FR2672495A1 - Compositions immunomodulatrices, a base de produits comportant au moins un groupe phosphate ou sulfate, et un gel d'un compose d'aluminium. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une composition immunomodulatrice ayant une capacité immunostimulatrice accrue, tant au niveau humoral que cellulaire. Cette composition contient d'une part, un immunomodulateur destinés à stimuler la réponse immune non spécifique (notamment agent anti-infectieux), ou en présence d'une substance immunisante, à stimuler la réponse immune spécifique (adjuvant de vaccin), ou les deux à la fois, cet immunomodulateur étant sous forme soluble dans l'eau ou solubilisable dans l'eau, le cas échéant en présence d'un dispersif et susceptible de se lier à l'immunomodulateur par des liaisons non covalentes et, d'autre part, un gel d'un composé d'aluminium, cette composition étant caractérisée par la présence de groupes sulfate ou phosphate soit sur l'immunomodulateur lui-même, soit, lorsque celui-ci est présent, sur le dispersif du genre en question. L'invention concerne enfin les préparations pharmaceutiques contenant la susdite composition et dépourvues de constituants huileux supplémentaires.

Description

COMPOSITIONS IXHUNONODULATRICES, A BASE DE PRODUITS
COMPORTANT AU MOINS UN GROUPE PHOSPHATE OU SULFATE,
ET UN GEL D'UN COMPOSE D'ALUNINIUX
L'invention concerne des compositions dispersables dans l'eau, constituées de substances immunomodulatrices ci-après souvent désignées sous l'expression "immunomodulateurs" fortement adsorbées sur des composés d'aluminium.

Les immunomodulateurs contenus dans les compositions selon l'invention sont utilisés soit seuls, lorsqu'ils sont destinés à stimuler la réponse immune non spécifique (notamment agent anti-infectieux), soit en présence d'une substance immunisante, en vue de stimuler la réponse immune spécifique (adjuvant de vaccin).

On sait que la réponse immune spécifique vis à vis d'une substance immunisante (antigène) peut être renforcée par des produits dits "adjuvants". Cet effet est recherché en particulier lorsque la substance immunisante est faiblement immunogene du fait de sa nature chimique ou de son mode d'obtention.

I1 est connu que la production d'anticorps spécifiques (réponse humorale) à un antigène donné est fortement augmentée lorsque l'antigène est administré dans l'eau, associé à un gel d'un composé de l'aluminium.

Cet effet sur la réponse immune spécifique de type humoral est souvent attribué à un "dépôt" au point d'injection de l'antigène qui, adsorbé sur le gel d'hydroxyde d'aluminium, est relargué lentement dans l'organisme, permettant ainsi une meilleure stimulation du système immunitaire (Glenny et al. J. of Pathotology (1926) 29, 31). Il a également été suggéré que le composé d'aluminium pouvait faciliter la présentation de l'entité immunomodulatrice vis à vis des cellules immunocompétentes.

De telles préparations d'un antigène adsorbé sur un gel d'hydroxyde d'aluminium sont largement utilisées dans les vaccins (WHO Scientific Group Immunological
Adjuvants, wHO Technical Report (1976) 595; R. Edelman
Rev. Infec. Dis. (1980) 2, 370). Elles présentent néanmoins certains désavantages, notamment la potentialisation de la production d'immunoglobulines de type IgE impliquées dans les allergies, et l'incapacité à peu près totale de déclencher une réponse immune spécifique de type cellulaire.

D'autres produits d'origine naturelle ou synthétique sont également aptes à renforcer la réponse immune spécifique à un antigène donné. Ces adjuvants agissent suivant des mécanismes biologiques variés, encore mal élucidés, mais qui diffèrent complètement de ceux mis en jeu par les composés (hydroxyde et sels d'aluminium).

Ainsi une catégorie d'immunomodulateurs désormais bien connus sous le terme générique de "Muramylpeptides" comprend des molécules dont la structure résulte de variations chimiques de la séquence N-acetyl-muramyl-Lalanyl-D-isoglutamine. Certains de ces Muramylpeptides, notamment ceux qui sont décrits dans les brevets FR 7816793 du 05/06/1978 et AU 900 9576 du 27/07/1989, sont dépourvus de tout effet pyrogène et sont bien tolérés.

Ces molécules représentent des adjuvants de vaccin de choix.

Cependant les Muramylpeptides de nature hydrophile s'éliminent très rapidement de 1 l'organisme, lorsqu'ils sont administrés dans 11 eau, et ne renforcent que la réponse immune spécifique de type humoral. Des associations d'un Muramylpeptide et d'un antigène adsorbé sur un gel d'hydroxyde d'aluminium ont également été réalisées (F. Audibert et al. (1984) 45, 261). De telles compositions donnent une réponse immune spécifique de type humoral accrue et une faible réponse de type cellulaire a parfois été observée. Les résultats obtenus jusqu'à ce jour ne sont cependant guere satisfaisants.

Des Muramylpeptides de nature lipophile comme, notamment, ceux qui sont décrits dans les brevets
FR 7808049 du 20/03/1978, FR 8407340 du 11/05/1984 et
AU 900 9576 du 27/07/1989 sont certes éliminés de façon fortement ralentie. Néanmoins, ces produits doivent être administrés avec l'antigène dans une émulsion eau dans l'huile, du type adjuvant incomplet de Freund, pour donner lieu à une réponse immune spécifique de type cellulaire vraiment efficace. Par ailleurs, du fait de leur hydrophobicité, la formulation galénique de ces produits est peu aisée. Il n'a jamais jusqu'à ce jour été envisagé d'associer de tels Muramylpeptides lipophiles avec un gel d'aluminium.

Tout récemment les problèmes relatifs à cette difficile formulation galénique ont pu être levés en les associant à certaines structures glycolipidiques sulfatées ou phosphorylées (ci-après dénommées "dispersifs'l) telles que celles qui sont décrites dans le brevet FRANCE N 90.09172 du 18/07/1990. Des solutions ou des dispersions aqueuses homogènes de ces Muramylpeptides lipophiles sont ainsi obtenues.

Il n'en reste pas moins que la question de leur aptitude à induire in vivo une réponse immunitaire de type cellulaire vraiment efficace, en l'absence de leur mise en émulsion au sein d'un milieu eau-huile du type "adjuvant incomplet de Freund", nta pas reçu de réponse tout à fait satisfaisante.

Une deuxième categorie d'immunomodulateurs applicables dans le cadre de l'invention, (en lieu ou place du Muramylpeptide ou en sus de celui-ci) comprend - des constituants d'origine bactérienne, entre autres des constituants solubles ou solubilisables de peptidoglycanes ou des lipolysaccharides du type LPS, ou encore des fractions lipidiques obtenus à partir de ces
LPS, en particulier le "Lipide A" (cf par exemple article de Ernst Th. Rietschel et al intitulé "Molecular structure of bacterial endotoxin in relation to bioactivity" (Structure moléculaire des endotoxines bactériennes en relation avec leur bioactivité) dans l'ouvrage lui-même intitulé "Cellular and molecular aspects of endotoxin reactions" (Aspects cellulaires et moléculaires des réactions mettant en oeuvre des endotoxines), sous la direction de A. Nowotny, J.J.

Spitzer et E.J. Ziegler ; 1990, Elsevier Science
Publishers B.V. (Division biomedicale), pages 15-32) - des analogues des précédents constituants d'origine bactérienne ou des produits (naturels, hemisynthétiques ou de synthèse) correspondant à des fragments de ces constituants d'origine bactérienne, notamment des dérivés détoxifiés. On mentionnera tout particulièrement le dimycolate de tréhalose (TDM), le Lipide A diphosphorylé et tous autres analogues de ces immunomodulateurs.Au titre des analogues du Lipide A, obtenus par synthèse ou hémisynthèse, on citera les produits répondant à la formule générale (I)

Pour les mêmes raisons d'hydrophobicité que déjà évoquées à propos de certains Muramylpeptides, l'association de ces analogues du Lipide A avec un gel d'hydroxyde d'aluminium n'a pas été envisagée jusqu'à ce jour.

En fait, leur formulation galénique est souvent difficile. Néanmoins, comme les Muramylpeptides lipophiles ils peuvent, grâce à leur association avec les dispersifs décrits dans le brevet FR 9009172, conduire à des solutions ou dispersions aqueuses homogènes.

Les compositions conformes à l'invention contiennent, d'une part, un immunomodulateur du type sus-indiqué sous forme soluble dans l'eau ou solubilisable dans l'eau, le cas échéant en présence d'un dispersif du type sus-mentionné (et dont les caractéristiques principales seront encore rappelées ciaprès) et susceptible de se lier à l'immunomodulateur par des liaisons non covalentes et, d'autre part, un gel d'aluminium, ces compositions étant plus particulièrement caractérisées par la présence de groupes sulfate ou phosphate soit sur l'immunomodulateur lui-même, soit, lorsque celui-ci est présent, sur le dispersif du genre en question. I1 a en effet été remarqué que la présence de ces groupes phosphate ou sulfate entraînait une forte adsorption de l'immunomodulateur, soit directement, soit via le dispersif, soit encore par l'intermédiaire des deux à la fois, sur le gel de composé d'aluminium.

En ce qui concerne le gel d'aluminium, il peut être constitué par tout sel ou autre composé d'aluminium pharmaceutique acceptable qui, à l'instar de l'hydroxyde d'aluminium présente la capacité de former des gels présentant les caractéristiques d'adsorption du gel d'hydroxyde d'aluminium. Celui-ci est, à ce jour, le "gel d'aluminium préféré.

Le dispersif est avantageusement constitué par un dérivé osidique dont l'une au moins des fonctions hydroxyle est substituée par un ou plusieurs groupe(s) phosphate ou sulfate, ce dérivé étant également porteur d'au moins un groupement lipophile le rendant apte à s'associer de façon non-covalente à un immunomodulateur, lorsque celui-ci comporte lui-même un groupe lipophile approprie.

Lorsque les deux groupements lipophiles respectivement portés par le dispersif et l'immunomodulateur sont tels que l'un d'entre eux est composé d'une structure hydrocarbonée linéaire, tandis que l'autre est constitué d'une structure hydrocarbonée ramifiée, on obtient, par l'intermédiaire de ces groupes lipophiles, une liaison non-covalente entre l'immunomoduîateur et le dispersif, l'enociation de produits ainsi obtenue étant solubilisée ou dispersée de façon homogène dans un solvant aqueux.

La structure hydrocarbonée ramifiée comprend de préférence deux chaînes de ramification prenant naissance sur deux atomes de carbone adjacents, ou séparés l'un de l'autre par un atome de carbone, ces deux atomes de carbone étant portés par un groupe tiers faisant partie, l'un de l'immuno-modulateur, l'autre du dispersif.

La structure hydrocarbonée linéaire doit avoir, pour s'associer à la chaîne hydrocarbonée ramifiée, une longueur suffisante permettant l'instauration de liaisons non covalentes, notamment du type Van der Walls, entre la structure hydrocarbonée linéaire et l'une au moins des ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée.

Ainsi, l'association de I'immunomodulateur et du dérivé osidique s'effectue par l'intermédiaire de leurs groupements lipophiles respectifs, dès lors que s'établissent des liaisons non covalentes suffisamment fortes pour permettre à la structure hydrocarbonée linéaire, d'être maintenue dans une position dite en "sandwich" entre les deux ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée.

De préférence, la structure hydrocarbonée linéaire possède un nombre d'atomes de carbone au plus égal au nombre d'atomes de carbone des ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée.

L'association du dérivé osidique tel que décrit cidessus, de nature amphiphile et hydrosoluble, à un immunomodulateur hydrophobe et insoluble dans l'eau, permet la dispersion homogène de l'association des produits dans un solvant aqueux.

Une forme préférée de composition conforme à l'invention, susceptible d'être solubilisée ou dispersée de façon homogène dans un solvant aqueux, comprend (1) une substance pharmacologiquement active, insoluble dans l'eau, cette substance étant substituée
soit par au moins une structure hydrocarbonée linéaire de 4 à 20 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une liaison éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile de type A,
soit par au moins une structure hydrocarbonée ramifiée de 10 à 50 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une ou plusieurs liaison(s) éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile du type B, (2) un composé constitué par un dérivé osidique associé de façon non covalente à la substance (1), ce dérivé osidique étant lui-même substitué
soit par au moins un groupement lipophile de type
A lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type B,
soit par au moins un groupement lipophile du type
B lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type A, l'une au moins des fonctions hydroxyles du dérivé osidique sus-mentionné étant substituée par un, ou plusieurs, groupe(s) phosphate ou sulfate.

(3) un gel d'aluminium, tel qu'il a été défini plus haut.

D'une manière générale, tout dérivé osidique tel que défini ci-dessus est utilisable dans les compositions de l'invention, dès lors que ce dérivé n'entraîne pas une modification des propriétés pharmacologiques de 1' immunomodulateur.

Des compositions particulièrement préférées de l'invention sont celles comprenant des dérivés osidiques répondant à la formule (II) suivante

dans laquelle - R représente un groupement lipophile du type A ou du type B, - R2 représente H, ou OH, ou un groupement acêtamido, sulfate, sulfamido, phosphate, phosphamido, - R3 et R4, identiques ou différents, représentent soit
H, soit OH, ou OCH3, ou encore un groupement sulfate ou phosphate, - RX représente soit H, soit OH, ou OCH3, ou encore un résidu ose ou osamine dont le carbone anomérique en position 1 (C1) est engagé dans une liaison glycosidique, les positions C2, C3 et C4 étant respectivement substituées par des groupes R'2, R'3, et R'4 ayant respectivement les significations données ci-dessus pour
R2, R3, et R4, et la position C6 par un groupe R' ayant la signification donnée ci-dessus pour R, l'un au moins des groupes R2, R'2, R3, R'3, R4 ou R'4 représentant un résidu sulfate ou phosphate.

A titre d'exemple de dérivés osidiques répondant à la formule (II) sus-mentionnée, on peut citer les composés suivants - a ou P-méthyl-glycoside N-acetyl-4-sulfate-6-OR2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl 4-Sulfate-6-OR-2-desoxy-glucosamine, - a ou 8 ss-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-OR-glucopyrano- se, - 4-sulfate-6-OR-glucopyranose, - 6,6'-di-OR-4,4'-di-sulfate-a,a'-D-Trehalose,
R ayant la signification indiquée ci-dessus.

Des compositions préférées de l'invention sont celles comprenant les dérivés osidiques de formule (I) suivants - a ou p-méthyl-glycoside N-acetyl-4-Sulfate-6octanoyl-2-desoxy -glucosamine, - a ou ss-méthyl-glycoside-N-acetyl-4-Sulfate-6-(2,3- dipalmitoyl) glyceroyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-Sulfate-6-octanoyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-Sulfate-6- (2, 3-dipalmitoyl) -glyceroyl-2- desoxy-D-glucosamine, - a ou p-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-octanoyl-glucopyranoside, - a ou p-methyl-glycoside 4-Sulfate-6- (2, 3-dipalmi- toyl)-glyceroyl-D-glucopyranoside, - 4-Sulfate-6-octanoyl-D-glucopyranose, - 4-Sulfate-6(2,3-di-palmitoyl)-glyceroylglucopyranose - 4,4' di-sulfate-6, 6' di-octanoyl-a, a' -D-Trehalose, - 4,4'di-sulfate-6,6'(2,3-dipalmitoyl)-glyceroyl-t
D-Trehalose.

Les dérivés osidiques de formule (II) peuvent être produits par des méthodes qui sont classiquement utilisées en chimie de synthèse des oses et des oligosaccharides.

A titre illustratif, ces méthodes procedent par étapes successives à partir de l'ose ou de l'oligosaccharide à modifier chimiquement, pour parvenir au dérivé recherché, spécifiquement substitué sur la position voulue. Pour ce faire, les fonctions en positions c1, C2, C3, C4 et C6 d'un ose et celles correspondantes d'un oligosaccharide, sont protégées temporairement par des groupements protecteurs (tels que benzyle, benzylidène, acétyle...) introduits spécifiquement et séquentiellement sur les positions qui ne seront pas finalement l'objet de la modification chimique envisagée, en tirant partie des différences de réactivité desdites fonctions.

Puis l'introduction des groupements lipophiles du type A ou B sus-mentionnés, est avantageusement effectuée de la manière suivante les (ou la) fonctions hydroxyles primaires non protégées, peuvent réagir soit sous forme substituée par un groupe tosyle avec un sel d'acide gras, en présence d'éther couronne, soit sous forme libre avec un chlorure d'acide gras, ou avec la fonction carboxylique d'un acide gras en présence d'un réactif de couplage.

Après introduction des (ou de la) modifications chimiques envisagées sur les (ou la) positions restées libres, le dérivé obtenu est libéré (étape de déprotection) de tous ses groupements protecteurs pour aboutir au dérivé osidique ou oligosaccharidique voulu.

Le cas échéant, l'introduction des (ou du) groupes phosphates est réalisée préalablement à l'étape de déprotection sus-mentionnée, par la méthode dite phosphite triester décrite dans Perich, J.W. et al,
Tetrahedron Lett., (1988), 29, 2369.

L'introduction des (ou du), groupes sulfates est réalisée après l'étape de déprotection sus-mentionnée, notamment par utilisation du complexe triméthylamineanhydride sulfurique selon la méthode notamment decrite dans Ichikawa Y. et al, Carbohydrate Research, 172, (1988), 37-64.

Une première catégorie de compositions selon l'invention met en oeuvre, un Muramylpeptide. Qu'il soit libre (notamment dans le cas où il porte lui-même un ou plusieurs groupes phosphate ou sulfate permettant son adsorption sur le gel d'aluminium) ou bien associé au dispersif, le Muramylpeptide utilisé s'adsorbe fortement et de façon stable au gel d'hydroxyde d'aluminium. I1 en résulte un relarguage lent de ce Muramylpeptide dans l'organisme à partir du point d'injection. Dans les cas où l'immunomodulateur est utilise pour ses vertus d'adjuvant immunologique, la composition selon l'invention contient aussi, de préférence, l'antigène (ou une fraction de l'antigène ou encore un haptène porteur de l'epitope caractéristique de l'antigène) contre lequel une protection in vivo est recherché.Le relarguage du
Muramylpeptide est alors associé aux phénomènes similaires subis par l'antigène lui-même adsorbé sur le gel d'hydroxyde d'aluminium, d'où un renforcement considerable de l'activité immunoadjuvante propre aux
Muramylpeptides vis à vis de la réponse immune spécifique tant au plan humoral que cellulaire.

Ce renforcement de la qualité d'adjuvanticité des
Muramylpeptides s'accompagne d'une suppression de la production d'immunoglobulines de type IgE, essentiellement due au gel d'hydroxyde d'aluminium.

Des compositions particulièrement préférées de l'invention sont celles pour lesquelles les
Muramylpeptides portent eux-mêmes un ou plusieurs substituants . phosphate ou sulfate dans leur propre structure moléculaire. Il s'agit notamment de
Muramylpeptides qui repondent à la formule générale (III) suivante

dans laquelle::
X représente un résidu aminoacyle du groupe comprenant alanyle, valyle, isoleucyle, norleucyle, thréonyle, prolile, glutaminyle, asparaginyle, methionyle, tryptophanyle, phénylalanyle, tyrosyl, glycyle
R représente H ou CH3 Rq représente OH, OSO3 (ci-après souvent dénommé SO4), 0P03 (ci-après souvent dénommé SO4) ou un résidu Nacetyl-glucosaminyle lié par son carbone anomérique, R6 represente OH, OS03, OP03 ou OX', X' étant un groupe hydrocarboné linéaire comportant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupe du type (A)n-B définis ci-après à propos de R8
R7 représente OH, NH2, ou OY, Y étant un groupe hydrocarboné linéaire comportant de 1 à 10 atomes de carbone
R8 représente OH, NH2 ou OZ, Z étant (A)n-B dans lequel,
n représente 0 ou 1
A représente soit un enchaînement de 1 à 3 residus aminoacyles identiques ou différents entre eux, lysyle, diaminopimélyle ou l'un quelconque des résidus aminoacyle listés pour X, ci-dessus, soit un groupe NH-(CH2)p-CO, p étant de 2 à 10
B représente une structure linéaire ou ramifiée comportant de 10 à 15 atomes de carbone et, éventuellement, une ou plusieurs liaisons éther, ester, thioéther, thioester ou imide,
Les groupes aminocyles peuvent être dextrogyres ou lévogyres
Une composition préférée de l'invention comprend les
Muramylpeptides de formule (III) sus-mentionnée dans laquelle::
X represente L- ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle n=O
R représente CH3
R7 représente OH, NH2, ou On(CH2)xH avec x de 1 à 6, de préférence
R8 représente OH, NH2, ou On(CH2)xH avec x de 1 à 20 Rq représente OH ou SO4 R6 représente OH ou S04 ou On(CH2)xH avec x de 1 à 20
Dans cette composition préférée, les Muramylpeptides de formule (III) comportent au moins 1 groupement S04, notamment en position 6 sur le groupe saccharidique. Les plus representatifs de ces composés sont:
6-SO4-N-acetyl-Muramyl-L-alanyl -D-glutamine methyl ester
6-SO4-N-acetyl-Muramyl-L-alanyl-D-glutamine n-butyl ester
6-SO4-N-acetyl-Muramyl-thréonyl-D-isoglutamine
6-SO4-N-acetyl-Muramyl-thréonyl -D-isoglutamine neicosyl ester
6-SO4-N-acetyl -Muramyl-thréonyl-D-glutamique di methyl esters
6-SO4-N-acetyl-Muramyl-thréonyl -D-glutamique alpha n-butyl gamma methyl diesters
Une autre composition préférée de l'invention comprend les Muramylpeptides de formule (III) sus mentionnée dans laquelle::
X représente L- ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle n=0
R représente CH3
R7 représente OH ou NH2 ou O(CH2)XH avec x de 1 à x = 4 etant préféré
R8 représente OCH2-CH(OR')-CH2(OR'), R' étant On(CH2)xH avec x de 5 à 20
R4 représente OH ou SO4 RE représente OH ou S04
Dans cette autre composition préféree, les
Muramylpeptides comportent au moins 1 groupe S04.Les plus représentatifs à ce jour sont: 6-SO4-acétyl-Muramyl-L-threonyl-D(1,2-dipalmitoyl- sn-glycerol)-isoglutamine 6-SO4-acetyl-Muramyl-D-alanyl-D(1,2-dipalmitoyl- sn-glycerol-isoglutamine)
Les Muramylpeptides qui correspondent à la formule générale sus indiquée et qui comprennent au moins un groupe sulfate ou phosphate sont nouveaux et constituent en eux-mêmes une invention. Ils peuvent être obtenus par les mêmes procédés que les Muramylpeptides non sulfatés ou non phosphorylés, en particulier ceux qui font l'objet des brevets antérieurs identifies plus haut, si ce n'est que l'on intercale une étape de sulfatation ou de phosphatation entre l'étape de suppression des groupes protecteurs encore portés par le Muramylpeptide pré-formé et l'étape d'hydrogénation finale.

Cette étape de sulfatation ou de phosphatation peut être réalisée dans les mêmes conditions que rappelées plus haut à propos de la production des dérivés d'osides utilisés à titre de dispersifs préférés.

On peut cependant avoir recours, pour la production d'autres compositions conformes à l'invention, à des
Muramylpeptides ne comportant aucun groupe S04 (ou OS03) en particulier lorsqu'ils sont associés à un "dispersif" posédant lui-même une structure glycolipidique sulfatée ou phosphorylée.

Les Muramylpeptides appartiennent notamment à une seconde famille préféree d'un Muramylpeptide la formule (IV) suivante

dans laquelle - R représente H ou CH3 - R4 est OH, OSO3, OPO3 ou un résidu N-acetylglucosaminyle liée par son carbone anomérique - R6 est un groupe Z-(B1) nl - R7 représente un groupe - NH2, -OH ou un groupe -OW1, W1 étant un groupe hydrocarboné comportant de 1 à 10 atomes de carbone ; - R8 est un groupe (A1)-Y - X représente un résidu aminoacyle du groupe comprenant alanyle, valyle, isoleucyle, norleucyle, leucyle, thréonyle, prolyle, glutaminyle, asparaginyle, méthionyle, tryptophanyle, phénylalanyle, tyrosyle, glycyle ;; - Y représente soit OH, soit NH2, ou un groupe -OWz, W2 étant un groupe hydrocarboné de 1 à 4 atomes de carbone, ou encore un groupement lipophile du type A ou du type B (compte tenu des définitions qui ont été données de ces groupements lipophiles, à propos des "dispersifs" constitues par les dérivés d'osides susdits), - Z représente soit H, soit un groupement lipophile du type A ou du type B étant cependant entendu que l'un au moins des deux groupes Y et Z est toujours constitué par un groupement lipophile du type A ou du type B - n1 et n2, identiques ou différents, représentent zéro ou 1, - A1 et B1 sont soit des groupes respectivement identiques ou differents comprenant de 1 à 3 résidus aminoacyles, eux-mêmes identiques ou différents entre eux, ou encore un groupe -NH-(CH2)p-CO- avec des valeurs de p comprises entre 2 et 10.

Dans une première catégorie préférée de
Muramylpeptides au sein de la seconde famille - n1 et n2 représentent zéro, - R représente CH3, - R7 représente -OH, -NH2 ou -On (CH2)XH avec x1 compris xl entre 1 et 6, avec une préférence pour x1=4, - X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente -O-CH2-CHO(R7)-CH2O(R8),
Z représente H, et lorsque Z représente O
|
-C-CHO(R+)-CH2O(R10), Y représente -OH, -NH2 ou un groupe -0W2, W2 ayant la signification indiquée dans la revendication 6, et R9 et R10 étant des groupes palmitoyles.

Dans une seconde catégorie distincte de
Muramylpeptides au sein de la seconde famille - nl et nz représentent zéro, - R représente CH3, - R7 représente -OH, ou -NH2 ou -On (CH2) H avec x1 compris entre 1 et 6, avec une preference pour x1=4, - X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente -O-(CH2)X2H avec x2 = 8, Z 2 représente H, et lorsque Z représente -CO(CH2)X2H, avec x2 = 8, Y représente -OH, -NH2, ou un groupe -0W2, W2 ayant la signification indiquée propos de la première catégorie de Muramylpeptides.

Les dispersifs particulièrement préférés qui peuvent être utilisés conjointement avec les susdits
Muramylpeptides sont ceux qui comportent une séquence 6,6'-di(OR")-4,4'-diSO4-alpha, alpha' -D-tréhalose, avec
R" représentant On(CH2)xH, avec x étant de 5 à 20, notamment 16.Les Muramylpeptides les plus représentatifs à ce jour sont alors N-acetyl-Muramyl-L-thréonyl- (1, 2-dipalmitoyl- sn-glycerol)-D-isoglutamine (ci-après MDP (Thr) GDP) N-acetyl-Muramyl-D-alanyl- (1, 2-dipalmitoyl- sn-glycerol)-D-isoglutamine
La présente invention concerne également et plus particulièrement une troisième famille de compositions à base d'un analogue du "Lipide A", constituant domaine hydrophode des endotoxines qui est l'entité chimique responsable de l'activité immunostimulante de cette structure bactérienne (C. Galanos et al. dans "Internat.

Rev. of Biochem. (1977) 14, 239).

De façon préférée dans les compositions selon l'invention, les analogues du "Lipide A" sont ceux qui, obtenus par synthèse ou hémisynthèse, ont une toxicité très atténuée, notamment le MPL 'Lipide A monophosphorylé). Ce sont des structures très hydrophobes dispersables dans l'eau de façon homogène, en presence d'un dispersif présentant une structure glycolipidique sulfatée ou phosphorylée telle que celles décrites dans le brevet FR 90.09172 du 18/07/90.

Dans cette troisième famille de compositions selon l'invention, un analogue du Lipid A associé au dispersif, s'adsorbe fortement et de façon stable au gel d'hydroxyde d'aluminium. Il en résulte un relarguage lent de ce produit dans l'organisme à partir du point d'injection, ce qui renforce considérablement son activité immunostimulante propre.

Ces analogues du Lipid A répondent à la formule générale (V),

dans laquelle:
R4 et R'1 représentent H ou PO4, avec au moins R4 ou R'1 étant un groupe PO4
R2, R3 et R' 2, R' 3 représentent CO-CH(OR)-(CH2)X-CH3, x étant compris entre 5 et 15, avec une préférence pour x = 10, et R étant CO-(CH2)y-CH3 y étant compris entre 5 et 15 avec une préférence pour x = 10 ou 12.

La présente invention concerne donc l'utilisation des compositions selon l'invention soit seules pour stimuler les défenses générales de l'organisme, soit avec un antigène de préférence lui-même adsorbé sur gel d'hydroxyde d'aluminium afin d'augmenter la réponse immune spécifique de type humoral et cellulaire.

Il est avantageux d'utiliser des compositions pour lesquelles l'hydroxyde d'aluminium et le produit immunomodulateur se trouvent dans un rapport pondéral de 0,05 à 1, par exemple 0,4. Dans le cas ou le dispersif est associé au produit immunomodulateur; leur rapport pondéral est compris entre 0,5 et 1,5.

D'une façon générale les compositions selon l'invention peuvent être préparées par toutes techniques appropriées pour la production de mélanges. Les méthodes décrites ici le sont à titre uniquement d'exemple.

Les composés selon l'invention peuvent être préparés à partir des quantités adéquates des divers constituants, en ajoutant directement, sous agitation, le gel d'hydroxyde d'aluminium à la solution ou à la dispersion de l'immunomodulateur seul ou en association avec le dispersif. En particulier, lorsque l'immunomodulateur est hydrophobe, on produit cette association dans des conditions telles que lorsque cette association de (1) llimmunomodulateur, (2) du dérivé osidique et (3) du gel d'hydroxyde d'aluminium est mise en suspension dans l'eau On obtient une suspension (ou dispersion) utilisable notamment en tant que préparation pharmaceutique, lorsque l'eau sus-mentionnée est stérile.

La composition selon l'invention peut être ensuite éventuellement mélangée, sous agitation, à une suspension de l'antigène, le cas échéant lui-même préalablement adsorbé sur gel d'hydroxyde d'aluminium ou sur ballast de type saccharidique, comme par exemple le mannose. Le lyophilisat est finalement repris extemporanément dans un solvant aqueux pharmacologiquement acceptable, avant d'être administré.

En variante, le procédé comprend - la solubilisation du (ou des) dérivé osidique dans une quantite déterminée d'un solvant aqueux, - l'addition sous agitation à la solution précédemment obtenue, d'une quantité déterminée d'une (ou plusieurs) substance pharmacologiquement active, - l'addition au fluide obtenu du gel d'aluminium et de l'antigène et, le cas échéant, du ballast polysaccharidique, - le cas échéant, la lyophilisation de la solution précédente.

L'invention est davantage illustrée dans la description détaillée qui suit, sans que cette dernière ne revête un caractère limitatif, d'exemples de mise en oeuvre de l'invention.

1) Synthèse du sel de sodium du 6,6' di-octanoyl-4,41-disulfate-a,l-
D-tréhalose (ou DOTS)
.6,6 'octanoyl-2, 3-2' , 3' ,tetra-O-benzyl
-a, a' -D-tréhalose
Dissolution dans le THF sec (50 ml), sous argon, à l'abri de la lumière de 3 mmoles de 2,3-2',3'- tetra-O benzyl-a,a' -D-tréhalose (A.F. Hadfield,
L. Hough, and A.C. Richardson - Carbohyd. Res. 63, (1978), 51) de 7,5 mmoles d'acide octanoïque, et de 7,87 mmoles de triphénylphosphine. A la solution refroidie à 0 C, addition en 15 minutes d'une solution de diisopropylazodicarboxylate (8,02 mmoles) dans le THF sec (25 ml). Purification sur silice 60 H sous pression dans le mélange de toluène/CH2Cl2/AcOEt : 30/10/5.

Huile : m = 2,58 g (90 %).

. Sel de sodium du6,6'-dioctanoyl-2,3-2',
3. -tetra-O-benzyl-4 .4. -di-sulfate-
a,a'-D-tréhalose.

A 1,5 mmole du produit précédent en solution dans le
DMF sec (15 ml), addition de 15 mmoles de complexe triméthylamine/anhydride sulfurique (2,1 g) et incubation à 50"C en conditions anhydrides pendant 2 jours. Addition de CH3OH (10 ml), puis, extension par du chloroforme (10 ml) et percolation sur Sephadex LH2o dans le mélange
CHCl3-CH30H : I/I. Apres concentration, purification sur colonne de silice 60H sous pression, dans le mélange
CHCl3-CH3OH-H2O : 15/5/05 (1,7 g : huile). Dissolution dans le mélange DMF-H2O : I/I (80 ml) et percolation sur colonne de résine Dowex 50 WX4 H+ (85 ml) par solution avec le même mélange de solvants : neutralisation par
NaOH O,îN : lyophilisation m = 1, 51 g (87 %).

Sel de sodium du6,6'-dioctanoyl-4,4'- di-O-sulfate-a, a' -D-tréhalose
(C28K48Na2O19S2 : 798,79)
1,5 g du dérivé précédent, solubilise dans 150 ml d'un melange eau/alcool (6,5/10), est hydrogéné en présence de 750 mg de Pd/C à 10 %. Après filtration, concentration,lyophilisation en solution aqueuse.

Purification sur silice 60-G dans CHC13-CH30H-CH3COOH
H2O : 40/20/8/2. Concentration, coevaporation avec du toluène, lyophilisation en solution aqueuse. Percolation sur Sephadex LH20 dans le méthanol. Concentration dessiccation, lyophilisation en solution dans lteau m = 525 mg (51 %).

Teneur en sulfate : 2,7 Eq/g (conductimétrie).

teneur en acide octanoïque : 1,97 Eq/mole (CPV).

2) Préparation d'un exemple dune composition
conforme à l'invention, décrite à titre d'exemple
1 mg de DOTS est dissous dans 0.5 ml de soluté physiologique, cette solution est ajoutée goutte à goutte à 1 mg de MDP-Thr-GDP en poudre.

La dispersion obtenue est mélangée sous forte agitation à 0,5 ml d'une solution isotonique. Cette préparation contient donc par ml, 0,5 mg d'immunomodulateur DOTS. (La dispersion aqueuse obtenue est d'aspect'opalescent et ne sédimente pas ou très peu, (une nouvelle agitation permet d'obtenir à nouveau la dispersion homogène). Après lyophilisation, on peut par addition d'eau ou de soluté physiologique, reconstituer une dispersion d'aspect identique, la concentration en dérivés dépendant du volume de l'addition.)
A la dispersion est ajouté 0,1 ml (soit 2 mg) d'une suspension dhydroxyde d'aluminium à 20 mg par ml, sous forte agitation.

En lieu et place du MDP(Thr)GDP, on peut utiliser des Muramylpeptides sulfatés ou phosphorylés hydrosolubles. On décrit ci-après la production de deux de ces composés
Synthèse de 6-SO4-N-acetyl-muramyl-
L-Thréonyl-D-isoglutamine
Préparation de Alpha-Bzl-MurNAc-L-Thr(Bzl)-D-iGln
Bzl (1)
1 mmole de alpha-Bzl-4,6 Bzi-MurNac-L
Thr(Bzl)-D-iGln-Bzl (867 mg) sont traités à reflux dans 60 ml d'acide acétique aqueux à 60%, jusqu'à solubilisation complète. Le mélange réactionnel est concentré à sec.Le résidu est successivement repris et concentré dans l'eau, le toluène, le méthanol. (1) est purifié sur une colonne de gel de silice 60 G dans le mélange de solvants CHCl3-CH30H (6-1). Les fractions contenant (1) sont concentrées et le résidu desséché en présence de KOH et P2O5. m: 380 mg (50%).

Préparation de Alpha-Bzl-6-SOL-MurNac-L-Thr (Bzl) -D-
iGln-OBzl, sel de sodium (2)
A une solution de 1 mmole de (1) (763 mg) dans 10 ml de diméthylformamide sec, sont ajoutées 2 mmoles d'un complexe de l'anhydride sulfurique, notamment du complexe de sulfate de tri-méthylamine (TMA SO3) (278 mg). Après 2 jours à température ordinaire et vérification par chromatographie sur couche mince de gel de silice (CHCl3-CH2OH, 1-1), 5 ml de CH3OH sont ajoutés, puis 5 ml de CHCl3. Le mélange réactionnel ainsi étendu est passé sur une colonne d'un tamis moléculaire commercialisé sous la marque SEPHADEX LH 20 et le produit est élué avec le mélange de solvants CHC13-CH30H (1-1), puis purifié sur colonne de gel de silice 60G avec le mélange de solvants
CHCl3-CH3OH-H2O (15/5/0,5).Les fractions contenant (2) sont concentrées et le résidu est repris dans un minimum d'eau. La solution est neutralisée par NaOH 0,1 N, puis lyophilisée. (2) est séché sous vide poussé en présence de KOH et P205. m: 432mg (50%).

Préparation de 6 SOt-MurNac-L-Thr-D-iGln, sel de
sodium (3)
1 mmole de (2) (864 mg) est hydrogénolysé dans un mélange de CH3COOH et CH3OH (1-1) en présence de palladium 5% sur charbon, sous faible pression pendant 5 jours. La suspension est ultra-filtrée sur filtre commercialisé sous la marque MILLIPORE LSWP 5 um, le catalyseur étant lavé avec CH3COOH. Le filtrat est concentré et le résidu repris à l'eau. La solution est neutralisée avec NaOH 0,1 N, puis lyophilisée. (3) est desséché en présence de KOH et P205. m: 424 mg (60 %).

6-SO-MurNac-L-Thr-D-iGln 1,2-dipalmitoyl-sn
glycerol, sel de sodium (3) (1306,5)
1 mmole de (2) (1386 mg) est hydrogénolysé dans un mélange de CH3COOH et CH3OH (1-1) en présence de palladium 5% sur charbon, sous faible pression pendant 5 jours. La suspension est ultra-filtrée sur filtre millipore LSWP 5 um, le catalyseur étant lavé avec
CH3COOH. Le filtrat est concentré et le résidu repris à l'eau. La solution est neutralisée avec NaOH 0,1 N, puis lyophilisée. (3) est desséché en présence de KOH et P2O5.

m: 600 mg (50 %).

Synthèse de 6-SO4-N-acétyl-muranyl-L-thréonyl- D-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycerol)-isoglutamine
Préparation de Alpha-Bzl-MurNAc-L-Thr(Bzl)-D-(1,2
dipalmitoyl-sn-glycerol)-iGln, sel de sodium (1)
1 mmole de Alpha-Bzl-4,6-Bzi-MurNac-L-Thr(Bzl)
D-iGln-OBzl (1410 mg) est traitée à reflux dans 60 ml d'acide acétique aqueux à 60%, jusqu'à solubilisation complète. Le mélange réactionnel est concentré à sec. Le résidu est successivement repris et concentré dans l'eau, le toluène, le méthanol. (1) est purifié sur colonne de gel de silice 60G dans le mélange de solvants CHCl3-CH30H (6-1).Les fractions contenant (1) sont concentrées et le résidu désséché en présence de KOH et P505. m: mg (environ 50%)
Préparation de Alpha-Bzl-6-SQ-MurNac-L-Thr(Bzl) -
D-1,2-(dipalmitoyl-sn-glycerol)-iGln, sel de
sodium (2)
A une solution de 1 mmole de (1) (1306 mg) dans 10 ml de dimethylformamide sec, sont ajoutées 2 mmoles du complexe TMA-SO3 (278 mg). Après 2 jours à température ordinaire et vérification par chromatographie sur couche mince de gel de silice (CHC13-CH30H, 1-1), sont ajoutés 5 ml de CH30H, puis 5 ml de CHCl3. Le mélange réactionnel ainsi étendu est passé sur colonne de SEPHADEX LH 20 et le produit est élué avec le mélange de solvants CHCl3 CH3OH (1-1), puis purifié sur colonne de gel de silice 60 G avec le mélange de solvants CHCl3-CH30H-CH3COOH (15/5/0,5).Les fractions contenant (2) sont concentrées et le résidu est repris dans un minimum d'eau. La solution est neutralisée par NaOH 0,1 N, puis lyophilisée. (2) est séché sous vide poussé en présence de KOH et P205. m: (50%).

La nature des résultats biologiques auxquels l'invention conduit, est illustrée naturellement de façon non limitative dans l'exemple qui suit
Etude de l'augmentation de l'activité adjuvante du '!U > P LThrJ GDP
Des souris Balb-C sont immunisées par 100Ag d'ovalbumine en solution saline.L'antigène est administré soit seul soit avec, respectivement, les trois adjuvants ou mélanges adjuvants suivants (1) MDP(Thr)GDP 100g (2) DOTS 100 pg + 2 Alum 200 Sg (3) MDP(Thr)GDP 100 pg + DOTS 100 Ag + Alum 200 Ag
Après 3 semaines, du sang des animaux est prélevé et la quantité d'anticorps anti-ovalbumine présents dans leur sérum mesurée par la technique classique d'ELISA.

Les résultats obtenus montrent que les animaux témoins ayant reçu l'antigène seul ont un titre anticorps de 1000, que les lots expérimentaux ayant reçu l'antigène associé au MDPEThr)GDP + DOTS ou l'album seul présentent un titre de 2000. Par contre, les animaux ayant reçu un mélange adjuvant tertiaire ont un titre de 10.000.

Des expériences d'anaphylaxie cutanée passive ont été pratiquées avec ces sérums chez le rat : le dosage des IgE se fait par anaphylaxie cutanée passive. Les sérums sont dilués de 2 en 2 en tampon PBS. Ils sont injectés à des rats par la voie intradermique en différents points. Après 24 h (temps après lequel seuls les anticorps IgE restent fixés autour du point d'injection), on injecte par la voie veineuse l'antigène
HBs mélangé à une concentration appropriée de bleu Evans.

Une demi-heure après l'injection, on repère la presence d'IgE au niveau des points d'injection, par l'apparition d'une tache bleue qui signale l'augmentation de permeabilitecapillaire liée à la réaction IgE-HBS.

Les titres indiquent la plus forte dilution de sérum capable de provoquer une tache (titre ACP, en ce qui concerne les IgE spécifiques).

Les essais réalisés ont montré qu'il y a le même taux d'anticorps réaginiques IgE dans le lot traité avec le mélange adjuvant (3) que dans les lots traités avec adjuvants (1) et (2), bien que le titre des anticorps totaux soient 5 fois plus élevés.

D'autres souris Balb-C ont reçu les mêmes compositions adjuvantes et leurs ganglions ont été prélevés afin d'étudier l'induction d'une réponse à médiation cellulaire. Le test est un test classique de recherche de prolifération des cellules T quand elles sont cultivées en présence d'antigène vis à vis duquel elles ont été sensibilisées. Les essais se font d'après la méthode décrite dans l'article de F. Audibert et al, (1984), Infection and Immunity, Juillet 1984, p. 261-266.

Les résultats obtenus en cultivant les cellules provenant des animaux de quatre
(a) Antigène seul,
b) antigène + MDP[Thr]GDP + DOTS,
c) antigène + alum, et
d) antigène + MDP[Thr)GDP + DOTS + alum) ont montré que seule la dernière préparation immunisante permet d'obtenir une prolifération des cellules T cultivées en présence de doses appropriées d'ovalbumine.

Ce résultat indique que seul le mélange tertiaire permet d'obtenir une réponse à médiation cellulaire vis à vis de 1 'antigène.

Etude de l'augmentation de l'activité protectrice
contre l'infection
Dans les conditions d'expériences décrites dans le brevet FR 84.07340 du 11/05/84, le MDP[Thr]GDP seul est nettement moins actif contre K. pneumoniae, que lorsque ce produit est administré avec le dispersif et 1 'hydroxyde d'aluminium.

Lt invention concerne finale des compositions sous forme de doses unitaires contenant de 5 à 2000 microgrammes d'hydroxyde d'aluminium et de 100 à 50000 microgrammes de produit immunomodulateur, notamment de 50 à 500 microgrammes d'hydroxyde d'aluminium et de 100 à 10000 microgrammes de produit immunomodulateur, lorsque ladite composition est plus particulièrement destinée à l'homme.

Les compositions selon l'invention représentent ainsi une nouvelle formulation galénique d'immunomodulateurs, qui par addition à une suspension de gel d'un composé, notamment d'hydroxyde d'aluminium et éventuellement lyophilisée en présence d'un ballast constitué de préférence de sucres ou d'oligosaccharides, résulte en des préparation immunostimulantes de grande efficacité et facilité d'emploi.

Claims (18)

REVENDICATIONS

1. Composition contenant, d'une part, un immunomodulateur destinés à stimuler la réponse immune non spécifique (notamment agent anti-infectieux), ou en présence d'une substance immunisante, à stimuler la réponse immune spécifique (adjuvant de vaccin), ou les deux à la fois, cet immunomodulateur étant sous forme soluble dans l'eau ou solubilisable dans l'eau, le cas échéant en présence d'un dispersif susceptible de se lier à l'immunomodulateur par des liaisons non covalentes et, d'autre part, un gel d'un composé d'aluminium, cette composition étant caractérisée par la présence de groupes sulfate ou phosphate soit sur 1'immunomodulateur luimême, soit, lorsque le dispersif est présent, sur le dispersif du genre en question.

2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé d'aluminium est un hydroxyde d'aluminium.

3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'immunomodulateur est un

Muramylpeptide qui répond à la formule générale (III) suivante

dans laquelle:

X représente un résidu aminoacyle du groupe comprenant alanyle, valyle, isoleucyle, norleucyle, thréonyle, prolile, glutaminyle, asparaginyle, methionyle, tryptophanyle, phénylalanyle, tyrosyl, glycyle

R représente H ou CH3

R4 représente OH, OSO3 (ci-après souvent dénommé SO4),

OPO3 (ci-après souvent dénommé SO4) ou un résidu Nacetyl-glucosaminyle lié par son carbone anomérique,

R6 représente OH, OSQ3, OPO3 ou OX', X' étant un groupe hydrocarboné linéaire comportant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupe du type (A)n-B définis ci-après à propos de R8

R7 représente OH, NH2, ou OY, Y étant un groupe hydrocarboné linéaire comportant de 1 à 10 atomes de carbone

R8 représente OH, NH2 ou OZ, Z étant (A)n-B dans lequel,

n représente 0 ou 1

A représente soit un enchaînement de 1 à 3 résidus aminoacyles identiques ou différents entre eux, lysyle, diaminopimélyle ou l'un quelconque des résidus aminoacyle listés pour X, ci-dessus, soit un groupe NH-(CH,),-CO, p étant de 2 à 10

B représente une structure linéaire ou ramifiée comportant de 10 à 15 atomes de carbone et, éventuellement, une ou plusieurs liaisons éther, ester, thioéther, thioester ou imide,

4.Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que dans le Muramylpeptide de formule

III

X représente L- ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle n=O

R représente CH3

R7 représente OH, NH2, ou On(CH2)xH avec x de 1 à 6, de préférence

R8 représente OH, NH2, ou On (CH2) xH avec x de 1 à 20 Rq représente OH ou S04 h représente OH ou 504 ou On(CH2)xH avec x de 1 à 20

5.Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que dans le Muramylpeptide de formule

III

X représente L- ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle n=0

R représente CH3

R7 représente OH ou NH2 ou O(CH2)XH avec x de 1 à x = 4 étant préféré

R8 représente OCH2-CH(OR')-CH2(OR'), R' étant On(CH2)xH avec x de 5 à 20

R4 représente OH ou S04 R6 représente OH ou S04

6. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'immunomodulateur est constitué par l'un des composés suivants

6-SO4-acétyl-Muramyl-L-thréonyl-D(1,2-dipalmitoylsn-glycerol)-isoglutamine 6-SO4-acétyl-Muramyl-D-alanyl-D(1,2-dipalmitoyl- sn-glycérol-isoglutamine)

7.Composition selon l'une des revendications 3 à 6 caractérisée en ce qu'elle est exempte de dispersif.

8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que (1) l'immunomodulateur est substitué

soit par au moins une structure hydrocarbonée linéaire de 4 à 20 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une liaison éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile de type A,

soit par au moins une structure hydrocarbonée ramifiée de 10 à 50 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une ou plusieurs liaison(s) éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile du type B, (2) le dispersif est constitué par un dérivé osidique associé de façon non covalente à la substance (1), ce dérivé osidique étant lui-même substitué

soit par au moins un groupement lipophile de type

A lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type B,

soit par au moins un groupement lipophile du type

B lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type A, l'une au moins des fonctions hydroxyles du dérivé osidique sus-mentionné étant substituée par un, ou plusieurs, groupe(s) phosphate ou sulfate.

9. Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que le dérivé osidique est représenté par la formule (II) suivante

dans laquelle - R représente un groupement lipophile du type A ou du type B, - R2 représente H, ou OH, ou un groupement acétamido, sulfate, sulfamido, phosphate, phosphamido, - R3 et R4, identiques ou différents, représentent soit

H, soit OH, ou OCH3, ou encore un groupement sulfate ou phosphate, - R1 représente soit H, soit OH, ou OCH3, ou encore un résidu ose ou os amine dont le carbone anomérique en position 1 (C1) est engagé dans une liaison glycosidique, les positions C2, C3 et C4 étant respectivement substituées par des groupes R'2, R'3, et R'4 ayant respectivement les significations données ci-dessus pour

R2, R3, et R4, et la position C6 par un groupe R' ayant la signification donnée ci-dessus pour R, l'un au moins des groupes R2, R'2, R3, R13, R4 ou R '4 représentant un résidu sulfate ou phosphate.

10. Composition selon la revendication 8 ou la revendication 9 caractérisée en ce que le dérivé osidique est choisi parmi les composés suivants - a ou 8-méthyl-glycoside N-acetyl-4-sulfate-6-OR-2desoxy-glucosamine, - N-acetyl 4-Sulfate-6-OR-2-desoxy-glucosamine, - a ou p-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-OR-glucopyrano- se, - 4-sulfate-6-OR-glucopyranose, - 6,6 '-di-OR-4, 4' -di-sulfate-a,a'-D-Trehalose,

R ayant la signification indiquée dans la revendication 9.

11. Composition selon l'une des revendications 8 à 9 caractérisée en ce que le dérivé osidique est choisi parmi les composés suivants: - a ou ss-méthyl-glycoside N-acetyl-4-Sulfate-6octanoyl-2-desoxy -glucosamine, - a ou ss-méthyl-glycoside-N-acetyl-4-Sulfate-6-(2,3- dipalmitoyl) glyceroyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-sulfate-6-octanoyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-Sulfate-6- (2, 3-dipalmitoyl) -glyceroyl-2- desoxy-D-glucosamine, - a ou p-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-octanoyl-glucopyranoside, - a ou p-methyl-gîycoside 4-Sulfate-6- (2, 3-dipalmi- toyl)-glyceroyl-D-glucopyranoside, - 4-Sulfate-6-octanoyl-D-glucopyranose, - 4-Sulfate-6(2,3-di-palmitoyl)-glyceroylglucopyranose - 4,4' di-sulfate-6,6' di-octanoyl-a,a'-D-Trehalose, - 4,4'di-sulfate-6,6'(2,3-dipalmitoyl)-glyceroyl-a-a'

D-Trehalose.

12. Composition selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisée en ce que la substance pharmacologiquement active est un dérivé lipophile de muramyl-peptide utilisable en tant qu'adjuvant de vaccin ou agent anti-infectieux.

13. Composition selon la revendication 12 caractérisée en ce que la substance pharmacologiquement active est choisie parmi les composés répondant à la formule (IV) suivante :

dans laquelle - R représente H ou CH3 ; - Rq est OH, OS03, OPO3 ou un résidu N-acétylglucosaminyle liée par son carbone anomérique - R6 est un groupe Z-(B1),1 - R7 représente un groupe - NH2, -OH ou un groupe -OW1, W1 étant un groupe hydrocarboné comportant de 1 à 10 atomes de carbone ;; - R8 est un groupe (A1)-Y - X représente un résidu aminoacyle du groupe comprenant alanyle, valyle, isoleucyle, norleucyle, leucyle, thréonyle, prolyle, glutaminyle, asparaginyle, méthionyle, tryptophanyle, phénylalanyle, tyrosyle, glycyle - Y représente soit OH, soit NH2, ou un groupe -OW2, W2 étant un groupe hydrocarboné de 1 à 4 atomes de carbone, ou encore un groupement lipophile du type A ou du type B, - Z représente soit H, soit un groupement lipophile du type A ou du type B, étant cependant entendu que l'un au moins des deux groupes Y et Z est toujours constitué par un groupement lipophile du type A ou du type B ;; - n1 et n2, identiques ou différents, représentent zéro ou 1, - A1 et B1 sont soit des groupes respectivement identiques ou différents comprenant de 1 à 3 résidus aminoacyles, eux-mêmes identiques ou différents entre eux, ou encore un groupe -NH-(CH2)p-CO- avec des valeurs de p comprises entre 2 et 10.

14. Composition selon la revendication 13 caractérisée en ce que la substance pharmacologiquement active est choisie parmi les composés de formule (II) dans laquelle - n1 et n2 représentent zéro, - R5 représente CH3, - R; représente -OH, -NH2 ou -On (CH2) H avec x1 compris xl entre 1 et 6, avec une préférence pour x1=4, - X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente -O-CH2-CHO(R7)-CH2O(R8),

Z représente H, et lorsque Z représente O

||

-C-CHO(R7)-CH2O(R8), Y représente -OH, -NH2 ou un groupe -OW2 W2 ayant la signification indiquée dans la revendication 6, et R7 et R8 étant des groupes palmitoyle.

15. Composition selon la revendication 13, caractérisée en ce que la substance pharmacologiquement active est choisie parmi les composés de formule (II) dans laquelle - n1 et n2 représentent zéro, - R5 représente CH3, - R6 représente -OH, ou -NH2 ou -On (CH2)X1H avec x1 compris entre 1 et 6, avec une préférence pour x1=4, - X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente -O-(CH2). H avec x2 = 8, Z représente H, et lorsque Z représente -CO(CH2)H, avec x2 = 8, Y représente -OH, -NH2, ou un groupe -0W2, W2 ayant la signification indiquée dans la revendication 13.

16. Composition selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisée en ce que l'immunomodulateur est un constituant d'origine bactérienne, notamment un dimycolate de tréhalose, un

Lipide A monophosphorylé ou diphosphorylé ou des analogues de ces constituants.

17. Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce que l'immunomodulateur est un analogue du Lipide A répondant à la formule générale (V),

dans laquelle: Rq et R'1 représentent H ou PO4, avec au moins Rq ou R'1 étant un groupe PO4

R2, R3 et R'2, R'3 représentent CO-CH(OR)-(CH2)X-CH3, x étant compris entre 5 et 15, avec une préférence pour x = 10, et R étant CO-(CH2)y-CH3 y étant compris entre 5 et 15 avec une préférence pour x = 10 ou 12.

18. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 17 dispersée ou dispersable dans un solvant aqueux physiologiquement acceptable.