FI92602B - Menetelmä -2',3'-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi entsymaattisella deaminoinnilla - Google Patents
Menetelmä -2',3'-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi entsymaattisella deaminoinnilla Download PDFInfo
- Publication number
- FI92602B FI92602B FI883339A FI883339A FI92602B FI 92602 B FI92602 B FI 92602B FI 883339 A FI883339 A FI 883339A FI 883339 A FI883339 A FI 883339A FI 92602 B FI92602 B FI 92602B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- formula
- protecting group
- hydroxy protecting
- compound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Description
92602
Menetelmä β-2',3'-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi ent-symaattisella deaminoinnilla
Esillä oleva keksintö käsittelee parannettua mene-5 telmää β-2*,3*-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi.
Tyypillisesti 2',3'-dideoksisytidiini (ddC) syntetisoidaan 2'-deoksisytidiinistä (Samukov, V.V.; Ofitserov, V.I. Bioorg. Khim. 1983, 9, 132. Prisbe, E.J.; Martin, J.C. synth. Commun. 1985, 5 15, 401) lähtien. Tämä on 10 yleinen menetelmä syntetisoida 2,31-dideoksinukleosideja. Tämän synteesin tarvitsemat lähtöaineet ovat kuitenkin erittäin kalliita eikä niitä ole saatavissa irtotavarana. Tähän deoksygenointiin tarvittavat reagenssit ovat lisäksi melko kalliita.
15 US-patentti 028 817, jätetty 20.3.1987, esittää menetelmän, jolla tuotetaan 2',3'-dideoksinukleosideja, joilla on seuraava kaava 20 R0~u°y jossa B on puriini- tai pyrimidiiniemäs ja R on H tai hyd-: 25 roksisuojaryhmä, ja menetelmään kuuluvat vaiheet (a) y-karboksi-^butyrolaktonin muuttaminen 5-O-hydroksisuoja-ryhmä-metyyli-^-butyrolaktoniksi, (b) muutetaan välituote vaiheesta (a) 5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-2’,3'-dideok-sipentofuranoosiksi, (c) muutetaan vaiheen (b) välituote 30 l-0-aktivointiryhmä-5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-2',3 * -dideoksipentofuranoosiksi, (d) muutetaan vaiheen (c) välituote 1-poistuva ryhmä-5-0-hydroksisuojaryhmä-2',3'-dideoksipentofuranoosiksi , (e) vaiheen (d) välituote reagoi aktivoidun puriini- tai pyrimidiiniemäksen kanssa, ja (f) 35 otetaan talteen dideoksinukleosidi vaiheesta (e). Saatava 2 92602 tuote sisältää seoksen, jossa on B- ja α-anomeerejä, jotka voidaan erottaa käyttämällä kromatografiaa ja ki-teyttämismenetelmiä, jotka ovat hyvin tunnettuja alalla, jota tämä keksintö koskee.
5 Tällä alueella on tarve parantaa menetelmää, jotta yleisesti aktiivinen tai aktiivisempi 2 *,3'-dideoksinuk-leosidien B-anomeeri voidaan saada selektiivisesti ilman kalliita ja aikaavievää kromatografisia tai kiteyttämällä tapahtuvia B- ja a-anomeerien erottamisia.
10 Yhteenvetona, tämä keksintö käsittää menetelmän,
jolla selektiivisesti tuotetaan B-2’,3'-dideoksi-inosii-nia, jolla on kaava A
15 ao-v°J
jossa I on puriiniemäs, hypoksantiini, ja jossa tuotetaan 20 2',3’-dideoksiadenosiini, jolle sitten suoritetaan entsy- maattinen deaminointi ja adenosiiniemäksen korvaaminen inosiinilla.
Keksinnölle on tunnusomaista, että se käsittää seu-raavat vaiheet: 25 a) muutetaan ^-karboksi-^-butyrolaktoni, jolla on
kaava B
HOOC
k°r 30 \_/ (B)
5-O-hydroksi-suojaryhmä-metyyli-y^butyrolaktoniksi, jolla on kaava C
35 92602 3 RO—i o ^Cr 5 jossa R on hydroksisuojaryhmä, saattamalla kaavan B mukainen yhdiste reagoimaan karboksyyliryhmäpelkistimen kanssa ja sitten saattamalla saatu hydroksimetyyliryhmä reagoi- 10 maan hydroksisuojaryhmäreagenssin kanssa;
b) muutetaan vaiheen (a) mukainen välituote, jolla on kaava C, 5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-2,3-dideoksi-pentofuranoosiksi, jolla on kaava D
15 R0—I / 0 \ 20 jossa R on hydroksisuojaryhmä, saattamalla kaavan C mukainen yhdiste reagoimaan karbonyyliryhmäpelkistimen kanssa;
c) muutetaan vaiheen (b) mukainen välituote, jolla on kaava D, 1-0-aktivoiva ryhmä-5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-2,3-dideoksipentofuranoosiksi, jolla on kaava E
25
RO -1 (N
\Y~0R
30 jossa R on hydroksisuojaryhmä ja A on O-aktivoiva ryhmä, joka on alkyylikarbonyyliryhmä, saattamalla kaavan D mukainen yhdisteen reagoimaan asyloivan aineen kanssa, joka vastaa ryhmää A edellä; 35 d) muutetaan välituote vaiheesta (c), kaavan E mu kainen yhdiste, saattamalla se reagoimaan kaavan MX mukai- 4 92602
sen yhdisteen kanssa 1-poistuva ryhmä-5-O-hydroksisuoja-ryhmä-metyyli-2,3-dideoksipentofuranoosiksi, jolla on kaava F
5 RO— I v 10 jossa R on hydroksisuojaryhmä ja X on poistuva ryhmä, joka on Cl tai Br, saattamalla kaavan E mukainen yhdiste reagoimaan kaavan MX mukaisen yhdisteen kanssa, jossa M on (CH3)3Si; e) saatetaan vaiheen (d) mukainen, kaavan F mukai-15 nen välituote reagoimaan aktivoidun adeniinijohdannaisen kanssa, jossa emäs, adeniini, on aktivoitu antamalla kyseisen emäksen ytimen C-6-aminoryhmän ja N-9 typpiatomin reagoida aktivoivan yhdisteen kanssa, joka on silyloiva tai asyloiva tai bentsoyloiva aine siten, että läsnä on 20 Brönsted-happo tai Lewis-happo ja liuotin, joka on polaarinen tai ei-polaarinen liuotin; ja f) suoritetaan vaiheen (e) välituotteelle kemiallinen reaktio, joka pystyy korvaamaan 5-0-hydroksisuoja-ryhmän, jotta saadaan B- ja a-2',3'-dideoksiadenosiinin 25 anomeerinen seos; « g) saatetaan β- ja a-2',3'-dideoksiadenosiinin seos vaiheesta (f) kosketukseen entsyymin, adenosiinideaminaa-sin kanssa, jotta puriini- (adenosiini) rengassysteemin 6-asemassa oleva aminoryhmä korvautuisi selektiivisesti B- 30 2’,3'-dideoksiadenosiinissa hydroksyyliryhmällä, jolloin adenosiini muuttuu inosiiniksi; ja h) otetaan talteen dideoksi-inosiini edellä olevasta vaiheesta (g).
Seuraavassa esitettävässä kaaviossa I esitetään 35 tämän keksinnön mukainen menetelmä valmistaa B-2',3'-di- 92602 5 deoksi-inosiinia lähtien 5-O-hydroksi-suojaryhmämetyyli-y-butyrolaktonista.
Kaavio I
5 ,,O~^0y «»»* ,,ογγ°Η i ? β,0-^/°\^ΟΑί B'SiMt, *
ίο _ \ / - ,ΙΟπ/VI
αϊ,ο silyyliadeniini 7 ? 1.1. Nf 4a >· ^ ~£> 4b 20 ?* apa____ -Töl ~^j·* A 6 3b
ok OH
* 25 NH, i" “OO '·
Kaaviokuvassa I ja todellisissa työesimerkeissä 30 suoritetaan vaiheet (d) ja (e) kätevästi ja edullisemmin yhdessä astiassa lisäten peräkkäin halogenointiainetta ja aktivoitua adeniinijohdannaista l-O-asetyyli-5-O-bentsyy- li-2,3-pentofuranoosiin, jolla on kaava 3.
Lähtöaine Y-karboksi-^-butyrolaktoni voidaan edul-35 lisesti saadaglutaamihaposta käyttäen tavallisia kemialli- 6 92602 sessa kirjallisuudessa (Taniguchi, M.; Koga, K.; Yamada, S. Tetrahedron 1974, 30, 3547) käytettäviä menetelmiä.
Kemiallisten reaktioiden yhdistelmällä tuotetaan sopivasti suljettua 2,3-dideoksipentafuranoosia, 3. Tämä 5 yhdiste ja sen johdannaiset ovat tuttuja kirjallisuudesta.
Siten lähtöaineen y~karboksi-|*-butyrolaktonin muuttaminen 5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-butyrolaktoniksi, vaihe (a), vaatii ^-karboksiryhmän pelkistämisen hydroksi-metyyliryhmäksi seurauksena reaktiosta hydroksisuojaryhmä-10 reagenssin kanssa. Esimerkiksi J^-karboksiryhmän pelkistäminen ja saatavan ^-hydroksimetyy1iryhmän suojaaminen bentsyyliryhmän (PhCH2-) tai bentsoyyliryhmän [PhC(O)-] avulla, vaihe (a), suoritettiin kaavan I lähtö-aineen peräkkäisellä reaktiolla BH3SMe2:n, PhCH2Br3,4:n tai PhC(0)Cl:n 15 kanssa. Bentsoyyliryhmän käyttäminen on edullisempaa kuin bentsyyliryhmän käyttäminen, koska seuraavan bentsoyyli-suojaryhmän poistaminen on havaittu tapahtuvan helpommin ja siten saadaan parempia tuotteen saantoja.
Primäärinen alkoholifunktionaalinen ryhmä voidaan 20 suojata eetterinä, kuten trialkyyli- tai dialkyyliaryyli-tai diaryylialkyyli- tai triaryylisilyyli-, substituoimat-tomana tai substituoituna bentsyyli-, substituoimattomana tai substituoituna alkyyli- tai allyylieetterinä tai esterinä, kuten bentsoyyli-, mesitoyyli-, pivaloyyli-, substi-25 tuoimattomana tai substituoituna asetyyli- tai karbonaat-tiesterinä [Katso: "Protective Groups in Organic Synthesis," T.W. Greene, John Wiley, New York (1981) suojaryh-mien tarkempaa esittelyä varten ja niitä koskevan kemian esittämiseksi]. Vielä edullisemmassa suoritusmuodossa käy-30 tettiin hydroksisuojaryhmänä primääriselle alkoholille asemassa 5-bentsoyyliryhmää, koska kuten edellä esitettiin seuraavana suoritettavan bentsoyylisuojaryhmän poistamisen on havaittu tapahtuvan helpommin ja sen avulla saadaan suurempi tuotteen saanto. 5-O-bentsoyylisuojaryhmä voi-35 daan helposti korvata hydrolyysillä emäksisissä olosuh- 92602 7 •teissä esimerkiksi käsittelemällä metanolilla, joka on kyllästetty ammoniakilla.
5-O-hydroksisuo j aryhmä—butyrolaktonin muuttaminen 5-0-hydroksi-suojaryhmä-2,3-dideoksipentaf uranoosiksi, 5 jolla on kaava 2 vaiheessa (b), suoritettiin antamalla välituotteen, jolla on kaava 1 reagoida NaH:n ja HC02Et:n kanssa ja sitten HCl:n kanssa (Spry, D. V.; Bhala, A. R. Heterocycles, 1985, 23, 1901).
Tämän alueen asiantuntijoille tulisi olla selvää, 10 että mitä tahansa pelkistävistä aineista voidaan käyttää suoritettaessa joko toista tai molempia vaiheista (a) ja (b) riippumattomasti (siis peräkkäin) tai samanaikaisesti. Muita käyttökelpoisia pelkistimiä BH3*SMe2:n ohella käytettäväksi toisessa tai molemmissa vaiheissa (a) ja (b) 15 kuten edellä esitetään, ovat [(CH3)2CHCH(CH3)2]BH (disiamyy-liboraani), NaBH4 ja LiCl tai A1C13 tai BH3, LiAlH4, LiAlH(0Me)3, LiAlH(O-t-Bu)3 ja vastaavat. Erityisen edullista on käyttää disiamyyliboraania vaiheessa (b) laktoni-rengas karbonyyliryhmän pelkistämisessä.
20 Vaihe c, jossa muutetaan kaavan 2 välituote väli tuotteeksi, jolla on kaava 3 ja jossa on O-aktivointiryh-mä C(1)-asemassa 2,3-dideoksipentafuranoosirengassystee-missä, suoritetaan millä tahansa reagenssilla, joka on tehokas muuttamaan tämän 1-hydroksiryhmän ryhmäksi, joka 25 voidaan helposti korvata Cl:llä tai Brrlla reaktiolla HCl:n tai HBr:n kanssa. Tällaisia ryhmiä, jotka voidaan helposti korvata, ovat O-aktivointiryhmät, joita ovat al-kyylikarbonyyli-, aryylikarbonyyli-, alkyylitiokarbonyy- li-, aryylitiokarbonyyli-, alkyylisulfonyyli-, aryylisul-30 fonyyli- ja karbonaattiryhmät, joissa alkyyliosa voi olla substituoimaton tai substituoitu C^-alkyyliryhmällä ja aryyliosa voi olla substituoimaton tai substituoitu fenyy-liryhmä ja jossa substituentti alkyyli- tai aryyliosissa voi olla 1-3 ryhmää valittuna halogeenista tai C1_3-alkok-35 siryhmistä. Vielä edullisemmin tämä aktivointiryhmä on 8 92602 vastaava (edellä olevan kanssa) asetoksi- tai bentsyloksi-ryhmä ja edullisimmin asetoksi. Vaihe (c) suoritettiin hyvin käyttäen etikka-anhydridi/pyridiinireagenssia.
Vaihe (d), jossa korvataan 1-O-aktivoiva ryhmä-5 funktionaalinen ryhmä poistuvalla ryhmällä, joka on Cl tai Br, voidaan suorittaa käsittelemällä 3 HCl:lla, HBr:lla tai halotrialkyylisilaanilla, jollaon kaava R3SiX, jossa R on alkyyli ja X on halogeeni, edullisemmin (CH3)3SiBr CH2Cl2:ssa matalassa lämpötilassa, jotta saadaan furano-10 syylihalogenideja, jotka esiintyvät liuoksessa anomeerien (a ja B) seoksena.
Tämän keksinnön mukaisen valmistusmenetelmän kohdassa (e) voi välituote, jolla on kaava F vaiheesta (d), reagoida sopivasti aktivoidun adenosiiniemäksen kanssa, 15 jolloin tällainen adenosiiniemäs on aktivoitu reaktiolla hyvin tunnettujen aktivointiaineiden kanssa, jotta saadaan silyloitu, asetyloitu tai bentsoyloitu emäs, sopivan polaarisen tai ei-polaarisen liuottimen läsnäollessa ja valinnaisesti siten, että läsnä on Lewis-happo, kuten esi-20 merkiksi boorihalogenidi, alumiinihalogenidi, titaanihalo-genidi, tina(IV)kloridi, sinkkihalogenidi, trimetyylisi-lyylibromidi, jodidi, triflaatti tai jokin muu hyvin tunnettu laji, jota käytetään glykosylointireaktioissa, tai siten, että läsnä on Bronsted-happo, kuten vetykloridi, 2‘5 -bromidi tai -jodidi. Erityisen käyttökelpoinen tässä vaiheessa (e) on silyloidun adenosiinin käyttäminen ei-polaaristen liuottimien, kuten esimerkiksi bentseenin, tolueenin, kloroformin, dikloorimetaanin, dikloorietaanin tai hiilitetrakloridin läsnäollessa. Käyttökelpoisten po-30 laaristen liuottimien esimerkkejä ovat esimerkiksi tetra-hydrofuraani ja dioksaani, sekä nitriilit, kuten asetonit-riili, dimetyyliformamidi ja dimetyylisulfoksidi. Esimerkin käyttökelpoisesta menetelmästä suorittaa vaihe (e) esittävät Brundidge et ai., US-patentti 4 625 020, jossa 35 esitetään silyloitujen pyrimidiinien liittäminen, jolloin hydroksi- ja aminoryhmien aktiivisia vetyjä suljetaan si- 92602 9 lyyliryhmillä, kuten trimetyylisilyyliryhmällä, käyttäen 2-deoksi-2-fluoriarabinofuranosyylihalogenidia.
Vaihtoehtoisesti toisessa tämän keksinnön mukaisessa suoritusmuodossa, kun vaiheesta (c) ryhmä "A" on ase-5 tyyli, voidaan vaiheen (c) välituotteen antaa reagoida aktivoidun adeniinijohdannaisen kanssa Lewis-hapon läsnäollessa kuten vaiheessa (e), jolloin saadaan 5-0-hydroksi-suoj aryhmä-2’,3’-dideoksiadenosiinivälituote ilman erillistä vaihetta (d).
10 Kuten edellä on mainittu vielä toisessa edullisem massa tämän keksinnön mukaisessa suoritusmuodossa kaavan 3 l-0-asetyyli-5-0-bentsoyyli-2,3-pentofuranoosi vaiheesta (c) yhdistettiin ensin bromitrimetyylisilaanin kanssa ja sitten bis-silyyliadeniinin kanssa, jolloin saatiin yhdes-15 sä vaiheessa ilman l-bromi-5-0-bentsoyyli-2,3-pentofura-noosivälituotteen erottamista vaiheesta (d) 5'-O-bentsoyyli-2 ', 3 ' -dideoksiadenosiinia tuotteena yhdistetyistä vaiheista (d) ja (e).
Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä 20 vaiheessa (f) suoritettiin 5'-O-bentsoyyli-2',3'-dideoksi-adenosiinille kemiallinen reaktio 5-0-suojaryhmän poistamiseksi. Tämän suojaryhmän sopivat poistomenetelmät ovat hyvin tunnettuja tä.män keksinnön alueella [kts. esimerkiksi: "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W.
: 25 Greene, John Wiley, New York, (1981), joka on mainittu edellä]. Kun suojaryhmä on bentsyyliryhmä, voidaan helposti poistaa katalyyttisesti hydraamalla (H2/PdCl2). Vielä edullisemmin käsiteltiin 5'-O-bentsoyyli-2’,3'-dideoksiadenosiini ammoniakilla kyllästetyllä metanolilla, jolloin 30 saatiin 2',3’-dideoksiadenosiini a- ja β-anomeerien seoksena.
Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä vaiheessa (g) yhdistettiin β- ja a-2',3'-dideoksiadenosiinien seos vaiheesta (f) entsyymin, adenosiinideaminaasin (ADA), joka 35 on eristetty vasikan pernasta, kanssa neutraalissa vesipi- 10 92602 toisessa väliaineessa (Secrist, J. A. et ai. J. Med. Chem. 1987, 30, 746). Tämä entsyymi katalysoi selektiivisesti B-2’, 3'-dideoksiadenosiinin deaminointia, jolloin saadaan kvantitatiivisesti B-2',3'-dideoksi-inosiinia. Vaikka 5 esillä olevassa esimerkissä käytettiin vasikan pernasta saatua adenosiinideaminaasia (ADA), uskotaan, että sopivia ovat kaikki adenosiiniaminohydrolaasivalmisteet ("deaminaasi", EC 3.5.4.4). Siten tämän keksinnön alueeseen kuuluu kaikkien adenosiiniaminohydrolaasivalmisteiden 10 (tai "deaminaasivalmisteiden”) käyttö, jotka pystyvät selektiivisesti deaminoimaan B-2',3'-dideoksiadenosiiniano-meerin. Siten sen lisäksi, että käytetään vapaata entsyymiä sopivassa väliaineessa, kuten tässä esitetyssä iner-tissä vesipitoisessa väliaineessa, voidaan käyttää entsyy-15 miä, ADA, joka on sidottu sopivaan kantajaan, kuten esi-merkiksi oksiraani-akryylipolymeerkantajaan Eupergit c (Rohm Pharma Gmb). ADA voidaan sitoa polymeeriin käyttäen konventionaalisia menetelmiä.
2',3'-dideoksi-inosiinituote otettiin edullisesti 20 talteen keräämällä reaktioseos vaiheesta (g), poistamalla liukenemattomat reagenssit ja lisäaineet suodattamalla Celiten läpi ja puhdistamalla saatu tuote pylväskromato-grafisesti esimerkiksi silikageelipylväällä käyttäen eluoinnissa 1 - 5-%:ista metanoliliuosta kloroformissa.
25 Käyttämällä entsyymiä, adenosiinideaminaasia esil lä olevan keksinnön menetelmän mukaisesti, saadaan se etu, että tuloksena saatavia anomeereja (a ja B) ei tarvitse erottaa käyttämällä kalliita ja aikaavieviä kromatografisia ja kiteyttämiseen perustuvia menetelmiä, jotka tähän 30 asti ovat olleet hyvin tunnettuja keksinnön alueella.
B-2',3'-dideoksi-inosiinianomeeri esitetään, koska se on aktiivinen anomeeri tai on ainakin aktiivisempi anti-viraalisena aineena kuin a-anomeeri.
Seuraavat esimerkit, joissa yhdisteet on numeroitu, 35 viitaten reaktiokaavioon I, esittelevät muutamia edustavia 92602 11 esillä olevan keksinnön mukaisia suoritusmuotoja ja niitä ei ole tarkoitettu rajoittamaan keksinnön aluetta. Kaikki osat ja prosentit ovat painoa kohti ja lämpötilat ovat Celsius-asteita, ellei toisin ole mainittu.
5 Esimerkki 1 (D)-5-0-bentsyyli-2,3-dldeokslpentofuranoosi (2) 200 ml 0,5 M disiamyyliboraanin THF-liuosta 0°C:ssa lisättiin tipoittain typen alla liuokseen, jossa oli 155,1 g (0,069 mol) (D)-5'-bentsoyylioksi-5-hydroksime-10 tyylibutyrolaktonia 1 50 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Pidettiin 20 minuuttia 0°C:ssa, jonka jälkeen reaktioseos kuumennettiin 22°C:seen. Reaktioseosta sekoitettiin 22°C:ssa 16 tuntia, sitten siihen lisättiin hitaasti 12 ml vettä ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen 30 minuuttia.
15 Reaktioseos jäähdytettiin 0°C:seen ja sitten lisättiin hitaasti 24 ml 30-%:ista vetyperoksidia säilyttäen pH välillä 7 - 8 IN NaOH:lla. Lisäämisen jälkeen reaktioseos haihdutettiin alipaineessa rotavaporissa 30°C:ssa, jolloin saatiin öljyinen jäännös. Tämä jaettiin 500 ml:aan dikloori-20 metaania ja 150 ml:aan vettä. Vesikerros uutettiin käyttäen 2 x 100 ml dikloorimetaania ja sitten yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin 50 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi. Saanto 15,3 g (100 %) 5-0-bentsoyyli-2,3-dideoksipentofu-: 25 ranoosia. XH-NMR vastasi rakennetta ja öljy käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa.
Esimerkki 2 l-0-asetyyli-5-0-bentsoyyll-2,3-dideoksipentofura-noosi (3) 30 Seosta, jossa oli 5-0-bentsoyyli-2,3-dideoksipento- furanoosia (15,3 g, 0,069 mol) 32 ml:ssa pyridiiniä ja 16 ml:ssa etikka-anhydrldia, sekoitettiin 22°C:ssa 4 tuntia ja laimennettiin sitten 500 ml:11a dikloorimetaania ja lisättiin 100 g jäitä. Tämän jälkeen reaktioseos pestiin 35 käyttäen 3 x 100 ml IN kloorivetyhappoa, 3 x 100 ml kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta ja 100 ml kyl- 92602 12 lästettyä suolaliuosta. Orgaaninen kerros kuivattiin nat-riumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin vaalean keltaista öljyä. Tämä voitiin käyttää sellaisenaan tai kromatografioida silikageelillä 35 - 60 % EtOAc/heksaanil-5 la. Saanto 15,9 g (87 %) l-0-asetyyli-5-0-bentsoyyli-2,3-dideoksipentofuranoosia. Sen NMR vastasi rakennetta.
Esimerkki 3 5'-O-bentsoyyli-21,31-dideoksiadenosiini (4) 1-O-asetyy1i-5-O-bentsoyy1i-2,3-pentofuranoosia 10 (0,522 g, 0,00198 mol) liuotettiin 5 ml:aan 1,2-dikloori- etaania. Tähän lisättiin 276 μΐ (1,2 ekv.) trimetyylisi-lyylibromidia. Tätä sekoitettiin 22°C:ssa 15 minuuttia ennen kuin siihen lisättiin 11,9 ml 0,2M bis-silyyliadenii-nin liuosta 1,2-dikloorietaanissa. Liuosta sekoitettiin 88 15 tuntia 22°C:ssa. Tämän jälkeen reaktio lopetettiin jäähdyttämällä 0°C:seen ja sitten seos kaadettiin 40 ml:aan kylmää kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta. Reaktioseos jaettiin käyttäen 200 ml dikloorimetaania ja 2 x 40 ml kylmää kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesi-20 liuosta ja 40 ml kyllästettyä suolaliuosta. Orgaaninen kerros kuivattiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin väritöntä öljyä, joka kromatografioitiin silikageelillä ja eluoitiin 8-%:isella metanolilla metyleenikloridissä. Fraktiot otettiin talteen ja näin saatiin 420 mg 5'-0-25 bentsoyyli-2',3'-dideoksiadenosiinia anomeerien seoksena (63 %).
Esimerkki 4 2',3*-dideoksi-inosiini (6) Tämä anomeerien seos (1,66 g) käsiteltiin käyttäen 30 170 ml ammoniakilla kyllästettyä metanolia. Tämä suljet tiin tiiviisti ja sitä sekoitettiin 18°C:ssa 48 tuntia.
TLC osoitti reaktion olevan täydellinen. Liuotin haihdutettiin ja korvattiin 170 ml:11a tuoretta ammoniakin meta-noliliuosta. 48 tunnin kuluttua osoitti TLC jälleen reak-35 tion olevan täydellinen. Siten liuotin haihdutettiin ja lisättiin etanolia (5 ml). Näin saatiin värittömiä kitei- « 92602 13 tä, jotka otettiin talteen ja pestiin käyttäen 5 ml 95-%:ista etanolia, jolloin saatiin 1,20 g (95 %) 2',3’-dideoksiadenosiinia 5a yhdessä sen α-anomeerin 5b kanssa 1:1-suhteessa ^-NMRilla. a + 8-2',3'-dideoksiadenosiini-5 seos liuotettiin 50 ml:aan deionisoitua vettä ja tähän liuokseen lisättiin 10 mg adenosiinideaminaasia (tyyppi II, Sigma; 9 yksikköä/mg -» 9 pmol/min). Liuosta sekoitettiin 20°C:ssa ja reaktiota seurattiin HPLCrlla. 2 tunnin 30 minuutin kuluttua lisättiin toiset 10 mg adenosiinideami-10 naasia. HPLC osoitti, että reaktio oli lähes täydellinen 3 tunnin kuluttua. Tämän jälkeen reaktioseos konsentroitiin (1-2 ml) 35°C:ssa, jolloin saatiin öljyä. Öljy otettiin talteen ja laimennettiin hitaasti käyttäen 2 x 1,5 ml:n annoksia metanolia, jolloin saatiin valkeita kiteitä. 15 15 minuutin kuluttua aine suodatettiin ja värittömät kiteet pestiin käyttäen 2 x 1,5 ml:n annoksia metanolia, jolloin saatiin 2',3'-dideoksi-inosiinia (120 mg, 48 %). Emäliuos käsiteltiin kuten edellä, jolloin saatiin vielä 29 mg (12 %) hyvälaatuista tuotetta, joka karakterisoitiin käyt-20 täen 1H-NMR:a. NMR-spektri vastasi rakennetta.
Claims (11)
1. Menetelmä, jolla selektiivisesti tuotetaan β-2',3'-dideoksi-inosiinia, joka vastaa kaavaa A 5 N N (A) HOCH,0 O tunnettu siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet: 15 a) muutetaan J^-karboksi-j^-butyrolaktoni, jolla on kaava B HOOC 20 \_/ (B)
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheissa (a) ja (b) käytettävä pelkistin on BH3 (B2H6), BH3SMe2, [ (CH3CHCH(CH3) ]2BH, NaBH4, NaBH4 ja joko LiCl tai A1C13 tai BF3, LiAlH4, LiAlH-(0Me)3 25 tai LiAlH(OBu-t)3
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (b) käytettävä pelkistin on [(CH3)2CHCH(CH3)]2BH
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-30 n e t t u siitä, että vaiheessa (a) käytettävä hydroksi- suojaryhmä on bentsoyyliryhmä.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheen (c) mukainen välituote reagoi (CH3)3SiBr:n kanssa, joka tällöin toimii kaavan MX mu- 35 kaisena yhdisteenä. 92602 17
5-O-hydroksi-suojaryhmä-metyyli-^-butyrolaktoniksi, jolla’ on kaava C 25 RO--» r\ xy 30 jossa R on hydroksisuojaryhmä, saattamalla kaavan B mukainen yhdiste reagoimaan karboksyyliryhmäpelkistimen kanssa ja sitten saattamalla saatu hydroksimetyyliryhmä reagoimaan hydroksisuojaryhmäreagenssin kanssa; b) muutetaan vaiheen (a) mukainen välituote, jolla 35 on kaava C, 5-0-hydroksisuojaryhmä-metyyli-2,3-dideoksi-pentofuranoosiksi, jolla on kaava D 92602 15 R0—I /0 \ >O~-0H 5 jossa R on hydroksisuojaryhmä, saattamalla kaavan C mukainen yhdiste reagoimaan karbonyyliryhmäpelkistimen kanssa; c) muutetaan vaiheen (b) mukainen välituote, jolla on kaava D, 1-0-aktivoiva ryhmä-5-0-hydroksisuojaryhmä- 10 metyyli-2,3-dideoksipentofuranoosiksi, jolla on kaava E RO -1 Q Ύ y^0A
15 N-' jossa R on hydroksisuojaryhmä ja A on O-aktivoiva ryhmä, joka on alkyylikarbonyyliryhmä, saattamalla kaavan D mukainen yhdisteen reagoimaan asyloivan aineen kanssa, joka 20 vastaa ryhmää A edellä; d) muutetaan välituote vaiheesta (c), kaavan E mukainen yhdiste, saattamalla se reagoimaan kaavan MX mukaisen yhdisteen kanssa 1-poistuva ryhmä-5-O-hydroksisuoja-ryhmä-metyyli-2,3-dideoksipentofuranoosiksi, jolla on kaa- • 25 va F • · RO-1 o ^ y ίΟ^ 30 jossa R on hydroksisuojaryhmä ja X on poistuva ryhmä, joka on Cl tai Br, saattamalla kaavan E mukainen yhdiste reagoimaan kaavan MX mukaisen yhdisteen kanssa, jossa M on 35 (CH3)3Si; 92602 16 e) saatetaan vaiheen (d) mukainen, kaavan F mukainen välituote reagoimaan aktivoidun adeniinijohdannaisen kanssa, jossa emäs, adeniini, on aktivoitu antamalla kyseisen emäksen ytimen C-6-aminoryhmän ja N-9 typpiatomin 5 reagoida aktivoivan yhdisteen kanssa, joka on silyloiva tai asyloiva tai bentsoyloiva aine siten, että läsnä on Brönsted-happo tai Lewis-happo ja liuotin, joka on polaarinen tai ei-polaarinen liuotin; ja f) suoritetaan vaiheen (e) välituotteelle kemial-10 linen reaktio, joka pystyy korvaamaan 5-O-hydroksisuoja- ryhmän, jotta saadaan β- ja a-2',3'-dideoksiadenosiinin anomeerinen seos; g) saatetaan β- ja a-2',3'-dideoksiadenosiinin seos vaiheesta (f) kosketukseen entsyymin, adenosiinideaminaa- 15 sin kanssa, jotta adenosiini-rengassysteemin 6-asemassa oleva aminoryhmä korvautuisi selektiivisesti B-2',3’-di-deoksiadenosiinissa hydroksyyliryhmällä, jolloin adeno-siini muuttuu inosiiniksi; ja h) otetaan talteen dideoksi-inosiini edellä ole- 20 vasta vaiheesta (g).
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (e) adenosiiniemäsyhdis-te, aktivoituna reaktiolla halotrialkyylisilaanin kanssa, tämän toimiessa silyloivana aineena, jossa halo on bromi 5 tai jodi, reagoi 1-poistuva ryhmä-5-0-suojaryhmä-2',3'- dideoksipentafuranoosivälituotteen kanssa, jolla on kaava F vaiheesta (d), jolloin saadaan 5'-0-hydroksi-suojaryhmä-2',3',-dideoksiadenosiinivälituote.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, t u n- 10. e t t u siitä, että reaktiovaihe (e) suoritetaan ei- polaarisessa liuottimessa, joka on CHC13, CH2C12, C1CH2-CH2C1 tai CC14.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktiot vaiheissa (d) ja (e) suo- 15 ritetaan yhdessä astiassa lisäten peräkkäin halogenoin-tiainetta ja aktivoitua adenosiinijohdannaista vaiheen (c) välituotteeseen.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että halogenointiaine on bromitrimetyy- 20 lisilaani ja aktivoitu adenosiinijohdannainen on bis-si-lyyliadeniini.
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (f) vaiheen (e) mukainen välituote, jossa suojaryhmä on bentsoyyli, rea- : 25 goi ammoniakilla kyllästetyn metanolin kanssa, jolloin 5-O-hydroksisuojaryhmä korvautuu.
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (g) käytetään entsyymi, adenosiinideaminaasi, liuoksena neutraalissa vesi- 30 pitoisessa väliaineessa tai sidottuna entsyymivalmistee-na. 92602 18
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US7484487A | 1987-07-17 | 1987-07-17 | |
| US7484487 | 1987-07-17 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883339A0 FI883339A0 (fi) | 1988-07-13 |
| FI883339A FI883339A (fi) | 1989-01-18 |
| FI92602B true FI92602B (fi) | 1994-08-31 |
| FI92602C FI92602C (fi) | 1994-12-12 |
Family
ID=22122017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883339A FI92602C (fi) | 1987-07-17 | 1988-07-13 | Menetelmä -2',3'-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi entsymaattisella deaminoinnilla |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR930005870B1 (fi) |
| AT (1) | AT395977B (fi) |
| CA (1) | CA1335187C (fi) |
| ES (1) | ES2007532A6 (fi) |
| FI (1) | FI92602C (fi) |
| GR (1) | GR1000483B (fi) |
| LU (1) | LU87280A1 (fi) |
| PT (1) | PT88017B (fi) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GR861255B (en) * | 1985-05-15 | 1986-09-16 | Wellcome Found | Therapeutic nucleosides |
| IL85778A0 (en) * | 1987-03-20 | 1988-09-30 | Bristol Myers Co | Production of 2',3'-dideoxynucleosides and certain such novel compounds |
-
1988
- 1988-07-04 AT AT0173088A patent/AT395977B/de not_active IP Right Cessation
- 1988-07-08 GR GR880100455A patent/GR1000483B/el not_active IP Right Cessation
- 1988-07-13 FI FI883339A patent/FI92602C/fi active IP Right Grant
- 1988-07-15 LU LU87280A patent/LU87280A1/fr unknown
- 1988-07-15 KR KR1019880008865A patent/KR930005870B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-07-15 CA CA000572184A patent/CA1335187C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-15 ES ES8802250A patent/ES2007532A6/es not_active Expired
- 1988-07-15 PT PT88017A patent/PT88017B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT88017A (pt) | 1989-06-30 |
| KR900001858A (ko) | 1990-02-27 |
| GR880100455A (en) | 1989-04-12 |
| FI883339A (fi) | 1989-01-18 |
| CA1335187C (en) | 1995-04-11 |
| GR1000483B (el) | 1992-07-30 |
| FI92602C (fi) | 1994-12-12 |
| LU87280A1 (fr) | 1989-03-08 |
| ES2007532A6 (es) | 1989-06-16 |
| AT395977B (de) | 1993-04-26 |
| ATA173088A (de) | 1992-09-15 |
| PT88017B (pt) | 1995-03-01 |
| KR930005870B1 (ko) | 1993-06-25 |
| FI883339A0 (fi) | 1988-07-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7858774B2 (en) | Synthesis of 5-azacytidine | |
| US4965374A (en) | Process for and intermediates of 2',2'-difluoronucleosides | |
| IE871756L (en) | Nucleotides | |
| US8193354B2 (en) | Process for preparation of Gemcitabine hydrochloride | |
| EP0688783B1 (en) | Method for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluornucleosides | |
| Fairbanks et al. | Synthesis of 5-epihydantocidin from D-Ribose | |
| AU2010291893B2 (en) | Synthesis of decitabine | |
| US5011774A (en) | Dideoxyinosine by enzymatic deamination of dideoxyadenosine | |
| US5559222A (en) | Preparation of 1-(2'-deoxy-2',2'-difluoro-D-ribo-pentofuranosyl)-cytosine from 2-deoxy-2,2-difluoro-β-D-ribo-pentopyranose | |
| Brandstetter et al. | A galactopyranose analogue of hydantocidin | |
| EP0638586B1 (en) | Nucleoside derivatives and methods for producing them | |
| FI92602B (fi) | Menetelmä -2',3'-dideoksi-inosiinin valmistamiseksi entsymaattisella deaminoinnilla | |
| CA1339644C (en) | Method of preparing beta-2',2'-difluoronucleosides | |
| US5144018A (en) | 2',3'-dideoxy-adenosine derivatives | |
| US5817639A (en) | Purine 4'-thioarabinonucleosides | |
| Harusawa et al. | Efficient and β-Stereoselective Synthesis of 4 (5)-Methyl-5 (4)-(5-amino-5-deoxy-β-D-ribofuranosyl) imidazole and Related Compounds Exhibiting Antiulcer Activity | |
| MIYASHITA et al. | Isolation and characterization of a new aristeromycin analog | |
| RU2345087C2 (ru) | Способ получения и очистки гемцитабина гидрохлорида | |
| AU610865B2 (en) | Process to produce 2',3'-dideoxynucleosides | |
| Purkayastha et al. | Synthesis of certain 6‐alkylthio‐2, 2′‐anhydro‐5‐azauridines | |
| KR20070063421A (ko) | 2′,2′-디플루오로뉴클레오시드 및 중간체의 새로운 제조방법 | |
| Limberg et al. | Synthesis of modified aldonic acids and studies of their substrate efficiency for dihydroxy acid dehydratase (DHAD) | |
| WO2008026222A2 (en) | Process and intermediates of 2,2' difluoronucleosides | |
| JPH06263791A (ja) | α−リバゾールの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY |