FI63391B - Analogifoerfarande foer framstaellning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet - Google Patents
Analogifoerfarande foer framstaellning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet Download PDFInfo
- Publication number
- FI63391B FI63391B FI770835A FI770835A FI63391B FI 63391 B FI63391 B FI 63391B FI 770835 A FI770835 A FI 770835A FI 770835 A FI770835 A FI 770835A FI 63391 B FI63391 B FI 63391B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- lys
- gly
- thr
- obr
- boc
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/675—Beta-endorphins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin
Description
- —---- rft1 KUULUTUJJULKAISU /77Q1
3¾¾ W <11>UTLACGNINCSSKRIFT
C Patentti nyönnolty 10 06 1933 vwa#y Patent aeddelat ’ (51) Kv.lk.7lnc.Cl/ C 07 C 103/52 SUOMI—FINLAND pi) 770835 (22) Htk«mltpilvl—Am&kniftgtdtf 16.03-77 (23) Alkupllvi—ClltiglMtadag 16.03*77 (41) Tullut IuIMmIuI — Bllvit oftmtlig 18.09 · 77
Patanttl-ja rukuterihallltut NlhtMloIpnw.). kuuqulk^un prm.- 28.02.83
Patent- och ragiftnratyralaan ' Arattkin utlagd odi utUkrMUn publkunui (32)(33)(31) Pyy*·** MuollcMi_a«|M prtorttM 17*03.76 USA (US) 66771+7 (71) F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Grenzacherstrasse 124-181+, Basel, Sveitsi-Schweiz(CH) (72) Choh Hao Li, Berkeley, California, USA(US) (7I+) Oy Roister Ab (54) Analogiamenetelmä uusien opiaatti-agonisti-aktiivisten hentriakonta-peptidien valmistamiseksi - Analogiförfarande för framställning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet
Keksintö koskee analogiamenetelmää uusien opiaatti-agonisti-aktiivisten hentriakontapeptidien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-
Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-R - (I) 2 3
Lys-Asn-Ala-R -Lys-Lys-Gly-R -OH
jossa R1 = Ile, R2 = His ja R3 = Gin tai R^ = Ile, R2 = Tyr ja R3 = Glu tai R1 = Vai, R2 = His ja R3 = Gin, erikoisesti niiden hentriakontapeptidien valmistusta, joilla on sekvenssi H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-
Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-His-Lys-
Lys-Gly-Gln-OH. (Ia) 2 63391
Sekvenssin (Ia) mukaista hentriakontapeptidiä kutsutaan seuraavassa myös /3-endorfiiniksi.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista että a) yhdiste jolla on kaava (Ia)
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr--Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala- (Ia) His-Lys-Lys-Gly-Gln-OH
eristetään kamelin aivolisäkkeestä ja se, että aivolisäkkeille suoritetaan hapan asetonmuuttaminen, saatu fraktio D kromatogra-foidaan karboksimetyyliselluloosalla ja näin saatu komponentti N puhdistetaan geelisuodatusta ja elektroforeesia käyttäen sinänsä tunnetulla tavalla, tai se että b) tavallisen kiinteän faasin peptidisynteesin viimeisessä vaiheessa kaavan (Ha)
Boc-Tyr-(oBr-Z)-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Lys(oBr-Z)-Ser(Bzl)-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys(oBr-Z)-Asn-Ala-Ile-R^-Lys-(oBr-Z)-Asn-Ala-R^ -Lys(oBr-Z)-Lys (0Bt**Z) -Gly-R3 -R (Ha) mukaista styreeni-divinyylibentseenikopolymeraattiin kantajana sidottua suojattua peptidiä, jossa oBr-Z on o-bromibentsyylioksi-karbonyyli; Bzl on bentsyyli; Boc on t-butyylioksikarbonyyli ja R on styreeni-divinyylibentseenikopoiymeraatti ja jossa R^ = Ile, R3 = His(Boc) ja R3 = Gin tai 1 ' 2 ’ 3' R = Ile, R = Tyr(oBr-Z) ja R = Glu(OBzl) tai R1 = Vai, R3 = His(Boc) ja R3 = Gin, käsitellään nestemäisellä fluorivedyllä, jolloin ei ainoastaan peptidi erotu kiinteästä kantajasta vaan myös samanaikaisesti kaikki peptidisuojaryhmät poistuvat.
/^-endorfiinin eristäminen luonnosta saatavista lähteistä voi tapahtua sinänsä tunnetuilla menetelmillä. Edullisia luonnosta saatavia lähteitä ovat lampaiden aivolisäkkeet ja erityisesti kamelin aivolisäkkeet. Niinpä esim. kamelin aivolisäkkeiden hapan uuttaminen asetonilla antaa jakeen D, josta edelleen karboksi- metyyliselluloosalla kromatografoiden (kts. Li et ai., Biochemistry
14 (1975) 947) saadaan komponentit . Puhdistamalla komponentti N
geelisuodatuksella ja elektroforeettisesti sinänsä tunnetuilla menetelmillä saadaan toivottu /3-endorfiini.
3 63391
Luonnosta saatavasta materiaalista eristetyn (9-endorf iinin aminohappojen tunnistaminen ja sekvenssianalyysi voi tapahtua pilkkomalla entsymaattisesti trypsiinin ja subtilisiinin avulla sinänsä tunnetulla tavalla puhdistetusta komponentista N saatu $-endorfiini. Pilkkomistuotteet erotettiin toisistaan paperikro-matrografisesti ja sitä seuraavalla korkeajännite-elektroforeesilla. Trypsiinipilkkomisen tuottaessa 11 täplää saatiin sub — tilisiinipilkkomisella 10 täplää. Yksityiset täplät eluoitiin ja aminohappopitoisuus määritettiin automaattisesti analysaattoria käyttäen. Sekvenssianalyysi suoritettiin Dansyl-Edman-pilkkomis-menetelmän mukaan. Käyttämällä näitä menetelmiä tunnistettiin ft -endorfiini yllä annetun sekvenssin mukaiseksi hentriakonta-peptidiksi.
^-endorfiinin synteesi voidaan suorittaa peptidien kiinteän faasin synteesien alueella yleisesti tunnettuja menettelytapoja käyttäen (kts. esim. teos "Methoden der organischen Chemie" (Houben-Weyl), osa XV, Synthese von Peptiden, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974). Erään edullisen suoritustavan mukaan käytetään aminosuojattua glutamiinia, joka tuottaa ^-endorfiinin päätekar-boksyyliryhmän, yhdessä kiinteän faasin synteesissä yleisesti käytetyn hartsin kanssa, kuten bentshydryyliamiini-polystyreenin, joka on verkkoutettu 1-2%:illa divinyylibentseeniä. Aminosuoja-ryhmä poistetaan sitten selektiivisesti, jolloin käytetään aina suojaryhmän mukaan vaihtelevaa reagenssia. Eräässä edullisessa suoritustavassa käytetään aminosuojaryhmänä t-butyylioksikarbo-nyyliryhmää (Boc) ja selektiivisenä lohkaisureagenssinä 50%:ista trifluorietikkahappoa metyleenikloridissa.
Suojaryhmän lohkaisun jälkeen glutamiinihartsia käsitellään aminosuojatulla glysiinillä, edullisesti N-Boc-glysiinillä, erityisesti symmetrisen anhydridin muodossa, sinänsä tunnetulla tavalla, niin että glutamiiniryhmän vapaan aminoryhmän ja glysiinin kar-boksyyliryhmän välille muodostuu peptidisidos.
Suojaryhmän lohkaisun ja suojattujen aminohappojen symmetristen anhydridien kytkennän muodostama kierto toistetaan sitten lopuilla aminohapoilla (3-endorfiini-sekvenssin mukaisessa järjestyksessä. Muutamat näistä aminohapoista vaativat «^-aminoryhmän suojauksen lisäksi reaktiivisen sivuryhmän sulkemista. Tällaisia aminohappoja ja niiden suojaryhmiä ovat seuraavat: 4 63391
Glu(OBzl), Ser(Bzl), Lys(oBr-Z), Tyr(oBr-Z) ja His(Boc) jossa oBr-Z = o-bromibentsyylioksikarbonyyli,
Bzl = bentsyyli ja Boc = t-butoksikarbonyyli.
Synteesin päätyttyä saadaan seuraava suojattu hentriakon-tapeptidi, joka on sitoutunut styreeni-divinyylibentseeni-kopoly-meraattiin:
Boc-Tyr(oBr-Z)-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Lys(oBr-Z)-Ser(Bzl)-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys(oBr-Z)-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys(oBr-Z)-Asn-Ala-His(Boc)-Lys(oBr-Z)-Lys(oBr-Z)-Gly-Gln-® jossa oBr-Z, Bzl ja Boc merkitsevät samaa kuin edellä ja (r) on styreeni-divinyylibentseeni-kopolymeraatti.
Peptidin lohkaisu hartsista suoritetaan käsittelemällä nestemäisellä fluorivedyllä, jolloin kaikki suojaryhmät lohkeavat samanaikaisesti ja saadaan toivottu /J-endorfiinin.
Vaikka ^3-endorfiini sisältää f'J-lipotropiini-hormonin ryhmien 61-91 mukaisen aminohapposekvenssin, on sen lipolyyttinen aktiivisuus hyvin vähäinen verrattuna täydellisen hormonin aktiivisuuteen. (3-endorfiinilla on merkittävä opiaatti-agonistivaiku-tus ja se on sen vuoksi tehokas kipuja lievittävä lääke, joka ei aiheuta riippuvuutta. Synteettisellä ja luonnosta saatavalla -endorfiinilla on samanlaiset fysikaaliset ja biologiset ominaisuudet .
('S-endorfiinin analogit, jotka on määritetty sekvenssin I avulla, vastaavat osaa sian ja ihmisen ^ί-lipotropiinista. Ne valmistetaan tarkoituksenmukaisesti analogisesti edellä kuvatun ^3-endor-fiinisynteesin kanssa.
KOETULOKSET
{3-endorfiinin biologinen aktiivisuus
Luonnosta saatavan (^3-endorfiinin opiaatti-agonisti-aktiivi-suus määritettiin menetelmällä, joka on esitetty viitteessä Simon et ai., Proc. Nat. Acad. Sei. 70 (1973) 1947 käyttämällä nuorten pyöriäisten aivoista saatuja kalvoja. Tulokset on kerätty seuraa-vaan taulukkoon: 6 3 3 91 5 TAULUKKO 1 ,-LPH-(61-91):n opiaatti-agonisti-aktiivisuus vastaaotto-
S
yhteyskokeessa.
Annos
Yhdiste (10 7 il) (mg) vaikutus3^ normorfiini 0,7 0,019 28 _+ 0,8 7.0 0,190 70 + 0,9 fls-LPH-(61-91)b 1,0 0,343 60 + 0,7 10.0 3,438 83 + 0,2 a) % stereospesifisen yhteyden ehkäistyminen %.
b) Suhteelliset voimakkuudet laskettuina normorfiinista 342%, kun 95% luotettavuusrajat ovat välillä 300-392 ja ^ =0,044.
Tämän taulukon arvoista voidaan todeta, että (Ϊ -endorfiinilla on voimakas opiaatti-agonisti-aktiivisuus, ja että se on vaikutukseltaan 3,42 kertaa voimakkaampi kuin normorfiini, kun laskentaperusteena käytetään molaarisia määriä.
Luonnosta saatavan ^3-endorfiinin lypolyyttistä aktiivisuutta verrattiin lampaiden ^3-lipotropiinin aktiivisuuteen kanii-ninrasvasoluihin käyttämällä menetelmää, joka on esitetty viitteessä Li et ai., Arch. Biochem. Biophys. 169 (1975) 669. Saadut tulokset on kerätty yhteenvetona seuraavaan taulukkoon 2: TAULUKKO 2 /3-iipotropiinin ja luonnosta saatavan (^3-endorfiinin lipo-lyyttinen aktiivisuus
Yhdiste Annos Vaikutus /3-lipotropiini 0,37 3,24 _+ 0 1.1 5,71 + 19 luonnosta saatava /3-endorfiini 1,1 0,66 _+ 0,28 10.0 1,42 + 0,37 vertailu 0 0,74+0,06 S 63391 a) ^uraol muodostunutta glyseriiniä solugrammaa ja tuntia kohti.
Kolmen määrityksen keskiarvo + standardipoikkeama.
Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää farmaseuttisina valmisteina, joissa vaikuttava aine vapautuu suoraan tai hidastetusta, seoksessa jonkun enteraaliseen, perkutaaniin tai pa-renteraaliseen käyttöön soveltuvan orgaanisen tai epäorgaanisen inertin kantaja-aineen, kuten veden, gelatiinin, arabikumin, maitosokerin, tärkkelyksen, magnesiumtearaatin, talkin, kasvisöljyjen, polyalkyleeniglykolien, vaseliinin, jne. kanssa. Farmaseuttiset valmisteet voivat olla kiinteässä muodossa, esim. tabletteina, helminä, suppositorioina, kapseleina; puolikiinteässä muodossa, esim. voiteina; tai nestemäisessä muodossa, esim. liuoksina, suspensioina tai emulsioina. Ne ovat mahdollisesti steriloituja ja/tai sisältävät muita apuaineita, kuten säilöntä-, stabilointi-, verkkoutus- tai emulgointiaineita, makua parantavia aineita, suoloja osmoottisen paineen muuttamiseksi tai puskureita. Farmaseuttisten valmisteiden valmistaminen voi tapahtuva jokaiselle asiantuntijalle tunnetulla tavalla.
Parenteraalinen valmiste voidaan valmistaa seuraavasti: (3~endorfiinin stabiloitu liuos tislatussa vedessä täytetään steriileihin ampulleihin, niin että kukin ampulli sisältää 50 mg peptidiä. Sitten liuokset lyofilisoidaan, niin että saadaan kuiva jauhe, josta kulloinkin voidaan muodostaa ruiskeliuos lisäämällä isotonista suolaliuosta.
Käytettäessä systeemisesti vaikuttavia farmaseuttisia valmisteita voidaan ohjeannostuksena pitää noin 5-750 mg/kg.
ESIMERKKI 1
Luonnosta saatavan ^3-endorfiinin eristäminen 500 kamelin aivolisäkettä uutettiin happamalla asetonilla käyttäen menetelmää Li et ai., Biochemistry 14 (1975) 947. Saatu fraktio D puhdistettiin kromatografisesti karboksimetyylisellu-loosalla ja se tuotti 66 mg komponenttia N, jolle suoritettiin geelisuodatus Sephadex G-25:llä (hieno) 0,1 N etikkahapossa.
A: 10 mg; B: 7 mg; C: 11 mg; D: 13 mg; E: 2 mg; ja F 7 mg; 7 63391
Fraktio C erotettiin edelleen käyttämällä preparatiivista elektroforeesia kahden tunnin kuluessa 400 Villa Whatman No. 3 MM-paperilla pyridiinietikkahappo-puskurissa pH:ssa 3,7 (pyridiini/ etikkahappo/vesi = 4/40/1150 (v/v)). Päävyöhyke eluoitiin 0,1 N etikkahapolla, lyofilisoitiin ja saatiin 7,5 mg puhdasta tuotetta. Aminohappojakson pääteaminohapoksi määritettiin tyrosiini.
Spackman et ai., Anal. Chem. 30 (1958) 1190 menetelmällä automaattista analysaattoria käyttäen suoritettu aminohappoana-lyysi antoi taulukossa 3 esitetyt tulokset.
Trypofaanin puuttuminen varmistettiin menetelmän Smith,
Nature 171 (1953) 43 mukaisella värikokeella.
8 63391
Taulukko 3
Peptidikomponentti N:n (fraktio C) aminohapot
Aminohappo happohydro- sekvenssi- lyysistä a) analyysistä lysiini 5,1 5 hletidiini 0,9 1 h) asparagiinihappo 2,0 2 ' treoniini 3»2 3 seriini 1,6 2 glutamiinihappo 2,7 3°^ proliini 0,7 1 glyeiini 3,2 3 alaniini 1,7 2 väliini 0,9 1 metioniini 0,6 1 isoleusiini 1»0^ 2 leueiini 2,0 2 tyrosiini 0,9 1 fenyylialaniini 1,9 2 a) 24 tuntia kestävä hydrolyysi 110°:ssa 6 M HClsllä b) 2 aeparagiini c) 1 glutamiinihapon ja 2 glutamiinin summa d) 72-tuntinen hydrolyysi osoitti 2 yksikön läsnäolon.
9 63391 ESIMERKKI 2
Luonnosta saatavan ^3-endorfiinin rakennemääritys 1 mg esimerkin 1 mukaisesti saatua peptidiä pilkottiin entsymaattisesti 0,02 mg:11a trypsiiniä ja 0,05 mg:11a subtilisiiniä 0,2 M ammoniumasetaattipuskurissa^jonka pH oli 8,0, 37°C:ssa 8 tunnin aikana (trypsiini) tai 1 tunnin aikana (subtilisiini). Pilkkomistuotteet eroteltiin paperikromatografiällä /butanoli/ etikkahappo/vesi = 4:1:5 {v/vff ja sitä seuraavalla korkeajännite-elektroforeesilla pH:ssa 2,0 /muurahaishappo (88%)/etikkahappo/ vesi = 218:63:719 (v/v).7 1i tunnin aikana ja 200 V:lla. Täplät eluoitiin 0,1 N ammoniumhydroksidiliuoksella, eluaatti kuivattiin eksikkaattorissa ja analysoitiin. Aminohappoanalyysi suoritettiin menetelmällä Spackman et ai. (katso yllä) ja sekvenssianalyysi Edman-pilkonnan avulla, kuten on kuvattu artikkelissa Li et ai., Arch. Biochem. Biophys. 141 (1970) 705. Asp/Asn ja Glu/Gln suhteen määrittäminen tapahtui paperielektroforeettisesti pH:ssa 6,7 menetelmällä, joka on esitetty viitteessä Offord, Nature 211 (1966) 591 . Tulokset on esitetty taulukoissa 4 ja 5.
10 , 63391
Taulukko 4
Tryptieten ja subtilisiini-peptidien komponentin N (fraktio C) aminohapot ja NH^-pääteryhmät »
Amino- tryptisat peptidit subtilisiini-peptidit happo Tl T3 T5 T6 T7 ΤΘ T9 ____SJ_ S9
Lysiini ~2/l M M 1»° histidiini 0,9 1,0 asparagiinihappo 1,0 0,6 °>8 treoniini 1/1 2/l sariini 1,0 0,8 1,1 glutaml 1 nl happo 1,1 1,0 1,0 1,2 1,8 proliini o,0 If1 glyeiini 1,0 0,5 2,0 alaniini 1,0 0,8 1,1 °78 vallini 1,0 metioniini 0,8 isolausiini 2,0 2,0 leusiini 2,2 1,0 tyrosiini 0,6 fenyylialaniini 1,0 o, 9 NHg- Asn Asn Lys Gly Asn Tyr Ser Lys Glu (pääte ) a) hydrolyysi 6 N HClxssa llO°Cteaa 24 tunnin aikana; hydrolyysin kasto T7:llä ja S7:llä 72 tuntia.
11 63391 TAULUKKO 5
Tryptisten peptidien sekvenssianalyysi peptidi sekvenssi^ T8 Tyr-Gl^-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys T9 Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Th^-Lei^-Phev-Lys T7 Asi\-Ala-Il^-Il^-Lys T3 Asry-Ala^-Hi^-Lys T5 Ly^-Gly-Gln T6 Gly-Glr\ a) vertaa taulukko 4 b) -»,Dansyl-Edman-menetelmä
Saaduista analyysituloksista muodostuu ^-endorfiinille alussa esitetty jakso.
ESIMERKKI 3 (3-endorfiinin kiinteän faasin synteesi o<-bentsyyli-N -t-butyylioksikarbonyyliglutamaatin kytkeminen bentshydryyliamiinihartsiin saatiin aikaan käyttämällä sen symmetristä anhydridiä. 2,5 g bentshydryyliamiinihydrokloridihartsia, joka sisälsi 0,38 mmol vapaata amiinia g kohti, neutraloitiin 5%: ilia di-isopropyylietyyliamiinia (DIEA) Ci^C^JSsa ja käsiteltiin sitten 3 ekvivalentilla symmetristä anhydridiä Ci^C^sssa 45 minuutin ajan. Siihen lisättiin edelleen 5 ml 5% DIEAsta Cl^Cljtssa. 10 minuutin kuluttua suodatettiin, pestiin kolmesti 30 ml:11a ja kolmesti 30 ml:11a absoluuttista etanolia. Kun hartsia oli vielä kerran käsitelty samalla määrällä symmetristä anhydridiä, sitä kuivattiin tunnin ajan P20^:llä. Reaktion täydellisyys kokeiltiin gisiinikokeella. Kun näyte oli hydrolysoitu propionihappo/12 N HCli ssa, tuotti aminohappoanalyysi piikin, joka vastasi 0,23 mmol:n määrää Gln:ää g:aa kohti (68% lohkeaminen). Fluorivedyn avulla lohkais- 12 63391 tun tuotteen tunnistus glutamiiniksi tapahtui ohutkerroskromato-grafisesti 1-butanoli/etikkahappo/vesiseoksessa (4:1:1, (v/v)) ja 1-butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi-seoksessa (6:6:1,2:4,6 (v/v)).
Boc-aminohappojen reaktio N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin (DCCI) kanssa suoritettiin seuraavasti: 1,9 mmol Boc-aminohappoa 6 ml:ssa CH«Cl?:ta jäähdytettiin 0,°C:een ja sekoitettiin 1,6 ml: aan 0,6 M DCCI:tä C^C^rssa. Sekoitettu 20 minuuttia 0, C:ssa, disykloheksyyliureasakka suodatettiin pois ja pestiin 2,4 ml:11a CH^Clgita. Suodos käytettiin heti kytkeytymisreaktioon.
Edellä kuvatulle hartsille suoritettiin seuraava synteesi- kaavio: 1. pesu kolmesti kulloinkin 15 ml :11a Cl^C^sta; 2. Boc-ryhmän poistaminen 50% trifluorietikkahapolla Ci^C^^sa 15 minuutin aikana; 3. pesu kahdesti kulloinkin 15 ml: 11a CHjC^sta; 4. pesu kahdesti kulloinkin 15 ml:11a 50% dioksaania CiH^Cljissa; 5. pesu kahdesti kulloinkin 15 ml: 11a Cl^C^ita; 6. neutralointi 15 ml:11a 5% DIEA:ta Cl^C^tssa; 7. pesu kuudesti kulloinkin 15 ml:11a Cl^C^ita; 8. Boc-aminohapon symmetrisen anhydridin liuoksen lisäys ja ravistelu 30 minuutin ajan; 9. 0,20 ekvivalentin 5% DIEA:ta Cfi^Cl^tssa lisäys ja ravistelu 20 minuutin ajan; 10. pesu kolmesti kulloinkin 15 ml:11a CHjCljita ja 11. pesu kolmesti kulloinkin 15 ml:11a absoluuttista etanolia.
Tämä kierto toistettiin kulloinkin seuraavien N-suojattujen aminohappojen kanssa:
Boc-Gly, Boc-Lys(oBr-Z),,Boc-Lys(oBr-Z), Boc-His(Boc), Boc-Ala, Boc-Asn, Boc-Lys(oBr-Z), Boc-Ile, Boc-Ile, Boc-Ala, Boc-Asn1,
Boc-Lys(oBr-Z), Boc-Phe, Boc-Leu, Boc-Thr, Boc-Val, Boc-Leu,
Boc-Pro, Boc-Thr, Boc-Gln, Boc-Ser(Bzl), Boc-Lys(oBr-Z),
Boc-Glu(OBzl), Boc-Ser(Bzl), Boc-Thr, Boc-Met, Boc-Phe, Boc-Gly, Boc-Gly ja Boc-Tyr(oBr-Z).
Asn lisäämisen jälkeen kuivattiin peptidi (saanto 4,7 g) ja ali-kvootti osa (400 mg) poistettiin. Jäljelle jäänyt peptidihartsi käsiteltiin sitten saman yllä kuvatun kaavion mukaisesti seuraavien aminohappojen lisäämiseksi, kahdella poikkeuksella: neutraloimiseksi 13 63391 käsiteltiin kahdesti 5% DIEA:lla Cl^C^issa ja anhydridikytkennän toisessa vaiheessa lisättiin trifluorietanolia 20% konsentraatioon saakka.
0,6 g:sta suojattua ja hartsiin sidottua ^3-endorfiinia lohkaistiin Boc-suojaryhmä. Suoritettiin neutralointi ja kuivattua hartsia sekoitettiin 1,8 ml:n anisolia ja 15 ml:n nestemäistä fluorivetyä läsnäollessa 0°C:ssa tunnin ajan. Fluorivety poistettiin typpivirran avulla ja öljymäinen jäännös pestiin kahdesti 15 ml:11a etyyliasetaattia. Peptidi uutettiin hartsista kolmesti 15 ml: 11a 50% etikkahappoa, yhdistetyt suodokset haihdutettiin alennetussa paineessa pieneen tilavuuteen ja niille suoritettiin geelisuodatus Sephadex G-10:llä 0,5 N etikkahapossa. Todettiin 1 piikki. Lyofili-fointi tuotti 110 mg ainetta, joka kromatografoitiin sitten karbok-simetyyliselluloosalla. Pääpiikin eristäminen tuotti 66 mg ainetta, joka puhdistettiin edelleen partitiokromatografisesti Sephadex G-50: llä. Pääpiikki tuotti jälleen 52 mg erittäin puhdasta (b -endorfiinia (19,6% saanto laskettuna lähtöainehartsista).
Puhdistetun aineen ohutkerroskromatografia n-butanoli/pyri-diini/jääetikka/vesi-seoksessa (15:10:3:12, (v/v)) tuotti täplän R^-arvoltaan 0,35. Synteettisen -endorfiinin paperielektroforeesi tuotti yhden ainoan täplän pH-arvoissa 3,7 ja 6,9 R^-arvoltaan (laskettuna Lys:stä) 0,65 tai 0,42. Puhdistetun aineen geelielektrofores-si tuotti samoin yhden ainoan vyöhykkeen pH:ssa 4,5 tunnin aikana.
1 mg näyte tutkittiin elektrofokusoimalla 5%:isessa polyakryyliami-digeelissä, jolloin tuloksena oli yksi vyöhyke, jonka pl oli noin 10,0. Aminohappoanalyysi happaman hydrolyysin jälkeen tuotti seuraa-vat arvot:
Lys5,2' His0(9, Asp2>2, Thr3(0, Ser^,, Glu2|1, Pro, _,,
Gly3,0' Äla2,1' Val1,1' Met0,9' Ile1,5' Leu2,2' Tyr1,0 1a Phe2,2-
Aminohappoanalyysi täydellisen entsymaattisen pilkkomisen jälkeen (ensin trypsiinillä ja kymatrypsiinillä, sitten leusiiniaminopepti-daasilla) tuotti seuraavat arvot:
Lys3,0' His1,0' Thr3,2' (Ser' Asn' Gln)3,2' Glu1,1' Pro0,9'
Gly3,0’ Äla2,1’ Val1,0' Met1,2' Ile2,0' Leu2,1' ^a Phe1,8· 14 63391 ESIMERKKI 4
Esimerkissä 3 kuvatun menetelmän mukaisesti valmistettiin (^3-endorfiinin analogi, jonka sekvenssi vastaa osittain sian fi-lipotropiinia, jolloin asemaan 23 sijoitettiin isoleusiinin asemasta väliini. Saadun hentriakontapeptidin sekvenssi on seuraava: H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Val-Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-Gln-OH
ESIMERKKI 5
Esimerkissä 3 kuvatun menetelmän mukaisesti, mutta käyttämällä kloorimetyloitua polystyreeni-divinyylibentseenihartsia, valmistettiin ^3-endorfiinin analogi, jonka aminohapposekvenssi on seuraava: H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-
Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-
Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-Glu-OH
jolloin asemaan 27 sijoitettiin Boc-His(Boc):n asemasta Boc-Tyr(oBr-Z) ja C-päätteen aminohappona käytettiin glutamiinihappoa muodossa Boc-Glu(OBzl). Tämän analogin sekvenssi vastaa osaa ihmisen /3-lipo-tropiinista.
Claims (1)
- 63391 15 Patenttivaatimus Analogiamenetelmä uusien opiaatti-agonisti-aktiivisten hentriakontapeptidien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln- Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-R1- (I) 2 3 Lys-Asn-Ala-R -Lys-Lys-Gly-R -OH joissa R^ = Ile, R2 = His ja R3 = Gin tai R1 = Ile, R2 = Tyr ja R3 = Glu tai R^ = Vai, R2 = His ja R3 = Gin, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jolla on kaava (Ia) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile- (Ia) Lys-Asn-Ala-His-Lys-Lys-Gly-Gln-OH eristetään kamelin aivolisäkkeestä ja siitä, että aivolisäkkeille suoritetaan hapan asetoniuuttaminen, saatu fraktio D kromatogra-foidaan karboksimetyyliselluloosalla ja näin saatu komponentti N puhdistetaan geelisuodatusta ja elektroforeesia käyttäen sinänsä tunnetulla tavalla, tai siitä, että b) tavallisen kiinteän faasin peptidisynteesin viimeisessä vaiheessa kaavan (Ha) Boc-Tyr-(oBr-Z)-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Lys(oBr-Z)-Ser(Bzl)-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys(oBr-Z)-Asn-Ala-Ile-R1 -Lys(oBr-Z)-Asn-Ala-R2 - (Ha) Lys(oBr-Z)-Lys(oBr-Z)-Gly-R3'-R mukaista styreeni-divinyylibentseenikopolymeraattiin kantajana sidottua suojattua peptidiä, jossa oBr-Z on o-bromibentsyylioksi-karbonyyli; Bzl on bentsyyli; Boc on t-butyylioksikarbonyyli ja R on styreeni-divinyylibentseenikopolymeraatti ja jossa R1' = Ile, R2' = His(Boc) ja R3'= Gin tai R1 = Ile, R2 = Tyr(oBr-Z) ja R3 = Glu(OBzl) tai R1 = Vai, R2 = His (Boc) ja R3 = Gin, käsitellään nestemäisellä fluorivedyllä, jolloin ei ainoastaan peptidi erotu kiinteästä kantajasta vaan myös samanaikaisesti kaikki peptidisuojaryhmät poistuvat.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US66774776 | 1976-03-17 | ||
| US05/667,747 US4038222A (en) | 1976-03-17 | 1976-03-17 | Untriakontapeptide with opiate activity |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI770835A FI770835A (fi) | 1977-09-18 |
| FI63391B true FI63391B (fi) | 1983-02-28 |
| FI63391C FI63391C (fi) | 1983-06-10 |
Family
ID=24679466
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI770835A FI63391C (fi) | 1976-03-17 | 1977-03-16 | Analogifoerfarande foer framstaellning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4038222A (fi) |
| JP (1) | JPS52113958A (fi) |
| AR (2) | AR222778A1 (fi) |
| AT (1) | AT355238B (fi) |
| AU (1) | AU514499B2 (fi) |
| BE (1) | BE852510A (fi) |
| CA (1) | CA1092602A (fi) |
| CH (1) | CH625785A5 (fi) |
| DE (1) | DE2711487C2 (fi) |
| DK (1) | DK149203C (fi) |
| ES (2) | ES456901A1 (fi) |
| FI (1) | FI63391C (fi) |
| FR (1) | FR2348912A1 (fi) |
| GB (1) | GB1563654A (fi) |
| GR (1) | GR63092B (fi) |
| IE (1) | IE44226B1 (fi) |
| IL (1) | IL51660A (fi) |
| LU (1) | LU76963A1 (fi) |
| MC (1) | MC1137A1 (fi) |
| NL (1) | NL7702849A (fi) |
| NO (1) | NO147105C (fi) |
| NZ (1) | NZ183605A (fi) |
| PH (1) | PH13864A (fi) |
| PT (1) | PT66311B (fi) |
| SE (1) | SE436354B (fi) |
| ZA (1) | ZA771593B (fi) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4320117A (en) * | 1976-06-21 | 1982-03-16 | Imperial Chemical Industries Limited | Polypeptide |
| US4123523A (en) * | 1976-06-21 | 1978-10-31 | Imperial Chemical Industries Limited | Analgesic and sedative polypeptides |
| US4371463A (en) * | 1977-02-17 | 1983-02-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Enzyme-resistant opiate pentapeptides |
| US4098781A (en) * | 1977-03-11 | 1978-07-04 | American Home Products Corporation | Polypeptides with morphine-like activity |
| US4081434A (en) * | 1977-03-11 | 1978-03-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Novel analogs of β-endorphin |
| US4317770A (en) * | 1977-03-11 | 1982-03-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | D-amino acid analogs of beta-endorphin |
| US4127534A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel tripeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said tripeptides |
| US4127536A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel tricosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said tricosapeptides |
| US4127535A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel dipeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said dipeptides |
| US4127520A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel nonadecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said nonadecapeptides |
| US4127533A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel octapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said octapeptides |
| US4127522A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel triacontapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said triacontapeptides |
| US4127532A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel heptapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said heptapeptides |
| US4127537A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel tetracosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said tetracosapeptides |
| US4127523A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel undecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said undecapeptides |
| US4127517A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel docosapeptides, intermediates therefore and pharmaceutical compositions and methods employing said docosapeptides |
| US4312857A (en) * | 1977-06-16 | 1982-01-26 | The United States Of America As Represented By The Veterans Administration | Novel derivatives of beta-endorphin, intermediates therefor and compositions and methods employing said derivatives |
| US4127539A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel hexacosapeptides, intermediates therefore and pharmaceutical compositions and methods employing said hexacosapeptides |
| US4127530A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel heneicosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said heneicosapeptides |
| US4127540A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel derivatives of δ-endorphins, intermediates therefor, and compositions and methods employing said derivatives |
| ZA783287B (en) * | 1977-06-16 | 1980-01-30 | D Coy | Novel polypeptides |
| US4127524A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel dodecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said dodecapeptides |
| US4127525A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel tridecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said tridecapeptides |
| US4127538A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel pentacosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said pentacosapeptides |
| US4127527A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel pentadecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said pentadecapeptides |
| US4127526A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel tetradecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said tetradecapeptides |
| US4127531A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel hexapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said hexapeptides |
| US4127518A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel derivatives of gamma-endorphins, intermediates therefor, and compositions and methods employing said derivatives |
| US4139504A (en) * | 1977-06-16 | 1979-02-13 | Coy David Howard | Novel nonapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said nonapeptides |
| US4127529A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel eicosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said eicosapeptides |
| US4127519A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Octadecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said octadecapeptides |
| US4127541A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel decapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said decapeptides |
| US4127528A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel derivatives of alpha-endorphin, intermediates therefor and compositions and methods employing said derivatives |
| US4127521A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel octacosapeptides, intermediates therefor and pharmaceutical compositions and methods employing said octacosapeptides |
| US4105652A (en) * | 1977-08-05 | 1978-08-08 | Hoffmann-La Roche Inc. | Synthesis of human β-endorphin |
| US4232008A (en) * | 1978-11-17 | 1980-11-04 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Tetrapeptides and methods |
| US4116950A (en) * | 1978-01-16 | 1978-09-26 | Hoffmann-La Roche Inc. | Analogs of human β-endorphin |
| US4330465A (en) * | 1978-03-02 | 1982-05-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Novel β-endorphin analogs |
| US4219468A (en) * | 1978-11-13 | 1980-08-26 | Hoffmann-La Roche Inc. | Tritiated β-endorphin |
| US4396606A (en) | 1979-11-05 | 1983-08-02 | Addiction Research Foundation | Novel polypeptide analgesics |
| US4250087A (en) * | 1979-12-10 | 1981-02-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Carboxyl terminus analogs of β-endorphin |
| JPS56108750A (en) * | 1980-02-01 | 1981-08-28 | Takeda Chem Ind Ltd | Polypeptide and its preparation |
| US4316895A (en) * | 1980-01-03 | 1982-02-23 | Kimball Charles D | Endorphins having placental or pancreatic origin |
| US4438104A (en) | 1980-01-03 | 1984-03-20 | Endorphin, Inc. | Endorphins having placental or pancreatic origin |
| US4350764A (en) * | 1980-03-10 | 1982-09-21 | The Regents Of The University Of California | Microbiological synthesis of beta endorphin |
| US4313937A (en) * | 1980-08-12 | 1982-02-02 | Tsutomu Oyama | Method for producing long-lasting analgesic effects of β-endorphin |
| GB2111505B (en) * | 1981-06-16 | 1984-09-26 | Charles D Kimball | Endorphins having placental or pancreatic origin |
| FR2857873B1 (fr) * | 2003-07-21 | 2006-02-24 | Courtage Et De Diffusion Codif | Procede et produit cosmetique destines a limiter la croissance des tissus adipeux |
-
1976
- 1976-03-17 US US05/667,747 patent/US4038222A/en not_active Expired - Lifetime
-
1977
- 1977-02-16 CH CH193477A patent/CH625785A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-03-06 AU AU23298/77A patent/AU514499B2/en not_active Expired
- 1977-03-09 MC MC771235A patent/MC1137A1/xx unknown
- 1977-03-15 PH PH19558A patent/PH13864A/en unknown
- 1977-03-15 NZ NZ183605A patent/NZ183605A/xx unknown
- 1977-03-15 IL IL51660A patent/IL51660A/xx unknown
- 1977-03-15 CA CA274,024A patent/CA1092602A/en not_active Expired
- 1977-03-15 FR FR7707621A patent/FR2348912A1/fr active Granted
- 1977-03-16 DK DK116177A patent/DK149203C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-03-16 JP JP2815177A patent/JPS52113958A/ja active Granted
- 1977-03-16 ZA ZA00771593A patent/ZA771593B/xx unknown
- 1977-03-16 LU LU76963A patent/LU76963A1/xx unknown
- 1977-03-16 NL NL7702849A patent/NL7702849A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-03-16 PT PT66311A patent/PT66311B/pt unknown
- 1977-03-16 AT AT178877A patent/AT355238B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-03-16 NO NO770941A patent/NO147105C/no unknown
- 1977-03-16 SE SE7703004A patent/SE436354B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-03-16 IE IE571/77A patent/IE44226B1/en unknown
- 1977-03-16 AR AR266874A patent/AR222778A1/es active
- 1977-03-16 GB GB11109/77A patent/GB1563654A/en not_active Expired
- 1977-03-16 ES ES456901A patent/ES456901A1/es not_active Expired
- 1977-03-16 FI FI770835A patent/FI63391C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-03-16 DE DE2711487A patent/DE2711487C2/de not_active Expired
- 1977-03-16 BE BE175818A patent/BE852510A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-03-17 GR GR53010A patent/GR63092B/el unknown
- 1977-08-08 US US05/822,772 patent/USRE29842E/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-11-25 AR AR270126A patent/AR222007A1/es active
-
1978
- 1978-03-01 ES ES467453A patent/ES467453A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI63391B (fi) | Analogifoerfarande foer framstaellning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet | |
| Marglin et al. | Chemical synthesis of peptides and proteins | |
| FI92325B (fi) | Menetelmä tymopentiinianalogien valmistamiseksi | |
| Han et al. | Studies on the Primary Structure of Bovine High-MolecularWeight Kininogen: Amino Acid Sequence of a Fragment (“Histidine-Rich Peptide”) Released by Plasma Kallikrein | |
| EP0561412A1 (en) | Parathyroid hormone derivatives | |
| Cody et al. | Cyclic melanotropins. 9. 7-D-Phenylalanine analogues of the active-site sequence | |
| JPH0684400B2 (ja) | 新規な生長ホルモン遊離ペプチド | |
| US4081434A (en) | Novel analogs of β-endorphin | |
| US4537716A (en) | Des-serine2 or des-glycine2 -leucine22 calcitonin | |
| EP0315687B1 (en) | (n-alpha-acyl, 8-glycine, des-19-leucine)-calcitonin | |
| US4414149A (en) | Glycine8 -D-arginine24 calcitonin | |
| Kopeyan et al. | Amino‐Acid Sequence of Toxin III of Naja haje | |
| Lai et al. | Primary structure of cholera toxin subunit A1: isolation, partial sequences and alignment of the BrCN fragments | |
| TZOUGRAKI et al. | SYNTHESIS OF HUMAN β‐ENDORPHIN IN SOLUTION USING BENZYL‐TYPE SIDE CHAIN PROTECTIVE GROUPS | |
| CA1248089A (en) | Analgesic peptide and process for the preparation thereof | |
| EP0478775B1 (en) | Peptide derivatives | |
| Li et al. | β-endorphin: Replacement of glutamic acid in position 8 by glutamine increases analgesic potency and opiate receptor-binding activity | |
| KR810000736B1 (ko) | 헨트리아콘타 펩타이드 유도체의 제조방법 | |
| US4639509A (en) | [16,19-Di-alanine] calcitonin | |
| US4824936A (en) | (19-Alanine) calcitonin | |
| Chandramouli et al. | Solid phase synthesis of thymosin β9 | |
| CA1108122A (en) | Protected coupled hentriakontapeptide intermediates | |
| EP0288058A2 (en) | Analogs of (1,7-di-alanine, des-19-leucine) calcitonine | |
| Martinelli et al. | Amino acid sequences of portions of the α and β chains of bovine fibrinogen | |
| US4469632A (en) | D-Arginine24 calcitonin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF |