FR2646852A1

FR2646852A1 - Polyphenolic product with antiviral activity

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Publication number: FR2646852A1
Application number: FR8906282A
Authority: FR
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1989-05-12
Filing date: 1989-05-12
Publication date: 1990-11-16
Anticipated expiration: 2009-05-12
Also published as: FR2646852B1

Abstract

The invention relates to a polyphenolic product. This product is characterised by the fact that it can be obtained by extraction from plant organs, by means of a volatile polar solvent and by concentration of the extract. Application to the manufacture of antiviral pharmaceutical compositions.

Description

La présente invention concerne un nouveau produit à activité anti-virale. Elle a plus particulièrement pour objet une famille de substances extraites de plantes très diverses. Ces plantes possèdent entre elles des caractéristiques propres à assurer l'activité anti-virale optimale. The present invention relates to a new product with anti-viral activity. It relates more particularly to a family of substances extracted from very diverse plants. These plants possess characteristics that ensure optimal anti-viral activity.

Les thérapeutiques anti-virales, notamment contre l'herpès, employées à ce jour, ont souvent des effets secondaires indésirables et une toxicité souvent importante. Anti-viral therapies, especially against herpes, used to date, often have undesirable side effects and often significant toxicity.

C'est pourquoi un but de la présente invention est de fournir des produits à activité anti-virale, notamment anti-herpétique, dont les effets secondaires et la toxicité sont faibles. Therefore, an object of the present invention is to provide products with antiviral activity, including anti-herpes, whose side effects and toxicity are low.

Un autre but de la présente invention est de fournir des procédés de préparation des produits spécifiés ci-dessus. Another object of the present invention is to provide processes for the preparation of the products specified above.

Un autre but de la présente invention est de fournir des compositions pharmaceutiques notamment pour usage topique. Another object of the present invention is to provide pharmaceutical compositions, in particular for topical use.

Ces buts et d'autres qui apparaîtront par la suite sont atteints par des produits polyphénoliques, de la famille des proanthocyanidols, caractérisés par le fait qu'ils être peuvent obtenus par extraction d'organes végétaux au moyen d'un solvant polaire volatil et concentration de l'extrait. These and other objects which will appear later are achieved by polyphenolic products, family proanthocyanidols, characterized in that they can be obtained by extraction of plant organs using a volatile polar solvent and concentration of the extract.

Les proanthocyanidols ont en commun de se dégrader en anthocyanidols par hydrolyse acide et de se polymériser par oxydation en solution aqueuse en devenant de moins en moins solubles dans l'eau. Proanthocyanidols have in common to degrade to anthocyanidols by acid hydrolysis and to polymerize by oxidation in aqueous solution becoming less and less soluble in water.

On trouve ainsi dans la nature des monomères tels que la catéchine, I'épicatéchine et des flavanes 3-4, diols, des oligomères d'un poids moléculaire compris entre 600 et 1000, et des polymères d'un poids moléculaire pluS élevé. Monomers such as catechin, epicatechin and 3-4 flavans, diols, oligomers with a molecular weight between 600 and 1000, and polymers of higher molecular weight are thus naturally present.

Un très grand nombre d'espèces végétales peuvent être utilisées comme source de procyanidols. Parmi celles-ci, on peut citer à titre d'exemple les plantes à proanthocyanidols (à l'exclusion d'autres proanthocyanidols) telles que Pinus maritima, Cupressus sempervirens, Alpinia galanga, les plantes à procyanidols et prodelphinidols telles que Vitis vinifera, Vaccinum myrtillus, Fragaria vesca et des plantes à proanthocyanidols plus rares tels que les plantes à profisetinidols du genre Schinopsis et à proguibourtinidols extraits de divers Acacia. A very large number of plant species can be used as a source of procyanidols. Among these, mention may be made, for example, of proanthocyanidin plants (excluding other proanthocyanidins) such as Pinus maritima, Cupressus sempervirens, Alpinia galanga, plants with procyanidols and prodelphinidols such as Vitis vinifera and Vaccinum. myrtillus, Fragaria vesca and plants with rarer proanthocyanidols such as Schinopsis profietinidol and proguibourtinidol plants extracted from various Acacia species.

Au cours de l'étude qui a mené à la présente invention, il a été montré que certains extraits avaient des propriétés anti-virales remarquables, notamment contre le virus de l'herpès, mais aussi que, ramenée au poids d'organe végétal sec utilisé l'activité des extraits variait de manière importante selon la technique d'extraction utilisée, le solvant et la purification de l'extrait. During the study which led to the present invention, it has been shown that certain extracts have remarkable anti-viral properties, especially against the herpes virus, but also that, brought back to the weight of dry plant organ The activity of the extracts varied significantly depending on the extraction technique used, the solvent and the purification of the extract.

En particulier, les techniques de concentration et de purification permettent d'éliminer non seulement des produits inactifs ou faiblement actifs, tels que les résidus insolubles d'organes végétaux, mais aussi des produits qui pourraient avoir une action antagoniste. In particular, concentration and purification techniques make it possible to eliminate not only inactive or weakly active products, such as insoluble plant organ residues, but also products that could have an antagonistic action.

De préférence, ledit solvant est choisi dans le groupe de l'eau, des alcools linéaires ou ramifiés de moins de 5 atomes de carbone et leurs mélanges monophasés. Avantageusement, ledit solvant polaire est une solution hydroalcoolique, L'alcool choisi dans ce cas étant de préférence un alcool de 1 à 3 atomes de carbone, de préférence le méthanol. Preferably, said solvent is selected from the group of water, linear or branched alcohols of less than 5 carbon atoms and their single-phase mixtures. Advantageously, said polar solvent is an aqueous-alcoholic solution. The alcohol chosen in this case is preferably an alcohol of 1 to 3 carbon atoms, preferably methanol.

L'extraction est une extraction solidelliquide et peut consister aussi bien en une décoction qu'une infusion à diverses températures. The extraction is a solid-liquid extraction and can consist of both a decoction and an infusion at various temperatures.

L'extraction peut être menée de manière à éviter la dégradation des composés polyphénoliques visés. Pour- ce faire, il est préférable d'éviter de trop hautes températures et de réduire la quantité d'oxygène en contact avec lesdits composés polyphénoliques. Ainsi, I'extraction peut être réalisée sous atmosphère inerte, par exemple sous azote. The extraction can be carried out in such a way as to avoid the degradation of the polyphenolic compounds concerned. To do this, it is preferable to avoid too high temperatures and to reduce the amount of oxygen in contact with said polyphenolic compounds. Thus, the extraction can be carried out under an inert atmosphere, for example under nitrogen.

Afin d'éviter toute dégradation des produits actifs de l'extrait, il est également préférable que la concentration s'effectue par élimination dudit solvant polaire à des températures relativement faibles et pendant une durée courte. Pour cette raison, I'élimination du solvant polaire se fait avantageusement sous pression réduite. Lorsque le solvant polaire contient une proportion importante d'eau, I'élimination du solvant polaire peut se faire par une lyophilisation. In order to avoid any degradation of the active products of the extract, it is also preferable that the concentration is carried out by removal of said polar solvent at relatively low temperatures and for a short time. For this reason, the polar solvent is advantageously removed under reduced pressure. When the polar solvent contains a large proportion of water, the polar solvent can be removed by lyophilization.

L'élimination du solvant polaire se fait jusqu'à obtention d'un extrait sec. Cet extrait est repris deux fois de suite dans une proportion minimale d'eau distillée à une température comprise entre environ 15"C et 40"C, de préférence aux alentours d'environ 200C (les zéros sauf indication contraire, ne sont pas des chiffres significatifs), puis filtré pour séparer les solubles des insolubles. Avantageusement, I'eau distillée de reprise a un volume compris entre 1/10e et l/lOOe du volume de solution alcoolique utilisée pour la décoction. A titre indicatif, le poids d'eau distillée est voisin de celui du poids d'organe végétal sec extrait.Les produits polyphénoliques selon l'invention se répartissent alors dans les deux phases selon des proportions variables et qui dépendent de l'origine de l'extrait et de la répartition des proanthocyanidols en fonction de leur poids moléculaire au sein du végéta. Les poids moléculaires élevés sont insolubles (supérieurs à 5.103), les poids moléculaires faibles (inférieurs à 5.103) sont solubles. Avantageusement, pour des questions de facilité de formulation galénique, on utilise des proanthocyanidols solubles, c'est-à-dire des proanthocyanidols dont le poids moléculaire est inférieur à environ 5.103. La fraction ainsi obtenue représente de iqbc à 20 96 du poids initial d'organe sec. The polar solvent is removed until a solids content is obtained. This extract is taken twice in succession in a minimum proportion of distilled water at a temperature between about 15 ° C and 40 ° C, preferably around 200C (zeros unless otherwise indicated, are not figures significant), then filtered to separate soluble and insoluble. Advantageously, the recovered distilled water has a volume of between 1 / 10th and 1 / 100th of the volume of alcoholic solution used for the decoction. By way of indication, the weight of distilled water is close to that of the weight of dry plant organ extracted. The polyphenolic products according to the invention are then distributed in the two phases in variable proportions and which depend on the origin of the extract and distribution of proanthocyanidols according to their molecular weight within the veg. The high molecular weights are insoluble (greater than 5.103), the low molecular weights (below 5.103) are soluble. Advantageously, for questions of ease of formulation, soluble proanthocyanidins, that is to say proanthocyanidols whose molecular weight is less than about 5.103, are used. The fraction thus obtained represents from 1% to 20% of the initial weight of dry organ.

A la suite de ces opérations, il est avantageux de poursuivre l'enrichissement par élimination des substances non proanthocyanidoliques. As a result of these operations, it is advantageous to continue the enrichment by elimination of non-proanthocyanidolic substances.

Cette élimination peut être réalisée par tout moyen connu en lui-même, mais est de préférence réalisée par des extractions liquide-liquide au moyen d'un solvant organique non miscible à l'eau successives dans le cas des proanthocyanidols hydrosolubles et par décoctipns successives dans le cas des proanthocyanidols non hydrosolubles.This removal can be carried out by any means known per se, but is preferably carried out by liquid-liquid extractions by means of a water-immiscible organic solvent in the case of water-soluble proanthocyanidols and by successive decoctions in the case of non-water-soluble proanthocyanidols.

Plus précisément dans le cas des proanthocyanidols hydrosolubles, la purification est réalisée de la manière suivante
- dissolution de l'extrait dans une phase aqueuse, avantageusement le volume de la phase aqueuse sera voisin du volume utilisé à l'occasion de la dernière reprise à l'eau distillée spécifiée ci-dessus, le volume étant de préférence légèrement supérieur à cette dernière valeur
- extraction liquide/liquide au moyen de solvants dont la polarité est voisine de celle de l'éther éthylique et de l'acétate d'éthyle ou dont la polarité est intermédiaire aux valeurs de ces deux derniers solvants
- extraction de la phase aqueuse à l'aide d'un solvant non miscible à l'eau et de polarité supérieure à l'acétate d'éthyle.Avantageusement, un alcool ayant au plus 1 à 10 atomes de carbone et dont la chaîne est linéaire ou ramifiée, de préférence, les alcools non miscibles à l'eau en en toute proportion dont le nombre de carbones n'excède pas 6.More specifically in the case of water-soluble proanthocyanidols, the purification is carried out as follows
dissolving the extract in an aqueous phase, advantageously the volume of the aqueous phase will be close to the volume used during the last recovery with the distilled water specified above, the volume preferably being slightly greater than this last value
- liquid / liquid extraction using solvents whose polarity is close to that of ethyl ether and ethyl acetate or whose polarity is intermediate to the values of these last two solvents
extraction of the aqueous phase with a solvent immiscible with water and with a polarity greater than ethyl acetate. Advantageously, an alcohol having at most 1 to 10 carbon atoms and whose chain is linear or branched, preferably water immiscible alcohols in any proportion whose carbon number does not exceed 6.

La purification par extraction au moyen d'éther ou d'acétate d'éthyle peut être réalisée en une ou plusieurs opérations d'extraction, avec un ou plusieurs solvants. De préférence on réalise cette étape d'extraction purificatrice en mettant en contact une ou plusieurs fois la phase aqueuse avec une phase éthérée, puis en mettant une ou plusieurs fois la phase aqueuse ainsi purifiée avec une phase acétate d'éthyle. Les solvants utilisés peuvent être récupérés par exemple par distillation, cependant que les extraits sont écartés dans ces extractions liquide-liquide les rapports O/A, c'est-à-dire phase organique sur phase aqueuse, sont avantageusement inférieurs à 1/2, de préférence entre 1/3 et 1/5. Purification by extraction with ether or ethyl acetate can be carried out in one or more extraction operations with one or more solvents. This purifying extraction step is preferably carried out by contacting the aqueous phase one or more times with an ethereal phase, then putting the aqueous phase thus purified one or more times with an ethyl acetate phase. The solvents used can be recovered for example by distillation, while the extracts are separated in these liquid-liquid extractions the O / A ratios, that is to say organic phase on aqueous phase, are advantageously less than 1/2, preferably between 1/3 and 1/5.

Lorsqu'on utilise des solvants qui comme l'éther forment facilement des péroxydes, il est préférable avant tout usage d'éliminer ces derniers. Lorsque cette opération de purification par extraction est menée, en continu ; on peut utiliser des séries de mélangeurs/décanteurs fonctionnant à contre-courant. On peut ainsi réaliser plusieurs extractions successives sur la même phase aqueuse en utilisant des solvants dont la polarité est croissante depuis l'éther jusqu'à l'acétate d'éthyle. When using solvents such as ether easily form peroxides, it is preferable before any use to eliminate them. When this extraction purification operation is conducted continuously; Mixer / decanter series operating countercurrently can be used. It is thus possible to carry out several successive extractions on the same aqueous phase by using solvents whose polarity is increasing from ether to ethyl acetate.

La phase alcoolique de la dernière étape qui contient les proanthocyanidols peut être lavée à l'eau puis évaporée et pourra être utilisée pour fabriquer des compositions pharmaceutiques. Cette fraction représente moins de 5 %, en général entre environ 0,01 et 2 % du poids de l'organe végétal sec. The alcohol phase of the last step which contains the proanthocyanidols may be washed with water and then evaporated and may be used to make pharmaceutical compositions. This fraction represents less than 5%, generally between about 0.01 and 2% of the weight of the dry plant organ.

Ces compositions pharmaceutiques seront particulièrement actives, car on aura éliminé de ces dernières toutes les parties de la plante qui sont soit inefficace, soit antagoniste de l'action des proanthocyanidols. These pharmaceutical compositions will be particularly active, since all the parts of the plant which are either ineffective or antagonistic to the action of proanthocyanidols will have been eliminated from them.

Ces extraits ayant une efficacité bien supérieure à celle de la plante elle-même. Ainsi, on aura éliminé les fractions contenant les insolubles dans ledit solvant polaire volatil tel que les lignines, les celluloses et les amidons.These extracts have an efficiency much higher than that of the plant itself. Thus, fractions containing the insolubles in said volatile polar solvent such as lignins, celluloses and starches will have been removed.

Les compositions pharmaceutiques peuvent comporter des excipients ou des adjuvants utilisés pour une utilisation topique. Ces compositions contiennent entre 0,1 96 et 5 % du produit obtenu par la présente invention. The pharmaceutical compositions may comprise excipients or adjuvants used for topical use. These compositions contain between 0.1% and 5% of the product obtained by the present invention.

Toutes les opérations ci-dessus sont avantageusement menées sous atmosphère inerte. Les fractions finales recueillies présentent une masse moléculaire supérieure à 1000, plus précisément 80 à 90 % des proanthocyanidols qui présentent un poids moléculaire supérieur à 1000. All the above operations are advantageously carried out under an inert atmosphere. The final fractions collected have a molecular weight greater than 1000, more precisely 80 to 90% of proanthocyanidols which have a molecular weight greater than 1000.

Les essais in vitro et cliniques démontrent une remarquable activité jointe à une innocuité quasi-totale, c'est-à-dire dans ce cas non mesurable. The in vitro and clinical trials demonstrate a remarkable activity coupled with an almost total safety, that is to say in this case not measurable.

Les exemples non limitatifs suivants illustrent la présente invention. The following nonlimiting examples illustrate the present invention.

Exemple 1 : Extrait hydrométhanolique de cônes de Cupressus sempervirens
200 g de cônes secs concassés sempervirens sont décoctés trois fois de
suite pendant une demi-heure par 2000 ml de méthanol à 80 %. Les
extraits hydrométhanoliques sont réunis et évaporés à sec sous pression
réduite. On reprend ce résidu par 200 ml d'eau distillée à 200C environ.Example 1 Hydromethanic Extract of Cupressus Sempervirens Cones
200 g of crushed sempervirens dry cones are decocted three times
continued for half an hour with 2000 ml of 80% methanol. The
hydromethanic extracts are combined and evaporated to dryness under pressure
scaled down. This residue is taken up in 200 ml of distilled water at approximately 200 ° C.

On filtre. On reprend l'insoluble par 200 ml d'eau distillée à 20"C
environ. On filtre. Les filtrats sont réunis. Le résidu de cette solution
est d'environ 33 g soit un rendement de 16,5 %. We filter. The insoluble material is taken up in 200 ml of distilled water at 20 ° C.
about. We filter. The filtrates are combined. The residue of this solution
is about 33 g is a yield of 16.5%.

1.2 - Fraction procyanidolique
La solution aqueuse obtenue précédemment est ajustée à 400 ml par de
l'eau distillée et extraite à contre courant par 5 fois 100 ml d'éther
éthylique. La phase éthérée est éliminée, l'éther éthylique est chassé
de la phase aqueuse par évaporatipn sous pression réduite. On complète
le volume de la solution aqueuse à 400 ml par de l'eau distillée, puis on
extrait à contre courant par 5 fois 100 ml d'acétate d'éthyle. 1.2 - Procyanidolic fraction
The aqueous solution obtained above is adjusted to 400 ml with
distilled water and extracted against the current by 5 times 100 ml of ether
ethyl. The ether phase is eliminated, the ethyl ether is removed
of the aqueous phase by evaporation under reduced pressure. We complete
the volume of the aqueous solution to 400 ml with distilled water, then
counter-current extract with 5 times 100 ml of ethyl acetate.

La phase organique est éliminée. On chasse l'acétate d'éthyle de la
solution aqueuse par évaporation sous pression réduite. On complète le
volume de la solution à 400 ml par de l'eau distillée, puis on l'extrait à
contre courant par 5 fois 100 ml de n-butanol. La phase butanolique est
lavée par 2 fois 100 ml d'eau distillée puis évaporée à sec sous pression
réduite. Ce résidu est dissous dans 20 ml de méthanol et la solution
méthanolique est filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est de 780 mg
soit un rendement de 0,39 %.The organic phase is eliminated. Ethyl acetate is removed from the
aqueous solution by evaporation under reduced pressure. We complete the
volume of the 400 ml solution with distilled water, and then extracted
against current by 5 times 100 ml of n-butanol. The butanol phase is
washed twice with 100 ml of distilled water and then evaporated to dryness under pressure
scaled down. This residue is dissolved in 20 ml of methanol and the solution
methanol is filtered and then evaporated to dryness. The residue is 780 mg
a yield of 0.39%.

Le produit ainsi obtenu chromatographié sur plaque de gel de silice,
révèle l'absence de substances susceptibles de migrer dans le solvant
acétate d'éthyle, acide formique, eau (8-1-1 VIV), ce qui indique
l'absence de substances de bas poids moléculaires ( ' 103). Cette
technique permet de suivre la purification du produit. D'autre part, ce
résidu dissous dans un alcool et traité à chaud par de l'acide
chlorhydrique donne lieu à la formation d'une coloration rouge. Une
chromatographie sur plaque contre un témoin révèle la formation de
cyanidine, à l'exclusion d'autre anthocyane.La détermination du poids
moléculaire de ce résidu en perméation de gel en milieu non aqueux
révèle une répartition de poids moléculaires de 1000 à 5000 environ,
avec la présence minoritaire de polymères de haut poids moléculaire (M.1 03). The product thus obtained is chromatographed on a silica gel plate,
reveals the absence of substances likely to migrate into the solvent
ethyl acetate, formic acid, water (8-1-1 VIV), which indicates
the absence of low molecular weight substances (103). This
technique makes it possible to follow the purification of the product. On the other hand, this
residue dissolved in an alcohol and heat-treated with acid
hydrochloric acid gives rise to the formation of a red coloring. A
plate chromatography against a control reveals the formation of
cyanidin, to the exclusion of other anthocyanins.The determination of the weight
of this residue in gel permeation in a non-aqueous medium
reveals a molecular weight distribution of about 1000 to 5000,
with the minority presence of high molecular weight polymers (M.1 03).

Exemple 2 Extrait hydroéthanolique de rhizomes d'Alpinia galanga
2.1 - Extrait brut soluble
1 kg de rhizomes frais d'Alpinia galanga contenant 88 % d'eau sont
broyés puis soumis à une première décoction d'une demi-heure dans 9,2
litres d'éthanol à 65,8 % afin de réaliser en fait une décoction de
l'équivalent de 220 g de rhizomes secs par 10 1 d'éthanol à 60 %. Puis
les rhizomes sont décoctés deux fois de suite par 10 1 d'éthanol à 60 %
pendant une demi-heure. Les extraits sont réunis et évaporés à sec sous
pression réduite. On reprend ensuite ce résidu par 220 ml d'eau
distillée à 20"C environ et on filtre. L'insoluble est repris par 220 mi
d'eau distillée à 20"C. Les filtrats sont réunis.Le résidu de cette
solution aqueuse est de 38,4 g soit un rendement de 3,84 % par rapport
aux rhizomes frais et de 17,45 % par rapport aux rhizomes secs. EXAMPLE 2 Hydroethanolic extract of rhizomes of Alpinia galanga
2.1 - Soluble raw extract
1 kg of fresh rhizomes of Alpinia galanga containing 88% water are
crushed and then subjected to a first decoction of half an hour in 9.2
liters of ethanol to 65.8% in order to actually make a decoction of
the equivalent of 220 g of dry rhizomes per 10 1 of 60% ethanol. Then
the rhizomes are decocted twice in succession by 10 1 of 60% ethanol
for half an hour. The extracts are combined and evaporated to dryness under
reduced pressure. This residue is then taken up in 220 ml of water
distilled at about 20 ° C and filtered.The insoluble is taken up by 220 mi
distilled water at 20 ° C. The filtrates are combined.The residue of this
aqueous solution is 38.4 g, a yield of 3.84% compared to
with fresh rhizomes and 17.45% compared to dry rhizomes.

2.2 - Fraction procyanidolique
La solution aqueuse précédente est traitée de la même façon que dans
le cas de l'exemple 12 jusqu'à l'évaporation de la phase butanolique. Le
résidu est alors lavé à 20"C environ par deux fois 20 ml d'eau distillée.2.2 - Procyanidolic fraction
The previous aqueous solution is treated in the same way as in
the case of Example 12 until the evaporation of the butanol phase. The
The residue is then washed at about 20 ° C. with twice 20 ml of distilled water.

le résidu final est de 104 mg soit un rendement de 0,01 % par rapport
aux rhizomes frais et de 0,4 % par rapport aux rhizomes secs. Cette
fraction présente les mêmes caractéristiques qualitatives que celles des
cônes de Cupressus sempervirens. La mesure du poids moléculaire
révèle un poids moyen de 4000.the final residue is 104 mg, ie a yield of 0.01% relative to
with fresh rhizomes and 0.4% compared to dry rhizomes. This
fraction has the same qualitative characteristics as those of the
cones of Cupressus sempervirens. Molecular weight measurement
reveals an average weight of 4000.

Exemple 3 : Fraction procyanidolique insoluble de Cupressus Sempervirens
200 g de cônes secs concassés de Cupressus sempervirens sont décoctés
trois fois de suite pendant une demi-heure par 2000 M1 de méthanol à
80 %. Les extraits hydrométhanoliques sont réunis et évaporés àsec
sous pression réduite. On lave ce résidu par deux fois 200 ml d'eau
distillée à 20"C environ. Les eaux de lavage sont éliminées. Le résidu
est séché sous vide au dessicateur puis lavé à reflux par deux fois 200
mi d'éther éthylique. La phasée éthérée est éliminée. Le résidu est
ensuite lavé par deux fois 200 ml d'acétate d'éthyle. La phase soluble
dans l'acétate d'éthyle est éliminée.Puis le résidu est repris par 20 ml
de méthanol à 20"C environ. La solution méthanolique est filtrée. Le
résidu de cette solution méthanolique est de 1,74 g soit un rendement
de 0,87 96. Cette fraction insoluble dans l'eau présente les mêmes
caractéristiques qualitatives que la fraction soluble obtenue à l'exemple
1. La détermination des poids moléculaires indique la présence très
prépondérante de molécules de hauts poids moléculaires (?5.î04). Example 3 Insoluble Procyanidolic Fraction of Cupressus Sempervirens
200 g of crushed dry cones of Cupressus sempervirens are decocted
three times in a row for half an hour per 2000 M1 of methanol to
80%. The hydromethanic extracts are combined and evaporated to
under reduced pressure. This residue is washed twice with 200 ml of water
distilled at about 20 ° C. The washings are removed.
is dried under vacuum in the desiccator and then washed at reflux twice
half of ethyl ether. The ethereal phasing is eliminated. The residue is
then washed twice with 200 ml of ethyl acetate. Soluble phase
in ethyl acetate is removed.Then the residue is taken up in 20 ml
methanol at approximately 20 ° C. The methanol solution is filtered.
the residue of this methanolic solution is 1.74 g, a yield
0.87 96. This water insoluble fraction has the same
qualitative characteristics that the soluble fraction obtained in the example
1. The determination of molecular weights indicates the very presence
preponderant high molecular weight molecules (? 5.l04).

Exemple 4 : Essais antiviraux in vitro
Les essais antiviraux ont été réalisé sur le virus de l'herpès simplex de
type I implanté sur des fibroblastes de poumon embryonnaire humain.Example 4: In Vitro Antiviral Trials
Antiviral tests were conducted on the herpes simplex virus of
type I implanted on human embryonic lung fibroblasts.

On a déterminé sur un même lot de dilution virale correspondant à une
dose infectante 50 (DI 50) 105,7 virus par nuit, l'efficacité antivirale
des différents produits proanthocyanidoliques obtenus, c'est--à-dire la
quantité de produit par nuit, c'es--à-dire 100 ,ul de milieu qui provoque
une diminution de moitié de la DI 50. The same batch of viral dilution corresponding to one
Infectious dose 50 (DI 50) 105.7 viruses per night, antiviral efficacy
different proanthocyanidolic products obtained, that is to say the
amount of product per night, ie 100 μl of medium which causes
a 50% reduction in the DI 50.

A titre de comparaison, ont été testés également les oligomères (PM t 103) de Pinus maritima obtenus à partir d'écorce de Pinus maritima sèche comme dans le cas de l'exemple 1. On retrouve ces oligomères en solution dans l'acétate d'éthyle qui sert normalement au lavage du résidu de poids moléculaire plus élevé.

By way of comparison, oligomers (PM t 103) of Pinus maritima obtained from dry Pinus maritima bark were also tested, as in the case of Example 1. These oligomers are found in solution in sodium acetate. which is normally used for washing the higher molecular weight residue.

<SEP> QUANTITE <SEP> PROVOQUANT <SEP> LA
<tb> <SEP> EXTRAIT <SEP> DIMINUTION <SEP> DE <SEP> MOITIE <SEP> DE <SEP> LA
<tb> <SEP> DI <SEP> 50
<tb> Procyanidols <SEP> solubles <SEP> de
<tb> Cupressus <SEP> sempervirens <SEP> 4 <SEP> pu/100 <SEP> 1 <SEP>
<tb> Procyanidols <SEP> insolubles <SEP> de
<tb> Cupressus <SEP> sempervirens <SEP> 7,2 <SEP> ils/100 <SEP>
<tb> Procyanidols <SEP> solubles <SEP> d'Alpinia
<tb> galanga <SEP> I <SEP> /100 <SEP>
<tb> Oligomères <SEP> procyanidoliques
<tb> de <SEP> Pinus <SEP> maritima <SEP> 15,6 <SEP> | <SEP> /100 <SEP>
<tb>
Exemple 5 :: Essais de toxicité sur l'animal des proanthocyanidols obtenus
dans les exemples précédents
La toxicité par voie orale de tous les proanthocyanidols obtenus
recherchée chez la souris n'a pu être évaluée, les doses à intégrer
dépassant les possibilités des animaux.<SEP> QUANTITY <SEP> CAUSING <SEP> LA
<tb><SEP> EXTRACT <SEP> DECREASE <SEP> FROM <SEP> HALF <SEP> FROM <SEP> LA
<tb><SEP> DI <SEP> 50
<tb> Procyanidols <SEP> soluble <SEP> of
<tb> Cupressus <SEP> sempervirens <SEP> 4 <SEP> pu / 100 <SEP> 1 <SEP>
<tb> Insoluble <SEP> Procyanidols <SEP> of
<tb> Cupressus <SEP> sempervirens <SEP> 7.2 <SEP> they / 100 <SEP>
<tb> Procyanidols <SEP> soluble <SEP> of Alpinia
<tb> galanga <SEP> I <SEP> / 100 <SEP>
<tb> Procyanidolic Oligomers <SEP>
<tb> of <SEP> Pinus <SEP> maritima <SEP> 15,6 <SEP> | <SEP> / 100 <SEP>
<Tb>
Example 5: Animal toxicity tests of the proanthocyanidols obtained
in the previous examples
Oral toxicity of all proanthocyanidols obtained
in mice could not be evaluated, the doses to be
going beyond the possibilities of animals.

Les tests d'irritation primaire cutanée des mêmes produits ainsi que les
tests d'irritation oculaire pratiqués chez le lapin en solution aqueuse à
5 % pour les fractions solubles ont permis de définir les produits comme
non irritants. Les tests d'irritation primaire cutanée des protanthocya
nidols insolubles en solution à 5 % dans un mélange à 50 % de mono
propylèneglycol et d'eau ont permis de définir ces produits comme non
irritants comparativement à un mélange pur de monopropylèneglycol et
d'eau à 50 %. The primary cutaneous irritation tests of the same products as well as the
ocular irritation tests performed in rabbits in aqueous solution
5% for the soluble fractions allowed to define the products as
non-irritating. Primary skin irritation tests of protanthocya
insoluble nidols in 5% solution in a mixture of 50% mono
propylene glycol and water have helped to define these products as non
irritants compared to a pure mixture of monopropylene glycol and
50% water.

Exemple 6 : Essais cliniques sur les procyanidols d'Alpinia galanga
Les essais cliniques ont été réalisés sur les proanthocyanidols d'Alpinia
galanga obtenus à l'exemple 2.Example 6: Clinical Trials on Procyanidols of Alpinia Galanga
The clinical trials were carried out on the proanthocyanidols of Alpinia
galanga obtained in Example 2.

L'étude a porté sur 1-40 malades, présentant des symptômes herpétiques
débutant depuis moins de 24 heures, répartis comme suit
. 24 femmes d'âges compris entre 17 et 47 ans présentant un herpès
récurrant lié au cycle menstruel. Parmi elles, on comptait 18 cas
d'herpès labial et 6 cas d'herpès touchant des régions diverses du corps
non muqueuses (ailes du nez, fesses, joues).The study involved 1-40 patients with herpetic symptoms
Beginner for less than 24 hours, distributed as follows
. 24 women between 17 and 47 years old with herpes
recurrent related to the menstrual cycle. Among them, there were 18 cases
of herpes labialis and 6 cases of herpes affecting various regions of the body
non-mucous (wings of the nose, buttocks, cheeks).

. 116 hommes d'âges compris entre 19 et 54 ans présentant tous un
herpès labial.. 116 men between the ages of 19 and 54, all with a
genital herpes.

Les femmes ont été réparties en quatre groupes :
. un groupe témoin d'herpès labial récurrent,
,un groupe essai de la même affection soit à chaque fois 9 personnes,
un groupe témoin d'herpès divers,
. un groupe essai d'herpès divers, soit à chaque fois 3 personnes.The women were divided into four groups:
. a control group of recurrent herpes labialis,
, a test group of the same affection is in each case 9 people,
a control group of various herpes,
. a trial group of various herpes, in each case 3 people.

Les hommes ont été répartis en deux groupes égaux de 58 personnes, un
groupe essai et un groupe témoin aussi homogène que possible.The men were divided into two equal groups of 58 people, one
test group and a control group as homogeneous as possible.

Les témoins sont traités jusqu'à disparition des lésions à raison d'une
application à 7h, 9h, llh, 13h, 15h, 17h et 19 h pendant trois jours puis
d'une application matin, midi et soir jusqu'à la fin d'un gel placebo de
composition suivante :
Polyacrylate de sodium réticulé : 0,75 %
Caramel : qs pour coloration
Conservateurs: paraoxybenzoate de propyle et de méthyle:
0,35%
Eau distillée : qs 100 %.The witnesses are treated until the disappearance of the lesions at the rate of one
application at 7h, 9h, 11h, 13h, 15h, 17h and 19h for three days then
an application morning, noon and night until the end of a placebo gel
following composition:
Crosslinked sodium polyacrylate: 0.75%
Caramel: qs for coloring
Preservatives: propyl and methyl paraoxybenzoate:
0.35%
Distilled water: qs 100%.

Les groupes essais sont traités dans les mêmes conditions que les témoins avec un gel de la composition suivante :
Polyacrylate de sodium réticulé : 0,75 %
Fraction polysaccharidique t 2 %
Conservateurs : paraoxybenzoate de propyle et de méthyie
0,35 %
Eau distillée : qs 100 96. The test groups are treated under the same conditions as the controls with a gel of the following composition:
Crosslinked sodium polyacrylate: 0.75%
Polysaccharide fraction t 2%
Preservatives: Propyl and methyl paraoxybenzoate
0.35%
Distilled water: qs 100 96.

Résultats :
On apprécie le temps que met la lésion à disparaître complètement ne laissant plus qu'une trace cicatricielle totalement fermée et sèche.Results:
We appreciate the time that the lesion disappears completely, leaving only a cicatricial trace completely closed and dry.

Groupe témoin des hommes : 5ème jour:
6ème jour : 4 et 1 abandon
7ème jour : 4
8ème jour : 16 et 2 abandons
9ème jour : 11
10ème jour : 14
11ème jour : 2
12ème jour : 3
Groupe essai des hommes : 1 er jour : 1
2ème jour 5
3ème jour : 37
4ème jour : 12
5ème jour : 1
6ème jour 0
7ème jour 1 abandon
8ème jour : 1
Premier groupe témoin des femmes
5ème jour 1
6ème jour : 1
7ème jour 4
8ème jour 0
9ème jour 2 abandons
10ème au 15ème jour: 0
16ème jour : 1
Premier groupe essai des femmes
2ème jour : 1
- 3ème jour : 2
4ème jour : 2
6ème jour : 2
9ème jour : 2
Deuxième groupe témoin des femmes
13ème jour : 2
17ème jour : 1
Deuxième groupe essai des femmes
4ème jour : 1
8ème jour : 2
Outre une efficacité importante du produit, on note chez tousles sujets traités une excellente tolérance au traitement, aucun effet secondaire n'ayant été signalé, les abandons en cours d'essai ne sont pas liés à une intolérance au produit. Men's control group: 5th day:
6th day: 4 and 1 abandon
7th day: 4
8th day: 16 and 2 dropouts
9th day: 11
10th day: 14
11th day: 2
12th day: 3
Men's Test Group: Day 1: 1
2nd day 5
3rd day: 37
4th day: 12
5th day: 1
6th day 0
7th day 1 abandon
8th day: 1
First control group of women
5th day 1
6th day: 1
7th day 4
8th day 0
9th day 2 give up
10th to 15th day: 0
16th day: 1
First group test of women
2nd day: 1
- 3rd day: 2
4th day: 2
6th day: 2
9th day: 2
Second group control of women
13th day: 2
17th day: 1
Second group women's essay
4th day: 1
8th day: 2
In addition to a high efficacy of the product, we note in all treated subjects excellent tolerance to treatment, no side effects have been reported, discontinuations during the trial are not related to intolerance to the product.

Claims

1. Polyphenolic product, characterized in that it can be obtained by extraction from plant organs, by means of a volatile polar solvent and by concentration of the extract.

2. Product according to claim 1, characterized in that said polar solvent is selected from the group of water, linear or branched alcohols with less than 5 carbon atoms and mixtures thereof.

3. Product according to claim 2, characterized in that said polar solvent is an aqueous-alcoholic solution.

4. Product according to one of claims 1 to 3 taken separately, characterized in that the concentration step comprises an evaporation of said polar solvent under reduced pressure.

5. Product according to one of claims 2 to 4 taken separately, characterized in that said polar solvent is selected from the group of linear or branched alcohols having not more than 5 carbon atoms and mixtures thereof with water and by the after evaporation of said polar solvent, the residue is taken up in an aqueous phase, then filtered and subjected to further evaporation of the aqueous phase.

6. Product according to claims 4 and 5 taken separately, characterized in that the concentration step comprises the elimination of the lighter and heavier molecules to obtain an average molecular weight between 103 and

7. Pharmaceutical composition, characterized in that it comprises the product according to claims 1 to 6.

8. Pharmaceutical composition according to claim 7, characterized in that it further comprises excipients and adjuvants used for topical use.

9. Use of the product according to one of claims 1 to 6, for manufacturing antiviral pharmaceutical compositions.