FI90779B - Process for preparing polymers containing thiol groups - Google Patents
Process for preparing polymers containing thiol groups Download PDFInfo
- Publication number
- FI90779B FI90779B FI883648A FI883648A FI90779B FI 90779 B FI90779 B FI 90779B FI 883648 A FI883648 A FI 883648A FI 883648 A FI883648 A FI 883648A FI 90779 B FI90779 B FI 90779B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- polymer
- water
- groups
- process according
- polymer containing
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
- C12N11/087—Acrylic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
- C08F8/34—Introducing sulfur atoms or sulfur-containing groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
- C08F8/08—Epoxidation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
9077990779
Menetelmä tioliryhmiä sisältävien polymeerien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää tioliryhmää sisäl-5 tävien polymeerien valmistamiseksi.This invention relates to a process for the preparation of polymers containing a thiol group.
Polymeeriset kantajamateriaalit, joista on tehty merkaptoryhmäjohdannaisia, ovat suuren kiinnostuksen kohteina, koska niiden avulla voidaan toisaalta puhdistaa aineita, jotka normaalisti kykenevät vuorovaikutukseen 10 sulfhydryyliryhmien kanssa, ja toisaalta immobilisoida irreversiibelisti aineita sulfhydryyliryhmiin. Tällaiset aineet voivat olla esimerkiksi entsyymejä, vasta-aineita, proentsyymejä tai antigeenejä. Kantajamatriksina on tähän asti käytetty erityisesti agaroosijohdannaisia. Tämän po-15 lymeerisen kantajan valmistuksen yhteydessä ansaitsee erityistä huomiota funktionaalisten sulfhydryyliryhmien tuonti kantajaan. Tunnettuja ja alalla käytössä olevia menetelmiä ovat polymeerijohdannaisen valmistus homokys-teiinitiolaktonia käyttämällä, glutanionin liittäminen, 20 jota edeltää aktivointi bromisyaanilla, samoin kuin aktivointi epikloorihydriinillä ja sitä seuraava reaktio tiosulfaatin kanssa yhdistettyyn pelkistysvaiheeseen sekä ditiotreitolilla tehtävä oksiraaniryhmäreaktio [R. Axen et ai., Acta Chemica Scan. B 29 (1975) 471-474).Polymeric carrier materials which have been derivatized with mercapto groups are of great interest because they can be used to purify substances that are normally capable of interacting with sulfhydryl groups on the one hand, and to irreversibly immobilize substances on sulfhydryl groups on the other hand. Such agents may be, for example, enzymes, antibodies, proenzymes or antigens. To date, agarose derivatives in particular have been used as carrier matrices. In connection with the preparation of this polymeric support, the introduction of sulfhydryl functional groups into the support deserves special attention. Methods known and used in the art include the preparation of a polymer derivative using homocysteine thiolactone, the incorporation of glutanion preceded by activation with bromocyanine, as well as activation with epichlorohydrin and subsequent reaction with a thiosulfate-combined reduction step, and dithiothreitol Axen et al., Acta Chemica Scan. B 29 (1975) 471-474).
25 Näihin tiolipitoisiin polymeereihin samoin kuin niiden valmistusmenetelmiin liittyy kuitenkin haittapuolia, ja ne ovat siten parantamisen arvoisia. Tähän on toisaalta syynä matriksi, joka hiilihydraattirakenteensa takia on mekaanisesti herkkä ja myös altis mikrobien vai-30 kutukselle. Toisaalta syynä on sulfhydryyliryhmien tuon-timenetelmä, joka on joko kallis tai työläs ja voi joidenkin menetelmien yhteydessä johtaa epästabiilien sidosten muodostumiseen.However, these thiol-containing polymers, as well as their production methods, have drawbacks and are therefore worth improving. This is due, on the one hand, to the matrix, which, due to its carbohydrate structure, is mechanically sensitive and also susceptible to microbial action. On the other hand, the reason is the method of importing sulfhydryl groups, which is either expensive or laborious and can lead to the formation of unstable bonds in some methods.
Tämän keksinnön päämääränä oli siten kehittää me-35 netelmä, joka mahdollistaa tioliryhmiä sisältävien poly- 2 meerien valmistamisen yksinkertaisesti ja taloudellisesti. Muodostuvien kemiallisten sidosten tulee lisäksi olla hyvin stabiileja.It is therefore an object of the present invention to provide a process which makes it possible to prepare polymers containing thiol groups in a simple and economical manner. In addition, the chemical bonds formed must be very stable.
Keksinnön päämääränä oli myös tioliryhmiä sisältä-5 2vien polymeerien valmistaminen, joilla on johdannaisten valmistukseen käytetyn matriksin ansiosta parempi mekaaninen ja kemiallinen kestävyys.It is also an object of the invention to provide polymers containing thiol groups which have better mechanical and chemical resistance due to the matrix used for the preparation of the derivatives.
Nyt on yllättävästi havaittu, että polymeerit, joista on valmistettu oksiraaniryhmiä sisältäviä johdan-10 naisia, reagoivat rikkivedyn vesiliukoisten suolojen kanssa, jolloin muodostuu immobilisoituja funktionaalisia sulfhydryyliryhmiä.It has now surprisingly been found that polymers from which oxirane-containing derivatives have been reacted with water-soluble salts of hydrogen sulfide to form immobilized sulfhydryl functional groups.
Keksintö koskee siten tioliryhmiä sisältävän polymeerin valmistusmenetelmää, jolle on tunnusomaista, että 15 hydroksyyliryhmiä sisältävän veteen liukenemattoman polymeerin annetaan reagoida lämpötilassa 40-50 °C 1—4 tunnin ajan 1-kloori-l,2-epoksipropaanin (epikloorihydriinin) tai l,4-bis(2,3-epoksipropoksi)butaanin kanssa, jolloin polymeeriin tulee oksiraaniryhmiä, pestään polymeeri ve-20 dellä, siirretään se vesiliuokseen, käsitellään veteen liukenevalla sulfidilla lämpötilassa 0—70 °C 2—48 tuntia ja pestään polymeeri vedellä tai laimealla hapolla.The invention thus relates to a process for the preparation of a polymer containing thiol groups, which is characterized in that a water-insoluble polymer containing hydroxyl groups is reacted at 40-50 ° C for 1 to 4 hours with 1-chloro-1,2-epoxypropane (epichlorohydrin) or 1,4-bis With (2,3-epoxypropoxy) butane to give the polymer oxirane groups, wash the polymer with water, transfer it to an aqueous solution, treat with water-soluble sulfide at 0-70 ° C for 2-48 hours, and wash the polymer with water or dilute acid.
Hydroksyyliryhmiä sisältäväksi polymeeriksi soveltuvat hiilihydraattipohjaiset polymeerit, esimerkiksi 25 agaroosigeeli tai dekstraanigeeli, tai metakryyliamidi-, N-metyleeni-bismetakryyliamidi-, glysidyylimetakrylaatti-polyetyleeniglykolijohdannais- ja pentaerytritolidimetak-ryylipohjaiset polymeerit.Suitable carboxyl-containing polymers are carbohydrate-based polymers, for example an agarose gel or dextran gel, or methacrylamide, N-methylene bismethacrylamide, glycidyl methacrylate-polyethylene glycol derivatives and pentaerythritol dimers.
Polymeerit, joita kutsutaan kemiallisen luonteensa 30 mukaisesti sekapolymeereiksi ja jotka koostuvat akryyli- happo- tai metakryylihappojohdannaisista ja on varustettu oksiraaniryhmillä, soveltuvat edullisesti tioliryhmiä sisältävien polymeerien valmistukseen. Tällaisten sekapoly-meerien monomeerirakenneosia ovat esimerkiksi metakryyli-35 amidi, N-metyleeni-bis-metakryyliamidi, glysidyylimetak- li 90779 3 rylaatti-polyeteeniglykolijohdannaiset tai pentaerytrito-limetakryylihappojohdannaiset. Erityisen sopivat ovat hartsit, joita myydään nimillä Fractogel® ja Sepabead^.Polymers, called copolymers according to their chemical nature, which consist of acrylic acid or methacrylic acid derivatives and are provided with oxirane groups, are preferably suitable for the preparation of polymers containing thiol groups. The monomer components of such copolymers are, for example, methacrylic-35 amide, N-methylene-bis-methacrylamide, glycidylmethyl 90779 3 rylate-polyethylene glycol derivatives or pentaerythritol-methacrylic acid derivatives. Particularly suitable are resins sold under the names Fractogel® and Sepabead®.
Näiden veteen liukenemattomien hartsien hydrok-5 syyliryhmät saatetaan tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi EP-hakemusjulkaisun 0 203 463 mukaisesti, reagoimaan l-kloori-2,3-epoksipropaanin (epikloorihydriinin) tai 1,4-bis(2,3-epoksipropoksi)butaanin kanssa, ja tuodaan siten oksiraaniryhmiä polymeeriin.The hydroxyl groups of these water-insoluble resins are reacted with 1-chloro-2,3-epoxypropane (epichlorohydrin) or 1,4-bis (2,3-epoxypropoxy) butane by known methods, for example according to EP application 0 203 463, and thus introducing oxirane groups into the polymer.
10 Epoksidointi tehdään esimerkiksi suspendoimalla 1 kg vedestä kosteaa polymeeriä veteen (1500 ml) ja 2 N NaOH-liuokseen (650 ml) ja saattamalla seos reagoimaan epikloorihydriinin (200 ml) kanssa korotetussa lämpötilassa, esimerkiksi lämpötilassa 40—50 °C. 1—4 tunnin ku- 15 luttua polymeeri pestään vedellä ja imetään kuivaksi.The epoxidation is carried out, for example, by suspending 1 kg of a water-moist polymer in water (1500 ml) and 2N NaOH solution (650 ml) and reacting the mixture with epichlorohydrin (200 ml) at an elevated temperature, for example 40-50 ° C. After 1 to 4 hours, the polymer is washed with water and sucked dry.
Oksiraanipitoinen polymeeri sekoitetaan sitten veteen tai vesipohjaiseen puskuriliuokseen, jota käytetään yhtä hartsikiloa kohden 500 ml—3 1, edullisesti kuitenkin noin 1 1. Puskurina voidaan käyttää suolaliuoksia, esi-20 merkiksi natriumfosfaattipuskuria, natriumsitraattipusku-ria tai Hepes-puskuria, jonka pH on 4-13. Edullisesti lisätään 1 1 0,25 M natriumvetykarbonaattiliuosta 1 kg:a kohden polymeeriä.The oxirane-containing polymer is then mixed with water or an aqueous buffer solution used per kilogram of resin in an amount of 500 ml to 3 l, but preferably about 1 l. Saline solutions, for example sodium phosphate buffer, sodium citrate buffer or Hepes buffer at pH 4-, can be used as buffer. 13. Preferably 1 l of 0.25 M sodium hydrogen carbonate solution is added per 1 kg of polymer.
Sitten lisätään 10—200 g vesiliukoista sulfidia 25 tai vetysulfidia, edullisesti alkalimetallisulfidia. Erityisen edullisesti lisätään 70—80 g natriumsulfidinona-hydraattia, ja sekoitetaan seosta lämpötilassa 0—70 °C, edullisesti 35—45 °C. Reaktioaika on 2—48 tuntia, edullisesti 12—14 tuntia. Polymeeri pestään sitten vedellä ja/-30 tai liuoksella, joka sisältää 0,5 ml etikkahappoa vedessä.10 to 200 g of water-soluble sulfide or hydrogen sulfide, preferably alkali metal sulfide, are then added. Particularly preferably, 70-80 g of sodium sulfidinone hydrate are added, and the mixture is stirred at a temperature of 0-70 ° C, preferably 35-45 ° C. The reaction time is 2 to 48 hours, preferably 12 to 14 hours. The polymer is then washed with water and / -30 or a solution containing 0.5 ml of acetic acid in water.
Keksinnön edullisessa toteutusmuodossa valmistetaan polymeeri tuomalla pentaerytritolista, metakryyli-happojohdannaisesta ja polyetyleeniglykolista valmistet-35 tuun, divinyylibentseenillä silloitettuun sekapolymeeriin 4 oksiraaniryhmiä saattamalla se reagoimaan epikloorihyd-riinin kanssa ja käsittelemällä tuote natriumsulfidillä.In a preferred embodiment of the invention, the polymer is prepared by introducing 4 oxirane groups into a divinylbenzene crosslinked copolymer of pentaerythritol, methacrylic acid derivative and polyethylene glycol by reacting it with epichlorohydrin and treating the product with sodium sulfide.
Lisäksi on edullinen menetelmä, jossa polymeeri valmistetaan tuomalla metakryylihappojohdannaisiin perus-5 tuvaan polymeeriin (Sepabeads*) oksiraaniryhmiä saattamalla se reagoimaan butaanidiolidiglysidyylieetterin kanssa ja käsittelemällä tuote natriumsulfidillä.In addition, a method in which the polymer is prepared by introducing oxirane groups into a polymer based on methacrylic acid derivatives (Sepabeads *) by reacting it with butanediol diglycidyl ether and treating the product with sodium sulfide is preferred.
Polymeeriset kantajat, joihin on tuotu funktionaalisia tioliryhmiä edellä mainitulla menetelmällä, sovel-10 tuvat mekaanisen ja kemiallisen stabiiliutensa ansiosta aivan erityisen edullisesti entsyymien, proentsyymien, vasta-aineiden tai antigeenien immobilisointiin samoin kuin merkaptoryhmien kanssa vuorovaikutukseen kykenevien aineiden kromatografiseen käsittelyyn.Due to their mechanical and chemical stability, the polymeric supports to which the thiol functional groups have been introduced by the above-mentioned method are particularly particularly suitable for the immobilization of enzymes, proenzymes, antibodies or antigens as well as for the chromatographic treatment of substances capable of interacting with mercapto groups.
15 Siten valmistetut tioliryhmiä sisältävät polymee rit soveltuvat lisäksi disulfidiaktivoinnin jälkeen reaktioihin tioliryhmiä sisältävien aineiden, esimerkiksi proteiinien, kanssa, jolloin tapahtuu disulfidin vaihto. Tällä tavalla voidaan tällaisia proteiineja konsentroida 20 tai eluoida polymeeristä ja puhdistaa sitä kautta. Disul-fideja, jotka ovat erityisen soveltuvia polymeerin merkaptoryhmien aktivointiin ovat esimerkiksi 2,2'-dipyri-dyylidisulfidi, bis-(2-pyridyyli-N-oksidi)-disulfidi ja 5,5'-ditio-bis-(2-nitrobentsoehappo).The thiol-containing polymers thus prepared are further suitable, after disulfide activation, for reactions with thiol-containing substances, for example proteins, in which disulfide exchange takes place. In this way, such proteins can be concentrated or eluted from the polymer and purified thereby. Disulfides that are particularly suitable for activating mercapto groups in the polymer include, for example, 2,2'-dipyridyl disulfide, bis- (2-pyridyl-N-oxide) disulfide, and 5,5'-dithio-bis- (2-nitrobenzoic acid). .
25 Keksinnön mukaisesti valmistettua polymeeriä voi daan edullisesti käyttää alfax-antitrypsiinin puhdistukseen.The polymer prepared according to the invention can be advantageously used for the purification of alpha-antitrypsin.
Keksintöä valaistaan seuraavin esimerkein.The invention is illustrated by the following examples.
Esimerkki 1 30 Fractogef^-pohjäisen tioliryhmiä sisältävän poly meerin valmistusExample 1 Preparation of a Fractogef-based polymer containing thiol groups
Fractogei^ HW-65 (F):ään, pentaerytriolin, metak-ryylihappojohdannaisten ja polyetyleeniglykolin sekapoly-meeriin (1000 ml, valmistaja Toyo Soda) lisättiin 350 ml 35 vettä ja 275 ml 5 N natriumhydroksidiliuosta, ja kuumen- 90779 5 nettiin seos lämpötilaan 45 °C. Lisättiin 200 ml epikloo-rihydriiniä, ja sekoitettiin 2 tuntia tässä lämpötilassa.To Fractogei ^ HW-65 (F), to a copolymer of pentaerythriol, methacrylic acid derivatives and polyethylene glycol (1000 ml, manufactured by Toyo Soda) were added 350 ml of water and 275 ml of 5 N sodium hydroxide solution, and the mixture was heated to 45779 ° C. ° C. 200 ml of epichlorohydrin were added, and stirred for 2 hours at this temperature.
Seos suodatettiin, ja tuotetta pestiin vedellä niin pitkään, että pH laski arvoon 7. Kuivaksi imetty hartsi 5 siirrettiin 0,2 mol/1 natriumvetykarbonaattiliuokseen (1400 ml), ja lisättiin 72 g Na2S 9H20:a. Sekoitettiin 15 tuntia lämpötilassa 40 °C, imusuodatettiin, ja pestiin tuote vedellä ja sen jälkeen liuoksella, joka sisälsi 0,5 ml etikkahappoa ja 100 ml vettä.The mixture was filtered and the product was washed with water until the pH dropped to 7. The resin 5 impregnated to dryness was transferred to 0.2 M sodium bicarbonate solution (1400 mL), and 72 g of Na 2 S 9 H 2 O was added. After stirring for 15 hours at 40 ° C, it was filtered off with suction and the product was washed with water and then with a solution of 0.5 ml of acetic acid and 100 ml of water.
10 Esimerkki 210 Example 2
Sepabeadd^-pohjäisen (valmistaja Mitsubishi) tio-liryhmiä sisältävän polymeerin valmistus 1000 ml Sepabead^ HG05:ä suspendoitiin 0,6 M NaOH-liuokseen (1000 ml), joka sisälsi 2 g NaBH4:ä. Sen 15 jälkeen lisättiin 1000 ml butaanidiolidiglysidyylieet- teriä, ja suspensiota sekoitettiin 8 tuntia huoneen lämpötilassa. Epoksiryhmillä aktivoitu SepabeadJ^ HG05 -materiaali pestiin sitten lasisintterillä vedellä (15 1). Reaktio Na2S 9H20:n kanssa tehtiin esimerkissä 1 kuvatul-20 la tavalla.Preparation of Sepabead®-based (manufactured by Mitsubishi) thiol-containing polymer 1000 ml of Sepabead® HGO5 was suspended in 0.6 M NaOH solution (1000 ml) containing 2 g of NaBH4. Then 1000 ml of butanediol diglycidyl ether were added, and the suspension was stirred for 8 hours at room temperature. The epoxy-activated Sepabead® HGO5 material was then washed with sintered glass with water (15 L). The reaction with Na 2 S 9 H 2 O was performed as described in Example 1.
Esimerkki 3 * » ClExample 3 * »Cl
Tioliryhmiä sisältävän Fractogelw:n aktivointi 2,2'-ditiobis-pyridiini-N-oksidilla 500 ml esimerkissä 1 kuvatulla tavalla valmistet-25 tua Fractogel® HW-65:ä tasapainotettiin puskurilla A, joActivation of Fractogelw containing thiol groups by 2,2'-dithiobis-pyridine N-oxide 500 ml of Fractogel® HW-65 prepared as described in Example 1 were equilibrated with buffer A,
ka sisälsi 50 mmol/1 Tris HCl:a ja 150 mmol/1 NaCl:a (pHka contained 50 mmol / l Tris HCl and 150 mmol / l NaCl (pH
7,5). Sen jälkeen hartsimateriaalia inkuboitiin neljästi 320 min:n ajan huoneen lämpötilassa puskurin kanssa, joka sisälsi kullakin kerralla 1 1 puskuria A ja 1,5 mmol/1 30 2,21-ditiobis-pyridiini-N-oksidia, ja pestiin sen jälkeen uudestaan puskurilla A. Siten aktivoitua materiaalia voidaan käyttää esimerkiksi disulfidivaihtoreaktioihin.7.5). The resin material was then incubated for four minutes at room temperature with buffer containing 1 L of Buffer A and 1.5 mmol / L of 2,21-dithiobis-pyridine N-oxide each time, and then washed again with Buffer A. Thus, the activated material can be used, for example, for disulfide exchange reactions.
Esimerkki 4Example 4
Tioliryhmiä sisältävän Sepabead^ HG05:n aktivoin-35 ti di-(2-pyridyyli)-disulfidillä 6 500 ml esimerkin 2 mukaisesti valmistettua Sepa-bead^ HG05:ä aktivoitiin liuoksella, joka sisälsi 1,5 mmol/1 di-(2-pyridyyli)-disulfidia, esimerkin 3 mukaisissa olosuhteissa.Activation of thiol-containing Sepabead® HGO5 with di-di- (2-pyridyl) disulfide 6,500 ml of Sepa-bead ^ HGO5 prepared according to Example 2 was activated with a solution containing 1.5 mmol / l di- (2- pyridyl) disulfide, under the conditions of Example 3.
5 Esimerkki 55 Example 5
Alfa^antitrypsiinin puhdistus 500 ml ihmisen plasmaa laimennettiin vedellä (1000 ml), joka sisälsi 30 mmol/1 merkaptoetanolia, inkuboitiin 1 tunti huoneen lämpötilassa, ja tehtiin sitten ammonium-10 sulfaattifraktiosaostus kyllästysasteiden 50 % ja 75 % (massa/tilavuus) välillä. Alueella 50—75 % (massa/tila-vuus) saatu sakka liuotettiin liuokseen, joka sisälsi 50 mmol/1 Trisiä, 200 mmol/1 NaClra ja 1 mmol/1 EDTA:a (pH 8,0), ja käsiteltiin kromatografisesti 500 ml:n AC$ 202-15 pylväällä. Alfa^antitrypsiiniä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja siirrettiin pylvääseen.(100 ml), joka sisälsi 2,21-ditiobis-pyridiini-N-oksidilla aktivoitua tio-li-Fractogei^:ä. Pylväs huuhdottiin samalla puskurilla, ja alfa.,-antitrypsiini eluoitiin liuoksella, joka sisälsi 20 10 mmol/1 ditiotreitolia. Siten saadun alfa^antitrypsii- nin puhtausaste oli hyvä.Purification of alpha-antitrypsin 500 ml of human plasma was diluted with water (1000 ml) containing 30 mmol / l mercaptoethanol, incubated for 1 hour at room temperature, and then ammonium-10 sulfate fraction precipitation was performed between 50% and 75% (w / v) saturation degrees. The precipitate obtained in the range of 50-75% (w / v) was dissolved in a solution of 50 mmol Tris, 200 mmol NaCl and 1 mmol EDTA (pH 8.0) and chromatographed in 500 ml on the AC $ 202-15 column. Fractions containing alpha-antitrypsin were combined and transferred to a column (100 ml) containing 2,21-dithiobis-pyridine N-oxide-activated thio-1-Fractoge. The column was rinsed with the same buffer, and alpha-antitrypsin was eluted with a solution containing 20 mmol / l dithiothreitol. The alpha-antitrypsin thus obtained was of good purity.
lili
Claims (7)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3726454 | 1987-08-08 | ||
| DE19873726454 DE3726454A1 (en) | 1987-08-08 | 1987-08-08 | POLYMERS CONTAINING THIOL GROUPS, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND THEIR USE |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883648A0 FI883648A0 (en) | 1988-08-04 |
| FI883648A FI883648A (en) | 1989-02-09 |
| FI90779B true FI90779B (en) | 1993-12-15 |
| FI90779C FI90779C (en) | 1994-03-25 |
Family
ID=6333374
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883648A FI90779C (en) | 1987-08-08 | 1988-08-04 | Process for the preparation of polymers containing thiol groups |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0305749B1 (en) |
| JP (1) | JP2703937B2 (en) |
| KR (1) | KR0131766B1 (en) |
| AT (1) | ATE67509T1 (en) |
| AU (1) | AU616898B2 (en) |
| CA (1) | CA1315464C (en) |
| DE (2) | DE3726454A1 (en) |
| DK (1) | DK439988A (en) |
| ES (1) | ES2025743T3 (en) |
| FI (1) | FI90779C (en) |
| GR (1) | GR3003361T3 (en) |
| PT (1) | PT88191B (en) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9007384D0 (en) * | 1990-04-02 | 1990-05-30 | Duncan Ruth | Coupling between polymers and other organic molecular entities utilising thiol-specific reactive groups |
| DE4106984A1 (en) * | 1991-03-05 | 1992-09-10 | Bio Rad Lab Gmbh | METHOD FOR SEPARATING SPECIES CONTAINING PRIMARY AMINO GROUPS FROM SOLUTIONS |
| US5710211A (en) * | 1995-08-01 | 1998-01-20 | Kuraray Co., Ltd. | Process for producing vinyl alcohol polymer |
| JP4670150B2 (en) | 1999-04-02 | 2011-04-13 | 味の素株式会社 | Method for producing subunit peptides derived from multimeric proteins |
| DE10004565A1 (en) * | 2000-02-02 | 2001-08-09 | Merck Patent Gmbh | Alkaline-stable coating on substrates |
| AU2003901834A0 (en) * | 2003-04-17 | 2003-05-01 | Clearcoll Pty Ltd | Cross-linked polysaccharide compositions |
| ES2659442T3 (en) * | 2009-09-30 | 2018-03-15 | Thiomatrix Forschungs- Und Beratungs Gmbh | Mucoadhesive polymers with partial vitamin B structures |
| CN102532372B (en) * | 2010-12-17 | 2015-06-10 | 通用电气公司 | Polymer and preparation and using method thereof |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1495319A1 (en) * | 1963-08-28 | 1969-08-28 | Huels Chemische Werke Ag | Process for the production of thermosetting resins |
| JPS4867382A (en) * | 1971-12-06 | 1973-09-14 | ||
| US3900451A (en) * | 1973-08-24 | 1975-08-19 | Dow Chemical Co | Method of making sulfhydryl-containing polymers |
| BE821435A (en) * | 1974-10-24 | 1975-02-17 | PROCESS FOR PREPARING COPOLYMERS. | |
| DE2732301C3 (en) * | 1977-07-16 | 1980-12-11 | Roehm Gmbh, 6100 Darmstadt | Process for the production of stabilized carrier-bound proteins |
| US4565854A (en) * | 1983-04-07 | 1986-01-21 | Kuraray Co., Ltd. | Polymer having thiol end group |
-
1987
- 1987-08-08 DE DE19873726454 patent/DE3726454A1/en not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-08-02 EP EP88112531A patent/EP0305749B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-02 DE DE8888112531T patent/DE3864958D1/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-08-02 ES ES198888112531T patent/ES2025743T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-02 AT AT88112531T patent/ATE67509T1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-08-04 FI FI883648A patent/FI90779C/en not_active IP Right Cessation
- 1988-08-04 PT PT88191A patent/PT88191B/en not_active IP Right Cessation
- 1988-08-05 AU AU20431/88A patent/AU616898B2/en not_active Ceased
- 1988-08-05 CA CA000573912A patent/CA1315464C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-08-05 DK DK439988A patent/DK439988A/en not_active Application Discontinuation
- 1988-08-05 JP JP63194740A patent/JP2703937B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-08-08 KR KR1019880010085A patent/KR0131766B1/en not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-12-17 GR GR91401549T patent/GR3003361T3/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI90779C (en) | 1994-03-25 |
| JP2703937B2 (en) | 1998-01-26 |
| FI883648A (en) | 1989-02-09 |
| EP0305749A1 (en) | 1989-03-08 |
| DK439988D0 (en) | 1988-08-05 |
| CA1315464C (en) | 1993-03-30 |
| DK439988A (en) | 1989-02-09 |
| KR890003842A (en) | 1989-04-18 |
| PT88191A (en) | 1989-06-30 |
| EP0305749B1 (en) | 1991-09-18 |
| DE3726454A1 (en) | 1989-02-16 |
| ATE67509T1 (en) | 1991-10-15 |
| JPS6466213A (en) | 1989-03-13 |
| AU2043188A (en) | 1989-02-09 |
| PT88191B (en) | 1995-03-01 |
| GR3003361T3 (en) | 1993-02-17 |
| KR0131766B1 (en) | 1998-04-13 |
| ES2025743T3 (en) | 1992-04-01 |
| FI883648A0 (en) | 1988-08-04 |
| DE3864958D1 (en) | 1991-10-24 |
| AU616898B2 (en) | 1991-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5866673A (en) | Polymerizable derivatives of polyamides | |
| US5116962A (en) | Material for affinity chromatography which is a sulfated polysaccharide bonded to an insoluble polymer | |
| FI90779B (en) | Process for preparing polymers containing thiol groups | |
| CA2511190C (en) | Sugar chain asparagine derivatives, sugar chain asparagine, sugar chain, and processes for producing these | |
| JPS6259124B2 (en) | ||
| JPS6048703B2 (en) | Support for chromatography and its preparation method | |
| AU2003292641A1 (en) | Three-branched sugar-chain asparagine derivatives, the sugar-chain asparagines, the sugar chains, and processes for producing these | |
| EP0057600B1 (en) | Affinity resins and their use in isolating bacterial luciferase | |
| AU610734B2 (en) | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography | |
| JPH0423751B2 (en) | ||
| EP0186347B1 (en) | Method for producing high-active biologically efficient compounds immobilized on a carrier | |
| US5196536A (en) | 2-Fluoro-1-methylpyridinium salt activated diols and polyols as cross-linkers | |
| US5130436A (en) | 2-fluoro-1-methylpyridinium salt activated diols and polyols as cross-linkers | |
| JP3583429B2 (en) | Separating agents for hydrophobic chromatography | |
| SU981322A1 (en) | Process for producing water-soluble linear polysacchoride | |
| EP0217510A2 (en) | Anthraquinone derivatives | |
| US20030186807A1 (en) | Hydrogel product for adsorption purposes | |
| CN112569910B (en) | Preparation method of adsorbent for removing LDL (low density lipoprotein) by blood extracorporeal circulation and perfusion device | |
| US5077344A (en) | Polymer modification | |
| SU1028679A1 (en) | Nitrophenyl disulphide derivatives of cross-linked agarose as chemosorbent for studying protein=protein reaction and process for preparing the same | |
| RU2048475C1 (en) | Method of sulfated chitosan preparing | |
| Mathur et al. | Polysaccharides and functional polysaccharides: Preparation and applications | |
| SU1454846A1 (en) | Method of producing l-lysin-alpha-oxidase | |
| EP1094894B1 (en) | Hydrogel product for adsorption purposes | |
| SU479782A1 (en) | The method of producing sorbent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT |