FI73597B - FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ETT INTRAVENOEST INJICERBART HUMANIMMUNOGLOBULIN. - Google Patents

FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ETT INTRAVENOEST INJICERBART HUMANIMMUNOGLOBULIN. Download PDF

Info

Publication number
FI73597B
FI73597B FI824283A FI824283A FI73597B FI 73597 B FI73597 B FI 73597B FI 824283 A FI824283 A FI 824283A FI 824283 A FI824283 A FI 824283A FI 73597 B FI73597 B FI 73597B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
immunoglobulin
igg
activity
antibody
solution
Prior art date
Application number
FI824283A
Other languages
Finnish (fi)
Other versions
FI824283A0 (en
FI73597C (en
FI824283L (en
Inventor
Rodolphe Fritsche
Norbert Chariatte
Original Assignee
Schweiz Serum & Impfinst
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=4194125&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI73597(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Schweiz Serum & Impfinst filed Critical Schweiz Serum & Impfinst
Publication of FI824283A0 publication Critical patent/FI824283A0/en
Publication of FI824283L publication Critical patent/FI824283L/en
Publication of FI73597B publication Critical patent/FI73597B/en
Application granted granted Critical
Publication of FI73597C publication Critical patent/FI73597C/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065Purification, fragmentation
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

! 73597! 73597

Laskimonsisäisesti annettavan humaani-immunoglobu1iinin valmistusmenetelmäA process for the preparation of human immunoglobulin for intravenous administration

Esitettävä keksintö koskee uutta, laskimonsisäisesti annettavaa natiivia, kemiallisesti muuttumatonta ja entsymaattisesti hajoittamatonta stabiilia immunoglobuliinia, jolla ei ole lainkaan antikomplementtiaktiivisuutta, sekä sen valmistustapaa .The present invention relates to a novel intravenous native, chemically unchanged and enzymatically undegraded stable immunoglobulin having no anticomplementary activity and to a process for its preparation.

Humaani-immunoglobuliineilla on tärkeä tehtävä tartuntatautien ja vasta-ainepuutostilojen torjunnassa ja hoidossa. Gammaglobuliineja käytetään esimerkiksi suojakeinona virusperäisiä tartuntatauteja vastaan, kuten esimerkiksi maksatulehdusta, tuhkarokkoa, vihurirokkoa, sikotautia, vesikauhua vastaan tai bakteerien aiheuttamia tauteja, kuten jäykkäkouristusta, kurkkumätää ja hinkuyskää vastaan. Esimerkiksi stafylokokkien, Escherichia colin, Pseudomonas1 in ym. aiheuttamissa antibioottiresistenteissä tartuntataudeissa käytetään gamma-globuliinihoitoa. Spesifisiä gammaglobuliineja (igG) käytetään myös rhesus-inkompatibiliteetin ennaltaehkäisyyn.Human immunoglobulins play an important role in the prevention and treatment of infectious diseases and antibody deficiency conditions. For example, gamma globulins are used as a protection against viral infectious diseases such as hepatitis, measles, rubella, mumps, rabies, or bacterial diseases such as tetanus, diphtheria, and pertussis. For example, in antibiotic-resistant infectious diseases caused by staphylococci, Escherichia coli, Pseudomonas1, etc., gamma globulin therapy is used. Specific gamma globulins (igG) are also used to prevent rhesus incompatibility.

Sitä paitsi gammaglobuliinihoito on erittäin tärkeä suojakeino infektioita vastaan potilailla, joilla esiintyy immuno-globuliinivajausta, jotka siis kärsivät agamma- tai hypo-gammaglobulinemiasta.In addition, gamma globulin therapy is a very important safeguard against infections in patients with immunoglobulin deficiency, who thus suffer from agamma or hypo-gamma globulinemia.

Tavanomaiseen lihakseen annettavaan hoitoon liittyy joitakin merkittäviä puutteita:There are some significant shortcomings with conventional intramuscular treatment:

Voidaan injisoida vain rajoitettu määrä, enintään 10 ml.Only a limited amount, up to 10 ml, can be injected.

2. Resorptio elimistön läpi on hyvin hidas. R.Martin du Pan et ai., Blut 5, 104 (1959) totesivat esimerkiksi, että viiden vuorokauden kuluttua vielä 35-40 % immunoglobuliinista oli jäljellä injektiokohdassa.2. Resorption through the body is very slow. For example, R.Martin du Pan et al., Blut 5, 104 (1959) found that after five days, 35-40% of the immunoglobulin remained at the injection site.

3. Injektiokohdassa tapahtuva proteolyysi hajoittaa suuren osan immunoglobuliinia, vrt. S. Barandun et ai., Vox Sanguinis 28, 157-175 (1975).3. Proteolysis at the injection site degrades much of the immunoglobulin, cf. S. Barandun et al., Vox Sanguinis 28, 157-175 (1975).

2 73597 Päin vastoin kuin edellä saadaan laskimoon annetulla injektiolla tai infuusiolla nopeasti veren korkea immunoglobulii-nitaso, mikä esimerkiksi septis-toksisissa infektioissa on välttämätöntä.2 73597 In contrast to the above, high blood levels of immunoglobulins are rapidly obtained by intravenous injection or infusion, which is essential, for example, in septic toxic infections.

Laskimoon annettavaksi ei kuitenkaan sovellu veriplasmasta, seerumista tai istukasta tavanomaisin fraktioimismenetelmin valmistettu immunoglobuliini, joka soveltuu ainoastaan lihakseen annettavaksi. Vrt. Cohn et ai., J. Amer.Chem. Soc.However, immunoglobulin prepared from plasma, serum or placenta by conventional fractionation methods and suitable for intramuscular administration only is not suitable for intravenous administration. See. Cohn et al., J. Amer. Chem. Soc.

68, 459 (1946), A.J.L. Strauss et ai., J.Immunol. 9J3, 24 (1964), A. Horejsi et ai., Acta Med.Scand. 155, 65 (1956), A.Poison et ai., Biochem. Biophys. Acta 8_2, 463 (1964).68, 459 (1946), A.J.L. Strauss et al., J. Immunol. 9J3, 24 (1964), A. Horejsi et al., Acta Med.Scand. 155, 65 (1956), A. Poison et al., Biochem. Biophys. Acta 82, 463 (1964).

Kun näitä immunoglobuliineja annetaan laskimonsisäisesti, aiheuttaa se n. 15-30 %:lla potilaista anafylaktisiä sietämät-tömyysreaktioita /C.A. Janeway et ai., New Engl. J.Med. 278, 919 (1968J_/. Potilailla joilla on immunoglobuliini vajausta ja joilla on erityisen suuri IgG:n tarve, nousee tämä anafylak-tisten reaktioiden taso aina 90 %:iin. Tähän päivään mennessä ei näille reaktioille ole voitu antaa yksikäsitteisen tyydyttävää selitystä. Tiedetään kuitenkin mitä todennäköisimmin, että reaktion laukaisevat komplementtia sitovat IgG-aggregaa-tit, joita usein esiintyy tavanomaisissa kaupallisissa immu-noglobuliinivalmisteissa. Olettamuksen puolesta puhuu se, että on voitu osoittaa selvä yhteys kliinisesti todettavien sietämättömyysreaktioiden, verenkierrossa olevan komplementin määrän sekä in vitro osoitetun immunoglobuliinien anti-komplementtiaktiivisuuden kesken. Laskimonsisäisesti annettavien immunoglobuliinien valmistamisen päätavoitteena on siksi niiden antikomplementtiaktiivisuuden poistaminen /S. Barandun et ai., Vox Sanguinis Ί_, 157-174 (1962]y.When these immunoglobulins are administered intravenously, it causes anaphylactic intolerance reactions in about 15-30% of patients /C.A. Janeway et al., New Engl. J.Med. 278, 919 (1968J_ /. In patients with immunoglobulin deficiency and a particularly high IgG requirement, this level of anaphylactic reactions rises to 90%. To date, no unambiguous satisfactory explanation has been given for these reactions. However, it is known complement-binding IgG aggregates, which are often present in conventional commercial immunoglobulin preparations, are likely to trigger a clear link between clinically detectable intolerance reactions, the amount of complement in the circulation and the immunoglobulin demonstrated in vitro. The main goal of the preparation of immunoglobulins for intravenous administration is therefore to eliminate their anticomplementary activity / S. Barandun et al., Vox Sanguinis Ί_, 157-174 (1962] y.

Immunoglobuliinien (IgG) antikomplementtiaktiivisuuden alentamiseksi tunnetaan nykyisin useita eri mahdollisuuksia:Several different possibilities are currently known for reducing the anticomplementary activity of immunoglobulins (IgG):

On esitetty IgG-aggregaattien poistamista ultrasentrifugoi-malla tai kromatografisesti erottamalla. Näin valmistetut tuotteet ovat kuitenkin epästabiileja ja niiden antikomplementti- 3 73597 aktiivisuus kehittyy pian, todennäköisesti monoraeerien aggre-goituessa uudelleen. /S. Barandun et ai., Vox Sanguinis 1_, 157 (1962^7·Removal of IgG aggregates by ultracentrifugation or chromatographic separation has been reported. However, the products thus prepared are unstable and their anticomplementary activity will soon develop, probably with re-aggregation of monorera. / S. Barandun et al., Vox Sanguinis 1_, 157 (1962 ^ 7 ·

Itävaltalaisen patentin 359 640 mukaan voi antikomplementti-aktiivisuutta alentaa sekoittamalla albumiinin tai seerumin kanssa. Näitä valmisteita ei kuitenkaan enää voi kutsua immu-noglobuliineiksi, koska antikomplementtiaktiivisuuden alentamiseksi riittävästi ovat albumiini- tai seerumilisäykset niin huomattavat, että IgG:n osuus kokonaisproteiinista jää liian alhaiseksi. IgG-aggregaattien hävittämistä on myöskin kokeiltu aktiivihiiliadsorption avulla /M.Steinbuch, Vox Sanguinis 13, 103, (1967J_/, tärkkelyksen, silikaattien avulla (DE-OSAccording to Austrian patent 359,640, anticomplementary activity can be reduced by mixing with albumin or serum. However, these preparations can no longer be called immunoglobulins because the albumin or serum additions are so significant that the proportion of IgG in the total protein remains too low to sufficiently reduce the anticomplementary activity. Destruction of IgG aggregates has also been attempted by activated carbon adsorption /M.Steinbuch, Vox Sanguinis 13, 103, (1967J_ /, starch, silicates (DE-OS

26 58 334) sekä polyetyleeniglykoleenisaostuksclla (DE-OS26 58 334) and polyethylene glycol precipitation (DE-OS

27 51 717). Millään näistä menetelmistä ei voi täysin poistaa antikomplementtiaktiivisuutta.27 51 717). None of these methods can completely eliminate anticomplementary activity.

Immunoglobuliinin osittaisella entsymaattisella hajoittami-sella saatiin valmisteita, joilla ei ollut komplementin sito-misaktiivisuutta, koska proteolyyttiset entsyymit kuten pepsii-ni ja plasmiini ensisijaisesti lohkaisevat tai tuhoavat IgG-molekyylin Fc-osan, johon tämän molekyylin antikomplementti-aktiivisuus paikallistuu.Partial enzymatic degradation of the immunoglobulin yielded preparations that lacked complement binding activity because proteolytic enzymes such as pepsin and plasmin primarily cleave or destroy the Fc portion of the IgG molecule to which the anticomplementary activity of this molecule localizes.

Tämän menetelmän suuri haitta on kuitenkin IgG-molekyylin Toosaan liittyvien biologisten toimintojen täydellinen kumoaminen, kuten esimerkiksi sytofiilinen aktiivisuus, opsonisaatio eli sytolyysi (bakteriolyysi), jotka kaikki edellyttävät vahingoittamatonta Fc-osaa, joka voi kiinnittyä Fc-resepto-riin. Sitä paitsi immunoglobuliinimolekyylin entsymaattises-sa hajoituksessa muodostuu Fab ja F(ab')2~osia, jotka kyllä voivat sitoa spesifisen antigeenin, mutta tuotteen biologinen puoliintumisaika on hyvin lyhyt, nimittäin 18-24 h, kun sen sijaan täydellisellä IgG-molekyylillä se on 18-22 vrk.However, a major disadvantage of this method is the complete reversal of the Toosa-related biological functions of the IgG molecule, such as cytophilic activity, opsonization, or cytolysis (bacteriolysis), all of which require an intact Fc moiety that can attach to the Fc receptor. In addition, the enzymatic degradation of an immunoglobulin molecule produces Fab and F (ab ') 2 - moieties, which may bind a specific antigen, but the biological half-life of the product is very short, namely 18-24 h, whereas for a complete IgG molecule it is 18 -22 days.

4 73597 Näistä huomattavista haitoista huolimatta on kaupallisesti tarjolla useita entsymaattisesti hajoitettuja laskimonsisäisesti annettavia immunoglobuliinivalmisteita:4 73597 Despite these significant disadvantages, a number of enzymatically degraded intravenous immunoglobulin preparations are commercially available:

Ranskalaisessa patentissa 2.382M esitetään pepsiinillä käsiteltyjä tuotteita, joissa on jopa n. 80 % F(ab')2_osia· Vain 3-5 % IgG-molekyyleistä on säilynyt hajoamatta proteolyysissä. Näillä valmisteilla ei ole antikomplementtiaktiivisuutta ja F(ab')2~osa't: pystyvät neutraloimaan toksiineja ja viruksia.French Patent 2,382M discloses pepsin-treated products having up to about 80% F (ab ') 2 moieties. Only 3-5% of IgG molecules remain undegraded in proteolysis. These preparations have no anticomplementary activity and F (ab ') 2 ~ osa': are able to neutralize toxins and viruses.

Esimerkiksi DE-patentissa 27 52 694 on esitetty plasmiLnilla käsiteltyjä IgG-valmisteita. Niissä on noin 30-40 % intaktia IgG (alaluokka 2 ja 4), joka ei hajoa proteolyyttisesti. Näiden valmisteiden komplementinsitomisaktiivisuus on heikko (20-50 mg/ml/2 CH5Q).For example, DE patent 27 52 694 discloses plasmid-treated IgG preparations. They contain about 30-40% intact IgG (subclasses 2 and 4), which is not proteolytically degraded. These preparations have low complement binding activity (20-50 mg / ml / 2 CH5Q).

Happokäsittelyllä pH:ssa 4 24 h 37°C voidaan esimerkiksi S. Barandun et al:n mukaan, Vox Sanguinis Ί_, 157 (1962)Acid treatment at pH 4 for 24 h at 37 ° C can be carried out, for example, according to S. Barandun et al., Vox Sanguinis 157_, 157 (1962).

IgG:n antikomplementtiaktiivisuutta voimakkaasti vähentää. Saadut valmisteet sisältävät 85-90 % monomeeristä IgG:tä ja 10-15 % IgG-aggregaatteja. Näiden tuotteiden komplementinsitomisaktiivisuus on heikko (50-70 mg/ml/2CH50). Niiden biologinen puoliintumisaika on lyhentynyt noin 14 vuorokauteen ja valmisteilla on varastoitaessa heikko stabiilisuus ja niiden antikomplementtiaktiivisuus lisääntyy jälleen. Jonkin aikaa on ollut kaupallisesti saatavissa tällä menetelmällä valmistettu stabiili kylmäkuivattu valmiste.The anticomplement activity of IgG is greatly reduced. The resulting preparations contain 85-90% monomeric IgG and 10-15% IgG aggregates. These products have low complement binding activity (50-70 mg / ml / 2CH50). Their biological half-life has been reduced to about 14 days and the preparations have poor storage stability and their anti-complement activity increases again. For some time, a stable lyophilized preparation prepared by this method has been commercially available.

Useasti on yritetty ja ehdotettu laskimonsisäisesti annettavan IgG-valmisteen tuottamista reaktiokykyisten kemikalien avulla.There have been several attempts and proposals to produce an intravenous IgG preparation using reactive chemicals.

a) Beta-propiolaktonilla tehdään IgG:n Fc-osan komplementti-reseptorit tehottomiksi. Näin valmistetut tuotteet eivät enää sido komplementtia ja ne sisältävät aina 90 %:iin asti mono-meeriä, niiden biologinen puoliintumisaika on kuitenkin laskenut 4-12 vuorokauteen. Vertaa: eurooppalainen patenttihakemusa) Beta-propiolactone inactivates the complement receptors of the Fc portion of IgG. The products thus prepared no longer bind complement and contain up to 90% monomer, however, their biological half-life has decreased to 4-12 days. Compare: European patent application

IIII

5 73597 13 901; S. Barandun ot ai., Monograph. Allergy, 9, 39-60 (Karger, Basel 1975).5,73597 13,901; S. Barandun ot ai., Monograph. Allergy, 9, 39-60 (Karger, Basel 1975).

b) IgG-molekyylin disulfidisiltojen pelkistämisellä ja sulfo-noinnilla voidaan T. Yamanaka et ai. mukaan, Vox Sanguinis 37, 14-20 (1979) antikomplementtiaktiivisuutta myöskin voimakkaasti alentaa.b) By reducing and sulfonating the disulfide bridges of the IgG molecule, T. Yamanaka et al. according to Vox Sanguinis 37, 14-20 (1979) also greatly reduces anticomplementary activity.

c) D.D. Schröder et al:n, Vox Sanguinis 4Ό, 383-394 (1981) erään ehdotuksen mukaan pelkistämällä ja alxyloimalla tai DE-hakemusjulkaisun 24 42 655 mukaan amidioimalla voidaan päästä laskimonsisäisesti annettavaan IgG-valmisteeseen.c) D.D. According to a proposal by Schröder et al., Vox Sanguinis 4Ό, 383-394 (1981), reduction and alkoxylation or amidation according to DE-A-24 42 655 can be used to obtain an intravenous IgG preparation.

Näiden kemiallisten toimenpiteiden yhteydessä oi voi estää molekyylirakenteen muutoksia ja IgG-molekyylin uusien antigee-nideterminaattien esiintymistä.In connection with these chemical procedures, oi can prevent changes in the molecular structure and the occurrence of new antigenic terminates of the IgG molecule.

Toistaiseksi ei ole olemassa mitään ihanteellista laskimonsi-säiseen käyttöön sopivaa iramunoglobuliinivalmistetta. IgG-molekyylit muuttuvat joko entsvmaattisen hajoamisen kautta, jolloin Fc-osiir, liittyviä ominaisuuksia menetetään, tai ne joutuvat kemiallisten reaktioiden kohteeksi ja niiden molekyylirakenne muuttuu, jolloin tavallisesti myös biologinen puoliintumisaika lyhenee, tai IgG-valmisteeseen jää, jos käytetään etupäässä fysikaalisia toimenpiteitä, vielä tiettyä antikomple-menttiaktiivisuutta.To date, there is no ideal iramunoglobulin preparation suitable for intravenous use. IgG molecules are either altered by enzymatic degradation, resulting in the loss of Fc-osiir-related properties, or subjected to chemical reactions and changes in molecular structure, usually shortening the biological half-life, or the IgG preparation remains antikomple-menttiaktiivisuutta.

Tämän keksinnön tarkoituksena on puhdistaa ja käsitellä immuno-globuliinia siten, että saadaan stabiili tuote, jonka natiivi molekyylin rakenne säilyy koskemattomana, ja jolla siten on alkuperäinen vasta-aineaktiivisuus ja jolla ei ole mitään in vitro osoitettavissa olevaa antikomplementtiaktiivisuutta ja jota sen mukaisesta voi vaaratta antaa laskimonsisäisesti erityisen vaaralle altistetuille potilaille, jotka kärsivät immunoglobuliinin puutetta.It is an object of the present invention to purify and treat an immunoglobulin so as to obtain a stable product which retains its native molecular structure intact, thus has original antibody activity and no in vitro detectable anticomplementary activity, and which can be safely administered intravenously. particularly at risk in immunoglobulin deficient patients.

6 73597 Tähän on esitettävän keksinnön mukaan päästy menetelmällä, joka koostuu kolmesta perättäisestä keskenään sopeutetuista vaiheista, siten että joka vaiheessa immunoglobuliinin anti— komplementtiaktiivisuus vähenee.6,73597 According to the present invention, this has been achieved by a method consisting of three successive intermittent steps, so that in each step the anti-complement activity of the immunoglobulin is reduced.

Ensimmäinen vaihe käsittää monomeerisen immunoglobuliini G:n ja sen aggregaattien alustavan erottamisen toisistaan lonin-vaihtajan avulla, jolloin IgG-monomeeri eluoituu selektiivisesti IgG-aggregaattien jäädessä sitoutuneeksi ioninvalhta-jaan. Eluoidut monomeerit sitovat komplementtia vielä vain heikosti, mutta ovat hyvin epästabiileja ja muuttuvat nopeasti jälleen antikomplementtisiksi, ellei niitä stabiloida.The first step involves the preliminary separation of monomeric immunoglobulin G and its aggregates by means of an ion exchanger, whereby the IgG monomer is selectively eluted while the IgG aggregates remain bound to the ion whitener. The eluted monomers still bind complement only weakly, but are very unstable and rapidly become anticomplementary again unless stabilized.

Stabilointi tapahtuu toisessa vaiheessa sinänsä jo tunnetun S.I. Miekka et alin, Vox Sanguinis _29, 102 (1975) kehittämän menetelmän mukaan, jossa tuotetta käsitellään heikolla hapolla ja/tai lisätään polyglykoleja, sokereita ja/tai polyoleja, jolloin polyglykolin ja sokerin lisääminen on välttämätöntä.The stabilization takes place in the second stage by the S.I. According to the method developed by Sword et al., Vox Sanguinis _29, 102 (1975), in which the product is treated with a weak acid and / or polyglycols, sugars and / or polyols are added, whereby the addition of polyglycol and sugar is necessary.

Kolmannessa vaiheessa voidaan poistaa antikomplementaarisesti vaikuttavan aktiivisuuden viimeiset tähteet selektiivisellä alumiinihydroksidiadsorptiolla.In the third step, the last residues of the anticomplementary activity can be removed by selective aluminum hydroxide adsorption.

Onnistumisen edellytyksenä on kolmen eri vaiheen oikea järjestys .The prerequisite for success is the correct order of the three different stages.

Tällä menetelmällä valmistetulla immunoglobuliinilla ei ole enää antikomplementtiaktiivisuutta, sen molekyylirakenne on alkuperäinen ja vasta-aineen aktiivisuus on säilynyt muuttumattomana. Tähän korkealaatuiseen tulokseen päästään vain keksinnön mukaisen menetelmän kolmen eri vaiheen yhdistelmällä.The immunoglobulin prepared by this method no longer has anticomplementary activity, its molecular structure is original, and the activity of the antibody has remained unchanged. This high quality result is achieved only by a combination of three different steps of the method according to the invention.

Keksinnön kohteena on siten ihmiselimistön immunologisen vastustuskyvyn vahvistamiseksi suoneen annettava humaani-immuno-globuliini (IgG), joka on tunnettu siitä, että se on natiivia, kemiallisesti muuttumatonta ja entsymaattisesti hajottamatontaThe invention therefore relates to a human immunoglobulin (IgG) for intravenous administration to strengthen the immunological resistance of the human body, which is characterized in that it is native, chemically unchanged and enzymatically undegraded.

IIII

7 73597 immunoglobuliinia, jolla ei ole yhtään in vitro osoitettavaa 3ntikoiTiplenen11iaktiivisuu11a ja jolla on muuttumaton vaste— aineaktiivisuus.7 73597 immunoglobulins which do not have any in vitro detectable activity and have unchanged response activity.

Tämän laskimoon annettavan immunoglobuli inin valmistusmene— telmä on tunnettu siitä, että tavanomaisilla menetelmillä humaanip 1 asmasta tai -istukasta valmistettu immunoglobu1iini sidotaan ensiksi ioninvaihtajaan, josta seiektiivisesti cluoi— daan monomeerinen immunoglobu1iini, joka stabiloidaan käsittelemällä hyvin heikolla hapolla ja/tai polyglykoli- ja sokeri-lisäyksellä ja/tai polyolilisäykseilä, jolloin polyglykolin ja sokerin lisäys on välttämätön, jonka jälkeen välittömästi alumiinihydroksidi adsorption avu Ha antikomp1 emonttiakt iivisuu-den tähde poistetaan.This method of preparing an intravenous immunoglobulin is characterized in that an immunoglobulin prepared from human asthma or placenta by conventional methods is first bound to an ion exchanger from which a monomeric immunoglobulin is selectively cleaved by treatment with a very weak acid and / or polyglycol and / or polyglycol. and / or polyol additions, whereupon the addition of polyglycol and sugar is necessary, immediately after which the aluminum hydroxide adsorption aid Ha anticompact mother residue is removed.

Menetelmän yksityiskohdat ovat seuraavat: a) tunnetulla menetelmällä eristetty immunoglobu1iini sidotaan ioninvaihtajaan, josta monomeerinen immunog]obuliini eluoidaan 0,02-0,2 molaarisella puskuriliuoksella, jonka pH on n. 4,0-5,5, b) väkevöinnin jälkeen lähes monomeerinen eluaatti dialysoi-daan tai liuoksen ollessa heikosti hapan (pH >4 - <5) inkuboi-daan 30-45°C 15-60 min ja sen jälkeen dialyso.idaen ja näin stabiloituun immunoglobuliini1iuokseen lisätään polyglykolia, sokeria ja tarvittaessa polyoiia, ja c) lopuksi lisätään alumiinihydroksidigeeliä, johon viimeiset antikomplementtiaktiivisuuden tähteet adsorboidaan, jonka jälkeen adsorptioaine erotetaan ja näin saatu stabiloitu immu-noglobuliinifraktio käsitellään tunnettuja menetelmiä käyttäen varastoitavaksi, laskimoon injisoitavaksi käyttökelpoiseksi immunoglobuliinivalmisteeksi.The details of the method are as follows: a) the immunoglobulin isolated by a known method is bound to an ion exchanger from which the monomeric immunoglobulin is eluted with a 0.02-0.2 molar buffer solution having a pH of about 4.0-5.5, b) after concentration the almost monomeric eluate dialyzed or, in the case of a weakly acidic solution (pH> 4 to <5), incubated at 30-45 ° C for 15-60 min and then dialyzed, and thus the polyglycol, sugar and, if necessary, polyol are added to the thus stabilized immunoglobulin solution, and c) finally an aluminum hydroxide gel is added to which the last residues of anticomplementary activity are adsorbed, after which the adsorbent is separated and the stabilized immunoglobulin fraction thus obtained is processed using known methods into a usable immunoglobulin preparation for storage, intravenous injection.

Lähtöaineena käytetään keksinnön menetelmässä immunoglobuliinia, joka oli valmistettu tunnetuilla fraktiointimenetelmä 1lä 8 73597 humaaniplasmasta tai -istukasta, esimerkiksi etanolitruktioin-timenetelmällä (Cohn et ai.)/ suolasaostuksella (Strauss et ai.), polyetyleenisaostuksella (Poison et ai.) tai seostamalla akridiinijohdoksella kuten Rivanol^-'': 11a (Horejsi et ai.) tai kromatografisella menetelmällä. Käyttökelpoista istukka-immunoglobuliinia raaka-aineeksi saadaan esimerkiksi H.L. Taylor et ai., J . Amer. Chem. Soc . 7J3, 1356 (1956) mukaan isotonisesta istukan vesiuutteesta fraktloivasti saostamalla 95 % etanolilla.The starting material used in the process of the invention is an immunoglobulin prepared from known human plasma or placenta by fractionation method 1, 83535, for example by ethanol reduction (Cohn et al.) / Salt precipitation (Strauss et al.), Polyethylene precipitation (Poison et al.) Or by blending (Horejsi et al.) Or by chromatography. Useful placental immunoglobulin as a raw material is obtained, for example, from H.L. Taylor et al., J. Amer. Chem. Soc. 7J3, 1356 (1956) from isotonic placental aqueous extract by fractional precipitation with 95% ethanol.

Lähtöaineena voidaan käyttää normaalista tai hyperimmuunista humaaniplasmasta tai vastaavasta istukasta valmistettua immuno-globuliinia.An immunoglobulin prepared from normal or hyperimmune human plasma or a similar placenta can be used as a starting material.

Tartuntatautien hoitoon ja ennaltaehkäisyyn tarvitaan spesifisiä vasta-aineita sisältäviä immunoglobuliineja.Immunoglobulins containing specific antibodies are needed for the treatment and prevention of infectious diseases.

Näillä indikaatioilla käytetään immunoglobuliineja, jotka valmistetaan sellaisesta plasmasta tai istukasta, joka sisältää vasta-aineita tiettyjä virus- ja bakteeriperäisiä tartuntatauteja vastaan, esimerkiksi virus-vastaaineita maksatulehdusta, tuhkarokkoa, vihurirokkoa, sikotautia ja vesikauhua vastaan tai bakteerivasta-aineita jäykkäkouristusta, kurkkumätää, hinkuyskää, stafylokokkeja, Escherichia coli'a, Pseudomonas'ia ym. vastaan. Morbus haemolyticus neonatarum'ia vastaan käytetään sellaisen plasman tai istukan immunoglobuliineja, joissa on anti-D(Rho) vasta-aineita.These indications use immunoglobulins prepared from plasma or placenta containing antibodies against certain infectious diseases of viral and bacterial origin, for example, viral antibodies against hepatitis, measles, rubella, mumps and rubella, or antibodies against tetanus, tetanus, tetanus, tetanus , Escherichia coli, Pseudomonas and others. Plasma or placental immunoglobulins with anti-D (Rho) antibodies are used against Morbus haemolyticus neonatarum.

Lähtöaineena käytettyä natiivista immunoglobuliinia käytetään liuoksena, jonka valkuaispitoisuus on 20-40 mg/1 ja sen happamuusaste pH 4,0-5,5. Esimerkiksi Cohn'in fraktio II ja III, joka sisältää saostettuna plasman tai istukan immunoglobuliineja, tai liuotettu lyofilisaatti tai jopa etanolia sisältävä immunoglobuliiniliuos saatetaan vastaavasti laimentamalla ja happoa lisäämällä säätää pH 4,0—5,0 happamuuteen. Tämä IgG-monomeerejä, IgG-dimeerejä, IgG-trimeerejä ja IgG-polymeerejä sisältävä liuos fraktioidaan (kromatografoidaan) ioninvaihta-jien avulla.The native immunoglobulin used as starting material is used as a solution with a protein content of 20-40 mg / l and an acidity of pH 4.0-5.5. For example, Cohn's fractions II and III, which contain precipitated plasma or placental immunoglobulins, or a dissolved lyophilisate or even an ethanol-containing immunoglobulin solution are adjusted to an acidity of 4.0 to 5.0, respectively, by dilution and acid addition. This solution containing IgG monomers, IgG dimers, IgG trimers and IgG polymers is fractionated (chromatographed) using ion exchangers.

9 735979 73597

Ioninvaihtajana on kationinvaihtaja edullisin. Suositeltavia ovat erityisesti karboksimetyyJ iselluloosat (CMC).As the ion exchanger, a cation exchanger is most preferred. Carboxymethylcelluloses (CMC) are particularly preferred.

Ioninvaihtajat tasapainotetaan ensiksi 0,0 1.-0,04 molaarisessa puskuriliuoksessa pH 4,0-5,0. Näissä olosuhteissa sitoutuu kaikki immunoglobuliini ioninvaihtajaan.The ion exchangers are first equilibrated in 0.0 1 to 0.04 molar buffer solution pH 4.0 to 5.0. Under these conditions, all of the immunoglobulin binds to the ion exchanger.

Ioninvaihtajan tasapainottamiseen ja IyG-monomeerien eluoin-tiin käytetty puskuriliuos voi olla mikä tahansa biologisesti sovelias puskuri kuten esimerkiksi asetaattl-, fosfaatti-, sitraatti- tai aminohappopuskuri. IgG-monorneerit eluoidaan 0,02-0,2 mol aari solia puskurilla pH 4,0-5,5, joka sisältää 0,05-0,15 moolia keittosuolaa.The buffer solution used to equilibrate the ion exchanger and elute the IyG monomers can be any biologically acceptable buffer, such as acetate, phosphate, citrate, or amino acid buffer. IgG monomers are eluted with 0.02-0.2 moles of sol with buffer pH 4.0-5.5 containing 0.05-0.15 moles of saline.

IgG-aggregaatit, niin polymeerit kuin myös trimeerit ja di-meerit jäävät ioninvaihtajaan sitoutuneiksi, ne voidaan myöhemmin liuottaa siitä korkeamo1 narise 1 la puskurilla. Monomee-risen IgG-jakeen antikomplementtiaktiivisuus on alhainen, nimittäin 60-80 mg/ml^CH^ lähtöaineeseen verrattuna (0,3-1,0 mg/ml/2CH^^) . IgG-monomeorili iios väkevöidään, se n pH säädetään 4,1-4,6 ja inkuboidaan 15-60 min ajaksi 30-45°C. Inku-bointia ei tarvitse suorittaa, jos jo lähtömateriaalin anti-komplementti akti ivisuus on suhteellisen alhainen.IgG aggregates, both polymers and trimers and dimers, remain bound to the ion exchanger and can be subsequently dissolved therefrom with high molecular weight buffer. The anticomplementary activity of the monomeric IgG fraction is low, namely 60-80 mg / ml compared to the starting material (0.3-1.0 mg / ml / 2CH2). The IgG monomer is concentrated, adjusted to pH 4.1-4.6 and incubated for 15-60 min at 30-45 ° C. Incubation is not required if the anti-complement activity of the starting material is already relatively low.

Immunoglobuliin.il iuos dialysoidaan tämän jälkeen pH 5,8-6,1 puskuriliuosta vastaan, esimerkiksi 0,005-0,015 nolaarista fosfaattipuskuria vastaan. Voidaan myös käyttää sitraatti-, ftalaatti- ja aminohappopuskuria. Dialysoimal1 a puhdistettuun IgG-1 luokseen lisätään stabiili, suuden lisäämiseksi, polyg.lykolia, sokeria ja tarvittaessa polyolia. Polyglyko]ina käytetään edullisesti 0,05-0,3 % (paino/tilavuus) polyetyleeniglyko-liliuosta (PEG 1000-6000) tai polypropy1 eon 1g 1ykolia, sokerina 3-7 (paino/ti lavuus) sakkaroosia, laktoosia, maltoosia tai mannoosia, sakkaroosia pidetään yleensä soveliaimpana, poly-olina käytetään 0-7 % (paino/t ilavuus) sorbitolia tai manni-tolia. Saatu liuos säädetään pH 6,4-6,8.The immunoglobulin solution is then dialyzed against a pH 5.8-6.1 buffer solution, for example 0.005-0.015 molar phosphate buffer. Citrate, phthalate and amino acid buffer may also be used. To the purified IgG-1 to be dialyzed, stable, polyglycol, sugar and, if necessary, polyol are added to increase the oral content. The polyglycol is preferably 0.05-0.3% (w / v) polyethylene glycol solution (PEG 1000-6000) or 1 g of polypropylene, the sugar is 3-7 (w / v) sucrose, lactose, maltose or mannose. , sucrose is generally considered to be the most suitable, 0-7% (w / v) sorbitol or mannitol is used as the poly-ol. The resulting solution is adjusted to pH 6.4-6.8.

10 7 3 5 9 710 7 3 5 9 7

Antikomplementtiaktiivisuuden poistamiseksi on kolmas toimenpide välttämätön. Sitä varten lisätään neutraloituun IgG-liuokseen 5-20 % (paino/paino) alumiinihydroksidigeeliä. Suspensiota sekoitetaan huoneen lämmössä 20-120 min tai yli yön 4°C:ssa, jonka jälkeen sentrifugoidaan n. 10000 x g ja suodatetaan steriiliksi. Suodos siirretään lyofilisointi-astioihin, esimerkiksi ampulleihin tai seerumipulloihin ja kylmäkuivataan.A third step is necessary to eliminate anti-complement activity. To this end, 5-20% (w / w) aluminum hydroxide gel is added to the neutralized IgG solution. The suspension is stirred at room temperature for 20-120 min or overnight at 4 ° C, then centrifuged at about 10,000 x g and filtered sterile. The filtrate is transferred to lyophilization vessels, such as ampoules or serum bottles, and lyophilized.

Kun näin saatu lyofilisaatti liuotetaan tislattuun veteen tai 0. 05.molaariseen keittosuolaliuokseen, on saadulla immuno-globuliinilla seuraavat ominaisuudet: 1. Siinä ei enää ole mitattavaa antikomplementtiaktiivisuutta.When the lyophilisate thus obtained is dissolved in distilled water or 0.05 molar saline solution, the immunoglobulin obtained has the following properties: 1. It no longer has measurable anticomplementary activity.

2. Geelikromat.ografiällä määritettynä saadaan monomeerisen immunoglobuliinin (IgG) osuudeksi 85-95 %. Sen osia ei esiinny.2. The monomeric immunoglobulin (IgG) content is 85-95% as determined by gel chromatography. There are no parts of it.

3. Immunoelektroforeesissa anti-humaaniantiseerumia vastaan näkyy yksi ainoa IgG-presipitaatioviiva. Hajoamistuotteita ei ole osoitettavissa.3. Immunoelectrophoresis against anti-human antiserum shows a single IgG precipitation line. Decomposition products are not detectable.

4. Normaaliseerumin IgG-alaluokkien suhteellinen jakauma säilyy muuttumattomana.4. The relative distribution of normal serum IgG subclasses remains unchanged.

5. Proteiinikonsentraatioon verrattuna säilyy vasta-aine-spektrin aktiivisuus muuttumattomana.5. Compared to the protein concentration, the activity of the antibody spectrum remains unchanged.

Verrattaessa kaupallisen laskimoon annettavan immunoglobulii-nivalmisteen antikomplementtiaktiivisuutta (ilmaistu mg/ml/ 2CHj-q) keksinnön mukaisesti saatuun luonnolliseen, muuttumattomaan ja hajottamattomaan, stabiloituun immunoglobuliiniin, todetaan: Antikomplementtiaktiivisuus ilmoitetaan mg:na proteiinia/ml, joka vaaditaan kahden komplementtiyksikön estämiseen. Se määritetään herkistettyjen lampaan punasolujen 50 %:na hemolyysinä (mg/ml/2CH^0) M.M. Mayer'in standardimenetelmällä, Experimental Immunochemistry, 2nd Ed. s. 133-230, Charles C. Thomas, Springfield, sekä US Department of Health, Education and Wellfare Public Health Monograph No. 74, "Standardized diagnostic complement fixation method and adaptation to micro test". Katso taulukko s. 11.When comparing the anticomplementary activity (expressed in mg / ml / 2CH 2 -q) of a commercial intravenous immunoglobulin preparation with the natural, unchanged and undegraded, stabilized immunoglobulin obtained according to the invention, the following is stated: The anticomplementary activity is expressed in mg protein / ml required to supplement two complements. It is determined by 50% hemolysis (mg / ml / 2CH 2 O) of sensitized sheep erythrocytes M.M. By the standard method of Mayer, Experimental Immunochemistry, 2nd Ed. pp. 133-230, Charles C. Thomas, Springfield, and U.S. Department of Health, Education and Wellfare Public Health Monograph no. 74, "Standardized diagnostic complement fixation method and adaptation to micro test". See table on page 11.

tl 11 73597tl 11 73597

Keksinnön mukaisesti tuotettua immunog lolnili irvi valmistetta annettiin 2,5-10 g annoksina 48 potilaulLe Laskimonsisäisesti. Valmisteiden siedettävyys oli hyvä, sillä mitään odottamattomia sivuvaikutuksia ei voitu havaita. Tähän esikokee-seen ottivat osaa pelkästään sellaiset potilaat, joilla ei ollut immunoglobuliinin puutetta. - Näiden kokemusten perusteella kliininen kokeilu on osoitettu oikeutetuksi sellaisille potilaille, joilla on joko synnynnäinen tai saatu immunoglobuliinin puutos, ja joilla sen johdosta kaikkien nykyisten valmisteiden käyttöön elintärkeässä immunogLobuliinihoidossa liittyy tietty riski.The immunoglobil preparation prepared according to the invention was administered in doses of 2.5 to 10 g to 48 patients intravenously. The tolerability of the preparations was good, as no unexpected side effects could be observed. Only patients without immunoglobulin deficiency participated in this preliminary experiment. - Based on these experiences, a clinical trial has been shown to be justified in patients with either congenital or acquired immunoglobulin deficiency and as a consequence there is a certain risk associated with the use of all current products in vital immunoglobulin therapy.

Tau lukkoTau lock

IgG-valmiste Antikom.pl ementti- akt i ivisuus (mg/nl/2C!Ir-0) 16 % standardi-IgG 0,5-1,5 (lihakseen annettuna)IgG preparation Antikom.pl cement activity (mg / nl / 2C! Ir-0) 16% standard IgG 0.5-1.5 (intramuscular)

Adsorption avulla puhdistettu IgG 3-3 )Purified IgG 3-3)

Beta-propiolaktonilla käsitelty IgG 40-50Beta-propiolactone-treated IgG 40-50

Hapoilla käsitelty TgG 60-80Acid-treated TgG 60-80

Plasmiinilla pilkottu tai osittain hajoitettu IgG 20-50Plasmin digested or partially digested IgG 20-50

Pepsiinillä pilkottu tai osittain ei mitattavaa hajoitettu IgG aktiivisuuttaPepsin-cleaved or partially non-measurable degraded IgG activity

Keksinnön mukai sesti valmistettu IgG (esimerkki ]) Lähtöaine 0,7 CMC monomeerijao 60-88IgG prepared according to the invention (example]) Starting material 0.7 CMC monomer fraction 60-88

IgG-valmiste stabiloinnin jälkeen 150-200IgG preparation after stabilization 150-200

Lopputuote (esimerkki 1) ei mitattavaa akti ivisuuttaThe final product (Example 1) has no measurable activity

Keksinnön mukaisen valmisteen ja menetelmän suoma etu valmistustapaan verrattuna on ilmeinen.The advantage of the preparation and method according to the invention over the method of preparation is obvious.

___ - T~ 12 73597___ - T ~ 12 73597

Esimerkki 1 6 g kylmäkuivattua immunoglobuliinia (IgG), joka on valmistettu tunnetun COHN:in menetelmän n:o 9 mukaisesti normaalista humaaniplasmasta, liuotetaan 90 ml:aan tislattua vettä. Liuos suodatetaan kirkkaaksi ja sen pH säädetään 10 % etikkahapol-la pH 4,6 ja siirretään 1 litralla 0,02 molaarista asetaatti-puskuria (pH 4,6) tasapainotettuun karboksimetyyliselluloosa-kolonniin (CMC-kolonni, 7 cm pitkä, 6 cm halkaisija). Ionin-vaihtaja adsorboi IgG:n ja kolonni pestään 500 ml :11a edellä mainittua asetaattipuskuria. Monomeerinen IgG eluoidaan sitten 1,5 1:11a 0,1 molaarista asetaattipuskuria pH 4,6, joka sisältää 8,18 g NaCl/ 1, jonka jälkeen eluaatti konsentroidaan ultrasuodatuksen avulia 50 ml:ksi. Saatu liuos, jonka proteiinipitoisuus on 70-80 mg/ml, inkuboidaan pH 4,l:ssa 30 min 37°C vesihauteella. Dialysoitaessa 1 1 fosfaattipuskuria (0,015 M, pH 6,05) vastaan asettuu liuoksen happamuus vähitellen pH 5,8:ksi. Liuoksen stabiloimiseksi lisätään tuotteeseen 0,3 % (paino/tilavuus) PEG 4000 ja 7 % (paino/tilavuus) sakkaroosia. Happamuus säädetään 0,1 N Na0H:lla pH 6,4:ksi. Liuokseen lisätään 10 % (paino/paino) alumiin1hydroksidigeeliä ja sekoitetaan 30 min huoneen lämmössä. Suspensio sentrifugoi-daan 20 min 10000 x g voimalla ja saatu yläosa steriilLsuoda-tetaan. Valmiste jaetaan kylmäkuivausastioihin ja kylmäkuiva-taan. Astiaan (ampulli, seerumipullo jne.) täytetään niin paljon IgG-liuosta, että kun kylmäkuivattu tuote liuotetaan kahdesti tislattuun veteen tai 0,05 M keittosuolaliuokseen, saadaan 5 % proteiini-(IgG)-liuos, joka on sopiva laskimoon injisoitavaksi tai infuusioksi.Example 1 6 g of lyophilized immunoglobulin (IgG) prepared according to the known COHN method No. 9 from normal human plasma is dissolved in 90 ml of distilled water. The solution is filtered clear and adjusted to pH 4.6 with 10% acetic acid and transferred to a equilibrated carboxymethylcellulose column (CMC column, 7 cm long, 6 cm in diameter) with 1 liter of 0.02 molar acetate buffer (pH 4.6). . The ion exchanger adsorbs the IgG and the column is washed with 500 ml of the above-mentioned acetate buffer. The monomeric IgG is then eluted with 1.5 l of 0.1 molar acetate buffer pH 4.6 containing 8.18 g NaCl / l, after which the eluate is concentrated to 50 ml by ultrafiltration. The resulting solution with a protein content of 70-80 mg / ml is incubated at pH 4.1 for 30 min in a 37 ° C water bath. When dialyzed against 1 L of phosphate buffer (0.015 M, pH 6.05), the acidity of the solution gradually returns to pH 5.8. To stabilize the solution, 0.3% (w / v) PEG 4000 and 7% (w / v) sucrose are added to the product. The acidity is adjusted to pH 6.4 with 0.1 N NaOH. To the solution is added 10% (w / w) aluminum 1 hydroxide gel and stirred for 30 min at room temperature. The suspension is centrifuged at 10,000 x g for 20 min and the resulting supernatant is sterile filtered. The preparation is divided into freeze-drying containers and freeze-dried. The container (ampoule, serum bottle, etc.) is filled with enough IgG solution to dissolve the lyophilized product in doubly distilled water or 0.05 M saline to give a 5% protein (IgG) solution suitable for intravenous injection or infusion.

Esimerkki 2 6 g kylmäkuivattua IgG:tä liuotetaan, suodatetaan ja puhdistetaan esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti. Mono-meerijae väkevöidään ja dialysoidaan ilman happokäsittelyä 0,015 molaarista fosfaattipuskuria pH 6,05 vastaan, kunnes liuoksen pH on 5,8. Liuokseen lisätään 0,5 % PEG 4000 ja 3,5 % maltoosia ja mannitolia kumpaakin, jonka jälkeen säädetään pH 6,4 ja tämän jälkeen lisätään 10 % (paino/paino) alumiini-hydroksidigeeliä. Suspensiota sekoitetaan 15 h 4°C, sentrifu- u 73597 goidaan, suodatetaan ja käsi toilään edelleen kuten esimerkissä 1.Example 2 6 g of lyophilized IgG is dissolved, filtered and purified according to the procedure described in Example 1. The monomer fraction is concentrated and dialyzed without acid treatment against 0.015 molar phosphate buffer pH 6.05 until the pH of the solution is 5.8. 0.5% PEG 4000 and 3.5% maltose and mannitol each are added to the solution, after which the pH is adjusted to 6.4 and then 10% (w / w) aluminum hydroxide gel is added. The suspension is stirred for 15 h at 4 ° C, centrifuged at 73597, filtered and further hand-treated as in Example 1.

Esimerkki 3 Lähtöaineena käytetään COIINrin menetelmällä n:o 9 saatua saostumaa, joka sisältäni viedä etanolia. Sakka liuotetaan jääkylmään veteen ja käsitellään esimerkin 1. mukaisesti edelleen siten, että erotus CMC-kolonnissa suoritetaan 4°C:ssa.Example 3 The starting material is the precipitate obtained by COIINr method no. 9, which contains ethanol. The precipitate is dissolved in ice-cold water and further treated according to Example 1 so that the separation on a CMC column is carried out at 4 ° C.

Muut toimenpiteet suoritetaan kuten esimerkissä ]. Sakkaroosin sijasta lisätään vastaava määrä laktoosia.Other operations are performed as in the example]. Instead of sucrose, an equivalent amount of lactose is added.

Lopputuotteella en samat edul1 isot ominaisuudet kuin esimerkin 1 lopputuotteella.The final product does not have the same advantageous properties as the final product of Example 1.

Esimerkki 4 Lähtöaineena käytetään kylmäkuivattua IgG:tä, joka on valmistettu COHN:in menetelmällä n:o 9 sellaisesta hyperimmuunista humaaniplasmasta, jolla on korkea spesifinen anti-tetanus-tiitteri. Lähtöaine sisältää 10 ?, proteiinia, sen tiitteri on 280 T.E. Te/ml. Kylmäkuivattu tuote .1 luotetaan veteen siten, että liuos sisältää 30 ing proteiinia/ml , suoritetaan esimerkin i mukainen kolmivaiheinen erotus, puhdistus ja stabilointi. Tuotteessa ei ole ant i. kömpi emon 11 i ak t i ivi suutta , siinä on 5 %:ssa proteiini liuoksessa 150 I.E. tetanus/ml.Example 4 The starting material used is lyophilized IgG prepared by COHN method No. 9 from a hyperimmune human plasma having a high specific anti-tetanus titer. The starting material contains 10? Protein, its titer is 280 T.E. Te / ml. The lyophilized product .1 is relied on in water so that the solution contains 30 ing protein / ml, the three-step separation, purification and stabilization according to Example i being carried out. The product has no ant i. Mum 11 i ak t i ivity, it contains 5% protein in a solution of 150 I.E. tetanus / ml.

Es imerkki 3 Lähtöaineeksi o e e tuai. spesi1istä anti-D-vasta-ainetta (150 mcg/ml 10 % protei1ni11uoksessa) sisältävää IgG:t ä, jota käsitellään esimerkin 1 mukaisesti. Lopputuote sisältää 5 %:ssa IgG-liuoksessa 85 mcg/ml spesifistä anti-D-vasta-ainctta eikä sillä ole antikomplementtiakti ivisuutta.Example 3 The starting material is o e e tuai. IgG containing a specific anti-D antibody (150 mcg / ml in 10% protein solution) treated according to Example 1. The final product contains 85 mcg / ml of specific anti-D antibody in 5% IgG solution and has no anticomplement activity.

Esimerkit 6- i_2Examples 6- i_2

Kuten esimerkeissä 4 ja 5 on kuvattu, saadaan laskimonsisäisesti annettavia opt._i.maa li sest i s i e det tavi ä va Imi st t i ta , jotka sisältävät a emg.inn lue te ituja spesifi s:i ä aneita: 14 73597 6. anti-kurkkumätä-vasta-aine 7. anti-maksatulehdus-vasta-aine 8. anti-vihurirokko-vasta-aine 9. anti-sikotauti-vasta-aine 10. anti-vesikauhu-vasta-aine 11. anti-tuhkarokko-vasta-aine 12. anti-B.hinkuyskä-vasta-aineAs described in Examples 4 and 5, intravenous ophthalmic formulations are obtained which contain the specifics listed below: 14 73597 6. Anti- diphtheria antibody 7. anti-hepatitis antibody 8. anti-rubella antibody 9. anti-mumps antibody 10. anti-rubella antibody 11. anti-measles antibody 12. anti-B. whooping cough antibody

Proteiinipitoisuutta kohden ilmoitettuna ovat nämä tuotteet säilyttäneet korkean spesifisen vasta-aineaktiivisuuden.Expressed per protein content, these products have retained high specific antibody activity.

Esimerkit 13-22Examples 13-22

Isotonisista istukan vesiuutteista 95 % etanolilla saostamal-la saadut immunoglobuliinifraktiot säädetään proteiinipitoisuuteen 30 mg/ml ja pH 5,0, jonka jälkeen suoritetaan esimerkin 1 mukainen erotus, puhdistaminen ja stabilointi. Tuotteilla ei ole antikomplementtiaktiivisuutta ja näin ollen ne ovat laskimonsisäisesti annettuna optimaalisesti siedettäviä ja ovat säilyttäneet lähtöaineena esiintyvän vasta-aine-spektrin.The immunoglobulin fractions obtained from isotonic aqueous placental extracts by precipitation with 95% ethanol are adjusted to a protein concentration of 30 mg / ml and a pH of 5.0, followed by separation, purification and stabilization according to Example 1. The products do not have anticomplementary activity and are therefore optimally tolerable when administered intravenously and have retained the antibody spectrum present as a starting material.

13. IgG, jolla on epäspesif i ner. vista-ainespektri 14. IgG, jolla on anti-vihurirokko-vasta-ainetta 15. IgG, jolla on anti-jäykkäkouristus-vasta-ainetta 16. IgG, jolla on anti-D-vasta-ainetta 17. IgG, jolla on anti-kurkkumätä-vasta-ainetta 18. IgG, jolla on anti-maksatulehdus-vasta-ainetta 19. IgG, jolla on anti-sikotauti-vasta-ainetta 20. IgG, jolla on anti-vesikauhu-vasta-ainetta 21. IgG, jolla on anti-tuhkarokko-vasta-ainetta 22. IgG, jolla on anti-B.hinkuyskä-vasta-ainetta.13. IgG having a non-specific i ner. vista antibody spectrum 14. IgG with anti-rubella antibody 15. IgG with anti-tetanus antibody 16. IgG with anti-D antibody 17. IgG with anti-tetanus antibody diphtheria antibody 18. IgG with anti-hepatitis antibody 19. IgG with anti-mumps antibody 20. IgG with anti-rabies antibody 21. IgG with anti-measles antibody 22. IgG having anti-B. pertussis antibody.

IlIl

Claims (2)

15 7 359715 7 3597 1. Menetelmä laskimonsisäisesti annettavan immunoglobu-liinin valmistamiseksi ihmiselimistön immuunivasteen vahvistamiseksi, tunnettu siitä, että tunnetuilla menetelmillä ihmisen plasmasta tai istukasta saatu antikomplementaa-rinen immunoglobuliini ensin sidotaan ioninvaihtajaan, josta selektiivisesti eluoidaan monomeerinen immunoglobuliini 0,02-0,2 molaarisella puskuriliuoksella pH:ssa 4,0-5,5, konsentroidaan tämä, poistetaan oleellisesti antikomplementtiak- tiivisuus käsittelemällä heikolla hapolla pH:ssa 4,1-4,6 ja o o mahdollisesti inkuboidaan 30 -45 C:ssa 1/4-1 tunti, sitten diasuodatetaan laimeaa puskuria, pH 5,8-6,1, vastaan ja/ tai stabiloidaan lisäämällä polyetyleeniglykolia tai polypro-pyleeniglykolia ja sakkaroosia, laktoosia, maltoosia tai man-noosia ja/tai sorbitolia tai mannitolia, polyalkyleeniglyko-lin ja sokerin lisäyksen ollessa välttämätön, ja sitten anti-komplementtiaktiivisuuden viimeiset tähteet poistetaan alu-miinihydroksidiadsorption avulla.A method for preparing an intravenous immunoglobulin for enhancing the human immune response, characterized in that anticomplementary immunoglobulin obtained from human plasma or placenta by known methods is first bound to an ion exchanger from which the monomeric immunoglobulin is selectively eluted with a pH of 0.02 to 0.2 molar buffer. , 0-5.5, concentrate this, substantially remove the anti-complement activity by treatment with a weak acid at pH 4.1-4.6 and optionally incubate at 30-45 ° C for 1/4-1 hour, then diafilter in dilute buffer, pH 5.8-6.1, and / or stabilized by the addition of polyethylene glycol or polypropylene glycol and sucrose, lactose, maltose or mannose and / or sorbitol or mannitol, with the addition of polyalkylene glycol and sugar if necessary, and then anti- the last residues of complement activity are removed by aluminum hydroxide adsorption. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että käytetään normaalista tai hyperimmuunista humaaniplasmasta tai vastaavanlaisesta istukasta saatua immu-noglobuliinia. 1 Patenttivaatumuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että käytetään sellaista immunoglobuliinia, joka sisältää vasta-aineita määrättyjä viraalisia tai bakteeriperäisiä patogeenisiä aineita vastaan tai anti-D-vasta-aineita.Method according to Claim 1, characterized in that immunoglobulin obtained from normal or hyperimmune human plasma or a similar placenta is used. Method according to Claim 2, characterized in that an immunoglobulin is used which contains antibodies against certain pathogenic substances of viral or bacterial origin or anti-D antibodies.
FI824283A 1982-02-08 1982-12-14 Process for the preparation of an intravenously injectable human immune oglobulin. FI73597C (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH74182 1982-02-08
CH74182 1982-02-08

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI824283A0 FI824283A0 (en) 1982-12-14
FI824283L FI824283L (en) 1983-08-09
FI73597B true FI73597B (en) 1987-07-31
FI73597C FI73597C (en) 1987-11-09

Family

ID=4194125

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI824283A FI73597C (en) 1982-02-08 1982-12-14 Process for the preparation of an intravenously injectable human immune oglobulin.

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0085747B2 (en)
JP (1) JPS58159424A (en)
AR (1) AR229486A1 (en)
AT (1) ATE19735T1 (en)
AU (1) AU554817B2 (en)
DE (1) DE3271181D1 (en)
DK (1) DK157367C (en)
ES (1) ES518181A0 (en)
FI (1) FI73597C (en)
PH (1) PH20924A (en)
PT (1) PT75979B (en)
ZA (1) ZA828687B (en)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58180433A (en) * 1982-04-16 1983-10-21 Fujirebio Inc Removing method of anticomplementary substance from immunoglobulin
US4439421A (en) * 1982-08-30 1984-03-27 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Stabilized gamma globulin concentrate
ATE66616T1 (en) * 1982-08-30 1991-09-15 Baxter Int PROCESSES FOR PREPARING GAMMA GLOBULIN CONTAINING COMPOSITIONS.
JP2691708B2 (en) * 1984-09-26 1997-12-17 住友製薬株式会社 Human monoclonal antibody and method for producing the same
GB8519848D0 (en) * 1985-08-07 1985-09-11 Schweiz Rotes Kreuz Treatment of chronic inflammatory disease
DE3641115A1 (en) * 1986-12-02 1988-06-16 Lentia Gmbh METHOD FOR PRODUCING AN INTRAVENOUS APPLICABLE AND STABLE IN LIQUID FORM IMMUNOGLOBULINS
AT389817B (en) * 1987-01-22 1990-02-12 Schwab & Co Ges Mbh Process for the preparation of an immunoglobulin which is stable in liquid form for intravenous administration
ATE65410T1 (en) * 1987-11-27 1991-08-15 Akzo Nv STABILIZATION OF ANTIBODIES.
DE3927111C3 (en) * 1989-08-17 1994-09-01 Biotest Pharma Gmbh Process for the preparation of unmodified intravenous IgM and / or IgA-containing immunoglobulin preparations
JPH0778025B2 (en) * 1990-03-20 1995-08-23 日本赤十字社 Method for producing immunoglobulin G
US5256771A (en) * 1990-04-03 1993-10-26 Miles Inc. Heat treatment of IgM-containing immunoglobulins to eliminate non-specific complement activation
DE59309332D1 (en) * 1993-12-27 1999-03-04 Rotkreuzstiftung Zentratrallab Process for the preparation of a concentrate of anti-D immunoglobulin G and pharmaceutical composition containing the same
TWI391399B (en) * 2005-05-25 2013-04-01 Hoffmann La Roche Method for determining the concentration of a salt for eluting a polypeptide

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2500076C3 (en) * 1975-01-02 1982-11-18 SCHURA Blutderivate GmbH & Co KG, 4150 Krefeld Process for the production of intravenously tolerated gamma globulins
DE2527064C3 (en) * 1975-06-18 1979-11-15 Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt Process for the production of an intravenous native human immunoglobulin preparation with a natural half-life and unchanged antibody activity compared to the starting material
US4126605A (en) * 1975-12-29 1978-11-21 Plasmesco Ag Process of improving the compatibility of gamma globulins
US4124576A (en) * 1976-12-03 1978-11-07 Coval M L Method of producing intravenously injectable gamma globulin
JPS5822085B2 (en) * 1977-07-19 1983-05-06 株式会社ミドリ十字 Intravenous gamma globulin preparations
DE2837168A1 (en) * 1978-08-25 1980-03-06 Blutspendedienst Dt Rote Kreuz METHOD FOR PRODUCING AN IMMUNAL GLOBULIN SOLUTION SUITABLE FOR INTRAVENOUS APPLICATION
JPS5625114A (en) * 1979-08-07 1981-03-10 Green Cross Corp:The Preparation of human gamma globulin
US4374763A (en) * 1979-09-17 1983-02-22 Morishita Pharmaceutical Co., Ltd. Method for producing gamma-globulin for use in intravenous administration and method for producing a pharmaceutical preparation thereof
JPS58180433A (en) * 1982-04-16 1983-10-21 Fujirebio Inc Removing method of anticomplementary substance from immunoglobulin

Also Published As

Publication number Publication date
ZA828687B (en) 1983-09-28
ES8401983A1 (en) 1984-01-16
JPS58159424A (en) 1983-09-21
PT75979B (en) 1985-10-04
FI824283A0 (en) 1982-12-14
EP0085747B2 (en) 1990-05-30
EP0085747B1 (en) 1986-05-14
PT75979A (en) 1983-01-01
DK26583D0 (en) 1983-01-24
AR229486A1 (en) 1983-08-31
EP0085747A2 (en) 1983-08-17
ES518181A0 (en) 1984-01-16
DE3271181D1 (en) 1986-06-19
AU9132882A (en) 1983-08-18
FI73597C (en) 1987-11-09
DK26583A (en) 1983-08-09
AU554817B2 (en) 1986-09-04
EP0085747A3 (en) 1984-09-05
FI824283L (en) 1983-08-09
JPH0365327B2 (en) 1991-10-11
DK157367C (en) 1990-05-21
ATE19735T1 (en) 1986-05-15
DK157367B (en) 1989-12-27
PH20924A (en) 1987-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI73597B (en) FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ETT INTRAVENOEST INJICERBART HUMANIMMUNOGLOBULIN.
JP5042817B2 (en) Methods for providing virus-safe purified antibody preparations
EP0703925B1 (en) Production of antibody fragments
EP2270044B1 (en) Liquid immunoglobulin G (lgG) product
CA1341505C (en) Intravenously administered polyclonal immunoglobulin preparation containing igm and method of manufacture
US4318902A (en) Concentrated immunoglobulin solution suited for intravenous administration
EP1225180B1 (en) Process for the production of virus-inactivated human gammaglobulin G
DK166763B1 (en) IMMUNOGLOBULIN-G-CONTAINING FRACTION
US4880913A (en) Process for the preparation of an immunoglobulin which can be administered intravenously and is stable in liquid form
IE46304B1 (en) Process of preparing a serum protein composition for intravenous application
US20060177909A1 (en) Preparation of immunoglobulin
KR100236762B1 (en) Method for recovering immunoglobulin from fractions produced during fractionation of human blood plasma
AU725134B2 (en) Method of producing an IgM preparation for intravenous application
US10358462B2 (en) Method for the preparation of immunoglobulins
DK166713B1 (en) PROCEDURE FOR INACTIVATION OF SUBSTANCES CAUSING INCOMPATIBILITY REACTIONS IN IMMUNGLOBULIN-CONTAINED BLOOD FRACTIONS FOR THERAPEUTICAL OR PROPHYLACTIC USE AND IMPROVEMENT OF IMMUNGLULFULMINFULMINFULMODELM
US6646108B1 (en) Process for isolating IgG and IgA
Burnouf What can be learned in the snake antivenom field from the developments in human plasma derived products?
AU2016231646B2 (en) Method for the preparation of immunoglobulins
CA1168152A (en) Process for preparing human plasma fractions containing immune globulin (igg)
CA2943328C (en) Method for the preparation of immunoglobulins
US10538577B2 (en) Polyvalent immunotherapeutics
RU2708394C2 (en) Method of producing immunoglobulins
KR102372105B1 (en) Method for the preparation of immunoglobulins
NZ724670A (en) Method for the preparation of immunoglobulins
NZ724670B2 (en) Method for the preparation of immunoglobulins

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: SCHWEIZERISCHES SERUM- UND IMPFINSTITUT