FI95082B

FI95082B - Förfarande för faställande av närvaro av en ytantigen, en trombocytcell

Info

Publication number: FI95082B
Application number: FI883585A
Authority: FI
Inventors: Robert Mcmillan
Original assignee: Scripps Clinic Res
Priority date: 1986-12-01
Filing date: 1988-07-29
Publication date: 1995-08-31
Also published as: FI95082C; DK426588A; JP2803824B2; DE3751331T2; DE3751331D1; NO172910B; DK173838B1; NO883367L; US5176998A; EP0290595A1; AU594554B2; ATE123341T1; FI883585A; US5336597A; FI883585A0; DK426588D0; AU1087688A; EP0290595B1; NO883367D0; EP0290595A4

Claims

1. Förfarande for fastställande av närvaro av en ytantigen i en trombocytcell, kännetecknat av att det omfattar följan-de steg: a) man ästadkommer ett prov av omarkerade trombocyter, som 20 skall analyseras, varvid alla trombocyter som innehäller en ytantigen att detekteras har ett immunkomplex som innehäller en antikropp mot nämnda antigen i immunreaktion med denna; b) man loser provets trombocyter för att producera en cel-läterstod, och da nämnda immunkomplex var närvarande i pro- 25 vet, ett upplöst immunkomplex; och c) närvaro av nämnda upplösta immunkomplex analyseras fäs- tat vid den fasta bärarfasen.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att det 30 vidare omfattar följande steg: i) före steg a) blandas trombocyterna med en antikropp som förmär immunreagera med trombocytcellens ytantigen för att bilda en reaktionsblandning som sensibiliserar trombocytcel-lerna, 35 ii) reaktionsblandningen som sensibiliserar trombocytceller uppehälls tillräckligt länge för att bilda ett immunkomplex, som innehäller nämnda antigen och nämnda antikropp, varvid ett trombocytprov användbart under punkt a) ästadkoms. 48 9 5 0 8 2

3. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att antikropparna mot nämnda immunkomplex är autoantikroppar.

4. Forfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att 5 autoantikropparna är riktade mot trombocyternas glykopro- tein-Ilb/IIIa-komplex eller glykoprotein lb.

5. Forfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att trombocyterna härrör frän en första person och antikropparna 10 är alloantikroppar frän en andra person.

6. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att antikropparna mot nämnda immunkomplex är riktade mot en hu-vudsaklig kömpiexantigen kompatibel med vävnaderna. 15

7. Förfarande enligt patentkrav 6, kännetecknat av att den huvudsakliga komplexantigen som är kompatibel med vävnaderna är en HLA-antigen. 20

8. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att det vidare omfattar följande steg: i) separation av celläterstoder frän det eventuella lösta immunkomplexet i steg b), ii) anslutning av nämnda separerade, närvarande lösta im- 25 munkomplex vid den fasta bäraren för att bilda ett bundet ,: immunkomplex, iii) därefter analys av förekomsten av nämnda immunkomplex som immunkomplex bundet vid den fasta bäraren. 30

9. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att trombocyterna i steg i) kommer frän en eventuellt anländande givare och antikroppen finns i patientens serum eller plasma, varvid förfarandet används för att analysera trombocyternas kompatibilitet med en eventuellt anländande givare 35 och patienten.

10. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att an-*. tikroppen i steg i) reagerar med en antigen-epitop, som är „ 95082 gemensam for väsentligt hela den grupp som skall sokas for trombocyternas ytantigen, varvid förfarandet används för att typifiera celler för att fastställa närvaro av en grupp yt-antigener i en cell. 5

11. Förfarande enligt patentkrav 10, kännetecknat av att nämnda grupper av ytantigener i cellen är HLA-antigener.

12. Förfarande enligt patentkrav 1 för att analysera ett 10 ytantigen-antikroppkomplex i ett trombocytprov, kannetecknat av att det omfattar följande steg: a) upplösning av trombocytprovet för att bilda en vatten-haltig blandning innehällande ett upplöst ytantigen-anti- 15 kroppkomplex i trombocyter, b) bildande av en bindande reaktionsblandning genom att blanda nämnda vattenhaltiga blandning med en fast bärare som förmär immunreagera med nämnda ytantigen-antikroppkomplex i 20 trombocyter, c) uppehällande av nämnda bindande reaktionsblandning tillräckligt länge för att den fasta bäraren skall immun-reagera med det eventuellt förekommande ytantigen-antikropp- 25 komplexet i trombocyter för att bilda en immunreaktionspro- • : dukt i fast fas, varvid en fast bärare bildas, d) bildande av en markerande reaktionsblandning genom att blanda den bibehällna fasta bäraren med en markerad anti- 30 kroppmolekyl som förmär immunreagera med nämnda antigen-an- tikroppkomplex av immunreaktionsprodukten i den fasta fasen, e) uppehällande av nämnda markerande reaktionsblandning tillräckligt länge för att den markerade antikroppmolekylen 25 skall immunreagera med den eventuella immunreaktionsprodukten i den fasta fasen som bildats i steg c) för att bilda ett markerat komplex i den fasta fasen, 50 95082 f) fastställande av närvaro av det eventuella markerade komplexet i fast fas som bildats i steg e), och sälunda fastställande av ett eventuell ytantigen-antikroppkomplex i nämnda trombocytprov. 5

13. Förfarande för analys av ett trombocytprov för fastställande av en ytantigen i trombocyterna, kännetecknat av att det omfattar följande steg: 10 a) bildande av en reaktionsblandning som sensibiliserar trombocyter genom att blanda ett trombocytprov med en anti-kroppmolekyl som förmär immunreagera med ytantigen i trombocyterna för att bilda ett trombocyt-immunkomplex, 15 b) uppehällande av nämnda sensibiliserade reaktionsblandning tillräckligt länge för att bilda nämnda trombocytimmun-komplex, varvid antikroppssensibiliserade trombocyter bil-das, 20 c) dekomposition av nämnda sensibiliserade trombocyter för att erhälla en vattenhaltig blandning innehällande ett upp-löst trombocytimmunkomplex, da detta immunkomplex bildats i steg b), 25 d) bildande av en fästande reaktionsblandning genom att blanda nämnda vattenhaltiga blandning med en fast bärare som förmär immunreagera med nämnda lösta trombocyt-immunkomplex, e) uppehällande av nämnda fästande reaktionsblandning 30 tillräckligt länge för att den fasta bäraren skall immunreagera med ett eventuellt närvarande upplöst trombocytim-: munkomplex, sä att en immunreaktionsprodukt i fast fas upp- kommer, vilken ätgärd ästadkommer en bestäende fast bärare, 35 f) bildande av en markerande reaktionsblandning genom att blanda den fasta bäraren med en markerad antikroppmolekyl som förmär immunreagera med nämnda trombocyt-immunkomplex av I immunreaktionsprodukten i fast fas, li 95082 g) uppehällande av nämnda markerande reaktionsblandning tillräckligt länge för att nämnda markerade antikroppmolekyl skall immunreagera med den eventuella immunreaktionsproduk-ten i fast fas som bildats i steg e), sä att ett markerat 5 fastfaskomplex bildas, h) fastställande av förekomst av ett eventuellt markerat fastfaskomplex som bildats i steg g), och sälunda fastställande av förekomst av en eventuell ytantigen i nämnda trom- 10 bocytprov. • I