FI89058B

FI89058B - Foerfarande foer framstaellning av som remin-inhibitorer anvaenda 2-(l-alanyl-l-histidylamino)-butanol-derivat

Info

Publication number: FI89058B
Application number: FI880734A
Authority: FI
Inventors: Kohji Nakano; Takashi Fujikura; Ryuichiro Hara; Masato Ichihara; Yukiko Fukunaga; Masayuki Shibasaki
Original assignee: Yamanouchi Pharma Co Ltd
Priority date: 1987-02-27
Filing date: 1988-02-17
Publication date: 1993-04-30
Also published as: FI880734A0; NO880851L; EP0281316A2; US4904660A; FI880734A; NO880851D0; AU1250288A; AU612626B2; CA1325497C; FI89058C; EP0281316A3

Description

1 89058

Menetelmä valmistaa reniini-inhibiittoreina käytettäviä 2-(L-alanyyli-L-histidyyliamino)-butanoli-johdannaisia Förfarande för framställning av som remin-inhibitorer använda 2-(L-alanyl-L-histidylamino)-butanol-derivat

Reniini on asparagiini-proteinaasi, joka katalysoi angioten-sinogeeni-glykoproteiinin spesifistä hydrolyysiä angiotensiini I-dekapeptidiksi. Dipeptidyy1i-karboksipeptidaasi , joka on angiotensiinin muuntoentsyymi (ACE), muuntaa sen jälkeen sen oktapeptidiksi Ali, joka on äärimmäisen tehokas vasokonstrik-tori ja sen lisäksi myös aldosteronin vapauttamista ja siten natriumin pidättymistä edistävä aine. Aminopeptidaasit vaikuttavat edelleen AII:een, jolloin saadaan Alli, joka saa aikaan samanlaisia vaikutuksia kuin Ali, mutta pienemmässä määrin. Tämä kaskadi-reaktio, josta käytetään nimitystä reniini-angio-tensiini-systeemi, on sen vuoksi tärkeä ala verenpaineen ja elektrolyyttien homeostaasin säätelyssä.

"Reniini-inhibiittori" estää reniinin ja angiotensinogeenin välisen reaktion ja pienentää angiotensiini I:n muodostumista, mikä johtaa angiotensiini II:n (Ali), joka saa aikaan korkean verenpaineen ja joka myös edistää aldosteronin vapautumista, muodostumisen estämiseen. Koska reniinillä on huomattava spesifisyys substraattiaan kohtaan, tämän entsyymin ihnibiitto-reiden tulisi saada aikaan vieläkin suoremman reaktion reniini - angiotensiini -systeemissä . Reniini-angiotensiini-systeemin käsitteleminen reniini-inhibiittoreilla (näiden joukossa substraatin kanssa analoginen inhibiittori, esifragmentin osasta saadut peptidit, pepstatiini/statiini-pohjäiset inhibiittorit ja muuta substraatin transiitiotilan analogit tai välivaihe-analogit) on rajoitetussa määrässä tapauksia alentanut verenpainetta. Tällaisia äskettäin löydettyjä reniini-inhibiitto-reita on esitetty julkaisussa: J. Med. Chem. , 28., 1553/1985), : .· J. Med. Chem., 28., 1756(1985). Tokukaisho. 61-33152, Tokukais-ho.61-122296, Tokukaisho.61-236770, 61-275257 ja 61-275258.

2 89058

Jotta reniini-inhibiittorit olisivat hyödyllisiä kliinisessä käytössä, niillä on oltava seuraavat ominaisuudet: (1) Voimakas inhibiitiovaikutus ihmisreniiniin.

(2) Kliiniseen käyttöön sopiva, vaikutusaikaa pidentävä vaikutus .

(3) Erinomainen absorboituminen suoliston läpi.

(4) Kyky estää erittäin spesifisesti ihmisreniiniä.

Eräillä transiitiotilan analogeilla (stattiinipohjäiset inhibiittorit) oli jossakin määrin inhiboiva vaikutus ja eräät peptidit, joissa on N-terminaalisia ja/tai C-terminaalisiä suojaryhmiä, ovat jossakin määrin pidentäneet vaikutusta. Edellä mainittuja kohtia (1) - (4) ei kuitenkaan ole alalla täydellisesti ratkaistu.

Suoliston läpi tapahtuvan absorboitumisen parantamiseksi uskotaan tarvittavan pienimolekyylisiä yhdisteitä. Tutkimuksen avulla on yritetty löytää transiitiotilan analogien pienimolekyylisiä tripeptidejä ja dipeptidejä; aikaisemmat pienimolekyyliset transiitiotilan analogiset reniini-inhibiittorit ovat kuitenkin menettäneet huomattavasti aktiivisuudestaan protei-naasien vaikutuksesta ruoansulatuskanavassa. Vain edellä mainitussa Tokukaisho.61-236770-julkaisussa on kuvattu eräitä reniini-inhibiittoripeptidejä, jotka jossakin määrin absorboituvat oraalisen antamisen jälkeen. Näiden inhibiittoreiden tapauksessa ihmisssreniiniin kohdistuva spesifinen aktiivisuus ja vaikutuksen pidentyminen eivät ole kuitenkaan riittäviä, ja siten aktiivisuutta on yhä tarpeen parantaa. Toisaalta edellä mainitussa Tokukaisho.61-33152-julkaisussa on kuvattu eräitä seuraavan kaavan mukaisia yhdisteitä o r3 r4 oh n"B 1 1 I U R7 i V/*\X *6 R]^ O R5 Rg Rg 3 89058 jossa Rg sisältää "heteroaryylin" eräänlaisena aryylinä. Heterorengasta ei ole kuitenkaan spesifisesti kuvattu.

Lisäksi patenttijulkaisuissa EP 172347 ja 200406 on esitetty eräitä reniini-inhibiittoreita, kuten RCOCH2-CH-CO-His-NH-CH-CH(CH2)n-CO-XR2

I I

ch2 ch2ch(ch3)2

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet (so. kaavan (I) mukaiset yhdisteet) ovat kuitenkin rakenteellisesti täysin erilaisia näihin alan aikaisempiin yhdisteisiin verrattuna.

Tutkimusten, joiden kohteena on ollut saada ominaisuuksiltaan edellä olevien kohtien (1) - (4) mukaista reniiniä, tuloksena saatu kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joilla on havaittu olevan nämä ominaisuudet (1) - (4) ja niiden uskotaan olevan kliinisesti hyödyllisiä reniini-inhibiittoreita.

Tämän keksinnön kohteena on siten menetelmä valmistaa remiini-inhibiittoreina käytettäviä 2-(L-alanyyli-L-histidyyliamino)-butanoli-johdannaisia, joiden kaava I on

li-NH

«A s CK2 ch2r2 ch2-r3 (I) r1-(!;h-conh-ch-con-<!:h-ch-R4

L

i 4 89058 jossa on f\o.(CH2)n- (n = 1 tai 2); halogeeni --/ O N-CO-(CH2)n~ (n = 1 tai 2); ^-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 4) suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkoksikarbonyy1 iaini-no ; 5) (CH2)n- 6) suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg aikoksikarbonyy1i; 7) -CONH- suoraketjuinen tai haarautunut C]_-Cg alkyleeni-OH; 8) -4)—CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2);

^ S

9) / \ O N-NHCO-; 10) suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyylikarbonyyli-(ch2)n~ (n = 1 tai 2); 11) — Ov y— (CH2)n- (n = 1 tai 2); — O' 5 89058 12) /— 0\ ^_ y~ (CH2)n- (n = 1 tai 2); ^-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 14) Νΰ-f] (CH2)n" (n = 1 tai 2)'' 15) C^-Cg aikynyy1i-(CH2)n_ (n = 1 tai 2); 16) NC-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 17) C3-C7 sykloalkyyli-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 18) 0 \-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 19) // \\_ (CH2)n-NHCO- (n = 1 tai 2); 20) NHCO- 21) C3-C7 sykloalkylideeni-C^-Cg alkynyyli; 22) C3-C7 sykloalkyyli-C^-Cg alkyleeni, joka voi olla substi-tuoitu hydroksilla; tai 23> / \ 0 — Ci-Cg alkyleeni, joka voi olla substituoitu \_/ hydroksilla; 6 89058 R2 on 1) fenyyli; tai 2) naftyyli R3 on 1) suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyyli; 2) sykioheksyyli; tai 3) fenyyli; R4 on 1) nitrometyyli; 2) -COORc (Rc on suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyyli); 3) -(CH2)-S-Rd (0)n (n = 0, 1 tai 2);

Rd on tetratsolyyli, joka voi olla substituoitu alemmalla alkyylilla, karbamoyyli-alempi alkyylilla, tai tarkoittaa heterosyklistä ryhmää " AT? b) N-Π -|f- 4J— Ci~Cg alkyyli;

c) N-N

—-4J- Ci~C6 alkyyli; 7 89058 d) N-Tj ^ N ^ C^-Cg alkyyli; e) N- "-C0 g) ^ ; tai

h) -N

-\- II

V" r5 on : 1) vety; tai 2) Ci-Cg alkyyli.

Käytetty nimitys "alempi" tarkoittaa suoraketjuista tai haarautunutta hiiliketjua, jossa on enintään 6 hiiliatomia, ellei toisin ole mainittu. Alemmasta aikyyliryhmästä ovat siten konkreettisia esimerkkejä metyyli, etyyli, propyyli, isopro-pyyli, butyyli, isobutyyli, sek-butyyli, tert-butyyli, pentyy-li, isopentyyli, neopentyyli, tert-pentyyli, 1-metyylibutyyli, 2-metyylibutyyli, 1,2-dimetyylipropyyli, heksyyli, isoheksyy-li, 1-metyylipentyyli , 2-metyylipentyyli, 3-metyylipentyy1i , 1,1-dimetyylibutyyli, 1,2-dimetyylibutyyli, 2,2-dimetyylibu-tyyli, 1,3-dimetyylibutyyli, 2,3-dimetyylibutyyli, 3,3-ditne- 8 89058 tyylibutyyli, 1-etyylibutyyli, 2-etyylibutyyli, 1,1,2-trime-tyylipropyyli, 1,2,2-trimetyylipropyyli, 1-etyyli-l-metyyli-propyyli ja 1-etyyli-2-metyy1ipropyy1iryhmiä jne.

"Karbamoyyli-alempi-alkyyli" on ryhmä, joka voidaan saada substituoimal la mikä tahansa vetyatomi ’’alemmassa alkyylissä" "karbamoyyli11ä" (-CONH2)· Konkreettisia esimerkkejä "karba-moyyli-alempi-alkyylistä" ovat karbamoyylimetyyli, karbamoyy-lietyyli (2- tai 1-karbamoyylietyyli), 3-karbamoyylipropyyli, 2-karbamoyylipropyy1i, 1-karbamoyylipropyyli, karbamoyylietyy-li, karbamoyylipentyyli, karbamoyyliheksyyli, karbamoyylibu-tyyli ja niiden haarautuneet alempi-alkyyli-johdokset.

"Sykloalkyyli” tarkoittaa Cj-Cy-rengasalkyyliä. Konkreettisia esimerkkejä ovat syklopropyyli, syklobutyyli, sykiopentyyli, sykloheksyyli, sykioheptyyli jne.

Esimerkkejä ryhmästä "alempi alkynyyli" ovat etynyyli, propy-nyyli jne.

Ryhminä "alempi alkoksiryhmä" mainittakoon lisäksi metoksi, etoksi, propoksi, isopropoksi, butoksi, isobutoksi, sek-butok-si, tert-butoksi, pentyylioksi (amyylioksi), isopentyylioksi, tert-pentyylioksi, neopentyylioksi, 2-metyylibutoksi, 1,2-di-metyy1ipropoksi, 1-etyylipropoksi ja heksyylioksiryhmät ja vastaavat.

Älkyleeniryhmässä on mieluummin 1-6 hiiliatomia. Yksittäisiä esimerkkejä ovat: metyleeni, etyleeni, metyylimetyleeni, CH3 (-CH), trimetyyleeni, tetrametyleeni, 3,3-dimetyy1itetramety-leeni, 4,4-dimetyylitetrarnetyleeni, 1,1,3-trimetyy1itrimety-leeni, 1,1,2-trimetyy1itrimetyleeni, 1,1,2,2-tetrametyyliety-leeni, 1,l-dimetyyli-2-etyylietyleeni, 1,1-dietyylietyleeni.

"Sykloalkylideeni" on erityisesti C3-C7 alifaattinen kahdenar-voinen ryhmä. Konkreettisia esimerkkejä ovat sykiopropylidee- 9 89058 ni, syklobutylideeni, syklopentylideeni, sykloheksylideeni, sykloheptylideeni ja vastaavat.

Esillä oleva keksintö käsittää yhdisteiden (I) suolat. Esimerkkejä tällaisista suoloista ovat happoadditiosuolat epäorgaanisten happojen, kuten mineraalihappojen kanssa (esimerkiksi suolahappo, bromivetyhappo, jodivetyhappo, rikkihappo, typpihappo ja fosforihappo ja vastaavat) ja erilaisten orgaanisten happojen kanssa, kuten muurahais-, etikka-, oksaali-, sitruuna-, meripihka-, fumaari-, maleiini-, omena-, viini-, metaanisulfoni- ja etaanisulfonihappojen ja vastaavien kanssa. Suoloja muodostavia ovat myös happamet aminohapot, kuten asparagiinihappo, glutamiinihappo.

Eräillä keksinnön mukaisilla yhdisteillä voi ilmeisestikin olla erilaisia isomeerejä, kuten optisia isomeerejä, diaste-reoisomeereja ja geometrisia isomeerejä. Esillä oleva keksintö kattaa eristetyt isomeerit ja niiden seokset. Erityisesti kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä on 3 - 4 asymmetristä hiili-atomia, ja näillä on optisia isomeerejä. Käsillä olevien yhdisteiden suoloina mainittakoon myös suola alkalin kanssa (esimerkiksi natrium, kalium jne.), maa-aikai imetai Iin kanssa (magnesium, kalsium jne.) ja orgaanisen emäksen kanssa (di-etyyliamiini, trietyyliamiini, dietanoliamiini, sykloheksyy-liamiini).

Tämän keksinnön mukaan kaavan (I) yhdisteet voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavilla menetelmillä.

ίο 89058

Menetelmä 1

I-NH

,Γ;

N

ch2r2 ch2r*

I I

Rl~CH-CONH-CH-COOH + HN-CH-CH-R4 I (III)

(II) OH

R5 tai sen C-terminaalisesti aktiivinen esteri > haavan (1) mukainen yhdiste

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa saattamalla kaavan (II) mukainen yhdiste reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa ja tarvittaessa poistamalla suojaryhmä.

Kaavan (II) mukaisina yhdisteinä voidaan käyttää vapaata happoa tai N-hydroksyyliamiini-aktiivista esteriä. Reaktiossa voidaan käyttää kytkentämenetelmää kondensointiaineen läsnäollessa. Aktiivisina estereinä käytetään fenoliaktiivista esteriä (N-nitrofenoli-aktiivinen esteri jne.), N-hydroksyyli-amiini-aktiivinen esteri, 1-hydroksibentsotriatsoli-aktiivinen esteri jne.), hiilihappomono-alkyy1iesteriä, seka-happo (orgaaninen happo)-anhydridiä, seka-fosforihappo-aktiivista esteriä (difenyylifosforyy1 ikioridi ja N-metyy1imorfoiiini), happoatsidia (valmistettu happohydratsiinista ja typpihalo-genidi). C-terminaalisena aktiivisena yhdisteenä voidaan käyttää myös happoanhydridiä.

Kytkentämenetelmässä käytetään kytkentäaineena N,N'disyklo-heksyylikarbodi-imidiä, karbonyylidi-imidatsolia, difenyyli-fosforyyliatsidia (DPPA) jne. Reaktio voidaan tavallisesti suorittaa liuottimen läsnäollessa jäähdyttäen tai huoneen n 89058 lämpötilassa. Liuottimena voidaan käyttää orgaanista liuotinta, joka ei ota osaa reaktioon (esimerkiksi dimetyy1iformami-di, dimetyyliasetamidi, dioksaani tetrahydrofuraani, eetteri, dikloorimetaani, dikloorietaani, kloroformi, hiilitetraklori-di, dimetoksimetaani, dimetoksietaani, etyyliasetaatti, bent-seeni, asetonitriili, dimetyylkisulfoksidi) tai näiden orgaanisten liuottimien seosta. Tietyn laatuinen aktiivinen esteri on ehkä saatettava tai on pakko saattaa reagoimaan vedettömissä tai kuivissa olosuhteissa. Tasainen reaktio saadaan aikaan käyttämällä mieluummin N-metyy1imorfoliinia, trietyyliamiinia, trimetyy1iamiinia. So. tällaisen emäksen mukanaolo voi johtaa tasaiseen reaktioon. Ottaen huomioon suojaryhmiin ja rasemi-soitumiseen liittyvät ongelmat, on kaikkei suositeltavampaa käyttää atsidimenetelmää tai kytkentämenetelmää, jossa käytetään dietyylifosforyylisyanidia jne. Jos suojaryhmiä käytetään, ne poistetaan reaktion jälkeen. Karboksyylin suojaryhmä-nä voidaan käyttää mieluummin peptidien synteesissä tavallisesti käytettyä esteri ryhmää, kuten bentsyyliä, p-nitrobent-syyliä, difenyylimetyyliä (bentsohydryyli), trityyliä jne.

(so. substituoidut bentsyylit, tert-butyyliä, metyyliä, etyyliä jne. (so. alemmat alkyylit), fenasyyliä, 4-pikolyy1iä, sykioheksyyliä jne. Imidatsolyylin suojaryhmänä voidaan käyttää bentsyyliä, edellä mainittua substituoitua bentsyyliä, tert-butyyliä jne.

Suojaryhmät voidaan poistaa tavallisilla menetelmillä. Menetelmä 2

.-NH

| N

CH2R2 ch2r3 i I i R^-CH-COOH + H2N-CH-CON-CH-CH-R4 I I (V)

(IV) R5 OH

12 89058 tai sen C-terminäsiisesti aktiivinen esteri -—---“-> kaavan (I) mukainen yhdiste

Esillä olevan keksinnön mukaiset kaavan (I) yhdisteet voidaan valmistaa myös saattamalla reagoimaan kaavan (IV) mukainen yhdiste ja kaavan (V) mukainen yhdiste ja tarvittaessa poistamalla suojaryhmä.

Reaktio-olosuhteet jne. ovat samat kuin menetelmässä 1.

Muut menetelmät

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen substituenttien laadusta riippuen voidaan käyttää erilaisia menetelmiä. Esteri johdokset voidaan esimerkiksi valmistaa saattamalla karboksyylihappo tai sen reaktiivinen johdos reagoimaan alemman alkoholin tai alemman alkyylihalogenidin kanssa (so. alkoholi-reaktiivinen esteri), [tavallinen esteröinti]; ja vapaa karboksyylihappo voidaan valmistaa tavanomaisen hydrolyysireaktion avulla esteri johdoksiksi.

Siinä tapauksessa, että ryhmässä on >N-CO-osa, voidaan vastaavaa karboksyylihappoa tai sen C-terminaalisesti aktiivista esteriä käyttää lähtöaineena, joka saatetaan reagoimaan R^-ryhmään perustuvan amidi johdoksen kanssa.

Kaavan (I) yhdisteet, joissa on alempi alkanoyyli-osa, voidaan valmistaa käyttämällä vastaavaa hydroksijohdosta tai sen reaktiivista johdosta lähtöaineena, joka saatetaan reagoimaan alemman alkaanikarboksyylihapon tai sen reaktiivisen johdoksen kanssa.

Siinä tapauksessa, että R^ on -CI^SR^, voidaan käyttää seuraa-vaa reaktiomenetelmää 13 89058

,-NH

«Λ j N ^ ch2r2 ch2r3

I I

Ri-CH-CONH-CH-CON-CH-CH-CH + Rd-SM

I \ / *5 0 (VII) (VI) -> kaavan (I) mukainen yhdiste Tässä tapauksessa kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan siten valmistaa saattamalla reagoimaan kaavan (VI) mukainen yhdiste ja kaavan (VII) mukainen yhdiste.

M on vety tai aikaiimetal1iatomi; ja esimerkkejä alkalimetal-lista ovat natrium, kalium jne. Tämä reaktio voidaan suorittaa miluummin 1iuottimessa, joka ei ota osaa reaktioon. Tällaisesta liuottimesta esimerkkejä ovat N,N-dimetyy1iformamidi, dime-tyy1isulfoksidi, eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, meta-noli, etanoli, isopropanoli, asetoni, metyylietyyliketoni, di-k1oorimetaani, ety1eenikloridi, kloroformi, hii1itetrakloridi jne. (orgaaniset liuottimet), vesi ja veden ja orgaanisen liuottimen seos. Siinä tapauksessa, että merkaptaaniyhdistettä käytetään kaavan (VI) mukaisena yhdisteenä, reaktio suoritetaan mieluummin emäksen läsnäollessa. Esimerkkejä emäksestä ovat trietyyliamiini, trimetyyliamiini, kaliumkarbonaatti, natriumkarbonaatti, kaiiumhydroksidi jne. (orgaaniset emäkset ja epäorgaaniset emäkset). Reaktiolämpötilaa ei ole erityisesti rajoitettu. Lähtöaineiden laadusta jne. riippuen reaktio voidaan suorittaa jäähdyttäen, ympäristön lämpötilassa tai kuumentaen.

Siinä tapauksessa, että ryhmässä R^ on -COCH2-osa, voidaan käsillä olevat yhdisteet valmistaa saattamalla vastaava kar- boksyylihappo tai sen johdos reagoimaan vastaavan halogenidin 14 89058 tai sulfonaatin kanssa [X-CH2-: X=halogeeni tai p-tolueenisul-fonyylioksi, metaanisulfonyy1i (orgaaninen sulfonihapporyhmä)] tavalliseen tapaan.

Siinä tapauksessa, että esillä olevan keksinnön mukaisissa yhdisteissä on tioeetteri-osa, voidaan käyttää tavallista tioeettereiden muodostamisreaktiota (esimerkiksi vastaavan merkaptaani ( SH)-yhdisteen tai sen ai kaiimetal1ijohdoksen reaktio vastaavan halogenidin tai sulfonaatin kanssa).

Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää sellaisenaan, vapaassa muodossa tai suoloinaan. Eristäminen ja puhdistaminen voidaan suorittaa tavanomaisten kemiallisten toimenpiteiden avulla, kuten uuttamalla, kiteyttämällä, kiteyttämällä uudelleen, erilaisten kromatograafisten tekniikoiden avulla jne.

Esillä olevan keksinnön mukaisissa yhdisteissä voivat rasemaa-tit, optisesti aktiiviset muodot, diastereoisomeerit ja vastaavat olla yksinään tai seoksena. Stereokemiallisesti puhtaita isomeerejä voidaan saada käyttämällä sopivia raaka-aineita tai tavanomaisen raseemisen erottamisen avulla [esimerkiksi käsittelemällä tavanomaisella optisesti aktiivisella hapolla (viinihappo jne.) ja sen jälkeen suorittamalla optinen erotus jne.]. Diastereoisomeerien seos voidaan erottaa tavalliseen tapaan, esimerkiksi fraktiokiteyttämäl1ä, kromatograafisesti jne.

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä ja niiden seoksilla on voimakas, spesifinen reniiniä inhiboiva aktiivisuus. Niillä voidaan myös pidentää vaikutusaikaa tavalla, joka sopii kliiniseen antamiseen, ja lisäksi ne absorboituvat erinomaisesti suoliston läpi. Keksinnön mukaisten yhdisteiden voidaan siten odottaa olevan hyödyllisiä korkean verenpaineen, erityisesti reiniini-angiotensiini-pohjaisen korkean verenpaineen hoitamisessa ja estämisessä. Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdis- 15 89058 teiden erinomaiset vaikutukset on osoitettu seuraavan kokeen avul1 a.

(1) Ihmisplasman reniiniä inhiboiva vaikutus.

Ihmisplasmaan (250 μΐ), jonka angiotensiini I:n muodostamis-aktiivisuus oli 0,5 ng/ml/h (37°C) lisättiin 225 μΐ entsyymi-inhibiittoria (BAL, 8-hydroksisulfaatti, pH 4,6) ja 25 μΐ testattavan yhdisteen liuosta dimetyylisulfoksidissa ja seosta sekoitettiin. Osaa sekoitetusta seoksesta inkuboitiin 2 tuntia 37°C:ssa ja lopun seoksen annettiin seistä sellaisenaan 4°C:ssa. Kummastakin seoksesta otettiin 100 μΐ ja mitattiin angiotensiini I:n muodostumismäärien ero RIA-menetelmäl1ä 37°:ssa ja 4°C:ssa, minkä jälkeen laskettiin IC5Q-konsentraa-tio (M) 50-prosenttisesti estävä konsentraatio.

Seuraavassa on esitetty osa saaduista tuloksista.

16 89058 I Π) «o E o •h m σι *h »h σ> E iO i .—ii i

Λ ι-l O >1 O O

‘H O M >1 r—I rH

C—t o κ o κ κ m ui O 'f +J lO xj* I-H (0

U

•P

dj co co -p K X i ου tn ^ \ i tsi tsj

* \ / - V V

ffi' >i w m o ►, i i

O -P «N CN

O 0) K K

o E o o

H

(N «N I

K X * 0 o z

1 i O

o o o o o o

Ή I I O

X Z Z CO

G CD ? o o ^ o »a· r·. σι ie ei

•H O -H H -H

10 ·· M (0 (0 ω c ω ω ω 17 89058

Seokset, jotka sisältävät tehokkaina komponentteina yhtä tai useampaa yhdistettä (I) tai niiden suolaa, voidaan valmistaa tabletteina, jauheina, rakeina, granulaatteina, kapseleina, pillereinä, nesteinä, ruiskeina, lääkepuikkoina, voiteina, hap-valmisteena jne. käyttämällä tavanomaisia kantajia, apuaineita jne. tai muita lisäaineita. Ne voidaan antaa oraalisesti (mukaanlukien kielen alla) tai parenteraalisesti.

Lääketieteellisiin preparaatteihin tarkoitettuja kantajia ja apuaineita ovat kiinteät tai nestemäiset toksittomat farmaseuttiset aineet. Tällaisista aineista esimerkkejä ovat laktoosi, magnesiumstearaatti, tärkkelys, talkki, gelatiini, agar, pektiini, arabikumi, oliiviöljy, sesamöljy, kaakaovoi, ety1eeniglykoli jne. ja muut tavallisesti käytetyt aineet.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kliininen annostus voidaan määrittää sopivalla tavalla riippuen hoidettavan potilaan tilasta, painosta, iästä, sukupuolesta jne. Se on yleensä 0,5 - 5000 mg päivässä aikuisille, annettuna yhtenä tai kahtena annoksena (oraalisesti 1 - 5000 mg, parenteraali-sesti: 0,1 - 1000 mg).

Käsillä olevat yhdisteet, jotka ovat luonteeltaan peptidimäi-siä, voidaan tavallisesti antaa farmaseuttisena seoksena, kuten tabletteina, pillereinä, kapseleina jne., jotka on valmistettu käyttämällä kantajia ja apuaineita, joita tavallisesti käytetään oraaliseen tai parenteraaliseen antamiseen, kuten ruiskeena annettaviin farmaseuttisiin peptidiseoksiin.

Vertailuesimerkin yhdisteet valmistettiin tavanomaisilla menetelmillä. (Vertailuesimerkki) 1 (2RS,3S)-3-N-t-butoksikarbonyyliamino-5-metyyli-l-(l-metyy-1 i-tetratsolyylitio)-2-heksanoli.

18 89058 -^ch3

CH

s' ^ CH3 ch2 (CH3)3COCONH-CH-CH-CH2 -> \ / [S] 0 ^ ch3

CH

/ ^ch3

CH? N N

I ji ίί

(CH3)3COCONH-CH-CH-CH2-S

[S] OH CH3 (m/z): 346 (M+ + 1), 290, 246 (KBr) cm"1: 3368, 1688, (CDC13, TMS ^ 0Η3 6 ppm: 0,94 (d, 6H, -CH "" ) ^ CH3 1,42 (s, 9H, t-Bu O- ) 3,40 (d, 2H, -CH CH? -S) I ^

OH

N-N

H ii 3,96 (s, 3H, -S^N'' ) ch3 2.-5

Samalla tavalla kuin kohta 1 edellä, valmistettiin seuraavat: 2. (2RS,3S)-3-N-t-butoksikarbonyyliamino-5-metyy1i-1-(2-tiat-solyylitio)-2-heksanoli 19 8 9058 /CH3

CH

xch3 CH2 N-π

I Jl J

( ch3 ) 3coconh-ch-ch-ch2 -s

[S] OH

3. (2RS,3S)-3-N-t-butoksikarbonyyliamino-5-metyyli-1-[(5-rnetyyli-l,3,4-tiadiatsol-2-yyli)tio]-2-heksanoli.

/CH3

CH

^ch3

CH2 N-N

I JL JL

(CH3)3COCONH-CH-CH-CH2-S ch3

[S] OH

4. ^CH3

CH

/ ^ch3 ch3 ch2 n- (CH 3) 3 COCONH - CH - CH - CH 2 - S 0^

[S] OH

5. ^-ch3

CH

^CH3 CH2 N-η

I JL J

(CH3)3COCONH-CH-CH-CH2-S

: [S] OH CH3 20 89058 6. ^CH3

CH

/ ^ch3 CH2 N-1 (ch3)3coconh-ch-ch-ch2-s

[S] OH

7· /*) ch2 (ch3)3coconh-ch-ch-ch2 -> [S1 0 xz>

CH2 N-N

, λ I Jl N

(ch3)3coconh-ch-ch-ch2-s [S] OH CH -a /l>

CH2 N· 1 — I

(ch3)3coconh-ch-ch-ch2-s

[S] OH

9. /®

CH? N N

I ϊ N

(ch3)3coconh-ch-ch-ch2-s

I I

[S] OH CH2CONH2 21 89058 10- /“Λ /Γ NH ^-CH3

A / A J CH

/ / ^ CH3

CH2 CH2 CH2 N-N

,, Il I 1 8 (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CON3 + H2N-CH-CH-CH2-S'^'N-'

[LJ [L] [S] I I

OH CH3 /O A~ /Ci;

CH2 CH2 CH2 N-N

III 11 8 (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S^s'N/

CL] [L] [S] I I

OH CH3 11. ^cooc2h5 ch2ch ^ I ^ COOC2H5 r—Λ + C y—COOCH2Br -> o- coch2c (cooc2h5)2 12.

ch2-^^ .cooch2ch3 R1-C^ ^ cooch2ch3 13. 2-(l-naftyylimetyyli)-2-[2-okso-2-(tetrahydropyran-4-yyli)etyyli]malonihappo-dietyy1iesteri 22 8 9 0 5 8 14. 2-[2-(3-tienyy1i)-2-oksoetyy1i]-2-(1-naftyy1imetyyli)-malonihappo-dietyyli esteri 15 . 2-[2-(2-tienyyli)-2-oksoetyyli]-2-(1-naftyylimetyy1i) -malonihappo-dietyyliesteri 16. 2-(3-metyyli-2-oksobutyyli)-2-(naftyylimetyyli)-malonihappo-dietyyl iesteri 17. 2-(1-naftyylimetyy1i)-4-fenyyli-4-oksovoihappo 18 CH2 \\ // (4-sykloheksyyli-2- | '—' (1-naftyylimetyyli)- R^-CH-COOH 4-oksovoihappo) 19. 4-sykloheksyyli-2-(1-naftyylimetyyli)-4-oksovoihappo 20. 2-(1-naftyylimetyy1i)-4-okso-4-(tetrahydropyran-4-yy1i)-voihappo 21. 4-(3-tienyyli)-2-(l-naftyylimetyyli)-4-oksovoihappo 22. 4-(2-tienyyli)-2-(1-naftyylimetyyli)-4-oksovoihappo 23. 5-metyyli-2-(l-naftyylimetyyli)-4-oksoheksaanihappo 24. 2-(1-naftyylimetyy1i)malonihappo-monoetyyliesteri COOEt COOEt

COOEt vesip.NaOH I^^COOH

23 89058 25 .

COOEt COOEt oS ' go 26.

COOEt COOH

CONH^Xy ** x^-CONH^xx ^ L II \ vesip. NaOH-EtOH l· II Ί 27 . Γ jl COOEt NH2 COOEt ||Ί

JL xJ > xJ

...- DCC-HOBT

28 .

COOEt .. COOH ..

j^COHH C°NH

C Jl /1 vesip. NaOH-EtOH [Γ lj | 24 89058 29.

ch2

/ \ I

_N NH CO CH COO C2H5 30 ch2

/ \ I

0^_N NH CO CH COOH

31.

ij'^COOEt (Γ^0Η 0 _> o 32 .

jP°H jPBr 0 0 jCBr ί ΓΊΠ

fY**\ rS

U J I cooEt L COOEt EtONa/EtOH J COOEt COOEt 1* k ' 89058 25 / ^ 33.

I^^COOEt 1) vesip.KOH I^COOH

J COOEt 2) H30 © Γ" COOH

C09 V^COOH

-2_ί-> T

. Λ 34·

™2\J

^cooch2ch3

Ri-C

x cooch2ch3 35. 2-(3-propargyyli) -2-(1-naftyy1imetyyli)malonihappo 36. 2-[2-(1,3-dioksolan-2-yy1i)etyyli]-2-(1-naftyy1imetyyli) -malonihappo-dietyyliesteri 37· /"Λ CK2-\/> 1 1 ^

R-L-CH-COOH

38. 2-(l-naftyylimetyyli)-4-pentiinihappo 39. 4-(1,3-dioksolan-2-yyli)-2-(1-naftyy1imetyyli)voihappo 26 89058 40. (2RS,3S)-3-amino-5,5-dimetyy1i-2-hydroksiheksaanihappo ch2c(ch3)3 ch2c(ch3)3 ch2c(ch3)3

I I I

Boc-HN-CHCOOCH3 -=» Boc-HN-CHCHO -» Boc-HN-CH-CHCN

<L) (L) (L) I

OSi(CH3)3 ch2c(ch3)3 -* h2n-ch-ch-cooh

(L) I

OH

41. - 43.

R3 h2n-ch-ch-cooh

(s) I

OH

R3 /CH3 -CH ^ CH3 ch3 -chch2ch3 -(ch2)3ch3 27 89058 44. (2RS,3S)-3-amino-5,5-dimetyyli-2-hydroksiheksaanihappo-isopropyy1iesteri ch2c(ch3)3 ch2c(ch3)3

I I

h2n-ch-ch-cooh -> H2N-CH-CH-COOCH(CH3)2 I l

OH OH

45. - 48.

R3 H2N-CH-CH-COOCH(CH3)2

(S) I OH

R3 __ ^ch3 -(ch2)3ch3 -CH CHo

"'CHS I

-chch2ch3 _ -(ch2)2ch3 49. (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo 50. (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyy1ivoihappo-iso-propyyliesteri 28 89058 51. (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi- 4-sykioheksyy1ivoihappo-metyy- 1iesteri 52. 4-(p-fluori f enoksi )-2-(1-naftyylimetyy1i)voihappo 53. (2RS,3S)-3-N-t-butoksikarbonyy1iamino-4-sykioheksyy1i -1-(l-metyyli-5-tetratsolyylitio)-2-butanoli.

1.4 ml trietyyliamiinia (10 millimoolia) lisättiin liuokseen, jossa oli 2,29 g (10 millimoolia) 3-t-butoksikarbonyyliamino- 4-sykloheksyyli-l,2-oksobutaania ja 1,16 g (10 millimoolia) 1-metyyli-5-merkaptotetratsolia 20 ml:ssa tetrahydrofuraania, ja seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioseok-seen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia ja seos pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännökseen lisättiin eetteri-n-heksaania, jolloin saatiin 1.5 g haluttua yhdistettä valkoisena jauheena.

Sulamispiste: 120 - 136°C

IR (KBr) cm'1: 3356, 2936, 1688, 1530, 1178 NMR (CDCl3): 1,42 (s, 9H, t-BuO-), 3,38, 3,93

Edellä olevan kohdan 43 mukaisella tavalla valmistettiin seuraavat yhdisteet.

54. (3S)-1-(bentsotiatsolyylitio)-3-t-butyylioksikarbonyyli-amino)-1-(2-bentsotiatsolyylitio)-4-sykloheksyyli-2-butanoli 55. (3S)-3-t-butyylioksikarbonyyliamino-4-sykloheksyyli-l-[(5-hydroksimetyyli-1,3,4-tiadiatsol-2-yy1i)tio-2-butanol i 56. (3S)-3-t-butyylioksikarbonyy1iamino-4-sykloheksyyli-1-[(5-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-2-yyli)tio-2-butanoli 57. (3S)-3-t-butoksikarbonyyliamino-4-sykloheksyyli-l-(2-pyrimidinyylitiö)-2-butanoli 29 89058 58. (3S)-3-t-butoksikarbonyy1iamino-4-sykloheksyy1i-1-(1,2,3-tiadiatsol-5-yyli tio)-2-butanoli 59. (3S)-3-t-butoksikarbonyy1iamino-4-sykloheksyyli-1-(1-etyyli-5-tetratsolyyli)tio-2-butanoii 60. (3S)-3-[(N-t-butoksikarbonyyli-L-histidyyli)amino]-4-sykloheksyy1i-1-(2-tiatsolyylitio)-2-butanoii 61. (3S)-3-[(N-1-butoksikarbonyyli-L-histidyy1i) amino]-4-sykloheksyy1i-1-[(5-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-2-yyli)tio]-2-butanoli 62. (3S)-3-[(N-t-butoksikarbonyyli-L-histidyyli) amino]-4-sykloheksyy1i-1-(2-pyrimidinyylitio)-2-butanoli 63. (3S)-3-[(N-t-butoksikarbonyy1i-L-histidyyli) amino]-4-sykloheksyy11-1-(1,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)-2-butanoli 64. (3S)-3-[(N-t-butoksikarbonyyli-L-histidyyli)amino]-4-syk1oheksyy1i-1-[(1-etyyli-5-tetratsolyyli)tio]-2-butanoli 65. (3S)-[(N-t-butoksikarbonyyli-L-histidyyli)amino]-4-sykloheksyyli-l-[(l-metyyli-5-tetratsolyyli)sulfonyyli]-2-butanoli 66. (3S)-(N-t-butoksikarbonyyliamino)-4-sykloheksyyli-l-[(1-metyyli-5-tetratsolyyli)sulfonyyli]-2-butanoli 67. (3S)-3-(N-t-butoksikarbonyyliamino)-5-metyyli-l-nitro- 2-heksanoli 30 8 9 0 5 8

Esimerkki 1 /O /7 <'3,3 / >=/ / vch3

CH2 CH2 CH2 N N

,3 I 1 1 1 j (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CON3 + H2N-CH-CH-CH2-S'^N/

CL] [L] [S] | I

OH CH3 /O /J /<:;

CH2 CH2 CH2 N-N

, , I I I 1 ji

-> (CH3 ) 3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S^l<K

[L] [L] [S] | | OH CH3 (2RS,3S)-3-(N-t-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histi-dyyliamino)-5-metyyli-l-[(1-metyyli-5-tetratsoiyyli)tio]-2-heksanoli t-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidinyylihydratsi-dia (416 mg, 1 millimooli) liuotettiin 10 ml:aan dimetyyli-formamidia. Saatu liuos jäähdytettiin -10°C:een, tähän lisättiin 0,84 ml 4N/(HCl/dioksaania ja 0,2 ml isoamyylinitriittiä samalla sekoittaen, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia -30°C:ssa ja seokseen lisättiin 0,45 ml N-metyyli-morfoliinia samalla jäähdyttäen -40°C:ssa.

Erikseen lisättiin 5 ml 4N-HC1/dioksaania 3-N-t-butoksikarbo-nyyliamino-5-metyyli-1-(1-metyyli-5-tetratsolyylitiö)-2-hek-sanoliin (345 mg) ja seosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa kuiviin ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan dimetyyliformamidia. Tämä liuos lisättiin edellä mainittuun reaktioseokseen ja saatua seosta sekoitettiin yön yli kylmähuoneessa. Reaktioseokseen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia, pestiin vesipitoisella natriumvety- 31 89058 karbonaatilla ja vedellä ja sen jälkeen seos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Saatuun jäännökseen lisättiin kloroformia, jolloin haluttu yhdiste saatiin valkoisena jauheena (75 mg).

Rf = 0,17 (kloroformi:metanoli = 5:1)

Massaspektri (m/z): 630 (M++l) IR (KBr) cm-1; 3312, 1698, 1660, 1642

Esimerkki 2 jT\ /T*t ^C"3

A / A Λ CH

/ ^=/ / / ^ch3 CH2 CH2 CH2 N-1 I I I Π il (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S·^ s' [L] [L] [S] |

OH

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butok-sikarbonyy1i-L-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-5-metyyli-1-(2-tiatsolyylitio)-2-heksanoli.

Rf = 0,58 (kloroformi:metanoli = 5:1)

Massaspektri (m/z): 631 (M++l) IR (KBr) cm-1: 3316, 1698, 1644, 1537

Esimerkki 3 ch2 ch2 ch2 n-/ (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S O^ [L] [L] [S] |

OH

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butok-sikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-5-metyyli-1-[(4-metyylioksatsol-2-yyli)tio]-2-heksanoli.

32 89058

Rf=0,60 (kloroformi:metanoli=5:l)

Massaspektri (m/z): 629 (M++l) IR (KBr) cm-1: 3328, 1696, 1646, 1522, 1170

Esimerkki 4 /O P ,<

CH2 CH2 CH2 N-N

(CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-Sx^'sJ^ ch3 [L] [L] [S] I

OH

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butok-sikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-5-metyyli-1-[(5-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-2-yyli)tio]-2-heksanoli.

Rf=0,41 (kloroformi:metanoli=5:1)

Massaspektri (m/z): 646 (M++l) IR (KBr) cm"1: 3312, 1698, 1663, 1642, 1530

Esimerkki 5 /O p ch2 ch2 ch2 N-n III II 1 (ch3)3coconh-ch-conh-ch-conh-ch-ch-ch2-sxVn^

CL] CL] [S] | I

OH CH3

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butok-sikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-5-metyyli-1-[(l-metyyli-imidatsol-2-yyli)tio]-2-heksanoli.

Rf=0,55 (kloroformi:metanoli=5:1)

Massaspektri (m/z): 628 (M++l) IR (KBr) cm'1: 3324, 1654, 1522 33 8 9 058

Esimerkki 6 /CH3 M y X J ch /\=J / / ^ch3 CH2 CH2 CH2 N-] ( CH 3) 3COCONH - CH - CONH - CH - CONH -CH-CH-CH^S^S^

[L] [L] [S] I

OH

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butok-sikarbonyyli-L-fenyy1ialanyyli-L-histidyyliamino)-5-metyy1i-1-[(2-tiatsolin-2-yyli)ti o]-2-heksanoli.

Rf=0,62 (kloroformi:metanoii = 5:1)

Massaspektri (m/z): 633 (M++l) IR (KBr) cm-1: 3328, 1668, 1558

Esimerkki 7

/8x”XD

CH2 CH2 CH2 n-N

/—^ I I I X N

O N-COCH2-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S^s'N'^

^ CL] [S] I I

OH CH3 (2RS,3S)-3-[N-[1,4-diokso-4-morfolino-2-(1-naftyylimetyyli)-butyyli-L-histidyyliamino)]-4-sykloheksyyli-1—(1-metyyli-5-tetratsolyylitio]-2-heksanoli.

5 ml 4N-HC1/dioksaania lisättiin (2RS,3S)-3-[(N-t-butoksikar-bonyyli-L-histidyyli)amino)]-4-sykloheksyyli-l-(1-metyyli-5-tetratsolyylitio]-2-butanoliin (260 mg, 0,5 millimoolia), seosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa ja sen jälkeen se väkevöitiin alipaineessa kuiviin. Jäännökseen lisät- 34 89058 tiin 160 mg 3-morf oiinokarbonyy1i-2-(1-naftyy1imetyy1i)-pro-pionihappoa ja 5 ml dimetyyliformamidia ja seosta sekoitettiin samalla jäähdyttäen jäissä. Seokseen lisättiin 0,13 ml dife-nyylifosforyyliatsidia ja 0,21 ml trietyyliamiinia ja seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioseokseen lisättiin 50 ml etyyliasetaattia ja seos pestiin vesipitoisella natriumvetykarbonaati1 la ja vedellä, kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatogra-foitiin silikageelillä ja haluttua yhdistettä sisältävä jae väkevöitiin. Jäännökseen lisättiin eetteriä, jolloin saatiin 70 mg haluttua yhdistettä valkoisena jauheena.

Rf = 0,50 (kloroformi:metanoii = 5:1)

Massaspektri (m/z): 732 (M++l), 523 IR (KBr) cm-1: 3328, 1652, 1450, 1116

Esimerkki 8 /8λ™/Θ

CH2 CH2 CH2 N-N

/-\ III II N

Cf VC0CH2-CH-C0NH-CH-C0NH-CH-CH-CH2-S>^N''

[L] [S] I I

OH CH3

Esimerkin 1 mukaisella tavalla saatiin (2RS,3S)-4-sykloheksyy-li-3-N-[N-[l,4-diokso-2-(1-naftyy1imetyyli)-4-(tetrahydropy-ran-4-yyli)butyyli]-L-histidyyliamino]-l-(1-metyyli-5-tetrat-soyylitio)-2-butanoli.

Rf = 0,55 (kloroformi :metanoii = 5:1)

Massaspektri (m/z): 731 (M++l) IR (KBr) cm-1: 3328, 1705, 1660 35 89058

Esimerkki 9

/OA"/D

CH2 CH2 CH2 n N

I I I 1 il (CH3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-S^vN·'

[L] [L] [S] | I

OH CH3 (2RS,3S)-3-(N-t-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histi-dyy1iamino)-4-sykloheksyy1i-1-(1-metyy1i-5-tetratsolyylitio)- 2- butanoli.

Liuos, joka sisälsi 416 mg (1 millimooli) t-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidiinihydratsidia ja 10 ml dimetyyli-formamidia, jäähdytettiin -40°C:een, liuokseen lisättiin 4N-HCl-dioksaania (0,84 ml) ja 0,2 ml isoamyylinitriittiä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia -20 - -30°C:ssa. Seos jäähdytettiin -40°C:een, minkä jälkeen siihen lisättiin N-me-tyylimorfoiiinia. Erikseen lisättiin 5 ml 4N-HCl/dioksaania 3- (N-t-butoksikarbonyyliamino)-4-sykloheksyyli-l-(l-metyyli-5-tetratsoyylitio)-2-butanoliin (385 mg) ja seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan dimetyyliformamidia. Edellä saatu reaktioliuos lisättiin tähän liuokseen ja seosta sekoitettiin yön yli kylmähuoneessa. Reaktioseokseen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia ja seos pestiin vesipitoisella nat-riumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös pyiväskromatogra-foitiin ja haluttua yhdistettä sisältävä jae väkevöitiin. Jäännökseen lisättiin eetteriä, jolloin saatiin 110 mg haluttua yhdistettä valkoisena jauheena.

Rf=0,48 (kloroformi:metanoli=5:l)

Massaspektri (m/z): 670 (M++l) IR (KBr) cm*1: 3328, 1696, 1662, 1642, 1528, 1172 36 89058

Esimerkki 10 /O/OV©

CH2 CH2 CH2 N-N

III X n

(ch3)3COCONH-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CH2-SJK CL] [L] [S] | I

OH CH2CONH2

Esimerkin 9 mukaisesti saatiin (2RS,3S)-3-(N-t-butoksikarbo-nyyli-b-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-4-sykloheksyyli-1-(1-karbamoyy1 imetyyli-5-tetratsolyy1 itiö)-2-butanoii.

Rf=0,27 (kloroformi:metanoli = 5:1)

Massaspektri (m/z): 713 (M++l) IR (KBr) cm-1: 3328, 1696, 1664, 1642, 1170

Esimerkki 11 /O/OV© CH2 CH2 CH2 N-1 III II j (CH 3 ) 3 COCONH - CH - CONH - CH - CONH - CH - CH - CH 2 - S ^ [L] [L] [S] |

OH

Esimerkin 9 mukaisesti saatiin (2RS,3S)-3-(N-butoksikarbonyy-li-L-fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-4-sykloheksyyli-1-(2-(tiatsolyylitiö)-2-butanoli.

Rf = 0,54 (kloroformi :metanoii = 5:1)

Massaspektri (m/z): 671 (M++l) IR (KBr) cm"1: 3336, 1696, 1646, 1528, 1170 37 8 9058

Esimerkki 12 (2RS,3S)-3-[N-[2(R,S)-t-butoksikarbonyyliamino-3-(1-naftyyli)-propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi -4-syk1oheksyy1i-voihappo-isopropyyliesteri /8/C” /5) ch2 ch2 ch2 I I I ^ ch3 (ch3)3coco-nh-ch-conh-ch-conh-ch-ch-co-och [R,S] [L] [S] | [R, S] ^CH3

OH

(R^-: t-butoksikarbonyyliamino, R^: isopropoksi) 4N-HCl/diok-saaniliuosta lisättiin N-Boc histidinyyli(2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyy1iesteriin, (290 mg) ja seosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa. Reaktio-seos väkevöitiin alipaineessa kuiviin. Jäännökseen lisättiin 190 mg Boc-3-(1-naftyyli)-aianiinia ja liuotettiin kuivaan di-metyy1 iformamidiin, minkä jälkeen tähän lisättiin 98 mg syano-fosfonihappodietyyliesteriä ja 122 mg trietyyliamiinia jäissä jäähdyttäen. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Seosta sekoitettiin yön yli, minkä jälkeen siihen lisättiin 50 ml vettä ja seos uutettiin 100 ml :11a etyyliasetaattia. Uute pestiin 5-prosenttisel 1 a natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, jolloin puhdistamaton tuote saatiin värittömänä karamel1imaisena aineena. Tämä tuote py1väskromatografoitiin si 1ikageeli1ä (liuotin: kloroformi:metanoli = 95:5) tuotteen puhdistamiseksi, jolloin saatiin haluttu yhdiste (170 mg) värittömänä jauheena.

Rf = 0,45 (kloroformi:metanoli = 9:l) MS (FAB): 678 (M++l) IRKB-i : 3280, 2930, 1710, 1670 cm

Esimerkit 13 - 27 38 89058

Esimerkin 12 mukaisesti saatiin seuraavat yhdisteet.

/8 /ϋ'Χ5> ch2 ch2 ch2 ,1 I I ^ch3

R1-CH-CONH-CH-CONH-CH-CH-CO-OCH

[R,S] [L] [S] |[R,S] ^ CH3

OH

Esimerkki 13 (2RS,3S)-3-[N-[2-(l-naftyyli)metyyli-3-(1-naftyyliJpropionyy- 1i]-L-histidyy1i]amino-2-hydroksi-4-sykioheksyylivoihappo- isopropyy1iesteri ___ f>CH2- ( Rl : >=/ )

Esimerkki 14 (2RS,3S)-3-[N-[2-etoksikarbonyy1i-3-(1-naftyyli)propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopro-pyyliesteri ( R1 : CH3CH2OCO- )

Esimerkki 15 (2RS,3S)-3-[N-[2-(2-hydroksi-1(S)-metyylietyylikarbamoyyli)- 3-(l-naftyyli)propionyy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-syk1oheksyylivoihappo-isopropyyliesteri CH3

, I

( R1: HOCH2CHNHCO- ) [S] 39 89058

Esimerkki 16 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-4-(3-tienyy1i)-2-(1-naftyylimetyy1i)- 4-oksobutanoyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyy-1ivoihappo-isopropyyliesteri ( R1: j—j— COCH2 )

Esimerkki 17 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-4-(2-tienyy1i)-2-(l-naftyylimetyyli)-4-oksobutanoyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyy-1ivoihappo-isopropyyliesteri < ^ ci ^coch2-

Rf = 0,59 MS (m/z): 687 (M++l) IRvK^rcm-1 : 2932, 1736, 1660 max

Esimerkki 18 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-2 -(N-morfoiinokarbamoyy1i)-2-(l-naftyyli-(propionyyli)-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyyli-voihappo-isopropyyliesteri ( R1: _^N-NHCO- )

Rf = 0,45 MS (m/z): 691 (M++l) IRvKBrcm'1 : 2932, 1736, 1670 me x

Esimerkki 19 40 89058 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-6-metyyli-2-(l-naftyylimetyyli)-4-okso-heksanoyyli]-L-histidyy1i]amino-2-hydroksi-4-sykioheksyy1i-voihappo-isopropyy1iesteri ch3^ ( R1: CHCOCH2- ) ch3'

Rf = 0,54 MS (m/z): 647 (M++l) iRvJ^cm-1 : 2936, 1734, 1712, 1660

TTicl X

Esimerkki 20 (2RS,3S)-3-[N-[2(RS)-4-(l,3-dioksolan-2-yyli)-2-(l-naftyyli-metyyli)-butanoyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi - 4-sykioheksyy 1 ivoihappo-isopropyyliesteri ( R1: [ y-CH2CH2- )

Rf = 0,67 MS (m/z): 663 (M++l) IRvKBrcm_1 : 2936, 1734, 1652 max

Esimerkki 21 (2RS,3S)-3-[N-[2(RS)-4-(l,3-di oksan-2-yy1i)-2-(l-naftyyli-metyyli)butanoyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-syklo-heksyylivoihappo-isopropyyliesteri

CO

)—ch2ch2- )

O

Rf = 0,45 MS (m/z): 676 (M++l) IRvKBrcm~1 : 2936, 1736, 1654 max 4i 89058

Esimerkki 22 (2RS,3S)-3-[N-[2(RS)-4-fenyyli)-2-(1-naftyy1imetyyli)-4-okso-butanoyy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyyli-voihappo-isopropyyliesteri ( r1: coch2- )

Rf = 0,63 MS (m/z): 681 (M+-t-l) IRvKBrcm_1 : 2932, 1736, 1682 max

Esimerkki 23 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-2-(1-naftyy1imetyyli)-3-(2-aminotiatso-4-yy1i)propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyy-1ivoihappo-isopropyyliesteri (Rl; 1 j > H2Nx\S^

Rf = 0,34 MS (m/z): 675 (M++l) IRv^^m-1 : 2988, 1732, 1654 max

Esimerkki 24 (2RS,3S)-3-[N-[(2RS)-2-(1-naftyylimetyyli)-4-pentinoyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyy1ivoihappo-isopro-pyyliesteri ( R1 : HCsCCH2- )

Rf = 0,54 MS (m/z): 601 (M++l) IRvKBrcm”1 : 3312, 1732, 1652 max 42 8 9 058

Esimerkki 25 (2RS,3S)-3-[[N-(2(RS)-3-syano-2-(1-naftyylimetyyli)-propionyy-li]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi -4-syk1oheksyylivoihappo-isopropyyliesteri ( R1 : NC CH2- )

Rf = 0,63 MS (m/z): 602 (M++l) IRv^^em"1 : 2936, 2253, 1738, 1664 ma x

Esimerkki 26 (2RS,3S)-4-syk1oheksyyli-3-[N-[4-sykioheksyyli-1,4-diokso-2-(1-naftyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi -voihappo-isopropyy1iesteri ( R1 : \H /“ CO-CH2- )

Rf = 0,17'—' MS (FAB) (m/z): 687 (M++l) ϊΚ'ϋϊα®-1 : 2936, 2856, 1734, 1662 max

Esimerkki 27 ( 2RS,3S)-4-sykioheksyyli-3-[N-[l,4-diokso-2-(1-naftyylimetyy-1i)-4-(tetrahydropyran-4-yyli)butyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksivoihappo-isopropyyliesteri ( R1 : O Vco-CH2- )

Rf = 0,08^-' MS (m/z): 689 (M++l) IRvmavcn'“1 : 3336' 2936, 1734, 1664

luot X

« 89058

Esimerkki 28 (2RS,3S)-4-sykloheksyyli"2-hydroksi-3-[N-[3-(1-naftyylimetyy-li)-2(R,S)-(2-fenetyyliaminokarbonyyli)propionyyli]-L-histi-dyy li]aminovoihappo-isopropyyliesteri 4N-HC1/ V, s

COOH

m xi r> χ > O X ΛΝΗ jX , DPPA/TEA cf^NC^CONH^CONH^T 'C00\

OH

Rf = 0,36 MS: FAB (POS) (m/z): 710 (M++l), 181 IRvKBrcm_1 : 3316, 2932, 2856, 1738 max

Esimerkki 29 (2RS,3S)-4-sykloheksyyli-2-hydroksi-3-[N-[3- (1-naftyy 1 i)' (2R,S)-1-(1-naftyy1iaminokarbonyyli)propionyyli]-L-histidyy-1i]aminovoihappo-isopropyyliesteri :

BocN^CONH^CHCOO-( H^CONH ^CHCOCr\ J

H i N n i

OPI · 2HC1 OH

Ci οά p fi, p f^YNY^CONH^CONH C°° %° 44 89058

Rf = 0,40 MS: FAB (POS) (m/z): 732 (M++l), 449 iRv^^cm"1 : 2932, 1732, 1670 max

Esimerkki 30 (2RS,3S)-4-sykloheksyy1i-2-hydroksi-3-[N-[(2R,S)-sykioheksy1i-deenimetyy1i-3-(l-naftyyli)propionyyli]-L-histidyyli]aminovoi-happo-isopropyy1iesteri fi & T-HQ/pi X2

BocN^CONH^T C0° ' N CONH 't'’ C0° \

OH H, OH

2HC1

k^COOH

_O_, CO r®, DPP A / TEA L/CONH^ CONhA^00^

T OH

m MS: FAB (POS) (m/z): 671 (M++l), 400 IRvKBrcm_1 : 3320, 2936, 2856, 1738 max

Esimerkki 31 (2RS,3S)-4-sykloheksyy1i-3-[N-[4-sykloheksyy1i-4-hydroksi-2-(1-naftyylimetyyli)-1-oksobutyyli]-L-histidyyli]amino-2-hyd-roksivoihappo-isopropyy1iesteri 45 89058 j3> \-/^^CONH CONH—/ OH '

Noin 20 mg natriumboorihydridiä suspendoitiin 3 ml:aan me-tanolia ja suspensio jäähdytettiin jäissä jäähauteel1 a. Suspensioon lisättiin noin 20 mg (2RS,3S)-4-sykloheksyy1i-3-[N-[4-sykloheksyy1i-1,4-diokso-2-(l-naftyylimetyy1i)-1-butyy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksivoihappo-isopropyyliesteriä ja seosta sekoitettiin 40 minuuttia samalla jäähdyttäen jäissä. Reatkioseokseen lisättiin 10 ml kyllästettyä vesipitoista natriumvetykarbonaattia ja seos uutettiin etyyliasetaatilla (20 ml x 3). Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaati11 a ja liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännös liuotettiin pieneen määrään etyyliasetaattia ja tähän lisättiin n-heksaania, jolloin saatiin haluttu tuote värittöminä kiteinä. Saanto: 17 mg.

Rf=0,43 (kloroformi:metanoli=10:1) MS: FAB (pos.); (m/z): 689 (M++l) IR*KBrcm_1 : 3336, 2936, 1734, 1654 max

Esimerkki 32

Esimerkin 31 mukaisesti saatiin seuraavat yhdisteet.

ojÄ» CONH CONH/ OH \ .. 89058 46 (2RS,3S)-4-sykloheksyy1i-3-hydroksi-3-[N-[4-hydroksi-4-(1-naftyylimetyyli)-l-okso-4-(tetrahydropyran-4-yyli)butyy1i]-L-histidyyli]aminovoihappo-isopropyyliesteri .

Rf = 0,29 (kloroformi : metanoii = 10:1) MS: (m/z): 691 (M++l) IRvKBrcm_1 : 3420, 2936, 1734, 1654 max

Esimerkki 33 (2RS,3S)-3~[N-[2-(l-naftyylimetyy1i)-3-(morfolinokarbonyyli) -propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksiheksaanihappo-iso-propyyliesteri ch2ch2ch3 / \ I -— CH3

0 N-COCH2-CH-His-NHNH2 + H2N-CH-CHCOOCH

\-1 (L) (S) I ^CH3

OH

ch2ch2ch3 / \ I ^-CH3

0 N-COCH2-CH-Hi s-NH-CH-CH-COOCH

\-f (L) (S) I ^ CH3

OH

950 mg N-[2-(1-naftyylimetyy1i)-3-(morfolinokarbonyyli)-propionyyl i]-L-histidiinihydratsidia liuotettiin 25 ml:aan dime-tyyliformamidia, liuokseen lisättiin 1,6 ml 4H HCl-dioksaania (1,6 ml) ja 0,46 ml isoamyylinitriittiä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin -30°C:een ja neutraloitiin 0,92 ml:lla trietyyliamiinia, jolloin saatiin N-[2-(1-naftyylimetyy1i)-3-(morfolinokarbonyyli)propiopyyli]-L-histidiiniatsidin liuos. Tämä atsidiliuos lisättiin tipot- 47 89058 tain ja samalla jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 378 mg (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksiheksaanihappo-isopropyyliesteriä 12 ml:ssa dimetyyliformamidia. Saatua seosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin vesipitoista kyllästettyä natriumvetykarbonaattia ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridilla ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaati1-la. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa ja jäännös pyiväskromatografoitiin puhdistamista varten si 1ikageeli11ä eluoimalla kloroformin ja metanolin (95:5)-seoksel1 a, jolloin saatiin haluttua yhdistettä 160 mg värittömänä jauheena.

Rf = 0,19 (kloroformi:metanoii = 95:5) MS (FÄB); 636 (M++l) IR KBrcm'1 : 3290, 2960, 2930, 1730, 1640 max

Esimerkki 34 (2RS ,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfoiinokarbonyy1i)-propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-metyyliheksaani-happo-isopropyy1iesteri

SCH3 I

ch-ch2ch3 t \ I ^CH3

O N-COCH2-CH-His-NH-CH-CH-COOCH

\-/ (L) (S) | ^ CH3

OH

Reaktio suoritettiin esimerkin 33 mukaisella tavalla käyttämällä lähtöaineena 624 mg N-[2-(l-naftyylimetyyli)-3-(morfo-1inokarbonyyli)propionyyli]-L-histidiinihydratsiinia ja 264 mg (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-metyyliheksaanihappo-isopropyy-liesteriä. Tuote puhdistettiin pyiväskromatograafisesti sili-kageelillä (eluointi1iuos: kloroformi:metanoli=95:5), jolloin saatiin 30 mg haluttua yhdistettä.

48 8 9 058

Rf = 0,29 (kloroformi :metanoii = 9:1) MS (FAB); 650 (M++l) IR KBrcm"1 : 3300, 2970, 1730, 1640 max

Esimerkit 35 - 38

Esimerkin 33 mukaisesti saatiin seuraavat yhdisteet.

Esimerkki 35 (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfoiinokarbonyy1i)-propionyy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-metyyliva1 eri -aanahappo-isopropyyliesteri C*2\)> /cH3

^—f CH

/—\ | ^CH3 /CH3

O N-COCH2-CH-His-NH-CH-CH-COOCH

N-( (L) (S) | ^CH3

0H

Sp.: 100 - 101°C Rf = 0,21 MS (FAB); 636 (M++l) IR ^cm'1 : 3300, 2970, 1730, 1660, 1630 max

Esimerkki 36 '-f CH2CH2CH2CH3 I /CH3

O N-COCH2~ CH-His-NH-CH-CH-COOCH

U) (S) I ^ CH3

OH

49 89058 (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfoiinokarbonyy1i) -propionyy1i]-L-histidyy1i]amino-2-hydroksiheptaanihappo-iso-propyy1iesteri

Sp.: 85 - 87°C Rf=0,18 MS (FAS); 650 (M++l) IR KBrcm-1 : 3290, 2940, 1735, 1640 max

Esimerkki 37 .—..

cH20 ο„2/λ I \=J ^ ch3

O N-COCH2~ CH-His-NH-CH-CH-COOCH

N-f (L) (S) I ^CH3

OH

(2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfolinokarbonyy1i) -propionyy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-fenyy1ivoihappo-isopropyyliesteri MS (FAB); 684 (M++l) IR KBrcm_1 : 1738, 1646, 1112 max

Esimerkki 38 ___ ρ·0 c„2^3 O N-COCHo-CH-His-NH-CH-CH-COOCH-3 N-/ (L) (S) (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfolinokarbonyy1i) -propionyyli]-L-histidyy1i]amino-2-hydroksi-4-fenyy1ivoihappo-metyyliesteri MS (FAS); 656 (M++l) IR KBrcm-1 : 1748, 1646, 1116 max 50 8 9 0 5 8

Esimerkki 39 (2RS,3S)-3-[n-[4-(p-fluori fenoksi )-2-(l-naftyy1imetyy 1 i) -butyryy1i]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykioheksyy 1 i-voihappo-isopropyyliesteri ( a) N-[4-(p-f1uorifenoksi )-2 -(l-naftyy1imetyy1i)butyryy1i ] - L-histidiini-metyyliesteri 20 ml dimetyy1iformamidia lisättiin seokseen, jossa oli 1,5 g 4-(p-fluorifenoksi)-2-(1-naftyylimetyyli)voihappoa, 0,6 g 1-hydroksibentsotriatsolia ja 1,1 g L-histidiini 2HCl-suolaa, ja seos neutraloitiin 1,3 ml :11a trietyy1iamiinia. Seokseen lisättiin 1,0 g N,N’-disykloheksyy1ikarbodi-imidiä, minkä jälkeen sitä sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Liukenematon aines poistettiin ja dimetyyliformamidi poistettiin tislaamalla alipaineessa. Jäännökseen lisättiin 100 ml mety-leenikloridia ja seos pestiin kyllästetyllä vesipitoiselle natriumvetykarbonaati11 a ja vedellä. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tämän jälkeen pyl-väskromatografoitiin puhdistamista varten si 1ikageeli11ä. Saatiin 1,7 g haluttua yhdistettä valkoisena jauheena. Sulamispiste: 65 - 69°C IR (cm-1): 1746, 1656, 1508, 1250 MS: 490 (M++l) (b) N-[4-(p-f1uorifenoksi)-2-(1-naftyylimetyyli)butyryyli]-L-histidiinihydratsidi 1,7 g edellä (a) saatua N-[4-(p-fluorifenoksi)-2-(1-naftyyli-metyyli )butyryy1i]-L-histidiiniä liuotettiin 40 ml:aan meta-nolia, lisättiin 0,6 ml hydratsiinihydraattia ja sen jälkeen seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioliuos väkevöitiin alipaineessa, jäännökseen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia ja sen jälkeen seos pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin haluttu tuote (1,5 g) valkoisena jauheena.

si 89058

Sulamispiste: 87 - 91°C IS (cm-1): 3292, 1654, 1508, 1250 (c) (2RS,3S)-3-[N-[4-(p-fluorifenoksi)-2-(1-naftyylimetyyli)-butyryyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyyli-voihappo-isopropyyliesteri 489 mg N-[(p-fluorifenoksi)-2-(1-naftyylimetyyli)butyryyli]-L-histidiini-hydratsidia liuotettiin 18 ml:aan dimetyyliform-amidia, tähän lisättiin -40°C:ssa 0,84 ml 4N HCl-dioksaania ja sen jälkeen 0,2 ml isoamyylinitriittiä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia -20 - -30°C:ssa. Reaktioseos jäähdytettiin -40°C:een, siihen lisättiin 0,34 ml N-metyylimorfoiii-nia ja sen jälkeen 243 mg (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-syklo-heksyylivoihappo-isopropyyliesteriä, minkä jälkeen reaktioseos kaadettiin 100 ml:aan jäävettä, uutettiin metyleenikloridi11 a ja pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Tämän jälkeen puhdistettiin pyiväskromatografoimal1 a silika-geelillä. Saatiin 300 mg haluttua yhdistettä valkoisena jauheena (Rf 0,52) (300 mg).

Rf-arvo: ohut 1evykromatografia (Merck, precoat plate silica gel 6OF254) eluointi1iuoksena (kloroformi-metanoli=5:1).

Esimerkki 40 (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-morfoiinokarbonyy1i)-propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykloheksyyli-voihappo-isopropyyliesteri 480 mg N-[(2-(1-naftyylimetyyli)-3-morfoiinokarbonyyli)-pro-pionyyli]-L-histidiini-hydratsidia liuotettiin 13 ml:aan dime-tyyliformamidia, tähän lisättiin -20°C:ssa 0,8 ml 4N HCl-dioksaania ja 0,17 ml isoamyylinitriittiä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin -30°C:een ja neutraloitiin trietyy1iamiini 11 a, jolloin saatiin N-[2-(l-naftyylimetyyli)-3-(morf oiinokarbonyy1i)propionyyli]- 52 89058 L-histidiiniatsidin liuos. Tämä atsidiliuos lisättiin tipot-tain ja näissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 243 mg (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyy-liesteriä 25 ml:ssa dimetyyliformamidia, ja seosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin kyllästettyä vesipitoista natriumvetykarbonaattia ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridi11 a ja kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa. Jäännös puhdistettiin py1väskromatografoimal1 a si 1ikageeli 11 ä eluoiden kloroformin ja metanolin (95:5) seoksella. Näin saatiin 350 mg haluttua yhdistettä värittömänä jauheena (Rf=0,34) (350 mg).

Sulamispiste: 103 - 107°C MS (FAB): 690 (M++l)

Esimerkki 41 (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-morfoiinokarbonyyli ) -propionyyli]-L-histidyyli]amino-2-hydroksi-4-sykioheksyyl i-voihappo-metyyliesteri

Reaktio suoritettiin esimerkin 40 mukaisella tavalla käyttämällä N-[2-(1-naftyylimetyyli)-3-(morfolinokarbonyyli)-pro-pionyyli]-L-histidiinihydratsidia (480 mg) ja 243 mg (2RS,3S)- 3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-metyyliesteriä. Tuote puhdistettiin pyiväskromatograafisesti silikageeli11ä (eluointiliuos: kloroformi-metanoli=95:5), jolloin saatiin 150 mg haluttua yhdistettä värittömänä jauheena (Rf=0,64). Sulamispiste: 83 - 87°C MS (FAB): 662 (M++l)

Esimerkki 42 N-(2-bentsyyli-3-fenyylipropionyyli)-L-histidyyli-(2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykioheksyy1ivoihappo-isopropyyliesteri 53 89058 (a) N-tert-butoksikarbonyyli-L-histidyyli-(2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyyliesteri 2,44 g (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyyliesteriä ja 2,75 g N-tert-butoksikarbonyyli-L-histi-diiniä liuotettiin 130 ml:aan dimetyyliformamidia. Tähän lisättiin jäissä jäähdyttäen 1,85 g syanofosforihappodietyy1i-esteriä ja 2,17 g trietyyliamiinia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia jäissä jäähdyttäen ja tämän jälkeen huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa ja jäännökseen lisättiin vettä. Seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin 10-prosenttisel1 a vesipitoisella sitruunahapolla, natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesi-liuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaati11 a. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatografoimalla (si 1ikageeli) eluoimalla kloroformin ja metanolin (97:3) seoksella, jolloin saatiin haluttu yhdiste jauheena (700 mg).

NMR (CDCl3) δ (ppm): 0,6-2,0 (m, 33H), 2,9-3,1 (m, 1H), 4,,08 (d, 1H, J=3,1Hz), 4,1-4,6 (m, 1H), 4,9-5,2 (m, 1H), 5,6-5,9 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,56 (s, 1H) MS: 480 (M+) (b) N-(2-bentsyyli-3-fenyylipropionyyli)-L-histidyyli- (2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyy-liesteri 120 mg N-tert-butoksikarbonyyli-L-histidyyli-(2RS,3S)-3-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyyliesteriä liuotettiin 60 ml:aan 4N HCl-dioksaania ja seosta sekoitettiin 40 minuuttia huoneen lämpötilassa. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa kuiviin ja jäännökseen lisättiin 60 mg 2-bent-syyli-3-fenyylipropionihappoa. Tämän jälkeen seos liuotettiin 3 ml:aan dimetyyliformamidia ja lisättiin jäissä jäähdyttäen 41 mg syanofosforihappodietyy1iesteriä ja tämän jälkeen tipot- 54 89058 tain 53 mg trietyyliamiinia. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia jäissä jäähdyttäen ja sen jälkeen yön yli huoneen lämpötilassa. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökseen lisättiin vettä. Saatu seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin 5-prosenttisella suolahapolla, natriumvety-karbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa. Jäännös puhdistettiin py1väskromatograafisesti (si 1ikageeli) eluoimalla kloroformin ja metanolin (95:5) seoksella, jolloin saatiin 70 mg haluttua yhdistettä värittömänä jauheena (Rf=0,61).

Sulamispiste: 91 - 94°C MS (FAB): 603 (M++l)

Esimerkki 43

Esimerkin 1 mukaisesti saatiin (3S)-3-(N-t-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyy1i-L-histidyyliamino)-5-metyyli-1-nitro-2-heksanoli

Esimerkit 44 - 51

Esimerkin 8 mukaisesti valmistettiin seuraavat yhdisteet.

(3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[l,4-diokso-4-morfoiino-2-(1-naf-tyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-(2-tiatsolyyli-tio)-2-butanoli (3S)-4-sykioheksyyli-3-[[N-[1,4-diokso-4-morfoiino-2-(l-naf-tyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-l-[(5-metyyli-1,3,4-tiadiatsol2-yyli)tio]-2-butanoli (3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[l,4-diokso-4-morfoiino-2-(1-naf-tyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-(2-pyrimidinyyli-tio)-2-butanoli 55 8 9058 (3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[1,4-diokso-4-morfolino-2-[l-naf-tyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-(1,2,3-tiadiatsol- 5-yyli]-2-butanoli (3S)-sykioheksyyli-3-[[N-[l,4-dioksi-2-(l-naftyylimetyyli)-4-(3-tienyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-(1-metyy1i-5-tet-ratsolyyli]-2-butanoii (3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[(1,4-diokso-4-morfolino )-2-(1-naf -tyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-[(1-etyyli-5-tetratsolyy-1i)tio]- 2-butanoli (3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[(1,4-diokso-4-morfolino)-2-(l-naf-tyylimetyyli)butyyli]-L-histidyyli]amino]-1-[(1-metyyli-5-tet-ratsolyyli)sulfonyyli]-2-butanoli (3S)-4-sykloheksyyli-3-[[N-[(l,4-diokso-4-morfolino)-2-(l-naf-tyylimetyyli)butyy1i]-L-histidyyli]amino]-1-nitro-2-butanoli

Esimerkit 52 - 54

Esimerkin 9 mukaisesti valmistettiin seuraavat yhdisteet.

(3S)-1-(2-bentstiatsolyy1itio)-3-[(N-t-butoksikarbonyy1i-L-fenyyliaianyyli-L-histidyyli)amino]-4-sykloheksyyli-2-butanoii (3S)-3-[(N-t-butoksikarbonyyli-L-fenyyliaianyyli-L-histidyy-1i)amino]-4-sykloheksyyli-1-[(5-hydroksimetyyli-1,3,4-tiadiat-sol-2-yyli)tio]-2-butanoli (3S)-3-[[(N-butoksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidyy-1i)amino]-4-sykloheksyyli-l-nitro-2-butanoli 56 89058

Esimerkki 55 (3S)-3-[N-(t-butoksikarbonyyli-1-fenyylialanyyli-L-histidyy-1i)-N-metyyli]amino-4-sykioheksyyli-2-hydroksibutanonihappo-isopropyyliesteri

Esimerkki 56 (3S)-3-[[N-[3-(morfolino)karbonyy1i]-2-(l-naftyylimetyyli)-propionyyli]-L-histidyyli]-N-metyyli]amino-4-syk1oheksyyli-2-hydroksivoihappo-isopropyyliesteri

Esimerkki 57

Isopropyyli (3S)-3-(t-butyylioksikarbonyy1i-L-fenyylialanyyli-L-histidyyli)amino-2-sykloheksyyli-2-hydroksibutyraatti 0,48 g isopropyyli (3S)-3-(t-butyylioksikarbonyyli-L-histidyyl i)-amino-2-sykioheksyyli-2-hydroksibutyraattia liuotettiin 10 ml:aan 4N HCl-dioksaania. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännös liuotettiin 4 mlraan dimetyyliformamidia. Liuos jäähdytettiin jäillä, minkä jälkeen liuokseen lisättiin peräkkäin 0,52 ml trietyyliamiinia, 0,29 g t-butyylioksikarbonyyl i-fenyylialaniinia ja 0,26 g difenyylifosfatidyyliatsi-dia. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen siihen lisättiin 30 ml kyllästettyä vesipitoista natriumvety-karbonaattia ja saatu orgaaninen kerros pestiin 30 ml :11a vettä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaati11 a ja liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännös puhdistettiin pyiväskromato-grafoimalla si 1ikageeli11ä (CHCl3:metanoli = 100:1). Tuote kiteytettiin uudelleen eetteri-n-heksaanista, jolloin saatiin haluttu yhdiste valkoisena jauheena (505 mg).

Rf: 0,33 (kloroformi:metanoli=10:1) MS (FAB): 628 (M++l) IR (KBr) (cm-1): 3432, 2936, 1724, 1662 57 89058

Vertai 1uesimerkki 57 /2/δ

cH2 CH? N — N

| I h H

(CH3 )3C0C°NH-CH-C0NH-CH-CH-CH'>-S n/N

[L] [S] | I

OH CH3 (2RS,3S)-3-N-[(Na-l-butoksikarbonyyli-L-histidyyli)amino]-4-sykloheksyyli-1-(1-metyyii_5_te^ratsoiyylitiö)-2-butanoli 15 ml 4N-HC1/dioksaania lisättiin 3-N-t-butoksikarbonyyli-amino-4-sykloheksyy1i-1-(l-metyyli-5-tetratsolyylitio)-2-butanoliin (1 g; 2,6 mil 1imoolia). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti, minkä jälkeen se väkevöitiin alipaineessa kuiviin. Jäännökseen lisättiin 663 mg N-t-butoksikarbonyy-1i-L-histidiiniä ja 350 mg 1-hydroksibentsotriatsolia ja 20 ml dimetyy1iformamidia. Seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,37 ml trietyyliamiinia ja 600 mg N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Liukenematon aines poistettiin suodattamalla. Lisättiin 100 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen seos pestiin vesipitoisella natriumvetykarbonaati1 la ja vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin. Jäännökseen lisättiin eetteri-n-heksaania, jolloin saatiin 520 mg haluttua yhdistettä valkoisena jauheena.

Rf=0,45 (kloroformi:metanoli=5:1) MS (m/z): 523 (M++l), 423 IR (KBr) cm"1: 3364, 2936, 1698, 1646, 1526, 1172 Esimerkki 58

Esimerkin 33 mukaisesti saatiin (2RS,3S)-3-[N-[2-(l-naftyy^1 met yyl i )-3-morf oi inokarbonyy 1 i )propionyyl i ]-L-histidyy 1 i ]artU no-5,5-dimetyy1i-2-hydroksiheksaanihappo-isopropyyli esteri· Sulamispiste: 101 - 104°C

58 89058 (Yhteenveto vaimistusesimerkeistä) _S-i-E-2-S.3-B-4- /T\ A^i Ai -CH3 λ=/ AAA Ks xch3 ^-λ ÄA /CH3 v_v 2 AAA KA vch3 O VN-CO-CH2 cooch3 CA ό (*) cooo<cI33 / \ Al^A zCH3 o n-co-ch? I I -ch?ch3 cooch^ x_y vch3 , (-ch2-r3) / \ A^! -CH3

o n-co-ch2 I -CH3 COOCH

w | ^CHj -chch2ch3 (-ch2-r3) f \ A^>1 /CH3 -CH3

O N-CO-CH2 II -CH COOCH

W ^CH3 CH3 / \ A^A -CH3 O N-CO-CH2 |[ -CH2CH2CH3 COOCHv ^ CH3 59 89058 ^ A -"CH3

0 N-CO-CH2 I if I COOCH

N-/ ^ ch3 n-co-ch2 cooch3 r^N^i r\ ^CH3

(ch3)3coconh I IT 1 H COOCH

^ch3 ch2 ch3ch2oco- ch3 hoch2chnhco- " ” ” ,_r-COCHo- .,, nr Π Π coch2- 60 89058 ¢/ \-NHCO- \_/ ch3^ chcoch2- ch3^ Γ VcH2-CH2- " /-0 ( y CH 2 - CH 2 -

V. O

{]ycocH2- N-CH2-

I I

h2n^s^ HCSC-CH2- " " ncch2- " " 6i 89058 0-CO-CH2- " COCH g - " " ^~~^-ch2ch2nhco " ^>v.NHCO-

Γ ijf »t M »I

^H~^~ CH-CH2- ^ΪΡ)— ch-ch2- " "

OH

0/CH3

-CH CH2-S-TZ

ch3 0/- ch3 n ,

-ch ^ II I

CH3 CH2-S

62 89058 0/- CH3 N-jpCHs

"CH\ J J

CH3 CH2-S

0^CH3 n —n

-ch J II

^ ch3 ch2-s“^ch3 0^, CH3 N-n

-CH ^ J H

ch3 ch2-s“^n^ ch3

(CH3)3COCONH- (Cj) -CH ^ 3 J J

c/ \i-co-ch2 f^Y^l ΙηΊ ch2-s-tz

V_y 2 SA

(/ yCO-CH2 (^] CH2-S-TZ

(ch3)3coconh- l^jj (^h^) ch2-s-tz (ch3)3coconh- [^] ch2-s-tz ch2conh2 63 8 9058 Λ Λ ΛΊ

(CH3)3COCONH- Γ Μ ί HJ CH2-S

(ch3)3coconh- (^) ch2-s^J|^j)

(ch3)3coconh- fil [h] II (I

ch2-s/\s/^-oh o ^n-co-ch2 [h] l| Ι x> / CH2-S'Axs/

/-λ Λτ^ί r"S N—N

o n-co-ch2 I N J I H J J| II

n—/ yy ch2-s^\s/nch3 G-co'cH2 00 0 CK2.sx)

ό ji-c°-cH2 rTl hn I I

' f ch2-s^\ s„n

I-r coch2 rY

(1^ JJ MM CH2-S-TZ

64 89058 6(h) ch3

COOCH

I ^ ch3 ch3 (ch3)3coconh- Γ 7) ΓηΊ cooch^ CH3 ^ ch3 /—\ r^Sr^i ΓηΊ / ch3

o N-COCH2 I I \X“N- COOCH

\_v I " ch3 ch3

Edellä olevan esimerkin 55 yhdiste valmistettiin seuraavasti: 0,21 g t-butyylioksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli-L-histidyyli-hydratsidia liuotettiin 3 ml:aan dimetyyliformamidia. Seos jäähdytettiin -60°C:een, siihen lisättiin 0,43 ml 4H-HCl/l,4-dioksaania ja 0,10 ml isoamyylinitriittiä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia -20°C:ssa. Reaktioseos jäähdytettiin -60°C:een, tähän lisättiin peräkkäin 0,30 ml N-me-tyylimorfoiiinia ja 5 ml dimetyyliformamidi1iuosta, joka sisälsi (3S)-4-sykloheksyy1i-2-hydroksi-3-metyyliaminobutaani-happo-ispropyyliesterin HCl-suolaa, ja seosta sekoitettiin 1 päivä 4°C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin 50 ml natriumvetykar-bonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja seos uutettiin etyyliasetaatilla (100 ml x 3). Orgaaninen liuos pestiin peräkkäin 50 ml :11a vettä ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen kuivattiin vedettömällä natriumsulfaati11 a ja liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatograafisesti (si 1ikageeli) (kloroformi:metano-li=100:l - 10:1). Käsittelemällä eetteri-n-heksaanilla saatiin haluttu yhdiste valkoisena jauheena (0,12 g).

Rf: 0,39 ( k 1 or of ormi : metanol. i = 10 :1) 65 89058

Edellä olevan esimerkin 56 mukainen yhdiste saatiin seruaavas-ti : 100 mg (3S)-3-[N-(t-butyylioksikarbonyyli-L-histidyyli)-N-metyyli]amino-4-sykioheksyyli-2-hydroksibutaanihappo-isopro-pyyliesteriä liuotettiin 3 ml:aan 4N-HCl/dioksaania ja liuosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännös liuotettiin 3 ml:aan dimetyyliform-amidia. Liuos jäähdytettiin jäillä, siihen lisättiin 0,11 ml trietyyliamiinia, 76 mg 3-(morfoiinokarbonyyli)-2-(1-naftyy1i-metyyli)propionihappoa ja 0,05 ml difenyylifosfatidyyliatsi-dia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 1 päivä huoneen lämpötilassa. Reaktioseokseen lisättiin 30 ml natriumvetykarbonaa-tin kyllästettyä vesiliuosta ja seos uutettiin etyyliasetaatilla (50 ml x 3) ja orgaaninen kerros pestiin 30 ml :11a vettä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaati1 la ja sen jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatograafisesti si 1ikageeli1lä (kloroformi:metano-li = 100:l - 20:1). Käsittelemällä eetter-n-heksaani11 a saatiin 50 mg haluttua yhdistettä valkoisena jauheena.

Rf: 0,44 (kloroformi:metanoli=10:1).

Claims

66 8 9 058

1. Menetelmä valmistaa reniini-inhibiittoreina käytettäviä 2-(L-alanyyli-L-histidyyliamino)-butanoli- johdannaisia, joiden kaava I on li—NH ch2~^ N ^ ch2r2 ch2-r3 (I) R ! - CH - CONH - CH - CON - CH - CH - R 4 L ^ jossa R^ on ^7^\_0-(CH2)n- (n = 1 tai 2); halogeeni -/ 2) /—\ O N-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); \_/ ^~(CH2)n- (n = 1 tai 2); 4. suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkoksikarbonyy1iami-no; 5) (CH2)n- 6. suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg aikoksikarbonyy1i; 7) -CONH- suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg aikyleeni-OH; 67 89058 8) -1 -H-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); ^3^ 9) \ O N-NHCO-; v_y 10. suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyylikarbonyyli-(CH2)n- (n = 1 tai 2);

11. I—0\ y~ (CH2)n~ (n = 1 tai 2); 12 ) /— 0\ (^ ^— (CH2 )n" (n = 1 tai 2); 13) (/ \\—co-(CH2)n- (n = 1 tai 2); ..·;· 14) N -Π (CH2)n“ (n = 1 tai 2); n2h^^s^

15. Cj^-Cg alkynyyl i-(CH2)n- (n = 1 tai 2);

16. NC-(CH2)n- (n = 1 tai 2);

17. C3-C7 sykloalkyyli-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); 18) / \ O \-CO-(CH2)n- (n = 1 tai 2); o 19) r\ // \\— (CH2)n-NHCO- (n = 1 tai 2); 68 89058 20 ) ^^ NHCO-

21. C3-C7 sykloalkylideeni-C^-Cg alkynyyli;

22. C3-C7 sykioalkyy1i-C^-Cg alkyleeni, joka voi olla substi-tuoitu hydroksilla; tai 23) /-\ O V— Cj_-Cg alkyleeni, joka voi olla substituoitu \_/ hydroksilla; R2 on 1. fenyyli; tai 2. naftyyli R3 on 1. suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyyli; 2. sykloheksyyli; tai 3. fenyyli; R4 on 1. nitrometyyli; 2) -COORc (Rc on suoraketjuinen tai haarautunut C^-Cg alkyyli); 69 89058 3) -(CH2)-S-Rd (0)n (n = O, 1 tai 2); Rd on tetratsolyyli, joka voi olla substituoitu alemmalla alkyylilla, karbamoyyli-alempi alkyylilla, tai tarkoittaa heterosyklistä ryhmää " -"U —[f -jj— C^-Cg alkyyli; c) N-N —^ —4)— ci~c6 alkyyli; d) O Cj^-Cg alkyyli; e) N- O /N-^ 'S '-- g) ; tai .·· - h) - N -I- il : : ^ /N S 70 89058 R5 on 1. vety; tai

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (2RS,3S)-3-[N-[2-(1-naftyylimetyyli)- 3-(morfoiinokarbonyyli)propionyyli]-L-histidyyli]-amino-2-hydroksi-4-sykloheksyylivoihappo-isopropyyliesteri . 72 89058

2. C^-Cg alkyyli, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava II on j- NH ch2-An^ ch2r2 (II) Rx-CH-CONH-CH-COOH jossa R^ ja R2 on edellä määritelty, saatetaan reagoimaan yhdisteen tai sen C-terminaalisesti aktiivisen esterin kanssa, jonka kaava III on CH2R3 NH-CH-CH-R4 (III) I I r5 oh jossa R3, R4 ja R5 on edellä määritelty, b) yhdiste, jonka kaava IV on CH2R2 I (IV) Ri-CH-COOH jossa Rl ja R2 on edellä määritelty, saatetaan reagoimaan yhdisteen tai sen C-terminaalisesti aktiivisen esterin kanssa, jonka kaava V on 7i 89058 fi-NH ch4 ^ ch2 n / ch2-r3 (V) h2n-ch-con-ch-ch-r4 I I r5 oh jossa R3, R4 ja R3 on edellä määritelty, c) yhdiste, jonka kaava VI on li-NH CHX ^ ch2 n ^ ch2r2 ch2-R3 (VI) Ri-iH-CONH-CH-CON-iH-CH-CH 1 \ / r5 o jossa Rj_, R2, R3 ja R5 on edellä määritelty, saatetaan reagoimeen yhdisteen kanssa, jonka kaava VII on Rd-SM (VII) jossa Rd on edellä määritelty ja M on vety tai alkalimetalliatomi ja jolloin edellä olevan menetelmän mukaan saadusta yhdisteestä poistetaan tarvittaessa suojaryhmä.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (2RS,3S)-3-[N-[2-(1,4-diokso-4-morfo-lino-2-(l-naftyylimetyyli)-3-(butyyli)-L-histidyyliamino)] -4-sykloheksyy1i-1-(1-metyyli-5-tetratsolyy1itio]-2-butanoli.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (2RS,3S)-3-[N-t-butoksikarbonyyli-L- fenyylialanyyli-L-histidyyliamino)-4-sykloheksyyli-1-(1-metyy-1i-5-tetratsoiyylitiö]-2-butanoli. 73 89058