FI63424B - Alfa-amylassubstrat och dess framstaellningsfoerfarande - Google Patents
Alfa-amylassubstrat och dess framstaellningsfoerfarande Download PDFInfo
- Publication number
- FI63424B FI63424B FI791355A FI791355A FI63424B FI 63424 B FI63424 B FI 63424B FI 791355 A FI791355 A FI 791355A FI 791355 A FI791355 A FI 791355A FI 63424 B FI63424 B FI 63424B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- substrate
- grains
- starch
- crosslinking agent
- per
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B31/00—Preparation of derivatives of starch
- C08B31/003—Crosslinking of starch
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
- tTty—τ> Γ(ι1 .... KUULUTUSJULKAISU , 7 . - .
^ (11) UTLÄGCNI NGSSKRIFT 6 3 4 2 4 C (45) Peter; '..li ay3n:.; I Ly 10 06 1933 ^ T ^ (51) KMk.3/tac.a3 C 08 B 31/00, 33/00, C 12 Q 1/40 SUOMI—FINLAND (21) hM««iiMi^-hw>ciM*wii| 791355 (22) Hak«mitpilvl — AiMBknlnpdif 25.Oi.79 ' ' (23) AlkupUvl—GJW*h*t»d*| 25.01*.79 (41) Tullut JulkiMk*l — Bllvit offtntllg 0 3.11.79
Patentti-ja rekisterihallitut .... ..., , . , _ . . . (44) NlhtivtJuipanon j» kuuLjulkUwn pvm. — ofl no fto
Patent- och registerctyrelsen ' ' AmMu utlt(d och utUkrtfUn publicorad do.ue.oi (32)(33)(31) Ι»/Χ«»·«τ «voUtan-BogtH priorltot 02.05.78
Saksan Lii11otasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) P 2819298.5 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, D-6800 Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken lyskland(DE) (72) Hans-Georg Batz, Tutzing, Elli Rauscher, Munchen, Gunter Weimann, Tutzing, August Wilhelm Wahlefeld, Weilheim, Wolfgang Gruber, Tutzing-Unterzeismering, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken lyskland(DE) (7l) Berggren Oy Ab (51*) oi-amylaasisubstraatti ja menetelmä sen valmistamiseksi -o6*amylassubstrat och dess framställningsförfarande
Keksintö koskee α-amylaasin määrittämiseksi tarkoitettua substraattia, joka perustuu osasmuotoiseen tärkkelykseen tai amyloosiin, joihin on liitetty määritettävissä olevia ryhmiä.
a-amylaasioeilin määrittäminen seerumissa muodostaa tärkeän kliinisen parametrin haiman toiminnan seuraamisessa.
Kuten tunnettua α-airylaasi lohkaisee tärkkelyksen ja tärkkelys-johdannaisen 1,4-glyoksidi-sidoksen. Vaikutuksen ei tarvitse välttämättä kohdistua ketjun päähän vaan se voi alkaa myös verk-koutuneen tärkkelysmolekyylin ketjun keskikohdalta. Liukenemattomasta tärkkelyksestä muodostuu tämän vaikutuksesta liukenevia tärkkelysosasia, haarautumattomat ketjut pilkkoutuvat lopuksi maltoosiksi asti. Nopeus, jolla tämä pilkkoutuminen tapahtuu on läsnä olevan pilkkovan amylaasin määrän mittana. Jos käytetään värjättyä liukenematonta tärkkelystä, muodostuu värjäytyneitä liukenevia osasia ja syntyneen liuoksen väristä voidaan siten päätellä pilkkoutumisaste (Experientia 23 (1967) 805). Tähän tarkoitukseen väriaineina ehdotetaan käytettäväksi reaktioväri-aineita, jollaisia käytetään selluloosakuitujenkin värjäykseen.
2 63424
Koska tärkkelys ei kuitenkaan ole täysin liukenematon ja on sen vuoksi vain huonosti jalostettavissa (kuten värjättävissä), DE-OS 19 01 517:ssä on ehdotettu liukoisen tärkkelyksen verkkouttamista (esim. epikloorihydriinillä) täysin liukenemattoman geelin valmistamiseksi, joka sen jälkeen pilkotaan ja väritetään.
Tämän amylaasi-määrityssysteemin tarkkuus riippuu lähinnä siitä, että entsyymille on tarjolla niin suurin ylimäärin substraattia, että ylimääräistä substraattia on läsnä reaktion päätyttyäkin (pysähdyttyä) , so. että entsyymi voi pilkkoa jatkuvasti optimaalisesti koko reaktion ajan. Tämä merkitsee kuitenkin edelleen sitä, että verrattavissa olevien mittausten suorittamiseksi tarjolla ei ainoastaan pidä olla samoja substraattimääriä, vaan myöskin verrattavissa oleva määrä tämän substraatin pintaa, samoin kuin verrattavissa oleva ja yhdenmukainen verkkorakenne. DE-OS 19 01 517:n mukaisen substraatin yhteydessä amylaasille tarjoutuu tosin vertailukelpoisia pintoja painoyksikköä kohden (murtamalla geeli seulan avulla suunnilleen yhtä suuriksi sirpaleiksi), mutta sama verkkoutumisaste ei sitä vastoin ole aina toistettavasti saavutettavissa koska ensiksikin jo alkujaan epäyhtenäisestä tärkkelyksestä syntyy pilkottaessa seos, jossa on liukenevia tärkkelyssiruja, joiden keskimääräinen pituus erästä toiseen on erilainen, ja toiseksi niin sanotusta Trcmmsdorf-efektistä johtuen sen jälkeen tapahtuvan verkkouttamisen yhteydessä on odotettavissa epätasaisesti verkkoutuneen tuotteen muodostuminen.
Trommsdorf-efekti kuvaa itseään kiihdyttävää, entropiahukasta johtuvaa, eksotermisesti tapahtuvaa verkkoutumisreaktiota, joka on vain hyvin vaikeasti hallittavissa.
Näistä syistä johtuen edellä selotetulla tavalla valmistettu substraatti vaihtelee laadultaan erästä erään. Ongelmia ilmenee myös absorption lineaarisuuden suhteen entsyymikonsentraation kasvaessa (Clin. Chim. Acta 47 (1973) 233) . Tämän vuoksi kutakin pakkausta kohden on valmistettava kalibrointikäyrä, mikä merkitsee lisäkustannuksia .
Keksinnön tehtävänä on tämän vuoksi näiden tunnettujen verkkoutettu-jen tärkkelyspohjaisten a-amylaasisubstraattien varjopuolien poistaminen ja substraatin luominen, joka on oleellisen yhdenmukainen ja 3 63424 jonka absorption lineaarisuus sekä yhden erän osalta että myöskin erästä erään on entistä parempi ja tekee uusien kalibrointikäy-rien valmistamisen tarpeettomaksi.
Tämä tehtävä on ratkaistavissa keksinnön mukaisesti käyttämällä α-amylaasin määrittämiseen substraattia, joka perustuu osasmuotoi- seen a) tärkkelykseen tai b) amyloosiin, joihin on liitetty määritettävissä olevia ryhmiä, joka substraatti on tunnettu siitä, että se a) muodostuu pinnaltaan verkkoutuneista tärkkelysjyväsistä, joiden turpoamiskykyä on säännöätellysti vähennetty, ja jotka on verkkoutettu käyttämällä 0,0009-0,0027 moolia kaksifunktionaalista verkkoutusainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia tärkkelys jyväsiä, sekä joiden läpimitta on välillä 0,01-0,1 mm, tai b) muodostuu pinnaltaan verkkoutuneista amyloosijyväsistä, joiden turpoamiskykyä on säännöstellysti vähennetty, ja jotka on verkkoutettu käyttämällä 0,02-0,07 moolia kaksifunktionaalista verkkoutusainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia amyloosi-jyväsiä, sekä joiden läpimitta on välillä 0,05-0,20 mm.
Gelatinoimattoman tärkkelyksen verkkouttaminen eetterinmuodostus-ainein on jo tunnettua US-PS 2 500 950:n perusteella. Siinä selostetut tuotteet on tarkoitettu käytettäviksi ravintoaineina sekä tekstiilien viimeistelyn puitteissa. DE-AS 16 68 515:n perusteella on lisäksi jo tunnettua tämän laatuisten verkkouttamalla valmistettujen, turpoamiskyvyItään heikennettyjen tärkkelysjyvästen pilkkominen β-amylaasilla, a-1,4-glukosidaasilla tai fosforylaa-silla tärkkelyspilkkoutumistuotteen saamiseksi, joka tölkkisäilöt-tyjen ravintoaineiden aineosana antaa niille paremman syväjäähdy-tysstabiilisuuden. Mitään viittauksia siitä, että a-amylaasi erityisen tasaisesti pilkkoisi pinnaltaan verkkoutettuja sivuryhmin varustettuja, mainitun läpimittaisia tärkkelys- tai amyloosijyväsiä ja jotka sen vuoksi soveltuisivat analyyttisiin tarkoituksiin, siinä ei ole havaittavissa. Sinänsä epähomogeenisesta tärkkelyksestä saadaan nimittäin yllättäen verkkouttamisen jälkeen turvottamalla substraattia, joka pilkkoutuu oleellisesti tasaisemmin ja joka soveltuu sen vuoksi ylivoimaisen hyvin α-amylaasin substraatiksi. Oletetaan, että tärkkelysjyväsen ulommassa osassa sijaitseva jo verkkoutunut amylopektiini-kuori vahvistuu alla selostetussa käsittelyssä, jota α-amylaasin kohteeksi tarjoutuu substraatti, joka normaali turpoaminen on estynyt ja joka siten on tietyn sisäisen paineen alaisena.
4 6 3 4 2 4
Keksinnön mukainen menetelmä edellä määritellyn, tärkkelysjyväsiin perustuvan substraatin valmistamiseksi on tunnettu siitä, että lähtömateriaalina käytetään turvottamattomia tärkkelysjyväsiä, joiden läpimitta on välillä 0,01-0,10 mm, joita suspendoidaan liuokseen, joka sisältää 0,0009-0,0027 moolia kaksifunktionaalista verkkoutus-ainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia tärkkelysjyväsiä, kunnes verkkoutusaine on käytetty loppuun, ja sen jälkeen jyväsiin liitetään sinänsä tunnetulla tavalla määritettävissä olevia ryhmiä.
Vastaavasti on keksinnön mukainen menetelmä edellä määritellyn, amy-loosijyväsiin perustuvan substraatin valmistamiseksi tunnettu siitä, että lähtömateriaalina käytetään turvottamattomia amyloosijyväsiä, joiden läpimitta on välillä 0,05-0,20 nm, joita suspendoidaan liuokseen, joka sisältää 0,02-0,07 moolia kaksifunktionaalista verkkoutus-ainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia amyloosijyväsiä, kunnes verkkoutusaine on käytetty loppuun, ja sen jälkeen jyväsiin liitetään sinänsä tunnetulla tavalla määritettävissä olevia ryhmiä.
Sopivia kaksifunktionaalisia verkkoutusaineita ovat esimerkiksi ali-faattiset halogenidit, kuten propyleenidikloridi, diklooripentaani, etyleenidibromidi, glyseriinidikloorihydriini, diklooributaani, eetterin muodostavat epoksihalogeeniyhdisteet, kuten epikloorihydriini ja epibromihydriini, syanuurikloridi, fosforioksikloridi, metafosfaa-tit ja polymetafosfaatit, aldehydit, kuten formaldehydi, glutaarial-dehydi, akroleiini, meripihkahappoanhydridi ja näiden kaltaiset yhdisteet.
Kuten edellä jo on mainittu, käytetään tärkkelysjyvästen yhteydessä 0,0009 - 0,0027 moolia verkkoutusainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia tärkkelysjyväsiä, jolloin näiden jyvästen edullisin läpimitta on 0,01-0,1 mm. Amyloosijyvästen yhteydessä sitä vastoin parhaat tulokset saavutetaan käytettäessä 0,02-0,07 moolia verkkoutusainetta 100 grammaa kohden turvottamattomia amyloosijyväsiä, jolloin viimeksi mainittujen paras läpimitta on välillä 0,05-0,20 mm. Nämä eroavuudet johtuvat siitä, että tärkkelysjyväsessä luonnostaan oleva amylopektiinikuori on jo sinänsä verkkoutunut ja vaatii toivotun jarrutetun turpoavuuden saavuttamiseksi suhteellisen vähän verkkoutusainetta. Verkkoutusainemäärän ollessa liian vähäinen turpoaminen on liian suuri, verkkoutusainemäärän ollessa liian suuri jyväset tulevat liian stabiileiksi eikä enää ole 5 63424 tarjolla riittävästi vapaita amyloosiketjuja, joita a-amylaasi voisi pilkkoa. Amyloosi sitävastoin ei ole edeltä käsin verkkoutu-nutta, joten keksinnön mukaisen substraatin valmistamiseksi käytetään yli 10 kertaa niin suuri määrä verkkoutusainetta. Kun tärkkelyksen yhteydessä turpoamista keksinnön mukaisesti jarrutetaan, kiteisten, kylmään veteen liukenemattomien amyloosiosasten yhteydessä turpoavia tuotteita saadaan yleensä vasta verkkouttamalla. Koska teknillisessä amyloosissa usein on vielä tietty määrä amylopektii-niä, on tarkoituksenmukaista määrittää amylopektiinipitoisuus ja päätellä siitä tarvittava verkkoutusaineen määrä.
Määrättävinä, substraatissa olevina sivuryhminä tulevat kysymykseen ensisijaisesti väriaineet tai väriainetta muodostavat ryhmät, siis sellaiset, joiden annetaan reagoida vasta myöhemmin lisäkomponentin kanssa väriaineeksi. Väriaineet voivat absorboida näkyvää valoa tai näkymättömiä aallonpituuksia. Sopivia ovat myöskin fluorOivat väriaineet. Liittämiskelpoisia voivat edelleen olla radioaktiiviset tai entsymaattisesti määritettävissä olevat ryhmät. Erityisen sopiviksi osoittautui Cibacronblau 3 GA. Sopimattomiksi osoittautuivat diatsosysteemin omaavat väriaineet johtuen niiden vuorovaikutuksesta polysakkaridien kanssa sekä niiden hydrofobisuudesta.
Edellä selostetun ensisijaisen väriaineen lisäksi muutkin kemialliselta rakenteeltaan samanlaiset väriaineet osoittautuivat yhtä käyttökelpoisiksi, joskin ne sisälsivät käytännössä lisäaineena moninkertaisen määrän naftaliinisulfonihappoa ja viimeksi mainittu inhiboi α-amylaasia jo hyvin vähäisinä määrinä.
Muidenkin määrättävissä olevien ryhmien yhteydessä, jotka kemiallisen rakenteen puolesta soveltuvat liitettäviksi substraattiin, on tärkeätä, että ne eivät inhiboi itse α-amylaasia, mikä kuitenkin on yksinkertaisen esikokeen avulla todettavissa. Itse ryhmien liittäminen tapahtuu ammattimiehen tuntemin menetelmin, esimerkiksi puuvillavärjäämöissä yleisesti käytettävin menetelmin, eikä tarvitse tässä selostaa lähemmin.
a-amylaasin määrittämiseksi keksinnön mukaista substraattia lisätään tarkoituksenmukaisesti noin 5 mg/ml - 150 mg/ml. Ensisijaisesti käytettävät määrät ovat välillä noin 20 - noin 50 mg/ml, koska tällöin kaikissa olosuhteissa, siis patologistenkin herojen yhteydessä, käytettävissä on riittävän suuri ylimäärä substraattia.
63424
Oheisessa piirroksessa keksinnön mukaista reagenssia verrataan sen aikayksikköä kohden aiheuttaman ekstinktion osalta, käyttämällä samoja substraattimääriä ja muutenkin identtisiä olosuhteita, kahteen kaupan olevaan, värjättyihin tärkkelyksiin perustuvaan amylaa-sisubstraattiin. Käyrä 1 esittää keksinnön mukaista tärkkelyspohjäistä substraattia, käyrä 2 keksinnön mukaista amyloosi-pohjäistä substraattia, käyrä 3 kaupan olevaa substraattia, jota oli valmistettu verkkouttamalla liukoista tärkkelystä ja värjäämällä sen jälkeen, käyrä 4 esittää toista alkuperää olevaa kaupan olevaa substraattia, jota on valmistettu periaatteessa kuten käyrän 3 substraattia. Kaikki substraatit oli väritetty Cibachronblau 3 GA:lla.
Piirroksessa esitetyt käyrät saatiin idättämällä kussakin tapauksessa 5,0 ml:ssa 10-prosenttista substraattisuspensiota 30°C:ssa 100 yUl norm, α-amylaasia. Määrättyinä aikoina lisättiin 1,0 ml 0,5-norm. NaOH:a, suodatettiin ja mitattiin ekstinktio E 578, n = 2, ilmaa vasten. Kuten kuvio osoittaa keksinnön mukaisilla substraateilla, tyhjäarvon ollessa suunnilleen sama kuin vertailusubstraa-teilla, ekstinktio saadaan lähes kaksi kertaa suuremmaksi.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä edelleen.
Esimerkki 1 g-amylaasisubstraatin valmistaminen perunatärkkelyksestä - 16 g NaOH lisätään sekoittaen 6 litraan vettä, tähän sekoitetaan sitten 1000 g tärkkelystä (kekimääräinen jyväskoko 0,01-0,1 mm, seulottua) ja tiputtamalla lisätään hitaasti 2 ml epikloorihydrii-niä. Erää sekoitetaan 15 tuntia huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen pH säädetään 2-n HClrlla arvoon 7-8 (noin 200 ml 2-n HC1) ja seoksen annetaan olla paikoillaan noin tunnin ajan. Tällöin verkkoutunut tärkkelys laskehtii alas, lievästi samea pintakerros dekantoidaan pois ja hävitetään. Jäljellä oleva 2-3 litran tilavuuden osa lisätään voimakkaasti sekoittaen noin 5-kertaiseen määrään metanolia.
Sen jälkeen suspensiota sekoitetaan vielä 1 tunnin ajan, minkä jälkeen sakka suodatetaan erilleen ja kuivataan vakuumissa huoneen lämpötilassa.
Saanto: 0,8-1 kg.
Värittäminen suoritetaan seuraavasti: 6 kg natriumsulfaattia (vedetöntä) liuotetaan sekoittaen ja lämmittäen 30 litraan vettä, sen 7 jälkeen lämmitetään 98°C:een ja lisätään annoksittain 1 kg verkkou-tettua tärkkelystä. Sitten lisätään 0,4 kg väriainetta Cibachron-blau 3 GA, minkä jälkeen liuosta pidetään vielä 10 minuuttia tässä lämpötilassa. Tämän jälkeen lisätään 0,92 kg natriumfosfaatti · 12 I^Orta, minkä jälkeen liuosta sekoitetaan vielä kerran 15 minuuttia 95-98°C:ssa. Tämän jälkeen jäähdytetään ja seoksen annetaan laskehtia. Erä suodatetaan erilleen, tai sentrifugoidaan erilleen ja pestään kunnes suodos on väritön. Turvonnut vesipitoinen tuote lisätään sitten voimakkaasti sekoittaen noin 5-kertaiseen tilavuus-määrään metanolia. Syntynyttä suspensiota sekoitetaan sitten vielä tunnin ajan ja tämän jälkeen suodatetaan. Sen jälkeen pestään asetonilla ja kuivataan vakuumissa huoneen lämpötilassa.
Saanto: 1,0 - 1,1 kg väritettyä, verkkoutunutta tärkkelystä.
Esimerkki 2
Amyloosi-pohjaisen a-amylaasisubstraatln valmistus
Menetellään kuten esimerkissä 1 on selostettu käyttämällä kuitenkin tärkkelyksen asemesta 1000 g amyloosia, jonka jyvästen keskimääräinen läpimitta on välillä 0,05-0,20 mm (seulottu) ja 25 ml epikloori-hydriiniä.
Esimerkki 3 g-amylaasimäärityksen suorittaminen
Reagenssit: Konsentraatiot
Substraatin suspensio 20 mg/ml 20-molaarisessa natrium- fosfaattipuskurissa, jossa on 50 mmoolia NaCl, pH 7,0
Natronlipeä 0,5-norm.
Mittausolosuhteet:
Idätyslämpötila 30°C
Idätysaika: 15 min
Mittausaaltopituus: 578 nm (550-650 nm)
Kerrospaksuus: 1 cm
Reagenssityhjäarvo: näytteen asemesta käytetään tislattua vettä. Reaktioastiaan pipetoidaan:
Suspensiota (30°C) 5,0 ml Näyte 0,1 ml
Sekoitetaan, idätetään tarkalleen 15 minuuttia 30°C:ssa.
Reaktio keskeytetään lisäämällä:
Claims (3)
1. Substrat baserat pk partikelformig stärkelse derivatiserad med bestämbara grupper för bestämning av a-amylas, k ä n n e -tecknat av att substratet utgöres av pk ytan tvärbundna stärkelsekorn, vars svällningsförmäga reglerbart förminskats och som tvärbundits med användning av 0,0009-0,0027 mol av ett di-funktionellt tvärbindningsmedel per 100 gram av icke-svällda stärkelsekorn, samt vars diameter är mellan 0,01 och 0,1 mm.
2. Substrat baserat pä partikelformig amylos derivatiserad med bestämbara grupper för bestämning av α-amylas, k ä n n e -tecknat av att substratet utgöres av pä ytan tvärbundna amyloskorn, vars svällningsförmäga reglerbart förminskats, och som tvärbundits med användning av 0,02-0,07 mol av ett difunktio-nellt tvärbindningsmedel per 100 gram av icke-svällda amyloskorn, samt vars diameter är mellan 0,05 och 0,20 mm.
3. Substrat enligt nägot av de föregäende patentkraven, kännetecknat av att det är derivatiserat med ett
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2819298 | 1978-05-02 | ||
| DE2819298A DE2819298A1 (de) | 1978-05-02 | 1978-05-02 | Alpha -amylasesubstrat und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI791355A FI791355A (fi) | 1979-11-03 |
| FI63424B true FI63424B (fi) | 1983-02-28 |
| FI63424C FI63424C (fi) | 1983-06-10 |
Family
ID=6038529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI791355A FI63424C (fi) | 1978-05-02 | 1979-04-25 | Alfa-amylassubstrat och dess framstaellningsfoerfarande |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4337310A (fi) |
| EP (1) | EP0005148B1 (fi) |
| JP (1) | JPS585040B2 (fi) |
| AT (1) | AT360556B (fi) |
| CA (1) | CA1110620A (fi) |
| DE (2) | DE2819298A1 (fi) |
| FI (1) | FI63424C (fi) |
| IE (1) | IE48138B1 (fi) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3001878A1 (de) * | 1980-01-19 | 1981-07-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Polysaccharid-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung sowie diese enthaltende mittel |
| ATE124719T1 (de) * | 1987-07-17 | 1995-07-15 | Modrovich Ivan Endre | Stabiles alpha-amylase-reagenz. |
| JP2786336B2 (ja) * | 1991-03-04 | 1998-08-13 | 富士写真フイルム株式会社 | 免疫分析要素および免疫分析方法 |
| GB2340147A (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-16 | Sofitech Nv | Wellbore fluid |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2500950A (en) * | 1945-12-29 | 1950-03-21 | Nat Starch Products Inc | Ungelatinized starch ethers from polyfunctional etherifying agents |
| DE1668515U (de) | 1953-08-04 | 1953-12-17 | Ernst Erich Nier | Ruecklicht, insbesondere fuer fahrraeder. |
| US2977356A (en) * | 1958-05-27 | 1961-03-28 | Anheuser Busch | Process for preparing cross-linked starch ethers in granule form |
| GB1167083A (en) * | 1966-01-20 | 1969-10-15 | Warner Lambert Pharmaceutical | Assay Method for Amylase |
| US3525672A (en) * | 1967-02-17 | 1970-08-25 | Nat Starch Chem Corp | Low temperature stable starch products |
| SE336915B (fi) * | 1968-01-15 | 1971-07-19 | Pharmacia Ab | |
| GB1320086A (en) * | 1970-09-11 | 1973-06-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Agent and method for the determination of hydrolysing enzymes |
| GB1333420A (en) | 1970-12-01 | 1973-10-10 | Xerox Corp | Reagent combination for use in the quantitative determination of amylase in body fluids |
| US3759794A (en) * | 1971-11-01 | 1973-09-18 | S Sax | Method for determination of amylase activity |
| GB1381380A (en) * | 1972-09-06 | 1975-01-22 | Warner Lambert Co | Water-soluble dyed substrate for amylase assay |
| CA1008069A (en) * | 1973-03-01 | 1977-04-05 | A.E. Staley Manufacturing Company | Temperature stable large granule starch product |
| US4025392A (en) * | 1976-04-14 | 1977-05-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Chromogenic substrate for determination of amylase activity |
-
1978
- 1978-05-02 DE DE2819298A patent/DE2819298A1/de not_active Withdrawn
-
1979
- 1979-02-16 AT AT122379A patent/AT360556B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-02-20 EP EP79100499A patent/EP0005148B1/de not_active Expired
- 1979-02-20 DE DE7979100499T patent/DE2961389D1/de not_active Expired
- 1979-02-26 CA CA322,323A patent/CA1110620A/en not_active Expired
- 1979-04-25 FI FI791355A patent/FI63424C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-05-01 JP JP54052569A patent/JPS585040B2/ja not_active Expired
- 1979-08-08 IE IE865/79A patent/IE48138B1/en unknown
-
1980
- 1980-09-08 US US06/184,675 patent/US4337310A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE48138B1 (en) | 1984-10-03 |
| JPS54158297A (en) | 1979-12-13 |
| IE790865L (en) | 1979-11-02 |
| ATA122379A (de) | 1980-06-15 |
| EP0005148B1 (de) | 1981-11-25 |
| AT360556B (de) | 1981-01-26 |
| DE2819298A1 (de) | 1979-11-08 |
| DE2961389D1 (en) | 1982-01-28 |
| CA1110620A (en) | 1981-10-13 |
| EP0005148A1 (de) | 1979-11-14 |
| FI63424C (fi) | 1983-06-10 |
| US4337310A (en) | 1982-06-29 |
| FI791355A (fi) | 1979-11-03 |
| JPS585040B2 (ja) | 1983-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0231125B1 (en) | Hydrolyzable fluorescent substrates and analytical determinations using same | |
| US5580527A (en) | Polymeric luminophores for sensing of oxygen | |
| CA1125634A (en) | Amylase determination | |
| CS273301B2 (en) | 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds | |
| EP0184437B1 (en) | Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes | |
| JPS60252464A (ja) | ヒドロラ−ゼ用の基質およびそれらの製法 | |
| FI63424B (fi) | Alfa-amylassubstrat och dess framstaellningsfoerfarande | |
| EP0087599B1 (en) | Diazonium salts and reagents for bilirubin assay | |
| US4268628A (en) | Method for the determination of α-amylase | |
| US4563421A (en) | Method for determining the presence of endohydrolase in a liquid and composition therefor | |
| US5710012A (en) | Salt of 6-carboxy-3-methylbenzothiazolone hydrazone hydrate in colorimetric determination of hydrogen peroxide | |
| US5128267A (en) | Naphthotriazolium salts | |
| US3759794A (en) | Method for determination of amylase activity | |
| US3694318A (en) | Substrate and method for alpha-amylase assay | |
| PL144340B1 (en) | Method for enzymatic determination of antibiotics of betha-lactam ring and analytical set therefor | |
| JPH0439913B2 (fi) | ||
| US3715325A (en) | Insoluble polymeric diazonium salt chromogen | |
| US3838149A (en) | Starch phosphate esters | |
| JPS5931699A (ja) | α−アミラ−ゼ活性の測定法 | |
| US3947377A (en) | Stabilized indicator compositions containing 9-γ-aminopropyl)-3-aminocarbazole | |
| JPH025400B2 (fi) | ||
| US4803157A (en) | Hydrolyzable fluorescent substrates for phosphatases and analytical use thereof | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| US5260428A (en) | Agent for the detection of substances with hydrolase activity | |
| JP2577431B2 (ja) | 前立腺酸性ホスフアターゼの測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |