FR2490672A1 - Cultivation of microorganisms in hydrophobic media - using aq. nutrients in microemulsion form - Google Patents

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Abstract

Cultivation of microorganisms in a hydrophobic medium is carried out using nutrients in aq. soln. with the improvement that the nutrient soln. is microemulsified in a liq. which is immiscible with water but miscible with the hydrophobic medium, and the resulting microemulsion is added to the culture. The process is esp. useful for promoting biodegradation of oil spills on land or sea. The microemulsions are stable liqs. which tend to remain in the oil layer and allow biodegradation to be achieved in a few days. Specifically claimed liq. nutrient compsns. comprise microemulsions in which the internal phase is an aq. soln. contg. assimilable N and P sources and the external phase is an oil-miscible water-immiscible organic liq.. The N source pref. includes urea and the P source is pref. a P-contg. surfactant.

Description

La présente invention concerne un nouveau type de microémulsion, à savoir la microémulsion thermodynamiquement stable d'une solution aqueuse de matières nutritives, dont la phase externe est constituée par un milieu hydrophobe. Elle comprend un procédé de production d'une telle microémulsion et des applications de celle-ci dans des domaines d'utilisation de microorganismes, notamment à la culture des microorganismes dans un milieu hydrophobe. The present invention relates to a new type of microemulsion, namely the thermodynamically stable microemulsion of an aqueous solution of nutrients, the outer phase is constituted by a hydrophobic medium. It comprises a method of producing such a microemulsion and applications thereof in areas of use of microorganisms, including the culture of microorganisms in a hydrophobic medium.

Des opérations industrielles, mettant en oeuvre des cultures de divers microorganismes, surtout bactéries et champignons, sont très courantes à l'heure actuelle. Nombreuses industries alimentaires, fabrications de médicaments, épurations, etc... sont basées sur de telles opérations. Le plus souvent, le travail comporte deux temps : d'abord a lieu la culture du microorganisme concerné, dans un milieu nutritif approprié, jusqu'à la croissance d'une population suffisamment nombreuse ; dans la seconde étape, cette population est mise au contact des matières que l'on veut soumettre à l'action des microorganismes. Les opérations en cuve ne comportent pas de difficultés spéciales à ce point de vue, la culture préalable, c'est-à-dire la multiplication, étant effectuée -selon les casdans une enceinte séparée ou dans la même cuve où a lieu la seconde phase opératoire.Par contre, lorsque les opérations sont réalisées dans la nature, sur des grandes surfaces de sol ou d'eau, comme c'est par exemple le cas dans l'élimination de nappes d'hydrocarbures par dégradation microbiologique en mer, sur des plages, sur des cours d'eau ou des lacs, la multiplication préalable des microorganismes utiles présente des difficultés. Industrial operations, involving cultures of various microorganisms, especially bacteria and fungi, are very common at present. Many food industries, drug manufacturing, purification, etc ... are based on such operations. In most cases, the work involves two stages: first, the cultivation of the microorganism concerned, in a suitable nutrient medium, until the growth of a sufficiently large population; in the second stage, this population is put in contact with the materials that one wants to submit to the action of microorganisms. The operations in the tank do not present any special difficulties in this respect, the prior culture, that is to say the multiplication, being carried out, according to the case, in a separate enclosure or in the same tank where the second phase takes place. However, when operations are carried out in the wild, on large areas of soil or water, as is the case, for example, in the elimination of oil slicks by microbiological degradation at sea, on beaches, on rivers or lakes, the prior multiplication of useful microorganisms presents difficulties.

On doit, en effet, fournir à la culture des matières nutritives, c'est-àdire des sources de C, N et P, ainsi que des oligoéléments, pour assurer la croissance des organismes en question ; or les sources classiques, telles qu'hydrates de carbone, nitrates ou sels ammoniacaux et phosphates sont solubles dans l'eau, ils ne peuvent donc pas demeurer dans la couche superficielle de l'étendue à traiter, où doit avoir lieu une forte croissance des microorganismes utiles ; ces substances diffusent dans l'eau ou le sol sous-jacent et sont ainsi soustraites à la culture.Nutrients, that is, sources of C, N, and P, as well as trace elements, must be supplied to the crop to ensure the growth of the organisms in question; however, conventional sources, such as carbohydrates, nitrates or ammonium salts and phosphates are soluble in water, they can not remain in the superficial layer of the area to be treated, where there must be a strong growth of useful microorganisms; these substances diffuse into the underlying water or soil and are thus removed from the crop.

Pour y remédier, on a appliqué, jusqu'à présent, différentes méthodes. Une d'entre elles consiste à enrober de paraffine des grains de composé azoté et de phosphate solides, pour les offrir sous cette forme aux microorranismes, comme indiqué dans le brevet US 3 959 127. Dans une variante, selon le brevet US 3 883 397, l'enrobage lipophile est un sel d'acide gras, à la place de la paraffine. Mais ces méthodes ne permettent pas aux microorganismes d'avoir rapidement à leur disposition la nour- riture voulue ; la matière grasse d'enrobage est difficile à percer, c'est-à-dire à dégrader, en l'absence d'azote et de phosphore extérieurs. To remedy this, different methods have been applied so far. One of them consists in coating paraffin grains of nitrogen compound and phosphate solids, to offer them in this form micro-tumors, as indicated in US Patent 3,959,127. In a variant, according to US Patent 3,883,397 , the lipophilic coating is a fatty acid salt, instead of paraffin. But these methods do not allow microorganisms to have the necessary nourishment readily available to them; the coating fat is difficult to pierce, i.e. to degrade, in the absence of external nitrogen and phosphorus.

Aussi l'action des bactéries ou des champignons est-elle lente et demande des semaines ou des mois. the autre solution proposée consiste à utiliser en tant que sources de N et P, des composés insolubles dans liteau, mais solubles dans les hydrocarbures, notamment des phospho-amino-lipides, comme décrit dans la publication française N 2 172 796 de brevet ; mais les composés azotés solubles dans l'huile ont en général une assez faible teneur en azote, et dans ces conditions, la dégradation biologique des hydrocarbures du pétrole, en mer, demande 2 à 3 mois.On a également indiqué, dans la publication française N 2 230 l'01, l'emploi d'amides, de sels organiques d'ammonium et de phospho-amino-lipides en solution dans un solvant pétrolier, cette solution étant mise en émulsion dans solvant pétrolier, cette solution étant mise en émulsion dans l'eau 1 'eau cette émulsion est pulvérisée sur une nappe d'hydrocarbure flottant sur l'eau, en vue de la biodégradation de la nappe. Cette méthode exige des fortes proportions d'émulsion aqueuse et le résultat n'est acquis qu'après plusieurs semaines.Also the action of bacteria or fungi is slow and takes weeks or months. the other proposed solution consists in using as N and P sources compounds which are insoluble in water, but which are soluble in hydrocarbons, in particular phosphoamino lipids, as described in French Patent Publication No. 2 172 796; but oil-soluble nitrogen compounds generally have a relatively low nitrogen content, and under these conditions, the biological degradation of petroleum hydrocarbons, at sea, takes 2 to 3 months. It is also stated in the French publication No. 2 230 01, the use of amides, organic ammonium salts and phosphoamino-lipids in solution in a petroleum solvent, this solution being emulsified in petroleum solvent, this solution being emulsified in water the water this emulsion is sprayed on a hydrocarbon layer floating on the water, for the biodegradation of the web. This method requires high proportions of aqueous emulsion and the result is acquired after several weeks.

La présente invention réalise une solution nouvelle de l'apport de substances nutritives, solubles dans l'eau, à une couche organique hydrophobe. Que cette couche -qui peut être hydrocarbonnée- flotte sur l'eau ou qu'elle se trouve sur le sol ou sur un support en matériau de construction, les substances nutritives, apportées selon l'invention restent principalement dans la couche hydrophobe et permettent la multiplication rapide des microorganismes, si des germes de ceux-ci s'y trouvent. The present invention provides a novel solution for the delivery of water-soluble nutrients to a hydrophobic organic layer. Whether this layer -which can be hydrocarbon-floats on the water or that it is on the ground or on a support of construction material, the nutrients provided according to the invention remain mainly in the hydrophobic layer and allow the rapid multiplication of microorganisms, if germs of these are found there.

Le nouveau procédé suivant l'invention consiste à créer une microémulsion du type eauans-huile, dont la phase interne est une solution aqueuse de matières nutritives et la phase externe un liquide non miscible à l'eau, et à ajouter cette microémulsion à la couche hydrophobe qu'il s'ait de dégrader ; la microémulsion peut renfer-.:er les germes des microorganismes appropriés si le milieu à traiter n'en contient pas, ou n'en contient pas suffisarment.  The new process according to the invention consists in creating a microemulsion of the water-oil type, the internal phase of which is an aqueous solution of nutrients and the external phase a liquid immiscible with water, and adding this microemulsion to the layer. hydrophobic that it is to degrade; the microemulsion may contain the germs of the appropriate microorganisms if the medium to be treated does not contain, or does not contain enough.

Bien entendu, comme connu dans l'art, la microémulsion contient au moins un agent tensioactif et un co-agent, qui ont servi à sa préparation. Of course, as known in the art, the microemulsion contains at least one surfactant and a co-agent, which were used in its preparation.

Ainsi, contrairement à la technique antérieure, les substances nutritives ne sont utilisées ni à l'état solide, ni en solution dans un solvant non miscible à l'eau, ni en macroémulsion aqueuse, mais sous la forme d'une solution aqueuse microémulsionnée dans un liquide miscible avec la couche hydrophobe à biodégrader, c'est-à-dire sous la forme de micelles micro-dispersées, dites inversées dont le diamètre est compris entre 80 et 600 Angströms et particulièrement entre 100 et 200 Angströms. Thus, contrary to the prior art, the nutrients are used neither in the solid state, nor in solution in a water-immiscible solvent, nor in aqueous macroemulsion, but in the form of a microemulsified aqueous solution in a liquid miscible with the hydrophobic layer to be biodegraded, that is to say in the form of micro-dispersed micelles, said inverted whose diameter is between 80 and 600 Angstroms and particularly between 100 and 200 Angstroms.

Cette forme inattendue conduit à ce résultat remarquable que la biodégradation peut être réalisée en quelques jours, au lieu des semaines ou mois que demandent les procédés connus.This unexpected form leads to this remarkable result that biodegradation can be achieved in a few days, instead of the weeks or months that the known methods require.

En tant que source d'azote on peut employer, dans les microémulsions suivant l'invention, les différents composés, solubles dans l'eau, assimilables par les microorganismes. Ce sont par exemple les nitrate, sulfate ou/et phosphate d'ammonium, l'urée, des protéines, peptones, etc. As a source of nitrogen, the microemulsions according to the invention can be used for the various compounds which are soluble in water and can be assimilated by microorganisms. These are for example nitrate, sulfate and / or ammonium phosphate, urea, proteins, peptones, etc.


L'urée étant l'engrais le plus riche en azote et très soluble dans l'eau, elle est particulièrement appropriée, puisqu'elle permet d'avoir des solutions aqueuses fortement concentrées.
Urea being the fertilizer rich in nitrogen and very soluble in water, it is particularly suitable, since it allows to have highly concentrated aqueous solutions.

Le phosphore peut etre apporté à la solution de même sous une de ses formes habituelles, phosphates ou phosphites alcalins ou d'ammonium. Phosphorus can be supplied to the solution as well in one of its usual forms, alkaline phosphates or phosphites or ammonium.

Suivant une forme d'exécution particulière de l'invention, le phosphore est pris sous la forme d'un composé tensioactif, tel que par exemple un phosphate d'alkyle supérieur ou une lécithine : on a ainsi la source de phosphore et l'agent tensioactif de la microémulsion dans la même molécule.According to a particular embodiment of the invention, the phosphorus is taken in the form of a surfactant compound, such as for example a higher alkyl phosphate or a lecithin: there is thus the source of phosphorus and the agent surfactant of the microemulsion in the same molecule.

Dans de nombreuses opérations industrielles comportant la culture de microorganismes il est nécessaire que le pH du milieu soit ajusté à la valeur la plus favorable à la croissance bactérienne ; en général ce pH doit être voisin de la neutralité, et l'on peut ajouter soit de l'acide phosphorique, source de phosphore, si le milieu doit être acidifié, ou bien de l'ammoniaque, source d'azote, si le milieu doit être neutralisé par une base. In many industrial operations involving the cultivation of microorganisms it is necessary that the pH of the medium is adjusted to the value most favorable to bacterial growth; in general this pH must be close to neutrality, and one can add either phosphoric acid, a source of phosphorus, if the medium must be acidified, or else ammonia, a source of nitrogen, if the medium must be neutralized by a base.

Dans le cas de la dégradation bactérienne des hydrocarbures par les microorganismes cités ci-dessous, les besoins en phosphore sont beau coup moindres qu'en azote ; exprimé en poids, le rapport P/N peut varier entre 0,02 et 0,2, de préférence entre 0,05 et 0,15 ; au point de vue de la croissance, les rapports P/N les plus favorables sont aussi proches que possible de 0,05. In the case of bacterial degradation of hydrocarbons by the microorganisms mentioned below, the phosphorus requirements are much lower than in nitrogen; expressed in weight, the P / N ratio can vary between 0.02 and 0.2, preferably between 0.05 and 0.15; in terms of growth, the most favorable P / N ratios are as close as possible to 0.05.

Lorsque le liquide non miscible à l'eau, de préférence lipomisci- ble, formant la phase externe de la microémulsion, ou bien la couche hydrophobe à dégrader, est utilisable par les nicroorganismes en tant que source de carbone, il n'est plus nécessaire d'ajouter d'autres composés carbonés, assimilables, à la microémulsion. Par contre, si la phase externe de celle-ci et la couche à dégrader sont difficilement attaquées par les microorganismes -du moins au début il y a intérêt à inclure dans la solution nutritive une source de carbone facile à utiliser, par exemple des hydrates de carbone solubles, permettant ainsi le démarrage rapide de la multiplication des microorganismes. When the water immiscible liquid, preferably lipomiscible, forming the outer phase of the microemulsion, or the hydrophobic layer to be degraded, is usable by the microorganisms as a carbon source, it is no longer necessary to add other carbon compounds, assimilable to the microemulsion. On the other hand, if the external phase of the latter and the layer to be degraded are difficult to attack by the microorganisms -at least at the beginning it is advantageous to include in the nutrient solution an easy-to-use carbon source, for example hydrates of soluble carbon, thus allowing the rapid start of the multiplication of microorganisms.

Comme dans toutes les cultures, des oligoéléments sont nécessaires en particulier des sels de Fe, Mg, K, etc..., il y a donc lieu d'en ajouter une très petite dose à la solution nutritive, à la manière connue en soi. As in all cultures, trace elements are required in particular salts of Fe, Mg, K, etc ..., it is therefore necessary to add a very small dose to the nutrient solution, in the manner known per se .

Il va de soi que, pour obtenir une microémulsion suivant l'invention, on doit utiliser un composé tensioactif capable d'en produire une. It goes without saying that to obtain a microemulsion according to the invention, it is necessary to use a surfactant compound capable of producing one.

Le choix du composé idoine, à la portée de l'comme de l'art, peut être fait parmi les nombreux groupes de tensioactifs non toxiques pour les microorganismes en présence. Ainsi peut-on employer par exemple des sulfates d'alcools gras, des sulfosuccinates, des esters oxyéthylénés de sorbitan, des alcools, acides ou huiles oxyéthylénés, esters de saccharose, anino-acides , O( -amido amino-acides, taurines, sarcosines, polyglycols, phosphates d'alkyles lourds, etc... Cette énumération n'a rien de limitatif, bien d'autres tensioactifs pouvant être utilisés, en particulier ceux qui ont des propriétés dispersantes vis à vis des hydrocarbures.The choice of the appropriate compound, within the scope of art as well as the art, can be made among the many groups of surfactants that are non-toxic to the microorganisms in the presence. Thus, for example, fatty alcohol sulfates, sulfosuccinates, oxyethylenated sorbitan esters, oxyethylenated alcohols, acids or oils, sucrose esters, amino acids, O-amido amino acids, taurines, sarcosines may be used. , polyglycols, phosphates of heavy alkyl, etc ... This enumeration is not limiting, although other surfactants can be used, especially those which have dispersant properties with respect to hydrocarbons.

De préférence, la balance hydrophile-lipophile des agents émulsifiants employés est comprise entre 10 et 17, ou mieux entre 11 et 15. Preferably, the hydrophilic-lipophilic balance of the emulsifying agents employed is between 10 and 17, or better still between 11 and 15.

Lorsqu'il s'agit d'opérations menées dehors, l'agent tensioactif lui-même doit être biodégradable , afin d'éviter des nuisances dans la nature. When it comes to operations carried out, the surfactant itself must be biodegradable, in order to avoid nuisances in nature.

Comme pour les tensioactifs, le choix est également vaste en ce qui concerne le co-tensioactif nécessaire à la formation de la microémulsion. De tels co-agents sont connus dans l'art, il nty a donc pas lieu d'en citer beaucoup ici ; on notera seulement, à titre d'indication non limitative, qu'il est possible d'employer des composés azotés, tels que carbamates, amides ou sels d'amines. La viscosité de la microémulsion peut être considérablement abaissée par l'adjonction d'un alcool, en particulier en C6 à C12, d'un ether ou d'un ester de polyol, notamment de glycol ; cela facilite beaucoup les manipulations. As for surfactants, the choice is also wide with regard to the co-surfactant necessary for the formation of the microemulsion. Such co-agents are known in the art, so there is no need to cite many here; it should be noted only, as a nonlimiting indication, that it is possible to use nitrogen compounds, such as carbamates, amides or amine salts. The viscosity of the microemulsion can be considerably lowered by the addition of an alcohol, in particular C 6 to C 12, an ether or a polyol ester, especially glycol; this makes handling a lot easier.

Puisque la phase externe de la microémulsion doit être miscible avec le liquide hydrophobe à biodégrader, elle est forcément choisie selon la nature de ce liquide. Dans le cas pratique le plus important, où ce dernier est constitué par des hydrocarbures du pétrole, la phase externe, lipomiscible, peut être consitutée par exemple par des hydrocarbures aliphatiques, aromatiques ou naphténiques, ou par des huiles dites minérales, c'est-à-dire des mélanges de tels hydrocarbures. Ce type de phase externe est difficilement attaquée par des bactéries, tant que celles-ci n'ont pas subi l'adaptation suffisante.Il est donc préférable d'utiliser des huiles végétales ou animales qui peuvent servir de source de carbone, parce qu'elles sont utilisables par les microorganismes ; ces huiles, ou de préférence leurs acides gras correspondants, permettent un développement rapide des microorganismes nécessaires à la dégradation de la couche hydrophobe, notamment du pétrole brut. Since the outer phase of the microemulsion must be miscible with the hydrophobic liquid to be biodegraded, it is necessarily chosen according to the nature of this liquid. In the most important practical case, where the latter consists of petroleum hydrocarbons, the external phase, lipomiscible, can be constituted for example by aliphatic hydrocarbons, aromatic or naphthenic, or by so-called mineral oils, that is, that is, mixtures of such hydrocarbons. This type of external phase is hardly attacked by bacteria, as long as these have not been sufficiently adapted. It is therefore preferable to use vegetable or animal oils which can serve as a source of carbon, because they can be used by microorganisms; these oils, or preferably their corresponding fatty acids, allow a rapid development of microorganisms necessary for the degradation of the hydrophobic layer, especially crude oil.

Le rapport pondéral entre le liquide lipomiscible, c'est-à-dire la phase externe de la microémulsion, et la solution aqueuse à émulsionner, doit en général être supérieur à 0,2 ; ce rapport est choisi de façon à ce que la solution aqueuse se trouve en phase interne. Le choix des tensioactifs et des co-tensioactifs est effectué selon la nature du liquide lipomiscible et suivant la concentration des sels dissous dans la phase aqueuse ; on se base pour cela sur les concepts de formulation des microémulsions, connus en soi. The weight ratio between the lipomiscible liquid, that is to say the external phase of the microemulsion, and the aqueous solution to be emulsified, must in general be greater than 0.2; this ratio is chosen so that the aqueous solution is in the internal phase. The choice of surfactants and co-surfactants is carried out according to the nature of the lipomiscible liquid and the concentration of the dissolved salts in the aqueous phase; this is based on the concepts of formulation of microemulsions, known per se.

Le procédé de l'invention est applicable à un grand nombre de microorganismes et en particulier à ceux qui permettent de dégrader des hydrocarbures ; ainsi peut-on appliquer l'invention à l'utilisation des bactéries telles que Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Artro bacter, Corynebactérium, etc... Les microorganismespeuvent également être des champignons. The process of the invention is applicable to a large number of microorganisms and in particular to those which make it possible to degrade hydrocarbons; Thus, the invention can be applied to the use of bacteria such as Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Artro bacter, Corynebacterium, etc. Microorganisms can also be fungi.

Bien que l'invention soit très intéressante pour les différentes opérations de biodégradation effectuées dehors, elle peut également rendre des services dans diverses fabrications en cuve, chaque fois qu'une couche hydrophobe d'une substance est mise en jeu dans le procédé. Ainsi, par exemple, s'applique-t-elle avec avantage à la fabrication de protéines à partir d'hydrocarbures par dégradation de ces derniers, à l'aide de bactéries et/ou de champignons. Dans tous les cas, la remarquable dispersion des substances nutritives, aqueuses, au sein de la phase hydrophoble, obtenue grace à l'invention, conduit à une multiplication plus rapide des microorganismes ; il en résulte un gain de temps appréciable dans les opérations. Although the invention is very interesting for the different biodegradation operations carried out, it can also be used in various tank manufacturing, whenever a hydrophobic layer of a substance is involved in the process. Thus, for example, it applies with advantage to the production of proteins from hydrocarbons by degradation of the latter, using bacteria and / or fungi. In all cases, the remarkable dispersion of nutrients, aqueous, within the hydrophobic phase, obtained by virtue of the invention, leads to a faster multiplication of microorganisms; this results in appreciable time savings in operations.

Parmi les applications au grand air, sur des surfaces d'eau ou de sol, la plus importante est la dégradation des hydrocarbures répandus accidentellement ; pour la raison exposée plus haut, c'est-à-dire du fait que les substances nutritives solubles restent dans la couche traitée au lieu d'etre entraînées par l'eau, l'invention présente une grande valeur pour la lutte contre la marée noire. Cependant, le meme principe s'applique à des opérations telles que nettoyage des chaussées, bassins, sols, cuves, etc..., des dépits hydrocarbonés qui peuvent les souiller. D'autres applications comprennent l'épandage d'engrais sur des cultures agricoles. Among the applications outdoors, on water or soil surfaces, the most important is the degradation of accidentally spilled hydrocarbons; for the reason explained above, that is to say that the soluble nutrients remain in the treated layer instead of being driven by water, the invention has great value for the fight against the tide black. However, the same principle applies to operations such as cleaning pavements, basins, soils, tanks, etc., hydrocarbon deposits that can contaminate them. Other applications include spreading fertilizer on agricultural crops.

Les microorganismes sont généralement présents dans le milieu à traiter ; il est cependant nécessaire parfois d'effectuer un ensemencement, lorsque la population initiale est jugée trop faible, ou bien si le milieu ne contient pas les bactéries appropriées. The microorganisms are generally present in the medium to be treated; however, it is sometimes necessary to seed, when the initial population is considered too low, or if the medium does not contain the appropriate bacteria.

Dans une forme particulière d'exécution de la présente invention, on utilise l'urée comme substance nutritive azotée ; on a constaté que ce composé joue en meme temps le rôle de co-tensioactif, on n'est donc plus obligé d'ajouter un autre co-tensioactif. D'autre part, comme le phosphore peut avantageusement être apporté par des esters allyliques de l'acide phosphorique, qui jouissent des propriétés tensioactives, la composition de la solution nutritive est simplifiée par le fait qu'il est possible d'employer l'urée et l'ester phosphorique, sans autre adjuvant. Il est cependant recommandable d'ajouter des liquides permettant d'abaisser la viscosité de la microémulsion ; on a cité plus haut quelques exemples de tels adjuvants ; dans une forme d'exécution particulière de l'invention, le butyléther d'éthylène glycol a donné d'excellents résultats. In a particular embodiment of the present invention, urea is used as a nitrogenous nutrient; it has been found that this compound plays at the same time the role of co-surfactant, so it is no longer necessary to add another co-surfactant. On the other hand, since the phosphorus can advantageously be provided by allyl esters of phosphoric acid, which have surfactant properties, the composition of the nutrient solution is simplified by the fact that it is possible to use urea and the phosphoric ester, without any other adjuvant. It is however advisable to add liquids to lower the viscosity of the microemulsion; some examples of such adjuvants have been cited above; in a particular embodiment of the invention, ethylene glycol butyl ether has given excellent results.

Le liquide lipomiscible, convenant fort bien pour la phase externe de la microémulsion, suivant l'invention, peut être constitué par un ou plusieurs esters d'acide gras, tels que les acides laurique, myristique, palmitique, arachidique, oléique, stéarique, caprique, caproique, caprylique, etc... ; les glycérides de tels acides constituent des produits industriels très accessibles, puisque ce sont des huiles végétales et animales. Des alcools gras, c'est-à-dire en C6 à C24 conviennent également, ainsi que les acides gras liquides, eux-mêmes. The lipomiscible liquid, which is very suitable for the external phase of the microemulsion according to the invention, may consist of one or more fatty acid esters, such as lauric acid, myristic acid, palmitic acid, arachidic acid, oleic acid, stearic acid or capric acid. , caproic, caprylic, etc ...; the glycerides of such acids are very accessible industrial products, since they are vegetable and animal oils. Fatty alcohols, that is to say C6 to C24 are also suitable, as well as liquid fatty acids, themselves.

Dans un cas particulier, où la solution aqueuse contient de lourée et des phosphates de lauryle ou/et d'oléyle commercialisés par exemple par la Société Hoechst sous le nom "Hostaphalt", la teneur préféréeen azote de l'ensemble de la microémulsion est d'environ 4 à 10 % en poids ou mieux de 5 à 7 %. Le rapport pondéral de l'azote sur le liquide lipomiscible est généralement de 0,1 à 0,4 et surtout de 0,11 à 0,31. In a particular case, where the aqueous solution contains heavy and lauryl or / and oleyl phosphates marketed for example by Hoechst under the name "Hostaphalt", the preferred nitrogen content of the whole microemulsion is about 4 to 10% by weight, or more preferably 5 to 7%. The weight ratio of nitrogen to lipomiscible liquid is generally from 0.1 to 0.4 and especially from 0.11 to 0.31.

L'invention est illustrée par la série d'exemples non limitatifs qui suivent
EXEMPLES 1 à 11
Pour chacun des essais, on mélange un certain volume de solution aqueuse d'urée à 50 % en poids avec un volume d'acide oléique, en présence d'une certaine quantité de tensioactifs constitués par un mélange d'esters phosphoriques d'alcools gras de C12 à C18 commercialisés par la Société
Hoechst sous les noms de "Hostaphat". Dans certains de ces essais, on ajoute également du butyl-éther d'éthylène glycol pour abaisser la viscosité.The invention is illustrated by the series of nonlimiting examples which follow
EXAMPLES 1 to 11
For each of the tests, a certain volume of aqueous solution of urea at 50% by weight with a volume of oleic acid is mixed in the presence of a certain amount of surfactants consisting of a mixture of phosphoric esters of fatty alcohols. from C12 to C18 marketed by the Company
Hoechst under the names of "Hostaphat". In some of these tests, butyl ether of ethylene glycol is also added to lower the viscosity.

On détermine le domaine des températures dans lequel la microémulsion obtenue est stable. The temperature range in which the microemulsion obtained is stable is determined.

Le tableau 1, ci-après, indique les compositions des microémulsions ainsi préparées, les domaines de stabilité de ces dernières et leur viscosité. Table 1 below indicates the compositions of the microemulsions thus prepared, the stability domains of the latter and their viscosity.

On peut voir qu'une excellente stabilité dans le domaine de OOC à plus de 400C peut être obtenue suivant les exemples 4, 5, 6, 8, 10 et 11. It can be seen that excellent stability in the OOC range above 400C can be achieved according to Examples 4, 5, 6, 8, 10 and 11.

En ce qui concerne la viscosité, on constate que sans adjonction de butyléther d'éthylène glycol, elle est très forte (exemple 1 et 2) ; par contre, cette adjonction la ramène à des valeurs très acceptables (exemples 3 à 11). Regarding the viscosity, it is found that without addition of butyl ether ethylene glycol, it is very strong (Example 1 and 2); on the other hand, this addition brings it back to very acceptable values (Examples 3 to 11).

TABLEAU 1

Figure img00080001
TABLE 1
Figure img00080001

<SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 11
<tb> Eau <SEP> 11,1 <SEP> 11,7 <SEP> 13,8 <SEP> 14,4 <SEP> 18,3 <SEP> 20,1 <SEP> 20,9 <SEP> 21,9 <SEP> 19,2 <SEP> 20,2 <SEP> 19,2
<tb> Urée <SEP> 11,1 <SEP> 11,7 <SEP> 13,8 <SEP> 14,4 <SEP> 18,3 <SEP> 20,1 <SEP> 20,9 <SEP> 17,2 <SEP> 15,8 <SEP> 16,6 <SEP> 15,7
<tb> Acide <SEP> oléique <SEP> 44,4 <SEP> 46,7 <SEP> 36,8 <SEP> 38,4 <SEP> 36,6 <SEP> 32,1 <SEP> 27,9 <SEP> 27,9 <SEP> 28 <SEP> 29,4 <SEP> 28
<tb> Rutyl-éther <SEP> d'éthylène <SEP> glycol <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 10,6 <SEP> 9,8 <SEP> 10,7 <SEP> 11,6 <SEP> 14,4 <SEP> 14,4 <SEP> 17,5 <SEP> 16,2 <SEP> 10,5
<tb> Phosphate <SEP> de <SEP> lauryle <SEP> (KL <SEP> 340) <SEP> 33,3 <SEP> - <SEP> 25 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 19,5 <SEP> 8,8 <SEP> 19,5
<tb> Phosphate <SEP> d'oléyle <SEP> (KO <SEP> 380) <SEP> - <SEP> 30 <SEP> - <SEP> 23 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP>
Phosphate <SEP> d'alkyl <SEP> phénol <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 16,1 <SEP> 16,1 <SEP> 15,9 <SEP> 15,9 <SEP> - <SEP> 8,8 <SEP>
<SEP> éthoxylé
<tb> Phosphate <SEP> mono-ammonique <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> % <SEP> azote <SEP> 5,2 <SEP> 5,45 <SEP> 6,44 <SEP> 6,72 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 7,4 <SEP> - <SEP>
Rapport <SEP> azote/acide <SEP> oléique <SEP> 0,117 <SEP> 0,117 <SEP> 0,175 <SEP> 0,175 <SEP> 0,23 <SEP> 0,29 <SEP> 0,35 <SEP> 0,31 <SEP> 0,26 <SEP> 0,26 <SEP> 0,26
<tb> Rapport <SEP> phosphore/azote <SEP> 0,154 <SEP> 0,064 <SEP> 0,09 <SEP> 0,049 <SEP> 0,099 <SEP> 0.09 <SEP> 0,086 <SEP> 0,063 <SEP> 0,064 <SEP> - <SEP>
<tb> Domaine <SEP> de <SEP> stabilité <SEP> C <SEP> 10-44 <SEP> 10-46 <SEP> 1-44 <SEP> 0-44 <SEP> 0-40 <SEP> 0-47 <SEP> 12-57 <SEP> 0-40 <SEP> 0-36 <SEP> 0-42 <SEP> 0-45
<tb> Viscosité <SEP> en <SEP> cps <SEP> à <SEP> 20 C <SEP> 1200 <SEP> 2000 <SEP> 167 <SEP> 265 <SEP> 203 <SEP> 197 <SEP> 141 <SEP> 98 <SEP> 61 <SEP> - <SEP>
EXEMPLES 12 à 16
Des microémulsions ont été préparées avec 33 % de phosphate de lauryle ; le liquide lipomiscible est l'acide oléique dont la quantité est égale à deux fois la solution aqueuse d'urée et de phosphate. On a fait varier le pourcent d'urée dans la phase aqueuse Les résultats cidessous donnent la température maximale à laquelle la microémulsion est encore stable.<SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 11
<tb> Water <SEP> 11.1 <SEP> 11.7 <SEP> 13.8 <SEP> 14.4 <SEP> 18.3 <SEP> 20.1 <SEP> 20.9 <SEP> 21 , 9 <SEP> 19.2 <SEP> 20.2 <SEP> 19.2
<tb> Urea <SEP> 11.1 <SEP> 11.7 <SEP> 13.8 <SEP> 14.4 <SEP> 18.3 <SEP> 20.1 <SEP> 20.9 <SEP> 17 , 2 <SEP> 15.8 <SEP> 16.6 <SEP> 15.7
<tb><SEP> Oleic Acid <SEP> 44.4 <SEP> 46.7 <SEP> 36.8 <SEP> 38.4 <SEP> 36.6 <SEP> 32.1 <SEP> 27.9 <SEP> 27.9 <SEP> 28 <SEP> 29.4 <SEP> 28
<tb> Rutyl ether <SEP> ethylene <SEP> glycol <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 10.6 <SEP> 9.8 <SEP> 10.7 <SEP> 11.6 <SEP > 14.4 <SEP> 14.4 <SEP> 17.5 <SEP> 16.2 <SEP> 10.5
<tb> Phosphate <SEP> of <SEP> lauryl <SEP> (KL <SEP> 340) <SEP> 33.3 <SEP> - <SEP> 25 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP > - <SEP> - <SEP> 19.5 <SEP> 8.8 <SEP> 19.5
<tb> Phosphate <SEP> of oleyl <SEP> (KO <SEP> 380) <SEP> - <SEP> 30 <SEP> - <SEP> 23 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP > - <SEP> - <SEP> - <SEP>
Phosphate <SEP> of alkyl <SEP> phenol <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 16.1 <SEP> 16.1 <SEP> 15.9 <SEP> 15, 9 <SEP> - <SEP> 8.8 <SEP>
<SEP> ethoxylated
<tb> Monoammonium Phosphate <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <September>
<tb>% <SEP> nitrogen <SEP> 5.2 <SEP> 5.45 <SEP> 6.44 <SEP> 6.72 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP > 7.4 <SEP> - <SEP>
Ratio <SEP> nitrogen / acid <SEP> oleic <SEP> 0.117 <SEP> 0.117 <SEP> 0.175 <SEP> 0.175 <SEP> 0.23 <SEP> 0.29 <SEP> 0.35 <SEP> 0, 31 <SEP> 0.26 <SEP> 0.26 <SEP> 0.26
<tb> Ratio <SEP> phosphorus / nitrogen <SEP> 0.154 <SEP> 0.064 <SEP> 0.09 <SEP> 0.049 <SEP> 0.099 <SEP> 0.09 <SEP> 0.086 <SEP> 0.063 <SEP> 0.064 <SEP > - <SEP>
<tb> Domain <SEP> of <SEP> Stability <SEP> C <SEP> 10-44 <SEP> 10-46 <SEP> 1-44 <SEP> 0-44 <SEP> 0-40 <SEP> 0 -47 <SEP> 12-57 <SEP> 0-40 <SEP> 0-36 <SEP> 0-42 <SEP> 0-45
<tb> Viscosity <SEP> in <SEP> cps <SEP> to <SEP> 20 C <SEP> 1200 <SEP> 2000 <SEP> 167 <SEP> 265 <SEP> 203 <SEP> 197 <SEP> 141 <SEP> 98 <SEP> 61 <SEP> - <SEP>
EXAMPLES 12 to 16
Microemulsions were prepared with 33% lauryl phosphate; the lipomiscible liquid is oleic acid whose amount is equal to twice the aqueous solution of urea and phosphate. The percent of urea in the aqueous phase was varied. The results below give the maximum temperature at which the microemulsion is still stable.

% d'urée dans la Limite supérieure de
phase aqueuse Température OC
22,2 36
25 32
33 38
50 35
56 Pas de microémulsion
Ces résultats montrent que des microémulsions pratiquement viables, stables jusqu'environ 360 C, peuvent etre obtenues avec des concentrations en urée allant jusqu'à 50 %, mais non pas au-delà.% urea in the upper limit of
OC aqueous phase
22.2 36
25 32
33 38
50 35
56 No microemulsion
These results show that substantially viable microemulsions, stable up to about 360 ° C., can be obtained with urea concentrations of up to 50%, but not beyond.

EXEMPLES 17 à 19
Avec une solution aqueuse à 50 % d'urée et l'addition de phosphate d'oléyle renfermant 30 % de mono-éthyl-éther de l'éthylène glycol, on a préparé trois microémulsions renfermant des proportions variables d'acide oléique. Voici les domaines de stabilité de ces produits.EXAMPLES 17-19
With a 50% aqueous solution of urea and the addition of oleyl phosphate containing 30% ethylene glycol mono-ethyl ether, three microemulsions containing varying proportions of oleic acid were prepared. Here are the areas of stability of these products.

Rapport pondéral Tensioactif Domaine de solution d'urée/acide oléique (Phosphate d'oléyle) stabilité OC
0,5 25,3 0-65
0,625 24,2 0-59
0,75 26,7 Ogel-64
Il en résulte qu'au delà du rapport solution aqueuse/acide oléique d'environ 0,65, et pour une quantité fixée de mono-éthyl-éther de l'éthy- lène glycol de 30 %, la microémulsion est difficile à utiliser, puisqu'elle tend à se gélifier ; par contre, au-dessous de ce rapport, on constate une excellente stabilité.Weight ratio Surfactant Area of solution of urea / oleic acid (Oleyl phosphate) stability OC
0.5 25.3 0-65
0.625 24.2 0-59
0.75 26.7 Ogel-64
As a result, beyond the ratio aqueous solution / oleic acid of about 0.65, and for a fixed amount of ethylene glycol mono-ethyl ether of 30%, the microemulsion is difficult to use, since it tends to gel; on the other hand, below this ratio, there is excellent stability.

DEGRADATION DES HYDROCARBURES DU PETROLE
EXEMPLE 20
Dans un fermenteur de 50 litres, on introduit 30 1 d'eau de mer sté rilisée à 1200C pendant 2 heures. Sur la surface de cette eau de mer, on répand 30 ml de pétrole brut de 340 API, contenant 75 % d'hydrocarbures saturés et 25 % d'aromatiques. La couche de pétrole a une épaisseur de 0,5 mm. Sur cette couche, on pulvérise 6 ml d'une des microémulsions des exemples précédents. Le milieu est ensuite ensemencé avec des germes provenant de l'eau de mer ; ces germes sont obtenus par culture pendant 24 h sur une solution aqueuse de glucose ; ils contiennent en majeure partie des Pseudomonas.DEGRADATION OF PETROLEUM HYDROCARBONS
EXAMPLE 20
In a 50 liter fermenter, 30 liters of sterilized sea water are introduced at 1200 ° C. for 2 hours. On the surface of this seawater is poured 30 ml of crude oil of 340 API, containing 75% of saturated hydrocarbons and 25% of aromatics. The oil layer has a thickness of 0.5 mm. On this layer, 6 ml of one of the microemulsions of the previous examples is sprayed. The medium is then seeded with seeds from seawater; these seeds are obtained by culture for 24 hours on an aqueous glucose solution; they contain mostly Pseudomonas.

Après cette inoculation, on effectue la numération des germes dans des prélèvements de pétrole : on trouve ainsi 2,5 x 103 à 4 x 104 germes par ml. After this inoculation, the count of germs is carried out in petroleum samples: thus 2.5 × 10 3 to 4 × 10 4 seeds per ml are found.

On procède alors à la culture aérobie, en agitant le contenu du fermenteur avec un agitateur tournant à 400 t/mn, pendant que 120 litres d'air stérilisé sont soufflés, par heure ; cette aération correspond sensiblement à celle qui a lieu naturellement en mer. The aerobic culture is then carried out, stirring the contents of the fermenter with a stirrer rotating at 400 rpm, while 120 liters of sterilized air are blown, per hour; this aeration corresponds substantially to that which takes place naturally at sea.

Après 48 h, une nouvelle numération est effectuée : ses résultats sont indiqués plus bas. After 48 hours, a new count is made: its results are indicated below.

Après 7 jours, on détermine le taux de dégradation du pétrole, par extraction des hydrocarbures résiduels avec du CCl4 et mesure à 1 'infra- rouge. After 7 days, the rate of oil degradation was determined by extracting the residual hydrocarbons with CCl 4 and measuring at 1 infrared.

Voici les résultats obtenus avec les microémulsions des exemples 1, 2, 3, 10 et 11. Here are the results obtained with the microemulsions of Examples 1, 2, 3, 10 and 11.

Microémulsion Germes au Cermes après Taux de dégradàtion
de départ 48 h
O
Ex.1 2,5*10@ 2,5*10@ 83 %
2 2*104 9,5*108 90 %
4 8 90 %
3 1,5x10 2,5x108
10 4,5*10@ 2,5*10@ 86 %
11 1,5*103 7,5*107 92 %
EXEMPLE 21
On réalise un essai selon le même mode opératoire décrit dans l'exemple 20, mais on introduit dans le fermenteur une eau de mer non stérilisée, et le milieu n'est pas ensemencé par des bactéries supplémentaires.Microemulsion Germs with Cermes after Degradation Rate
48 hours
O
Ex.1 2.5 * 10 @ 2.5 * 10 @ 83%
2 2 * 104 9.5 * 108 90%
4 8 90%
3 1.5x10 2.5x108
10 4.5 * 10 @ 2.5 * 10 @ 86%
11 1.5 * 103 7.5 * 107 92%
EXAMPLE 21
An experiment is carried out according to the same procedure described in Example 20, but non-sterilized seawater is introduced into the fermenter, and the medium is not inoculated with additional bacteria.

Les résultats sont les suivants
Microémulsion Germes au Germes après Taux de dégradation
de départ 48 h
11 2*103 5,5*107 82%
EXEMPLE 22
On réalise un essai selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 20, mais on remplace l'eau de mer par une eau naturelle dans laquelle on rajoute les différents constituants minéraux de l'eau de mer ainsi que 30 ppm, oligoéléments tels que Fer, magnésium, potassium. On pulvérise 6 ml de la microémulsion n) 11, et on ensemence le milieu avec une culture de bactéries.The results are as follows
Microemulsion Sprout Germs after Degradation Rate
48 hours
11 2 * 103 5.5 * 107 82%
EXAMPLE 22
An experiment is carried out according to the procedure described in Example 20, but the seawater is replaced by a natural water in which the various mineral constituents of the sea water are added, as well as 30 ppm, trace elements such as iron. , magnesium, potassium. 6 ml of microemulsion n) 11 are sprayed, and the medium is inoculated with a culture of bacteria.

Après 7 jours on détermine le taux de dégradation du pétrole, par extraction des hydrocarbures résiduels avec du CCl4, et mesure à 1 'infra- rouge. After 7 days, the oil degradation rate was determined by extracting the residual hydrocarbons with CCl 4 and measuring at 1 infrared.

Le taux de dégradation est de 90 Olo.  The degradation rate is 90 Olo.

Claims (14)

REVISNDTC.ATIONSREVISNDTC.ATIONS 1.- Procédé de culture de microorganismes dans un milieu comprenant une matière hydrophobe, par l'emploi de substances nutritives en solution aqueuse, caractérisé en ce que cette solution est microémulsionnée dans un liquide non miscible à l'eau, et la microémulsion, ainsi formée, est introduite dans ledit milieu contenant des germes des microorganismes à cultiver. 1. A process for culturing microorganisms in a medium comprising a hydrophobic material, by the use of nutrients in aqueous solution, characterized in that this solution is microemulsified in a water immiscible liquid, and the microemulsion, and formed, is introduced into said medium containing germs microorganisms to be cultivated. 2.- Procédé suivant la revendication 1, dans lequel la solution nutritive contient des composés hydrosolubles de l'azote et des composés hydrosolubles du phosphore, caractérisé en ce qu'on choisit, pour le liquide non miscible à l'eau, un liquide lipomiscible, renfermant des composés du carbone assimilables par les microorganismes concernés. 2. A process according to claim 1, wherein the nutrient solution contains water-soluble compounds of nitrogen and water-soluble phosphorus compounds, characterized in that a lipomiscible liquid is selected for the water immiscible liquid. , containing assimilable carbon compounds by the microorganisms concerned. 3.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les germes des microorganismes à cultiver préexistent dans le milieu hydrophobe dans lequel est introduite la solution microémulsionnée. 3. A process according to claim 1, characterized in that the germs of the microorganisms to be cultured pre-exist in the hydrophobic medium into which the microemulsified solution is introduced. 4.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les germes des microorganismes à cultiver, sont introduits sous forme d'une souche cultivée préalablement avec la solution micro émulsionnée dans le milieu hydrophobe. 4. A process according to claim 1, characterized in that the germs of the microorganisms to be cultured are introduced in the form of a strain previously cultured with the microemulsified solution in the hydrophobic medium. 5.- Microémulsion pour l'apport de substances nutritives à une culture de microorganismes, caractérisée en ce que sa phase interne est constituée par une solution aqueuse d'un composé de l'azote et d'un composé du phosphore utilisables par les microorganismes, tandis que la phase externe est un liquide organique, non miscible à l'eau, de préférence lipomiscible. 5. Microemulsion for the supply of nutrients to a culture of microorganisms, characterized in that its internal phase is constituted by an aqueous solution of a compound of nitrogen and a phosphorus compound that can be used by the microorganisms, while the outer phase is an organic liquid, immiscible with water, preferably lipomiscible. 6.- ijlicroemulsion suivant la revendication 5, dont la phase externe n'est pas utilisable, ou difficillement utilisable, par les microorganismes caractérisée en ce qu'une source hydrosoluble de carbone assimilable est ajoutée à la solution nutritive. 6. The microemulsion according to claim 5, wherein the external phase is not usable, or difficult to use, by microorganisms characterized in that a water soluble source of assimilable carbon is added to the nutrient solution. 7.- Microémulsion suivant la revendication 5 ou 6, caractérisée en ce que le composé de l'azote est choisi parmi les substances capables de jouer le rôle d'un co-tensioactif pour la formation de la microémulsion. 7. Microemulsion according to claim 5 or 6, characterized in that the nitrogen compound is selected from substances capable of acting as a co-surfactant for the formation of the microemulsion. 8.- Microémulsion suivant une des revendications 5 à 7, caractérisée en ce que le composé du phosphore est choisi parmi les tensioactifs renfermant du phosphore dans leur molécule.  8. Microemulsion according to one of claims 5 to 7, characterized in that the phosphorus compound is selected from surfactants containing phosphorus in their molecule. 9.- Microémulsion suivant une des revendications 5 à 8, caractérisée en ce que le composé de l'azote est l'urée, celui du phosphore est un ester phosphorique tensioactif d'alkyle ou d'alkényle, le rapport pondéral P/N étant de 0,02 à 0,2, et, de préférence, 0,05 à 0,15. 9. Microemulsion according to one of claims 5 to 8, characterized in that the nitrogen compound is urea, the phosphorus is a surfactant phosphoric ester of alkyl or alkenyl, the weight ratio P / N being from 0.02 to 0.2, and preferably from 0.05 to 0.15. 10.- Microémulsionsuivant une des revendications 5 à 9, caractérisée en ce que le liquide non miscible à l'eau, formant la phase externe, est un acide gras, un ester d'acide gras ou un alcool gras, en particulier une huile végétale ou animale. 10. Microemulsion according to one of claims 5 to 9, characterized in that the water-immiscible liquid, forming the external phase, is a fatty acid, a fatty acid ester or a fatty alcohol, in particular a vegetable oil. or animal. 11.- Microémulsion suivant une des revendications 5 à 10, caractérisée en ce que sa viscosité est abaissée par l'adjonction d'un diluant, de préférence un alcool, notamment en C6 à C12, d'un éther ou d'un ester de polyol, en particulier de glycol. 11. Microemulsion according to one of claims 5 to 10, characterized in that its viscosity is lowered by the addition of a diluent, preferably an alcohol, especially C6 to C12, an ether or an ester of polyol, in particular glycol. 12.- Microémulsion suivant une des revendications 5 à 11, caractérisée en ce qu'elle contient des oligoéléments, en particulier des sels de 12. Microemulsion according to one of claims 5 to 11, characterized in that it contains trace elements, in particular salts of Fe, Mg, K.Fe, Mg, K. 13.- Application de la microémulsion suivant une des revendications 5 à 12, aux opérations mettant en oeuvre la culture de microorganismes, caractérisée en ce que l'apport des substances nutritives au microorganismes est effectuée sous la forme de cette microémulsion. 13.- Application of the microemulsion according to one of claims 5 to 12, the operations involving the cultivation of microorganisms, characterized in that the supply of nutrients to the microorganisms is carried out in the form of this microemulsion. 14.- Application suivant la revendication 13, caractérisée en ce que l'opération consiste à dégrader des hydrocarbures recouvrant un plan d'eau ou de sol.  14.- Application according to claim 13, characterized in that the operation consists in degrading hydrocarbons covering a body of water or soil.
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