucleic Acid Research, 12: 8711-8721. Elle fait appel essentiellement à la méthode de co-culture, et fait intervenir une co-transformation avec un gène de sélection pour pouvoir repérer les transformants.
Elle est particulièrement applicable aux dicotylédones, ex.: tabac, luzerne, colza.
B) La technique de transfert direct de gènes par biolistique décrite en détail par (Zumbrum et al., 1989, Technique 1, 204-216; Sanford et al., 1991,
Technique 3, 3-16).
Cette technique implique l'association de 1 'ADN recombinant selon l'invention à des microparticules d'or ou de tungstène qui sont propulsées à l'aide d'un canon à particules sur le tissu à transformer. Elle sera particulièrement appliquée à la transformation d'espèces réfractaires aux agrobactéries.
Dans les deux cas susmentionnés, la vérification de la présence de 'ADN recombinant selon l'invention sera réalisée par des expériences d'hybridation de type Southern et d'amplification génique (polymerase chain reaction), à l'aide de sondes et d'amorces oligonucléotidiques issues notamment de la séquence SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5.
L'invention concerne également les cellules de plantes transformées par un vecteur selon l'invention, notamment par les techniques décrites ci-dessus, et comprenant une séquence d'ADN selon l'invention intégrée de façon stable dans leur génome.
L'invention vise également les plantes transformées telles qu'obtenues par culture des cellules transformées susmentionnées.
Les plantes transformées peuvent être ensuite propagées par voie sexuelle ou par voie végétative in vitro ou in natura.
L'invention a également pour objet les fragments de plantes, notamment fruits, semences, pollen, transformés par incorporation dans leur génome d'une séquence d'ADN selon l'invention, à l'aide des vecteurs recombinants susmentionnés.
L'invention concerne également les anticorps dirigés contre les polypeptides recombinants de l'invention, et plus particulièrement ceux dirigés contre les laccases recombinantes, ou fragments de laccases, susmentionnés.
De tels anticorps peuvent être obtenus par immunisation d'un animal avec ces polypeptides suivie de la récupération des anticorps formés.
Il va de soi que cette production n'est pas limitée aux anticorps polyclonaux.
Elle s'applique encore à tout anticorps monoclonal produit par tout hybridome susceptible d'être formé, par des méthodes classiques, à partir des cellules spléniques d'un animal, notamment de souris ou de rat, immunisés contre l'un des polypeptides purifiés de l'invention d'une part, et des cellules d'un myélome approprié d'autre part, et d'être sélectionné, par sa capacité à produire des anticorps monoclonaux reconnaissant le polypeptide susmentionné initialement mis en oeuvre pour l'immunisation des animaux.
L'invention vise également l'utilisation des anticorps susmentionnés dirigés contre les polypeptides recombinants de l'invention, pour la mise en oeuvre d'une méthode de détection ou de dosage des laccases chez les plantes, à partir d'échantillons prélevés chez ces dernières.
L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit du clonage de l'ADNc codant pour la laccase de tabac.
Une banque d'ADNc provenant de tiges de tabac (Nicotiana tabacum cv
Samsun), construite dans le site EcoRI du vecteur X ZAPII (Stratagene,
Cambridge, U.K.), a été criblée à l'aide d'une sonde hétérologue de laccase de sycomore. Cette sonde correspond à la séquence d'un ADNc de 435 paires de base (pb) publiée par Delaunay et al. (1994), codant pour une partie de la laccase susmentionnée et recouvrant l'extrémité 3' de la séquence d'ADNc (comprenant une zone codant pour une protéine avec deux régions conservées de fixation du cuivre) publiée par La Fayette et al. (1995).
Environ 400.000 plages de lyse ont été criblées et quatre clones positifs ont été détectés. Après excision du phage XZAPII dans le plasmide pBluescript (SK-) in vivo, ces clones ont été examinés.
La taille approximative de l'insert des quatre clones (pTL1-4) varie d'environ 700 pb à 2000 pb.
Une analyse préliminaire à l'aide d'enzymes de restriction de ces clones, a permis de montrer que deux d'entre eux (pTL1 et pTL3) contiennent le même insert (également confirmé par séquençage partiel de ces clones).
Les trois clones pTL2, pTL3 et pTL4 ont été davantage caractérisés par séquençage.
Parmi les trois clones analysés, celui possédant l'insert de plus grande taille, à savoir pTL3, contient un ADNc codant pour une laccase complète.
L'insert PTL3 est long de 1984 pb (SEQ ID NO 1) et est constitué d'une région non traduite de 81 pb en 5', d'une phase de lecture ouverte codant pour une laccase de 1674 pb, et d'une région non codante de 229 pb en 3'.
Les deux autres ADNc des clones pTL2 et pTL4 sont longs de 1512 pb (SEQ ID NO 2) et 630 (SEQ ID NO 3) respectivement, et correspondent à des séquences partielles ne contenant pas la région codant pour la partie Nterminale de la laccase. Toutefois, les clones pTL2, -3 et 4 contiennent des séquences d'ADNc codant des laccases différentes, puisque leurs séquences sont différentes dans les régions se chevauchant. La séquence déduite en acides aminés de la séquence nucléotidique de l'insert de pTL3 est identique à 89 % aux séquences en acides aminés dérivées de pTL2 et pTL4 qui présentent 95 % d'identité entre elles. Les trois séquences d'ADNc ont également des régions non codantes en 3' différentes.
L'insert d'ADNc de pTL3 code pour un polypeptide de 557 acides aminés (61,9 kDa) avec un point isoélectrique (pI) de 10,08.
La protéine déduite possède douze sites de N-glycosylation possibles (Asn-Xaa-Ser/Thr). La région hydrophobe N-terminale de 22 acides aminés représente vraisemblablement le peptide signal, comme le laisse suggérer la comparaison avec la séquence de la laccase de sycomore. La scission de ce peptide signal doit avoir lieu entre les résidus Lys en position 22 et Arg en position 23 selon les règles de Von Heijne (Von Heijne, 1986). En conséquence, la protéine mature contient 535 acides aminés (59,4 kDa).
La comparaison de la séquence entière en acides aminés déduite de deux protéines ont 48 % d'identité, cette identité étant même supérieure (60 %) lorsque les 100 acides aminés C-terminaux sont considérés.
Cette région C-terminale contient deux sites potentiels de fixation du cuivre.
La séquence de la laccase de tabac a également été comparée avec d'autres oxydases à cuivre trouvées dans les banques de données. Parmi ces protéines, celles ayant présenté la plus grande homologie sont les ascorbate oxydases de concombre et de tabac avec 36 % et 34 % d'identité respectivement, par utilisation du programme BESTFIT (Genetics Computer
Group, Wisconsin Package, Version 8).
Des comparaisons similaires ont été effectuées avec les laccases fongiques; 31 % et 28 % d'identité en acides aminés ont été trouvés avec les séquences déduites respectivement de Cryptococcus neofornans et Neurospora crassa.
Dans chaque cas, des régions conservées dans la séquence peptidique de la laccase du tabac ont été identifiées, ces régions étant très similaires aux sites de fixation du cuivre conservées parmi les oxydases à cuivre (Ohkawa et al., 1989 ; Messerschmidt and Huber, 1990).
BIBLIOGRAPHIE - Boudet et al., Plant J., 8 (1995), 465-477 - Dean and Erikson, Holzforschung 48 (1994) Suppl. 21-33 - Delaunay et al., Molecular characterization of sycomore laccase. 4th International
Congress of Plant Molecular Biology, Amsterdam, The Netherlands, June 19-24, 1994 - Driouich et al., Plant J., 2 (1992), 13-24 - La Fayette et al., Plant Physiol., 107 (1995), 667-668 - Messerschmidt and Huber, Eur. J. Biochem., 187 (1990), 341-352 - Ohkawa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86 (1989), 1239-1243 - O'Malley et al., Plant J. 4 (1993), 751-757; - Ryden and Hunt, J. Mol. Evol., 36 (1993), 41-66 - Van Heijne, Nucleic Acides Res., 14 (1986), 46834690.
LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE:
(i) DEPOSANT:
(A) NOM: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
(B) RUE: 3, rue Michel-Ange
(C) VILLE: PARIS
(E) PAYS: FRANCE
(F) CODE POSTAL: 75016 PARIS
(ii) TITRE DE L' INVENTION: SEQUENCES D'ADN CODANT POUR DES LACCASES,
ET LEURS APPLICATIONS DANS LE DOMAINE DE LA REGULATION DES
TENEURS EN LIGNINES DES PLANTES.
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 6
(iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR:
(A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk
(B) ORDINATEUR: IBM PC compatible
(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS
(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 1984 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 82..1752
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:
CAGAAAATCA TTTCAATTCG TTCTCTATAG CACAATTGTA AATAGAAGTC CAATTGCAGA 60
AATTTCAAGA AAGAGACAAA A ATG AAC TCT TGG ATT CGT CTT TTC ATA GTA 111
Met Asn Ser Trp Ile Arg Leu Phe Ile Val
1 5 10
TTG GCA GCT TGT CTT TTT CCT CTT GTC GTT GAA TGC AGG ATT CGA CAT 159
Leu Ala Ala Cys Leu Phe Pro Leu Val Val Glu Cys Arg Ile Arg His
15 20 25
TAC AAG TTC AAT GTG GTA ATG AAG AAC ACG ACT CGC CTT TGT TCA TCC 207
Tyr Lys Phe Asn Val Val Met Lys Asn Thr Thr Arg Leu Cys Ser Ser
30 35 40
AAG CCC ATT GTT ACT GTT AAT GGA AAA TTT CCA GGA CCT ACA ATC TAT 255
Lys Pro Ile Val Thr Val Asn Gly Lys Phe Pro Gly Pro Thr Ile Tyr
45 50 55
GCT CGG GAA GGT GAC ACA GTA CTT GTC AAA GTT GTT AAC CAT GTC AAG 303
Ala Arg Glu Gly Asp Thr Val Leu Val Lys Val Val Asn His Val Lys
60 65 70
TAT AAT CTC TCT ATC CAT TGG CAT GGT ATT AGA CAA CTT AGA ACA GGT 351
Tyr Asn Leu Ser Ile His Trp His Gly Ile Arg Gln Leu Arg Thr Gly
75 80 85 90
TGG GCA GAT GGA CCA GCA TAC ATC ACA CAA TGT CCA ATT CAG CCA GGG 399
Trp Ala Asp Gly Pro Ala Tyr Ile Thr Gln Cys Pro Ile Gln Pro Gly
95 100 105
CAA AAC TAT GTG TAT AAC TTC ACT ATT ACA GGC CAA AGG GGT ACA CTA 447 Gln Asn Tyr Val Tyr Asn Phe Thr Ile Thr Gly Gln Arg Gly Thr Leu
110 115 120
TTT TGG CAT GCT CAT ATT TTG TGG CTA AGG GCC ACT GTT CAT GGT GCA 495
Phe Trp His Ala His Ile Leu Trp Leu Arg Ala Thr Val His Gly Ala
125 130 135
ATT GTT ATC TTG CCT AAC CTT GGA GTG CCT TAT CCA TTC CCT AAA CCC 543
Ile Val Ile Leu Pro Asn Leu Gly Val Pro Tyr Pro Phe Pro Lys Pro
140 145 150
AAC CAC GAA GCT GTC GTG ATC CTA GCT GAA TGG TGG AAA TCT GAT ACC 591
Asn His Glu Ala Val Val Ile Leu Ala Glu Trp Trp Lys Ser Asp Thr 155 160 165 170
GAA GCT GTG ATT AAT GAA GCC ATA AAA TCA GGA TTA GCC CCT AAT GTT 639
Glu Ala Val Ile Asn Glu Ala Ile Lys Ser Gly Leu Ala Pro Asn Val
175 180 185
TCT GAT GCT CAC ACT ATT AAT GGT CAT CCG GGA CCC GTC TCA AAT TGC 687
Ser Asp Ala His Thr Ile Asn Gly His Pro Gly Pro Val Ser Asn Cys
190 195 200
GCA TCA CAA GGT GGA TAC AAA TTG AAC GTT GAT CCA GGA AAA ACC TAC 735
Ala Ser Gln Gly Gly Tyr Lys Leu Asn Val Asp Pro Gly Lys Thr Tyr
205 210 215
ATG TTA CGA GTC ATC AAC GCT GCG CTC AAT GAA GAA CTC TTT TTC AAA 783
Met Leu Arg Val Ile Asn Ala Ala Leu Asn Glu Glu Leu Phe Phe Lys
220 225 230
ATT GCT GGC CAT AAA ATG ACA GTA GTT GAA GTT GAT GCC ACT TAC ATT 831
Ile Ala Gly His Lys Met Thr Val Val Glu Val Asp Ala Thr Tyr Ile 235 240 245 250 AAA CCT TTC AAA ACA GAC ACA ATT GTA ATT GCT CCT GGC CAA ACA ACA 879
Lys Pro Phe Lys Thr Asp Thr Ile Val Ile Ala Pro Gly Gln Thr Thr
255 260 265
AAT GTA ATT GTC ACT GCC AAT CAA GGT TCT GGA ARA TAC ATG GTT GCT 927
Asn Val Ile Val Thr Ala Asn Gln Gly Ser Gly Lys Tyr Met Val Ala
270 275 280
GCT TCA CCT TTT ATG GAT GCA CCA ATT GCT GTT GAT AAT GTT ACA GCA 975
Ala Ser Pro Phe Met Asp Ala Pro Ile Ala Val Asp Asn Val Thr Ala
285 290 295
ATA GCC ACT TTA CAT TAT TCT GGC ACA CAA GGA AAT AGC CAC ATT TCA 1023
Ile Ala Thr Leu His Tyr Ser Gly Thr Gln Gly Asn Ser His Ile Ser
300 305 310
CTT ACT AGT ACA CCA CCT AAA AAT GCC ACC CCT GTA GCC AAC ACT TTT 1071
Leu Thr Ser Thr Pro Pro Lys Asn Ala Thr Pro Val Ala Asn Thr Phe 315 320 325 330
CTT GAT TCT TTA AGA AGC CTG AAT TCC AAA AAA TAC CCT GCT AAA GTT 1119
Leu Asp Ser Leu Arg Ser Leu Asn Ser Lys Lys Tyr Pro Ala Lys Val
335 340 345
CCC AAA AAA ATT GAT CAT TCC CTA TTT TTC ACG GTA GGT TTA GGG ATT 1167
Pro Lys Lys Ile Asp His Ser Leu Phe Phe Thr Val Gly Leu Gly Ile
350 355 360
AAT CCA TGC CCA ACT TGC AAA CAA GGT AAT GGA AGC AGA GTT GTG GCT 1215
Asn Pro Cys Pro Thr Cys Lys Gln Gly Asn Gly Ser Arg Val Val Ala
365 370 375
AGT GTA AAC AAT GTT ACA TTC GTT ATG CCA ACG GTT GCC CTT TTA CAA 1263
Ser Val Asn Asn Val Thr Phe Val Met Pro Thr Val Ala Leu Leu Gln
380 385 390
GCA CAT TTC TTT GGG ACT AAA GGA GTT TTC ACG ACA GAT TTT CCA GCA 1311
Ala His Phe Phe Gly Thr Lys Gly Val Phe Thr Thr Asp Phe Pro Ala 395 400 405 410
AAC CCG CCT TTT GCT TTC AAC TAT ACG GGA ACA GGA CCA ACT AAT TTG 1359
Asn Pro Pro Phe Ala Phe Asn Tyr Thr Gly Thr Gly Pro Thr Asn Leu
415 420 425
GCG ACG ATG AAT GGG ACT AAG GTT TAT AGG CTG CGG TAT AAC GAT ACA 1407
Ala Thr Met Asn Gly Thr Lys Val Tyr Arg Leu Arg Tyr Asn Asp Thr
430 435 440
GTT CAA TTG GTT TTG CAG GAT ACT GGA ATT ATA GCC CCT GAG AAC CAT 1455
Val Gln Leu Val Leu Gln Asp Thr Gly Ile Ile Ala Pro Glu Asn His
445 450 455
CCA ATC CAT TTG CAT GGC TTC AAT TTT TTT CTA GTG GGT AAA GGC ATA 1503
Pro Ile His Leu His Gly Phe Asn Phe Phe Leu Val Gly Lys Gly Ile
460 465 470
GGA AAT TTT AAT CCA AAA ACA GAT CCT AAG AAT TTT AAT CTT GTG GAT 1551
Gly Asn Phe Asn Pro Lys Thr Asp Pro Lys Asn Phe Asn Leu Val Asp 475 480 485 490
CCT GTT GAG AGG AAT ACA GTT GGT GTT CCT GCT GGA GGA TGG GTT GCT 1599
Pro Val Glu Arg Asn Thr Val Gly Val Pro Ala Gly Gly Trp Val Ala
495 500 505
ATA AGA TTT CGT GCT GAC AAT CCA GGA GTT TGG TTT ATG CAT TGT CAT 1647
Ile Arg Phe Arg Ala Asp Asn Pro Gly Val Trp Phe Met His Cys His
510 515 520
CTA GAG ATA CAC ACA ACA TGG GGA TTG AAA ATG GCA TGG CTT GTA GAT 1695
Leu Glu Ile His Thr Thr Trp Gly Leu Lys Met Ala Trp Leu Val Asp
525 530 535
AAT GGC AAA GGC CCA AAT GAG TCC CTT TTG CCA CCT CCT AAG GAT CTT 1743
Asn Gly Lys Gly Pro Asn Glu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Lys Asp Leu
540 545 550
CCA AAA TGC TAAAATTGGA GAGGCCTTTT TTAAAGGAGT TAAATTTCAC 1792
Pro Lys Cys 555 ATACGAAGCA TAATGTAGGG AAAGCAGGCT GAAGACTGCA CCAAGAGAGA CAAAGAAGAA 1852
AGGCGAGTCA AAAAGCAATG TATTCATTTT TGAGTGAAAG AGAAAAAACA TTTTTTTTCC 1912 TCAGCCAAAT TTTAATAATT ATACGAGTAT TCAATGTATA CATTTTTTGA GATTGTTAAT 1972 GGAAGTTTGA AG 1984 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 557 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:
Met Asn Ser Trp Ile Arg Leu Phe Ile Val Leu Ala Ala Cys Leu Phe
1 5 10 15
Pro Leu Val Val Glu Cys Arg Ile Arg His Tyr Lys Phe Asn Val Val
20 25 30
Met Lys Asn Thr Thr Arg Leu Cys Ser Ser Lys Pro Ile Val Thr Val
35 40 45
Asn Gly Lys Phe Pro Gly Pro Thr Ile Tyr Ala Arg Glu Gly Asp Thr
50 55 60
Val Leu Val Lys Val Val Asn His Val Lys Tyr Asn Leu Ser Ile His
65 70 75 80
Trp His Gly Ile Arg Gln Leu Arg Thr Gly Trp Ala Asp Gly Pro Ala
85 90 95
Tyr Ile Thr Gln Cys Pro Ile Gln Pro Gly Gln Asn Tyr Val Tyr Asn
100 105 110
Phe Thr Ile Thr Gly Gln Arg Gly Thr Leu Phe Trp His Ala His Ile
115 120 125
Leu Trp Leu Arg Ala Thr Val His Gly Ala Ile Val Ile Leu Pro Asn
130 135 140
Leu Gly Val Pro Tyr Pro Phe Pro Lys Pro Asn His Glu Ala Val Val 145 150 155 160
Ile Leu Ala Glu Trp Trp Lys Ser Asp Thr Glu Ala Val Ile Asn Glu
165 170 175
Ala Ile Lys Ser Gly Leu Ala Pro Asn Val Ser Asp Ala His Thr Ile
180 185 190
Asn Gly His Pro Gly Pro Val Ser Asn Cys Ala Ser Gln Gly Gly Tyr
195 200 205
Lys Leu Asn Val Asp Pro Gly Lys Thr Tyr Met Leu Arg Val Ile Asn
210 215 220
Ala Ala Leu Asn Glu Glu Leu Phe Phe Lys Ile Ala Gly His Lys Met 225 230 235 240
Thr Val Val Glu Val Asp Ala Thr Tyr Ile Lys Pro Phe Lys Thr Asp
245 250 255
Thr Ile Val Ile Ala Pro Gly Gln Thr Thr Asn Val Ile Val Thr Ala
260 265 270
Asn Gln Gly Ser Gly Lys Tyr Met Val Ala Ala Ser Pro Phe Met Asp
275 280 285
Ala Pro Ile Ala Val Asp Asn Val Thr Ala Ile Ala Thr Leu His Tyr
290 295 300
Ser Gly Thr Gln Gly Asn Ser His Ile Ser Leu Thr Ser Thr Pro Pro 305 310 315 320
Lys Asn Ala Thr Pro Val Ala Asn Thr Phe Leu Asp Ser Leu Arg Ser
325 330 335
Leu Asn Ser Lys Lys Tyr Pro Ala Lys Val Pro Lys Lys Ile Asp His
340 345 350
Ser Leu Phe Phe Thr Val Gly Leu Gly Ile Asn Pro Cys Pro Thr Cys
355 360 365
Lys Gln Gly Asn Gly Ser Arg Val Val Ala Ser Val Asn Asn Val Thr
370 375 380
Phe Val Met Pro Thr Val Ala Leu Leu Gln Ala His Phe Phe Gly Thr 385 390 395 400
Lys Gly Val Phe Thr Thr Asp Phe Pro Ala Asn Pro Pro Phe Ala Phe
405 410 415
Asn Tyr Thr Gly Thr Gly Pro Thr Asn Leu Ala Thr Met Asn Gly Thr
420 425 430
Lys Val Tyr Arg Leu Arg Tyr Asn Asp Thr Val Gln Leu Val Leu Gln
435 440 445
Asp Thr Gly Ile Ile Ala Pro Glu Asn His Pro Ile His Leu His Gly
450 455 460
Phe Asn Phe Phe Leu Val Gly Lys Gly Ile Gly Asn Phe Asn Pro Lys 465 470 475 480
Thr Asp Pro Lys Asn Phe Asn Leu Val Asp Pro Val Glu Arg Asn Thr
485 490 495
Val Gly Val Pro Ala Gly Gly Trp Val Ala Ile Arg Phe Arg Ala Asp
500 505 510
Asn Pro Gly Val Trp Phe Met His Cys His Leu Glu Ile His Thr Thr
515 520 525
Trp Gly Leu Lys Met Ala Trp Leu Val Asp Asn Gly Lys Gly Pro Asn
530 535 540
Glu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Lys Asp Leu Pro Lys Cys 545 550 555
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 1512 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..1227
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:
CAT CCA TTC CCC AAA CCC AAC CAT GAA GCT GTC GTT GTT TTA GCT GAA 48
His Pro Phe Pro Lys Pro Asn His Glu Ala Val Val Val Leu Ala Glu
1 5 10 15
TGG TGG AAA TCG GAT ACT GAA GCT GTG ATT AAT GAA GCT CTA AAA TCA 96
Trp Trp Lys Ser Asp Thr Glu Ala Val Ile Asn Glu Ala Leu Lys Ser
20 25 30
GGT TTA GCC CCC AAT GTT TCC GAT GCT CAC ACA ATC AAT GGT CAT CCT 144
Gly Leu Ala Pro Asn Val Ser Asp Ala His Thr Ile Asn Gly His Pro
35 40 45
GGA CCA GTT TCC AAT TGT CCG ACC CAA GGT GGA TAC AGC TTG AGT GTT 192
Gly Pro Val Ser Asn Cys Pro Thr Gln Gly Gly Tyr Ser Leu Ser Val
50 55 60
GAA CCT GGA AAA ACA TAC ATG TTA CGA GTG ATC AAT GCT GCG CTC AAT 240
Glu Pro Gly Lys Thr Tyr Met Leu Arg Val Ile Asn Ala Ala Leu Asn
65 70 75 80
GAA GAA CTC TTC TTT AAG ATT GCT GGC CAC AAA ATG ACT GTA GTT GAA 288
Glu Glu Leu Phe Phe Lys Ile Ala Gly His Lys Met Thr Val Val Glu
85 90 95
GTG GAT GCC ACT TAC GTA AAA CCC TTC AAA ACA GAC ACA ATT GTA ATC 336
Val Asp Ala Thr Tyr Val Lys Pro Phe Lys Thr Asp Thr Ile Val Ile
100 105 110
GCC CCT GGC CAA ACA ACA AAT GTT ATA GTA ACT GCT GAT CAG AGT TTC 384
Ala Pro Gly Gln Thr Thr Asn Val Ile Val Thr Ala Asp Gln Ser Phe
115 120 125
GGA AAA TAT ATG GTT GCT GCT TCT CCC TTT ATG GAC GCT CCT ATC GCC 432
Gly Lys Tyr Met Val Ala Ala Ser Pro Phe Met Asp Ala Pro Ile Ala
130 135 140
GTC GAC AAT ATC ACG GCC ACC GCC ACG TTG CAT TAT TCC GGC GCA CTA 480
Val Asp Asn Ile Thr Ala Thr Ala Thr Leu His Tyr Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
GGC ACT TCT CCC ACA ACT CTC ACT AGT ACT CCG CCC CAA AAC GCC ACT 528
Gly Thr Ser Pro Thr Thr Leu Thr Ser Thr Pro Pro Gln Asn Ala Thr
165 170 175
TCA GTA GCC AAC AAT TTT CTT GAC GCT CTC AAA AGT CTT AAT TCA AAA 576
Ser Val Ala Asn Asn Phe Leu Asp Ala Leu Lys Ser Leu Asn Ser Lys
180 185 190 AAA TAC CCA GCT AAA GTT CCA CAA ACT GTG GAT CAT TCG TTG TTT TTC 624
Lys Tyr Pro Ala Lys Val Pro Gln Thr Val Asp His Ser Leu Phe Phe
195 200 205
ACT GCT GGA CTT GGA ATT AAT CCA TGT CCA ACG TGT AAA CAA GCT AAT 672
Thr Ala Gly Leu Gly Ile Asn Pro Cys Pro Thr Cys Lys Gln Ala Asn
210 215 220
GGC AGC AGA GTT GTC GCT AGT GTA AAT AAT GTT ACA TTT GTT ATG CCA 720
Gly Ser Arg Val Val Ala Ser Val Asn Asn Val Thr Phe Val Met Pro 225 230 235 240
ACC GTA GCG CTT TTA CAA GCG CAT TTC TTT GGC ATA AAT GGT GTT TTC 768
Thr Val Ala Leu Leu Gln Ala His Phe Phe Gly Ile Asn Gly Val Phe
245 250 255
ACA ACA GAT TTT CCA GCG AAT CCG CCA TTC GTT TTT AAC TAT ACT GGA 816
Thr Thr Asp Phe Pro Ala Asn Pro Pro Phe Val Phe Asn Tyr Thr Gly
260 265 270
ACA CCA CCA ACA AAC TTG GCT ACA ACG AAT GGG ACG AAG GTT TAT CGG 864
Thr Pro Pro Thr Asn Leu Ala Thr Thr Asn Gly Thr Lys Val Tyr Arg
275 280 285
TTG CCT TAT AAT GCA ACA GTT CAA TTA GTT TTG CAG GAT ACT GGA ATT 912
Leu Pro Tyr Asn Ala Thr Val Gln Leu Val Leu Gln Asp Thr Gly Ile
290 295 300
ATA GCC CCT GAA AAC CAT CCA ATC CAT TTG CAT GGT TTC AAT TTC TTT 960
Ile Ala Pro Glu Asn His Pro Ile His Leu His Gly Phe Asn Phe Phe 305 310 315 320
TTA GTG GGT AAA GGA CTA GGG AAT TTC AAT TCC AAA ACA GAC CCA AAG 1008
Leu Val Gly Lys Gly Leu Gly Asn Phe Asn Ser Lys Thr Asp Pro Lys
325 330 335
AAT TTT AAT CTT ATT GAT CCT GTT GAA AGG AAT ACA ATT GGA GTG CCT 1056
Asn Phe Asn Leu Ile Asp Pro Val Glu Arg Asn Thr Ile Gly Val Pro
340 345 350
TCT GGA GGA TGG GTT GCC ATA AGA TGG CTT GCT GAC AAT CCA GGA GTT 1104
Ser Gly Gly Trp Val Ala Ile Arg Trp Leu Ala Asp Asn Pro Gly Val
355 360 365
TGG TTT ATG CAT TGT CAT CTA GAG GTG CAC ACA ACA TGG GGA TTG AAA 1152
Trp Phe Met His Cys His Leu Glu Val His Thr Thr Trp Gly Leu Lys
370 375 380
ATG GCA TTC CTT GTA GAT AAT GGC AAG GGT CCA AAG GAG TCA CTT CTG 1200
Met Ala Phe Leu Val Asp Asn Gly Lys Gly Pro Lys Glu Ser Leu Leu 385 390 395 400
CCA CCT CCA AAG GAT CTC CCA AAA TGC TAAAATAGTG GTGAAAATCC 1247
Pro Pro Pro Lys Asp Leu Pro Lys Cys
405
ATTTGTTTCT CCTCTCAACA AGTTCAGACA AATCTTCATC TGCAACATGT AAGAAAGCAG 1307 CAAAAGCTCG ACCATGCAAT GAGAGAAAGA AGAATTAGAG AGTCAATAAG CAATGTATTC 1367
ATTTTCTTGA GTGAAAAAAG AAAGGGAGAT TTTTGCTCAA GCAATCCTCA ATAATTATGT 1427 TTGTATGCAA ATATACATTT TTTTTGTCAT TGTTCATGGA AGTTTGAGAA ATGGATTGTT 1487
TCTTTTATCA AAAAAAAAAA AAAAG 1512
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 409 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:
His Pro Phe Pro Lys Pro Asn His Glu Ala Val Val Val Leu Ala Glu
1 5 10 15
Trp Trp Lys Ser Asp Thr Glu Ala Val Ile Asn Glu Ala Leu Lys Ser
20 25 30
Gly Leu Ala Pro Asn Val Ser Asp Ala His Thr Ile Asn Gly His Pro
35 40 45
Gly Pro Val Ser Asn Cys Pro Thr Gln Gly Gly Tyr Ser Leu Ser Val
50 55 60
Glu Pro Gly Lys Thr Tyr Met Leu Arg Val Ile Asn Ala Ala Leu Asn
65 70 75 80
Glu Glu Leu Phe Phe Lys Ile Ala Gly His Lys Met Thr Val Val Glu
85 90 95
Val Asp Ala Thr Tyr Val Lys Pro Phe Lys Thr Asp Thr Ile Val Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Thr Asn Val Ile Val Thr Ala Asp Gln Ser Phe
115 120 125
Gly Lys Tyr Met Val Ala Ala Ser Pro Phe Met Asp Ala Pro Ile Ala
130 135 140
Val Asp Asn Ile Thr Ala Thr Ala Thr Leu His Tyr Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Gly Thr Ser Pro Thr Thr Leu Thr Ser Thr Pro Pro Gln Asn Ala Thr
165 170 175
Ser Val Ala Asn Asn Phe Leu Asp Ala Leu Lys Ser Leu Asn Ser Lys
180 185 190
Lys Tyr Pro Ala Lys Val Pro Gln Thr Val Asp His Ser Leu Phe Phe
195 200 205
Thr Ala Gly Leu Gly Ile Asn Pro Cys Pro Thr Cys Lys Gln Ala Asn
210 215 220
Gly Ser Arg Val Val Ala Ser Val Asn Asn Val Thr Phe Val Met Pro 225 230 235 240
Thr Val Ala Leu Leu Gln Ala His Phe Phe Gly Ile Asn Gly Val Phe
245 250 255
Thr Thr Asp Phe Pro Ala Asn Pro Pro Phe Val Phe Asn Tyr Thr Gly
260 265 270
Thr Pro Pro Thr Asn Leu Ala Thr Thr Asn Gly Thr Lys Val Tyr Arg
275 280 285
Leu Pro Tyr Asn Ala Thr Val Gln Leu Val Leu Gln Asp Thr Gly Ile
290 295 300
Ile Ala Pro Glu Asn His Pro Ile His Leu His Gly Phe Asn Phe Phe 305 310 315 320
Leu Val Gly Lys Gly Leu Gly Asn Phe Asn Ser Lys Thr Asp Pro Lys
325 330 335
Asn Phe Asn Leu Ile Asp Pro Val Glu Arg Asn Thr Ile Gly Val Pro
340 345 350
Ser Gly Gly Trp Val Ala Ile Arg Trp Leu Ala Asp Asn Pro Gly Val
355 360 365
Trp Phe Met His Cys His Leu Glu Val His Thr Thr Trp Gly Leu Lys
370 375 380
Met Ala Phe Leu Val Asp Asn Gly Lys Gly Pro Lys Glu Ser Leu Leu 385 390 395 400
Pro Pro Pro Lys Asp Leu Pro Lys Cys
405 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 5:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 630 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..273
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:
CTT TTT TTA GTG GGT ARA GGA CTA GGA AAT TTC AAT TCC ARA ACA GAC 48
Leu Phe Leu Val Gly Lys Gly Leu Gly Asn Phe Asn Ser Lys Thr Asp
1 5 10 15
CCT AAG AAT TTT AAT CTT ATT GAT CCT GTT GAA AGG AAT ACA ATT GGA 96
Pro Lys Asn Phe Asn Leu Ile Asp Pro Val Glu Arg Asn Thr Ile Gly
20 25 30
GTG CCT TCT GGA GGA TGG GTT GCC ATA AGA TGG CGT GCT GAC AAT CCA 144
Val Pro Ser Gly Gly Trp Val Ala Ile Arg Trp Arg Ala Asp Asn Pro
35 40 45
GGA GTT TGG TTT ATG CAT TGT CAT CTA GAG GTG CAC ACA ACA TGG GGA 192
Gly Val Trp Phe Met His Cys His Leu Glu Val His Thr Thr Trp Gly
50 55 60
TTG AAA ATG GCA TTC CTT GTA GAT AAT GGC AAG GGT TCT AAT GAG TCA 240
Leu Lys Met Ala Phe Leu Val Asp Asn Gly Lys Gly Ser Asn Glu Ser
65 70 75 80
CTT TTG CCA CCA CCA AAG GAT CTC CCA AAA TGC TAAAATAATG ATGGAAATCC 293
Leu Leu Pro Pro Pro Lys Asp Leu Pro Lys Cys
85 90
ATTTGTTTCT CCTCTCAACA AGTTCAGACA AATCTTAATT TGCAACAAAA GCTGCACCAA 353 GCAATGAGAG AAGAATTAGA GTCAATAAGC AATGTACTAT TCATTTTCTT GAGTGAAAAA 413
GACTAGGAGA ATTTTGCTCA AGCAATATTC AATAATTATG TTTGTATGCA TATATACATT 473
TTTTTTTGTC CTTGTTCAAG GAAGTTTGAG AGATGGATTG TACGTTTCTT TTACCTCTTA 533
TTATTGTCAC TCCCAAGTCA TACTTTCTGT TAAAAGTTTT CTGAATGTTT TAAATTTAGA 593 AATAACATTA CAGTAACAGA AAAAAAAAAA AAAAAAG 630
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 6:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 91 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:
Leu Phe Leu Val Gly Lys Gly Leu Gly Asn Phe Asn Ser Lys Thr Asp
1 5 10 15
Pro Lys Asn Phe Asn Leu Ile Asp Pro Val Glu Arg Asn Thr Ile Gly
20 25 30
Val Pro Ser Gly Gly Trp Val Ala Ile Arg Trp Arg Ala Asp Asn Pro
35 40 45
Gly Val Trp Phe Met His Cys His Leu Glu Val His Thr Thr Trp Gly
50 55 60
Leu Lys Met Ala Phe Leu Val Asp Asn Gly Lys Gly Ser Asn Glu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Pro Pro Pro Lys Asp Leu Pro Lys Cys
85 90

Claims (19)

REVENDICATIONS
1. Utilisation de séquences nucléotidiques recombinantes contenant une (ou plusieurs) région(s) codante(s), cette (ces) région(s) codante(s) étant constituée(s)
- d'une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou d'un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou d'une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- d'une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, pour la transformation de cellules végétales en vue de l'obtention de plantes transgéniques au sein desquelles la biosynthèse des lignines est régulée soit dans le sens d'une augmentation, soit dans le sens d'une diminution des teneurs en lignines produites, par rapport aux teneurs normales en lignines produites chez les plantes non transformées, et/ou dans le sens d'une modification de la composition des lignines produites par lesdites plantes transgéniques par rapport aux lignines produites chez les plantes non transformées.
2. Utilisation de séquences nucléotidiques recombinantes selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elles contiennent à titre de région codante, tout ou partie d'une séquence nucléotidique choisie parmi les suivantes:
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 1, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour la laccase de tabac représentée par SEQ ID NO 2,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 3, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 4,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 5, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 6,
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, et plus particulièrement avec l'ARNm codé par les séquences SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, et
SEQ ID NO 5 respectivement,
- la séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant soit pour un ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou pour les fragments de laccase représentés par SEQ ID NO 4, ou SEQ ID NO 6, soit pour une protéine dérivée de la laccase ou fragments de laccase susmentionnés,
- la séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique complémentaire susmentionnée, par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un
ARNm codant pour une laccase chez les plantes, et plus particulièrement avec un des ARNm susmentionnés.
3. Séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante, I'une au moins des séquences suivantes
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 1, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par
SEQ ID NO 2, ou
- un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 1 susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ci-dessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par
SEQ ID NO 2, ou pour une protéine dérivée de cette dernière,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 3, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 4, ou
un fragment de la séquence nucléotidique représentée par
SEQ ID NO 3, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 4, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 3, susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ci-dessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour le fragment de laccase représenté par
SEQ ID NO 4, ou pour une protéine dérivée de ce dernier,
- la séquence nucléotidique représentée par SEQ ID NO 5, codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase de tabac, ce fragment étant représenté par SEQ ID NO 6, ou
un fragment de la séquence nucléotidique représentée par
SEQ ID NO 5, ce fragment codant pour un fragment de la laccase représentée par SEQ ID NO 6, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence représentée par
SEQ ID NO 5, susmentionnée, ou d'un fragment tel que décrit ci-dessus de cette séquence, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm codant lui-même pour le fragment de laccase représenté par
SEQ ID NO 6, ou pour une protéine dérivée de ce dernier.
4. Séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de région codante, I'une au moins des séquences suivantes
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 1, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s 'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, à savoir avec 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 1, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 2, tel que défini ci-dessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné,
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 3, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 4, à savoir 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 3, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 4, telle que définie cidessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné,
- la séquence nucléotidique complémentaire de celle représentée par
SEQ ID NO 5, cette séquence complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec l'ARNm codant lui-même pour la laccase représentée par SEQ ID NO 6, à savoir 'ARNm codé par la séquence représentée par SEQ ID NO 5, ou codé par une séquence dérivée de cette dernière, telle que définie ci-dessus, ou
- un fragment de la séquence complémentaire susmentionnée, ce fragment de séquence codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes, notamment chez le tabac, et plus particulièrement avec I'ARNm codant luimême pour la laccase représentée par SEQ ID NO 6, telle que définie cidessus, ou
- toute séquence nucléotidique dérivée de la séquence complémentaire susmentionnée, ou du fragment de cette séquence complémentaire tel que décrit ci-dessus, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné.
5. ARNm codé par une séquence d'ADN selon la revendication 3, et plus particulièrement
- 1'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 1, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ci-dessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour la laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 2, ou pour un fragment de cette laccase ou une protéine dérivée tels que définis ci-dessus,
- l'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 3, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ci-dessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour le fragment d'une laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 4, ou pour un fragment de ce dernier ou une protéine dérivée tels que définis cidessus,
- l'ARNm codé par la séquence d'ADN représentée par SEQ ID NO 5, ou codé par un fragment ou une séquence dérivée tels que définis ci-dessus, ledit ARNm étant susceptible de coder à son tour pour le fragment d'une laccase présente chez le tabac, telle que représentée par SEQ ID NO 6, ou pour un fragment de ce dernier ou une protéine dérivée tels que définis cidessus.
6. ARNm antisens, caractérisé en ce qu'il comprend des nucléotides complémentaires de la totalité ou d'une partie seulement des nucléotides constituant un ARNm selon la revendication 5, et en ce qu'il est susceptible de s'hybrider avec ce dernier.
7. Laccases de tabac telles qu'obtenues sous forme essentiellement pure par extraction et purification à partir de tabac, et plus particulièrement la laccase représentée par SEQ ID NO 2, ou celle comprenant le polypeptide représenté par SEQ ID NO 4, ou encore celle comprenant le polypeptide représenté par SEQ ID NO 6, ou toute protéine dérivée de ces dernières, notamment par addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés, ou tout fragment issu desdites laccases ou de leurs séquences dérivées.
8. Séquences nucléotidiques codant pour la laccase représentée par SEQ
ID NO 2, ou pour les polypeptides représentés par SEQ ID NO 4, et SEQ ID
NO 6, ou toute séquence dérivée ou fragment de ces derniers, tels que définis dans la revendication 7, lesdites séquences nucléotidiques étant caractérisées en ce qu'elles correspondent à tout ou partie des séquences représentées par
SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3, ou SEQ ID NO 5, respectivement, ou à toute séquence dérivée de ces dernières par dégénérescence du code génétique, et étant néanmoins susceptibles de coder pour les laccases ou séquence dérivée ou fragment de ces dernières, tels que définis ci-dessus.
9. Complexes formés entre un ARNm antisens selon la revendication 6, et un ARNm selon la revendication 5.
10. Séquence nucléotidique recombinante, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'ADN selon la revendication 3, susceptible de coder pour un ARNm lui-même susceptible de coder pour une laccase ou toute séquence dérivée ou fragment de cette dernière, ladite séquence selon la revendication 3 étant insérée dans une séquence hétérologue.
11. Séquence nucléotidique recombinante, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'ADN complémentaire selon la revendication 4, insérée dans une séquence hétérologue, ladite séquence d'ADN complémentaire codant pour un ARNm antisens susceptible de s hybrider avec 1' ARNm codant pour une laccase ou toute séquence dérivée ou fragment de cette dernière.
12. Séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 10 ou la revendication 11, caractérisé en ce qu'elle comprend les éléments nécessaires pour réguler l'expression de la séquence nucléotidique selon la revendication 3, ou de sa séquence complémentaire selon la revendication 4, notamment un promoteur et un terminateur de la transcription de ces séquences, et le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment l'ARNm codant pour l'alcool cinnamylique deshydrogénase (CAD), et/ou l'ARNm codant pour la cinnamoyl CoA réductase (CCR), et/ou l'ARNm codant pour 0-méthyltransférase (OMT), ou comprenant également à titre de région codante au moins une séquence nucléotidique codant pour tout ou partie d'un
ARNm antisens susceptible de s'hybrider avec l'ARNm susmentionné, notamment avec l'ARNm codant pour la CAD, la CCR ou l'OMT.
13. Vecteur recombinant caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique recombinante selon l'une des revendications 10 à 12, intégrée dans l'un de ses sites de son génome non essentiels pour sa réplication.
14. Procédé de régulation de la biosynthèse des lignines chez les plantes, soit par diminution, soit par augmentation des quantités de lignines produites, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez ces plantes, ledit procédé comprenant une étape de transformation de cellules de ces plantes à l'aide d'un vecteur contenant:
- une séquence nucléotidique codant pour un ARN messager (ARNm), cet ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou un fragment de la séquence nucléotidique susmentionnée, ce fragment codant pour un
ARNm, cet ARNm codant lui-même pour un fragment d'une laccase, ou une séquence nucléotidique dérivée de la séquence nucléotidique susmentionnée, ou dérivée du fragment susmentionné, notamment par mutation et/ou addition, et/ou suppression, et/ou substitution d'un ou plusieurs nucléotides, cette séquence dérivée codant pour un ARNm, cet ARNm codant lui-même pour une protéine dérivée d'une laccase, ou
- une séquence nucléotidique complémentaire d'une séquence nucléotidique codant pour un ARNm codant lui-même pour une laccase chez les plantes, ou complémentaire d'un fragment d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, ou complémentaire d'une séquence nucléotidique dérivée, soit d'une séquence nucléotidique codant pour ledit ARNm, soit d'un fragment de cette dernière, cette séquence complémentaire codant pour une séquence nucléotidique antisens (encore désignée ARNm antisens) susceptible de s'hybrider avec un ARNm codant pour une laccase chez les plantes,
ladite transformation étant effectuée notamment à l'aide d'un vecteur selon la revendication 13.
15. Procédé de diminution de la biosynthèse de lignine chez les plantes, et donc de diminution des quantités de lignines produites, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez les plantes, caractérisé en ce qu'il est effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant:
- au moins une séquence d'ADN selon la revendication 4,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'un ARNm antisens capable de s'hybrider à un ARNm codant pour une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment l'ARNm codant pour la
CAD, la CCR ou l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant selon la revendication 13, contenant une séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 1 1 ou la revendication 12,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 11, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour un ARNm antisens capable de s'hybrider à un
ARNm codant pour une autre enzyme que la laccase, telle que définie cidessus.
16. Procédé de diminution de la biosynthèse de lignine chez les plantes, et donc de diminution des quantités de lignines produites, par rapport aux quantités normales de lignines produites chez les plantes, caractérisé en ce qu'il est effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant:
- au moins une séquence d'ADN selon la revendication 3,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment une séquence d'ADN codant pour tout ou partie de la CAD, la CCR ou l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant selon la revendication 13, contenant la séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 10 ou la revendication 12,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 10, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus.
17. Procédé d'augmentation de la biosynthèse de lignine chez les plantes, et donc d'augmentation des quantités de lignines produites par rapport aux quantités normales de lignines produites chez les plantes, caractérisé en ce qu'il est effectué par transformation du génome de ces plantes, en y incorporant:
- au moins une séquence d'ADN selon la revendication 3,
- et, le cas échéant, au moins une séquence d'ADN codant pour une autre enzyme que la laccase, qui se trouve être impliquée dans une étape de la biosynthèse des lignines chez les plantes, notamment une séquence d'ADN codant pour la CAD, la CCR ou l'OMT,
ladite transformation étant réalisée:
- soit à l'aide d'un vecteur recombinant selon la revendication 13, contenant la séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 10 ou la revendication 12,
- soit à l'aide de plusieurs vecteurs recombinants dont l'un au moins contient une séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 13, tandis que 1' (ou les) autre(s) vecteur(s) recombinant(s) contien(nen)t une séquence d'ADN codant pour tout ou partie d'une enzyme autre que la laccase, telle que définie ci-dessus.
18. Plantes ou fragments de plantes, notamment cellules, fruits, semences, pollen, transformés par incorporation dans leur génome d'au moins une séquence nucléotidique selon l'une des revendications 3 ou 4.
19. Polypeptides recombinants, notamment laccases recombinantes, représentés par SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 4, et SEQ ID NO 6, tels qu'obtenus par transformation de cellules végétales en intégrant de façon stable dans leur génome, une séquence nucléotidique recombinante selon la revendication 10, notamment à l'aide d'un vecteur selon la revendication 13.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7087426B2 (en) 1996-09-11 2006-08-08 Agrigenesis Biosciences Ltd. Materials and methods for the modification of plant lignin content
US6204434B1 (en) 1996-09-11 2001-03-20 Genesis Research & Development Corporation Limited Materials and methods for the modification of plant lignin content
US6410718B1 (en) 1996-09-11 2002-06-25 Genesis Research & Development Corporation Ltd. Materials and methods for the modification of plant lignin content
US5850020A (en) * 1996-09-11 1998-12-15 Genesis Research & Development Corporation, Ltd. Materials and method for the modification of plant lignin content
US7071384B2 (en) 1997-03-07 2006-07-04 Genencor International, Inc. Methods for commercial production of heterologous laccase in plant tissue and extraction of the laccase from plant seed
CA2301500A1 (fr) 1997-08-27 1999-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes codant des enzymes pour une biosynthese de lignine et leurs utilisations
US6013860A (en) * 1998-07-24 2000-01-11 Calgene Llc Expression of enzymes involved in cellulose modification
US6800792B1 (en) 1998-10-05 2004-10-05 Prodigene Inc. Commercial production of laccase in plants
WO2000020615A2 (fr) * 1998-10-05 2000-04-13 Prodigene, Inc. Production commerciale de la laccase exprimee dans des plantes
BR9915021A (pt) 1998-10-09 2001-08-14 Genesis Res & Dev Corp Ltd Materiais e métodos para a modificação de conteúdo de lignina da planta
FR2946661B1 (fr) * 2009-06-10 2011-09-09 Genoplante Valor Obtention de plantes a teneur reduite en lignines

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990008828A2 (fr) * 1989-02-02 1990-08-09 Paladin Hybrids Inc. Procedes moleculaires de production de semences hybrides
WO1993005160A1 (fr) * 1991-09-10 1993-03-18 Zeneca Limited Modification de la synthese de lignine dans les plantes
WO1993005159A1 (fr) * 1991-04-26 1993-03-18 Zeneca Limited Modification de la synthese de la lignine dans les plantes
WO1994023044A1 (fr) * 1993-04-02 1994-10-13 The Samuel Roberts Noble Foundation, Inc. Procede de reduction de la teneur en lignine dans des plantes
WO1995027790A2 (fr) * 1994-04-11 1995-10-19 Centre National De La Recherche Scientifique SEQUENCES D'ADN CODANT POUR UNE CINNAMOYL CoA REDUCTASE, ET LEURS APPLICATIONS DANS LE DOMAINE DE LA REGULATION DES TENEURS EN LIGNINES DES PLANTES

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990008828A2 (fr) * 1989-02-02 1990-08-09 Paladin Hybrids Inc. Procedes moleculaires de production de semences hybrides
WO1993005159A1 (fr) * 1991-04-26 1993-03-18 Zeneca Limited Modification de la synthese de la lignine dans les plantes
WO1993005160A1 (fr) * 1991-09-10 1993-03-18 Zeneca Limited Modification de la synthese de lignine dans les plantes
WO1994023044A1 (fr) * 1993-04-02 1994-10-13 The Samuel Roberts Noble Foundation, Inc. Procede de reduction de la teneur en lignine dans des plantes
WO1995027790A2 (fr) * 1994-04-11 1995-10-19 Centre National De La Recherche Scientifique SEQUENCES D'ADN CODANT POUR UNE CINNAMOYL CoA REDUCTASE, ET LEURS APPLICATIONS DANS LE DOMAINE DE LA REGULATION DES TENEURS EN LIGNINES DES PLANTES

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOUDET A M: "Genes involved in monolignol biosynthesis and their manipulation for tailoring new lignins", ABSTR.PAP.AM.CHEM.SOC.;(1996) 211 MEET., PT.1, CHED274 . 11TH ACS NATIONAL MEETING, NEW ORLEANS, LA, 24-28 MARCH, 1996., XP000618488 *
BOUDET, A.M, ET AL.: "Lignin genetic engineering", MOLECULAR BREEDING, vol. 2, 1996, pages 25 - 39, XP002025844 *
BOUDET, A.M., ET AL.: "TANSLEY REVIEW NO. 80. BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY OF LIGNIFICATION", NEW PHYTOL., vol. 129, 1995, pages 203 - 236, XP002006037 *
KATO, N., ET AL.: "Tobacco mRNA for ascorbate oxidase precursor, ascorbate oxidase.", EMBL SEQUENCE DATABASE, RELEASE 41, 30-NOV-1994. ACCESSION NUMBER D43624., XP002025847 *
KIEFER-MEYER, M.-C., ET AL.: "Cloning and sequence analysis of laccase-encoding cDNA clones from tobacco", GENE, vol. 178, 31 October 1996 (1996-10-31), pages 205 - 207, XP002025850 *
LAFAYETTE, P.R., ET AL.: "Nucleotide sequence of a cDNA clone encodimg an acidic laccase from sycamore maple (Acer pseudoplatanus L.)", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 107, no. 2, February 1995 (1995-02-01), pages 667 - 678, XP002025845 *
LAGRIMINI, L.M.: "Wound-induced deposition of polyphenols in transgenic plants overexpressing peroxidase", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 96, 1991, pages 577 - 583, XP002025778 *
O'MALLEY. D.M., ET AL.: "The role of laccase in lignification", PLANT JOURNAL, vol. 4, no. 5, 1993, pages 751 - 757, XP002025846 *

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AU3097297A (en) 1998-01-05
FR2749322B1 (fr) 1998-07-17
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