FI85857C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 1,3,4,9-tetrahydropyrano /3,4-b/indol-1-aettiksyraderivat. - Google Patents

Description

1 85857

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 1,3,4,9-tetra-hydropyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappojohdannaisten valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien, terapeut tisesti käyttökelpoisten 1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indoli-1-etikkahappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava (I), x;; R4 CH2

15 r5 H R CH2-COOH

jossa R1 on alempi alkyyli, jossa on 1-4 hiiliatomia, R2 ja R3 ovat vetyjä tai R2 ja R3 ovat liittyneet yhteen rakenteeksi 20 -CH=CH-CH=CH- ja muodostavat fenyyliryhmän yhdessä niiden hiiliatomien kanssa, joihin R2 ja R3 ovat liittyneet, R4 ja R5 merkit-25 sevät vetyä, alkyyliä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai halogeenia, sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

Tämän keksinnön mukaisesti saatavien indolijohdan-30 naisten on todettu osoittavan käyttökelpoisia farmakody-naamisia ominaisuuksia ilman että ilmenee ei-toivottavia sivuvaikutuksia. Tämän vaikutuksen merkittäviä tuntomerk-λ. kejä ovat anti-inflammatoriset ja analgeettiset vaikutuk set.

35 85857

Huolimatta siitä, että vaikkakin viimeisten neljän vuosikymmenen aikana on saavutettu edistystä kehitettäessä aineita kipua aiheuttavien ja tulehduksellisten tilojen hoitamiseksi, on silti olemassa tarve tehokkaista ai-5 neista, joilla ei ole sivuvaikutuksia, joita liittyy tähän tarkoitukseen nykyisin käytettyihin terapeuttisiin aineisiin.

Läheisin esillä olevaan keksintöön liittyvä tekniikan taso käy ilmi seuraavasta: 10 Demerson ja muut osoittivat US-patenttijulkaisussa 3 939 178, että 1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indoleilla ja l,3,4,9-tetrahydrotiopyrano[3,4-b]indoleilla on anal-geettinen ja anti-inflammatorinen vaikutus, mutta niissä ei ole esillä olevan keksinnön mukaisia substituentteja. 15 Läheisesti näihin liittyviä ovat US-patenttijulkaisut 3 974 179 ja 3 843 681.

Hakijan US-patenttijulkaisussa 3 974 179 kuvataan yhdisteitä, jotka ovat rakenteitaan läheisiä uusille kaavan (I) mukaisille yhdisteille, mutta joissa 4-asemassa 20 on alkyylisubstituentti.

Uusilla kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on yllättävät ja arvokkaat ominaisuudet US-patenttijulkaisussa 3 974 179 kuvattuihin yhdisteisiin nähden, jotka ovat rakenteitaan läheisiä uusille kaavan (I) mukaisille yhdis-25 teille. Tämä perustuu siihen, että uusissa kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä 1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indoli -1-etikkahapporungon 4-asemassa on joko bentsyyli- tai allyylisubstituentti. Näiden yhdisteiden rakenteeseen liittyvää aktiivisuutta on käsitelty yksityiskohtaisesti ' 30 julkaisussa Journal of Medicinal Chemistry 31 (1988) 2211 - 2217.

Em. julkaisun perusteella on selvää, että uudet ... kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa 4-substituentti on allyyli tai bentsyyli, omaavat erityisen korkean anal-: 35 geettisen aktiivisuuden, jollaista aktiivisuutta ei kui- 3 85857 tenkaan ole sellaisilla rakenteellisesti läheisillä yhdisteillä, joissa 4-substituentti on propyyli, vinyyli, homoallyyli, fenyyli tai fenetyyli. On erityisesti huomattava, että yhdiste, jossa 4-substituentti on propyyli 5 (ks. yhdiste 19 sivun 2213 taulukossa), ei itse asiassa ole lainkaan aktiivinen, kun taas vastaava yhdiste, jossa 4-substituentti on allyyli (ks. yhdiste 15 sivun 2213 taulukossa), omaa voimakkaan analgeettisen aktiivisuuden. Yhdisteet 15 ja 19 tosin kuuluvat pyrano[3,4-b]indolisar-10 jän sijasta tetrahydrokarbatsolisarjaan. Em. julkaisun ja siinä esitettyjen farmakologisten tulosten perusteella alan ammatilaiselle on kuitenkin ilmeistä, että sekä tet-rahydrokarbatsolisarjassa että pyrano[3,4-b]indolisarjässä 4-allyyli- tai 4-bentsyylisubstituentti on erityisen 15 kriittinen aktiivisuudelle. Tämän substituentin oleellinen rakenteellinen piirre on π-systeemi, jossa on ainakin kaksi sp2- hybridoitua hiiliatomia liittyneenä asemaan 4 metyleeniryhmän välityksellä. US-patenttijulkaisussa 3 974 179 esitetyillä, 4-asemassa alkyylillä substituoi-20 dullia yhdisteillä ei ole tätä rakenteellista piirrettä.

Edellä esitetyn perusteella on katsottava, että uudet kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa 4-substituentti on allyyli tai bentsyyli, omaavat oleellisesti paremmat ominaisuudet kuin US-patenttijulkaisussa "25 3 974 179 esitetyt, 4-asemassa alkyylillä substituoidut yhdisteet.

Esillä olevan keksinnön eräänä edullisena piirteenä on yhdisteiden valmistus, joilla on kaava (II) - 30 ✓ r3 I· X,

rS I CH2-C02H

4 85857 jossa R2 ja R3 ovat vety tai R2 ja R3 ovat liittyneet yhteen rakenteeksi -CH=CH-CH=CH- ja muodostavat fenyyliryhmän yhdessä niiden hiiliatomien 5 kanssa, jolloin R2 ja R3 ovat liittyneet, R4 ja R5 ovat vety, alempi alkyyli, jossa on 1-4 hiiliatomia tai halogeeni, sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistus.

Esillä olevan keksinnön vielä eräänä piirteenä on 10 kaavan (II) mukaisten yhdisteiden valmistus, joissa R2 ja R3 ovat vety ja R2 ja R3 ovat liittyneet yhteen rakenteeksi -CH=CH-CH=CH- ja muodostavat fenyyliryhmän yhdessä niiden hiiliatomien 15 kanssa, joihin R2 ja R3 ovat liittyneet, R4 on vety tai 5-, 6- tai 7-halogeeni, R5 on vety, metyyli, etyyli tai propyyli, sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistus.

Edullisimpia esillä olevan keksinnön mukaisesti 20 saatavissa yhdisteitä ovat seuraavat: 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano-[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 7- kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-pro-penyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 25 l-etyyli-7-fluori-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-pro- penyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 8- kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-5-metyyli-4-(fenyylimetyyli )-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 1,8-dietyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(2-propenyyli)-pyrano-: 30 [3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-propenyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 7-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 35 6-bromi-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; ϋ 85857 5-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyy-limetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-1-etikkahappo; 7,8-dikloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyy-li)pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 5 7-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyy- limetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyylimetyyli )-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo; ja 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(2-propenyyli)-8-propyyli-10 pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien, kaavan (I) mukaisten indolijohdannaisten valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.

15 Uusia indolijohdannaisia voidaan valmistaa seuraa- vien menetelmien avulla.

6 85857

Menetelmä A: 3 „χ

Ac · X·· Α/ί H ch2- c- och3 r J, (III) (IV) (VI) X'] 1} RA CH2 R2 C-OCH3 r I Δ 2) och3 (VII) —^°-5-► AXAX α> R5 ^ R xch2-cooh

Menetelmä B: -,

RJ

:: .,kur“'L·: Xc/i

R I CH

H I 2 (IX) κ I

Cl H

(VIII) 3 <» X, cn2

··; , 0ΠΜ KaavanI

^ 0H menetelmää A , .

• R ^ mukainen (VI) yhdiste I, 7 85857

Menetelmä_C: *3 X, jSO * ζ-L’I «κι_*

R3 I

(XI) H <ni> *3 R3 Ä „2 r‘ c«2 ^XJ 'C1,2C"2 —Ti-°3>3 ► η£ΚΪ^ “λ

rX>/ I R I

κ H H (X) (XIII) I Noudatetaan

X menetelmää B

Kaavan (I) muk ai se t yhdi stee t.

Menetelmä A kuvaa menetelmää kaavojen (I) ja (II) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jonka menetelmän mukaan kondensoidaan substituoitu isatiini (III), jossa 4 5 R ja R ovat samoja kuin kaavoissa (I) ja (II) on määritelty, karboksyylihappoesterin enolaatin (IV) kanssa, ' 2 3 . jossa R ja R ovat samoja kuin kaavoissa (I) ja (II) on määritelty, jolloin saadaan hydroksiesterivälituote (V): 85857 x*3 r ™2

5 R CH-CO CH

ί ,£ς£" J

R H

(V) 10 Välituote (V) pelkistetään sitä eristämättä käyttämällä hydridiä, esimerkiksi LiAlH., jolloin saadaan /3 -subs- 2 3 4 5 tituoitu tryptofoli (VI), jossa R , R , R ja R ovat samoja kuin edellä on määritelty, β -substituoidun trypto- 15 folin (VI) reagoittaminen 3-metoksi-2-alkaanihapon metyy- liesterin (VII) kanssa, jossa R^ on sama kuin kaavoissa (I) ja (II) on määritelty, Lewis-hapon, esimerkiksi boori-trifluoridieetteraatin läsnäollessa, ja sen jälkeen suoritettu alkalinen hydrolyysi tuottaa kaavojen (I) ja (II) 20 mukaiset yhdisteet. Kondensoimalla, vaihtoehtoisesti, substituoidun β-ketoesterin kanssa ja suorittamalla sen jälkeen hydrolyysi siten kuin Demerson ja muut ovat esittäneet US-patentissa 3 939 178 saadaan kaavan (I) ja (II) mukaiset yhdisteet.

25 Menetelmää A käytettiin esimerkkien 1 ja 8-37, tau lukko II, mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi. Tarvittavat isatiinit III valmistettiin siten kuin Frank D. Popp on esittänyt aikakauslehdessä Advances in Heterocyclic Chemistry, 18, s 1-58 (1975).

20 Menetelmä B kuvaa menetelmää kaavojen (I) ja (II) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jonka menetelmän mukaan alkyloidaan substituoitu indoli-3-etikkahapon me- 4 5 • tyyliesteri VIII, jossa R ja R ovat samoja kuin kaavois sa (I) ja (II) on määritelty, orgaanisen halogenidin (IX) 2 3 kanssa, jossa R ja R ovat samoja kuin kaavoissa (I) ja 9 85857 (II) on määritelty, jolloin saadaan c>6-substituoitu indo- 2 3 4 5 li-3-etikkahappoesteri (X), jossa R , R , R ja R ovat samoja kuin edellä on määritelty. Esteri (X) pelkistetään esimerkiksi LiAlH^:n avulla, jolloin saadaan edellä ole-5 vassa menetelmässä A kuvattu -substituoitu tryptofoli (VI). Yhdiste (VI) muutetaan kaavojen (I) ja (II) mukaiseksi yhdisteeksi edellä kuvatun menetelmän A avulla.

Menetelmää B käytettiin esimerkin 2, taulukko II, mukaisen yhdisteen valmistamiseksi.

10 Menetelmä C kuvaa menetelmää kaavojen (I) ja (II) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jonka menetelmän 4

mukaan reagoitetaan substituoitu indoli (XI), jossa R

5 ja R ovat samoja kuin kaavoissa (I) ja (II) on määri- 2 telty, ja substituoitu happokloridi (XII), jossa R ja 3 15 R ovat samoja kuin kaavoissa (I) ja (II) on määritelty, jolloin saadaan substituoitu 3-asyyli-indoli (XIII), jos-2 3 4 5 sa R , R , R ja R ovat samoja kuin edellä on määritelty. Yhdisteen (XIII) toisiintuminen menetelmässä B kuvatuksi välituotteeksi, o(,-subs tatuoiduksi indoli-3-etikkahapon 20 esteriksi (X) aikaansaadaan käyttämällä tallium(III)nitraattia menetelmän mukaan, jonka ovat esittäneet E.C.

Taylor ja muut aikakauslehdessä J. Amer. Chem. Soc. 98, 3037 (1976).

. Menetelmää C käytettiin esimerkkien 4 ja 5, tau- \ * 25 lukko II, mukaisten yhdisteiden valmistamiseen.

• ’·' Vaihtoehtoisesti voidaan soveltaa sellaista mene- telmää, joka on selostettu US-patenttijulkaisussa * m Λ 4 585 877, esillä olevan keksinnön mukaisten yhdistei-• '-· den valmistamiseen, joilla on kaavat (I) ja (II) .

: ' Tässä käytetty termi "alkyyli" tarkoittaa suora- ketjuisia alkyyliradikaaleja, joissa on 1-6 hiiliatomia, sekä haarautuneita alkyyliradikaale ja, joissa on 3-4 hiiliatomia, ja käsittää metyylin, etyylin, propyylin, • . 35 isopropyylin, butyylin, isobutyylin, pentyylin, heksyylin ja niiden kaltaiset.

10 85857 Tässä käytetty termi "alempi alkyyli" tarkoittaa suoraketjuisia alkyyliradikaaleja, joissa on 1-4 hiili-atomia, ja haarautuneita alkyyliradikaaleja, joissa on 3-4 hiiliatomia, ja käsittää metyylin, etyylin, nropyylin, 5 isopropyylin, butyylin, isobutyylin ja niiden kaltaiset.

Tässä käytetty termi "halogeeni" tarkoittaa fluoria, klooria, bromia ja jodia.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet muodostavat suoloja sopivien farmaseuttisesti hyväksyttävien epäorgaanisten 10 ja orgaanisten emästen kanssa. Näillä suolajohdannaisilla on samat vaikutukset kuin alkuperäishapolla ja ne sisältyvät tämän keksinnön piiriin. Kaavan (I) mukainen happo muunnetaan oivallisin saannoin vastaaviksi farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloiksi neutraloimalla mainittu happo 15 sopivalla epäorgaanisella tai orgaanisella emäksellä. Suoloja annetaan samalla tavalla kuin alkuperäisiä happoyhdis-teitä. Sopivia epäorgaanisia emäksiä näiden suolojen muodostamiseksi ovat esimerkiksi alkalimetallien, esimerkiksi natriumin, kaliumin, magnesiumin, kalsiumin ja niiden 20 kaltaisten hydroksidit, karbonaatit, bikarbonaatit tai alkoksidit. Edullinen suola on natriumsuola. Sopivia orgaanisia emäksiä ovat seuraavat amiinit: alemmat mono-, di- ja tri-alkyyliamiinit, joiden alkyyliradikaaleissa on enintään 3 hiiliatomia, kuten metyyliamiini, dimetyyli-25 amiini, etyyliamiini, di- ja trietyyliamiini, metyylietyy-liamiini ja näiden kaltaiset; mono-, di- ja trialkanoli-amiinit, joiden alkanoliradikaaleissa on enintään 3 hiili-atomia, kuten mono-, di- ja trietanoliamiini; alkyleeni-diamiinit, jotka sisältävät enintään 6 hiiliatomia, ku-30 ten heksametyleenidiamiini; sykliset tyydytetyt tai tyydyttämättömät emäkset, joissa on enintään 6 hiiliatomia, kuten pyrrolidiini, piperidiini, morfoliini, piperatsiini ja näiden N-alkyyli- ja N-hydroksialkyylijohdannaiset, kuten N-metyylimorfoliniini ja N-(2-hydroksietyyli)nioeridii-35 ni samoin kuin pyridiini. Lisäksi voidaan mainita vastaa- 11 85857 vat kvaternääriset suolat, kuten tetra-alkyyli- (esim. tetrametyyli-), alkyyli-alkanoli- (esim. metyylitrimetan- oli- ja trimetyyli-monoetanoli-) ja sykliset ammonium-suolat, esimerkiksi N-metyylipyridinium-, N-metyyli-N-5 (2-hydroksietyyli-morfolinium-, Ν,Ν-dimetyylimorfolinium-, N-metyyli-N-(2-hydroksietyyli)-morfolinium- ja N,N-dimet-yylipiperidiniumsuolat, joille on tunnusomaista hyvä vesiliukoisuus. Periaatteessa voidaan kuitenkin käyttää kaikkia ammoniumsuoloja, jotka ovat fysiologisesti soveltuvia. 10 Muuntamiset suoloiksi voidaan suorittaa monilla talla alalla tunnetuilla menetelmillä. Esimerkiksi kysymyksen ollessa epäorgaanisten emästen suoloista, on edullista liuottaa kaavan (I) mukainen happo veteen, joka sisältää ainakin yhden ekvivalenttimäärän hydroksidia, karbo-15 naattia tai bikarbonaattia. Reaktio suoritetaan edullisesti veden kanssa sekoittuvassa orgaanisessa liuottimes-sa, joka on inertinen reaktio-olosuhteille, esimerkiksi metanolissa, etanolissa, dioksaanissa ja näiden kaltaisessa veden läsnäollessa. Esimerkiksi natriumhydroksidin, nat-20 riumkarbonaatin tai natriumbikarbonaatin tällainen käyttäminen antaa natriumsuolan liuoksen. Liuoksen haihdutus tai polariteetiltaan keskinkertaisemman, veteen sekoittuvan liuottimen, esimerkiksi alemman alkanolin, kuten butano-lin, tai alemman alkanonin, esimerkiksi etyylimetyyliketo-• 25 nin lisääminen antaa kiinteän suolan, jos tällaista muo toa toivotaan.

Amiinisuolan valmistamiseksi liuotetaan kaavan (I) mukainen happo sopivaan liuottimeen, jonka polariteetti on joko keskinkertainen tai alhainen, esimerkiksi etano-30 liin, asetoniin, etyyliasetaattiin, dietyylieetteriin ja bentseeniin. Sen jälkeen liuokseen lisätään ainakin ekvivalentti määrä toivottua kationia vastaavaa amiinia. Ellei muodostunut suola saostu, voidaan se yleensä saada kiinteään muotoon lisäämällä sekoituskelpoista laimennusainet-35 ta, jonka polariteetti on alhainen, esimerkiksi bentsee-niä tai petroolieetteriä, tai haihduttamalla. Jos amiini 12 85857 on verraten haihtuva, voidaan ylimäärä poistaa helposti haihduttamalla. On edullista käyttää oleellisesti ekvivalentit määrät vähemmän haihtuvia amiineja.

Suoloja, joissa kationi on kvaternäärinen ammonium, 5 valmistetaan sekoittamalla kaavan (I) mukainen happo ekvivalentin määrän kanssa vastaavaa kvaternääristä ammonium-hydroksidia vesiliuoksessa, jonka jälkeen vesi haihdutetaan .

Esillä olevaan keksintöön sisältyvät diastereoiso-10 meerit, joissa 4-substituentti on joko cis- tai trans-asemassa etikkahappoketjussa asemassa yksi.

Tähän keksintöön sisältyvät myös kaavan (I) mukaisten yhdisteiden optiset isomeerit, jotka johtuvat niiden sisältämistä asymmetrisistä keskuksista. Tällaisia isomee-15 rejä voidaan saada oleellisesti puhtaassa muodossa klassisten erotusmenetelmien avulla tai steerisesti kontrolloidun synteesin avulla. Näihin kuuluu erityistapauksena 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano-/3,4-b/indoli-l-etikkahapon hajottaminen optisiksi iso-20 meereikseen erottamalla vastaava ^(1S)-endc^-l, 7,7-tri- metyyli-bisykloZ2.2.l7heptan-2-yyliesteri ja suorittamalla sen jälkeen emäksinen hydrolyysi.

Anti-inflammatorinen vaikutus

Kaavan (I) mukaisten pyranoindolietikkahappojohdan-. 25 naisten hyödylliset anti-inflammatoriset vaikutukset osoi tetaan farmakologisissa standardikokeissa, esimerkiksi kokeessa, josta käytetään nimitystä apuaineella aiheutetun turvotuksen ehkäisy (Preventative Adjuvant Edema).

Tämän kokeen tarkoituksena on määrittää koestetta-30 vien lääkkeiden kyky osoittaa nopeaa anti-inflammatorista vaikutusta rotissa. Tätä koetta käytetään primäärisenä seulontana anti-inflammatorisia lääkkeitä varten.

Koe-eläinlaji : Käytetään urospuolisia Sprague Dawley-rottia 35 (180-200 g). Eläimet saavat vapaasti juoda vettä, mutta i: i3 85857 niille ei anneta ravintoa 18 tuntiin ennen kokeiden suoritusta.

Lääkevalmisteet ja annostaminen:

Freund'in täydellistä apuainetta (complete adju-5 vant) valmistetaan suspendoimalla 5 mg tapettua ja kuivattua Mycobacterium butyricum'ia (Difco) 1 ml:an mineraaliöljyä. Koestettavat yhdisteet liuotetaan tai sus-pendoidaan niiden liukoisuuden mukaan liuokseen, joka sisältää 0,5 % Tween 80 tislatussa vedessä. Primääristä seulo lontaa varten annetaan kaikkia lääkkeitä mahaan ulottuvan letkun avulla mielivaltaisen annostuksen ollessa 25 mg/kg, p.o. nestetilavuuden ollessa 0,5 ml/100 g kehon painoa 10 eläimen ryhmille.

Menetelmän yksityiskohtia: 15 Menetelmä on oleellisesti sellainen, jonka Wax ja muut ovat selostaneet aikakauslehdessä J. Pharmacol. Exp. Ther., 192, 166-171 (1975). Ryhmille rottia ruiskutetaan ihonsisäisesti vasempaan takakäpälään 0,1 ml Freund'in täydellistä apuainetta. Koeyhdistettä tai liuotinta an-20 netaan välittömästi ennen apuaineen antamista, 24 tuntia ja 48 tuntia apuaineen antamisen jälkeen (päivät 0, 1 ja 2). Ruiskutetun takakäpälän tilavuus mitataan ennen apuaineen ruiskuttamista ja 24 tuntia viimeisen lääkeannon jälkeen (päivä 3) pulssin tilavuusmittarin (plethysmomet-. 25 rin) (Buxco Electronics Inc.) avulla. Takakäpälän tila vuuksien päivänä 0 ja päivänä 3 välinen ero edustaa turvotusta lavuutta. Etodolac'ia (25 mg/kg, po) käytetään positiivisena kontrollina.

Tulosten esitys: 30 Keskimääräinen turvotustilavuus (ilmaistuna suuree na ml + SEM) lasketaan jokaiselle ryhmälle ja lääkkeen : antama prosentuaalinen suoja lasketaan seuraavasti:

Suojaus % = _(c-t) 100_ 35 c 14 85857

Jossa c on keskimääräinen turvotustilavuus liuottimena käsitellyille (0,5 % Tween 80 tislatussa vedessä) vertailukohteille ja t on keskimääräinen turvotustilavuus lääkkeellä käsitellylle ryhmälle.

5 Analgeettinen vaikutus:

Lisäkokeelle, jota käytettiin esilläolevan keksinnön mukaisten yhdisteiden hyödyllisyyden määrittämiseksi, käytetään nimitystä: lääkkeiden vaikutukset fenyylibentso-kinonin avulla aiheutettuihin vääntelehtimisiin hiirissä. 10 Tämän kokeen tarkoituksena on määrittää koestetta- vien lääkkeiden kyky ehkäistä niiden hiirien tuskallinen reagointi, joihin on ruiskutettu kemiallista ärsykettä. Tätä koetta käytetään primäärisenä seulontana sekä perifeerisestä että keskushermostoon vaikuttavia analgeettisia 15 lääkkeitä varten.

Koe-eläinlaji:

Urospuoliset sveitsiläiset albinohiiret (15-25 g) . Eläimet paastoavat 18 tuntia ennen niiden käyttämistä kokeissa, mutta ne saavat vapaasti nauttia vettä.

20 Lääkevalmiste ja annostus: Lääkkeet liuotetaan tai suspendoidaan niiden liukoisuuden mukaan liuokseen, joka sisältää 0,5 % Tween 80 tislatussa vedessä. Niitä annetaan mahaan asti ulottuvan letkun avulla nestetilavuuden ollessa 5 ml/kg. Primääris-25 tä seulontaa varten annetaan kaikkia lääkkeitä mielivaltaisen annostuksella 25 mg/kg, p.o. 10 hiiren ryhmälle.

Menetelmän yksityiskohtia: Käytetään sen menetelmän muunnosta, jonka Siegmund ja muut ovat esittäneet aikakauslehdessä Proc. Soc. Exp.

30 Biol. Med., 95, 729-731 (1957). Viiden hiiren ryhmille annostellaan koestettavaa yhdistettä tai liuotinkontrol-lia. 60 minuuttia myöhemmin eläimiin ruiskutetaan i.p. 0,3 ml/20 g kehon painoa 0,02 %:sta fenyylibentsokinonin (PBQ; 2-fenyyli-l,4-bentsokinoni) liuosta ja hiiret pannaan 35 erillisiin tarkkailuhäkkeihin. Jokaisen hiiren suorittama 15 85857 kiemurtelu- tai vatsan vääntelehtimisliikkeiden lukumäär-seuraavien 15 minuutin aikana lasketaan. Koe uusitaan toisella 5 hiiren ryhmällä ja vääntelehtimisten keskimääräinen lukumäärä hiirtä kohti 10 hiiren ryhmälle lasketaan.

5 Tulosten esitys: Lääkkeellä käsiteltyjä ryhmiä ja liuottimena käsiteltyjä ryhmiä verrataan ja lääkkeellä saatu prosentuaalinen suojaus lasketaan seuraavasti: 10 prosentuaalinen suojaus = (c-t) 100 c jossa c = vääntelehtimisten keskimääräinen lukumäärä vertailuryhmässä jossa t = vääntelehtimisten keskimääräinen lukumäärä koestettavalla lääkkeellä käsitellyssä ryhmässä.

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden käyt tökelpoisuuden määrittämiseksi käytetystä lisäkokeesta käytetään nimitystä "Randall Selitto"-koe rotilla.

Tämän kokeen tarkoituksena on arvioida perifeeriseen ja keskushermostoon vaikuttavien lääkkeiden kyky ehkäistä 20 rottien reaktio tulehtuneeseen käpälään kohdistuneeseen tuskalliseen ärsytykseen.

Koe-eläinlaji: Käytetään urospuolisia Sprague Dawley-rottia (180-200 g). Eläimet paastoavat yön yli ennen lääkkeen antamista.

25 Lääkevalmiste ja annostus:

Freund’in täydellistä apuainetta (FCA) valmistetaan suspendoimalla 5 mg tapettua ja kuivattua mycobacterium-butyricum1ia (Difco) yhteen ml:aan mineraaliöljyä. Koeyh-disteet liuotetaan tai suspendoidaan niiden liukoisuuden 30 mukaan liuokseen, joka sisältää 0,5 % Tween 80 tislatussa vedessä. Niitä annetaan mahaan asti ulottuvan letkun · kautta neste-tilavuudeltaan 0,5 ml/100 g kehon painoa 10 eläimen ryhmille.

Menetelmän yksityiskohtia: 35 10 rottaa käytetään ryhmää kohti. Menetelmä on oleellisesti sellainen, jonka Randall ja selitto ovat 16 85857 selostaneet aikakauslehdessä Arch. Int. Pharmacodyn. III, 409 (1957) ja laite, jota käytetään puristuksen kohdistamiseen käpälään (analgesia-mittari rotan käpälää varten, Ugo Basile, Corneriä, Italia), on sen laitteen muunnos, 5 jota Gilfoil ja muut ovat selostaneet aikakauslehdessä J. Pharmacol. 142, 1 (1963). Koje on pohjimmiltaan laite, joka kohdistaa voiman, joka suurenee vakionopeudella. Voimaa tarkkaillaan jatkuvasti piirtimen avulla, joka liikkuu suoraviivaista asteikkoa pitkin ja voima mitataan 10 grammoissa. Tulehdusreaktio aiheutetaan rottien vasempaan takakäpälään ruiskuttamalla ihonsisäisesti 0,1 ml Freund' in apuainetta. Koeyhdistettä tai liuotinta annetaan 24 tuntia apuaineen antamisen jälkeen. Kipukynnys (ääntely) määritetään tuntia myöhemmin käsiteltyjen ryhmien ja ver-15 tailuryhmien rottien tulehtuneessa käpälässä.

Tulosten esitys ja aktiviteetin tunnusmerkit:

Jokainen eläin, jolla saatu lukema on 1,5 kertaa suurempi kuin vertailuryhmän keskimääräinen lukema, katsotaan vastaanottavaiseksi käsittelylle (sillä on analgeet-20 tinen vaikutus). Niiden eläinten lukumäärä, jotka osoittavat analgeettista vaikutusta, määritetään sen jälkeen jokaisessa ryhmässä.

ED,-q (annos joka aiheuttaa kivun tunnottomuuden 50 %:lla eläimistä) käyttäen vähintään 3 annosta määri-25 tetään sen jälkeen menetelmällä, jonka Litchfield ja

Wilcoxon ovat esittäneet aikakauslehdessä J. Pharmacol. Exp. Ther., 96, 99-113 (1949).

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä saavutetut tyypilliset tulokset edellä mainituissa ko-30 keissa ovat seuraavanlaiset: ti 17 85857

Taulukko I

Substituoidut 1,3,4,9-tetrahydropyrano/3,4-b7~ indoli-l-etikkahapot R^ A, ** CH2

PA

R H R1 CH2~ C00h

Esim. Apuaineella Fenyylikinonilla aiheu- Randall Selitto-koe aiheutettu tettu vääntelehtiminen rotassa x) turvotuksen hiirissä x) ehkäisy x) 1 37 (1,9) (0,003) 2 - — - 3 - 19 - 4 15 86 (0,5) 5 4 - - δ (3,2) (18) - 7 37 15 - 10 (7,8) (7) 60b 11 55 11 — 12 32a (9,5) (1) 13 36 2 — 14 46 21 — 15 30 25 — 16 (3) (5,5) (0,012) 17 44 11 — 18 15 (3,2) (0,8) 19 52 (3,3) (1,6) 20 34 11 — 1. 8585?

Esim. Apuaineella Fenyylikinanilla aiheu- Randall Selitto-koe aiheutettu tettu vääntelehtiminen rotassa x) turvotuksen hiirissä x) ehkäisy x 21 40 11 — 22 47 (4,7) (0,25) 23 0 (1,4) - 24 2 0 - 25 - (3,1) — 26 - 10 - 27 — 24 — 29 - (3,2) - 34 - (1,4) - x) Mainitut luvut ovat joko prosentuaalinen ehkäisy annostuksen ollessa 25 mg/kg tai ED^q ilmoitettuna suureena mg/kg jälkimmäinen sulkeissa.

a koestettuna käyttäen annostusta 10 mg/kg b koestettuna käyttäen annostusta 5 mg/kg Tämän keksinnön mukaisiin yhdisteisiin liittyvien sivuvaikutusten puuttuminen osoitetaan akuuttisen myrkyllisyyden standardikokeiden avulla, joita R.A. Turner on selostanut aikakauslehdessä "Screening Methods in Pharmacology" Academic Press, New York ja Lontoo, 1965, s. 152-163, sekä antamalla yhdistettä pitkähkön ajan lämminverisille eläimille.

Käytettäessä tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä anti-inflammatorisina ja analgeettisina aineina lämminverisille eläimille, annetaan niitä oraalisesti, sellaisenaan tai annostusmuodoissa, so kapseleissa tai tableteissa, sekoitettuna farmakologisesti hyväksyttävien ek-sipienttien, kuten tärkkelyksen, maitosokerin jne kanssa, tai niitä annetaan oraalisesti liuosten muodossa sopivis- i.

is 85857 sa liuottimissa, kuten kasviöljyissä tai vedessä. Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa oraalisesti lääkeainetta hidastetusti luovuttavassa annostusmuodossa tai ihon kautta voiteissa tai laastareissa. Tämän keksin-5 nön mukaisia yhdisteitä voidaan myös antaa peräpuikkojen muodossa.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden, joilla on kaava I, annostus vaihtelee valitun erityisen yhdisteen ja lääkkeen antomuodon mukaan. Lisäksi se vaihtelee käsitit) telyn alaisena olevan potilaan mukaan. Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä annetaan yleensä konsentraatiotasolla, joka tuottaa vaikutuksen ilman haitallisia sivuvaikutuksia. Nämä tehokkaat anti-inflammatoriset ja analgeettiset konsentraatiotasot saavutetaan yleensä lääkemäärän olles-15 sa välillä l,0^ug - 500 mg/kg päivää kohti, jolloin edullinen määrä on l,0^ug - 100 mg/kg päivää kohti. Edullinen anti-inflammatorinen annosalue on 1 mg - 20 mg/kg b.i.d. (bis in die=kahdesti päivässä). Edullinen analgeettinen annosalue on välillä l^ug - 4 mg/kg b.i.d.

20 Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa yhdessä ei-steroidisten anti-inflammatoristen lääkeaineiden, kuten asetaminofeenin, ibuprofeenin ja aspiriinin kanssa ja/tai ooppiumiin perustuvien kipulääkkeiden kuten kodeiinin, oksikodonin ja morfiinin kanssa yhdessä taval-25 listen kofeiiniannosten kanssa. Käytettäessä yhdessä muiden lääkkeiden kanssa säädetään esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden annostusta edelliset huomioonottaen.

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on myös kuumelääkevaikutus.

30 Seuraavat esimerkit valaisevat lähemmin keksintöä.

Esimerkki^1 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahappo (isomeeri Δ) (I» R1 - CoHn, R2 ja R3 = -CH~CH-CH=CH-, R4 ja 35 r5 . _H) 20 85857

Vaihe 1 3-fenyylipropionihapon metyyliesterin valmistus Seosta, joka sisälsi 118,2 g (788 mmol) 3-fenyyli-propionihappoa, 5,9 g rikkihappoa ja 100 ml metanolia, 5 kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen yön yli. Ohut-kerroskromatografia-analyysi (TLC) osoitti, ettei lähtö-materiaalia ollut enää läsnä ja reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 200 ml:aan etyylieetteriä, pestiin 100 ml:11a natriumbikarbonaattia, kuivattiin mag-10 nesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 124,4 g (96,3 %) esteriä nahanruskeana öljynä.

IR (paljas) 3020, 2940, 1730 cm-1 Vaihe_ 2 15 (fenyylimetyyli)-lH-indoli-etanolin valmistus

Liuokseen, joka sisälsi litiumdi-isopropyyliamii-nia tetrahydrofuraani/sykloheksaani-seoksessa (2,2 M, 136,4 ml, 300 mmol) ja joka oli jäähdytetty -78°C:seen, lisättiin typpiatmosfäärin alaisena liuos, joka sisälsi 20 3-fenyylipropionihapon metyyliesteriä (44,6 g, 272 mmol) (valmistettu vaiheessa 1) 150 ml:ssa kuivaa tetrahydro-furaania. Seosta hämmennettiin 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 20,0 g (136 mmol) isatiinia 300 ml:ssa tetrahydro-·'· , furaania, lisättiin tipottain ja seoksen annettiin lämme- 25 tä huoneenlämpötilaan 3 tunnissa. Seos "tukahdutettiin" . .500 ml:11a kyllästettyä ammoniumkloridiliuosta ja kerrokset erotettiin; vesikerros pestiin eetterillä (2 150 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutokset kuivattiin magnesium-sulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin 30 saatiin 71,8 g ruskeata öljyä. 3-fenyylipropionihapon me-tyyliesteri poistettiin tislaamalla (95°C/1,5 mm) ja jäännös (50,6 g) liuotettiin 300 ml:aan kuivaa tetrahydro-furaania ja lisättiin hitaasti jäähdytettyyn (0°C) seokseen, joka sisälsi 18,56 g, 489 mmol litiumalumiinihydri-35 diä 225 ml:ssa tetrahydrofuraania. Seoksen annettiin läm- 21 85857 raetä huoneen lämpötilaan ja sen jälkeen sitä kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 3 tuntia. Seos jäähdytettiin sen jälkeen jäävesikylvyssä ja siihen lisättiin hitaasti 250 ml vettä. Suolat koottiin suodattamalla ja 5 pestiin eetterillä (3 x 400 ml). Orgaaninen kerros erotettiin suodoksesta ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 35,5 g punaisenruskeata öljyä. Tämä aine puhdistettiin pikakroma-tografian avulla (30 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, 10 piihappogeeli), jolloin saatiin 16,02 g (46,9 %) trypto-folia ruskeana öljynä.

NMR(CDC13) ^8,08 (s, 1H), 7,65 (d, 1H, J=7,5 Hz), 7,36 (d, ]H, J=7,5 Hz), 7,18 (m, 7H), 7,01 (d, 1H, J=2,0 Hz), 3,84 (d, 2H, J=5,0 Hz), 3,43 (dt, 1H, J=7,5 Hz), 15 3,10 (d, 2H, J=8,0 Hz), 1,79 (s, 1H) IR (paljas) 3420, 3020 cm^

Vaihe_3_ 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano^/3,4-b/indoli-l-etikkahapon metyyliesterin 20 valmistus

Liuosta, joka sisälsi 15,97 g (63,6 mmol) /?-(fen-yylimetyyli)-lH-indoli-etanolia (valmistettu vaiheessa 2), 9,95 g (76 mmol) metyylipropionyyliasetaattia ja 1,,60 g p-tolueenisulfonihappoa 500 ml:ssa bentseeniä, kuumennet-25 tiin palautus jäähdyttä jää käyttäen 3 tuntia ja vesi koot-• ' tiin Dean & Stark’in lauhdeastiaan. Reaktioseos jäähdy tettiin huoneen lämpötilaan ja pestiin 5 %:lla natriumbikarbonaatin vesiliuoksella (200 ml), vedellä (200 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja 30 haihdutettiin, jolloin saatiin 21,37 g raakaa tuotetta.

Diastereomeerit erotettiin pikakromatografiän avulla (13-%: nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli), jolloin saatiin isomeeriä A (korkeampi Rf-arvo, 2,26 g, 9,8 %) ja isomeeriä B (alempi Rf-arvo, 2,23 g, 9,8 %) keltaisina . 35 öljyinä.

22 858S7

Isomeeri_A

1H NMR(CDC13) b 9,17 (s, 1H), 7,42-7,00 (m, 9H), 3,80 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 3,01 (d, 1H, J=17 Hz), 2,80 (d, 1H, J=Hz), 2,85 (m, 1H), 2,05 (q, 2H, J=7,5 Hz), 5 0,90 (t, 3H, J=7,5 Hz)

IR(KBr) 3420, 1725 cm'1 Isomeeri B

ΧΗ NMR(CDC13) $> 8,88 (s, 1H) , 7,38-7,00 (m, 9H) , 3,84 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,04 (d, 1H, J=17,5 Hz), 2,78 (d, 10 1H, J=17,5 Hz), 3,15 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 2,20 (q, 2H, J=7,5 Hz), 0,82 (t, 3H, J=7,5 Hz) IR (KBr) 3440, 1725 cm"1

Vaihe 4 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano^, 4-b7indoli-l-etikkahapon valmistus 3,0 g (8,25 mmol) l-etyyli-4-(fenyylimetyyli)- 1,3,4,9-tetrahydropyrano/3,4-bTindoli-l-etikkahapon me-tyyliesterin isomeeriä A (valmistettu vaiheessa 3) liuotettiin 100 ml:aan etanolia ja liuokseen lisättiin 100 ml 2q 10 %:sta natriumhydroksidin vesiliuosta. Seosta kuumen nettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 2 tuntia ja sen jälkeen väkevöitiin sameaksi vesiliuokseksi. Väkevää kloorivetyhappoa lisättiin siksi kunnes seos muuttui happamaksi. Se pestiin sen jälkeen eetterillä (2 x 100 ml) - ; 25 3a yhdistetyt eetteriuutokset kuivattiin magnesiumsul faatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 2,8 g harmahtavaa vaahtoa. Tämä aine kiteytettiin uudelleen bentseeni/petrolieetteri-seoksesta, jolloin saatiin 2,3 g (80 %) puhdasta happoa valkoisena kiin-3q teänä aineena, sp 144-146°C.

1H NMR(CDC13) b 8,70 (s, 1H), 7,43-7,03 (m, 9H), 3,87 (d, 2H, J=2,5 Hz), 3,23 (m, 2H), 2,97 (d, 2H, J=3,0 Hz), 2,85 (m, 1H) , 2,04 (m, 2H) , 0,93 (t, 3H, J=7,5 Hz) IR (KBr) 3380, 3260, 1740 crtf1 35 Analyysi yhdisteelle ^22^23^35 23 85857

Laskettu: C 75,62, H 6,63, N 4,01 % Löydetty: C 75,96, H 6,43, N 3,99 % 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano/*3,4-b7indoli-l-etikkahapon natriumsuolan 5 (isomeeri A) valmistus 2,6 ml IN NaOH:n vesiliuosta lisättiin hämmennettyyn liuokseen, joka sisälsi 0,965 g (2,76 mmol) 1-etyyli- 1,3,4,9-tetrahydro-4- (f enyy lime tyyli) pyrano/^3,4-b/indoli-1-etikkahappoa 50 ml:ssa metanolia. pH säädettiin arvoon IQ 7,75 lisäämällä annoksittain 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro- 4-(fenyylimetyyli)pyrano/1,4-b/indoli-l-etikkahappoa.

Saatu liuos haihdutettiin kuiviin ja sen jälkeen jäännös otettiin bentseeniin ja haihdutettiin (2 kertaa). Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (8 ml), hämmennettiin ja 15 joukkoon lisättiin hitaasti petrolieetteriä (30-60°C, 30 ml). Muodostunutta sakkaa hämmennettiin tunnin ajan, suodatettiin, pestiin petrolieetterillä ja kuivattiin, jolloin saatiin 1,0 g (98 %) suolaa valkoisena kiinteänä aineena, sp 180-190°C (hajoaa).

20 NMR (DMSO-dg): protonien tyyppi kemiallinen lukumäärä siirtymä (£ ) 3 CH3 0,34 (t, J=8) 2 CH2 2,0 (2q, J=8) .·. 7 3CH2, CH 2,2-3,9 (m) : 25 9 aromaatti 6,9-7,2 (m)

Analyysi:

Laskettu: C 71,14, H 5,97, N 3,77 % Löydetty: C 70,41, H 6,03, N 3,64 %

Esimerkki 2 30 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano^,4-b/indoli-l-etikkahapon metyyliesteri (isomeeri A)

Vaihe 1

Indoli-3-etikkahapon metyyliesterin valmistus 35 25 g (143 mmol) indoli-3-etikkahappoa liuotettiin 500 ml:aan metanolia ja joukkoon lisättiin 5 ml väkevää 24 85857 rikkihappoa. Saatua liuosta kuumennettiin palautusjääh-dyttäjää käyttäen yön yli. TLC-analyysi osoitti, että lähtöainetta ei enää ollut läsnä, ja reaktioseos haihdutettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 300 ml:aan etyyli-5 eetteriä, pestiin 5 %:sella natriumbikarbonaatin vesiliuoksella (2 x 150 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 24,09 g (89,1 %) esteriä burgundinvärisenä öljynä.

IR (paljas) 3400, 1720 cm ^ 10 NMR (CDC13) 8,17 (s, 1H), 7,62 (d, 1H, J=6,7 Hz), 7,32- 7,07 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,70 (s, 3H)

Vaihe 2 X-(fenyylimetyyli)-lH-indoli-3-etikkahapon me-tyyliesterin valmistus 15 Kahden litran vetoiseen, kolmikaulaiseen pyöreä- pohjaiseen kolviin, joka oli varustettu lisäyssuppilolla, lisättiin typpiatmosfäärin alaisena 300 ml kuivaa tetra-hydrofuraania (THF) ja 68,75 ml litium-di-isopropyyli-amidia (1,92 M sykloheksaani/THF-seoksessa, 132 mmol).

20 Seos jäähdytettiin -78°C:seen ja joukkoon lisättiin tipoittaan liuos, joka sisälsi 11,36 g (60 mmol) indoli-3-etikkahapon metyyliesteriä 300 mlrssa kuivaa tetrahydro-furaania. Seoksen annettiin seistä -78°C:ssa 15 minuuttia -'· ja sen jälkeen lisättiin tipoittain liuos, joka sisälsi .·. : 25 7,59 g (60 mmol) bentsyylikloridia 300 ml:ssa tetra- nydrofuraania. Reaktioseosta täytyi hämmentää voimakkaasti, niin että saostunut indoli-3-etikkahapon metyyli-esterin dianioni reagoi täydellisesti bentsyylikloridin kanssa. 3 tunnin kuluttua osoitti TLC-analyysi lähtöai-30 neen täydellisen kulumisen loppuun ja joukkoon lisättiin 200 ml kyllästettyä ammoniumkloridin vesiliuosta. Vesi-kerros erotettiin ja pestiin eetterillä (2 x 100 ml) . Yhdistetyt eetteriuutokset lisättiin orgaaniseen kerrokseen, joka kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suoda-35 tattiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 15,0 g (kvanti- 25 85857 tatiivinen saanto) punaruskeata öljyä. Tämä aine pelkistettiin vastaavaksi tryptofoliksi ilman enempää puhdistamista.

1H NMR(CDC13) & 8,09 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J=7 Hz), 5 7,40-7,09 (m, 9H), 4,19 (dd, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,47 (dd, 1H) , 3,20 (dd, 1H) IR (paljas) 3400, 1730 cm ^

Vaihe 3 β-(fenyylimetyyli)-lH-indoli-etanolin valmistus 10 15 g (60 mmol) vaiheessa 2 saatua raakaa d~(fenyy limetyyli )-lH-indoli-3-etikkahapon metyyliesteriä liuotettiin 100 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja lisättiin tipoittain jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 2,73 g (72 mmol) litiumalumiinihydridiä 300 ml:ssa tetrahydrofu-15 raania. Seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sen jäJkeen sitä kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 1,5 tuntia (kuumentamista ei yleensä tarvita tässä reaktiossa). Seos jäähdytettiin jäävesikylvyssä ja joukkoon lisättiin tipoittain 150 ml IN kloorivetyhappoa. 20 Vesikerros poistettiin ja orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (2 x 100 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 15,06 g (kvantitatiivinen saanto) ruskeata öljyä, jolla oli samat fysikaaliset omi-• ·.: 25 naisuudet kuin esimerkissä 1, vaiheessa 2 saadulla tuot teella. Tämä aine syklisoitiin pyranoindoliksi vaiheessa 4 ilman enempää puhdistamista.

Vaihe 4 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-30 pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahapon metyyliesteri 15,06 g (60 mmol) vaiheessa 3 saatua raakaa /8-( fe-·: nyylimetyyli)-lH-indoli-etanolia liuotettiin 250 ml:aan : metyleenikloridia. 10,68 g (72 mmol) 3-metoksi-2-pentee- nihapon metyyliesteriä lisättiin ja sen jälkeen 2,5 ml .··. 35 booritrifluoridieetteraattia ja seosta hämmennettiin huo- 26 8 5 8 5 7 neen lämpötilassa yön yli. TLC-analyysi osoitti, että reaktio oli tapahtunut täydellisesti ja seokseen lisättiin 200 ml kyllästettyä natriumbikarbonaatti liuosta. Orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin vedellä (2 x 5 100 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suoda tettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakaa tuotetta, joka puhdistettiin pikakromatografiän avulla (13 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli). Tällöin saatiin 2,5 g (11,5 % laskettuna kolmen vaiheen 10 osalta) miltei puhdasta isomeeriä A. Tämän yhdisteen pro-toni-NMR täsmäsi esimerkissä 1, vaiheessa 3 selostetulla menetelmällä valmistetun näytteen vastaavan tuloksen kanssa.

Esimerkki 3_ 15 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano^3,4-byindoli-l-etikkahappo (isomeeri B) (I, r]= -c hr, R2 ja R3= -CH=CH-CH=CH-, R4 ja 5 25 R = -H) 2,19 g (6,0 mmol) 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-20 (fenyylimetyyli)-pyrano/3,4-b7indoli-etikkahapon metyyli-esterin isomeeriä B (valmistettu esimerkissä 1, vaiheessa 3) lisättiin seokseen, joka sisälsi 65 ml 10 %:sta natriumhydroksidin vesiliuosta ja 65 ml etanolia, ja reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyt-: 25 täen 2 tuntia. Seos haihdutettiin sen jälkeen kuiviin ja jäännökseen lisättiin seos, joka sisälsi suhteessa 1:1 10 %:sta natriumhydroksidia ja eetteriä. Vesikerros erotettiin, hapotettiin väkevällä kloorivetyhapolla ja uutettiin useita kertoja eetterillä. Yhdistetyt eetteriuutok-30 set kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin jolloin saatiin 1,68 g (80 %) nahanruskean-keItäistä kiinteätä ainetta. Tämä aine puhdistettiin pikakromatograf iän avulla (30 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli), jolloin saatiin 410 mg ainetta, 35 joka kiteytettiin uudelleen bentseeni/petrolieetteri- 27 85857 seoksesta, jolloin saatiin 315 mg (15 %) happoa valkoisena kiinteänä aineena, sp 171-173°C.

λΗ NMR(CDC13) f) 8,48 (s, 1H) , 7,39-7,01 (m, 9H) , 3,90 (dd, 2H, J=7,5 Hz, J=2,5 Hz), 3,19 (m, 2H), 3,02 (d, 5 2H, J=3 Hz), 2,88 (m, 1H), 2,15 (m, 2H), 0.89 (t, 3H, J=7,5 Hz) .

IR (KBr) 3390, 1722 cm-1 Analyysi yhdisteelle C22H23N03:

Laskettu: C 75,62, H 6,63, N 4,01 % 10 Löydetty: C 75,76, H 6,35, N 3,95 %

Esimerkki 4 1,8-dietyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano/3,4-b7indoli-l-etikkahappo (I, R1= “C2H5, R2 ja R3= -CH=CH-CH=CH-, R4= -H, 15 R5= 8-C2H5>

Vaihe_ 1_ 1-(7-etyyli-lH-indol-3-yyli)-3-fenyylipropanonin valmistus

Voimakkaasti hämmennettyyn liuokseen, joka sisäls-20 etyylimagnesiumbromidia (2,85 M eetterissä, 0,07 mol, 24,6 ml) 50 mlrssa vedetöntä eetteriä, lisättiin tipoittaan 10 minuutin kuluessa liuos, joka sisälsi 7,25 g (0,05 mol) 7-etyyli-lH-indolia 25 ml:ssa bentseeniä. Saatua vaaleanvihreätä seosta kuumennettiin palautusjäähdyt-25 täjää käyttäen 2 tuntia ja sen jälkeen jäähdytettiin -10°C: seen kuivajää/metanolikylvyn avulla. Liuos, joka sisälsi 8,43 g (0,05 mol) hydrosinnamoyylikloridia 20 mlrssa bentseeniä, lisättiin tipoittain (45 minuutin kuluessa). Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan; kun 30 sen jälkeen oli vielä kulunut 2 tuntia, ei TLC-analyysin avulla todettu enää yhtään lähtöainetta. 30 ml 10 %:sta ammoniumkloridin vesiliuosta lisättiin reaktioseokseen ja -tällöin muodostui valkoinen sakka, joka koottiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjössä, jolloin 35 saatiin 7,78 g (56 %) toivottua ketonia, sp 140-141,5°C.

28 85857 IR(CHC13) 3465, 1645 cm"1 NMR(CDC13) 4 9,39 (s, 1H), 8,30 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 3,12 (s, 4H), 2,88 (q, 2H), 1,32 (t, 3H) .

Vaihe 2 5 7-etyyli-(fenyylimetyyli)-lH-indoli-3-etikka- hapon metyyliesterin valmistus Menetelmän mukaan, jonka E.C. Taylor ja muut ovat esittäneet aikakauslehdessä J.Amer.Chem.Soc., 98, 3037 (1976), lisättiin liuos, joka sisälsi 2,77 g (10 mmol) 1Q 1-(7-etyyli-lH-indol-3-yyli)-3-fenyylipropanonia 25 ml: ssa seosta, joka sisälsi suhteessa 1:1 metanolia ja trime-tyyliortoformiaattia, 4,88 g:aan (11 mmol) tallium(III)-nitraattitrihydraattia, ja seosta kuumennettiin palautus-jäähdyttäjää käyttäen siksi kunnes tallium(I)nitraatin 15 saostuminen oli tapahtunut täydellisesti (noin 3 tuntia).

Tummanruskea seos laimennettiin 25 ml:11a eetteriä ja tallium ( I ) nitraatti poistettiin suodattamalla. Suodos pestiin peräkkäisesti 1 x 50 ml:n erillä vettä, 5 %:sta natriumkarbonaatin vesiliuosta ja vettä ja sen jälkeen kui-20 vattiin vedettömän MgS0^:n avulla. Suodoksen väkevöinti ja epäpuhtaan tuotteen pikakromatografia (20 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli) antoi esterin punaisenruskeana öljynä (0,98 g, 31,9 %).

IR(CHC13) 3485, 1735 cm”1.

25 NMR(CDC13) £>8,35 (s, 1H) , 7,70 (dd, 1H) , 7,15 (m, 3H) , 4,28 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 2,80 (q, 2H), 1,25 (m, 3H) .

Vaihe 3 7-etyyli- (fenyylimetyyli) -lH-indoli-etanolin 30 valmistus Hämmennettyyn suspensioon, joka sisälsi 0,702 g (18,5 mmol) litiumalumiinihydridiä 80 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania, lisättiin hitaasti typpiatmosfäärin alaisena 0°C:ssa (noin 1,5 tunnin kuluessa) liuos, joka 35 sisälsi 5,17 g (16,8 mmol) 7-etyyli-^-(fenyylimetyyli) - 29 85 8R7 lH-indoli-3-etikkahapon metyyliesteriä (valmistettu vaiheessa 2) 30 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania. Saatua tummanpunaista seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 2 tuntia. Se jäähdytettiin 0°C:seen ja "tukah-5 dutettiin" lisäämällä tipoittain 40 ml vettä. Saostuneet alumiinisuolat poistettiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. Suodoksen kerrokset erotettiin ja vesikerros pestiin eetterillä. Yhdistetyt eetterikerrokset pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedetkö tömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin toivottu alkoholi ruskeana öljynä (4,51 g, 96 %). IR(CHC13) 3570, 3480 cm-1 NMRCDC13) b 6,8-8,40 (m, 10H), 3,0-4,10 (m, 5H), 2,80 (q, 2H), 1,32 (t, 3H).

15 Vai he_ _4_ 1,8-dietyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano/3,4-b7indoli-l-etikkahapon (isomeeri A) valmistus 5,86 g (21,0 mmol) 8-etyyli-^?-(fenyylimetyyli)-1H-20 indoli-etanolia (valmistettu vaiheessa 3), 4,69 g (36,0 mmol) metyylipropionyyliasetaattia ja 0,49 g (2,6 mmol) p-tolueenisulfonihappoa liuotettiin 175 ml:aan bentseeniä ja liuosta kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 5 tuntia, ja vesi koottiin Dean & Stark'in lauhdeastiaan. 25 Seos pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (2 x 50 ml), kuivattiin (MgSO^), suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raaka metyyliesteri. Tämä aine liuotettiin seokseen, joka sisälsi 125 ml etanolia ja 125 ml natriumhydroksidin 10 %:sta vesiliuosta, ja seosta 30 kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 2 1/2 tuntia. Sen jälkeen se haihdutettiin kuiviin ja jäännökseen lisättiin 100 ml eetteriä ja 50 ml natriumhydroksidin 10 %:sta vesiliuosta. Kerrokset erotettiin ja vesikerros hapotet-tiin väkevänä kloorivetyhapolla ja uutettiin eetteri)lä 35 (2 x 100 ml). Yhdistetyt eetteriuutokset kuivattiin ve- 3o 85857 dettömän MgSC>4:n avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raaka tuote nahanvärisenä kiinteänä aineena (saanto 44 %). Diastereomeerit erotettiin osittain pikakromatografiän avulla (30 %:nen etyyliasetaatin hek-5 saaniliuos, H^PO^rlla käsitelty piihappogeeli), ja osa pylväästä saadusta fraktioseoksesta erotettiin HPLC:n avulla (Waters Assoc. C18 Prep 500). Isomeeri, joka eluoitui ensiksi C18-pylväästä nimettiin isomeeriksi A ja sen sp oli 147-148,5°C; toinen isomeeri nimtettiin 10 isomeeriksi B ja sen sp oli 158-159,5°C. Kumpikin isomeeri kiteytettiin uudelleen bentseeni/petrolieetteri (1:3)— seoksesta.

Isomeeri A_ IR(KBr) 3600-2600, 3330, 1740 cm”1. HPLC-analyysi: 97,98 % 15 isomeeripuhtaus.

Analyysi yhdisteelle ^2^271^0.3:

Laskettu: C 76,35, H 7,22, N 3,71 % Löydetty: C 76,28, H 7,25, N 3,81 %

Esimerkki_5 20 1,8-dietyyli-l,3,4,9-tetrahydro-5-(fenyylimetyyli-

pyrano,/3,4-b7indoli-l-etikkahappo (isomeeri B) Isomeeri_B

Valmistettu esimerkissä 4, vaiheessa 4.

IR(KBr) 3600-2600, 3460, 1700 cm”1. HPLC-analyysi: 96,90 % 25 isomeeripuhtaus.

Analyysi yhdisteelle ^24^27^3 :

Laskettu: C 76,35, H 7,22, N 3,71 % Löydetty: C 76,28, H 7,25, N 3,81 %

Esimerkki 6 30 1-etyyli-7-fluori-1,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4- (2-propenyyli)-pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahappo (isomeeri A) (I, R1= -C2H5, R2 ja R3= -H, R4= 7-F, R5= 8-CH3)

Vaihe_l 35 6-fluori-7-metyyli-isatiinin valmistus 31 85857

Seos, joka sisälsi 21,9 g 3-fluori-2-metyyliani-liinihydrokloridia, 500 ml vettä, 29 g hydroksyyliamiini-hydrokloridia, 120 g natriumsulfaattia ja muutamia tippoja 6N HC1, kuumennettiin kiehuvaksi samalla voimak-5 kaasti hämmentäen. Tähän lisättiin kiehuva liuos, joka sisälsi 21,9 g kloraalihydraattia 330 ml:ssa.vettä, ja keittämistä jatkettiin 45 minuuttia.

Reaktioseos jäähdytettiin ja suodatettiin. Sakka liuotettiin eetteriin, kuivattiin natriumsulfaatin avulla jo ja haihdutettiin, jolloin saatiin 18,7 g oksiimia (saanto 88 %) .

Oksiimi lisättiin annoksittain 300 ml:aan 90 %:sta rikkihappoa 65°C:ssa. Seosta kuumennettiin 80°C:ssa 15 minuuttia ja sen jälkeen kaadettiin jääveteen samalla häm-25 mentäen. Suodatus ja kuivatut tuotti 11,7 g (saanto 60 S) 6-fluori-7-metyyli-isatiinia, sp 204-206°C.

Vaihe_ 2 6-fluori-7-metyyli-indoli-3-(2-allyyli)etanolin valmistus 20 Liuos, joka sisälsi litiumdi-isopropyyliamiinia (LDA) (2,2 M sykloheksaanissa, 110 ml), jäähdytettiin -78°C:seen isopropyyliamiini-(IPA)-kuivajääkylvyssä. Joukkoon lisättiin 24,0 g (0,206 mol) metyyli-4-penteno-aattia 100 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania ja reaktio-25 seosta hämmennettiin 0,5 tuntia. Joukkoon lisättiin hitaasti liuos, joka sisälsi 19 g (0,106 mol) 6-fluori-7-metyyli-isatiinia (valmistettu vaiheessa 1) 150 ml:ssa tetrahydrofuraania, joka sisälsi 22 mmol 2-metyylipyrro-lidonia, samalla kun reaktioseoksen lämpötila pysytettiin 30 -60°C:n alapuolella. Reaktioseosta hämmennettiin -78°C:ssa 2 tuntia ja sen jälkeen sen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Ylimääräinen LDA "tukahdutettiin" käyttämällä kyllästettyä ammoniumkloridiliuosta. Orgaaninen kerros uutettiin eetterillä (2 x 200 ml), kuivattiin (Na2SO^) 35 ja haihdutettiin, jolloin saatiin 40,0 g raakaa hydrok-siesterivälituotetta.

85857

Liuos, joka sisälsi tämän hydroksiesteriväli-tuotteen 500 mlrssa tetrahydrofuraania, lisättiin tipoittaan hämmennettyyn suspensioon, joka sisälsi 9,8 g (0,258 mol) LiAlH^ 200 ml:ssa tetrahydrofuraania, ja 5 seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 2 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin jääkylvyssä, ylimääräinen hydridi hävitettiin käyttämällä tetrahydrofuraani/i^O (1:1)-seosta, suodatettiin, kuivattiin (Na2SC>4) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 30 g raakaa tryptofolia. Pika-20 kromatografia käyttämällä 25 %:sta etyyliasetaatin heksaa- niliuosta ja sen jälkeen 30 %:sta etyyliasetaatin heksaani-liuosta tuotti 11,7 g otsikkoyhdistettä (saanto 48 %) .

Tätä ainetta käytettiin välittömästi vaiheessa 3.

Vaihe 3_ 25 1-etyyli-7-fluori-1,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli- 4-(2-propenyyli>-pyrano/3,4-b7indoli-l-etikka-hapon (isomeeri A) valmistus

Seosta, joka käsitti 11,0 g (0,048 mol) 6-fluori- 7-metyyli-indoli-3-(2-allyyli)etanolia (valmistettu vai-20 heessa 2), 11 g 3-metoksi-2-penteenihapon metyyliesteriä, 1 ml:n BF2*Rt20:ta ja 500 ml dikloorimetaania, hämmennettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia, laimennettiin dikloo-rimetaanilla, pestiin 5 %:lla NaHCO^-liuoksella, vedellä, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 21 g 25 öljyä. Tämä pestiin piihappogeelipylvään läpi käyttäen heksaania ja sen jälkeen 5 %:sta etyyliasetaatin heksaani-liuosta. Preparatiivinen nestekromatografia Waters Assoc. Prep 500-kojeella käyttäen eluenttina 3,5 %:sta etyyliasetaatin heksaaniliuosta tuotti estereitä (5 g isomeeriä 30 A ja 6,5 g isomeeriä B).

Isomeeri A esteri hydrolysoitiin kuumentamalla palautus jäähdyttä jää käyttäen 2,5 tuntia seoksen kanssa, joka sisälsi 5 g KOH, 500 ml metanolia ja 10 ml vettä. Reaktioseos väkevöitiin, laimennettiin vedellä ja uutet-35 tiin eetterillä. Vesifaasi hapotettiin 5 %:lla HClillä ja 33 85857 uutettiin kloroformilla (3 x 200 ml). Yhdistetyt uutokset pestiin vedellä, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 3 g kiinteätä happoa. Uudelleenkiteytys tolu-eeni/petrolieetteri-seoksesta antoi 2,0 g otsikkoyhdistet-5 tä (saanto 12,6 %), sp 159-160°C.

NMR(DMSO-dg): protonien tyyppi kemiallinen lukumäärä siirtymä ( £) 3 CH3 0,72 (t, J=7) 2 CH2 1,95 (m) 10 3 CH3 2,35 (s) 2 =CH2 5,1 (m) 1 H-C=C 5,8 (m) 2 aromaatti 10,6, 11,9 (s) IR (KBr, cm-1) 3070 (MH/OH), 1710 (CO) 15

Analyysi:

Laskettu: C 68,87, H 6,69, N 4,23 % Löydettu: C 68,94, H 6,61, N 4,15 %

Esimerkki 7 l-etyyli-7-fluori-1,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli- 4- (2-propenyyli) -pyrano/3,4-b/rindoli-l-etikka-happo (isomeeri B)

Esimerkissä 6, vaiheessa 3 valmistettu 1-etyy- li-7-fluori-1,3,4,9-tetrahydro-8-(2-propenyyli)-pyrano-25 Z.3,4-b7indoli-l-etikkahapon isomeeri B esteri hydrolysoi tiin esimerkissä 6, vaiheessa 3 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 2,1 g valkoista kiinteätä ainetta. Uudelleenkiteytys tolueeni/petrolieetteri-seoksesta antoi 1,3 g otsikkoyhdistettä (saanto 8,1 %), sp 138-140°C.

30 NMR(DMSO-dg): protonien tyyppi kemiallinen lukumäärä siirtymä (S ) 3 CH3 0,62 (t, J=7) 1 CH3 2,35 (s) 2 CH2 2,06 (m) 35 2 =CH2 5,1 (m) 1 H-C=C 5,8 (m) 2 aromaatti 10,6 11,9 (s) 34 85857 IR (KBr, cm-1) 3070 (NH/OH), 1710 (CO)

Analyysi .

Laskettu: C 68,87, H 6,69, N 4,23 % Löydetty: C 68,98, II 6,77, N 4,18 % 5 Esimerkki_8 (+/-)-1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli) -pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahapon hajottaminen osiinsa Vaihe 1_ 10 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahapon /(IS)-endo?-!,7,7-trimetyyli-bisyklo/2,2. l/-heptan-2-yyliesterin valmistus 50 ml metyleenikloridia lisättiin seokseen, joka 15 sisälsi 3,50 g (10 mmol) l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4- (fenyylimetyyli)pyrano/3,4-b/indoli-l-etikkahappoa, ],70 g (11 mmol) /(IS)-endo/-(-)-borneolia, 2,27 g (31 mmol) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja 70 mg (0,57 mmol) 4-(Ν,Ν-dimetyyliamino)-pyridiiniä. Seosta hämmennettiin 20 huoneen lämpötilassa yön yli typpikaasuvirran alaisena.

Seos johdettiin sintratun lasisuppilon läpi ja sakka pestiin 50 ml:11a metyleenikloridia. Suodos kaadettiin 100 ml:aan eetteriä ja pestiin IN kloorivetyhapolla (2 x 50 ml) ja kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (1 x 50 ml), 25 kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 3,85 g raakaa esterien seosta. Pikakromatografia (10 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli) antoi 2,65 g esterien diastereomeeriseosta valkoisena vaahtona. Esterit erotettiin HPLC:n avulla 30 (Waters Prep. 500A, 4 %:nen etyyliasetaatin heksaaniliuos, piihappogeeli), jolloin saatiin 1,2 g isomeeriä A (ensiksi eluoituva isomeeri), sp 63-66°C ja 1,15 g isomeeriä B (toiseksi eluoituva isomeeri), sp 58-61°C.

Vaihe 2 35 (+)-1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)- pyrano/3,4-la/indoli-l-etikkahapon valmistus f 35 85857 1,20 g (2,5 mmol) 1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(f enyy lime tyyli) -pyrano/3,4-b7indoli-l-etikkahapon / (IS) -endo7~l, 7,7-trimetyyli-bisyklo/2.2 . l7heptan-2-yyli-esteriä (isomeeri Δ) liuotettiin seokseen, joka sisälsi 5 65 ml etanolia ja 65 ml 10 %:sta natriumhydroksidiliuosta, ja seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen 5 tuntia. Seos haihdutettiin sen jälkeen sameaksi vesiliuokseksi, jäähdytettiin jäävesikylvyssä ja hapotettiin väkevällä kloorivetyhapolla. Sen jälkeen se uutettiin eette-10 rillä (2 x 50 ml) ja yhdistetyt eetteriuutokset kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 900 mg keltaista öljyä. Tämä aine kiteytettiin uudelleen tolueenista, jolloin saatiin 397 mg (46 %) puhdasta happoa valkoisena kiinteänä ai-15 neena, sp 170-171,5°C.

Analyysi yhdisteelle C22H23N03:

Laskettu: C 75,62, II 6,63, N 4,01 % Löydetty: C 75,63, H 6,44, N 4,17 % Ä/d5= +62'9° 20 Esimerkki 9 (-)-1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano/3,4-b7indoli-l-etikkahapon valmistus Esimerkissä 8, vaiheessa 1 valmistettu 1-etyyli- 1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano/3,4-b7indoli-• 25 1-etikkahapon /J1S)-endo7-l,7,7-trimetyyli-bisyklo/2.2.1/- heptan-2-yyliesteri, isomeeri B, saippuoitettiin esimerkissä 2, vaiheessa 2 esitetyllä tavalla, jolloin saatiin 327 mg (41,3 %) puhdasta happoa valkoisena kiinteänä aineena, sp 171-172°C.

30 Analyysi yhdisteelle C22H23N03:

Laskettu: C 75,62, H 6,63, N 4,01 % Löydetty: C 75,55, H 6,42, N 4,31 % fr/l5 = -60,3° 36 85857

Taulukko_II

Substituoituja 1,3,4,9-tetrahydropyrano/3,4-b7~ indoli-etikkahappoj a R3 X, R4 ™2 sxö

R5 i R1 CH2- COOH

Esim. R1 R2 R3 R4 R3 Iscoieeri Sulanispiste (°C) 1 Et CH=CH-CH=CH H H A 145-147 2 Et CH=CH-CH=CH H H A — 3 Et CH=CH-CH=CH H H B 171-173 4 Et CH=CH-CH=CH H 8-C2HS A 147-148,5 5 Et CH=CH-CH=CH H 8-C2H5 B 158-159,5 6 Et H H 7-F 8-CH3 A 159-160 7 Et H H 7-F 8-CH3 B 138-140 8 Et CH=CH-CH=CH H H A(+) 170-171,5 . 9 Et CH=CH-CH=CH H H A(-) 171-172 10 Et H H H 8-C2H5 A 91-93.5 11 Et H H H 8-C2H5 B 118-119,5 12 Et H H H 8-n-C3H7 A 99.5-101,5 13 Et H H H 8-n-C3H7 B 117-120 14 Et H H H H A 133-138 15 Et H H H H B 136-141 16 Et H H 7-Cl 8-CH3 A 168-169 17 Et H H 7-Cl 8-CH3 B 124-126 18 Et CH=CH-CH=CH 7-C1 8-C1 A 154-155 i, 85857

Taulukko II__(jatkoa)

Esim. R*_R^_R^_R^_R^ Isomeeri Sp (°C) 19 Et CH=CH-CH=CH 7-C1 8-CH3 A 158-159 20 Et CH=CH-CH=CH 7-C1 8-CH3 B 218-220 21 Et CH=CH-CH=CH H 8-CH3 B 174-176 22 Et CH=CH-CH=CH H 8-CH3 A 141-143 23 Et CH=CH-CH=CH 5-CH3 8-C1 A 151-152 24 Et CH=CH-CH=CH 5-CH3 8-C1 B 250-252 25 Et CH=CH-CH=CH 6-Br H A 154-155,5 26 Et CH=CH-CH=CH 6-Br H B 156-158,5 27 Et H H 6-F H B 145-147 28 Et CH=CH-CH=CH 6-F H B 190-192 29 Et CH=CH-CH=CH 5-C1 8-CH3 A 172-173 30 Et CH=CH-CH=CH 5-C1 8-CH3 B 248-250 31 prcpyyli CH=CH-CH=CH H H A 139,5-141 32 prcpyyli CH=CH-CH=CH H H B 172-173 33 Et CH=CH-CH=CH H 7-C1 B 186,5-188 34 Et CH=CH-CH=CH H 7-C1 A 152,5-154 35 Et CH=CH-CH=CH 5-CH3 8-CH3 A 175-177 36 Et CH=CH-CH=CH 5-CH3 8-CH3 B 230-232 37 Et H H H 8-CH3 A 135-137 38 Et H H H 8-CH3 B 138-139 39 metyyli CH=CH-CH=CH H H A 157-158

Claims (5)

85857 38

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indoli-1-etikkahappojoh-5 dannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava (I), , /-' - R5 j!, R XCH2~COOH 15 jossa R1 on alempi alkyyli, jossa on 1-4 hiiliatomia, R2 ja R3 ovat vetyjä tai R2 ja R3 ovat liittyneet yhteen rakenteeksi -CH=CH-CH=CH- 20 ja muodostavat fenyyliryhmän yhdessä niiden hiiliatomien kanssa, joihin R2 ja R3 ovat liittyneet, R4 ja R5 merkitsevät vetyä, alkyyliä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai halogeenia, 25 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää A) vaiheet, joissa 1. kondensoidaan substituoitu isatiini, jolla on 30 kaava (III), .Mi R I

35 H I; 39 85857 jossa R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, karboksyy-lihappoesterin enolaatin kanssa, jolla on kaava (IV), r r3 X,. chT „ ™ » 2 II CH2~ c— OCH3 10 jossa R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, välituote-yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava (V), ^ r3 X, U ch2 20 H 2. pelkistetään mainittu kaavan (V) mukainen yhdiste tryptofolin valmistamiseksi, jolla on kaava (VI), 25 R3 X, r* fH2 (VI) " £kA K I H jossa R2, R3, R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, 35 40 85857 3. saatetaan kaavan (VI) mukainen yhdiste reagoimaan 3-metoksi-2-alkeenihapon metyyliesterin kanssa, jolla on kaava (VII), 5 1 0 R ys Lc»3 mi> 0CH3 10 jossa R1 merkitsee samaa kuin edellä, kaavan (I) mukaisen yhdisteen metyyliesterin valmistamiseksi, r3

15 A,! R5 h R CH2-COOCH3 20 jossa R1, R2, R3, R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, ja hydrolysoidaan mainittu esteri kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, tai B) vaiheet, joissa ·.· 25 1) kondensoidaan substituoitu indoli-3-etikkahapon metyyliesteri, jolla on kaava (VIII), 0 R H CH C-OCH R i H jossa R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, halogenidin .. 35 kanssa, jolla on kaava (IX), I: 41 85357 R3 *2 (ix) 5 ' 2

5 X jossa R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä ja X on halogeeni, joka on kloori, bromi tai jodi, a-substituoidun indoli-3-etikkahapon esterin valmistamiseksi, jolla on 10 kaava (X), R3 X, Cu R 15 x2 (x) ,ίϊ/' "“· H 20 jossa R2, R3, R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, 2. pelkistetään mainittu kaavan (X) mukainen yhdiste yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava (VI), ja muutetaan kaavan (VI) mukainen yhdiste yhdisteeksi, jolla on kaava (I).

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdisteitä, joilla on rakenne, x\ r4 ?H2 R . Qcpö R 1 c H ' CH?~ CO H H L2 5 2 2 42 85857 jossa R2 ja R3 ovat vetyjä tai R2 ja R3 ovat liittyneet yhteen rakenteeksi -CH=CH-CH=CH- 5 ja muodostavat fenyyliryhmän yhdessä niiden hiiliatomien kanssa, joihin R2 ja R3 ovat liittyneet, R4 ja R5 merkitsevät vetyä, alempaa alkyyliä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai halogeenia, sekä mainittujen yhdisteiden farmaseutti-10 sesti hyväksyttäviä suoloja.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdisteitä, joilla on rakenne . R3 . X, \ T2 (n) ” QuO R 1 C H CH2“C0 H H l2 5 1 2 jossa R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin patenttivaatimuksessa 2, R4 on vety tai 5-, 6- tai 7-halogeeni, R5 on ve-25 ty, metyyli, etyyli tai propyyli, sekä mainittujen yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, joka on . . 30 l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano- [3,4-b]indoli-l-etikkahappo, l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano-[3,4-b]indoli-l-etikkahappo (isomeeri A), 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano-35 [3,4-b] indoli-l-etikkahapon natriumsuola, 85857 43 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano-[3,4-b]indoli-l-etikkahapon natriumsuola (isomeeri A), (+)-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyra-no[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 5 ( - )-1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyra- no[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, (+)-1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyra-no[3,4-b]indoli-l-etikkahappo (isomeeri A), ( -)-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)pyrano-10 [3,4-b]indoli-l-etikkahappo (isomeeri A), 7-kloori-1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-pro-penyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 1-etyyli-7-fluori-1,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-pro-penyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 15 8-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-5-metyyli-4-(fenyy limetyyli )-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 1.8- dietyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(2-propenyyli)-pyrano-[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(2-propenyyli)-20 pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 7-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 6- bromi-1-etyyli-1,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyy1imetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 25 5-kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyy limetyyli )-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 7.8- dikloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli )-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 7- kloori-l-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyy- 30 limetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo, 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-8-metyyli-4-(fenyylimetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo tai 1-etyyli-l,3,4,9-tetrahydro-4-(2-propenyyli)-8-propyyli-pyrano[3,4-b]indoli-l-etikkahappo. .... 35 44 8 5 8 5 7

5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 1-etyyli-l,3, 4,9-tetrahydro-4-(fenyylimetyyli)-pyrano[3,4-b]indoli-1-etikkahappo tai sen natriumsuola. 5 l 45 Patentkrav 85857