FR2640627A1 - New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. - Google Patents
New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. Download PDFInfo
- Publication number
- FR2640627A1 FR2640627A1 FR8816647A FR8816647A FR2640627A1 FR 2640627 A1 FR2640627 A1 FR 2640627A1 FR 8816647 A FR8816647 A FR 8816647A FR 8816647 A FR8816647 A FR 8816647A FR 2640627 A1 FR2640627 A1 FR 2640627A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sep
- formula
- fluoride
- amino
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 0 CCC(*1)OC(CO)*=C1O Chemical compound CCC(*1)OC(CO)*=C1O 0.000 description 2
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
- C07H5/04—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to nitrogen
- C07H5/06—Aminosugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
- C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
Nouveaux fluorures d'aldosaminyle, leur préparation et Leur utilisation pour La fabrication d1oLigosaccha- rides avinés Liés (1#4). Novel aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of linked acid-killed oligosaccharides (1 # 4).
L'invention a pour objet de nouveaux fluorures d'aldosaminyle, en particulier le fluorure de 2-amino-2-désoxy -D-glucopyranosyle, leur procédé de préparation et leur utilisation pour la fabrication d'oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose lies B-(1 # 4) ou d'oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-galactopyranose liés α -(1 # 4). The subject of the invention is novel aldosaminyl fluorides, in particular 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranosyl fluoride, process for their preparation and their use for the manufacture of 2-amino-2- oligosaccharides. B-linked deoxy-D-glucopyranose (1 # 4) or oligosaccharides of 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose bound α - (1 # 4).
De façon plus precise, elle concerne des fluorures d'aldosaminyle qui sont des monosaccharides ou oligosaccharides fluorés, constituant des produits intermediaires de synthèse interessants pour la préparation des glycosides d'alkylamino-glycoses et des oligosaccharides aminés. More specifically, it relates to aldosaminyl fluorides which are fluorinated monosaccharides or oligosaccharides, constituting useful intermediate synthesis products for the preparation of glycosides of alkylamino glycoses and amino oligosaccharides.
Les oligosaccharides aminés, en particulier ceux qui sont constitués de sucres aminés présents naturellement dans les systèmes biologiques tels
Les 2-amino-2-désoxy-D-glucose, 2-amino-2-desoxy-D-ga- lactose ainsi que Leurs dérivés N-acylés, présentent un intéret en eux-mêmes ou comme intermédiaires de synthèse dans le cadre d'applications pharmacologiques ou encore phytosanitaires. C'est ainsi que l'on a rapporté que des oligosaccharides liés g-(1- 4) du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose possédaient des activités immunostimulantes chez L'animal (Suzuki et al., Carbohydr. Res., 151 (1986) 403-408), et que L'on a proposé leur utilisation comme agents antitumoraux (Tokoro et al., Chem. Pharm. Bull., 36 (1988) 784 et antimicrobiens (Suzuki et al. Chem.Amino oligosaccharides, in particular those which consist of naturally occurring amino sugars in biological systems such as
The 2-amino-2-deoxy-D-glucose, 2-amino-2-desoxy-D-galactose and their N-acyl derivatives are of interest in themselves or as synthetic intermediates in the context of pharmacological or phytosanitary applications. Thus, 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose g- (1-4) -linked oligosaccharides have been reported to have immunostimulatory activities in animals (Suzuki et al., Carbohydr Res. 151 (1986) 403-408), and that their use as antitumor agents (Tokoro et al., Chem Pharm Bull., 36 (1988) 784 and antimicrobials (Suzuki et al., Chem.
Pharm. Bull., 33 (1 985) 886.Pharm. Bull., 33 (1,985) 886.
Des propriétés antifongiques ont également éte notées pour ces oligosaccharides (Uchida et al., 4th International Conference on Chitin and
Chitosan Trondheim, 1988). Ceux-ci ont par ailleurs éte utilisés pour la préparation d'agents antibacteriens ou de réactifs de diagnostic (Svensson et al., P.C.T. Int. Appl. W08605789 du 9 octobre 1986).Antifungal properties have also been noted for these oligosaccharides (Uchida et al., 4th International Conference on Chitin
Chitosan Trondheim, 1988). These have also been used for the preparation of antibacterial agents or diagnostic reagents (Svensson et al., PCT Int Appl W08605789 of 9 October 1986).
Les oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-Dglucopyranose lié ss-(1e 4) ont jusqu'à présent été préparés par hydrolyse du chitosane, polysaccharide naturel constitué d'unités 2-amino-2-désoxy-D-glucopy ranose liées B-(1 # 4) par action,- soit de l'acide chlorhydrique concentré à chaud (Horowitz et al.,
J. Am. Chem. Soc., 79 (1957) 5046-49), soit d'une enzyme, la chitosanase (Tahio et al., brevet japonais
JP 6230, 103 (1987) ; Izume et al., Agric. Biol.Oligosaccharides of 2-amino-2-deoxy-Dglucopyranose bound ss- (1e 4) have heretofore been prepared by hydrolysis of chitosan, a naturally occurring polysaccharide consisting of 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose units linked together. B- (1 # 4) by action, - either hot concentrated hydrochloric acid (Horowitz et al.,
J. Am. Chem. Soc., 79 (1957) 5046-49), or an enzyme, chitosanase (Tahio et al., Japanese Patent
JP 6230, 103 (1987); Izume et al., Agric. Biol.
Chem., 51 (1987) 1189-91).Chem., 51 (1987) 1189-91).
Après cette hydrolyse, on sépare Le mélange d'oligosaccharides obtenus par chromatographie d'échanges d'ions comme il est décrit par Maksimov et al., Izv. Akad. Nauk SSSR, Ser. Khim, (1969) 11, 2579-81, ce qui a permis d'obtenir des oligosaccharides de d.p. 2 à 5 avec des rendements qui ne dépassent toutefois pas 5% dans le cas de l'hydrolyse acide. After this hydrolysis, the mixture of oligosaccharides obtained is separated by ion exchange chromatography as described by Maksimov et al., Izv. Akad. Nauk SSSR, Ser. Khim, (1969) 11, 2579-81, which made it possible to obtain oligosaccharides from d.p. 2 to 5 with yields which, however, do not exceed 5% in the case of acid hydrolysis.
Dans le cas de l'hydroLyse enzymatique, l'oligosaccharide de d.p. 6 a également pu être obtenu, mais avec un très faible rendement. Il est à noter toutefois que ce procédé necessite l'utilisa- tion d'une enzyme qui n'est pas commercialement disponible. In the case of enzymatic hydrolysis, the oligosaccharide of d.p. 6 could also be obtained, but with very low efficiency. It should be noted, however, that this process requires the use of an enzyme which is not commercially available.
Ainsi, ces procédés connus de préparation d'oligosaccharides aminés ne permettent pas d'aller au-delà d'un d.p. de 6 et ne donnent pas de bons rendements. Thus, these known processes for the preparation of aminated oligosaccharides do not make it possible to go beyond a d.p. of 6 and do not give good returns.
Des travaux récents ont montre qu'il était possible d'obtenir des oligosaccharides lies ss -(1 + 4) du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose en partant du polysaccharide naturel correspondant la chitine, par action du fluorure dthydrogene anhydre (Bosso et al., Carbohydr. Res., 156 (1986) 57-68). Recent work has shown that it is possible to obtain oligosaccharides related ss - (1 + 4) 2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose starting from the corresponding natural polysaccharide chitin, by the action of anhydrous hydrogen fluoride. (Bosso et al., Carbohydr Res., 156 (1986) 57-68).
Le mélange d'oligosaccharides obtenu peut être separé par chromatographie d'exclusion en utilisant le Bio-gel P-4 et successivement comme éluants l'acétate d'ammonium, puis l'eau. On pouvait donc envisager d'étendre cette technique au chitosane dans le but d'obtenir des oligosaccharides inférieurs. The oligosaccharide mixture obtained can be separated by exclusion chromatography using Bio-gel P-4 and successively as ammonium acetate eluants and then water. It could therefore be envisaged to extend this technique to chitosan in order to obtain lower oligosaccharides.
Cependant, l'application de cette technique au chitosane ne conduit pas aux oligosaccharides homologues aminés inférieurs voulus. However, the application of this technique to chitosan does not lead to the desired lower amino homologous oligosaccharides.
La présente invention a précisément pour objet de nouveaux fluorures d'aldosaminyle dérives du chitosane ou de polygalactosamines, utilisables comme produit intermédiaire pour la préparation d'oligosaccharides du 2-amino-2-desoxy-D-glucopyranose lies ss < 1+ 4) ou d'oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-galactopyranose liés a-(I4). The subject of the present invention is precisely new aldosaminyl fluorides derived from chitosan or polygalactosamines, which can be used as an intermediate product for the preparation of oligosaccharides of 2-amino-2-desoxy-D-glucopyranose related to ss <1+ 4) or oligosaccharides of 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose bonded to- (I4).
Ces fluorures d'aldosaminyle repondent aux formules
dans lesquelles x est égal à O ou est un nombre entier allant de 1 à 10.
where x is 0 or is an integer from 1 to 10.
L'invention concerne également les enantioméres de la série L des fluorures de formule Ia ou Ib. The invention also relates to enantiomers of the L series of fluorides of formula Ia or Ib.
Ainsi, ces fluorures correspondent à un monosaccharide fluore lorsque x=O ou à des oligosaccharides fluorés lorsque 1#x#10. Thus, these fluorides correspond to a fluoro monosaccharide when x = O or to fluorinated oligosaccharides when 1 # x # 10.
Le monosaccharide fluoré est le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D-glucopyranosyle de formule :
ou le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D galactopyranosyle de formule :
or 2-amino-2-deoxy-alpha-D galactopyranosyl fluoride of formula:
Le fluorure de formule (II) est un intermédiaire de synthese important car on peut obtenir des glycosides d'alkylamino-glycoses en partant de fluorures de glucosyle. De même, Les fluorures de glucosyle constituent des donneurs de restes glucosyle dans Les réactions de biosynthèse faisant intervenir des glucosyl-transférases. The fluoride of formula (II) is an important synthesis intermediate because it is possible to obtain alkylamino-glycose glycosides starting from glucosyl fluorides. Similarly, glucosyl fluorides are donors of glucosyl residues in biosynthetic reactions involving glucosyl transferases.
Les fluorures d'aldosaminyle de L'invention peuvent etre obtenus par un procédé simpLe à partir du chitosane ou d'une polygalactosamine. The aldosaminyl fluorides of the invention can be obtained by a simple method from chitosan or polygalactosamine.
Aussi, l'invention a également pour objet un procédé de préparation des fluorures d'oligoglucosaminyle répondant à la formule (Ia) donnée ci-dessus, et de leurs énantioméres de la série L, qui consiste à faire reagir du chitosane avec du fluorure d'hydrogène anhydre. Also, the subject of the invention is also a process for the preparation of oligoglucosaminyl fluorides corresponding to the formula (Ia) given above, and their enantiomers of the L series, which consists of reacting chitosan with fluoride of anhydrous hydrogen.
Elle concerne également un procédé de préparation de fluorures d'oligogalactosaminyle repondant à la formule (Ib) donnée ci-dessus et de leurs énantiomères de la série L, qui consiste à faire réagir de l'a-(1+ 4) polygalactosamine avec du fLuorure d'hydrogene anhydre. It also relates to a process for the preparation of oligogalactosaminyl fluorides corresponding to the formula (Ib) given above and their enantiomers of the L series, which consists in reacting a- (1 + 4) polygalactosamine with anhydrous hydrogen fluoride.
Généralement, on utilise du fluorure d'hydrogène anhydre à 0 C, on y ajoute le chitosane pulvérulent ou la polygalactosamine, puis on agite la suspension tout en laissant La température remonter à La température ambiante. La quantité de fluorure d'hydrogene utilisée dépend de la quantité de chitosane ou de polygalactosamine. On peut utiliser par exemple de une à quatre parties de chitosane pour 20 parties de fluorure d'hydrogène. Le fluorure d'hydrogène anhydre utilisé ne contient pas plus de 10X d'eau. Generally, anhydrous hydrogen fluoride is used at 0 ° C., powdered chitosan or polygalactosamine is added thereto, and the suspension is stirred while allowing the temperature to rise to room temperature. The amount of hydrogen fluoride used depends on the amount of chitosan or polygalactosamine. For example, one to four parts of chitosan can be used per 20 parts of hydrogen fluoride. The anhydrous hydrogen fluoride used does not contain more than 10% water.
Lorsque cet acide est mis en contact avec
Le chitosane ou La polygalactosamine, on obtient rapidement une solution homogène, et on maintient
La solution à la température ambiante pendant un temps qui peut varier de 12 à 48h et même davantage, en fonction du ou des fluorures d'oligoglucosaminyle que l'on veut obtenir.When this acid is brought into contact with
Chitosan or polygalactosamine, a homogeneous solution is quickly obtained, and is maintained
The solution at room temperature for a time which can vary from 12 to 48 hours and even more, depending on the oligoglucosaminyl fluoride or fluorides that is to be obtained.
En effet, te chitosane qui est un polysaccharide répondant à la formule ci-dessous,
se dissout facilement dans le fluorure d'hydrogène mais se dégrade également dans cet acide en oligosaccharides fluorés ayant des masses moléculaires plus faibles. Plus Le temps de réaction est important et la température élevée, plus la dégradation augmente et plus les oligosaccharides fluorés recueillis ont des masses moléculaires faibles.Indeed, chitosan, which is a polysaccharide corresponding to the formula below,
readily dissolves in hydrogen fluoride but also degrades in this acid to fluorinated oligosaccharides having lower molecular weights. The longer the reaction time and the higher the temperature, the greater the degradation and the more the recovered fluorinated oligosaccharides have low molecular weights.
Aussi, la proportion et la distribution en masse des composants du mélange d'oligosaccharides fluorés, peuvent être contrôLées en agissant sur le temps de contact entre le fluorure d'hydrogène et le chitosane ou La polygalactosamine de façon à obtenir les constituants voulus. Also, the proportion and mass distribution of the components of the mixture of fluorinated oligosaccharides can be controlled by acting on the contact time between the hydrogen fluoride and the chitosan or polygalactosamine so as to obtain the desired constituents.
Ainsi, un temps de traitement de l'ordre de 12h permet d'obtenir préférentiellement des oLigosaccharides fluorés de d.p. supérieur à 15 ; un temps de traitement de 12h à 48h conduit aux oLigosaccharides de d.p. 1 à 10 tandis qu'un temps de traitement supérieur à 48h conduit exclusivement au monosaccharide fluoré. Thus, a treatment time of the order of 12 hours makes it possible to preferentially obtain fluorinated oligosaccharides from d.p. greater than 15; a treatment time of 12h to 48h leads to the oligosaccharides of d.p. 1 to 10 while a treatment time greater than 48 hours leads exclusively to fluorinated monosaccharide.
Dans le cas du chitosane, lorsqu'on maintient La solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre pendant une durée d'au moins 48h â La température ambiante, La dégradation du chitosane est complète et on recueilte uniquement le monosaccharide fluoré correspondant, soit Le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D-glucopyranosyle de formule (II) décrit ci-dessus. In the case of chitosan, when the chitosan solution is maintained in anhydrous hydrogen fluoride for a period of at least 48 hours at room temperature, the degradation of chitosan is complete and only the corresponding fluorinated monosaccharide is recovered. The 2-amino-2-deoxy-alpha-D-glucopyranosyl fluoride of formula (II) described above.
Par conséquent, le temps de la reaction varie en fonction de La distribution en masse moyenne recherchee. Therefore, the reaction time varies depending on the desired average mass distribution.
Pour isoler ensuite les oligosaccharides fluorés obtenus, on peut évaporer Le fluorure d'hydrogène par entratnement au moyen d'air, puis soumettre le résidu à un procédé de séparation par chromatographie. In order to then isolate the obtained fluorinated oligosaccharides, the hydrogen fluoride can be evaporated by entraining by means of air, and then the residue is subjected to a separation process by chromatography.
Ceci peut être effectué en utilisant une colonne remplie d'un produit tel que le Bio-GeL
P-4.This can be done using a column filled with a product such as Bio-GeL
P-4.
Le résidu solide est introduit dans la cotonne après avoir été dissous dans l'acétate d'ammonium (50mM) amené à pH=4,5 par addition d'acide acétique, et on peut réaliser ensuite l'élution avec le même solvant. Comme on l'a vu précédemment, le fluorure de glucosaminyle de formule (Il) peut etre préparé par le procédé décrit ci-dessus en partant du chitosane. On peut aussi le préparer directement à partir de 2-amino-2-désoxy-D-glucose en dissolvant le 2-amino-2-désoxy-D-gLucose ou L'un de ses sels dans du fluorure d'hydrogene anhydre et en récupérant ensuite le fluorure de formuLe (11) present dans La solution. The solid residue is introduced into the cotton wool after having been dissolved in ammonium acetate (50 mM) brought to pH = 4.5 by addition of acetic acid, and the elution can then be carried out with the same solvent. As has been seen previously, the glucosaminyl fluoride of formula (II) can be prepared by the method described above starting from chitosan. It can also be prepared directly from 2-amino-2-deoxy-D-glucose by dissolving 2-amino-2-deoxy-D-glucose or one of its salts in anhydrous hydrogen fluoride and then recovering the fluoride of formula (11) present in the solution.
Les sels utilisables comme produit de depart peuvent être en particulier le chlorhydrate,
Le nitrate ou tout sel d'acide minéral. The salts which may be used as starting products may in particular be the hydrochloride,
Nitrate or any salt of mineral acid.
Pour récuperer le fluorure de formule (II) présent dans la solution, on peut éliminer l'acide fluorhydrique de la solution par évaporation, par exemple sous pression réduite. To recover the fluoride of formula (II) present in the solution, the hydrofluoric acid can be removed from the solution by evaporation, for example under reduced pressure.
On peut aussi récupérer le fluorure de formule (II) par précipitation en ajoutant à La solution de l'éther éthylique ou un produit analogue qui ne dissout pas le fluorure de formule (II) tout en étant compatible avec le fluorure d'hydrogène. The fluoride of formula (II) can also be recovered by precipitation by adding to the solution ethyl ether or a similar product which does not dissolve the fluoride of formula (II) while being compatible with hydrogen fluoride.
Les fluorures d'aldosaminyle de formule (Ia) et (Ib) obtenus à partir du chitosane ou d'une polygalactosamine par Le procédé décrit ci-dessus, ont une grande stabilité du fait de la présence, en position vicinale du centre anomère, d'un groupe aminé protonable qui diminue La stabilité de L'ion carbonium qui résulterait intermédiairement d'une telle rupture de la liaison carbone-fluor en milieu protoniant. Aussi, ils ne peuvent être hydrolysés par simple addition d'eau en les oligosaccharides non fluorés correspondants. The aldosaminyl fluorides of formula (Ia) and (Ib) obtained from chitosan or a polygalactosamine by the method described above, have a high stability due to the presence, in the vicinal position of the anomeric center, of a protonable amino group which decreases the stability of the carbonium ion which would result in an intermediate manner from such a rupture of the carbon-fluorine bond in a protonating medium. Also, they can not be hydrolysed by simple addition of water to the corresponding non-fluorinated oligosaccharides.
Toutefois, selon l'invention on a pu obtenir les oligosaccharides non fluorés correspondants en réalisant l'hydrolyse dans des conditions différentes. However, according to the invention it was possible to obtain the corresponding non-fluorinated oligosaccharides by carrying out the hydrolysis under different conditions.
Aussi, la présente invention a également pour objet un procédé de fabrication d'oligosaccharides du 2-amino-2 désoxy-D-glucopyranose Liés 6^(1+ 4) qui consiste à hydrolyser Le fluorure d'oligogiucosaminyle de formule (Ia). Also, the present invention also relates to a process for the manufacture of oligosaccharides of 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose bound 6 ^ (1 + 4) which comprises hydrolyzing the oligogiucosaminyl fluoride of formula (Ia).
Elle concerne également un procédé de préparation d'oligosaccharides du 2-amino-2-desoxy-D-galactopyranose Liés a-(1 @ 4), caractérisé en ce qu'il consiste à hydrolyser Le fluorure d'oligogalactosaminyle de formule (Ib). It also relates to a process for the preparation of oligosaccharides of 2-amino-2-desoxy-D-galactopyranose related to a- (1 @ 4), characterized in that it consists in hydrolyzing the oligogalactosaminyl fluoride of formula (Ib) .
Selon un premier mode de mise en oeuvre de ces procédés, on réalise l'hydrolyse en faisant réagir le ou les fluorures de formule (Ia) ou (Ib) avec une solution aqueuse d'acide perchlorique. According to a first embodiment of these processes, the hydrolysis is carried out by reacting the fluoride (s) of formula (Ia) or (Ib) with an aqueous solution of perchloric acid.
Cette réaction permet de transformer le fluorure d'otigoglucosaminyle de formule (Ia) en l'oligosaccharide correspondant, comme cela apparaît sur Le schéma réactionnel de la figure 1 qui se préfère aux fluorures d'oligoglucosaminyle de formule (Ia). This reaction makes it possible to convert the otigoglucosaminyl fluoride of formula (Ia) into the corresponding oligosaccharide, as appears in the reaction scheme of FIG. 1, which is preferred over the oligoglucosaminyl fluorides of formula (Ia).
Pour réaliser cette réaction, on utilise généralement le résidu sec obtenu par fluorolyse du chitosane et on dissout ce résidu dans une solution d'acide perchlorique. On peut operer à la température ambiante, mais on préfère généralement chauffer la solution à une température de 300 C- à 800 C, par exemple à 600 C. To carry out this reaction, the dry residue obtained by fluorolysis of chitosan is generally used and this residue is dissolved in a solution of perchloric acid. It is possible to operate at room temperature, but it is generally preferred to heat the solution to a temperature of 300 ° C. to 800 ° C., for example 600 ° C.
La concentration en acide perchlorique de la solution peut varier dans une large gamme. The perchloric acid concentration of the solution can vary over a wide range.
De même, on peut utiliser des quantités variables de solution. Ainsi, on peut utiliser des solutions d'acide perchlorique ayant des concentrations volumiques en acide perchlorique variant de 2% à 70%.Likewise, varying amounts of solution can be used. Thus, perchloric acid solutions having perchloric acid volume concentrations varying from 2% to 70% may be used.
La réaction est effectuée pendant une duree suffisante pour transformer tous les fluorures d'oligoglucosaminyle ou d'oligogalactosaminyle en les oligosaccharides correspondants. Lorsqu'on opère â 60 C, une durée de 2h est généralement suffisante. The reaction is carried out for a time sufficient to convert all oligoglucosaminyl or oligogalactosaminyl fluorides to the corresponding oligosaccharides. When operating at 60 ° C., a duration of 2 hours is generally sufficient.
Après cette réaction, on peut séparer les différents oligosaccharides par des méthodes classiques, par exemple par chromatographie d'exclusion de gel, en utilisant par exemple du Bio-GeL
P-4 et un éluant adapté, constitué par exemple d'acide acétique aqueux et d'acetate d'ammonium.After this reaction, the various oligosaccharides can be separated by conventional methods, for example by gel exclusion chromatography, using, for example, Bio-GeL.
P-4 and a suitable eluent, consisting for example of aqueous acetic acid and ammonium acetate.
On peut purifier ensuite les oligosaccharides obtenus par ultrafiltration, par exemple sur une membrane Ami con YCO-5 en réalisant l'étution par lreau. Après cette purification, on peut concentrer la solution, La lyophiliser et réaliser ensuite, si nécessaire, une seconde purification. Dans te cas des oligosaccharides ayant un d.p. supérieur ou égal à 4, il est généralement nécessaire d'effectuer une deuxième sequence de chromatographie pour obtenir des produits analytiquement purs. Les fractions oligosaccharidiques homogènes obtenues sont de nouveau ultrafiitrées. On peut ensuite les neutraliser par addition d'une solution d'acide chlorhydrique, puis Les lyophiliser, afin d'obtenir Le chlorhydrate correspondant. The oligosaccharides obtained by ultrafiltration can then be purified, for example on a YCO-5-friendly membrane, by carrying out the elution by glue. After this purification, the solution can be concentrated, lyophilized and then carried out, if necessary, a second purification. In the case of oligosaccharides having a d.p. greater than or equal to 4, it is generally necessary to carry out a second chromatography sequence to obtain analytically pure products. The homogeneous oligosaccharide fractions obtained are again ultra-violet. They can then be neutralized by adding a solution of hydrochloric acid and lyophilized to obtain the corresponding hydrochloride.
SeLon un second mode de mise en oeuvre du procédé de L'invention, on réalise L'hydrolyse en faisant réagir tout d'abord les groupements amine du ou des fluorures de formule (la) ou (Ib) avec un réactif acylant pour transformer la fonction amine primaire en un groupement moins aisément polarisabLe, mais néanmoins susceptible d'être régénéré en amine libre par un traitement simple, et en régénérant ensuite les groupements amine par hydrolyse dans un mélange alcool-eau. According to a second embodiment of the process of the invention, the hydrolysis is carried out by firstly reacting the amine groups of the fluoride (s) of formula (Ia) or (Ib) with an acylating reagent to transform the primary amine function in a less easily polarizable group, but nevertheless capable of being regenerated to free amine by a simple treatment, and then regenerating the amine groups by hydrolysis in an alcohol-water mixture.
Selon une caractéristique de ce second mode de mise en oeuvre du procédé de L'invention, le réactif acylant est l'anhydride trifluoroacétique. According to a characteristic of this second embodiment of the process of the invention, the acylating reagent is trifluoroacetic anhydride.
L'addition d'acide trifluoroacétique aux fluorures de formule (Ia) ou (Ib) conduit quantitativement à la formation des dérivés
O-trifluoroacétyl-trifluoroacétimidate conformément au schéma réactionnel E de La figure 2 annexée qui se rapporte aux fLuorures de glucosaminyle de formuLe (la) obtenus à partir du chitosane. Les groupes protecteurs temporaires trifluoroacétyle sont ensuite aisément hydrolyses dans un mélange alcool-eau, par exemple dans un mélange méthanol-eau, et L'on obtient ainsi tes obigosaccharides correspondants non fluorés.The addition of trifluoroacetic acid to the fluorides of formula (Ia) or (Ib) quantitatively leads to the formation of the derivatives
O-trifluoroacetyl trifluoroacetimidate according to reaction scheme E of the attached Figure 2 which relates to glucosaminyl fluorides of formula (Ia) obtained from chitosan. The temporary trifluoroacetyl protecting groups are then readily hydrolyzed in an alcohol-water mixture, for example in a methanol-water mixture, to give the corresponding non-fluorinated obigosaccharides.
De préférence, on conserve ces oligosaccharides sous La forme de Leur chlorhydrate par neutralisation à l'acide chlorhydrique, ce qui correspond à La formule :
dans Le cas des oligosaccharides dérivés des fluorures de formule (la).Preferably, these oligosaccharides are preserved in the form of their hydrochloride by neutralization with hydrochloric acid, which corresponds to the formula:
in the case of oligosaccharides derived from fluorides of formula (Ia).
Dans ce second mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention, la quantité d'anhydride trifluoroacétique utilisée doit être suffisante pour protéger tous les groupements NH2 et accessoirement OH des fluorures d'oligoglucosaminyle par le groupement CF3CO. Généralement, on utilise 10 parties d'anhydride trifluoroacétique par gramme de chitosane de départ. In this second embodiment of the process of the invention, the amount of trifluoroacetic anhydride used must be sufficient to protect all the NH 2 groups and, incidentally, OH oligoglucosaminyl fluorides by the CF 3 CO group. Generally, 10 parts of trifluoroacetic anhydride are used per gram of starting chitosan.
Cette reaction peut être effectuée à la température ambiante, pendant une durée suffisante pour obtenir le produit intermédiaire de formule (VI) de La figure 2 dans le cas où Le produit de départ est un fluorure de formule (la). Après reaction, on évapore Le réactif acylant en excès sous pression réduite, puis on dissout Le résidu dans un mélange alcool-eau que l'on porte au reflux pendant une durée suffisante, par exemple d'au moins 12h, afin d'obtenir l'oligosaccharide. La solution concentrée obtenue à la suite de cette réaction qui contient les oligosaccharides voulus peut être traitée comme précédemment pour séparer les différents oligosaccharides par chromatographie. Les oligosaccharides obtenus peuvent être purifiés dans les mêmes conditions que précédemment. This reaction can be carried out at room temperature for a time sufficient to obtain the intermediate product of formula (VI) of FIG. 2 in the case where the starting product is a fluoride of formula (Ia). After reaction, the excess acylating reagent is evaporated under reduced pressure and the residue is then dissolved in an alcohol-water mixture which is refluxed for a sufficient period of time, for example at least 12 hours, to obtain oligosaccharide. The concentrated solution obtained as a result of this reaction which contains the desired oligosaccharides can be treated as previously to separate the various oligosaccharides by chromatography. The oligosaccharides obtained can be purified under the same conditions as above.
Dans ce second mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention, on peut aussi faire réagir l'anhydride trifluoracétique directement sur la solution obtenue par fluorolyse du chitosane sans éliminer le fluorure d'hydrogène par évaporation. In this second embodiment of the process of the invention, it is also possible to react the trifluoroacetic anhydride directly on the solution obtained by fluorolysis of chitosan without eliminating the hydrogen fluoride by evaporation.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illus- tratif et non Limitatif en reférence au dessin annexe sur lequel - la figure 1 représente le schéma réactionnel correspondant au premier mode de mise en oeuvre du procédé de préparation d'oligosaccharides, conforme à l'inven- tion, et - la figure 2 représente le schéma réactionnel correspondant au second mode de mise en oeuvre du procédé de préparation d'oligosaccharides de l'invention. Other features and advantages of the invention will appear better on reading the following examples, which are of course given by way of illustration and not by way of limitation to the accompanying drawings in which - FIG. 1 represents the reaction diagram corresponding to the first embodiment of the invention. the process of preparing oligosaccharides according to the invention, and - Figure 2 shows the reaction scheme corresponding to the second embodiment of the oligosaccharide preparation process of the invention.
Exemple 1 : Preparation de fluorures d'oligoglucosami- nyle de formule (Ia). EXAMPLE 1 Preparation of Oligoglucosaminyl Fluorides of Formula (Ia)
Dans un récipient en téflon, en polyéthylè- ne, ou encore en acier, maintenu à OOC, on place 100ml de fluorure d'hydrogène anhydre et 59 de chitosane pulvérulent. On agite la suspension tout en laissant La température remonter à l'ambiante jusqu'à
L'obtention d'une solution homogène que l'on maintient à cette température pendant environ 19h. On refroidit alors la solution à 0 C et on la verse dans 2 L d'ether éthylique froid. Le precipité formé est recueilli par decantation et lavé avec 1 I d'éther, puis séché. On Le dissout ensuite dans 0,51 d'eau et on ajoute du carbonate de calcium en poudre de façon à neutraliser toute acidité résiduelle.Le filtrat, qui contient le mélange de fluorures d'oligoglucosaminyle est séché par lyophilisation.In a Teflon container made of polyethylene or steel, maintained at 0 ° C., 100 ml of anhydrous hydrogen fluoride and 59 ml of powdered chitosan are placed. The suspension is stirred while allowing the temperature to rise to ambient temperature until
Obtaining a homogeneous solution that is maintained at this temperature for about 19 hours. The solution is then cooled to 0 ° C. and poured into 2 L of cold ethyl ether. The precipitate formed is collected by decantation and washed with 1 l of ether and dried. It is then dissolved in 0.5 l of water and calcium carbonate powder is added to neutralize any residual acidity. The filtrate, which contains the oligoglucosaminyl fluoride mixture, is dried by lyophilization.
Exemple 2 : Séparation des fluorures d'oligoglucosaminyle obtenus par fluorolyse dy chitosane.EXAMPLE 2 Separation of oligoglucosaminyl fluorides obtained by fluorolysis of chitosan
On réalise cette préparation par chromatographie d'exclusion en utilisant du Bio-Gel P-4. This preparation is carried out by exclusion chromatography using Bio-Gel P-4.
L'appareillage est constitué d'une pompe à débit contrôlé Milton-Roy (minipompe A, 350 bars ;
Dosapro, Pont St Pierre, France) réglée à un débit de 110ml/heure, commutée à 2 colonnes de verre 5x100cm (K50/100, Pharmacia, Uppsala) remplies de Bio-Gel
P-4 (200-400 mesh ; Pharmacia). La détection est assurée en sortie de colonne par un réfractomètre (Waters, modèle R401) monté en serie. Des échantillons de 1g du mélange sec obtenu dans l'exemple 1 dissous dans 5ml d'une solution d'acétate d'ammonium (50mM) amenée à pH:4,5 par addition d'acide acétique, sont introduits au sommet de la cotonne par l'intermédiaire d'une boucle d'injection (Rheodyne, Cotati, CA ; modèle 7010). Les fractions issues de La coLonne sont collectées automatiquement toutes les 10 min.The apparatus consists of a Milton-Roy Controlled Flow Pump (A mini-pump, 350 bar;
Dosapro, Pont St Pierre, France) set at a flow rate of 110ml / hour, switched to 2 glass columns 5x100cm (K50 / 100, Pharmacia, Uppsala) filled with Bio-Gel
P-4 (200-400 mesh, Pharmacia). The detection is ensured at the column outlet by a refractometer (Waters, model R401) mounted in series. Samples of 1 g of the dry mixture obtained in Example 1 dissolved in 5 ml of a solution of ammonium acetate (50 mM) brought to pH 4.5 by addition of acetic acid are introduced at the top of the cotton seed. via an injection loop (Rheodyne, Cotati, CA, model 7010). Fractions from the column are collected automatically every 10 min.
Celles qui ont un volume hydrodynamique similaire sont réunies, concentrées et séchées par Lyophilisa- tion.Those with a similar hydrodynamic volume are pooled, concentrated and dried by lyophilization.
Deux cycles d'élution sont utilisés pour la séparation des oîigosaccharides fluorés. Two elution cycles are used for the separation of fluorinated oligosaccharides.
Chacun des cycles utilise une solution d'acétate d'ammonium 50 mM amenée à pH : 4,5 par addition d'acide acétique comme éluant. Dans chaque cycLe, après avoir réuni Les fractions de même volume hydrodynamique, celles-ci sont ultrafiltrées sur membrane Ami con Y CO5 avec élution par 21 d'eau, elles sont ensuite concentrées et séchées par Lyophilisation. Après le second cycle, les fractions d'oLi- gosaccharides fluorés homogènes sont caractérises par résonance magnetique nucléaire du 13C en utilisant un appareil AM500 Bruker. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 1 annexé qui indique
Les déplacements en ppm par rapport à l'acétone prise comme référence (31,07ppm), et les cycles sont numérotés en partant de l'extrémité anomérique réductrice par un nombre qui figure entre parenthèses.Each cycle uses a solution of 50 mM ammonium acetate brought to pH 4.5 by addition of acetic acid as eluent. In each cycle, after the fractions of the same hydrodynamic volume are combined, they are ultrafiltered on a membrane with CO 2 eluting with water, they are then concentrated and dried by lyophilization. After the second cycle, the homogeneous fluorinated oligosaccharide fractions are characterized by 13C nuclear magnetic resonance using an AM500 Bruker apparatus. The results obtained are given in the attached table 1 which indicates
Displacements in ppm relative to the acetone taken as reference (31,07ppm), and the cycles are numbered starting from the reducing anomeric end by a number which appears in parentheses.
Exemple 3 : Préparation du fluorure de 2-amino-2-déso xy-α-D-glucopyranosyle de formuLe (
On met en suspension 59 de chitosane à 0 C dans 100ml de fluorure d'hydrogène anhydre, on agite et on laisse la température revenir à l'ambiante. La solution obtenue après 10-30min est abandonnee pendant 48 heures à cette température, puis concentrée sous pression réduite. Le résidu pulvérulent obtenu, lavé à plusieurs reprises par de L'éther éthylique, est recristallisé dans Le méthanol. On obtient ainsi 3,59 du fluorure de formuLe (II), ce qui correspond à un rendement de 62%.Example 3: Preparation of 2-amino-2-deoxy-alpha-D-glucopyranosyl fluoride of formula (
Chitosan at 59 ° C. is suspended in 100 ml of anhydrous hydrogen fluoride, the mixture is stirred and the temperature is allowed to return to ambient temperature. The solution obtained after 10-30 min is left for 48 hours at this temperature and then concentrated under reduced pressure. The pulverulent residue obtained, washed several times with ethyl ether, is recrystallized from methanol. 3.59 of the fluoride of formula (II) is thus obtained, which corresponds to a yield of 62%.
Selon une variante de mise en oeuvre, on verse la solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre qui a été maintenue pendant 48 heures à la température ambiante, dans 2L d'éther éthylique, et on récupère par decantation le précipité formé. On lave celui-ci à plusieurs reprises par de L'éther éthylique ; on obtient ainsi le fluorure de formule (II) avec un rendement comparabLe à celui obtenu précédemment, et on le recristallise dans les mêmes conditions. According to an alternative embodiment, the chitosan solution is poured into the anhydrous hydrogen fluoride which has been kept for 48 hours at room temperature in 2 liters of ethyl ether, and the precipitate formed is recovered by decantation. This is washed several times with ethyl ether; the fluoride of formula (II) is thus obtained with a yield comparable to that obtained previously, and it is recrystallized under the same conditions.
Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes
Point de fusion : 970C
Pouvoir rotatoire : [α] D20 : +78,7 (c 0,68, eau)
Résonance magnétique nucléaire du 13C ( # en ppm)
C-1 105,4 (J,C,F 221Hz), C-2 54,5 (JC,F 26Hz), C-3 70,0 ; C-4 69,2 ; C-S 75,6 ; C-6 60,9.The characteristics of the product obtained are as follows
Melting point: 970C
Rotatory power: [α] D20: +78.7 (c 0.68, water)
13C nuclear magnetic resonance (# in ppm)
C-1 105.4 (J, C, F 221 Hz), C-54.5 (JC, F 26 Hz), C-3770.0; C-4.69.2; CS 75.6; C-6 60.9.
Exemple 4 : Préparation d'oligosaccharides du 2-amino -2-désoxy-D-glucopyranose liés ss-(1 # 4). Example 4: Preparation of 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose oligosaccharides bound ss- (1 # 4).
Pour cette préparation, on suit le schéma réactionnel de la figure 1. For this preparation, the reaction scheme of FIG. 1 is followed.
Sur cette figure, on a schématise également la reaction du chitosane avec le fluorure d'hydrogène dans des conditions conformes à celles de l'exemple 1. On voit ainsi que le chitosane de formule (IV) est dégradé en oligosaccharides fluorés de formule (la). This figure also schematizes the reaction of chitosan with hydrogen fluoride under conditions in accordance with those of Example 1. It can thus be seen that the chitosan of formula (IV) is degraded into fluorinated oligosaccharides of formula (la ).
Ces oligosaccharides fluorés sont transfor més en les oligosaccharides correspondants par traitement à l'acide perchlorique conformement au premier mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention. These fluorinated oligosaccharides are converted into the corresponding oligosaccharides by treatment with perchloric acid in accordance with the first embodiment of the process of the invention.
On dissout la poudre séchée obtenue dans l'exemple 1 dans 50ml d'un mélange comprenant 1 volume d'acide perchlorique à 70X et 5 volumes d'eau, puis on porte la solution à 600C pendant 2 heures. The dried powder obtained in Example 1 is dissolved in 50 ml of a mixture comprising 1 volume of 70X perchloric acid and 5 volumes of water, and the solution is then brought to 600 ° C. for 2 hours.
On ramène alors le volume de la solution à 20ml par concentration sous pression réduite, puis on fractionne la solution en ses constituants par chromatographie d'exclusion de gel en utilisant du Bio-Gel
P-4 et le même appareillage que dans l'exemple 2.The volume of the solution is then reduced to 20 ml by concentration under reduced pressure, and then the solution is fractionated into its constituents by gel exclusion chromatography using Bio-Gel.
P-4 and the same apparatus as in Example 2.
On réalise la séparation chromatographique dans Les mêmes conditions que celles de L'exemple 2, en utilisant des échantillons de îg du mélange sec dissous dans Sml d'eau. On réalise également deux cycles de purification avec de l'acétate d'ammonuim 50mM/acide acétique 250mM puis de l'eau comme
éluants comme dans l'exemple 2.The chromatographic separation is carried out under the same conditions as in Example 2, using samples of 1 g of the dry mixture dissolved in 1 ml of water. Two purification cycles are also carried out with 50mM ammonium acetate / 250mM acetic acid and then with water as
eluents as in Example 2.
Le rendement et les constantes physiques
des oligosaccharides liés ss -(1 4) ayant des d.p.Performance and physical constants
ss - (1 4) -linked oligosaccharides having dp
de 2 à 10, obtenus dans ces conditions, sont donnés
dans Le tableau 2 qui suit.from 2 to 10, obtained under these conditions, are given
in Table 2 which follows.
ExenDLe 5 : Preparation d'olinosaccharides du 2-amino 2-désoxy-D-glucopyranose liéss-(1 # 4). EXAMPLE 5 Preparation of bound 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose olinosaccharides (1 # 4).
Dans cet exemple, on utilise le second
mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention
qui correspond au schéma de la figure 2.In this example, we use the second
mode of implementation of the method of the invention
which corresponds to the diagram of Figure 2.
Sur cette figure, on a donné également
le schéma réactionnel correspondant à la fLuorolyse
du chitosane et à La formation des fluorures de
glucosaminyle de formule (Ia). Ces fluorures de
glucosaminyle réagissent ensuite avec de l'anhydride
trifluoroacétique pour former le dérivé de formule
(VI) qui est ensuite hydrolyse par un mélange de
méthanol et d'eau au reflux. On obtient ainsi Les
oligosaccharides de formule (VII) ayant un d.p.In this figure, we have also given
the reaction scheme corresponding to fluorolysis
chitosan and the formation of fluoride
glucosaminyl of formula (Ia). These fluorides
glucosaminyl react with anhydride
trifluoroacetic acid to form the derivative of formula
(VI) which is then hydrolyzed by a mixture of
methanol and reflux water. We thus obtain
oligosaccharides of formula (VII) having a dp
de 2 à 10. from 2 to 10.
La solution de chitosane dans le fluorure
d'hydrogène obtenue dans l'exemple 1 après 19h,
est concentrée par passage d'un courant d'air. Au
résidu obtenu, on ajoute 50ml d'anhydride trifluoro
acétique. On agite la solution résultante pendant
24 heures à la température ambiante, puis on la
concentre sous pression réduite et on La coévapore
avec du méthanol en utilisant 3 fois 100ml. On reprend
Le résidu dans 200ml d'un mélange méthanol :eau
avec un rapport v/v de 1/1 et on porte la solution
au reflux pendant une nuit. Après concentration
sous pression réduite, on reprend le résidu solide
par de l'eau et on sépare les oîigosaccharidcs
presents dans cette solution par chromatographie
dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 4. The chitosan solution in fluoride
of hydrogen obtained in Example 1 after 19h,
is concentrated by passing a stream of air. the
residue obtained, 50 ml of trifluoro anhydride
acetic. The resulting solution is stirred for
24 hours at room temperature and then we
concentrated under reduced pressure and the coevapore
with methanol using 3 times 100ml. We take back
The residue in 200ml of a methanol: water mixture
with a v / v ratio of 1/1 and we bring the solution
at reflux for one night. After concentration
under reduced pressure, the solid residue is taken up
by water and the oligosaccharides are separated
present in this solution by chromatography
under the same conditions as those of Example 4.
Les rendements et les caractéristiques des produits obtenus sont sensiblement analogues à celles que l'on obtient dans l'exemple précédent. The yields and characteristics of the products obtained are substantially similar to those obtained in the preceding example.
Exemple 6 : Préparation d'oligosaccharides du 2-amino -2-désoxy-D-glucopyranose Liés B-(1" 4).Example 6 Preparation of Oligosaccharides of 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Linked B- (1 "4).
On suit le même schéma réactionnel que celui de L'exemple 5, mais on ajoute directement 50ml d'anhydride trifluoroacétique dans la solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre obtenue après 19h dans l'exemple 1. On agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heures. The same reaction scheme as in Example 5 is followed, but 50 ml of trifluoroacetic anhydride are added directly into the solution of chitosan in the anhydrous hydrogen fluoride obtained after 19 hours in Example 1. The mixture is stirred at room temperature. room temperature for 24 hours.
On le refroidit à 0 C et on le verse dans de l'éther éthylique également refroidi préalablement à la même température. On sépare Le précipité obtenu par décantation, on te reprend par 200ml d'un mélange méthanol-eau avec un rapport v/v de 1/1, puis on chauffe au reflux pendant une nuit. On concentre alors la solution sous pression réduite et on reprend le résidu par 20ml d'eau. On soumet ensuite a solution obtenue à une séparation chromatographique dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 4.It is cooled to 0 ° C. and poured into ethyl ether, also cooled beforehand at the same temperature. The precipitate obtained is separated by decantation, taken up in 200 ml of a methanol-water mixture with a v / v ratio of 1/1, and then refluxed overnight. The solution is then concentrated under reduced pressure and the residue is taken up in 20 ml of water. The resulting solution is then subjected to chromatographic separation under the same conditions as in Example 4.
Les rendements et les caractéristiques des produits séparés sont sensiblement identiques à celtes que L'on obtient dans l'exemple 4.
TABLEAU 1
C-1 <SEP> C-2 <SEP> C-3 <SEP> C-4 <SEP> C-5 <SEP> C-6
<tb> x=0 <SEP> (1) <SEP> 105,00 <SEP> 54,60 <SEP> 69,23 <SEP> 69,99 <SEP> 75,60 <SEP> 60,66
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 26Hz
<tb> x=1 <SEP> (1) <SEP> 105,10 <SEP> 53,9 <SEP> 68,39 <SEP> 75,49 <SEP> 73,04 <SEP> 59,61
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP> 98,41 <SEP> 55,96 <SEP> 72,40 <SEP> 69,56 <SEP> 76,30 <SEP> 60,23
<tb> x=2 <SEP> (1) <SEP> 105,6 <SEP> 54,07 <SEP> 68,22 <SEP> 75,75 <SEP> 73,05 <SEP> 59,59
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP> 71,11 <SEP> 77,04 <SEP> 74,75 <SEP> 60,09
<tb> # <SEP> 99,17 <SEP> 56,05
<tb> (3) <SEP> 72,88 <SEP> 69,59 <SEP> 76,28 <SEP> 60,40
<tb> x=3 <SEP> (1) <SEP> 105,6 <SEP> 54,31 <SEP> 69,62 <SEP> 76,35 <SEP> 74,29 <SEP> 59,66
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 24Hz
<tb> (2) <SEP> # <SEP> 72,54 <SEP> # <SEP> 77,55 <SEP> # <SEP> 74,80 <SEP> # <SEP> 60,18
<tb> (3)# <SEP> 100,51 <SEP> # <SEP> 56,28 <SEP> 60,11
<tb> (4) <SEP> 73,05 <SEP> 70,05 <SEP> 76,25 <SEP> 60,51
<tb> TABLEAU 1 (suite)
<tb> x = 0 <SEP> (1) <SEP> 105.00 <SEP> 54.60 <SEP> 69.23 <SEP> 69.99 <SEP> 75.60 <SEP> 60.66
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 26Hz
<tb> x = 1 <SEP> (1) <SEP> 105.10 <SEP> 53.9 <SEP> 68.39 <SEP> 75.49 <SE> 73.04 <SEP> 59.61
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP> 98.41 <SEP> 55.96 <SEP> 72.40 <SEP> 69.56 <SE> 76.30 <SEP> 60.23
<tb> x = 2 <SEP> (1) <SEP> 105.6 <SEP> 54.07 <SEP> 68.22 <SEP> 75.75 <SEP> 73.05 <SEP> 59.59
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP> 71.11 <SEP> 77.04 <SEP> 74.75 <SEP> 60.09
<tb>#<SEP> 99.17 <SEP> 56.05
<tb> (3) <SEP> 72.88 <SEP> 69.59 <SEP> 76.28 <SEP> 60.40
<tb> x = 3 <SEP> (1) <SEP> 105.6 <SEP> 54.31 <SEP> 69.62 <SEP> 76.35 <SE> 74.29 <SEP> 59.66
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 24Hz
<tb> (2) <SEP>#<SEP> 72.54 <SEP>#<SEP> 77.55 <SEP>#<SEP> 74.80 <SEP>#<SEP> 60.18
<tb> (3) # <SEP> 100.51 <SEP>#<SEP> 56.28 <SEP> 60.11
<tb> (4) <SEP> 73.05 <SEP> 70.05 <SEP> 76.25 <SEP> 60.51
<tb> TABLE 1 (continued)
x=4 <SEP> (1) <SEP> 104,9 <SEP> 52,94 <SEP> 69,60 <SEP> 76,31 <SEP> 73,11 <SEP> 59,58
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2)
<tb> # <SEP> 70,46 <SEP> # <SEP> 76,01 <SEP> # <SEP> 74,74 <SEP> # <SEP> 60,05
<tb> (3)# <SEP> 98,09 <SEP> # <SEP> .55,94
<tb> (4) <SEP> 78,14 <SEP> 69,60 <SEP> 76,31 <SEP> 60,36
<tb> (5)
<tb> x=5 <SEP> (1) <SEP> 105,1 <SEP> 53,95 <SEP> 69,58 <SEP> 76,30 <SEP> 73,07 <SEP> 59,55
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP> # <SEP> 70,81 <SEP> # <SEP> 76,75 <SEP> # <SEP> 74,74 <SEP> # <SEP> 60,02
<tb> # <SEP> 98,49 <SEP> # <SEP> 55,95
<tb> (6)
<tb> 72,34 <SEP> 69,58 <SEP> 76,30 <SEP> 60,35
<tb> x=10
<tb> (2)..(9) <SEP> 99,64 <SEP> (2).(10) <SEP> 56,18 <SEP> 69,63 <SEP> 76,30 <SEP> 73,11 <SEP> 59,64
<tb> (1) <SEP> n'est <SEP> (1) <SEP> 54,27 <SEP> # <SEP> 71,73 <SEP> # <SEP> 77,16 <SEP> # <SEP> 74,80 <SEP> # <SEP> 60,12
<tb> plus <SEP> visible <SEP> JCF25Hz
<tb> 73,11 <SEP> 69,63 <SEP> 76,30 <SEP> 60,47
<tb> Le nombre entre parenthèses caractérise l'unité 2-amino-2-désoxy-Dglucopyranosyle numérotée à partir de l'extrémité réductrice à laquelle appartient l'atome de carbone considéré. x = 4 <SEP> (1) <SEP> 104.9 <SEP> 52.94 <SEP> 69.60 <SEP> 76.31 <SE> 73.11 <SEP> 59.58
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2)
<tb>#<SEP> 70.46 <SEP>#<SEP> 76.01 <SEP>#<SEP> 74.74 <SEP>#<SEP> 60.05
<tb> (3) # <SEP> 98.09 <SEP>#<SEP> .55.94
<tb> (4) <SEP> 78.14 <SEP> 69.60 <SEP> 76.31 <SEP> 60.36
<tb> (5)
<tb> x = 5 <SEP> (1) <SEP> 105.1 <SEP> 53.95 <SEP> 69.58 <SEP> 76.30 <SEP> 73.07 <SEP> 59.55
<tb> JCF <SEP> 221Hz <SEP> JCF <SEP> 25Hz
<tb> (2) <SEP>#<SEP> 70.81 <SEP>#<SEP> 76.75 <SEP>#<SEP> 74.74 <SEP>#<SEP> 60.02
<tb>#<SEP> 98.49 <SEP>#<SEP> 55.95
<tb> (6)
<tb> 72.34 <SEP> 69.58 <SEP> 76.30 <SEP> 60.35
<tb> x = 10
<tb> (2) .. (9) <SEP> 99.64 <SEP> (2). (10) <SEP> 56.18 <SEP> 69.63 <SEP> 76.30 <SEP> 73, 11 <SEP> 59.64
<tb> (1) <SEP> is <SEP> (1) <SEP> 54,27 <SEP>#<SEP> 71,73 <SEP>#<SEP> 77,16 <SEP>#<SEP> 74.80 <SEP>#<SEP> 60.12
<tb> more <SEP> visible <SEP> JCF25Hz
<tb> 73.11 <SEP> 69.63 <SEP> 76.30 <SEP> 60.47
<tb> The number in parentheses characterizes the 2-amino-2-deoxy-Dglucopyranosyl numbered unit from the reducing end to which the carbon atom belongs.
TABLEAU 2
<tb> oligosaccharide <SEP> Rendement <SEP> Point <SEP> de <SEP> fusion <SEP> Pouvoir <SEP> rotatoire
<tb> <SEP> (d.p.) <SEP> (%) <SEP> ( C) <SEP> ([α] <SEP> <SEP> D.degrés)
<tb> <SEP> 2 <SEP> 3,0 <SEP> 247 <SEP> +39,2
<tb> <SEP> 3 <SEP> 9,9 <SEP> 245 <SEP> +20,1
<tb> <SEP> 4 <SEP> 14,3 <SEP> 245 <SEP> +13
<tb> <SEP> 5 <SEP> 15,9 <SEP> 260 <SEP> déc. <SEP> +10
<tb> <SEP> 6 <SEP> 15,4 <SEP> 271 <SEP> déc. <SEP> +8
<tb> <SEP> 7 <SEP> 12,0 <SEP> 271 <SEP> déc. <SEP> +7
<tb> <SEP> 8 <SEP> 8,8 <SEP> 280 <SEP> déc. <SEP> +3
<tb> <SEP> 9 <SEP> 4,7 <SEP> 280 <SEP> déc. <SEP> +2
<tb> <SEP> 10 <SEP> 3,0 <SEP> 280 <SEP> déc. <SEP> +2
<tb> <tb> oligosaccharide <SEP> Yield <SEP><SEP> Point of <SEP> Merger <SEP> Rotational <SEP> Potency
<tb><SEP> (dp) <SEP> (%) <SEP> (C) <SEP>([α]<SEP><SEP> D.degrees)
<tb><SEP> 2 <SEP> 3.0 <SEP> 247 <SEP> +39.2
<tb><SEP> 3 <SEP> 9.9 <SEP> 245 <SEP> +20.1
<tb><SEP> 4 <SEP> 14.3 <SEP> 245 <SEP> +13
<tb><SEP> 5 <SEP> 15.9 <SEP> 260 <SEP> Dec. <SEP> +10
<tb><SEP> 6 <SEP> 15.4 <SEP> 271 <SEP> Dec. <SEP> +8
<tb><SEP> 7 <SEP> 12.0 <SEP> 271 <SEP> Dec. <SEP> +7
<tb><SEP> 8 <SEP> 8.8 <SEP> 280 <SEP> Dec. <SEP> +3
<tb><SEP> 9 <SEP> 4,7 <SEP> 280 <SEP> Dec. <SEP> +2
<tb><SEP> 10 <SEP> 3.0 <SEP> 280 <SEP> Dec. <SEP> +2
<Tb>
Claims (17)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8816647A FR2640627A1 (en) | 1988-12-16 | 1988-12-16 | New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8816647A FR2640627A1 (en) | 1988-12-16 | 1988-12-16 | New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2640627A1 true FR2640627A1 (en) | 1990-06-22 |
Family
ID=9373052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8816647A Withdrawn FR2640627A1 (en) | 1988-12-16 | 1988-12-16 | New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2640627A1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995021850A1 (en) * | 1994-02-09 | 1995-08-17 | Martek Biosciences Corporation | Generation and screening of synthetic drug libraries |
| FR2892419A1 (en) * | 2005-10-24 | 2007-04-27 | Univ Claude Bernard Lyon I Eta | HETEROLIGOMERS OF D-GLUCASAMINE AND N-ACETYL-D-GLUCOSAMINE, PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF AND USE THEREOF |
| WO2014090648A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Solvay Specialty Polymers Italy S.P.A. | Fluorinated chitosan derivatives |
| CN114712383A (en) * | 2016-03-30 | 2022-07-08 | 阿尤维斯研究有限公司 | Novel compositions and methods of treatment |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3922260A (en) * | 1973-08-24 | 1975-11-25 | Quintin P Peniston | Process for depolymerization of chitosan |
-
1988
- 1988-12-16 FR FR8816647A patent/FR2640627A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3922260A (en) * | 1973-08-24 | 1975-11-25 | Quintin P Peniston | Process for depolymerization of chitosan |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 110, 1982, pages 217-227, Elsevier Scientific Publishing Co., Amsterdam, NL; J. DEFAYE et al.: "The behavior of cellulose, amylose, and beta-d-xylan towards anhydrous hydrogen fluoride" * |
| CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 156, 1986, pages 57-68, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, NL; C. BOSSE et al.: "The behavior of chitin towards anhydrous hydrogen fluoride. Preparation of beta-(1-4)-linked 2-acetamido-2-deoxy-d-glucopyranosyl oligosaccharides" * |
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 70, no. 15, 14 avril 1969, page 427, résumé no. 68657v, Columbus, Ohio, US; J.E.G. BARNETT: "Acid and alkaline hydrolysis of glycopyranosyl fluorides", & CARBOHYD. RES. 1969, 9(1), 21-31 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995021850A1 (en) * | 1994-02-09 | 1995-08-17 | Martek Biosciences Corporation | Generation and screening of synthetic drug libraries |
| US5593853A (en) * | 1994-02-09 | 1997-01-14 | Martek Corporation | Generation and screening of synthetic drug libraries |
| FR2892419A1 (en) * | 2005-10-24 | 2007-04-27 | Univ Claude Bernard Lyon I Eta | HETEROLIGOMERS OF D-GLUCASAMINE AND N-ACETYL-D-GLUCOSAMINE, PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF AND USE THEREOF |
| WO2007048974A3 (en) * | 2005-10-24 | 2007-11-01 | Univ Claude Bernard Lyon | D-glucosamine and n-acetyl-d-glucosamine heterooligomers, method for preparing same and use thereof |
| WO2014090648A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Solvay Specialty Polymers Italy S.P.A. | Fluorinated chitosan derivatives |
| US9828444B2 (en) | 2012-12-12 | 2017-11-28 | Solvay Specialty Polymers Italy S.P.A. | Fluorinated chitosan derivatives |
| CN114712383A (en) * | 2016-03-30 | 2022-07-08 | 阿尤维斯研究有限公司 | Novel compositions and methods of treatment |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2333223C2 (en) | Aldehyde derivatives of sialic acid, methods of their obtainment, conjugates of aldehyde derivatives of sialic acid, and pharmaceutical composition based on them | |
| CN1241932C (en) | Novel oligosaccharides, preparation method and pharmaceutical composition containing same | |
| JPWO2007020889A1 (en) | Novel mucin-type glycoprotein and its use | |
| FR2607817A1 (en) | PROCESS AND MATERIAL FOR THE SEPARATION AND PURIFICATION OF CYCLODEXTRINS | |
| CH704106B1 (en) | A method of isolating and purifying monsialoganglioside GM1 for a medical use. | |
| AU2004209371B2 (en) | Process for producing sugar chain asparagine derivative | |
| FR2575182A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF HIGH PURITY RHAMNOSE FROM ARABIC GUM | |
| JPH04230699A (en) | Purification of insulin by chromatography | |
| JP3202365B2 (en) | Method for separating oligomannuronic acid by degree of polymerization | |
| FR2640627A1 (en) | New aldosaminyl fluorides, their preparation and their use for the manufacture of (1->4) bonded oligosaccharide amines. | |
| FR2585707A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOSIALOGANGLIOSIDE | |
| JP4209617B2 (en) | Method for producing chitosan oligosaccharide and method for producing chitosan oligosaccharide alcohol | |
| FR2640628A1 (en) | beta -(1->6) Bonded oligosaccharides, in particular 2-acetamido-2-deoxy-glucoses or -galactoses and their preparation. | |
| KR980008299A (en) | Separation and Purification Method of Low Molecular Chitosan Using Multistage Membrane Process | |
| KR100441270B1 (en) | The Method for Preparation of Water Soluble Free Amine Chitosan | |
| GB2438573A (en) | Purification method and production method for cellobiose | |
| EP0246149A2 (en) | Immunomodulating agents prepared by half-synthesis from a bacterial polysaccharide extracted from a mutant non-encapsulated strain of Klebsiella pneumoniae | |
| JPS6121102A (en) | Preparation of chitosan oligosaccharide | |
| JPS6023354A (en) | Manufacture of pure l-leucine | |
| JP3012924B2 (en) | 2-methyl- {4-O- (2-amino-2-deoxy-β-glucopyranosyl) -1,2-dideoxy-α-glucopyrano} (2,1-d) -2-oxazoline and salts thereof | |
| JPS62246575A (en) | Method for purifying pyrroloquinolinequinone | |
| JPH093088A (en) | Production of aminodisaccharide and chitin or its analogue polysaccharides | |
| EP0524082B1 (en) | Process for the preparation of eventually deuterated cis-inositol, meso-inositol, epi-inositol and/or cis-quercitol | |
| JP5569877B2 (en) | Chitin oligosaccharide derivatives, N-acetyllactosamine derivatives and methods for producing them | |
| JPS61115093A (en) | Production of moranoline derivative |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TP | Transmission of property | ||
| ST | Notification of lapse |