FI105453B - Menetelmä rokotteen tuottamiseksi HIV-retrovirusinfektiota vastaan - Google Patents

Description

5 105453

Menetelmä rokotteen tuottamiseksi HIV-retrovirusinfektiota vastaan Förfarande för producering av ett vaccin mot en HIV-retrovirusinfektion

Keksinnön ala 10 Tämän keksintö liittyy immunologiaan, erityisesti menetelmiin virusten ja/tai virusten infektoimien solujen, erityisesti virusten infektoimien CD4-solujen, inaktivoimiseksi ja/tai heikentämiseksi käyttämällä fotofereesiä ja käyttämällä mainittuja inaktivoituja ja/tai heikennettyjä viruksia ja/tai virusten infektoimia soluja immuunireaktion aikaansaamiseksi. Keksintö liittyy myös menetelmiin 15 potilaiden hoitamiseksi, jotka ovat viruksen, erityisesti HIV-viruksen, infektoimia ja joilla on epänormaalin......alhainen valkoisten verisolujen määrä, käyttämällä fotofereesiä sekä antamalla fotoaktiivinen yhdiste, kuten 8-metoksipsoraIeeni. On kuvattu myös yhdisteitä käytettäviksi lääkkeiden valmistamisessa tällaisten virusinfektioiden terapeuttista hoitoa varten. Keksintö liittyy myös rokotteisiin 20 viruksia, erityisesti HIV-retroviruksia, vastaan ja keksinnön kohteena ovat menetelmät mainittujen rokotteiden tuottamiseksi.

I «

Keksinnön taustaa . ~ - · —=· - • · · I I · • · -··-*' ---------- • · 25 On olemassa monia heikentäviä tarttuvia tauteja, jotka ovat virusinfektioiden ♦ · · ------------ ’·.* · aiheuttamia. On myös olemassa monia erityyppisiä viruksia, mukaanlukien DNA- virukset ja RNA-virukset._________ • · , · · — --------- 9 · ------------- * * * ------------- · • · · » · ----------- ’··' Retrovirukset muodostavat RNA-virusten alaryhmän, joiden on monistuakseen « · i.’ · 30 ensin käytettävä genominsa RNA:n käänteistranskriptiota DNA ihan ("transkrip- « I « tio" kuvaa tavanomaisesti RNAin synteesiä DNAista). Kun virusgenomi on DNAin muodossa, se sisällytetään isäntäsolugenomiin ja sen annetaan käyttää • · täysin hyväksi isäntäsolun transkriptio/kääntökoneistoa monistumista varten. Kun 105453 2 virus on sisällytetty isäntäsolun DNA:hän, se voi säilyä hengissä niin kauan kuin solu elää.

Tiettyjen retrovirusten tiedetään aiheuttavan vähenemistä infektoituneen potilaan 5 valkoisten verisolujen määrässä. Tämä retrovirusten alaryhmä, jotka vähentävät valkoisten verisolujen määrää, tunnetaan ihmisen immuunikatoviruksina (HIV).

HIV-virusten tiettyjä lajeja on eristetty potilaista, joilla on hankittu immuunika-tosyndrooma (AIDS), ja niille on annettu nimitykset HIV 1 ja HIV 2, joihin 10 viitataan joskus yhteisesti nimityksillä "HTLV III", "LAV" tai yksinkertaisesti "HIV”.Nämä retrovirukset infektoivat soluja, jotka ilmentävät CD4-markkerin, kuten ihmisen T-lymfosyytit ja monosyytit. Nämä solut sisältyvät immuunijärjestelmän toimintaan. Tämä infektio johtaa puolestaan CD4:n T-solupopulaation progressiiviseen katoon ja häiritsee muiden CD4-solujen, kuten monosyyttien, 15 toimintaa ja alentaa siten potilaan kykyä taistella muita infektioita vastaan ja saattaa potilaan alttiiksi opportunistisille infektioille, jotka osoittautuvat usein kohtalokkaiksi.

AIDS-infektiosta on olemassa ainakin kolme kliinistä ilmenemismuotoa. Ensim- : : : 20 mäisessä "kantajavailleessa" infektion ainoa osoitus on joko HIV-vasta-aineiden *!'" läsnäolo verivirrassa tai viruksen kyky viljelöityä. Seuraava vaihe tunnetaan • · < • "AIDSiin liittyvänä oireyhtymänä" (ARC) ja siihen liittyvät fyysiset oireet voivat • · · ! '.· käsittää itsepintaisen yleisen lymfadenopatian, yleisen heikkouden, korottuneen ’* ' lämpötilan ja kroonisia infektioita. Tämä tila etenee tavallisesti lopulliseen, • · · # ♦ · ’·* 25 kohtalokkaaseen AIDS-tilaan, kun potilas menettää kyvyn taistella infektiota vastaan.

« * · · • · * • · *·.' Erityisen vaikea ongelma, joka liittyy HIV-retrovirusinfektiota vastaan taistelemi- • · seen, on se, että RNA-DNA -käänteistranskriptioprosessi on täynnä toistunutta • · · • '··>' 30 mutaatiota, jolloin ihmisen immuunijärjestelmän on erittäin vaikea tunnistaa j infektoituneita soluja ja hyökätä niitä vastaan itse viruksen kanssa.

• * * % · · i 3 105453

Keksinnön tavoitteena on saada aikaan rokote virusinfektioita vastaan erityisesti silloin, kun infektio on retroviruksen, kuten HIV-retroviruksen, aiheuttama.

Keksinnön lisätavoitteena on saada aikaan menetelmä rokotteen valmistamiseksi 5 potilaiden hoitamiseksi, jotka ovat HIV-retroviruksen infektoimia ja joilla on epänormaalin alhainen valkoisten verisolujen määrä. Keksinnön muut tavoitteet selviävät keksinnön seuraavaksi esitettävästä kuvauksesta.

Yleinen kuvaus keksinnöstä 10

On löydetty menetelmä potilaiden hoitamiseksi, jotka ovat viruksen, erityisesti HIV-retroviruksen, infektoimia, käyttämällä fotoaktiivista yhdistettä, joka sitoutuu viruksen infektoiman solun tapauksessa solukalvoon (esim. sitoutumalla solukalvossa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiinihappokappaleeseen) ja/tai solun 15 tumassa tai solun solulimassa olevaan nukleiinihappoon, tai joka yhdiste vapaan viruksen tai soluun liittyvän viruksen tapauksessa sitoutuu viruksen pintaan (esim. viruksen pinnassa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiinihappokappaleeseen) ja/tai nukleiinihappoon (esim. DNA:han tai RNA:han), joka sisältyy virukseen, aktivoitaessa altistamalla sähkömagneettiselle säteilylle, jolla on ennaltamäärätty spektri :Y: 20 kuten ultraviolettivalolle, viruksen inaktivoimiseksi ja/tai heikentämiseksi ·:·" mahdollistaen näin käsiteltyjen virusten ja/tai viruksen infektoimien solujen t · · • viemisen potilaan immuunijärjestelmään, jotta voidaan saada aikaan immuuni- • · · • reaktio virusinfektiolle. Psoraleeniyhdisteet ovat erityisen suositeltavia tähän tarkoitukseen, erityisesti yhdiste 8-metoksipsoraleeni —Jossa tapauksessa UVA- • · · ·.* * 25 säteily on suositeltava mainitun yhdisteen aktivoimiseksi.

, »·· • · _________ *···’ Tässä on erityisenä piirteenä se, että kuvattuja hoitomenetelmiä käytetään t · . ’··· potilaisiin, joilla kiertävien lymfosyyttien eli valkoisten verisolujen määrä on • « epänormaalin alhainen.

• « · 30 » : On havaittu, että näitä hoitomenetelmiä voidaan käyttää immuunijärjestelmän • · toiminnan uudelleenkäynnistämiseen tällaisissa potilaissa. Tämä on erittäin 105453 4 tärkeätä ARC/AIDS-potilaiden hoidossa, joilla on HIV-tartunnan (jota on tätä ennen ollut erittäin vaikea hoitaa) lisäksi lamautunut immuunijärjestelmä.

Tällaiset potilaat eivät yleensä kestä lymfosyyttien eli valkoisten verisolujen määrän vähenemistä tulematta alttiiksi opportunistisille infektioille.

5

On havaittu, että nämä hoitomenetelmät ovat hyödyllisiä hallitsemaan HIV- ja muita retrovirusinfektioita potilaissa, joilla on epänormaalin alhainen valkoisten verisolujen taso, aiheuttamatta potilaan immuunijärjestelmän vahingollista heikkenemistä. Menetelmiä voidaan siis käyttää tilojen, kuten ARC/AIDS:in, 10 hoidossa altistamatta potilasta opportunistisen infektion vaaralle. Näitä hoitomenetelmiä voidaan käyttää myös tällaisissa potilaissa heidän immuunijärjestel-miensä toiminnan parantamiseen. HIV-retrovirukset voivat aiheuttaa myös muita sairauksia kuin AIDS:n, ja uskotaan, että nämä menetelmät olisivat hyödyllisiä myös tällaisten muiden sairauksien hoidossa.

15

Fotoaktiivinen yhdiste, kuten 8-metoksipsoraIeeni, annetaan potilaan vereen tai osaan siitä "in vitro" tai "in vivo" käyttämällä tavanomaisia antoreittejä. Osaa potilaan verestä hoidetaan tämän jälkeen (suositeltavasti ruumiin ulkoisesti) käyttämällä fotofereesiä, jossa veri saatetaan sähkömagneettisen säteilyn alaiseksi :Y: 20 aaltopituudella, joka soveltuu fotoaktiivisen yhdisteen, kuten ultraviolettivalon, ·:*” suositeltavasti pitkäaaltopituuksisen ultraviolettivalon aaltopituudella 320-400nm, «· * : Y aktivoimiseen, jota kutsutaan yleisesti UVA-valoksi. Hoidettu veri tai sen osa «i · • ',· palautetaan potilaaseen (ruumiin ulkoisen fotofereesin yhteydessä) tai se jää potilaaseen ("in vivo"-fotofereesin jälkeen).

M* v : 25

Keksinnön mukaisesti saadaan aikaan rokotteita viruksia vastaan ja menetelmiä *«· J

• · .

'···' niiden valmistamiseksi. Fotoaktiivinen yhdiste (kuten tässä yhteydessä on t i kuvattu) annetaan luovuttajan vereen tai osaan siitä, joka on viruksen, kuten • · HIV-retroviruksen, tartuttama tai joka kärsii AIDS:ista tai AIDS:iin liittyvästä • * · ·...* 30 oireyhtymästä. Keksinnön mukaisesti ainakin osa luovuttajan verestä käsitellään « : 'γ tämän jälkeen käyttämällä fotofereesiä, kuten yllä on kuvattu. Käsiteltyä verta tai • · ··/·: osaa siitä (esim. käsiteltyä vapaata eristettyä virusta) voidaan käyttää rokotteena.

i 5 105453 HIV-virusta hoidettaessa on suositeltavaa käyttää käsiteltyjä viruksen infektoimia soluja yhdessä käsitellyn viruksen kanssa toivotun immuunireaktion aikaansaamiseksi.

5 Käsitelty veri prosessoidaan valinnaisesti tavanomaisilla tekniikoilla, jotta eretrosyytit voidaan olennaisesti poistaa. Saatua prosessoitua fraktiota käytetään tämän jälkeen rokotteena, joka annetaan potilaalle.

Keksintöön liittyvät myös lääkkeet virusinfektioiden terapeuttista hoitoa varten 10 potilaissa, joilla on epänormaalin alhainen valkoisten verisolujen määrä, ja HIV-infektioiden, erityisesti HIV 1 -infektion tai HIV 2 -infektion, terapeuttista hoitoa varten, sekä potilaan terapeuttista hoitoa varten, joka on AIDS-kantaja tai jolla on AIDS tai AIDS:iin liittyvä oireyhtymä.

15 Piirustusten kuvaus

Kuvio 1 on lohkokaavio fotofereesilaitteesta, jota voidaan käyttää keksinnön mukaisten menetelmien toteuttamiseksi; : : : 20 Kuvio 2 on kaavio muutoksista esimerkin 2 potilaan n:o 3 CD4-soluissa sekä ':' ’: GP24- ja GP120-vasta-ainetasoissa; i i r • * ^ ^.....

• · • · • « · i V Kuvio 3 on kaavio muutoksista esimerkissä 2 hoidetun viiden potilaan GP24- * * vasta-ainetasoissa; • · · : 25

Kuvio 4 on kaavio muutoksista esimerkissä 2 hoidetun viiden potilaan GP120- - · · *···' vasta-ainetasoissa; «M ’ • · • ·

IM

f • « I · « - - *. *: Kuvio 5 on kaavio muutoksista esimerkissä 2 hoidetun viiden potilaan CD4-autta- • · · • * - · ’···* 30 jasoluprosenteissa.

• · I

♦ · · • · • · • · · I M • · , 105453 6

Yksityiskohtainen kuvaus keksinnöstä

Keksintö kohdistuu menetelmään rokotteen tuottamiseksi HIV-retrovirusinfektiota vastaan, jonka rokotteen sisältämät käsitellyt virukset ja/tai virusten 5 infektoimat solut voivat saada aikaan immuunireaktion virusinfektiolle potilaan immuunijärjestelmässä, ja jolle menetelmälle on tunnusomaista, että se käsittää seuraavat vaiheet: a. lisätään tiettyyn määrään infektoituneen luovuttajan verta fotoaktiivista 10 yhdistettä, joka viruksen infektoiman solun tapauksessa sitoutuu solukalvoon (esim. sitoutumalla solukalvossa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiinihappokappa-leeseen) ja/tai solun tumassa tai solun solulimassa olevaan nukleiinihappoon, tai joka yhdiste vapaan viruksen tai soluun liittyvän viruksen tapauksessa sitoutuu viruksen pintaan (esim. viruksen pinnassa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiini-15 happokappaleeseen) ja/tai nukleiinihappoon (esim. DNAihan tai RNArhan), joka sisältyy virukseen, aktivoitaessa altistamalla sähkömagneettiselle säteilylle, jolla on ennaltamäärätty spektri, viruksen inaktivoimiseksi ja/tai heikentämiseksi; b. käsitellään tämän jälkeen se osa potilaan verestä, johon fotoaktiivinen yhdiste :Yi 20 on lisätty, jossa mainitussa käsittelyssä ainakin fraktio mainitusta verestä saate- t '!": taan fotofereesin alaiseksi käyttämällä mainittua sähkömagneettista säteilyä, jota « « i • Y mainittua fotoaktiivista yhdistettä ja mainittua sähkömagneettista säteilyä n · • *.'· annostellaan määrinä, jotka ovat farmaseuttisesti tehokkaita siten, että ainakin osa HIY-retroviruksesta, jota on läsnä käsitellyssä fraktiossa, voidaan heikentää

III

• · · ·.* * 25 ja/tai inaktivoida; ja • # · i *···* c. tämän jälkeen valmistetaan fraktiosta rokote tavanomaisin keinoin.

• · • * H « • <

Vaikka ei ole tarkoitettu, että tämän keksinnön laajuus olisi rajoitettu mihinkään i « · I · '<··' 30 tiettyyn käyttöteoriaan, uskotaan, että virusinfektioita, erityisesti niitä, joita i 't' potilaan normaali immunologinen reaktio ei kontrolloi, voidaan hoitaa käyttä- • · mällä fotofereesihoitoa. Keksijät uskovat, että fotofereesihoito ei ainoastaan i 7 105453 hoida virusinfektiota, vaan he uskovat, että se (i) palauttaa hoidetun potilaan immuunijärjestelmän (jota virusinfektio on heikentänyt) kyvyn taistella muita infektioita vastaan, mukaanlukien ei-virusperäiset infektiot, ja (ii) palauttaa immuunijärjestelmän anamnestisen reaktion aikaisemmille infektioille.

5

Fotofereesihoito on erityisen hyödyllinen hoidettaessa usein mutatoivia viraalisia infektioita, kuten retroviruksia, esim. HIV-retroviruksia. Fotofereesimenetelmien mukaisesti voidaan käyttää käsiteltyjä infektoituneita soluja sekä kuollutta ja/tai heikennettyä virusta, peptidejä, itse viruksen synnynnäisiä alayksiköitä (jotka 10 vapautuvat solun hajotessa ja/tai leviävät vereen) ja/tai patogeenisiä ei-tarttuvia viruksia.

Viraalisen antigeenin mutaatio ei suojaa sitä heikentymiseltä/inaktivoitumiselta fotofereesin ja immuunivasteen myöhemmän kehittymisen aikana viraalisen 15 antigeenin mutaatiomuodoille. Esitetyt hoitomenetelmät saavat täten aikaan dynaamisen autogeenisen rokotteen virusinfektioita vastaan.

Menetelmien on havaittu olevan hyödyllisiä potilaiden hoidossa, joilla on virusinfektio ja epänormaalin alhainen valkoisten verisolujen määrä, ja ne ovat :V: 20 erityisen hyödyllisiä HIV-retrovirusinfektioiden hoidossa. Menetelmät ovat myös f _ _ _ erityisen hyödyllisiä potilaiden hoidossa, jotka ovat AIDS-kantajia ja joilla on AIDS tai AIDS:iin liittyvä oireyhtymä.

M · • I · • · • *

Fotoaktiivinen yhdiste annetaan ensin potilaan vereen, jolla on virus. Fotoaktiivi- tn 9 * · ‘ 25 nen yhdiste voidaan antaa in vivo (eli suun kautta tai laskimonsisäisesti) tai in vitro osaan potilaan verestä, joka on poistettu potilaasta käyttämällä ta- . »**'· *···’ vanomaisia verenottotekniikoita.

• · · • · ----- • » 4 9 · 9 *

Vapaa virus eristetään infektoituneista soluista vaihtoehtoisesti käyttämällä ta- 9 9 9 ------- 9 · _ 30 vanomaisia virukseneristämismenetelmiä, jotka ovat alalla tunnettuja. Fotoak- I ---------- ί’ν tiivinen yhdiste voidaan antaa infektoituneisiin soluihin ennen viruksen eristämis- f 9 *./·· tä tai vapaaseen eristettyyn viirukseen. Jos hoidetaan HIV-infektiota, allakuva- 8 105453 tuissa menetelmissä on kuitenkin tällä hetkellä suositeltavaa käyttää sekä käsiteltyä virusta että käsitellyn viruksen infektoimia soluja.

Tämän keksinnön mukaisesti valitun fotoaktiivisen yhdisteen tulisi edullisesti olla 5 sellainen, joka sitoutuu viruksen infektoiman solun tapauksessa solun kalvoon (esim. sitoutumalla solun kalvolla olevaan reseptoriin ja/tai nukleiinihappokap-paleeseen) ja/tai solun tumassa tai solun solulimassa olevaan nukleiinihappoon, tai joka sitoutuu vapaan viruksen tai soluun liittyvän viruksen tapauksessa viruksen pintaan (esim. reseptoriin ja/tai viruksen pinnalla olevaan nukleiinihap-10 pokappaleeseen) ja/tai nukleiinihappoon (esim. DNA:han tai RNA:han), joka sisältyy virukseen, aktivoitaessa altistamalla sähkömagneettiselle säteilylle, jolla on ennaltamäärätty spektri kuten ultraviolettivalolle, viruksen inaktivoimiseksi ja/tai heikentämiseksi ja mahdollistaen näin käsiteltyjen virusten ja/tai viruksen infektoimien solujen viemisen potilaan immuunijärjestelmään. Psoraleeniyhdis-15 teet ovat erityisen suositeltavia tätä tarkoitusta varten, erityisesti yhdiste 8-metoksipsoraleeni, jossa tapauksessa UVA-säteily on suositeltava mainitun yhdisteen aktivoimiseksi.

Potilaan veren osaa tai vapaata eristettyä virusta, johon fotoaktiivinen yhdiste on : 20 annosteltu, käsitellään saattamalla veren osa tai vapaa eristetty virus forofereesin alaiseksi käyttämällä mainittua sähkömagneettista säteilyä, esim. ultraviolettiva- « « « • Y* loa. Fotofereesivaihe toteutetaan edullisesti in vitro käyttämällä kehon ulkoista • · · • *.· fotofereesilaitetta.

• ♦ « · · *.* * 25 Tämä fotofereesivaihe voidaan myös suorittaa in vivo.

**· • ·

Nyt suositeltavaa kehon ulkoista fotofereesilaitetta, jota käytetään keksinnön • · *··,** mukaisissa menetelmissä, valmistaa tällä hetkellä Therakos, Inc., Westchester, • · \''i Pennsylvania nimellä UVAR. Kuvaus Therakos’in UVAR-fotofereesilaitteesta « · « *·.·' 30 löytyyUS-patentista n:o 4,683,889joka on myönnetty R.L. Edelson’ille 14.8.1987, jonka sisältöön viitataan kokonaisuudessaan tässä yhteydessä.

• · • V · • · · • · 9 105453

Kuten kuviossa 1 on kaaviomaisesti havainnollistettu, laite sisältää pumpun 10 veren poistamiseksi potilaasta luovuttajaneulan välityksellä, joka on sijoitettu potilaan sopivaan suoneen; säteilytyskammion 20; säteilytyslähteen 30, joka on lähellä säteilytyskammiota, ja suositeltavasti jatkuvatyyppisen sentrifugin 40.Lait-5 teen eri osat, kuten putkiston keruupussit verta ja vastaavaa varten, jotka tulevat kosketukseen potilaan veren tai sen osan kanssa, ovat suositeltavasti vaihdettavia siten, että ne voidaan hävittää kunkin käyttökerran jälkeen, jotta voidaan estää mahdollisten veren välityksellä tarttuvien infektioiden siirtyminen potilaalta toisille potilaille, joita hoidetaan myöhemmin laitteella.

10

Veren tai vapaan eristetyn viruksen altistaminen ultraviolettivalolle fotofe-reesilaitteessa on henkilöiden hallittavissa, joilla on alalla tavanomaista ammattitaitoa.

15 Kun fotofereesivaihe suoritetaan in vitro, ainakin osa käsitellystä verestä tai käsitelty vapaa eristetty virus palautetaan potilaaseen fotofereesikäsittelyn jälkeen. Ylläkuvattua hoitomenetelmää toistetaan suositeltavasti aikavälillä noin yksi viikko - joka neljäs viikko. HIV-infektiota hoidettaessa tässä yhteydessä kuvattuja hoitomenetelmiä annetaan kahtena peräkkäisenä päivänä ja toistetaan 20 suunnilleen kerran kuussa (ts. potilas saa hoitoa suositeltavasti kahdesti kuussa).

• V Tässä yhteydessä kuvatun mukaisesti ne henkilöt, jotka ovat alan asiantuntijoita, »f · ’.· pystyvät säätämään hoitoparametrit, eli fotoaktiivisen yhdisteen jasähkömagneet- tisen säteilyn annoksen, hoidon jaksoittaisuuden (ts. kuukausittain, viikoittain, M» • · · .* * 25 jne.) ja kunakin ajanjaksona annettavien hoitokertojen lukumäärän (esim.

kahdesti kuukaudessa kahtena peräkkäisenä päivänä) riippuen potilaan tilasta ja « » *···’ potilaan reaktiosta hoidolle.

• · • · • · • ·

Suositeltavia fotoaktiivisia yhdisteitä, joita käytetään tämän keksinnön mukaisesti, « I I ····-------- 30 ovat psoraleeneina (tai fiirökumariineina) tunnetut yhdisteet, joita on kuvattu • f · ....... .....

: ’ · US-patentissa n:o 4,321,919 jonka kuvaukseen viitataan kokonaisuudessaan tässä yhteydessä.

105453 10

Suositeltavia fotoaktiivisia yhdisteitä, joita käytetään tämän keksinnön mukaisesti, ovat esimerkiksi seuraavat: psoraleeni; 5 8-metoksipsoraleeni; 4,5’, 8-trimetyy lipsoraleeni; 4- metoksipsoraleeni; 5- metoksipsoraleeni; 4,4-dimetyylipsoraleeni; 10 4-5’-dimetyylipsoraleeni; ja 4 ’, 8-metoksipsoraleeni.

Erityisesti suositeltavin fotoaktiivinen yhdiste, jota käytetään keksinnön mukaisesti, on 8-metoksipsoraleeni.

15

Henkilöt, joilla on tavanomaiset taidot alalla, pystyvät määrittämään efektiivisen annoksen vapaan eristetyn viruksen in vitro -virusinaktivointia varten.

Fotoaktiivinen yhdiste, joka annetaan potilaan vereen in vivo, annetaan suositel-:': (: 20 tavasti suun kautta, mutta se voidaan antaa myös laskimonsisäisesti ja/tai muiden tavanomaisten antoreittien kautta.

»tr • • · · i *.* Fotoaktiivisen yhdisteen suositeltava annos on alueella noin 0,3-noin 0,7mg/kg '** * ruumiin painosta, vaikka suurempia tai pienempiä annoksia voidaan käyttää. Kun • " · · *·* * 25 fotoaktiivinen yhdiste annetaan in vitro ainoastaan osaan potilaan verestä tai sen fraktioon, alan asiantuntijat pystyvät laskemaan annoksen, joka vastaa mainittua • · aluetta, joka perustuu käsitellyn veren tai sen fraktion tilavuuteen.

• · • · M»

Kun fotoaktiivinen yhdiste annetaan suun kautta, se tulisi antaa ainakin noin yksi • « « *··* 30 tunti ennen fotofereesihoitoa, eikä enempää kuin noin kolme tuntia ennen : fotofereesihoitoa. Antamisen ajoitusta voidaan säätää tarvittaessa ylös- ja • * ·/·· alaspäin riippuen fotoaktiivisen yhdisteen biosaatavuudesta, sen odotetusta i 11 105453 puoliintumisajasta, jne. Jos se annetaan laskimonsisäisesti, ajat olisivat yleensä lyhyempiä.

Hoitomenetelmissä fotofereesihoito toteutetaan suositeltavasti käyttämällä 5 pitkäaaltopituuksista ultraviolettivaloa (UVA) aaltopituudella 320-400 nm.

Altistus ultraviolettivalolle fotofereesihoidon aikana on noin 3-4 tuntia, vaikka lyhyempiä tai pidempiä hoitoaikoja voidaan haluttaessa käyttää.

Sähkömagneettisen säteilyn spektristä riippumatta viruksen infektoimien solujen 10 ja/tai viruksen alttiina olon sille, joka tapahtuu fotoaktiivisen yhdisteen antamisen jälkeen, tulisi olla voimakas ja pitkäaikainen, jotta virus voidaan inaktivoida ja/tai heikentää tehokkaasti. Alan asiantuntijat voivat valita tämän kuvauksen kannalta sopivan aaltopituuden fotofereesille sekä altistuksen riippuen käytettävästä fotoaktiivisesta yhdisteestä ja hoito-olosuhteista (esim. altistus in vivo tai in 15 vitro).

Kun fotoaktiivinen yhdiste on 8-metoksipsoraleeni, on suositeltavaa käyttää keksinnön mukaisesti altistusta UVA-säteilylle noin 2 joulea/m2, joka perustuu hoidettavan viruksen ja viruksen infektoimien solujen pinta-alaan.

:Y: 20

Kun fotofereesihoito suoritetaan in vivo, erityistä huomiota tulisi kiinnittää \ .· säteilyn maksimialtistuksen- kontrolloimiseen, jottei potilaalle aiheudu tarpeet- • · · ; *.· tornia vaurioita. Menetelmät ultraviolettisäteilyn maksimialtistuksen laskemiseksi ovat alalla tunnettuja, minkä vuoksi niitä ei kuvata tässä yhteydessä.

• · · • · « 25

Yhteenvetona todettakoon, että keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetun • · · . · *·;;* rokotteen avulla saadaan. aikaan uusi hoito potilaille, jotka ovat viruksen infek- * · ....... " toimia ja joilla on heikentynyt immuunijärjestelmä tällaisen infektion johdosta,

I I

:.’’ί sekä potilaille, jotka ovat HIY-retroviruksen infektoimia tai jotka ovat AIDS- I < ...

'··' 30 kantajia tai joilla on AIDS tai AIDS:iin liittyvä oireyhtymä. Tällaiset potilaat i eivät voi kestää hoitoa, joka heikentäisi heidän immuunijärjestelmiään.

» · # · · • »· 12 105453

Keksijät ovat havainneet näiden hoitomenetelmien olevan turvallisia jälkimmäisessä mielessä, mutta ne ovat myös tehokkaita taisteltaessa ihmisissä esiintyvää HIV-infektiota vastaan. Keksinnön avulla saadaan myös aikaan menetelmät rokotteiden valmistamiseksi. Luovuttajaa, joka on viruksen, kuten HIV-retrovi-5 ruksen, infektoima, voidaan käyttää seuraavasti rokotteen tuottamiseksi infektiotaan vastaan.

Ylläkuvattu fotoaktiivinen yhdiste annostellaan ensin vähintään osaan luovuttajan verestä, joka sisältää vapaan viruksen ja/tai viruksen infektoimia soluja, joko 10 ennen veren poistamista, joko suun kautta tai laskimonsisäisesti, tai kun veri on poistettu luovuttajasta, jossa tapauksessa se annetaan in vitro. Valinnaisesti osa luovuttajan verestä voitaisiin käsitellä ensin tunnettuja menetelmiä käyttämällä, jotta erytrosyytit voidaan olennaisesti poistaa, minkä jälkeen fotoaktiivinen yhdiste annostellaan tuloksena saatavaan fraktioon.

15

Se osa verestä (esim. sen rikastettu leukosyyttifraktio) ja/tai vapaa eristetty virus, johon fotoaktiivinen yhdiste on annosteltu, saatetaan joka tapauksessa alttiiksi fotofereesikäsittelylle käyttäen sähkömagneettista säteilyä, jolla on ennaltamää-rätty spektri, esim. ultraviolettivaloa, suositeltavasti UVA:ta, aikaisemmin ::t: 20 kuvatulla tavalla. Käsitelty veri, sen käsitelty osa tai käsitelty vapaa eristetty virus '!"! (tapauskohtaisesti) annetaan sen jälkeen takaisin luovuttajalle autogeenisenä

« I I

• V rokotteena. On ymmärrettävää, että käsitelty virus voidaan keksinnön mukaisesti • · * ’/ myös eristää käsitellystä verestä tai sen osasta fotofereesihoidon jälkeen rokot- : teenä käytettäväksi.

• · * · 25

Lisäksi keksinnön mukaisesti käsiteltyä verta, joka on itse erilaisten verikom- • · ponenttien, kuten peptidien tai polypeptidien, esim. sytokiinien, lymfokiinien, • · • · **.* monokiinien, jne. seos ja/tai käsiteltyä osaa verestä voidaan prosessoida, kuten alalla tavanomaiset taidot omaavat henkilöt tietävät, tietyn komponentin tai *···' 30 tiettyjen komponenttien eristämiseksi, joita voidaan käyttää luovuttajan virusin- j fektion hoidossa ja/tai rokotteena virusta vastaan.

» I · 9 · 13 105453 ESIMERKKI 1

Miespuolista potilasta, joka oli 39 vuotta vanha, painoi noin 70 kg ja jonka diagnoosi oli AIDS:iin liittyvä oireyhtymä, hoidettiin tämän keksinnön mukaisesti 5 seuraavasti: 8-metoksipsoraleeniä annettiin suun kautta potilaalle hoidon ensimmäisen päivän iltapäivänä 30 mg:n annoksena (eli noin 0,4 mg/kg). Suunnilleen tunti sen jälkeen, kun potilaalle oli annettu 8-metoksipsoraleeniä, hänet valmisteltiin osan 10 hänen verestään ottamiseksi fotofereesihoitoa varten käyttämällä mainittua Therakos UVAR -fotofereesikonetta.

Sentrifugia, joka liittyy kiinteänä osana fotofereesikoneeseen, käytettiin olennaisesti kaikkien erytrosyyttien keräämiseksi poistetusta verestä ja ne palautettiin 15 myöhemmin potilaaseen. Noin 300 cm3 plasmaa ja 240 cm3 ruskeankeltaista peitinkalvoa (joka sisältää T-lymfosyyttejä) poistettiin seuraavaksi kuuden syklin aikana (40 cm3 ruskeankeltaista peitinkalvoa/sykli). Ruskeankeltainen peitinkal-vo ja plasma saatettiin UVA-valon alaisiksi sen jälkeen, kun 40 cm3 ruskeankeltaista peitinkalvoa oli kerätty ensimmäisen syklin aikana. Säteilytystä jatkettiin : : : 20 kaikkien kuuden syklin aikana ja sen jälkeen lisäksi puolentoista tunnin ajan, '!" jolloin säteilytysaika oli kokonaisuudessaan noin neljä tuntia. Säteilytetty rus- I I · • 1.· keankeltainen peitinkalvo ja plasma palautettiin tämän jälkeen potilaaseen.

·· · : V Tämä prosessi toistettiin seuraavan päivän aamuna.

M··· • ·· • · · *·1 1 25 Potilaan veriparametrit ennen keksinnön mukaisen fotofereesihoidon saamista ja viisi viikkoa hoidon saamisen jälkeen on esitetty taulukossa 1.

- · · • · • · · - - - · · • · m · • ·« - .· ---------------- ---------- t « · • · · ________; • « • · » · · --- - - * I · « - —— • · 1 — · 1 · · * · • · · • · · • · 14 TAULUKKO 1 105453 ARC-potilaan veriparametrit, jota hoidettiin keksinnön mukaisella fotofe-reesimenetelmällä 5

Veriparametri Ennen hoitoa Hoidon jälkeen Normaali alue

HEMOGLOBIINI 11.7G/DL 10,8 G/DL

HEMATOKRIITTI 33,9% 33,6%

WBC 5,2 /UL 4,7/UL

10

WBC-ERO

Nauhat 16% 16%

Seg. Neut. 29% 23%

Lymfosyytit 43% 46% 15 Atyp. Lymph. 7% 7%

Monosyytit 5% 6% VERIHIUTALEET 208,000 241,000

LYMFOSYYTIT

20 CD3 (T3) 17% 85% 56-78% 004(14) 4% 22% 32-50% i‘V CD8 (T8) 26% 62% 13-38% I V rVT8 SUHDE 0,15 0,4 0,8-1,9 • · «·< • · *.’ * 25 Lisäksi potilas, jolla oli negatiivinen sikotauti-ihokoe (joka suoritettiin alalla tavallisesti tunnetulla tavalla) kehitti ennen ylläkuvatun keksinnön mukaisen • · hoidon saamista positiivisen sikotauti-ihokokeen kuuden keksinnön mukaisen • · **;· kuukausittaisen hoidon jälkeen — tämä positiivinen sikotauti-ihokoe dokumentoi- « · V·: tiin ihobiopsialla, joka osoitti viivästyneen hypersensibiliteetin luonteenomaiset « 30 histologiset muutokset. Ylläolevat tulokset osoittavat normaalin immuunitoimin- ·« · • *non kuntoutumisen, mikä johtuu hoitomenetelmästä.

• · # · « • «· • · r 15 105453 Tämä potilas sai edelleen kuvattua hoitoa kahtena peräkkäisenä päivänä kuukausittain osana kliinistä tutkimusta, jossa oli mukana viisi potilasta ja jonka tuloksia on selvitetty allaolevassa esimerkissä 2, jossa tämä potilas on identifioitu potilaaksi n:o 1.

5 ESIMERKKI 2

Viisi potilasta, joilla oli ARC, johon kuuluvat luonteenomaisina piirteinä heikkous, lymfadenopatia, kuume, puuttuva ihokokeen reaktiivisuus ja vähentynyt 10 CD4-solujen määrä, ilmoittautui vapaaehtoisiksi ja tuli mukaan kliiniseen tutkimukseen, joka suoritettiin Institutional Review Board’in säännösten mukaisesti, jotka koskevat ihmisten hoitoa Morristown Memorial -sairaalassa, Morris-townissa, New Jerseyssä. Kolme homoseksuaalista miestä, joiden iät olivat 27-39 vuotta, yksi 42-vuotias miespuolinen kuntoutunut laskimonsisäisten huumeiden 15 väärinkäyttäjä ja yksi naispuolinen kuntoutunut laskimonsisäisten huumeiden väärinkäyttäjä muodostivat tutkimusryhmän. Ajanjakso ensimmäisestä tunnistetusta HIV-vasta-aineen positiivisuudesta HIV-positiivisiksi potilaiksi tuloon asti oli 1-4 vuotta. Mukaan otettiin ainoastaan potilaita, jotka eivät olleet läpikäyneet minkäänlaista aikaisempaa hoitoa HIV-infektiota vastaan. Kukin potilas sai Y: 20 kuukausittain hoitoa, joka toistettiin kahtena peräkkäisenä päivänä, kuten :"; esimerkissä 1 on kuvattu. Käytetty 8-metoksipsoraleenin annos vaihteli alueella • Y 0,4-0,6mg/kg ja se annettiin” suun kautta.

«· · • · · • · • · ''7; : *· *: Neljä potilaista sai yhteensä 12 hoitoa kuusi kuukautta kestäneen tutkimuksen • · · • * · *.* * 25 aikana, ts. kahtena peräkkäisenä päivänä kuukauden välein kuuden kuukauden aikana. Viides potilas lopetti hoidon vapaaehtoisesti viidennen kuukauden "*♦·' jälkeen ja sai ainoastaan 10.hoitoa. Fyysisen tutkimuksen, kuukausittaisten vasta- *·*/ aine- ja antigeenitutkimusten ja CD4-prosentin perusteella kaikkien viiden • i potilaan sairaus stabiloitui tai heillä oli positiivinen reaktio hoitoon. Kenenkään 30 potilaan immuunijärjestelmä ei vahingoittunut hoidon aikana.

* · » t * r™— • » Ψ * • · _____ • * · " j_ j; 16 105453

Pelkästään kliinisten kriteereiden perusteella kaikissa potilaissa esiintyi paranemista imusolmukkeiden koossa. Energiaindeksi ja yleinen "hyvän olon" tila parani neljällä potilaalla. Hoidon alussa energiatason nousu kesti noin yhden viikon hoidon jälkeen. Kolmannen hoitokuukauden jälkeen energiatason nousu 5 säilyi kauemmin.

Merkittävintä oli, että ensimmäinen hoidettu potilas (ylläolevan esimerkin 1 potilas), homoseksuaalinen mies, joka ennen hoitoa pystyi kävelemään portaita melko vaikeasti, pystyy nyt hölkkäämään kolme ja puoli mailia päivässä ja 10 nostamaan painoja.

Ainoa potilas, jolla ei näyttänyt olevan pysyvää energiatason nousua, oli naispuolinen kuntoutunut laskimonsisäisten huumeiden väärinkäyttäjä, jolla oli kolme pientä lasta. Vaikka hänen heikkoutensa oli ollut kroonista ennen tutkimukseen 15 tuloa, terapian jälkeen ei havaittu mitään pysyvää energiatason nousua.

Kliinisiä lisähavaintoja ovat mm. ruokahalun paraneminen ja painon stabiloituminen neljällä potilaalla, joista poikkeuksena oli nainen, joka laihtui 3,3 kg kuuden kuukauden hoidon aikana. Lymfadenopatia katosi kaikista viidestä potilaasta ; : 20 kolmanteen kuukauteen mennessä ja se on pysynyt poissa. Neljä miespotilasta sai myös uudelleen viivästyneen ihon hypersensibiliteetin kuuden kuukauden • V terapian jälkeen. Kuuden kuukauden hoidon jälkeen kaikki potilaat pystyivät ·· · : selviytymään vaikeuksitta yleisistä, yhteisöstä saaduista ylähengitystie-elinten * ’ tulehduksista.

• · · « · · 25

Muut kuin normaalit vaihtelut, hemoglobiini ja hematokriitti, retikulosyyttiluke- • · *;··/ ma ja verihiutaleiden määrä pysyivät stabiileina. Pieniä vaihteluita esiintyi

J

*;* valkoisten verisolujen määrässä ja kiertävät kokonaislymfosyytit pysyivät stabiilei- • · " na neljällä miespotilaalla; ainoalla naispotilaalla valkoisten verisolujen määrä • * · • · ’”·* 30 kuitenkin laski (4,000 ennen hoitoa ja 2,000 kuuden kuukauden terapian jälkeen) ; V ja lymfosyyttien määrä laski samanaikaisesti. ESR, virtsa-analyysi, ja SMAC-20 • · pysyivät kaikissa tapauksissa muuttumattomina lukuunottamatta lieviä nousuja i 17 105453 seerumin SGOT:issa ja SGPT:ssä. EBV-tiitterit pysyivat vakioina kaikilla muilla paitsi yhdellä potilaalla, jolla IgG-kapsidin antigeeni laski tiitteristä 1:1280 tiitteriin 1:160, johon liittyi HIV-vasta-aineen tiittereiden nousu. Ne potilaat, jotka olivat P24-antigeeninegatiivisia, pysyivät negatiivisina; ne, jotka olivat 5 positiivia, pysyivät positiivisina, eikä tiitterissä esiintynyt mitään muutoksia kuuden kuukauden lopussa. Veren HIV-virusviljelmät muuttuivat negatiivisiksi yhdellä potilaalla (potilas n:o 3), mutta pysyivät positiivisina muilla potilailla raportoidun hoidon jälkeen.

10 Potilaan tilan eteneminen, jonka HIV-viljelmä muuttui negatiiviseksi (potilas n:o 3) on esitetty kuviossa 2. Kaikkien viiden potilaan GP 24 -vasta-ainetasot hoidon aikana on esitetty kuviossa 3. Kaikkien viiden potilaan GP 120 -vasta-ainetasot hoidon aikana on esitetty kuviossa 4. Kaikkien viiden potilaan CD4-auttajasolu-prosentit hoidon aikana on esitetty lopuksi kuviossa 5.

15

Yhteenveto kliinisistä tunnusmerkeistä ja laboratoriotuloksista on esitetty allaolevassa taulukossa 2.

< 1 f

t ( I

< I f f I l l « ·.

• · • · • · · • · · • · 1 • · · —·· *·· « 1 · • · · • · _ · · • · • · · ·«· • · • « « 1 1 • n 9 * 9 1 • · · 9 9 a · « • · « « · · • · · t « · • · i • Il « · TAULUKKO 2 18 105453

Yhteenveto kliinisistä tunnusmerkeistä ja laboratoriotuloksista 5 Potilas nro 1

Ikä: 38

Sukupuoli: Mies

Altistava tekijä: Homoseksuaalisuus HIV-vasta-aineen positiivisuuden tiedetty kesto: 3 vuotta 10 Ennen hoitoa Hoidon jälkeen

Paino (kg) 71,3 70,5 CD4-solut (%) 4 34 CD24-vasta-aineen taso 15 (absorptio) 2,52 2,76 GP120-vasta-aineen taso (absorptio) 2,22 1,68

Viivästetty ihokoe 20 Hypersensibiliteetti neg. pos.

Virusviljelmä (veri) pos. pos.

I ( < (

Potilas nro 2 i ( .

Ikä: 30 • · · | 25 Sukupuoli: Mies • · t···. Altistava tekijä: Homoseksuaalisuus • · » HIV-vasta-aineen positiivisuuden tiedetty kesto: 2 vuotta .···. Ennen hoitoa Hoidon jälkeen .··*. Paino (kg) 64,5 66,0 / j 30 CD4-soIut (%) 29 31 • · » - · ·' CD24-vasta-aineen « · '···* taso ;v. (absorptio) 0,12 0,74 * « • · • · *

• M

4 · 19 105453 GP 120-vasta-aineen taso (absorptio) 0,03 0,14

Viivästetty ihokoe 5 Hypersensibiliteetti neg. pos.

Virusviljelmä (veri) pos. pos.

Potilas n:o 3

Ikä: 27 10 Sukupuoli: Mies

Altistava tekijä: Homoseksuaalisuus HIV-vasta-aineen positiivisuuden tiedetty kesto: 4 vuotta

Ennen hoitoa Hoidon jälkeen

Paino (kg) 63,6 64,7 15 CD4-solut (%) 34* 33** CD24-vasta-aineen taso (absorptio) 0,72 1,69 GP 120-vasta-aineen taso 20 (absorptio) 1,04 2,07

Viivästetty ihokoe

Hypersensibiliteetti neg. pos.

Virusviljelmä (veri) pos. pos.

> · > _______________ 25 * Tietoja tämän potilaan esikäsitellyistä CD4-soluista (%) ei ole saatavissa.

i · .

·:··· Taulukossa esitetty arvo määritettiin verelle, joka otettiin yksi kuukausi sen jälkeen, kun potilas oli saanut ensimmäisen hoitonsa.

• ** Tämä potilas sai ainoastaan kymmenen hoitoa viiden kuukauden aikana, M· 30 jonka jälkeen hän lopetti vapaaehtoisesti hoidon. Kolme kuukautta sen jälkeen, « ·/·.· kun tämä potilas oli vapaaehtoisesti lopettanut hoidon, hänen CD4-soIunsa (%) I < olivat nousseet lukemaan 40, Viisi kuukautta hoidon lopettamisen jälkeen CD4- :V. solut (%) putosivat kuitenkin lukemaan 24.

a · I · 4 · ( « · « « · « 20 105453

Potilas n:o 4

Ikä: 42

Sukupuoli: Mies

Altistava tekijä: Kuntoutunut IVDA

5 HIV-vasta-aineen positiivisuuden tiedetty kesto: 2 vuotta

Ennen hoitoa Hoidon jälkeen

Paino (kg) 109 108 CD4-solut (%) 11 33 CD24-vasta-aineen 10 taso (absorptio) 0,62 1,76 GP120-vasta-aineen taso (absorptio) 0,21 1,25 15 Viivästynyt ihokoe

Hypersensibiliteetti neg. pos.

Virusviljelmä (veri) pos. pos.

Potilas n:o 5 20 Ikä: 27

Sukupuoli: Nainen

Altistava tekijä: Kuntoutunut IVDA

HIV-vasta-aineen positiivisuuden tiedetty kesto: 2 vuotta *. * Ennen hoitoa Hoidon jälkeen • * · \m\ 25 Paino (kg) 61,0 57,7 • · CD4-solut (%) 12 13 • · CD24-vasta-aineen taso (absorptio) 1,41 2,89 :,f.: 30 GP120-vasta-aineen . taso (absorptio) 0,46 1,95 I · (

Viivästynyt ihokoe

Hypersensibiliteetti neg. neg.

• · \ 35 Virusviljelmä (veri) pos. pos.

• » i 21 105453 ESIMERKKI 3

Kun esimerkissä 2 kuvattu kuusikuukautinen hoito oli päättynyt, jossa potilaat n:o 1, 2, 4 ja 5 saivat kuukauden välein hoitoa kahtena peräkkäisenä päivänä, 5 hoitoa muutettiin siten, että kukin potilas sai ainoastaan yhden hoidon kuukaudessa kahden sijasta. Keksijät havaitsivat, että kunkin potilaan CD4-solulukema (%) putosi huomattavasti. Alkuperäinen hoito, jossa potilaat saivat käsittelyä kahtena peräkkäisenä päivänä kerran kuukaudessa, otettiin uudelleen käyttöön, jolloin potilaiden 1 ja 2 CD4-solulukema (%) nousi. Tietoja potilaiden 4 ja 5 10 CD4-solulukemista (%) ei ole vielä saatavissa. Yksittäiset tulokset olivat seuraa-vat:

Potilas n:o 1 15 Kun kuusi kuukautta kestänyt alkuperäinen kuuden kuukauden hoito, jossa oli kaksi käsittelyä kuukaudessa, oli päättynyt, tämän potilaan CD4-solulukema (%) oli 34. Kun potilas sai ainoastaan yhden käsittelyn kuukaudessa viiden kuukauden ajan, CD4-solulukema (%) putosi arvoon 18. Alkuperäinen terapia otettiin uudelleen käyttöön, ja kahden kuukauden kuluttua CD4-solulukema (%) nousi 20 arvoon 39.

( < ( I « I « : Potilas n:o 2

• * I

I · · ------------ * · • · * * Kun alkuperäinen kuuden kuukauden hoito, jossa oli kaksi käsittelyä kuukaudes- • · · • · · *·* 25 sa, oli päättynyt, tämän potilaan CD4-solulukema (%) oli 31. Kun potilas sai ainoastaan yhden käsittelyn kuukaudessa neljän kuukauden ajan, CD4-solulukema ’·//.’ (%) putosi arvoon 10. Alkuperäinen hoito otettiin uudelleen käyttöön, ja kahden • · kuukauden kuluttua CD4-solulukema {%) nousi arvoon 27.

• · • «· 30 • · * • f ‘ ':tj!rVrZ' • · • * * 22 105453

Potilas n:o 4

Kun alkuperäinen kuuden kuukauden hoito, jossa oli kaksi käsittelyä kuukaudessa, oli päättynyt, tämän potilaan CD4-solulukema (%) oli 33. Kun potilas sai 5 ainoastaan yhden käsittelyn kuukaudessa neljän kuukauden ajan, CD4-solulukema (%) putosi arvoon 7. Alkuperäinen hoito otettiin uudelleen käyttöön, mutta tietoja CD4-solulukeman (%) muutoksista ei ole vielä saatavissa.

Potilas n:o 5 10

Kun alkuperäinen kuuden kuukauden hoito, jossa oli kaksi käsittelyä kuukaudessa, oli päättynyt, tämän potilaan CD4-solulukema (%) oli 13. Kun potilas sai ainoastaan yhden käsittelyn kuukaudessa neljän kuukauden ajan, CD4-solulukema (%) putosi arvoon 8. Alkuperäinen hoito otettiin uudelleen käyttöön, mutta 15 tietoja CD4-solulukeman (%) muutoksista ei ole vielä saatavissa.

Lääkkeitä, jotka on valmistettu käyttämällä fotoaktiivisia yhdisteitä, voidaan muodostaa käyttämällä standarditekniikoita, jotka ovat jo alalla tunnettuja ja joita ei sen vuoksi kuvata tässä yhteydessä yksityiskohtaisesti. Fotoaktiiviset v.: 20 yhdisteet voidaan muodostaa asian havainnollistamiseksi käyttämällä tavanomai- ‘:' ‘: siä täyteaineita tablettien, kapseleiden ja vastaavien muodossa, jotka soveltuvat •« · : suun kautta annettaviksi. Tässä kuvatut fotoaktiiviset yhdisteet voidaan haluttaes- • 4 · : .· sa muodostaa parenteraalisesti annettaviksi laskimonsisäisten tai lihastensisäisten * ' reittien kautta. Lääkkeet voidaan myös muodostaa injektoitaviksi liuoksiksi tai

• I I

’·’ 25 suspensioiksi, jotta ne voidaan antaa in vitro veren fraktioon, joka on poistettu ... infektoituneelta luovuttajalta.

• · • · • t * ♦ · • · • · ‘1' Tulisi ymmärtää, että vaikka ylläoleva kuvaus on esitetty näiden keksintöjen t « *· havainnollistamiseksi, sen ei ole tarkoitettu rajoittavan keksintöjen laajuutta, 30 koska alalla tavanomaiset taidot omaavat henkilöt voivat tehdä tässä kuvattuihin * ♦ · • V keksintöihin erilaisia muunnoksia poikkeamatta sen hengestä ja laajuudesta, • · jotka on määritetty seuraavissa patenttivaatimuksissa.

Claims (6)

105453

1. Menetelmä rokotteen tuottamiseksi HIV-retrovirusinfektiota vastaan, jonka rokotteen sisältämät käsitellyt virukset ja/tai virusten infektoimat solut voivat 5 saada aikaan immuunireaktion virusinfektiolle potilaan immuunijärjestelmässä, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: a. lisätään tiettyyn määrään infektoituneen luovuttajan verta fotoaktiivista yhdistettä, joka viruksen infektoiman solun tapauksessa sitoutuu solukalvoon 10 (esim. sitoutumalla solukalvossa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiinihappokappa-leeseen) ja/tai solun tumassa tai solun solulimassa olevaan nukleiinihappoon, tai joka yhdiste vapaan viruksen tai soluun liittyvän viruksen tapauksessa sitoutuu viruksen pintaan (esim. viruksen pinnassa olevaan reseptoriin ja/tai nukleiini-happokappaleeseen) ja/tai nukleiinihappoon (esim. DNA:han tai RNA:han), joka 15 sisältyy virukseen, aktivoitaessa altistamalla sähkömagneettiselle säteilylle, jolla on ennaltamäärätty spektri, viruksen inaktivoimiseksi ja/tai heikentämiseksi; b. käsitellään tämän jälkeen se osa potilaan verestä, johon fotoaktiivinen yhdiste on lisätty, jossa mainitussa käsittelyssä ainakin fraktio mainitusta verestä saate- :;: 20 taan fotofereesin alaiseksi käyttämällä mainittua sähkömagneettista säteilyä, jota ' ·'' mainittua fotoaktiivista yhdistettä ja mainittua sähkömagneettista säteilyä : .1 annostellaan määrinä, jotka ovat farmaseuttisesti tehokkaita siten, että ainakin • · « • « · : ’ osa HIV-retroviruksesta, jota on läsnä käsitellyssä fraktiossa, voidaan heikentää ja/tai inaktivoida; ja « · · 25 ... c. tämän jälkeen valmistetaan fraktiosta rokote tavanomaisin keinoin. - · · • · ··« • 1 '1'

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ’ · · '; verifraktio käsitellään erytrosyyttien poistamiseksi olennaisesti. 30 < | f « < · * · « 105453

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verifraktio käsitellään erytrosyyttien poistamiseksi olennaisesti ennen vaiheen (b) suorittamista.

4. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat därav, att blodfraktio-nen behandlas för att väsentligen avlägsna erytrocyter efter steg (b).

4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verifraktio käsitellään erytrosyyttien poistamiseksi olennaisesti vaiheen (b) suorittamisen jälkeen.

5. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat därav, att fraktionen 5 som behandlas i steg (b) bestär av väsentligen fritt isolerat HIV-retrovinis.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 10 vaiheessa (b) käsitelty fraktio muodostuu olennaisesti vapaasta eristetystä HIV- retroviruksesta.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että veren käsiteltyä fraktiota käsitellään edelleen vaiheen (b) jälkeen, jotta käsitelty HIV- 15 retrovirus voidaan eristää käytettäväksi rokotteena HlV-retrovirusinfektiota vastaan. • I · 9 t « «14' • « • · »I · • ♦ · • · • · • · ♦ · · • · • · · • · · • • · ··» ♦ ·· • · • · « ( K 9 · f · • · · • · « « * «I · • · · • · • t • · • · « • M m · 105453 l.Förfarande för producering av ett vaccin mot en HIV-retrovirusinfektion, vilka behandlade virus och/eller cellerna som infekterats av virus, som vaccinet 5 innehäller, kan förorsaka ett immunsvar tili virusinfektionen i immunsystemet av patienten, kännetecknat därav, att förfarandet innefattar följande steg: a. tillsättning, tili en given mängd av en infekterad donators blod, av en fotoaktiv förening som, i det fall att en cell infekterats av ett virus, binds till cellmem- 10 branen (t.ex. genom att bindas tili en receptor och/eller ett nukleinsyrafragment pä cellmembranen) och/eller tili nukleinsyra i cellkärnan eller cellcytoplasman, eller som, ifall av antingen fritt virus eller ett virus i anslutning tili en cell, binds till virusytan (t.ex. till en receptor och/eller till ett nukleinsyrafragment pä virusytan) och/eller tili nukleinsyra (t.ex. DNA eller RNA), som ingär i viruset, 15 under aktivering genom att utsättas för elektromagnetiskt strälning av ett pä förhand bestämt spektrum i avsikt att inaktivera och/eller försvaga viruset; b. sedan behandling av donatorns blod, tili vilken den fotoaktiva föreningen har tillsats, varvid nämnda behandling innefattar att ätminstone en fraktion av :':': 20 nämnda blod utsätts för fotoferes genom att använda sig av nämnda elektromag- netiska strälning, varvid nämnda fotoaktiva förening och nämnda elektromagne- ; tiska strälning administreras i mängder som är farmaceutiskt effektiva för att • · · | försvaga och/eller inaktivera ätminstone en del av HIV-retroviruset som är närvarande i den behandlade fraktionen; och • · · • · · c. efter detta framställs ett vaccin av fraktionen pä konventionella sätt. • · · . · · • · ♦ ·· 105453

6. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat därav, att det vidare innefattar att man behandlar den behandlade blodfraktionen efter steg (b) för att isolera behandlat HIV-retrovirus för användning som ett vaccin mot en HIV- 10 retrovirusinfektion. • * · • · • · « · · • · • · » • · • · · • # 9 m · · • « · · « · « · • · · * « · • · • · t c Ϊ t I < · < « » • · > « · I I I I 1 « • · · f · « · • · « · · • ·