FI76558B - Foerfarande foer framstaellning av en vid blodtrycksjukdom anvaendbar inhibition foer angiotensinomvandlande enzym. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av en vid blodtrycksjukdom anvaendbar inhibition foer angiotensinomvandlande enzym. Download PDFInfo
- Publication number
- FI76558B FI76558B FI810663A FI810663A FI76558B FI 76558 B FI76558 B FI 76558B FI 810663 A FI810663 A FI 810663A FI 810663 A FI810663 A FI 810663A FI 76558 B FI76558 B FI 76558B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- proline
- compound
- compounds
- mixture
- benzoyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/50—Nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/26—2-Pyrrolidones
- C07D207/273—2-Pyrrolidones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
- C07D207/277—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D207/28—2-Pyrrolidone-5- carboxylic acids; Functional derivatives thereof, e.g. esters, nitriles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
- C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
- C07D277/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D277/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06173—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Glp-amino acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
1 76558
Menetelmä verenpainetaudissa käytettävän angiotensiinin muuttajaentsyymin inhibiittorin valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmää verenpainetaudissa käy-5 tettävän angiotensiinin muuttajaentsyymin inhibiittorin valmistamiseksi, jolla on kaava 0 R-A-S- (CH-) -CH-C-R-, (I) l n I £ R1 10 jossa R on vety, formyyli, asetyyli, propanoyyli, butano-yyli, fenyyliasetyyli, fenyylipropanoyyli, bentsoyyli, syk-lopentaanikarbonyyli, tert.-butyylioksikarbonyyli, syklo-pentaanikarbonyyli-L-lysyyli, pyro-L-glutamyyli-L-lysyyli, 15 L-lysyyli, L-arginyyli tai pyro-L-glutamyyli; A on D-fen-yylialanyyli, D,L-alanyyli, D-alanyyli, D,L-tryptofyyli, D-tryptofyyli, D,L-tyrosyyli, D-tyrosyyli, D,L-isoleusyy-li, D-isoleusyyli, D,L-leusyyli, D-leusyyli, D,L-histi-dyyli, D-histidyyli, D,L-valyyli tai D-valyyli, joiden 20 * -aminoryhmä on amidin välityksellä liittynyt radikaaliin
R; R^ on vety tai metyyli; Rj on L-proliini, L-3,4-dehydro-proliini? D,L-3,4-dehydroproliini, L-3-hydroksiproliini, L-4-hydroksiproliini, L-tiatsolidiini-4-karboksyylihappo tai L-5-oksoproliini, joiden iminoryhmä on imidin välityk-25 O
N
sellä liittynyt ryhmään -C-, ja n on 0 tai 1 siten, että kun n on 0, R^ on metyyli, sekä näiden yhdisteiden suolojen valmistamiseksi.
Angiotensiinin muuttajaentsyymi (peptidyylidipepti-30 dihydrolaasi, josta seuraavassa käytetään lyhennettä ACE) näyttelee keskeistä osaa kohonneen verenpaineen fysiologiassa. Entsyymi pystyy muuttamaan dekapeptidi, angioten-siini I:n, jonka sekvenssi on __ AspArgValTyrIleHisProPheHisLeu 3 5 oktapeptidi, angiotensiini IIrksi poistamalla pääteryhmän 2 76558
HisLeu. Jollei muuta ilmoiteta, erilaisten kemiallisten yksiköiden symbolit merkitsevät alla olevan taulukon mukaisesti :
Ala = L-alaniini 5 Arg = L-arginiini
Asp = L-asparagiinihappo
Boc = tert.-butyylioksikarbonyyli
Glu = glutamiinihappo <Glu = pyro-L-glutamiinihappo (L-5-oksoproliini) 10 Gly = glysiini
Hip = hippurihappo (bentsoyyliglysiini)
His = L-histidiini Ile = L-isoleusiini Leu = L-leusiini 15 Phe = L-fenyylialaniini
Pro = L-proliini APro = L-3,4-dihydroproliini Ser = L-seriini Trp = L-tryptofaani 20 Tyr = L-tyrosiini
Vai = L-valiini ACE = angiotensiinin muuttajaentsyymi Hepes = N-2-hydroksietyylipiperatsiini-N'-2-etaani-sulfonihappo.
25 Angiotensiini I:tä muodostuu reniini-entsyymin, joka on munuaisissa, muissa kudoksissa ja plasmassa esiintyvä endopeptidaasi, vaikuttaessa seerumin X-2-globuliiniin.
Määrätyt veressä esiintyvät peptidit vaikuttavat verenpaineeseen. Eräs näistä eli angiotensiini II on voima-30 kas pressori (verenpainetta kohottava aine). Toinen eli bradykiniini, joka on sekvenssin ArgProProGlyPheSerProPheArg omaava nonapeptidi, on voimakas depressori (verenpainetta alentava aine). Välittömän verenpainetta kohottavan vaikutuksen lisäksi angiotensiini II stimuloi aldosteronin va-35 pautumista, jolloin verenpaine pyrkii kohoamaan solujen ulkopuolisten suolojen ja nesteiden pidättymisen vuoksi. Nor- 3 76558 maalin ihmisen verestä löytyy mitattavissa oleva määrä angiotensiini II:ta. Tätä suurempina konsentraatioina sitä löytyy munuaisperäisistä verenpainetautia sairastavien potilaiden verestä.
5 Sekä normaaleissa että verenpainetautia sairastavis sa ihmisissä ACE-aktiivisuuden taso ylittää tavallisesti arvon, joka tarvitaan havaittujen angiotensiini II -tasojen ylläpitämiseksi. On kuitenkin havaittu, että verenpaineen merkitsevä aleneminen on saavutettavissa verenpaine-10 tautia sairastavissa potilaissa hoitamalla heitä ACE:n inhibiittoreilla /Gavras I. et ai., New Engl. J. Med. 291 (1974) 817/.
ACE on peptidyylidipeptidihydrolaasi. Se katalysoi erilaisten asyloitujen tripeptidien ja suurempien, suojaa-15 mattoman Λ,-karboksyyliryhmän sisältävien polypeptidien C-päätteen viimeistä edellistä peptidisidoksen hydrolysoitumista. ACE:n vaikutuksesta viimeistä edellinen peptidi-sidos lohkeaa hydrolyyttisesti karboksyylipäätteestä ja reaktiotuotteina saadaan dipeptidi ja jäljelle jäävä osa.
20 Entsyymin reaktiivisuus vaihtelee selvästi substraa tista riippuen. Ainakin yksi peptidisidostyyppi, jonka typpi on peräisin proliinista, ei hydrolysoidu lainkaan.
Näennäinen Michaelis-vakio (K ) vaihtelee substraatista m toiseen useita kymmenpotensseja. Entsyymin katalysoimien 25 reaktioiden kineettisiä muuttujia koskevan yleiskatsauksen on esittänyt Lehninger A., Biochemistry, Worth Publishers, Inc., New York, 1970, s. 153-157. Monet peptidit, joita kutsutaan angiotensiini I:n angiotensiini II:ksi entsymaat-tisen muuttumisen inhibiittoreiksi, ovat itse asiassa subs-30 traatteja, joiden on pienempi kuin angiotensiini I:llä. Oikeampi tapa on nimittää tällaisia peptidejä syrjäyttäviksi substraateiksi. Esimerkkejä syrjäyttävistä substraateista ovat bradykiniini ja Bpp5a (tunnetaan myös nimellä SQ20475), joka saadaan käärmeen myrkystä ja jonka sekvens-35 si on <GluLysTrpAlaPro.
Ondetti et ai. ovat US-patentissa 3 832 337, julkais- 4 76558 tu 27.8.1974, osoittaneet useiden synteettisten peptidi-johdannaisten olevan ACE:n inhibiittoreita.
ACE:n osuus verenpainetaudin synnyssä on jouduttanut tutkimuksia entsyymin inhibiittorien löytämiseksi, joita 5 voitaisiin käyttää verenpainetta alentavina lääkeaineina. Ks. esim. US-patentteja 3 891 616, 3 947 575, 4 052 511 ja 4 053 651. Erittäin tehokas inhibiittori, jonka biologinen aktiivisuus suun kautta annettuna on hyvin suuri, on D-3-merkapto-2-metyylipropanoyyli-L-proliini merkinnäl-10 lä SQ14225, joka on esitetty US-patentissa 4 4046 889, Ondetti et ai., julkaistu 6.9.1977, sekä tieteellisissä artikkeleissa Cushman D.W. et ai., Biochemistry 16 (1977) 5484 ja Ondetti M. et ai.,Science 196 (1977) 441. Inhibiit- _ 8 tori SQ14225:n Ι,-Q-arvon on ilmoitettu olevan 2,3 x 10 -m.
15 Yllä mainittujen Cushman et al.:n esittämä I^Q-arvo on inhibition saavuttamiseksi standardimäärityssysteemissä, jonka sisältämän substraatin taso on huomattavasti yli K -arvon. On huomattava, että Icn-arvot ovat suoraan verin 50 rattavissa toisiinsa, jos kaikki mahdolliset reaktioon 20 vaikuttavat tekijät pidetään vakioina. Näitä tekijöitä ovat entsyymilähde, entsyymin puhtaus, käytetty substraatti ja sen konsentraatio sekä määrityspuskurin koostumus. Kaikki tässä ilmoitetut I^^-arvot on saatu samalla määri-tyssysteemillä ja samalla entsyymillä (ihmisvirtsan ACE) 25 ja substraatin suunnilleen 1/2 K -tasolla ja siten ne m ovat keskenään vertailukelpoisia. Voidaan havaita arvojen poikkeavan muiden tutkijoiden arvoista ja itse asiassa tällaisia poikkeamia esiintyy tuntemattomista syistä kirjallisuudessa. Ks. esim. BPP^in I^-arvoja, joita ovat 30 julkaisseet Cushman D.W. et ai., Experientia 29 (1973) 1032 ja Dorer F.E. et ai., Biochim. Biophys. Acta 429 (1976) 220.
SQ14225:n vaikutustavan perustana pidettiin ACE:n aktiivisen kohdan mallia, joka kehitettiin vertaamalla 35 paremmin tunnettuun saman tyyppiseen entsyymiin karboksi-peptidaasi Arhan. Oletettiin, että aktiivisessa kohdassa 5 76558 on kationinen kohta, joka sitoo substraatin karboksyyli-pääteryhmään ja tasku tai halkeama, joka pystyy sitomaan C-pääteaminohapon sivuketjun ja sitoo erityisen lujasti pääteproliinitähteen heterosyklisen renkaan. Oletettiin, 5 että viimeistä edellistä aminohappotähdettä varten on vastaava tasku ja julkaistut arvot osoittavat eteeristen vaatimusten olevan melko tiukat, koska inhibiittorin D-muoto oli selvästi voimakkaampi kuin stereoisomeerinsä tai 3-me-tyyli- ja substituoimattomat analogit. Inhibiittorin sulf-10 hydryyliryhmän, jonka oletettiin olevan sitoutunut aktiiviseen kohtaan lähellä katalyyttistä keskusta, uskotaan näyttelevän keskeistä osaa entsyymin inaktivoitumisessa liittymällä sinkkiosaan, jonka tiedetään olevan välttämätön katalyyttiselle aktiivisuudelle. Sulfhydryylin substi-15 tuentit, kuten metyyliryhmä sekä S-asetyylijohdannainen, vähensivät tuntuvasti inhibiittorin voimaa. Ks. Cushman D.W. et ai.. Biochemistry, yllä.
Näiden molekyylien pysymättömyys ympäristöolosuhteissa on jossain määrin vaikeuttanut tutkimuksia in vitro, 20 joissa on selvitetty mekanismia, jolla SQ14225 ja sen analogit inhiboivat ACE:tä. On esim. havaittu, että vasta valmistettu vesiliuos, jonka konsentraatio on esim. 1 mg/ml SQl4225:tä, menettää pH-arvossa n. 8 huomattavan osan aktiivisuudestaan seisottuaan vain 30 minuuttia ja että ak-25 tiivisuuden lasku jatkuu liuoksen seistessä pidempään. Uskotaan, että tämä aktiivisuushukka johtuu pääasiassa SQ14225:n sulfhydryylipääteryhmien dimeroitumisesta, jolloin muodostuu disulfidi, joka inhibiittorina on huomattavan inaktiivinen. Koska vapaa sulfhydryyliryhmä on erittäin 30 reaktiokykyinen ja helposti hapettuu happamiksi polaarisiksi osiksi, kuten sulfoni- ja sulfoksidiryhmiksi, saattaa myös olla niin, että SQ14225:n vesiliuoksissa ajan mittaan in vitro havaittu aktiivisuushukka johtuu osaksi yhdestä tai useammasta tällaisesta hapettumisreaktiosta, jossa 35 muodostunut sulfoni tai sulfoksidi ei tehokkaasti inhiboi ACE:tä.
6 76558 Tällä hetkellä saatavissa olevat SQ14225:n kliinistä testausta koskevat raportit, joissa osa koskee "kap-topril"iksi nimettyä yhdistettä, osoittavat, että useimpien potilaiden ruoansulatuskanavan normaaliolosuhteissa 5 tuote on riittävän pysyvä annettavaksi suun kautta ACE:n tehokkaana inhibiittorina. Toistaiseksi ei kuitenkaan tiedetä, onko mahdollisesti potilasryhmää, johon SQ14225 ei tehoa juuri lainkaan. Vapaan sulfhydryyliryhmän suuren reaktiokyvyn vuoksi SQ14225 saattaa mahalaukun tai suo-10 liston olosuhteissa helposti muodostaa sekadisulfideja seerumin, soluproteiinien, peptidien tai muiden vapaan sulfhydryyliryhmän sisältävien aineiden kanssa sen ohella, että saattaa tapahtua dimeroitumista tai hapettavia hajoa-misreaktioita. Proteiinin kanssa muodostuva sekadisulfidi 15 voi toimia antigeeninä ja itse asiassa on silloin tällöin kliinisesti havaittu allergisia reaktioita. Ks. Favras et ai., New England, J. Med. 298 (1978) 991. Parhaassa tapauksessa voidaan olettaa SQ14225:n mahdollisesti muodostuvien disulfidien ja hapettavien hajoamistuotteiden olevan mel-20 koisen tehottomia inhibiittoreita. Voidaan olettaa, että SQ14225:n annosvaste voi vaihdella antotavasta riippuen ja potilaasta toiseen. Lisäksi ainakin joissakin potilaissa saattaa ilmetä ei-toivottuja sivuvaikutuksia ja saattaa olla hankalaa säädellä inhibiittorin määrää siten, että 25 kehossa ylläpidetään tehokas konsentraatio.
Yleensä tioesteriyhdisteitä pidetään erittäin reak-tiokykyisinä, koska tioesterisidos hydrolysoituu helposti sulfhydryyliosaksi ja karboksyyliosaksi. Niinpä tioesterei-tä käytetään usein aktiivisina esterivälituotteina asyloi-30 taessa miedoissa olosuhteissa. Yllä mainituissa Ondetti et ai:n patenteissa on käytetty ryhmiä, kuten asetyylitioa suojaryhminä. Oletetaan myös tioesterivälituotteiden esiintyvän syklisten peptidien, kuten tyrosiinin tai gramisidii-ni S:n biosynteesissä. Ks. Lipmann F., Accounts Chem. Res. 35 6 (1973) 361.
Tioesteriyhdisteitä, joilla on voimakas ACE:n inhi- 7 76558 hibitioaktiivisuus ja jotka suun kautta annettuina ovat tehokkaita verenpainetta alentavia lääkeaineita, on kuvattu esimerkiksi US-patenttijulkaisuissa 4 690 937, 4 690 938, 4 698 356, 4 690 939, 4 695 577, 4 690 940 ja 4 698 355.
5 SQ14225:n tyyppisiä yhdisteitä ovat kuvanneet
Ondetti et ai. US-patenteissa 4 046 889, 4 052 511, 4 053 651, 4 113 715 ja 4 154 840. Mielenkiintoisia ovat SQ14225:n analogit, joiden proliinin 5-jäseninen heterosyk-linen rengas on korvattu 4- tai 6-jäsenisellä renkaalla.
10 Näiden analogien inhibitiotehoja suhteessa SQ14225:een ei ole kuvattu. On raportoitu, että L-proliinin substituutio D-proliinilla alentaa voimakkaasti 3-merkaptopropanoyyli-aminohappojen inhibitiotehoa (Cushman D.W. et ai., yllä).
Proliinin substituutiota L-3,4-dihydroproliinilla 15 on tutkittu useissa systeemeissä. Substituoimalla L-3,4-Apro:lla bradykiniinin 7-asemassa, saadaan bradykiniini-johdannainen, jonka fysiologinen teho on selvästi vähentynyt. Ks. Fisher G.H. et ai., Arch. Biochem. Biophys. 189 (1978) 81. Toisaalta substituutio L-3,4-APro:11a ACE:n -20. inhibiittorin BPPga:n 3-, 5-, 8- tai 9-asemassa parantaa tämän inhibitiotehoa. Ks. Fisher F.H. et ai., FEBS Letters 107 (1979) 273. US-patenttijulkaisussa 958 180 tämän keksinnön keksijät ovat osoittaneet, että ryhmän APro sisältävillä yhdisteillä, jotka on esitetty mainitussa patent-25 tijulkaisussa, on suuri inhibitioteho ja verenpainetta alentava teho. Mutta tällä hetkellä ei voida esittää mitään järkisyytä selittämään havaittuja tuloseroja substi-tuoitaessa proliini Apro:lla. Vastaavasti vaikutusten antama kuva on epäselvä substituoitaessa muilla proliinijoh-30 darmaisilla tai -analogeilla ACE:n inhibiittorien eri kohdissa.
Vielä ei ole tutkittu tioesteriyhdisteiden rikin vasemmalla puolella olevan aminohapon vaikutusta. Uskotaan, että tämä aminohappo toimii entsyymin lisätunnistuskohtana. 35 Mikäli tämä pitää paikkansa, on oletettavissa, että tässä kohdassa aminohapon sisältävä yhdiste olisi parempi inhi- 8 76558 biittori. On havaittu, että monet aminohapot ovat tehokkaita ja että hydroksiproliini-, proliini-, L- ja D-L-3,4-dihydroproliini-, tiatsolidiini-4-karboksyylihappo- ja L-5-oksoproliinijohdannaiset ovat kaikki tehokkaita ve-5 renpainetta alentavia lääkeaineita ja inhiboivat voimakkaasti ACE:tä.
US-hakemusjulkaisujen 941 289 ja 958 180 tekemisajankohtana luultiin, että N-bentsoyyli-L-fenyylialaniini voidaan valmistaa näiden hakemusten esimerkin 4 ja vastaa-10 vasti 2 menetelmien mukaan. Myöhemmin havaittiin artikkelista Fischer ja Mooneyrat, Ber. 33 (1900) 2383, että näissä esimerkeissä kuvattujen menetelmien mukaan oli itse asiassa valmistettu yhdisteen raseeminen D,L-muoto eikä L-muoto. Nyt on todettu, että yhdisteiden N-bentsoyy-15 li-D,L-fenyylialaniinin, N-bentsoyyli-L-fenyylialaniinin ja N-bentsoyyli-D-fenyylialaniinin kaikkia kolmea optista isomeeriä voidaan käyttää yhdisteiden valmistamiseksi, jotka ovat angiotensiinin muuttajaentsyymin inhibiitto-reita.
:0 Samalla tavoin uskottiin US-patenttijulkaisujen 4 690 937, 4 690 938, 4 698 356, 4 690 939, 4 695 577, 4 690 940 ja 4 698 355 tekemisajankohtana, että kaikkien niissä esitettyjen aminohappojen on oltava L-muodossa, jotta valmistetut yhdisteet olisivat ACE:n inhibiittoreita. Myö-25 hemmin on havaittu, että voidaan myös käyttää näiden aminohappojen D- ja D,L-muotoja yhdisteiden valmistamiseksi, jotka ovat ACE:n inhibiittoreita.
Tämä keksintö koskee siten menetelmää uusien ACE:n inhibiittoreiden valmistamiseksi. Keksinnön mukaiselle me-30 netelmälle on tunnusomaista, että asianmukaisesti suojattu D- tai D,L-aminohappo tai D- ja L-aminohappojen seos saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava
O
35 HS-(CH ) -CH-C-R- (II) £ n | ^ R1 jossa n, ja Rj merkitsevät samaa kuin edellä, tai sen 9 76558 johdannaisen kanssa, jossa on suojattu; suojaryhmä(t) poistetaan ja haluttaessa ensimmäisessä vaiheessa saatu yhdiste, jolla on kaava 5 ? HA-S-(CH_) -CH-C-R-2 n i 2 R1 tai sen happoadditiosuola, jossa kaavassa A, n, ja R£ merkitsevät samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan asy-10 lointiaineen RÖH tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, joissa R merkitsee samaa kuin edellä, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R on muu kuin vety.
Uudet yhdisteet valmistetaan siis keksinnön mukaisesti siten, että asianmukaisesti suojattu D- tai D,L-15 aminohappo, jossa on haluttu A-ryhmä (kuten esimerkiksi BOC-D-alaniini, BOC-D-tryptofaani, BOC-D-tyrosiini, BOC-D-isoleusiini, BOC-D-leusiini tms.) saatetaan liuoksessa reagoimaan proliiniamidiyhdisteen, kuten esimerkiksi 2-D-metyyli-3-merkaptopropanoyyli-L-proliinin kanssa sopivan 20 reaktioapuaineen, kuten 1,1-karbonyylidi-imidatsolin ja liuotinten, kuten dimetyyliformamidin läsnäollessa. Saatu yhdiste pestään, tehdään happamaksi ja puhdistetaan kromatografisesta yhdisteen (kuten N-Z3-(HCl.H-D-fenyylialanyy-litio) -2-D-metyylipropanoyyl.i_7-L-proliinin) saamiseksi, 25 joka sitten saatetaan reagoimaan sopivan asylointiaineen, kuten bentsoyylikloridin kanssa; saatu yhdiste pestään ja puhdistetaan edelleen halutun tuotteen (kuten N-/_3-bentso-yyli-D-fenyylialanyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli7-L-pro-liinin) saamiseksi.
30 Käytettäessä suojattujen D- ja L-aminohappojen seos ta saadaan D,L-konfiguraation omaava lopputuote.
Uudet yhdisteet ovat käyttökelpoisia suun kautta vaikuttavina verenpainetta alentavina lääkeaineina.
Yhdisteiden tehoa on määritelty seuraavan kokeen 35 avulla.
ACE:n aktiivisuusmääritys. Useimmissa tässä kuvatuissa kokeissa entsyymi määritettiin 0,05-m Hepes-pusku- 10 76558 rissa, pH 8,0, jossa oli 0,1 moolia NaCl ja 0,75 moolia ^280^. Käytetty substraatti oli bentsoyyli-GlyHisLeu, jonka lopullinen konsentraatio oli 1 x 10^-m (K = n.
- 4 .3 . m 2 x 10 -m), sekä n. 130 000 pulssia/min l_ H/bentsoyyli- 5 GlyHisLeu:ta (25 Ci/mmol). Entsyymiä laimennettiin yllä mainitussa puskurissa siten, että 40 μΐ puskuroitua entsyymiä pystyi hydrolysoimaan 13 % substraattia 15 minuutin inkuboinnin ajaksi 37°C:ssa. Määrityksen käynnistämiseksi 40 yul entsyymiä ja 10 ui puskuria tai puskuriin 10 liuotettua inhibiittoria esi-inkuboitiin viisi minuuttia 37°C:ssa. Sitten lisättiin 50 ^ul substraattia reaktion käynnistämiseksi ja liuosta inkuboitiin 15 minuuttia 37°C:ssa. Reaktion lopettamiseksi lisättiin 1 ml 0,1-m kloorivetyhappoa ja sitten 1 ml etyyliasetaattia. Seosta 15 sekoitettiin tehosekoittimessa ja sentrifugoitiin nopeasti faasien erottamiseksi.
Siirrettiin 500 jil:n näyte etyyliasetaattikerrok-sesta nestetuikelaskimen pulloon, josa oli 10 ml Ria-fluor'ia, tavaramerkki New England Nuclear Coproration, 20 Boston, Masschusetts. Ι,-Q-arvojen määrittämiseksi verrattiin entsyymin aktiivisuutta inhibiittorin eri väkevyyksien läsnäollessa aktiivisuuteen ilman inhibiittoria. Piirtämällä inhibiittorikonsentraatio prosentuaalisen inhibition funktiona, saatiin I5Q-arvo.
25 Tässä hakemuksessa esitettyjen yhdisteiden edulli suus verrattuna tunnettuun yhdisteeseen kaptopril ilmenee seuraavasta.
Kaavan I mukaisten yhdisteiden stabiilisuus sekä biologisessa että muussa ympäristössä on huomattavasti pa-30 rempi kuin kaptoprilin. Tämä ilmenee siitä, että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat hydrolyysinkestäviä vahvasti hydrolysoivissa olosuhteissa ja siitä, että niillä on suhteellisen pitkä varastointi-ikä. Yhdisteiden in vitro-stabiilisuus plasma- ja kudoshomogenaattien hajottavassa 35 ympäristössä on esitetty seuraavassa.
11 76558
In vitro-hydrolyysi suoritettiin seuraavilla menetelmillä: A. Inkubointiseos: 1 ml 10-%:ista rotanmaksan homogenaat- tia (0,1 M kaliumfosfaattipuskuri, pH 7,4) ja 1 ml ana- -2 lysoitavaa yhdistettä 2 x 10 M samassa puskurissa.
5 Analyysimenetelmä: 100 pl:sta inkubointiseosta poiste taan proteiinit 200 μ1:1ΐ3 etanolia ja sentrifugoidaan.
20 pl supernatanttia analysoitiin HPLC:llä.
B. Inkubointiseos: 1 ml 5-%:ista rotanmaksan homogenaattia (0,1 M kaliumfosfaattipuskuri, pH 7,4) ja 1 ml analy- 10 soitavaa yhdistettä 2 x 10 M samassa puskurissa.
Analyysimenetelmä: 100 jul:aan inkubointiseoksesta lisätään 6 tippaa 1,0 N HC1 ja 5 ml etyyliasetaattia. Seosta sekoitetaan mekaanisesti 10 min ja sentrifugoidaan 10 min, jonka jälkeen etyyliasetaattikerros haih-15 dutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan 1 mitään vettä, seokseen lisätään 0,5 ml 0,4 M fosfaattipuskuria (pH 6,85) ja 5 pl 5 x 10 ^ M BIPM (N-/p-(2-bentsimi-datsolyyli)fenyyli/maleinidi),jonka jälkeen seosta seisotetaan 40 min 0°C:ssa.
20 Mittaukset suoritettiin aallonpituudella 310 nm (exci
tation) ja 365 nm (emission). Raja: >0,1 pg kaptopri-liä O
25 \ Jj + "S-R —* BIPM il
N __ 8 SR
30 Ύ fluoresenssi ö C. 0,154 m fosfaattipuskuria (pH 7,5) 1,5 ml 2,5 % 105 000 xg supernatanttia 0,5 10 mM analysoitavaa yhdistettä_0,1 kaikkiaan 2,1 ml 12 76558 37°C, O, 30, 60, 120, 180 min i 100 pl inkubointiseosta metanolia : 200 pl 5 , .
sekoitus: sentrifugointi ( 'i' 10 ui supernatanttia 10 HPLC* *HPLC: kolonni: Bondapak C18, liuotinseos: CH^CN 0,1 % tetrametyyliammoniumhydroksidi detektori: 220 nm, virtausnopeus 1 ml/min.
D. Inkubointiseos: 1 ml rotan plasmaa (0,1 M kaliumfos-faattipuskuri pH 7,4) ja 1 ml analysoitavan yhdisteen liuosta (400 ]ug/ml samaa puskuria)
Analyysimenetelmä; 100 pl:sta reaktioseosta poistetaan proteiinit lisäämällä 200 ui EtOH ja sentrifugoidaan. 2q 20 ρ1 supernatanttia analysoidaan HPLC:llä.
E. Inkubointiseos: 1 ml 20:%:ista rotansuoliston homoge-naattia (0,1 M kaliumfosfaattipuskuri, pH 7,4) ja 1 ml analysoitavaa yhdistettä (400 ug/ml samaa puskuria). Analyysimenetelmä: 100 pl:sta reaktioseosta poistetaan 25 proteiinit lisäämällä 200 pl EtOH ja sentrifugoidaan.
20 pl supernatanttia analysoidaan HPLC:llä.
F. Inkubointiseos: 1 ml 20-%:ista rotanmaksan homogenaat-tia (0,1 M kaliumfosfaattipuskuri, pH 7,4) ja 1 ml analysoitavaa yhdistettä(400 pg/ml samaa puskuria).
30 Analyysimenetelmä: 100 F1 :sta reaktioseosta poistetaan proteiinit lisäämällä 200 pl EtOH ja sentrifugoidaan. 20 pl supernatanttia analysoidaan HPLC:llä.
13 7 6 5 5 8
Yhdiste Inkubointi- Menetelmä aika (min) 10 30 i 60 | 80 120 180
N-/-3-(N-bentsoyyli-D- 1873 A
fenyylialanyylitio)-2-D- 92 80 D
5 metyylipropanoyylj?-L-pro- 25 10 E
liini
N-^J-(N-bentsoyyli-D-leu- 29 8 3 A
syylitio)tio)-2-D-metyyli-pr opanpyy li/-L-pr o 1 i in i
in N-£3- (N-propanpyyli) -D- 62 31 23 A
tryptofyylitio)-2-D-met- 95,0 87,0 86,8 88,6 C
yylipropanoyyli7-L-proliini
N-£3-(N-butyylioksikarbon- 97 96 94 B
yyli-D-alanyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli/-L-pro-liini 15
N-£3-(N-asetyyli-D-leusyy- 99 98 97 B
litio)-2-D-metyylipropanoyy- 105,1 99,6 97,0 92,1!c li/-L-proliini
N-(D-alanyylitio-2-D-metyy-86 65 52 ; B
lipropanoyyli) -L-proliini i ! i !
20 N-/3- (N-asetyyli-D-isoleu- |99,4 |93,5 | | 92,1 82,4 C
syyli-2-D-metyylipropanoyy- i * !
li)Z/-L-proliini I
_I_;_;____
On tunnettua, että kaptopril hyvin nopeasti hajoaa 25 disulfidiksi ja muiksi aineenvaihduntatuotteiksi, jotka yhdisteet eivät ole tehokkaita inhibiittoreina.
Squibb'in tutkijat ovat mm. (ASPET-kokouksessa Houstonissa, USA, elokuussa 1978) todenneet, että - 60 min inkuboinnin jälkeen rotan, ihmisen, api- 35 30 nan ja koiran plasmassa muuttumattoman S-kaptoprilin määrä oli 0, 7, 10 ja 25 %, vastaavasti. Disfulfidi oli pääasiallinen metaboliitti.
- rotan maksan, munuaisen ja suoliston homogenaa-tin 9000 g supernatanttifraktio muutti kaptoprilin lähes 35 täydellisesti disulfidiksi ja muiksi tuotteiksi 120 min kuluessa.
14 76558
Kaptoprilin huono stabiilisuus on muutenkin alalla hyvin tunnettu (ks. esim. Eur. J. Pharm. 67 (1980) 97 ja Clin. Pharmacol. Ther 27 (1980) 636). Hakijan havaintojen mukaan kaptoprilin puoliintumisaika vesipitoisessa 5 liuoksessa on noin 30 min.
Uusien kaavan I mukaisten yhdisteiden parempi stabiilisuus johtuu siitä, että yhdisteissä ei ole vapaata merkaptoryhmää. Yhdisteiden liuoksia voidaan varastoida paljon kauemmin - 1 mg/ml N-/T-(N-bentsoyyli-L-fenyyliala-10 nyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli/-*L-proliinia 1:1 metano-li/vesiseoksessa ei hajoa lainkaan 6 tunnin varastoinnin aikana. Yhdisteitä ei myöskään tarvitse sekoittaa pelkis-timen kanssa dimerisointireaktioiden estämiseksi, kuten kaptoprilin ollessa kyseessä. Uudet yhdisteet ovat siten 15 helpommin käsiteltävissä ja viimeisteltävissä kaupalliseen muotoon.
Lisäksi tunnetulla kaptoprilillä on normaalilla an-nosalueella haitallisia sivuvaikutuksia, jotka johtuvat yhdisteessä olevasta vapaasta merkaptoryhmästä. Kaavan I 20 mukaiset uudet yhdisteet eivät sisällä vapaita merkapto-ryhmiä, eivätkä ne helposti hydrolysoidu sellaisiksi yhdisteiksi. Yhdisteillä on siten paljon paremman stabiili-suutensa lisäksi se etu, että ne eivät aiheuta sivuvaikutuksia .
25 Keksintöä valaistaan tarkemmin seuraavien esimerk kien avulla.
Ohutlevykromatografiassa käytettiin silikageelile-vyjä ja seuraavia liuotinsysteemejä:
Systeemi 1 ZiTf(lE7: 30 trikloorimetaani rmetanoli:etikkahappo, 2:1:0,003 (tilavuusosina)
Systeemi 2 ARf(2)_/: butanoli:etikkahappo:vesi, 4:1:1 (tilavuusosina) 35 NMR-spektrit ajettiin 60 MHz:llä.
15 76558
Esimerkki 1 N-/T- (bentsoyyli-D-fenyylialanyylitio)-2-D-metyyli-propanoyylf7-L-proliinin valmistus a. N-/_3- (HCl.H-D-fenyylialanyylitio) -2-D-metyylipro-5 panoyyli7-L-proliinin valmistus
Liuos, jossa oli 531 mg (2 mmol) Boc-D-fenyyliala-niinia 3 ml:ssa uudelleentislattua dimetyyliformamidia (DMF), jäähdytettiin -20°C:seen ja sekoitettiin voimakkaasti. Lisättiin 341 mg (2,1 mmol) 1,1'-karbonyylidi-imidat-10 solia 3 ml:ssa DMF:ää (-10°C:ssa) ja muodostunutta liuosta sekoitettiin kaksi tuntia -10°C:ssa. Lisättiin liuos, jossa oli 456 mg (2,1 mmol) 2-D-metyyli-3-merkaptopropanoyyli-L-proliinia 2 ml:ssa DMF:ää sekä 0,285 ml (2,1 mmol) N-etyy-limorfoliinia ja reaktioseosta sekoitettiin tunti -10°C:ssa. 15 Seos lämmitettiin hitaasti huoneen lämpötilaan. Liuotin poistettiin pyöröhaihduttimessa 35°C:ssa. Jäännös liuotettiin 25 ml saan etyyliasetaattia ja lisättiin 35 ml vettä. Seos jäähdytettiin 0°C:seen ja hapotettiin sitten 0,3 ml:11a väkevää kloorivetyhappoa. Orgaanista faasia pestiin 20 kerran kylmällä, laimealla kloorivetyhapolla, kolmesti vedellä ja kolmesti kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin pyöröhaihduttimessa ja saatiin öljymäinen jäännös. Tuote puhdistettiin 25 pylväässä (2,2 x 98 cm), joka oli täytetty Sephadex LH-20:llä, ja tasapainotettiin ja kehitettiin isopropanolin ja tetrahydrofuraanin seoksella tilavuussuhteessa 7:3. Eristettiin fraktioita, kukin tilavuudeltaan 5,6 ml. Fraktiot 34-38 yhdistettiin. Fraktiot 33, 39, 40 ja 41 yhdis-30 tettiin, liuottimet poistettiin ja valutettiin uudelleen LH-20 -pylvään läpi. Uudelleenkromatografoidun aineksen fraktiot 37-40 ja fraktiot 37-40 ensimmäisestä kromatogra-foinnista puhdistettiin edelleen kolonnissa (1,2 x 98 cm), joka oli täytetty silikageelillä ja tasapainotettiin ja 35 kehitettiin etyyliasetaatilla. Eristettiin fraktioita, kukin tilavuudeltaan 5,0 ml. Fraktiot 22-29 yhdistettiin ja liuotin poistettiin pyöröhaihduttimessa. Jäännös liuo- 16 7 6 5 5 8 tettiin 1 ml:aan vedetöntä trifluorietikkahappoa, jossa oli 0,5 ml anisolia. Suojaryhmien poisto tapahtui puolen tunnin aikana huoneen lämpötilassa. Jäännös liuotettiin 1 ml:aan vetykloridillä kyllästettyä etyyliasetaattia.
5 Lisättiin 0°C:ssa 5 ml vedetöntä eetteriä, jolloin muodostui valkoinen sakka. Tunnin kuluttua 0°C:ssa valkoinen kiintoaine eristettiin suodattamalla ja pestiin viidesti eetterillä. Tuote kuivattiin yli yön vakuumieksikaattoris-sa NaOH:n ja P205:n päällä, saanto 381 mg.
10 b. N-/7-(bentsoyyli-D-fenyylialanyylitio)-2-D-me- tyylipropanoyyli7-L-proliinin valmistus 93 mg (0,23 mmol) yllä olevan vaiheen a. tuotetta N-£_3- (HC1 .H-D-fenyylialanyylitio) -2-D-metyylipropanoyylf/-L-proliinia saatettiin reagoimaan 0,029 ml:n (0,25 mmol) 15 kanssa bentsoyylikloridia 0,5 ml:ssa uudelleentislattua vedetöntä dioksaania (0°C:ssa) sekä 0,099 mltssa (0,71 mmol) N-etyylimorfoliinia. Reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti kolme tuntia huoneen lämpötilassa. Lisättiin 0,015 ml bentsoyylikloridia ja 0,018 ml N-etyylimorfolii-20 nia ja seosta sekoitettiin tunti. Liuotin poistettiin pyöröhaihduttimessa 30°C:ssa. Jäännös liuotettiin pieneen määrään n-butanoli-etikkahappo-veden (4:1:5) ylä- ja ala-faasia ja valutettiin pylvääseen (1,2 x 98 cm), joka oli täytetty Sephadex G-25:llä ja tasapainotettu partitio-25 kromatografiaa varten. Pylväs kehitettiin yläfaasi liikkuvana faasina (2,6 ml:n fraktioita). Fraktiot 15-24 yhdistettiin ja liuotin poistettiin pyöröhaihduttimessa. Jäännös liuotettiin pieneen määrään etyyliasetaattia ja puhdistettiin edelleen silikageelillä täytetyssä pylväässä 30 (1,2 x 95 cm) ja tasapainotettiin ja kehitettiin etyyli asetaatilla (5 ml:n fraktioita). Päähuipun sisältävät fraktiot yhdistettiin ja liuotin poistettiin. Aine puhdistettiin edelleen kromatografoimalla Sephadex LH-20:tä sisältävässä pylväässä (1,8 x 89 cm) ja tasapainotettiin ja 35 kehitettiin isopropanolin ja tetrahydrofuraanin seoksella tilavuussuhteessa 7:3. Eristettiin fraktioita, kukin tila- 17 76558 vuudeltaan 5,7 ml ja haluttu tuote eluoitiin fraktioissa 15-18 {saanto 98 mg). Lopputuote käyttäytyi kuten puhdas aine paperielektroforeesissa pH-arvoissa 5,0 ja 2,0 ja ohutkerroskromatografoitaessa.
5 L</d = -25,1; Rf (1) = 0,56; Rf (2) = 0,74; NMR/(CDC13 + CD3OD) : 1,19 (3H, b.d., CH3) , 1,5-2,4 (4H, m, CH2), 2,5-3,3 (5H, m, CH ja CH2), 3,3-3,8 (2H, m, CH2), 4.0- 4,4 (1H, m, CH), 4,8-5,2 (1H, m, CH), 7,23 (5H, s, aromaattinen H), 7,2-7,9 (5H, m, aromaattinen H).
10 Esimerkki 2 N-£3-(bentsoyyli)-D,L-fenyylialanyylitio)-2-D-me-tyylipropanoyyli7-L-proliinin valmistus Käyttäen Boc-D-fenyylialaniinin ja Boc-L-fenyyli-alaniinin 50:50-seosta yllä olevan esimerkin 1 menetel-15 mässä valmistettiin Ν-/Π-(bentsoyyli-D,L-fenyylialanyyli-tio)-2-D-metyylipropanoyyli/-L-proliini.
Vastaavan D-fenyylialanyylitio-yhdisteen tiedot ovat seuraavat: £\/d = -25,1; Rf (6) = 0,56; Rf (7) = 0,74; 20 NMR<i'(CDCl3 + CD3OD) : 1,19 (3H, b.d., CH3) , 1,5-2,4 (4H, m, CH2), 2,5-3,3 (5H, m, CH ja CH2), 3,3-3,8 (2H, m, CH2), 4.0- 4,4 (1H, m, CH), 4,8-5,2 (1H, m, CH), 7,23 (5H, s, aromaattinen H), 7,2-7,9-(5H, m, aromaattinen H).
Esimerkki 3 25 N-(2-bentsoyylifenyylialanyylitiopropanoyyli)-L- proliini- ja N-(3-bentsoyylifenyylialanyylitiopropanoyyli)-L-proliinijohdannaisten valmistus
Haluttu yhdiste valmistettiin substituoimalla yllä olevien esimerkkien 1-2 menetelmissä 2-D-metyyli-3-merkap-30 topropanoyyli-L-proliini joko 2-merkaptopropanoyyli-L-proliinilla tai 3-merkaptopropanoyyli-L-proliinilla ja antamalla merkaptoyhdisteen reagoida joko Boc-D-fenyylialaniinin tai tämän ja Boc-D-fenyylialaniinin 50:50-seok-sen kanssa.
35 L-fenyylialanyylitioyhdisteen tiedot ovat seuraa vat;
Rf (1) = 0,58; Rf (2) = 0,78; Rf (3) = 0,59; Rf (4) = 0,59.
18 76558
Merkaptoyhdisteet voidaan valmistaa menetelmien avulla, joita on kuvattu jossakin US-patenttijulkaisuista 4 690 937, 4 690 938, 4 698 356, 4 690 939, 4 695 577, 4 690 940 ja 4 698 355.
5 Esimerkki 4 L-3,4-dehydroproliini-, D,L-3,4-dehydroproliini-, L-3-hydroksiproliini-, L-4-hydroksiproliini- ja L-tiatso-lidiini-4-karboksyylihappojohdannaisten valmistus
Haluttu yhdiste valmistettiin käyttäen asianmukais- 10 ta merkaptoyhdistettä, jossa L-3,4-dehydroproliini, D,L- 3,4-dehydroproliini, L-3-hydroksiproliini, L-4-hydroksi-proliini tai L-tiatsolidiini-4-karboksyylihappo substi-tuoi L-proliinin yllä olevien esimerkkien 1-3 menetelmissä.
L-3,4-dehydroproliiniyhdisteen tiedot ovat seuraa- 15 vat:
Rf (2) = 0,73; Rf(3) = 0,59; Rf(4) = 0,615; Rf(5) = 0,73
Asianmukaiset merkaptoyhdisteet voidaan valmistaa käyttäen menetelmiä, joita on kuvattu tähän viitteinä liitetyissä US-patenttijulkaisuissa 4 690 937, 4 690 938, 20 4 698 356, 4 690 939, 4 695 577, 4 690 940 ja 4 698 355.
Esimerkki 5 D-alanyyli-, D-tryptofyyli-, D-tyrosyyli-, D-iso-leusyyli-, D-leusyyli-, D-histidyyli- ja D-valyylijohdannaisten valmistus 25 Haluttu yhdiste valmistettiin substituoimalla yllä olevien esimerkkien 1, 3 ja 4 menetelmissä Boc-D-fenyyli-alaniini Boc-D-alaniinilla, Boc-D-tryptofaanilla, Boc-D-tyrosiinilla, Boc-D-isoleusiinilla, Boc-D-leusiinilla, Boc-D-histidiinillä tai Boc-D-valiinilla.
30 NoC-/T- (Noi-bentsoyyli-D- £7K7d = -103,0 alanyylitio)-2-D-metyyli- 1^(6) ) 0,58 propanoyyli7-L-proliini R^(7) = 0,75 NÄR^ (CDC1-) ; 1,19 (3H, b.d. , CH-.) , 1,48-5 (3H, d, CH~) , 1,7- 2,3 (4H, m, CH~), 2,5-3,2 (3H, m, CH ja CH2), 3,25-3,8 (2H, ... m, CH„) , 4,2-4,7 (1H, m, CH) , 4,89 (IH, q, CH), 7,06 (1H, d, NH), 7,3-8,0 (5H, m, aromaattinen H) ja 10,21 (1H, s, COOH) 19 7655 8 N X -ί3~ (NX-bentsoyyli-D- £V7D = “33,1 tryptofyylitio)-2-D-metyyli- R. (b) = 0,56 propanoyyl.i/-L-proliini RZ (7) = 0,73 NÄR.3 (CD.OD): 1,0 (3H, b.d., 011,),1,65-2,3 (4H, m, CH.) , 2,6-3,1 (3H, m, CH.), 3,2-3,7 5 {4H, in, CH ja CH.) 7 4,05-4,35 (1H, m, CH), 4,8-5,1 (1H, m, CH), ja 6,88-7,82 (10H, m, aromaattinen H) N<-/7- (N<x -bentsoyyli-D- " ~5;?'0 leusyylitio)-2-D-metyyli- 58 in propanoyyli'/-L-proliini ~ 0,°2 , , 10 * * 1 NPIR^ (CD.OD) : 0,99 (6H, b.d, CH.), 1,22 (3H, b.d, CH,), 1.5- 2,4 (7H, m, CH ja CH.), 2.5- 3,15 (3H, m, CH ja CH.), 3,4-3,9 (2H, m, CH.), 4,1-4,45 (1H, m, CH), 4,6-570 (1H, m, CH) ja 7,5-8,1 (5H, m, aro- 15 maattinen H) N,/-(3-D-alanyylitio-2-D- = “105,4 metyylipropanoyyli)-L-pro- r (6) = 0,25 liini r| (7) 0,11
Esimerkki 6 20 - D,L-alanyyli-, D,L-tryptofyyli-, D,L-tyrosyyli-, D,L-isoleusyyli-, D,L-leusyyli-, D,L-histidyyli- ja D,L-valyylijohdannaisten valmistus
Haluttujen yhdisteiden saamiseksi substituoitiin yllä olevien esimerkkien 2-4 menetelmissä Boc-D-fenyyli-25 alaniinin ja Boc-L-alaniinin seos Boc-D-A:n ja Boc-L-A:n 50:50-seoksella, jolloin A on alaniini, tryptofaani, ty-rosiini, isoleusiini, leusiini, histidiini tai väliini. Esimerkki 7
Substituoimalla yllä olevissa esimerkeissä 1 ja 30 3-6 bentsoyylikloridi asianmukaisella yhdisteellä ja seuraamalla alan hyvin tuntemia menetelmiä, joita on kuvattu esim. US-patenttijulkaisuissa 4 690 937, 4 690 938, 4 698 356, 4 690 939, 4 695 577, 4 690 940 ja 4 698 355, valmistettiin formyyli-, asetyyli-, propanoyyli-, butanoyy-35 li-, fenyyliasetaatti-, fenyylipropanoyyli-, syklopentaa-nikarbonyyli-, syklopentaanikarbonyyli-L-lysyyli-, pyro-L-glutamyyli-L-lysyyli-, L-lysyyli-, L-arginyyli- ja pyro-L-glutamyylijohdannaiset.
20 7655 8 N<-Z3-N^-asetyyli-D-fenyy- /£<7D = “51,9 lialalyynitio)-2-D-metyyli- Rf(l) = 0,54 propanoyylj7-L-proliini r5(2) - 0,54 NHR Λ(CDCl^): 1,17 (3H, b.d., CH3), 1,75-2,35 (4H, m, CH_), 1,91 (3H, s, CH3), 2,55-3,25 5 (5H, m, CH ja CH ), 3,4-3,8 (2H, m, CH„), 4,1-4,6 (1H, m, CH), 4,6-570 (1H, m, CH), 6,63 (1H, d, NH), 6,82 (lH,s, COOH), 7,17 (5H, b.s., aromaattinen H) NX-/.3- (N\-syklopentaani- ^\'/D = -47,2 10 karbonyyli-D-alanyylitio)- Rf(I) = 0,62 2-D-metyylipropanoyyli7- R*(2) = 0,74 L-proliini NMR,( (CDC13 tCD^OD) : 1,20 (3H, b.d', CH.,) , 1,38 (3H, d, CHO , 1,5-2,4 T12H, m, CH„), 2,4-3,2 (4H, m, CH ja CH?)7 3,3-3,8 (2H, m, CH~), 4,2-4,8 (2H, m, 15 CH) N <-/_3-(N\-tert-butyylioksi- A.7_ = -62,5 karbonyyli-D-alanyylitio)- Rf(I) = 0,59 2-D-metyylipropanoyyli7-L- R^(2) = 0,73 proliini NX-/3-(Νχ-asetyyli-D-leusyy- = -29,5 20 litio)-2-D-metyylipropanoyy- Rf(±) = 0,55 li/-L-proliini R^(2) = 0,59 N^-/.3-(X-asetyyli-D-alanyy- /_\/Ώ = -72,3 litio)-1-D-metyylipropanoyy-li/-L-proliini Νλ-7.3-(N<X-asetyyli-D-valyy- /_Y/ = -73,8 “* litio)-2-D-metyylipropanoyy- D li/-L-proliini NX-/.3-(NX-propanoyyli-D-ala- /_ x/^ = -62,0 nyylitio)-2-D-metyylipropanoyy li/-L-proliini 30 NX-/.3-(NX-butanoyyli-D-ala- /.·Ή7 = -57,9 nyylitio)-2-D-metyylipropano-yyli7-L-proliini
Claims (3)
1. Menetelmä verenpainetaudissa käytettävän angioten-siinin muuttajaentsyymin inhibiittorin valmistamiseksi, jol-5 la on kaava 0 II R-A-S-(CH2)n-CH-C-R2 (I) «1 10 jossa R on vety, formyyli, asetyyli, propanoyyli, butanoyyli, fenyyliasetyyli, fenyylipropanoyyli, bentsoyyli, syklopentaa-nikarbonyyli, tert.-butyylioksikarbonyyli, syklopentaani-karbonyyli-L-lysyyli, pyro-L-glutamyyli-L-lysyyli, L-lysyy-li, L-arginyyli tai pyro-L-glutamyyli; A on D-fenyylialanyy-15 li, D,L-alanyyli, D-alanyyli, D,L-tryptofyyli, D-tryptofyy-li, D,L-tyrosyyli, D-tyrosyyli, D,L-isoleusyyli, D-isoleu-syyli, D,L-leusyyli, D-leusyyli, D,L-histidyyli, D-histidyy-li, D,L-valyyli tai D-valyyli, joiden o(-aminoryhmä on amidin välityksellä liittynyt radikaaliin R; R^ on vety tai metyy-20 li; R2 on L-proliini, L-3,4-dehydroproliini, D,L-3,4-dehyd-roproliini, L-3-hydroksiproliini, L-4-hydroksiproliini, L-tiatsolidiini-4-karboksyylihappo tai L-5-oksoproliini, joiden iminoryhmä on imidin välityksellä liittynyt ryhmään 0
25 -C-, ja n on 0 tai 1 siten, että kun n on 0, Rj on metyyli, sekä näiden yhdisteiden suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että asianmukaisesti suojattu D- tai D,L-aminohappo tai D- ja L-aminohappojen seos saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 30 0 HS-(CH2)n-CH-C-R2 (II) Rl jossa n, R^ ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä, tai sen 35 johdannaisen kanssa, jossa R2 on suojattu; suojaryhmä(t) poistetaan ja haluttaessa ensimmäisessä vaiheessa saatu yh- 22 7 6 5 5 8 diste, jolla on kaava 0 II HA-S- (CH2) n-(j:H-C-R2 5 R1 tai sen happoadditiosuola, jossa kaavassa A, n, ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan asyloin-tiaineen RÖH tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, jossa R merkitsee samaa kuin edellä, kaavan I mukaisen yhdisteen 10 saamiseksi, jossa R on muu kuin vety.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ensimmäinen reaktio suoritetaan 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin läsnäollessa.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että R2:lla on myös karboksyylin suojaryhmä, joka poistetaan ensimmäisen reaktion jälkeen. 23 7 6 5 5 8
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/121,188 US4692459A (en) | 1979-08-14 | 1980-03-03 | Anti-hypertensive agents |
US12118880 | 1980-03-03 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI810663L FI810663L (fi) | 1981-09-04 |
FI76558B true FI76558B (fi) | 1988-07-29 |
FI76558C FI76558C (fi) | 1988-11-10 |
Family
ID=22395126
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI810663A FI76558C (fi) | 1980-03-03 | 1981-03-03 | Foerfarande foer framstaellning av en vid blodtrycksjukdom anvaendbar inhibition foer angiotensinomvandlande enzym. |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4692459A (fi) |
EP (1) | EP0035383B1 (fi) |
JP (1) | JPS56164115A (fi) |
AT (1) | AT385038B (fi) |
AU (1) | AU534945B2 (fi) |
DD (1) | DD158238A5 (fi) |
DE (1) | DE3163812D1 (fi) |
DK (1) | DK93081A (fi) |
FI (1) | FI76558C (fi) |
IE (1) | IE51259B1 (fi) |
IL (1) | IL62203A (fi) |
NZ (1) | NZ194002A (fi) |
PL (1) | PL229971A1 (fi) |
PT (1) | PT70158A1 (fi) |
ZA (1) | ZA803486B (fi) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4692458A (en) * | 1980-03-05 | 1987-09-08 | University Of Miami | Anti-hypertensive agents |
JPS57209270A (en) * | 1981-06-19 | 1982-12-22 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Proline derivative |
CA1254699A (en) * | 1984-03-12 | 1989-05-23 | Jasjit S. Bindra | Renin inhibitors containing statine or derivatives thereof |
US5187183A (en) * | 1988-06-15 | 1993-02-16 | Brigham & Women's Hospital | S-nitroso derivatives of ACE inhibitors and the use thereof |
US5356890A (en) * | 1988-06-15 | 1994-10-18 | Brigham And Women's Hospital | S-nitroso derivatives of ace inhibitors and the use thereof |
US5025001A (en) * | 1988-06-15 | 1991-06-18 | Brigham And Women's Hospital | S-nitroso derivatives of ACE inhibitors and the use thereof |
DE4010797A1 (de) * | 1990-04-04 | 1991-10-10 | Hoechst Ag | Substituierte azole, verfahren zu deren herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung |
DE10115938A1 (de) * | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Medigene Ag Ges Fuer Molekular | Verfahren zur Herstellung von Oxirancarbonsäuren und Derivaten davon |
US11229746B2 (en) | 2006-06-22 | 2022-01-25 | Excelsior Medical Corporation | Antiseptic cap |
US9259535B2 (en) | 2006-06-22 | 2016-02-16 | Excelsior Medical Corporation | Antiseptic cap equipped syringe |
US9078992B2 (en) | 2008-10-27 | 2015-07-14 | Pursuit Vascular, Inc. | Medical device for applying antimicrobial to proximal end of catheter |
CA2841832C (en) | 2011-07-12 | 2019-06-04 | Pursuit Vascular, Inc. | Device for delivery of antimicrobial agent into a trans-dermal catheter |
US10046156B2 (en) | 2014-05-02 | 2018-08-14 | Excelsior Medical Corporation | Strip package for antiseptic cap |
JP6822978B2 (ja) | 2015-05-08 | 2021-01-27 | アイシーユー・メディカル・インコーポレーテッド | 治療薬のエミッタを受け入れるように構成された医療用コネクタ |
PL3525865T3 (pl) | 2016-10-14 | 2023-02-06 | Icu Medical, Inc. | Nasadki dezynfekcyjne dla łączników medycznych |
WO2018204206A2 (en) | 2017-05-01 | 2018-11-08 | Icu Medical, Inc. | Medical fluid connectors and methods for providing additives in medical fluid lines |
JP6600386B1 (ja) * | 2018-07-06 | 2019-10-30 | Kyb株式会社 | 弁装置 |
US11541221B2 (en) | 2018-11-07 | 2023-01-03 | Icu Medical, Inc. | Tubing set with antimicrobial properties |
US11400195B2 (en) | 2018-11-07 | 2022-08-02 | Icu Medical, Inc. | Peritoneal dialysis transfer set with antimicrobial properties |
US11534595B2 (en) | 2018-11-07 | 2022-12-27 | Icu Medical, Inc. | Device for delivering an antimicrobial composition into an infusion device |
US11541220B2 (en) | 2018-11-07 | 2023-01-03 | Icu Medical, Inc. | Needleless connector with antimicrobial properties |
US11517732B2 (en) | 2018-11-07 | 2022-12-06 | Icu Medical, Inc. | Syringe with antimicrobial properties |
US11433215B2 (en) | 2018-11-21 | 2022-09-06 | Icu Medical, Inc. | Antimicrobial device comprising a cap with ring and insert |
EP4255552A1 (en) | 2020-12-07 | 2023-10-11 | ICU Medical, Inc. | Peritoneal dialysis caps, systems and methods |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3947575A (en) * | 1969-06-30 | 1976-03-30 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Peptides as argiotensin converting enzyme inhibitors |
US3832337A (en) * | 1970-07-28 | 1974-08-27 | Squibb & Sons Inc | Peptide enzyme inhibitors |
US3891616A (en) * | 1974-04-17 | 1975-06-24 | Squibb & Sons Inc | Hypotensive {62 -homoaminoacid nonapeptides |
US4046889A (en) * | 1976-02-13 | 1977-09-06 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Azetidine-2-carboxylic acid derivatives |
US4052511A (en) * | 1976-02-13 | 1977-10-04 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Carboxyacylproline derivatives |
US4053651A (en) * | 1976-05-10 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Compounds and method for alleviating angiotensin related hypertension |
US4113715A (en) * | 1977-01-17 | 1978-09-12 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Amino acid derivatives |
GR73585B (fi) * | 1978-09-11 | 1984-03-26 | Univ Miami |
-
1979
- 1979-09-10 PT PT70158A patent/PT70158A1/pt unknown
-
1980
- 1980-03-03 US US06/121,188 patent/US4692459A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-06-11 NZ NZ194002A patent/NZ194002A/xx unknown
- 1980-06-11 ZA ZA00803486A patent/ZA803486B/xx unknown
- 1980-06-11 AU AU59227/80A patent/AU534945B2/en not_active Ceased
-
1981
- 1981-02-24 IL IL62203A patent/IL62203A/xx unknown
- 1981-02-27 DE DE8181300825T patent/DE3163812D1/de not_active Expired
- 1981-02-27 EP EP81300825A patent/EP0035383B1/en not_active Expired
- 1981-03-02 DK DK93081A patent/DK93081A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-03-02 AT AT0097081A patent/AT385038B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-03-03 FI FI810663A patent/FI76558C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-03-03 PL PL22997181A patent/PL229971A1/xx unknown
- 1981-03-03 IE IE460/81A patent/IE51259B1/en unknown
- 1981-03-03 DD DD81228014A patent/DD158238A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-03-03 JP JP3042981A patent/JPS56164115A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ194002A (en) | 1982-12-21 |
DE3163812D1 (en) | 1984-07-05 |
IE51259B1 (en) | 1986-11-26 |
EP0035383A1 (en) | 1981-09-09 |
DK93081A (da) | 1981-09-04 |
PT70158A1 (en) | 1982-03-01 |
DD158238A5 (de) | 1983-01-05 |
AU534945B2 (en) | 1984-02-23 |
PL229971A1 (fi) | 1982-02-01 |
ATA97081A (de) | 1987-07-15 |
FI76558C (fi) | 1988-11-10 |
ZA803486B (en) | 1981-06-24 |
US4692459A (en) | 1987-09-15 |
EP0035383B1 (en) | 1984-05-30 |
JPH03386B2 (fi) | 1991-01-07 |
AU5922780A (en) | 1981-09-10 |
JPS56164115A (en) | 1981-12-17 |
FI810663L (fi) | 1981-09-04 |
AT385038B (de) | 1988-02-10 |
IE810460L (en) | 1981-09-03 |
IL62203A (en) | 1984-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI76558C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en vid blodtrycksjukdom anvaendbar inhibition foer angiotensinomvandlande enzym. | |
US4692458A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4692437A (en) | Anti-hypertensive agents | |
EP0073143B1 (en) | Novel complex amido and imido derivatives of carboxyalkyl peptides and thioethers and ethers of peptides | |
EP0048159A2 (en) | Novel carboxyalkyl peptides and thioethers and ethers of peptides as antihypertensive agents | |
US4766110A (en) | Novel complex amido and imido derivatives of carboxyalkyl peptides | |
EP0009898B1 (en) | Novel anti-hypertensive mercaptoacylamino acid derivatives, their preparation and use | |
EP0036713B1 (en) | Angiotensin converting enzyme inhibitors | |
US4734420A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690936A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4698356A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690939A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4833152A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4695577A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690940A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690938A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4698355A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690937A (en) | Anti-hypertensive agents | |
KR850001629B1 (ko) | 아미노산-및 아실아미노산-치환 티올에스테르 프롤린류의 제조방법 | |
IE51739B1 (en) | Anti-hypertensive agents | |
KR840002357B1 (ko) | S-(아실아미도아실)메르캅토아실 프롤린류의 제조방법 | |
GB2114561A (en) | Anti-hypertensive agents | |
NO168306B (no) | Analogifremgangsmaate til fremstilling av en inhibitor forangiotensin-omdannende enzym | |
HU199786B (en) | Process for producing peptide derivatives suitable for treating high blood pressure | |
IE48823B1 (en) | Novel anti-hypertensive mercaptoacylamino acid derivatives,their preparation and use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: UNIVERSITY OF MIAMI |