ES437351A1 - Un procedimiento para el aislamiento de orgoteina a partir de una mezcla de proteinas solubles. - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para el aislamiento de orgoteína a partir de una mezcla de proteínas solubles, que comprende aislar orgoteína sustancialmente pura a partir de una fuente de la misma sometiendo una mezcla de orgoteína y otras proteínas solubles en tampón a una separación cromatográfica por aplicación de la mezcla de proteínas solubles en tampón en forma de una solución acuosa que tenga una concentración iónica menor de aproximadamente 0,01 M a una columna de una resina de intercambio de ión que tenga grupos débilmente básicos, absorbiendose así la orgoteina y una porción de las otras proteínas contenidas en la mezcla sobre la resina; eluir selectivamente las proteínas adsorbidas de la resina con un eluyente acuoso de concentración iónica mayor; y asilar orgoteina del eluato, y que se caracteriza por el hecho de que: (a) la separación cromatográfica se realiza a un pH de aproximadamente 6 y a una concentración iónica de hasta aproximadamente 0,01 M; (b) una porción de las proteínas adsorbidas se eluye de la columna con un eluyente acuoso que tiene un pH de aproximadamente 0,02 M y © se aísla orgoteína sustancialmente pura de la columna por los procedimientos siguientes: (i) cuando la mezcla de proteínas solubles se ha obtenido a partir de un tejido animal, por elución de otro porción de las proteínas adsorbidas de la columna con un eluyente acuoso que tenga un pH de aproximadamente 6 y una concentración iónica mayor comprendida entra aproximadamente 0,021 M y aproximadamente 0,03 M mientras que se determina al menos una de las absorbancias A264 y A280 y se mide al menos uno de los contenidos en Cu y Zn del eluato, y separación de la porción del eluato que tiene una concentración iónica de aproximadamente 0,02 a 0,03 M de la fracción que contiene la orgoteina que tiene un contenido máximo no iónico de metales divalentes y una absorbancia mínima A265 o A280; o bien (ii)cuando la mezcla de proteínas solubles se ha obtenido a partir de glóbulos rojos de la sangre e incluye la hemoglobina y la anhidrasa carbónica de los mismos, por lavado de la columna hasta dejarla exenta de hemoglobina y anhidrasa carbónica antes de eluir la orgoteina de aquélla