FI57024C - Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av ammoniak i blodet - Google Patents
Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av ammoniak i blodet Download PDFInfo
- Publication number
- FI57024C FI57024C FI1705/74A FI170574A FI57024C FI 57024 C FI57024 C FI 57024C FI 1705/74 A FI1705/74 A FI 1705/74A FI 170574 A FI170574 A FI 170574A FI 57024 C FI57024 C FI 57024C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- buffer
- nadph
- coenzyme
- ketoglutarate
- adp
- Prior art date
Links
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 25
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 title claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 9
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 claims description 13
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims description 7
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004418 trolamine Drugs 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 2
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 claims 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 10
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 8
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 2-oxoglutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GJMPSRSMBJLKKB-UHFFFAOYSA-N 3-methylphenylacetic acid Chemical compound CC1=CC=CC(CC(O)=O)=C1 GJMPSRSMBJLKKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940117957 triethanolamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 206010052770 Coma states Diseases 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003918 blood extract Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
Description
R35r71 ΓβΊ ««KUULUTUSJULKAIfU
(11) UTLÄGGN1NGSSKRIFT 6 7024 •^S§ C (45) Γ*tentti myönnetty IS :35 1930
Patent ceddelit T /51) Kv.ik.vtncci.* G 01 N 33/16 G 01 N 31/14
SUOMI —FINLAND (21) PuenttiK«kemu»-P«enten*Mcnin| 1705/7U
(22) H*Jceml«p4ivi — Ant6knlnpdtg OU.06.7^ ^ ^ (23) AlkupUvl — GlMghetsdeg OU. 06.71* (41) Tulkit Julkis·k*l — Bllvlt offentllg 08.12.7^
Patentti- ja rekisterihän itua (44) Nihtivikslpmen j· kuuLjuiiuisun pvm. —
Patent· och registerstyrelsen Antöksn utk|d och uti.skrift*n pubikerad 31 · 01. »o (32)(33)(31) kyyditty etuoikeus-fBejIrd prioritet 07 · 06.73
Saksan Li it t ot as avait a-Förbun ds republiken Tyskland(DE) P 232917^-9 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Berlin/Munchen, DE; Sandhofer Strasse 112-132, 6800 Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Friedrich da Fonseca-Wollheim, Berlin, Saksan Liittotasavalta-Förbunds-republiken Tyskland(DE) (7M Berggren Oy Ab (5U) Menetelmä veren ammoniakin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi - Forfarande för kvantitativ bestämning av ammoniak i blodet
Esillä oleva keksintö koskee uutta menetelmää veren ammoniakin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi ja tähän soveltuvaa reagenssiyhdistel- mää.
Veren ammoniakkimääritys on laboratoriodiagnostiikan eräs tärkeä osa erikoisesti maksasairauksien kysymyksessä ollessa. Eniten tarvitaan tätä määritystä epäselvien koomatilojen differentiaalidiagnostiikassa ja tarkasteltaessa maksakohtauskooman kehittymistä. Tämän johdosta on kehitetty jo sarja menetelmiä tämän tarpeen tyydyttämiseksi.
Niinpä on tunnettua suorittaa määritys Berthelot-reaktion avulla käyttäen valkuaisvapaata veriuutetta tai määrittää ammoniakki entsymaattisesti trikloorietikkahappouutteessa. Näillä menetelmillä on haittana se, että ne sisältävät erittäin huomattavia virhemahdollisuuksia, jotka perustuvat ennen kaikkea siihen, että tarvitaan valkuaisaineen poistaminen voimakkaan hapon avulla, jolloin voi esiintyä ammoniakin uudelleenmuodostumista ja juuri muodostunut ammoniakki antaa väärät arvot. Mondzac ym. ovat kuvanneet aikakausjulkaisussa J. Lab. Clin. Med. 66, 526 (1965) menetelmää, joka voidaan toteuttaa ilman valkuaisaineen poistamista ja joka perustuu reaktioon glutamaattihydrogenaa- 2 57024 sin ja ketoglutaraatin kanssa NADH:n (nikotiiniamidiadeniini-dinukleo-tidin pelkistetty muoto) läsnäollessa pH-arvossa 7,4. Tällöin mitataan fotometrisestä ekstinktiomuuttuminen aaltopituudella 340 m^u. Johtuen NH^-muutoksen hitaudesta ja esiintyvistä ei-spesifisistä ekstinktiomuutoksista on tällöin kuitenkin optisen kokeen päätekoh-dan yksikäsitteinen toteaminen erittäin vaikeata ja sisältää huomattavia virhelähteitä. Tämän johdosta on valkuaisaineiden poistamista pidetty tähän asti entsymaattisessa veren ammoniakkimäärityksessä välttämättömänä (Manoukian ja Pawaz, Z. klin. Chem. u. klin. Biochem.
7, 32 (1969))·
Keksinnön tehtävänä on tämän johdosta aikaansaada nopea ja varmasti toteutettavissa oleva veren ammoniakkimääritys, joka voidaan toteuttaa vaivattomasti käyttäen plasmaa, josta valkuaista ei ole poistettu. Erikoisesti on aikaansaatava sellainen menetelmä, joka soveltuu käytettäväksi tavanomaisessa laboratoriotekniikassa ja joka voidaan myös toteuttaa käyttäen suuria näytemääriä.
Tämä tehtävä ratkaistaan keksinnön mukaisesti menetelmän avulla veren ammoniakin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi glutamaattidehydrogenaa-sin ja ketoglutaraatin avulla koentsyymin läsnäollessa pelkistetyssä tilassa, jolle on tunnusomaista se, että koentsyyminä käytetään NADPH:ta (nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidifosfaattia pelkistetyssä muodossa).
NADH:n käyttökelvottomuus johtuu siitä, että plasma sisältää useita entsyymejä ja substraatteja, jotka myös reagoivat NADH:n kanssa ja aiheuttavat tämän johdosta sivureaktioita, jotka vääristävät tuloksen. Oli odotettavissa, että NADPH:ta käytettäessä esiintyvät samat vaikeudet, koska tämän aineen muodostavat useiden plasmassa esiintyvien entsyymien luonnollinen koentsyymi. Tämän lisäksi on huomattava, että niiden tulosten perusteella, jotka E. Schmidt on esittänyt (Methoden der enzymatischen Analyse (H.U. Bergmeyer, Hrsgb.) Bd. 1, S. 607, 2. Auflg., Verlag Chemie, Weinheim (1970)), reagoi glutamaatti-dehydrogenaasi NADH:n kanssa paljon nopeammin niin, että ottaen huomioon tällöin jo tapahtuvan haitallisen hitaan reaktion ei NADPH tästäkään syystä näyttänyt käyttökelpoiselta. Yllättäen on kuitenkin osoittautunut, että määritys tapahtuu sopivissa reaktio-olosuhteissa NADPH:n läsnäollessa erittäin suurella nopeudella, ja toiselta puolen NADPH:n sivureaktiot ovat niin pieniä, että esiintyy ainoastaan minimaalisesti epäspesifisiä ekstinktiomuutoksia, joita käytännöllisesti 57024 3 katsoen ei tarvitse ottaa ollenkaan huomioon.
Niinpä mainitun tunnetun menetelmän mukaisesti NADH:ta käytettäessä on tarpeellista suorittaa 15-20 minuutin pituinen esihautominen. Tämänkään esihautomisajan päättymisen jälkeen eivät epäspesifiset sivureaktiot ole kuitenkaan päättyneet ja peittävät varsinaisen määritysreaktion lisättäessä glutamaattidehydrogenaasi 20 minuutin kuluttua määrittävään erään. Keksinnön mukaisessa menetelmässä sitävastoin jokainen esihautominen on tarpeeton ja stabiili loppuarvo on saavutettu jo 5 minuutin kuluttua. Tällöin on huomattava, että normaalissa plasmassa esiintyvät NH^-väkevyydet ovat niin alhaiset, että on lisättävä suhteellisen suuri määrä, noin 0,5 ml, tarkkaa määritystä varten riittävän ekstinktiomuutoksen aikaansaamiseksi optisessa kokeessa. Koska ei suoriteta minkäänlaista valkuaisaineen poistoa tai valkuaisaineen denaturoimista esiintyy siis erittäin suuri määrä entsyymejä ja substraatteja, joiden läsnäollessa on odotettavissa sivureaktio NADPH:n kanssa.
Erittäin edulliseksi on osoittautunut keksinnön mukaisen menetelmän toteuttaminen ADP:n (adenosiinidifosfaatin) läsnäollessa. On todettu, että tällöin aikaansaadaan glutamaattidehydrogenaasin stabiloituminen ja aktivoituminen, joka mahdollistaa määräyksen erittäin nopean suorittamisen.
Keksinnön mukainen menetelmä toteutetaan käyttäen neutraalista heikosti alkaliseen pH-arvoa, koska glutamaattidehydrogenaasin aktiivisuudella on tällöin edullisimmat arvot. Sopiva alue on välillä pH 7 ja 9,5. Edullisesti työskennellään voimakkaammin alkalisella alueella kuin mikä on tavanomaista tunnettuja menetelmiä käytettäessä, ja erittäin edullisesti välillä pH 8,5 ja 8,7. Puskurina tulevat tällöin kysymykseen esitetyllä alueella tehokkaat puskurit, kuten fosfaattipuskuri, tris-puskuri (tris(hydroksimetyyli)aminometaani) ja trietanoliamiinipuskuri.
Reaktioon osaaottavien aineiden väkevyys voi olla samalla alueella kuin tunnetuissa menetelmissä. α-ketoglutaraatin väkevyys reaktio-seoksessa on tarkoituksenmukaisesti välillä noin 5 ja 20 mM ja gluta-maattidehydrogenaasia lisätään tarkoituksenmukaisesti määrässä välillä 1 ja 20 U/ml reaktioseosta. Myös puskuriväkevyys voi vaihdella suhteellisen laajoissa rajoissa ja on edullisesti välillä noin 0,05 4 b 7 O 2 4 ja 0,25 M. Edullisessa toteuttamismuodossa, lisättäessä ADP:tä, lisätään viimemainittua ainetta tarkoituksenmukaisesti sellaisessa määrässä, että aikaansaatu väkevyys on välillä noin 0,1 ja 2 mM.
Keksinnön mukainen menetelmä voidaan, kuten jo mainittiin, toteuttaa plasmassa, so. erytrosyyteistä jo vapautetussa veressä. Menetelmän toteuttaminen tapahtuu siten, että α-ketoglutaraatti-pitoiseen puskuriliuokseen lisätään NADPH ja sopivassa tapauksessa myös ADP tämän jälkeen, siihen sekoitetaan plasma, mitataan ekstinktion alkuarvo, lisätään entsyymi ja 5-10 minuutin kuluttua määrätään ekstinktion muutos.
Keksinnön mukainen menetelmä ei ole ainoastaan yksinkertainen ja nopea toteuttaa vaan sillä on myös suuri tarkkuus. Niinpä suoritettiin vertailukokeita, joissa 29 plasmanäytteeseen lisättiin ammonium-kloridia 160,0 ^uM loppuväkevyyteen saakka. Määräyksessä saatiin keskiarvoksi 160,8 ^uM, mikä vastaa arvoa 100,5 %.
Keksinnön toisena kohteena on reagenssiyhdistelmä keksinnön mukaisen menetelmän toteuttamiseksi. Tällainen reagenssiyhdistelmä sisältää 1. α-ketoglutaraattia puskurissa, pH 7-9,5 2. Glutamaattidehydrogenaasia, ja 3. NADPH:ta toisistaan erillään ennen käyttöä sekoittamattomassa tilassa. Aineosat 1 ja 3 voivat olla myös seoksena, mutta sen kestävyys kylmässä on kuitenkin vain noin 3-1* viikkoa.
Keksinnön mukaisen reagenssiyhdistelmän muodostaa 1. 0,05-0,25 M trietanoliamiinipuskuria, pH 8-9 15-50 mM a-ketoglutaraattia 0,3-5 mM ADP:tä ja sopivassa tapauksessa 2-30 mM alkaliatsidia 2. 5-50 U glutamaattidehydrogenaasia, ja 3. 0,1-1 /Umoolia NADPH:ta edullisesti stabiloimisaineen tai stabi-loimisseoksen läsnäollessa.
5 57024
Sopivan stabiloimisaineen NADPH:ta varten keksinnön mukaisen reagens-sin puitteissa muodostaa pelkästään seerumialbumiini tai se yhdistelmänä natriumbikarbonaatin ja dekstraanin kanssa. Erittäin edullinen on tämän johdosta aineosa 3, jolla on edellä mainittu yhdistelmä ja jossa on 0,1-0,5 /Umoolia NADPH:ta, 10-50 mg seerumialbumiinia, 1-5 ^umoolia NaHC0^:a ja 5-60 mg dekstraania. Edellä mainittu keksinnön mukainen reagenssi soveltuu käytettäväksi esitetyissä määrissä yhteen määritykseen Se voidaan kuitenkin muodostaa useampikertaisesta määrästä useampien määrityksien suorittamista varten.
Keksinnön mukainen menetelmä ei sovellu ainoastaan ammoniakin suoraksi määrittämiseksi veressä tai plasmassa, vaan myös muiden ammoniakkia muodostavien aineiden, esim. urean määrittämiseen. Viimemainitussa tapauksessa lisätään reaktioseokseen vast, reagenssiin ainoastaan ureaasia tai käytetään glutamaattidehydrogenaasin ja ureaasin seosta.
Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen keksintöä.
Esimerkki 1 Käytetään reaktioseosta, joka sisältää 0,15 M trietanoliamiinihydrokloridia, pH 8,6 20 mM a-ketoglutaraattia
1,5 mM ADP
15 mM natriumatsidia 0,3 mM NADPH
Kahteen maljaan, joiden paksuus on 10 mm, lisätään:
Koe-erä Reagenssien nolla-arvoseos
Reaktioseosta, ml 1,5 1,5
Plasmaa, ml 0,5 H20, ml - 0,5
Sekoitetaan ja määrätään lähtöekstinktio E^ arvossa 334 nm. Sitten lisätään kumpaankin seokseen 20 /Ui glutamaattidehydrogenaasia. Ekstinktion alenemista seurataan sen päättymiseen saakka (noin 5 min) ja tämän jälkeen mitataan ekstinktio Ej.
6 b/024 Näyte-eristä ja reagenssien nolla-arvoeristä lasketaan ekstinktio-ero ΔΕ = E-j^ - E2· Korjattu ekstinktioero ^Ekorjattu = ÄEnäyte-erä AEreagenssien nolla-arvo, josta saadaan laskemalla: /“Mol "V1 = 4Ekorj * 1000 = 4Ekorj * 1 2^ 2 NADPH:sta = 6,0 cm /^umoolia, näytteen 4 ,04-kertainen laimennus määritysseoksessa; korjausarvo on 1).
Esimerkki 2
Reagenssiyhdistelmä yhtä määritystä varten 1. Astia, jossa on puskuri/substraatti-seos stabiloidussa vesiliuoksessa, joka sisältää 0,15 M trietanoliamiinihydrokloridia, pH 8,6 20 mM a-ketoglutaraattia
1,5 mM ADP
15 mM natriumatsidia 2. Astia, jossa on 0,3 /Umoolia kuivattua tai lyofilisoitua NADPHrta.
5 /Umoolia NaHC0^:a ja 30 mg albumiinia 3· 500 U/ml glutamaattidehydrogenaasia liuotettuna glyseriini/veteen 1:1, joka sisältää mM fosfaattipuskuria pH 7 ja 2 1 mM ADP.
Claims (5)
1. Förfarande för kvantitativ bestämning av blodammoniak med glutamatdehydrogenas och α-ketoglutarat i närvaro av koenzym i re- . | ducerat tillständ, kännetecknat av att som koenzym an-vändes NADPH.
1. Menetelmä veren ammoniakin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi glutamaattidehydrogenaasin ja α-ketoglutaraatin avulla koentsyymin läsnäollessa pelkistetyssä tilassa, tunnettu siitä, että koentsyyminä käytetään NADPH:ta.
2. Förfarande enligt patentkravet 1,kännetecknat av att man arbetar i närvaro av ADP.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että työskennellään ADP:n läsnäollessa.
3. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2, kännetecknat av att en buffert med pH 8,0 - 9,0, fördelaktigen pH 8,6 an-vändes.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että käytetään puskuria pH 8,0-9,0, edullisesti pH 8,6.
4. Förfarande enligt nägot av de föregäende patentkraven, kännetecknat av att man använder trisbuffert eller tri-etanolaminbuffert.
4. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään tris-puskuria tai trietanoli-amiinipuskuria.
5. Reagenssiyhdistelmä jonkin patenttivaatimuksen 1-¾ mukaisen menetelmän toteuttamiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää: a) 0,05~0,25 M trietanolipuskuria, pH 8-9, 15-50 mM a-ketoglu-taraattia sekä 0,3-5 mM ADP, ja sopivassa tapauksessa 2-30 mM alkali-atsidia, b) 5—50 U glutamaattidehydrogenaasia ja c) 0,1-0,5 /Umoolia NADPH, 10-50 mg seerumialbumiinia ja sopivassa tapauksessa 1-5 ^umoolia NaHCO^ ja 5-50 mg dekstraania, tai näiden moninkertaistetun määrän.
5. Reagenskombination för utförande av förfarandet enligt nägot
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2329174 | 1973-06-07 | ||
| DE2329174A DE2329174C2 (de) | 1973-06-07 | 1973-06-07 | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Blutammoniak |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI170574A FI170574A (fi) | 1974-12-08 |
| FI57024B FI57024B (fi) | 1980-01-31 |
| FI57024C true FI57024C (fi) | 1980-05-12 |
Family
ID=5883399
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI1705/74A FI57024C (fi) | 1973-06-07 | 1974-06-04 | Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av ammoniak i blodet |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3929581A (fi) |
| JP (1) | JPS5721995B2 (fi) |
| AR (1) | AR199957A1 (fi) |
| AT (1) | AT330367B (fi) |
| CA (1) | CA1016050A (fi) |
| CH (1) | CH600339A5 (fi) |
| DD (1) | DD112525A5 (fi) |
| DE (1) | DE2329174C2 (fi) |
| FI (1) | FI57024C (fi) |
| FR (1) | FR2232760B1 (fi) |
| GB (1) | GB1417538A (fi) |
| HU (1) | HU168366B (fi) |
| IT (1) | IT1017557B (fi) |
| NL (1) | NL179490C (fi) |
| SE (1) | SE417839B (fi) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL7603588A (nl) * | 1975-04-21 | 1976-10-25 | Hoffmann La Roche | Gestabiliseerde coenzymoplossing. |
| DE2612726C3 (de) * | 1976-03-25 | 1979-03-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierte Urease |
| CA1187388A (en) * | 1978-09-20 | 1985-05-21 | American Monitor Corporation | Stabilization of working reagent solutions containing nadh, nadph, and/or enzymes, and the use of such stabilized reagents in enzymes or substrate assays |
| JPS6041500A (ja) * | 1983-08-12 | 1985-03-05 | Yamasa Shoyu Co Ltd | アンモニアの定量法 |
| US4935346A (en) | 1986-08-13 | 1990-06-19 | Lifescan, Inc. | Minimum procedure system for the determination of analytes |
| US5141853A (en) * | 1988-07-22 | 1992-08-25 | Abbott Laboratories | Determination of ammonia levels in a sample |
| ATE135746T1 (de) * | 1989-08-28 | 1996-04-15 | Hoffmann La Roche | Enzymatisches verfahren zur bestimmung der analyt-konzentration |
| JP3034969B2 (ja) * | 1991-03-01 | 2000-04-17 | 旭化成工業株式会社 | アンモニア、α−アミノ酸類またはα−ケト酸の高感度定量法および高感度定量用組成物 |
| DE4231266A1 (de) * | 1992-09-18 | 1994-03-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Dextran modifizierte Glutamat-Dehydrogenase |
| US6458326B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-10-01 | Home Diagnostics, Inc. | Protective test strip platform |
| US6525330B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-02-25 | Home Diagnostics, Inc. | Method of strip insertion detection |
| US6541266B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-04-01 | Home Diagnostics, Inc. | Method for determining concentration of an analyte in a test strip |
| US6562625B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-05-13 | Home Diagnostics, Inc. | Distinguishing test types through spectral analysis |
| JP5218949B2 (ja) | 2006-10-18 | 2013-06-26 | 国立大学法人名古屋大学 | Ｄ−セリンデヒドラターゼ及びその利用 |
| WO2016083399A1 (en) * | 2014-11-24 | 2016-06-02 | Forschungsgesellschaft Für Arbeitsphysiologie Und Arbeitsschutz E. V. | Alpha-ketoglutarate in combination with glutamate dehydrogenase for treating hyperammonemia |
| CN104374906B (zh) * | 2014-11-28 | 2016-02-17 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种血清氨检测试剂 |
| WO2020157178A1 (en) * | 2019-01-31 | 2020-08-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Stabilization of nadph or nadh in ammonia detection assays |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3527674A (en) * | 1966-06-30 | 1970-09-08 | Calbiochem | Reagent material and method for urea assay |
-
1973
- 1973-06-07 DE DE2329174A patent/DE2329174C2/de not_active Expired
-
1974
- 1974-03-22 AT AT239274A patent/AT330367B/de not_active IP Right Cessation
- 1974-04-18 IT IT21615/74A patent/IT1017557B/it active
- 1974-04-29 AR AR253512A patent/AR199957A1/es active
- 1974-05-01 NL NLAANVRAGE7405809,A patent/NL179490C/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-05-17 US US471064A patent/US3929581A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-05-27 CA CA200,847A patent/CA1016050A/en not_active Expired
- 1974-06-04 FI FI1705/74A patent/FI57024C/fi active
- 1974-06-04 JP JP6331974A patent/JPS5721995B2/ja not_active Expired
- 1974-06-05 GB GB2487674A patent/GB1417538A/en not_active Expired
- 1974-06-06 SE SE7407447A patent/SE417839B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-06-06 HU HUBO1502A patent/HU168366B/hu unknown
- 1974-06-07 FR FR7419841A patent/FR2232760B1/fr not_active Expired
- 1974-06-07 DD DD179020A patent/DD112525A5/xx unknown
- 1974-06-07 CH CH785074A patent/CH600339A5/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2232760A1 (fi) | 1975-01-03 |
| DD112525A5 (fi) | 1975-04-12 |
| IT1017557B (it) | 1977-08-10 |
| ATA239274A (de) | 1975-09-15 |
| AT330367B (de) | 1976-06-25 |
| DE2329174C2 (de) | 1975-07-24 |
| DE2329174B1 (de) | 1974-11-28 |
| CA1016050A (en) | 1977-08-23 |
| HU168366B (fi) | 1976-04-28 |
| NL179490C (nl) | 1986-09-16 |
| US3929581A (en) | 1975-12-30 |
| CH600339A5 (fi) | 1978-06-15 |
| JPS5023699A (fi) | 1975-03-13 |
| AR199957A1 (es) | 1974-10-08 |
| NL7405809A (fi) | 1974-12-10 |
| FI57024B (fi) | 1980-01-31 |
| FR2232760B1 (fi) | 1978-01-13 |
| SE7407447L (fi) | 1974-12-08 |
| JPS5721995B2 (fi) | 1982-05-11 |
| FI170574A (fi) | 1974-12-08 |
| GB1417538A (en) | 1975-12-10 |
| NL179490B (nl) | 1986-04-16 |
| SE417839B (sv) | 1981-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI57024C (fi) | Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av ammoniak i blodet | |
| Takahashi et al. | Carnitine determination by an enzymatic cycling method with carnitine dehydrogenase | |
| CA1125151A (en) | Triglycerides assay and reagents therefor | |
| Guynn et al. | Enzymic determination of inorganic phosphate in the presence of creatine phosphate | |
| FI70727B (fi) | Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat | |
| Wakil et al. | Studies on the mechanism of fatty acid synthesis VI. Spectrophotometric assay and stoichiometry of fatty acid synthesis | |
| FI57782C (fi) | Foerfarande och reagens foer enzymkinetisk koncentrationsbestaemning hos ett substrat | |
| EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| FI58160B (fi) | Enzymatiskt analysfoerfarande | |
| Buttery et al. | Enzymic assays for ammonia and L-glutamine in tissue extracts | |
| CN111944872A (zh) | 测定肌酐含量的试剂组合、试剂或试剂盒 | |
| Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
| Fossati et al. | A step forward in enzymatic measurement of creatinine | |
| Colin-Neiger et al. | Assessment of the Mulder and Van Doorn kinetic procedure and rapid centrifugal analysis of UDP-glucuronosyltransferase activities | |
| US5962248A (en) | Quantitative determination method for chloride ions | |
| RU2184778C2 (ru) | Система восстановления конфермента, набор для ферментативного определения концентрации анализируемого вещества и ферментативный способ определения концентрации анализируемого вещества | |
| US3994783A (en) | Differential assay of creatine phosphokinase isoenzymes | |
| JPH01108997A (ja) | 血液又は血液から導出した試料中の血清のフルクトスアミン含量を特異的に測定する方法及び試薬、及び非特異的還元作用を有するか、又は／及び溷濁を惹起する試料成分を除去する方法 | |
| Bruns et al. | Low apparent creatine kinase activity and prolonged lag phases in serum of patients with metastatic disease: elimination by treatment of sera with sulfhydryl agents. | |
| US3985621A (en) | Stopping agents for enzyme reactions of dehydrogenase systems | |
| Keppler et al. | Enzymatic analysis of guanine nucleotides in tissues and cells | |
| EP0019875B1 (en) | Method for assaying fatty acids | |
| JP5633669B2 (ja) | Ａｄｐの測定方法およびａｄｐ測定用キット | |
| Näslund et al. | Spectrophotometric assay of GTPase and ATPase activities related to protein synthesis | |
| JP2980811B2 (ja) | アンモニウムイオンの定量方法 |