FR2529441A2 - Straw provided with an identification rod for the freeze-storage of mammalian embryos - Google Patents
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Abstract
Description
La présente addition concerne une paillette pour la conservation par congélation d'embryons de mammifères selon le brevet principal 82.00.645; elle a trait plus particulièrement à un perfectionnement d'un des bouchons destiné à l'obturation de ladite paillette. The present addition relates to a straw for the preservation by freezing of mammalian embryos according to the main patent 82.00.645; it relates more particularly to an improvement of one of the plugs intended for closing said straw.
En premier lieu, il existe à l'heure actuelle un besoin d'identification d'un embryon congelé dans une paillette telle que celle décrite dans le brevet principal 82.00.645. First, there is currently a need to identify an embryo frozen in a straw such as that described in main patent 82.00.645.
On sait en effet que de telles paillettes avant utilisation sont conservées dans de l'azote liquide. Elles portent généralement sur leur corps diverses informations nécessaires à l'identification comme les références de ltorga- nisme ayant congelé les embryons, la date de congélation, la race et les références de la donneuse. It is known in fact that such flakes before use are stored in liquid nitrogen. They generally carry various information necessary for identification on their bodies, such as the references of the organism having frozen the embryos, the date of freezing, the breed and the references of the donor.
Etant donné que ces indications sont portées directement sur le corps de la paillette, un opérateur doit pour l'identification sortir pendant quelques instants la paillette de l'azote liquide afin de lire lesdites indications. Since these indications are carried directly on the body of the straw, an operator must for identification take the straw out of liquid nitrogen for a few moments in order to read said indications.
L'embryon qui est généralement congelé dans un volume de 10 à 40 S se réchauffe- très rapidement des qu'on le sort de l'azote liquide. I1 est bien connu que la vitesse de réchauffement entre - 1960C et - 600C est sensiblement de l'ordre de 3600C/min. The embryo, which is generally frozen in a volume of 10 to 40%, heats up very quickly as soon as it is removed from liquid nitrogen. It is well known that the rate of reheating between - 1960C and - 600C is appreciably of the order of 3600C / min.
La lecture effectuée directement sur la paillette est donc une source de réchauffement non contrôlée qui favorise la recristallisation du milieu congegé. The reading carried out directly on the straw is therefore a source of uncontrolled heating which promotes the recrystallization of the frozen medium.
Une telle recristallisation est d'autant plus marquée quand les cellules contiennent une certaine quantité de glace intracellulaire (FARRANT, HEATHER and WALTER, 1977 Effects of interactions between cooling and rewarming conditions on survival of cells. In : "The freezing of Mammalian embryos, Ciba Foundation Symposium, 52, Elsevier, Excerpta Medica, North Holland). Or, c'est précisément le cas avec le type de congélation actuellement utilisé pour les embryons. Such recrystallization is all the more marked when the cells contain a certain amount of intracellular ice (FARRANT, HEATHER and WALTER, 1977 Effects of interactions between cooling and rewarming conditions on survival of cells. In: "The freezing of Mammalian embryos, Ciba Foundation Symposium, 52, Elsevier, Excerpta Medica, North Holland) This is precisely the case with the type of freezing currently used for embryos.
I1 existe donc un problème concernant l'identification de telles paillettes. There is therefore a problem concerning the identification of such flakes.
I1 existe en outre un problème concernant le calibrage de la bulle de gaz qui est située entre la fonction contenant le cryoprotecteur et par conséquent embryon et la fraction qui, après décongélation, assure la dilution du cryoprotecteurX
La présente invention apporte une solution à ces problèmes en proposant une paillette pourvue d'un bouchon assurant tant une identification précise de l'embryon placé dans ladite paillette qu'une possibilité de calibrage de la bulle de gaz sus-mentionnée, tout en permettant un montage plus aisé de la paillette.There is also a problem concerning the calibration of the gas bubble which is located between the function containing the cryoprotector and consequently the embryo and the fraction which, after thawing, ensures the dilution of the cryoprotector.
The present invention provides a solution to these problems by proposing a straw provided with a plug ensuring both precise identification of the embryo placed in said straw and a possibility of calibrating the above-mentioned gas bubble, while allowing a easier mounting of the glitter.
Selon la présente invention, il est prévu une paillette pour la conservation par congélation d'embryons de mammifères dans un milieu de conservation capable d'être congelé et décongelé et comprenant une substance cryoprotectrice (ou cryoprotecteur) qui pénètre à l'intérieur des cellules de l'embryon, ladite paillette étant scellée à ses deux extrémités jusqu'au moment de l'utilisation dans le mammifère , l'embryon dans le milieu de conservation par congélation étant entouré respectivement : (A) d'une part successivement en direction d'une extrémité (a) d'un mélange gazeux, (b) d'un milieu de culture et (c) d'un premier bouchon extrême de scellement, et
(B) d'autre part successivement en direction de l'autre extrémité, (d) d'une bulle de gaz, (e) d'une solution d'au moins une substance miscible à liteau, peu ou pas toxique à la température ambiante vis-à-vis de l'embryon qui ne pénètre pas à l'intérieur des cellules de l'embryon et qui assure à l'extérieur de celui-ci une pression osmotique suffisante pour permettre une diffusion progressive du cryoprotecteur à l'extérieur des cellules, la disposition étant telle que, à la décongélation, l'embryon dans son milieu de conservation est mis directement en contact avec la solution, (f) d'une autre bulle de gaz et (g) d'un deuxième bouchon extrême de scellement, paillette dans laquelle le deuxième bouchon extrême de scellement est un jonc en matière synthétique.dont le corps est plus large que celui de ladite paillette et dont l'extrémité dudit jonc, provoquant l'éclatement de la bulle qui, lors de la décongélation, s'élève le long de la fraction du milieu assurant la dilution du cryoprotecteur, est emmanchée à force par au moins un méplat dans l'une des extrémités de la paillette après son remplissage à raison d'une longueur qui est choisie à volonté pour calibrer avec précision ladite bulle.According to the present invention, a straw is provided for the preservation by freezing of mammalian embryos in a preservation medium capable of being frozen and thawed and comprising a cryoprotective (or cryoprotective) substance which penetrates inside the cells of the embryo, said straw being sealed at its two ends until the moment of use in the mammal, the embryo in the freezing preservation medium being surrounded respectively: (A) on the one hand successively in the direction of one end (a) of a gaseous mixture, (b) of a culture medium and (c) of a first extreme sealing plug, and
(B) on the other hand successively in the direction of the other end, (d) of a gas bubble, (e) of a solution of at least one substance miscible with a strip, slightly or not toxic at temperature ambient vis-à-vis the embryo which does not penetrate inside the cells of the embryo and which ensures outside thereof an osmotic pressure sufficient to allow a progressive diffusion of the cryoprotector outside cells, the arrangement being such that, upon thawing, the embryo in its preservation medium is brought directly into contact with the solution, (f) another gas bubble and (g) a second extreme plug sealing, flake in which the second extreme sealing plug is a plastic rod. whose body is wider than that of said glitter and whose end of said rod, causing the bursting of the bubble which, during the thawing, rises along the fraction of the medium ensuring the dilution of the cryoprotec tor, is force-fitted by at least one flat in one of the ends of the straw after filling it with a length which is chosen at will to calibrate said bubble precisely.
La présente invention concerne également les caractéristiques ci-après considérées isolément ou selon toutes leurs combinaisons techniquement possibles
- l'extrémité du jonc assurant l'éclatement de la bulle présente une forme de calotte sphérique,
- l'extrémité du jonc assurant l'éclatement de la bulle présente une forme de tronc de cône;
- l'extrémité du jonc assurant l'éclatement de la bulle présente une forme de cône;
- la forme en tronc de cône ou de calotte sphérique de l'extrémité du jonc est surmontée d'une courte pointe;
- le corps du jonc comporte des symboles nécessaires à l'identification de la paillette;
- le Jonc est en matière plastique injectée;
- le jonc est en polychlorure de vinyle;
- l'emmanchement à force du jonc est renforcé en soumettent la zone de jonction à une opération de soudage.The present invention also relates to the characteristics below considered in isolation or in all their technically possible combinations
- the end of the rod ensuring the bursting of the bubble has a shape of a spherical cap,
- The end of the rod ensuring the bursting of the bubble has the shape of a truncated cone;
- The end of the rod ensuring the bursting of the bubble has a cone shape;
- the truncated cone or spherical cap shape of the end of the rod is surmounted by a short point;
- the body of the ring contains symbols necessary for the identification of the glitter;
- the rod is made of injected plastic;
- the rod is made of polyvinyl chloride;
- the press fit of the rod is reinforced by subjecting the junction zone to a welding operation.
L'invention est illustrée en référence aux dessins annexés sur lesquels
Fig. 1 illustre la structure d'une paillette selon la présente invention avant la congélation.The invention is illustrated with reference to the accompanying drawings in which
Fig. 1 illustrates the structure of a straw according to the present invention before freezing.
Fig. 2 est un détail de l'extrémité d'un jonc en forme de calotte sphérique. Fig. 2 is a detail of the end of a rod in the form of a spherical cap.
Fig. 3 est un détail de l'extrémité d'un jonc en forme de tronc de cône. Fig. 3 is a detail of the end of a rod in the form of a truncated cone.
Fig. 4 est un détail de l'extrémité d'un jonc en forme de cône. Fig. 4 is a detail of the end of a cone-shaped rod.
Aux dessins annexés, la paillette est désignée dans son ensemble par 1 et ses parois par 15. Elle est obturée à une de ses extrémités 13 par un bouchon 2, qui est par exemple un bouchon d'alcool polyvinylique. L'embryon 4' se trouve dans un cryoprotecteur 4 et est entouré respectivement par un mélange gazeux 5 et une bulle de gaz 7. In the accompanying drawings, the flake is designated as a whole by 1 and its walls by 15. It is closed at one of its ends 13 by a stopper 2, which is for example a stopper of polyvinyl alcohol. The embryo 4 ′ is located in a cryoprotector 4 and is surrounded respectively by a gas mixture 5 and a gas bubble 7.
Entre le mélange gazeux 5 et le bouchon 2 se trouve le milieu de culture 6. Une solution 8 d'au moins une substance miscible à l'eau, peu ou pas toxique à la température ambiante, vis-à-vis de l'embryon, qui ne pénètre pas à l'intérieur des cellules de l'embryon 4' mais qui assure à l'extérieur de l'embryon une pression osmotique suffisante pour permettre une diffusion progressive du cryoprotecteur 4 à 1'extérieur des cellules, est prévue entre la bulle de gaz 7 et une autre bulle de gaz 9 qui sépare ladite solution 8 du bouchon 3.Between the gas mixture 5 and the plug 2 is the culture medium 6. A solution 8 of at least one substance miscible with water, slightly or not toxic at room temperature, vis-à-vis the embryo , which does not penetrate inside the cells of the embryo 4 ′ but which provides outside the embryo an osmotic pressure sufficient to allow a progressive diffusion of the cryoprotector 4 outside the cells, is provided between the gas bubble 7 and another gas bubble 9 which separates said solution 8 from the plug 3.
Le bouchon 3 qui est prévu à l'extrémité 14 de la paillette 1 est un jonc 31, en matière plastique dont le corps 32 est plus large que celui de la paillette 1. Ce jonc 31 est serti ou emmanché à force à une de ses extrémités 34 pourvue au moins d'un méplat dans l'extrémité 14 de la paillette 1. L'extrémité 34 du jonc 31 en forme de calotte sphérique 34a, de tronc de cône 34b ou de cône 34c muni ou non d'une fine pointe 34d facilite après la décongélation l'éclatement de la bulle 7 lorsqu'elle arrive au contact du jonc 31, ce qui évite lors du retournement de la paillette 1 un mouvement de retour de la bulle 7 à l'intérieur de la paillette 1. Un tel mouvement peut perturber le déplacement de l'embryon 4' le long de la colonne constituée par le mélange des fractions 4 et 8. Le jonc 31 est emmanché après le remplissage de la paillette 1 à raison d'une longueur qui est choisie à volonté pour calibrer avec précision la bulle 7. Grâce à un effet de piston dû à l'emmanchement ré- glable du jonc 31, la bulle 7 peut être calibrée avec une très grande précision. Le jonc 31 comporte des symboles nécessaires à l'identification de la paillette 1; il est donc possible, selon la présente invention, tout en maintenant la possibilité de porter une identification directement sur la paillette 1, d'inscrire les symboles sur le jonc de matière plastique 31 qui possède une certaine inertie thermique et qui est serti dans l'extrémité 14 de la paillette 1. The plug 3 which is provided at the end 14 of the straw 1 is a rod 31, made of plastic, the body 32 of which is wider than that of the straw 1. This rod 31 is crimped or force-fitted to one of its ends 34 provided with at least one flat in the end 14 of the straw 1. The end 34 of the rod 31 in the form of a spherical cap 34a, of a truncated cone 34b or of a cone 34c with or without a fine point 34d facilitates, after defrosting, the bursting of the bubble 7 when it comes into contact with the rod 31, which avoids during the inversion of the straw 1 a return movement of the bubble 7 inside the straw 1. A such movement may disturb the movement of the embryo 4 'along the column formed by the mixture of fractions 4 and 8. The rod 31 is fitted after the filling of the straw 1 at a length which is chosen at will to precisely calibrate the bubble 7. Thanks to a piston effect due to the adjustable fitting of the jo nc 31, the bubble 7 can be calibrated with great precision. The rod 31 includes symbols necessary for the identification of the straw 1; it is therefore possible, according to the present invention, while maintaining the possibility of carrying an identification directly on the straw 1, of inscribing the symbols on the plastic rod 31 which has a certain thermal inertia and which is set in the end 14 of the straw 1.
Pour la lecture, seule la sortie du jonc de matière plastique 31 hors de l'azote liquide est nécessaire, la paillette proprement dite 1 étant laissée dans l'azote liquide. Le recours à un code de couleurs corps 32 du jonc 31 - extrémité 14 permet une première identification pour des lots de paillettes stockées dans le récipient d'azote liquide. Pour que la longueur paillette 1 - jonc 31 reste compatible avec les possibilités de stockage dans les différents récipients disponibles actuellement sur le marché, la longueur totale de la paillette 1 est réduite comme indiqué ci-après
Comme on l'a mentionné ci-dessus, la jonc-bouchon 3, 31 permet également un montage plus aisé de la paillette.En effet pour pouvoir monter dans la paillette 1 à la décongélation, la bulle 7 doit être de volume réduit 20 S pour les paillettes de 500 , 6-8 1 pour les pail- lettes de 250 1. Le calibrage de la bulle 7 doit être effectué avec précision lors du montage de la paillette 1. Si l'on prélève un volume d'air légèrement inférieur, le risque de mélange des deux fractions existe et il faut recommencer l'opération. Le jonc de matière plastique 31 au cours de l'embottement à l'extrémité 14 de la paillette 1 comprime les fractions gazeuses au montage et leur volume diminue.Cette diminution de volume liée à la longueur du jonc 31 inséré dans la paillette 1 rend plus aisé le montage l'opérateur peut prélever un volume plus important et con trôler à la fin des opérations le volume des fractions d'air ou mélange gazeux, en jouant sur la longueur du jonc 31 inséré dans la paillette 1.For reading, only the exit of the plastic rod 31 out of the liquid nitrogen is necessary, the actual flake 1 being left in the liquid nitrogen. The use of a color code body 32 of the rod 31 - end 14 allows a first identification for batches of flakes stored in the container of liquid nitrogen. So that the length of the straw 1 - rod 31 remains compatible with the possibilities of storage in the various containers currently available on the market, the total length of the straw 1 is reduced as indicated below.
As mentioned above, the stopper ring 3, 31 also allows easier mounting of the straw. Indeed, to be able to climb into the straw 1 when it is defrosted, the bubble 7 must be of reduced volume 20 S for flakes of 500, 6-8 1 for flakes of 250 1. The calibration of bubble 7 must be carried out with precision when mounting the flake 1. If a slightly smaller volume of air is taken , the risk of mixing the two fractions exists and the operation must be repeated. The plastic rod 31 during the embedding at the end 14 of the straw 1 compresses the gaseous fractions during assembly and their volume decreases. This reduction in volume linked to the length of the rod 31 inserted in the straw 1 makes it more easy assembly the operator can take a larger volume and control at the end of the operations the volume of the air fractions or gas mixture, by playing on the length of the rod 31 inserted in the straw 1.
L'emmanchement à force ou sertissage du jonc en matière plastique 31 dans la paillette 1 peut être éven- tuellement renforcé en soumettant la zone de jonction aux effets d'un soudage. Un tel procédé, par exemple, à l'aide d'une courte impulsion de soudage permet de parfaire la soudure des deux éléments en matière plastique afin de garantir l'inviolabilité de la paillette 1. The press fitting or crimping of the plastic rod 31 in the straw 1 can possibly be reinforced by subjecting the junction zone to the effects of welding. Such a method, for example, using a short welding pulse makes it possible to perfect the welding of the two plastic elements in order to guarantee the inviolability of the straw 1.
Selon la présente invention, on a réalisé des paillettes de diamètre interne de 2,8 mm (correspondant à celui des paillettes de 50055.) et des paillettes de diamètre interne de 1,7 mm (correspondant à celui de paillettes de 250
On indique ci-après le rapport en volume et en longueur des éléments constitutifs pour une paillette de petit diamètre, savoir 250
Fraction Longueur en Volume approxima
mm tif en
Embryon (4-4') 5 12
Mélange gazeux (5) 10 24
Bulle de gaz (7) entre l'embryon (4-4') et la solution (8) 2,5 6
Solution sucrose (8) 25 55
Milieu de culture (6) 25 55
Bulle d'air terminale (9) 2,5 6
Total paillette (1) sans bouchon (2) 70 ~ 160
Longueur totale paillette (1) sans jonc (31) 87
Longueur jonc (31) 55
Longueur totale 142
La présente invention propose donc une paillette munie d'un jonc d'identification pour la conservation par congélation d'embryons de mammifères, ledit jonc en matière plastique 31 permettant de réaliser une identification précise de l'embryon placé dans la paillette 1 et de calibrer à volonté la bulle de gaz 7 tout en rendant le montage de ladite paillette 1 plus aisé. I1 convient de remarquer que le jonc 31 peut être réalisé en toute matière plastique compatible avec les fractions de la paillette 1. A titre d'exemple, ce jonc 31 est réalisé en polychlorure de vinyle, toutefois, il est bien entendu que toutes les matières similaires conviennent aussi. Les symboles d'identification sur le jonc 31 peuvent être réalisées selon toutes manières convenables, par exemple ces identifications peuvent être imprimées en utilisant une matrice en caoutchouc.According to the present invention, flakes with an internal diameter of 2.8 mm were produced (corresponding to that of flakes of 50055.) and flakes of internal diameter of 1.7 mm (corresponding to that of flakes of 250
The volume and length ratio of the constituent elements for a small diameter straw is indicated below, namely 250
Fraction Length in Volume approxima
mm tif in
Embryo (4-4 ') 5 12
Gas mixture (5) 10 24
Gas bubble (7) between the embryo (4-4 ') and the solution (8) 2.5 6
Sucrose solution (8) 25 55
Culture medium (6) 25 55
Terminal air bubble (9) 2.5 6
Total straw (1) without cap (2) 70 ~ 160
Total length sequin (1) without ring (31) 87
Rod length (31) 55
Total length 142
The present invention therefore provides a straw provided with an identification rod for the conservation by freezing of mammalian embryos, said plastic rod 31 making it possible to carry out a precise identification of the embryo placed in the straw 1 and to calibrate at will the gas bubble 7 while making the mounting of said straw 1 easier. I1 should be noted that the rod 31 can be made of any plastic material compatible with the fractions of the straw 1. For example, this rod 31 is made of polyvinyl chloride, however, it is understood that all materials similar are also suitable. The identification symbols on the rod 31 can be made in any suitable way, for example these identifications can be printed using a rubber matrix.
La différence de largeur entre le corps 32 du
Jonc 31 et le corps de la paillette 1 peut varier à volonté, cependant on préfère que le corps 32 du jonc 31 soit seulement légèrement supérieur au corps de la paillette 1.The difference in width between the body 32 of the
Ring 31 and the body of the sequin 1 can vary at will, however it is preferred that the body 32 of the rod 31 is only slightly greater than the body of the straw 1.
L'invention n'est pas limitée au mode de réalisation représenté et décrit et elle englobe les différents équivalents techniques. The invention is not limited to the embodiment shown and described and it encompasses the various technical equivalents.
Claims (10)
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Family Applications (1)
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