FR2612937A1

FR2612937A1 - New microorganisms and process for producing glutamic acid using these microorganisms.

Info

Publication number: FR2612937A1
Application number: FR8803884A
Authority: FR
Inventors: Kazuhiko Yamada; Akira Seto
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1987-03-27
Filing date: 1988-03-24
Publication date: 1988-09-30
Anticipated expiration: 2008-03-24
Also published as: AU1161488A; BR8801289A; PH25252A; JPS63240779A; FR2612937B1; KR960006580B1; KR880011324A; AU616168B2; JPH0763383B2; MY102317A

Abstract

The object of the invention is new bacteria useful for producing glutamic acid by fermentation at high temperature. The microorganism according to the invention, called Corynebacterium thermoaminogenes has a maximum growth temperature of not less than 43 DEG C and is heat resistant at 55 DEG C for 10 min or more and it is capable of accumulating a large quantity of glutamic acid.

Description

La présente invention concerne un nouveau micro-organisme capable d'accumuler une quantité importante d'acide glutamique par fermentation et un procédé pour la production d'acide glutamique par culture du micro-organisme. The present invention relates to a new microorganism capable of accumulating a large amount of glutamic acid by fermentation and a method for the production of glutamic acid by culturing the microorganism.

Dans un procédé qui consiste å accumuler une grande quantité d'acide glutamique et à le recueillir, à savoir la production d'acide glutamique par fermentation à l'échelle industrielle, on cultive des micro-organismes capables d'accumuler une grande quantité d'acide glutamique dans un milieu, dits bactéries productrices d'acide glutamique, dans une cuve de fermentation en utilisant un milieu approprié dans des conditions de culture convenablement contrôlées telles que pH, température, quantité d'oxygène dissous. De nombreuses publications ont été faites sur la classification des bactéries productrices d'acide glutamique connues jusqu'à présent ; on citera par exemple les publications suivantes 1. Kinoshita et autres, Amino Acids, i p. 42 (1960), ci-après
Publication (1).In a process which consists in accumulating a large amount of glutamic acid and in collecting it, namely the production of glutamic acid by fermentation on an industrial scale, microorganisms are capable of accumulating a large amount of glutamic acid in a medium, known as glutamic acid-producing bacteria, in a fermentation tank using an appropriate medium under suitably controlled culture conditions such as pH, temperature, amount of dissolved oxygen. Many publications have been made on the classification of bacteria producing glutamic acid known so far; the following publications may be cited, for example: 1. Kinoshita et al., Amino Acids, i p. 42 (1960), below
Publication (1).

2. Okumura et autres, J. Agr. Chem. Soc. Japan, 36, p. 141 C1962),
ci-après Publication (2).2. Okumura and others, J. Agr. Chem. Soc. Japan, 36, p. 141 C1962),
hereinafter Publication (2).

3. Takayama et autres, J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 328 (1965),
ci-après Publication (3).3. Takayama et al., J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 328 (1965),
hereinafter Publication (3).

4. Takayama et autres, J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 335 (1965),
ci-après Publication (4).4. Takayama et al., J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 335 (1965),
hereinafter Publication (4).

5. Takayama et autres, J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 342 (1965),
ci-après Publication (5).5. Takayama et al., J. Agr. Chem. Soc. Japan, 39, p. 342 (1965),
hereinafter Publication (5).

6. Komagata et autres, J. Gen. Appl. Microbiol., 15, p. 243 (1969),
ci-après Publication (6).6. Komagata et al., J. Gen. Appl. Microbiol., 15, p. 243 (1969),
hereinafter Publication (6).

7. Yamada et autres, J. Gen. Appl. Microbiol., 16, p. 103 (1970),
ci-après Publication (7).7. Yamada et al., J. Gen. Appl. Microbiol., 16, p. 103 (1970),
hereinafter Publication (7).

8. Yamada et autres, J. Gen. Appl. Microbiol., 2 , p. 215 (1970),
ci-après Publication (8).8. Yamada et al., J. Gen. Appl. Microbiol., 2, p. 215 (1970),
hereinafter Publication (8).

9. Yamada et autres, J. Gen. Appl. Microbiol., 18, p. 399 (1972),
ci-après Publication (9).9. Yamada et al., J. Gen. Appl. Microbiol., 18, p. 399 (1972),
hereinafter Publication (9).

10. Yamada et autres, J. Gen. Appl. Microbiol., 18, p. 417 (1972),
ci-après Publication (10). 10. Yamada et al., J. Gen. Appl. Microbiol., 18, p. 417 (1972),
hereinafter Publication (10).

Dans ces publications, les bactéries productrices d'acide glutamique ne sont pas nécessairement définies strictement comme des bactéries capables d'accumuler une grande quantité d'acide glutamique dans un milieu. Cependant, comme mesure de La quantité de production, les bactéries productrices d'acide glutamique sont raisonnablement interprétées comme désignant des micro-organismes utilisables industriellement capables d'accumuler au moins 30 g/l d'acide glutamique dans un milieu avec un rendement d'au moins 30 % par rapport au glucose, comme décrit dans la publication (1). In these publications, the bacteria producing glutamic acid are not necessarily defined strictly as bacteria capable of accumulating a large amount of glutamic acid in a medium. However, as a measure of the quantity of production, the bacteria producing glutamic acid are reasonably interpreted as designating industrially usable microorganisms capable of accumulating at least 30 g / l of glutamic acid in a medium with a yield of at least 30% compared to glucose, as described in publication (1).

Ces bactéries productrices d'acide glutamique connues sont toutes des bâtonnets aérobies, Gram positif et ne formant pas de spores et classées dans un groupe bactérien dénommé corynébactéries. En outre, on connait entre autres l'effet suivant concernant les propriétés morphologiques et les propriétés physiologiques et biologiques : elles sont capables d'accumuler une grande quantité d'acide glutamique dans un milieu, sont auxotropes vis-à-vis de la biotine, contiennent de l'acide mésodiaminopimélique dans leurs parois cellulaires et ont une teneur en
GC d'environ 55 % dans l'ADN, sont semblables les unes aux autres, etc. A partir de ces faits, on admet largement que des microorganismes connus dénommés bactéries productrices d'acide gluta-mi que sont voisins les uns des autres du point de vue taxonomique.These known glutamic acid producing bacteria are all aerobic rods, Gram positive and not spore forming and classified in a bacterial group called corynebacteria. In addition, the following effect is known, among others, concerning the morphological properties and the physiological and biological properties: they are capable of accumulating a large amount of glutamic acid in a medium, are auxotropic with respect to biotin, contain mesodiaminopimelic acid in their cell walls and have a content of
GC about 55% in DNA, are similar to each other, etc. From these facts, it is widely accepted that known microorganisms called bacteria producing gluta-mi acid that are neighbors of each other from a taxonomic point of view.

En dépit du fait qu'elles soient considérées comme des microorganismes voisins les uns des autres, les bactéries connues productrices d'acide glutamique sont identifiées comme appartenant à des genres différents tels que le genre Brevibacterium, le genre Corynebacterium, le genre Microbacterium, etc. Une cause principale de ces diverses classifications provient,pense-t-on, de pratiques antérieures dans l'identification qui se faisait entre autres selon un système différent de classification et une norme de classification de la version la plus récente actuel le ment du Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, qui est l'ouvrage faisant le plus autorité dans Le monde pour l'identification des bactéries, une différence d'un agent d'identification de la classification standard, etc.En outre, Kinoshita et autres,
Publication (1), ont fait des recherches taxonomiques sur environ 20 bactéries productrices d'acide glutamique et en utilisant comme norme de classification des propriétés communes de ces bactéries, ils ont proposé de créer le genre des bactéries productrices d'acide glutamique. Cependant, cette proposition n'a pas été largement adopte jusqu'à présent.Despite the fact that they are considered to be neighboring microorganisms, the known bacteria producing glutamic acid are identified as belonging to different genera such as the genus Brevibacterium, the genus Corynebacterium, the genus Microbacterium, etc. A main cause of these various classifications comes, it is believed, from previous practices in the identification which was done inter alia according to a different classification system and a classification standard of the most recent version currently the ment of Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, which is the most authoritative work in the world for the identification of bacteria, a difference from an identification agent of the standard classification, etc.In addition, Kinoshita et al.
Publication (1), have done taxonomic research on about 20 bacteria producing glutamic acid and using as a classification standard common properties of these bacteria, they have proposed to create the genus of bacteria producing glutamic acid. However, this proposal has not been widely adopted so far.

Dans la production d'acide glutamique par fermentation à l'échelle industrielle, on cultive les bactéries productrices d'acide glutamique ci-dessus dans un milieu contenant des composants tels que glucose, saccharose, acide acétique, etc., en conditions aérobies en utilisant l'ammoniac, l'urée, le sulfate d'ammonium, etc., comme sources d'azote pour accumuler dans le milieu une quantité importante d'acide glutamique. La quantité d'acide glutamique à accumuler varie selon la composition du milieu, le pH d'incubation, la température de culture, la quantité d'oxygène dissous, les moyens de sécrétion dans le milieu de l'acide glutamique produit dans les cellules, etc.Cependant, en réglant ces facteurs dans des gammes optimales, on peut accumuler l'acide glutamique avec un rendement de 30 % ou plus par rapport au glucose, à une concentratio d'acide glutamique accumule de 30 g/l ou plus. In the production of glutamic acid by fermentation on an industrial scale, the bacteria producing glutamic acid above are cultivated in a medium containing components such as glucose, sucrose, acetic acid, etc., under aerobic conditions using ammonia, urea, ammonium sulphate, etc., as sources of nitrogen to accumulate in the medium a significant amount of glutamic acid. The amount of glutamic acid to accumulate varies according to the composition of the medium, the incubation pH, the culture temperature, the amount of dissolved oxygen, the means of secretion in the medium of the glutamic acid produced in the cells, etc. However, by adjusting these factors in optimal ranges, one can accumulate glutamic acid with a yield of 30% or more compared to glucose, to a concentration of glutamic acid accumulates 30 g / l or more.

L'acide glutamique a été produit industriellement par la méthode de fermentation décrite ci-dessus non seulement au Japon, mais également dans d'autres pays. Dans la production industrielle, l'un des facteurs les plus importants est une capacité de production élevée. La présente invention propose une technique très économique pour produire l'acide glutamique par fermentation à l'échelle industrielle. Glutamic acid has been produced industrially by the fermentation method described above not only in Japan, but also in other countries. One of the most important factors in industrial production is a high production capacity. The present invention provides a very economical technique for producing glutamic acid by fermentation on an industrial scale.

Dans la production industrielle d'acide glutamique par fermentation, il existe certains paramètres techniques pour mesurer le perfectionnement du point de vue économique. Par exemple, ces facteurs sont une augmentation du rendement par rapport au glucose, une augmentation de la concentration d'acide glutamique accumulé, une diminution de la durée d'incubation, etc. Un autre facteur important est l'élévation de la température d'incubation.L'incubation est mise en oeuvre à une température optimale pour la fermentation d'acide glutamique ; dans le cas où l'on utilise des bactéries classiques productrices d'acide glutamique, cette température est en général de 31 à 32OC. Lorsque l'incubation est amorcée, la fermentation produit de la chaleur de sorte que, si on laisse le système tel quel, la température de la solution de culture augmente de sorte que la production d'acide glutamique diminue fortement. Afin de maintenir la température de la solution de culture dans une gamme optimale, il est nécessaire de placer un échangeur de chaleur dans le fermenteur et de recycler à l'échangeur de L'eau refroidie brusquement.Afin d'obtenir de l'eau refroidie,on doit utiliser un réfrigérateur, mais à cause de la grande quantité de chaleur de fermentation produite, l'énergie électrique consommée par le réfrigérateur est également importante. In the industrial production of glutamic acid by fermentation, there are certain technical parameters for measuring improvement from an economic point of view. For example, these factors are an increase in yield relative to glucose, an increase in the concentration of accumulated glutamic acid, a decrease in the incubation time, etc. Another important factor is the rise in the incubation temperature. The incubation is carried out at an optimal temperature for the fermentation of glutamic acid; in the case where conventional bacteria producing glutamic acid are used, this temperature is generally from 31 to 32 ° C. When the incubation is initiated, the fermentation produces heat so that, if the system is left as it is, the temperature of the culture solution increases so that the production of glutamic acid decreases sharply. In order to keep the temperature of the culture solution in an optimal range, it is necessary to place a heat exchanger in the fermenter and to recycle abruptly cooled water to the exchanger. , a refrigerator must be used, but because of the large amount of heat of fermentation produced, the electrical energy consumed by the refrigerator is also important.

En conséquence, s'il est possible d'élever la température d'incubation dans la fermentation d'acide glutamique au-dessus de la température classique, les frais de réfrigération peuvent être réduits, améliorant ainsi la production industrielle du point de vue économique.Therefore, if it is possible to raise the incubation temperature in the glutamic acid fermentation above the conventional temperature, the refrigeration costs can be reduced, thereby improving industrial production from an economic point of view.

A la suite de diverses recherches pour résoudre le problème décrit c-dessus, la demanderesse a trouvé un nouveau micro-organisme capable de produire de L'acide glutamique dans les mêmes quantités que les bactéries classiques productrices d'acide glutamique (rendement de 30 % ou plus par rapport au glucose, quantité d'acide glutamique accumulée 30 g/l ou plus) et capable d'accumuler une quantité importante d'acide glutamique dans une gamme de températures élevées - par exemple 43"C à laquelle les bactéries classiques productrices d'acide glutamique ne poussent pas et la fermentation d'acide glutamique est impossible. On fait pousser ces micro-organismes à une température de 450C à laquelle les bactéries classiques productrices d'acide glutamique ne peuvent pas pousser et Les inventeurs ont trouvé des conditions pour L'accumulation d'une quantité importante d'acide glutamique dans un milieu par fermentation d'acide glutamique, utilisant le micro-organisme. La présente invention repose sur cette découverte. Following various researches to solve the problem described above, the applicant has found a new microorganism capable of producing glutamic acid in the same quantities as the conventional bacteria producing glutamic acid (yield of 30% or more compared to glucose, amount of glutamic acid accumulated 30 g / l or more) and capable of accumulating a significant amount of glutamic acid in a range of high temperatures - for example 43 "C at which conventional bacteria producing of glutamic acid do not grow and fermentation of glutamic acid is impossible. These microorganisms are grown at a temperature of 450C at which the conventional bacteria producing glutamic acid cannot grow and The inventors have found conditions for the accumulation of a large amount of glutamic acid in a medium by fermentation of glutamic acid, using the microorganism. r this discovery.

En ce qui concerne la température de croissance des bactéries classiques productrices d'acide glutamique, la température de croissance est une propriété commune aux bactéries productrices d'acide glutamique dans toutes les publications, dans la mesure où elle est mentionnée dans les publications mentionnées ci-dessus. Regarding the growth temperature of conventional glutamic acid-producing bacteria, the growth temperature is a property common to glutamic acid-producing bacteria in all publications, insofar as it is mentioned in the publications mentioned above. above.

Autrement dit, on indique dans la Publication (1) que les bactéries productrices d'acide glutamique poussent bien à 28-37"C. Dans la
Publication (2), les bactéries poussent bien à 30-37"C,mais beaucoup de bactéries ne poussent presque pas à 40OC. Il est également indiqué dans la Publication (4) que la température optimale de croissance est de 25 à 37OC, mais Les bactéries ne poussent presque pas à 42OC. Il est indiqué dans la Publication (9) qu'aucune bactérie ne pousse à 42OC. Il est indiqué dans la
Publication (9) qu'aucune bactérie ne pousse à 420C.Même en admettant que les procédés et les normes d'évaluation de la croissance puissent être différents dans les publications respectives, on suppose que la température de croissance la plus élevée des bactéries classiques productrices d'acide glutamique serait d'environ 42OC. La demanderesse a déterminé la température de croissance la plus élevée de chacune des 20 souches indiquées dans le tableau 1- ci-après, qui sont presque toutes des souches bactériennes accessibles à partir de bactéries connues que l'on suppose productrices d'acide glutamique, par deux procédés, à savoir une méthode à thermostat liquide secoué utilisant un bouillon nutritif comme milieu,et par culture sur plateau avec un thermostat gazeux de grande précision utilisant une gélose nutritive comme milieu.En conséquence, on n'observe pas du tout de croissance des souches essayées à 420C par l'une ou l'autre des méthodes de culture en liquide et sur plaque. On a donc estimé que la température de croissance la plus élevée des bactéries classiques productrices d'acide glutamique est inférieure à 42OC. In other words, it is indicated in Publication (1) that the bacteria producing glutamic acid grow well at 28-37 "C. In the
Publication (2), bacteria grow well at 30-37 "C, but many bacteria hardly grow at 40OC. It is also stated in Publication (4) that the optimum growth temperature is 25 to 37OC, but Bacteria hardly grow at 42OC. It is stated in Publication (9) that no bacteria grow at 42OC. It is indicated in the
Publication (9) that no bacteria grow at 420C. Even assuming that the methods and standards for growth assessment may be different in the respective publications, it is assumed that the highest growth temperature of the conventional bacteria producing glutamic acid would be around 42OC. The Applicant has determined the highest growth temperature of each of the 20 strains indicated in Table 1 below, which are almost all of the bacterial strains accessible from known bacteria which are supposed to produce glutamic acid, by two methods, namely a method with shaken liquid thermostat using a nutritive broth as medium, and by culture on a plate with a gaseous thermostat of high precision using a nutritive agar as medium. Consequently, no growth is observed at all strains tested at 420C by one or other of the liquid and plate culture methods. It has therefore been estimated that the highest growth temperature of conventional bacteria producing glutamic acid is less than 42 ° C.

TABLEAU 1
TemDérature de croissance la olus élevée et résistance à la temDé- rature mesurée sur les bactéries croductrices d'acide glutamique connues.TABLE 1
The highest growth temperature and resistance to temperature measured on known glutamic acid-forming bacteria.

Brevibacterium ammoniagenes ATCC 13745
Brevibacterium divaricatum NRRL B2312
Brevibacterium flavum ATCC 13826
Brevibacterium flavum ATCC 14067
Brevibacterium glutamigenes ATCC 13747
Brevibacterium immariophilum ATCC 14068
Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869
Brevibacterium roseum ATCC 13825
Brevibacterium saccharolyticum ATCC 14066
Brevibacterium taipei ATCC 13744
Brevibacterium thiogenitalis ATCC 19240
Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870
Corynebacterium callunae NRRL B2244
Corynebacterium glutamicum ATCC 13032
Corynebacterium glutamicum ATCC 13761
Corynebacterium herculis ATCC 13868
Corynebacterium lilium NRRL B2243
Corynebacterium melassecola ATCC 17965
Corynebacterium sp.ATCC 14747
Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354
Dans l'hypothèse où, afin d'effectuer la production d'acide glutamique par fermentation dans une gamme de températures plus élevées que les températures d'incubation classiques, les micro-organismes nécessaires seraient des micro-organismes ayant une température de croissance maximale supérieure à celle des bactéries classiques productrices d'acide glutamique, la demanderesse a isolé des micro-organismes qui poussent à 430C à partir de divers échantillons dans le monde naturel comme sources d'isolement et on fait un relevé de souches capables d'accumuler une quantité importante d'acide glutamique dans un milieu et elle a acquis 14 souches de sources différentes pour l'isolement des micro-organismes.D'après les résultats d'essais et l'identification des propriétés bactériologiques de ces souches, on a estimé que les souches isolées sont voisines les unes des autres et classées dans la même espèce. On-décrit ci-dessous les propretés bactériologiques de qUatre souches représentatives (souches n" AJ 12308, AJ 12309, AJ 12310 et AJ 12340). Brevibacterium ammoniagenes ATCC 13745
Brevibacterium divaricatum NRRL B2312
Brevibacterium flavum ATCC 13826
Brevibacterium flavum ATCC 14067
Brevibacterium glutamigenes ATCC 13747
Brevibacterium immariophilum ATCC 14068
Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869
Brevibacterium roseum ATCC 13825
Brevibacterium saccharolyticum ATCC 14066
Brevibacterium taipei ATCC 13744
Brevibacterium thiogenitalis ATCC 19240
Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870
Corynebacterium callunae NRRL B2244
Corynebacterium glutamicum ATCC 13032
Corynebacterium glutamicum ATCC 13761
Corynebacterium herculis ATCC 13868
Corynebacterium lilium NRRL B2243
Corynebacterium melassecola ATCC 17965
Corynebacterium sp.ATCC 14747
Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354
In the event that, in order to effect the production of glutamic acid by fermentation in a range of temperatures higher than conventional incubation temperatures, the microorganisms required would be microorganisms having a higher maximum growth temperature to that of conventional bacteria producing glutamic acid, the Applicant has isolated microorganisms which grow at 430C from various samples in the natural world as sources of isolation and a statement is made of strains capable of accumulating a quantity significant glutamic acid in a medium and it acquired 14 strains from different sources for the isolation of microorganisms. Based on test results and the identification of the bacteriological properties of these strains, it was estimated that the isolated strains are close to each other and classified in the same species. The bacteriological properties of four representative strains are described below (strains No. AJ 12308, AJ 12309, AJ 12310 and AJ 12340).

AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Caractéristiques morphologiques (1) Formes et dimensions Bâtonnets de 0,7-1,0 m comme colonne comme colonne comme colonne des cellules x 1,0-4,0 m ronds aux de gauche de gauche de gauche 2 extrémités des cellules ; on observe une disposition en V de division par rupture ; (2) Pléomorphisme On n'observe pas de pléo- comme colonne comme colonne comme colonne morphisme mais selon la de gauche de guache de gauche durée de culture, on observe rarement des cellules en bâtonnets longs, des cellules kystiques et des cellules à ramifications rudimentaires.AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Morphological characteristics (1) Shapes and dimensions Sticks of 0.7-1.0 m as column as column as column of cells x 1.0-4.0 m round to left from left to left 2 ends of cells; there is a V-shaped arrangement of division by rupture; (2) Pleomorphism We do not observe a pleo- as a column as a column as a morphism column but according to the left guache left culture time, we rarely observe cells in long sticks, cystic cells and cells with rudimentary ramifications .

(3) Motilité non non non non (4) Formation de spores non non non non (5) Gram positif positif positif positif (6) Coloration résistant négative négative négative négative à l'acide AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Caractéristiques de culture : (1) Culture sur plaque de Croissance abondante ou comme colonne comme colonne Croissance abongélose nutritive modérée : les colonies sont de gauche de gauche dante ou modérée ; rondes, lisses, entières, les colonies sont convexes, brillantes, rondes, lisses, opaques ou translucides, satinées, opaques, jaune pâle et butyreuses. ou translucides, jaune pâle et en paillettes.(3) Motility no no no no (4) Spore formation no no no no (5) Gram positive positive positive positive (6) Resistant coloring negative negative negative acid negative AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Culture characteristics: (1) Culture on an Abundant growth plate or as a column as a column. Moderate nutritive abongelosis growth: the colonies are from left to right or moderate; round, smooth, whole, the colonies are convex, shiny, round, smooth, opaque or translucent, satin, opaque, pale yellow and butyrous. or translucent, pale yellow and in glitter.

(2) Culture sur gélose Croissance abondante ou comme colonne comme colonne comme colonne nutritive inclinée modérée ; les colonies de gauche de gauche de gauche sont filiformes, brillantes et jaune pâle.(2) Culture on agar Abundant growth or as a column as a column as a moderate inclined nutrient column; the colonies from left to left are threadlike, shiny and pale yellow.

(3) Bouillon nutritif Croissance modérée : comme colonne comme colonne Croissance modérée ; presque uniformément de gauche de gauche les cellules tendent trouble mais quelques à se rassembler et cellules précipitent précipitent également.(3) Nutritive broth Moderate growth: as column as column Moderate growth; almost uniformly from left to left the cells tend to cloud but a few to congregate and cells precipitate also precipitate.

(4) Culture par piqûre sur Croissance modérée : comme colonne comme colonne comme colonne gélatine nutritive pas de liquéfaction de gauche de gauche de gauche (5) Lait de tournesol Rendu très faiblement comme colonne comme colonne comme colonne alcalin ; on n'observe de gauche de gauche de gauche ni liquéfaction, ni coagulation. (4) Culture by pitting on Moderate growth: as column as column as nutrient gelatin column no liquefaction from left to left from left (5) Sunflower milk Rendered very weakly as column as column as alkaline column; one observes from left to left of left neither liquefaction, nor coagulation.

AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Caractéristiques physiologiques et biologiques : (1) Réduction des nitrates réduits réduits réduits réduits (2) Dénitrification négative négative négative négative (3) Test MR négatif ou faible- négatif négatif ou fai- positif ment positif blement positif (4) Test VP positif négatif positif négatif (5) Formation d'indole négative négative négative négative (6) Formation de sulfure positive positive positive positive d'hydrogène (7) Hydrolyse de l'amidon négative négative négative négative (8) Utilisation des citrates ne pousse pas dans le milieu comme colonne comme colonne comme colonne de Koser, mais pousse dans de gauche de gauche de gauche le milieu de Christensen en le rendant alcalin (9) Utilisation de l'azote n'utilise pas les nitrates, comme colonne comme colonne comme colonne inorganique mais utilise les sels de gauche de gauche de gauche d'ammonium AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (10) Formation de pigment pas de formation extrap- comme colonne comme colonne comme colonne cellulaire de pigment. de gauche de gauche de gauche (11) Test de l'uréase négatif ou faiblement négatif négatif ou fai- positif positif. blement positif (12) Oxydase négative négative négative négative (13) Catalase positive positive positive positive (14) Gamme de croissance pousse bien à pH 7-9,5 ; comme colonne comme colonne pousse bien à pousse bien à 25-45 C ; de gauche de gauche pH 7-9,5 ; pousse légère croissance observée bien à 25-44 C ; à 46 C. légère croissance observée à 45 C (15) Comportement à l'oxygène aérobie ou facultativement comme colonne comme colonne comme colonne anaérobie. de gauche de gauche de gauche (16) Test O-F (glucose) pousse en produisant de comme colonne comme colonne comme colonne l'acide par fermentation. de gauche de gauche de gauche AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (17) Formation d'acides & BR< partir des sucres :: (1) L-arabinose négative négative négative négative (2) D-xylose négative négative négative négative (3) D-glucose positive positive positive positive (4) D-mannose positive positive positive positive (5) D-fructose positive positive positive positive (6) D-galactose négative négative négative négative (7) maltose positive positive positive négative (8) saccharose positive positive négative positive (9) lactose négative négative négative négative (10) tréhalose négative positive négative négative (11) D-sorbitol négative négative négative négative (12) D-mannitol négative négative négative positive (13) inositol négative négative négative positive (14) glycérol négative négative négative négative (15) amidon négative négative négative négative
Autres caractéristioues (1) Résistance à la surivit dans le lait survit dans le lait survit dans le lait survit dans le lait température écrémé 10 min à écrémé à 55 C pen- écrémé à 60 C pen- écrémé 10 min à 60 C, par la mé- dant 10 min, par la dant 10 min, par la 55 C, par la méthode au capillaire; méthode au capil- méthode au capil- thode au capillaire; meurt après 10 min laire ; meurt après laire ; meurt après meurt après 10 min à 65 C 10 min à 60 C 10 min à 65 C. à 60 C (2) Résistance au pousse dans un milieu comme colonne comme colonne comme colonne chlorure de sodium contenant 5 % de sel. de gauche de gauche de gauche AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (3) Auxotrophie a besoin de biotine comme colonne comme colonne comme colonne pour pousser de gauche de gauche de gauche (4) Composition de base de 60,2 % de GC 59,5 % de GC 59,0 % de GC 56,8 % de GC l'ADN (méthode Tm) (5) Monoacide dibasique acide mésodiamino- comme colonne comme colonne comme colonne contenu dans les parois pimélique de gauche de gauche de gauche cellulaires (6) Source d'isolement fruits légumes sol fruits
Comme indiqué ci-dessus, ces souches bactériennes (ci-après dénommées bactéries de la présente invention) sont toutes des bâtonnets Gram positif, ne formant pas de spores, qui poussent par voie aérobie et appartiennent donc au groupe des corynébactéries.En outre, lès bactéries de la présente invention ont les caractéristiques suivantes : le mode de division cellulaire est du type par rupture ; l'aminoacide dibasique contenu dans les parois cellulaires est L'acide mésodiaminopimélique ; ce sont des bactéries résistantes à L'osmose capables de pousser dans un milieu contenant 5 % de sel ; elles ont besoin de biotine pour leur croissance ; elles produisent une quantité importante d'acide glutamique à partir des sucres avec un rendement élevé et l'accumulent dans le milieu comme indiqué dans les exemples décrits ciaprès, etc. ; et ces propriétés sont identiques à celles des bactéries connues classiques productrices d'acide glutamique.En outre, dans les autres propriétés morphologiques, physiologiques et biologiques, les bactéries ont de nombreuses propriétés communes aux bactéries connues productrices d'acide glutamique.AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340
Physiological and biological characteristics: (1) Reduction of reduced nitrates reduced reduced reduced (2) Denitrification negative negative negative negative (3) MR test negative or weak-negative negative or weakly positive slightly positive (4) VP test positive negative positive negative (5) Indole formation negative negative negative negative (6) Sulphide formation positive positive positive positive positive hydrogen (7) Starch hydrolysis negative negative negative negative (8) Use of citrates does not grow in the medium as column as column as Koser column, but pushes Christensen's medium from left to left from left making it alkaline (9) Using nitrogen does not use nitrates, as column as column as inorganic column but uses the left ammonium left ammonium left AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (10) Pigment formation no extrap- formation as column as column as column c pigment eyepiece. left left left (11) Urease test negative or weak negative negative or weak positive. badly positive (12) Oxidase negative negative negative negative (13) Catalase positive positive positive positive (14) Growth range grows well at pH 7-9.5; as column as column grows well to grows well at 25-45 C; left to left pH 7-9.5; light growth observed well at 25-44 C; at 46 ° C. slight growth observed at 45 ° C. (15) Behavior with aerobic oxygen or optionally as a column as a column as an anaerobic column. left left left (16) OF test (glucose) grows by producing as column as column as column as acid by fermentation. left left left AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (17) Acid formation & BR <from sugars :: (1) L-arabinose negative negative negative negative (2) D-xylose negative negative negative negative ( 3) D-glucose positive positive positive positive (4) D-mannose positive positive positive positive (5) D-fructose positive positive positive positive positive (6) D-galactose negative negative negative negative (7) maltose positive positive positive negative (8) sucrose positive positive negative positive (9) lactose negative negative negative negative (10) trehalose negative positive negative negative (11) D-sorbitol negative negative negative negative (12) D-mannitol negative negative negative positive (13) inositol negative negative negative positive ( 14) glycerol negative negative negative negative (15) starch negative negative negative negative
Other characteristics (1) Resistance to surivit in milk survives in milk survives in milk survives in milk skimmed temperature 10 min to skimmed at 55 ° C skimmed to 60 ° C skimmed 10 min to 60 ° C, by the mediating 10 min, by dant 10 min, by 55 C, by the capillary method; capillary method- capillary method; dies after 10 min laire; dies after death; dies after dies after 10 min at 65 C 10 min at 60 C 10 min at 65 C. at 60 C (2) Resistance to growth in a medium like column like column like column sodium chloride containing 5% salt. from left to left from left AJ 12308 AJ 12309 AJ 12310 AJ 12340 (3) Auxotrophy needs biotin as column as column as column to grow from left to left from left (4) Basic composition of 60.2% of GC 59 , 5% GC 59.0% GC 56.8% GC DNA (Tm method) (5) Monoacid dibasic mesodiamino acid- as column as column as column contained in the pimelic walls from left to left from cell (6) Isolation source fruits vegetables soil fruit
As indicated above, these bacterial strains (hereinafter referred to as bacteria of the present invention) are all Gram-positive rods, not forming spores, which grow aerobically and therefore belong to the group of corynebacteria. bacteria of the present invention have the following characteristics: the mode of cell division is of the rupture type; the dibasic amino acid contained in the cell walls is mesodiaminopimelic acid; they are bacteria resistant to osmosis capable of growing in an environment containing 5% of salt; they need biotin for their growth; they produce a significant amount of glutamic acid from sugars with a high yield and accumulate it in the medium as indicated in the examples described below, etc. ; and these properties are identical to those of known conventional bacteria producing glutamic acid. In addition, in the other morphological, physiological and biological properties, the bacteria have many properties common to known bacteria producing glutamic acid.

D'après ce qui précède, on considère en ce qui concerne le genre que les bactéries de la présente invention appartiendraient raisonnablement au même genre que les bactéries connues productrices d'acide glutamique. Comme décrit précédemment, les opinions peuvent être divisées sur le genre dans lequel doivent être classées les bactéries connues productrices d'acide glutamique, mais selon le tout récent Bergey's Manual, 8e édition, en rapport avec le groupe des corynébactéries défini en référence aux publications (1) à (10), etc., les bactéries connues productrices d'acide glutamique sont divisées entre le genre Corynebacterium et le genre Brevibacterium.En tenant compte de ce que le genre Brevibacterium est lui-même traité comme un "Genus incertae sidis" du point de vue taxonomique et le genre Corynebacterium comme un genre ordinaire, cependant, on considère tout à fait probable à l'heure actuelle que les bactéries de la présente invention appartiennent au genre
Corynebacterium.From the above, it is considered with respect to the genus that the bacteria of the present invention would reasonably belong to the same genus as the known bacteria producing glutamic acid. As described above, opinions can be divided on the genus into which the known bacteria producing glutamic acid should be classified, but according to the very recent Bergey's Manual, 8th edition, in relation to the group of corynebacteria defined with reference to publications ( 1) to (10), etc., the known bacteria producing glutamic acid are divided between the genus Corynebacterium and the genus Brevibacterium.By taking into account that the genus Brevibacterium is itself treated as a "Genus uncertae sidis" from a taxonomic point of view and the genus Corynebacterium as an ordinary genus, however, it is considered quite likely at present that the bacteria of the present invention belong to the genus
Corynebacterium.

On donne à la suite un examen taxonomique des bactéries de l'invention au niveau de l'espèce. Les trois points suivants dans les propriétés bactériologiques sont différents entre les bactéries de la présente invention et les bactéries connues productrices d'acide glutamique en commun. Un premier point caractéristique est que la température la plus élevée révélant une croissance nettement observable est de 43"C ou plus. Comme décrit ci-dessus, la température de croissance la plus élevée des bactéries connues productrices d'acide glutamique est d'environ 42"C ou moins,mais il n'existe pas de bactéries capables de pousser à 430C ou plus. A taxonomic examination of the bacteria of the invention is given below at the species level. The following three points in the bacteriological properties are different between the bacteria of the present invention and the known bacteria producing glutamic acid in common. A first characteristic point is that the highest temperature revealing a clearly observable growth is 43 "C or more. As described above, the highest growth temperature of known bacteria producing glutamic acid is about 42 "C or lower, but there are no bacteria capable of growing to 430C or higher.

Un second point caractéristique est la résistance à la température. Dans la résistance à la température, on ne peut obtenir que difficilement des résultats précis dans le cas où l'on effectue le test à grande échelle en utilisant un tube à essais, etc., parce que la durée de conduction thermique, etc., varient fortement. Donc, un test effectue en mettant en suspension les bactéries dans le lait écrémé et en enfermant la suspension de manière étanche dans un tube capillaire est considéré comme meilleur (Publication (3)). Les bactéries de la présente invention peuvent toutes survivre dans le 3itécrémé après traitement à 55"C pendant 10 min par la méthode du tube à essais capillaire.Au contraire, la plupart des bactéries connues productrices d'acide glutamique sont mortes après un traitement à 550C pendant 10 min selon cette technique ; mais une publication indique que quelques bactéries présentent une légère survie (Publication (3)). A second characteristic point is the resistance to temperature. In temperature resistance, precise results can only be obtained with difficulty when the test is carried out on a large scale using a test tube, etc., because the duration of thermal conduction, etc., vary widely. Therefore, a test carried out by suspending the bacteria in skimmed milk and by sealing the suspension in a capillary tube is considered to be better (Publication (3)). The bacteria of the present invention can all survive in creamed cream after treatment at 55 "C for 10 min by the capillary test tube method. On the contrary, most of the known bacteria producing glutamic acid died after treatment at 550C. for 10 min according to this technique; but a publication indicates that some bacteria have a slight survival (Publication (3)).

En rapport avec cette publication, la demanderesse a reproduit l'expérience. Le test de thermostabilité a été effectué avec toutes les bactéries connues productrices d'acide glutamique indiquées dans le tableau 1 dans les mêmes conditions que pour les bactéries de la présente invention ; en conséquence, les bactéries connues productrices d'acide glutamique sont toutes mortes par traitement à 55"C pendant 10 min. Par contre, dans les bactéries de la présente invention, les 14 souches isolées survivent toutes dans le traitement à 55"C pendant 10 min. En outre, Il de ces souches survivent également même après traitement à 60"C pendant 10 min. In connection with this publication, the applicant has reproduced the experience. The thermostability test was carried out with all the known bacteria producing glutamic acid indicated in table 1 under the same conditions as for the bacteria of the present invention; consequently, the known bacteria producing glutamic acid all died by treatment at 55 "C for 10 min. In contrast, in the bacteria of the present invention, the 14 isolated strains all survive in treatment at 55" C for 10 min. min. In addition, II of these strains also survive even after treatment at 60 "C for 10 min.

Un troisième point caractéristique est que les bactéries de la presente invention peuvent accumuler une quantité importante d'acide glutamique même à 43OC. Les conditions de l'expérience et les quantités d'acide glutamique accumulées sont indiquées dans les exemples. On a déterminé l'accumulation d'acide glutamique dans les mêmes conditions par les bactéries connues productrices d'acide glutamique indiquées dans Le tableau 1, mais toutes les souches bactériennes ne poussent pas et la quantité d'acide glutami que accumulée est pratiquement nulle. A third characteristic point is that the bacteria of the present invention can accumulate a significant amount of glutamic acid even at 43OC. The conditions of the experiment and the amounts of glutamic acid accumulated are indicated in the examples. The accumulation of glutamic acid was determined under the same conditions by the known bacteria producing glutamic acid indicated in Table 1, but all the bacterial strains do not grow and the amount of glutami acid that accumulated is practically zero.

Les propriétés des bactéries de la présente invention décrites ci-dessus ne sont pas observées avec les bactéries connues productrices d'acide glutamique ; en particulier, il est impossible d'augmenter ou d'améliorer Les propriétés de température maximale de croissance et de thermostabilité par une opération en vue de la mutation des micro-organismes et ces propriétés sont considérées comme stables. En conséquence, on peut interpréter les résultats comme donnant une base suffisante pour considérer que les bactéries de la présente invention sont différentes de n'importe laquelle des bactéries connues productrices d'acide glutamique.En outre, on observe de légères différences dans les propriétés morphologiques telles que conditions de croissance, nuance de couleur des colonies, etc., et des différences dans Les propriétés physiologiques et biochimiques telles que formation d'acide à partir de saccharose, de maltose, de tréhalose, de D-mannitol,
D-inositol, etc., test MR, test VP, réduction des nitrates et test de l'uréase, etc., entre les 14 souches isolées de la présente invention. Ces différences sont au niveau de la souche mais on considère qu'elles ne conviennent pas pour les classer dans des espèces différentes. Donc, les bactéries de la présente invention ont toutes été identifiées comme appartenant à la même espèce.The properties of the bacteria of the present invention described above are not observed with known bacteria producing glutamic acid; in particular, it is impossible to increase or improve the properties of maximum growth temperature and thermostability by an operation for the mutation of microorganisms and these properties are considered to be stable. Consequently, the results can be interpreted as giving a sufficient basis to consider that the bacteria of the present invention are different from any of the known bacteria producing glutamic acid. In addition, slight differences in morphological properties are observed. such as growth conditions, shade of colony color, etc., and differences in physiological and biochemical properties such as acid formation from sucrose, maltose, trehalose, D-mannitol,
D-inositol, etc., MR test, VP test, reduction of nitrates and urease test, etc., between the 14 strains isolated from the present invention. These differences are at the strain level but it is considered that they are not suitable for classifying them in different species. Therefore, the bacteria of the present invention have all been identified as belonging to the same species.

On a effectué une comparaison des bactéries de la présente invention avec des bactéries appartenant au groupe des corynébactéries autres que les bactéries productrices d'acide glutamique ; cependant, on n'a pas trouvé de bactéries dans l'espèce correspondante. D'après ce qui précède, les bactéries de la présente invention ont toutes été identifiées comme une nouvelle espèce du genre Corynebacterium et dénommées Corynebacterium thermoaminogenes nov. sp. A comparison was made of the bacteria of the present invention with bacteria belonging to the group of corynebacteria other than the bacteria producing glutamic acid; however, no bacteria were found in the corresponding species. From the above, the bacteria of the present invention have all been identified as a new species of the genus Corynebacterium and called Corynebacterium thermoaminogenes nov. Sp.

Des souches représentatives appartenant à cette espèce sont les souches AJ 12308, AJ 12309, AJ 12310 et AJ 12340, qui ont été déposées sous les n FERM P-9244 (FERM BP-1540),
FERM P-9245 (FERM BP-1541), FERM P-9246 (FERM BP-1542) et
FERM P-9277 (FERM BP-1439) respectivement.Representative strains belonging to this species are the strains AJ 12308, AJ 12309, AJ 12310 and AJ 12340, which have been deposited under the numbers FERM P-9244 (FERM BP-1540),
FERM P-9245 (FERM BP-1541), FERM P-9246 (FERM BP-1542) and
FERM P-9277 (FERM BP-1439) respectively.

Ces souches identifiées ci-dessus par les n FERM P-9244, 9245, 9246 et 9277 ont été initialement déposées le 10 mars 1987 (FERM P-9244 à 9246) et le 13 mars 1987 (FERM P-9277) à l'institut de Recherche sur La Fermentation, Agence de l'industrie et de la
Technologie, Ministère du Commerce internationnal et de l'industrie (FHi), 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaragi-Ken 305, Japon, et on leur a attribué les n FERM P-9244, 9245, 9246 et 9277 indiqués ci-dessus.These strains identified above by the numbers FERM P-9244, 9245, 9246 and 9277 were initially deposited on March 10, 1987 (FERM P-9244 to 9246) and on March 13, 1987 (FERM P-9277) of Research on Fermentation, Industry and
Technology, Ministry of International Trade and Industry (FHi), 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaragi-Ken 305, Japan, and have been assigned FERM numbers P-9244, 9245, 9246 and 9277 indicated above.

Ces dépôts de souches ont ensuite été convertis en dépôts selon le traité de Budapest le 27 octobre 1987. Et les souches
FERM P-9244, P-9245, P-9246 et P-92770nt reçu les numéros correspondants FERM BP-1540, 1541, 1542 et 1539, > espectivement. These strain deposits were then converted into deposits according to the Budapest Treaty on October 27, 1987. And the strains
FERM P-9244, P-9245, P-9246 and P-92770 have received the corresponding numbers FERM BP-1540, 1541, 1542 and 1539,> respectively.

ExemDle 1
Dans un petit fermenteur ayant un volume de 1 l, on charge 300 ml d'un milieu liquide de culture ayant la composition indiquée dans le tableau 2 ci-après et on cultive Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12308 a une température de 43OC, tout en effectuant des additions appropriées de gaz ammoniac pour maintenir le pH du milieu de culture à 7,5-8,0. Cinq heures après le début de la culture, on ajoute de la pénicilline à une concentration de 3 U/ml lorsque la densité optique atteint 0,6 et on poursuit encore la culture. La solution de culture obtenue après incubation pendant 16 h est analysée par chromatographie liquide haute performance. En conséquence, l'acide glutamique s'est accumulé à une concentration de 39,1 g/l.La quantité d'acide glutamique accumulée est de 0,1 g/l ou moins dans un essai effectué simultanément avec Brevibacterium flavum ATCC 13826 dans les mêmes conditions. EXAMPLE 1
In a small fermenter having a volume of 1 l, 300 ml of a liquid culture medium having the composition indicated in table 2 below are loaded and Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12308 is cultivated at a temperature of 43OC, while carrying out appropriate additions of ammonia gas to maintain the pH of the culture medium at 7.5-8.0. Five hours after the start of the culture, penicillin is added at a concentration of 3 U / ml when the optical density reaches 0.6 and the culture is continued further. The culture solution obtained after incubation for 16 h is analyzed by high performance liquid chromatography. As a result, glutamic acid accumulated at a concentration of 39.1 g / l. The amount of glutamic acid accumulated was 0.1 g / l or less in a test carried out simultaneously with Brevibacterium flavum ATCC 13826 in the same conditions.

TABLEAU 2
Composition du milieu utilisé dans le test de
production par fermentation d'acide qlutamiaue
Glucose 100 9
Hydrolysat de soja (en azote total) 0,36 9
KH2P04 1 9 MgS0417H20 1 g Fie++, Mn++ 2 mg chacun
Vitamine B1 .HCl 100 y
Biotine 100 y
Sulfate d'ammonium 5 9
Eau 1 000 ml
pH 7,8
ExemPle 2
On met en oeuvre la production par fermentation d'acide glutamique en utilisant Corynebacterium therminoaminogenes AJ 12309 de manière semblable à L'exemple 1. En conséquence, il s'est accumulé 40,0 g/l d'acide glutamique dans la solution de culture obtenue après incubation pendant 19 h.TABLE 2
Composition of the medium used in the
production by fermentation of qlutamic acid
Glucose 100 9
Soy hydrolyzate (total nitrogen) 0.36 9
KH2P04 1 9 MgS0417H20 1 g Fie ++, Mn ++ 2 mg each
Vitamin B1 .HCl 100 y
Biotin 100 y
Ammonium sulfate 5 9
Water 1000 ml
pH 7.8
EXAMPLE 2
The production by fermentation of glutamic acid is carried out using Corynebacterium therminoaminogenes AJ 12309 in a manner similar to Example 1. As a result, 40.0 g / l of glutamic acid has accumulated in the culture solution obtained after incubation for 19 h.

ExemDle 3
On met en oeuvre la production par fermentation d'acide glutamique en utilisant Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12310 de manière semblable à L'exemple 1. En conséquence, il s'est accumulé 35,2 g/l d'acide glutamique dans la solution de culture obtenue après incubation pendant 17 h.EXAMPLE 3
Production by fermentation of glutamic acid is carried out using Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12310 in a manner similar to Example 1. Consequently, 35.2 g / l of glutamic acid has accumulated in the culture solution obtained after incubation for 17 h.

Exemple 4
On met en oeuvre la production par fermentation d'acide glutamique en utilisant Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12340 de manière semblable à l'exemple 1. En conséquence, il s'est accumulé 38,1 g/l d'acide glutamique dans la solution de culture obtenue après incubation pendant 18 h. Example 4
Production by fermentation of glutamic acid is carried out using Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12340 in a manner similar to example 1. Consequently, 38.1 g / l of glutamic acid has accumulated in the culture solution. obtained after incubation for 18 h.

Exemple 5
Dans un petit fermenteur d'un volume de 1 I, on charge 300 ml de milieu liquide de culture ayant la composition indiquée dans le tableau 2 dont on a retiré le glucose et le sulfate d'ammonium et auxquels on a ajouté 20 g d'acétate d'ammonium et on cultive Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12308 a une température de 40 C tout en ajoutant des suppléments convenables d'acide acétique ou de gaz d'ammoniac pour maintenir le pH du liquide de culture à 7,5-8,0. Huit heures après le début de la culture, on ajoute de la pénicilline à une concentration de 3 U/ml lorsque la densité optique atteint 0,6 et on poursuit encore la culture.Example 5
In a small fermenter with a volume of 1 l, 300 ml of liquid culture medium having the composition indicated in table 2 are loaded from which the glucose and ammonium sulphate have been removed and to which 20 g of ammonium acetate and Corynebacterium thermoaminogenes AJ 12308 is grown at a temperature of 40 C while adding suitable supplements of acetic acid or ammonia gas to maintain the pH of the culture liquid at 7.5-8.0. Eight hours after the start of the culture, penicillin is added at a concentration of 3 U / ml when the optical density reaches 0.6 and the culture is continued.

La solution de culture obtenue après incubation pendant 24 h est analysée par chromatographie liquide haute performance. En conséquence, L'acide glutamique s'est accumulé à une concentration de 32 g#, ce qui correspond à un rendement de 31,5 x par rapport à L'acide acétique.The culture solution obtained after incubation for 24 h is analyzed by high performance liquid chromatography. Consequently, the glutamic acid accumulated at a concentration of 32 g #, which corresponds to a yield of 31.5 × compared to the acetic acid.

il est entendu que L'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'illustration et que L'homme de l'art peut y apporter diverses modifications et divers changements sans toutefois s'écarter du cadre et de l'esprit de l'invention. it is understood that the invention is not limited to the preferred embodiments described above by way of illustration and that those skilled in the art can make various modifications and various changes without however departing from the scope and the spirit of the invention.

Claims

1. New microorganism called Corynebacterium thermoaminogenes, characterized in that it has a maximum growth temperature of not less than 43 "C and a thermoresistance at 55" C for 10 min or more and is capable of accumulating a quantity significant glutamic acid.

2. Microorganism according to claim 1, characterized in that it consists of a strain chosen from FERM BP-1539,

FERM BP-1540, FERM BP-1541 and FERM BP-1542.

3. Method for the production of glutamic acid by fermentation, characterized in that it consists in carrying out the fermentation of glutamic acid using Corynebacterium thermoaminogenes and in collecting glutamic acid from the culture solution.

4. Method according to claim 3, characterized in that said Corynebacterium consists of a strain chosen from

FERM BP-1539, FERM BP-1540, FERM BP-1541 and FERM BP-1542.