ES3047741T3 - Pluri-ionic complex for use in the prevention or treatment of neurogenic inflammation - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a un complejo pluriiónico sinérgico bioactivo que proporciona respuestas terapéuticas potenciadas a la inflamación neurogénica, en particular a nivel del Sistema Neuroinmunocutáneo-Endocrino (NICE). Se trata de una composición que comprende sales minerales, incluyendo al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio, caracterizada por las siguientes proporciones molares: litio 1 - magnesio [0,13 - 0,34] - potasio [1,20 - 2,40]. La composición según la invención también puede contener otras sales minerales, aditivos y/o excipientes. Puede utilizarse como fármaco, producto sanitario o agente cosmético, preferiblemente por vía tópica, para la prevención y/o el tratamiento de la inflamación neurogénica asociada a patologías agudas o crónicas que cursan con degeneración celular, como el dolor neuropático (diabético o posterior a un tratamiento médico), cicatrices dolorosas, piel atópica, enfermedades cutáneas autoinmunes, pie diabético y/o heridas (quemaduras, quirúrgicas u otras). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Complejo pluri-iónico para uso en la prevención o el tratamiento de la inflamación neurogénica

[0005] Campo de la invención

[0007] La invención se sitúa en el campo de una respuesta terapéutica para prevenir y/o tratar la inflamación neurogénica y restaurar la homeostasis celular.

[0009] Contexto

[0011] Cuando una célula sufre un daño o está sometida a estrés (de origen psíquico, metabólico, químico...) induce una depleción de magnesio intracelular Mg2+, con concentraciones que pueden descender del 40 al 60% en caso de daño (Neuropsychiatric Disease and Treatment 2017: 13275-302). Sin embargo, pequeñas fluctuaciones en la concentración intracelular de Mg2+ pueden influir en los procesos celulares. La desregulación del Mg2+ se observa con frecuencia en pacientes que padecen diabetes, enfermedades neurodegenerativas, así como síndrome metabólico.... (Mlagnesium Is a Key Player in Neuronal Maturation and NeuropathologyInt. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3439).

[0013] El magnesio actúa como cofactor en más de 300 reacciones enzimáticas en las que es crucial para el metabolismo del trifosfato de adenosina (ATP), una fuente de energía (Magnesium in Prevention and Therapy Nutrients 2015, 7).

[0015] El magnesio tiene potentes efectos antioxidantes, antinecróticos, y antiapoptóticos. El Mg2+ es en sí mismo en gran medida citoprotector, cardioprotector y neuroprotector frente a una amplia gama de insultos (Neuropsychiatric Disease and Treatment 2017:13275-302).

[0017] El magnesio, el cuarto elemento mineral más común en el organismo, también desempeña un papel esencial en la transmisión nerviosa y la conducción neuromuscular. Los niveles bajos de magnesio se asocian a una neurotransmisión glutaminérgica elevada, lo que conduce a un entorno propenso a la excitotoxicidad, que puede provocar estrés oxidativo y muerte celular neuronal. Este proceso está implicado en varios trastornos neurológicos, como el dolor crónico (The Role of Magnesium in Neurological Disorders, Nutrients, 2018, 10,730).

[0019] Una deficiencia de magnesio afecta negativamente al índice de resistencia a la insulina (HOMA-IR). El magnesio también es esencial para la síntesis de proteínas, incluida la síntesis de ADN y ARN (Magnesium in Prevention and Therapy, Nutrients, 2015, 7). Regula el movimiento transmembrana del potasio y el calcio.

[0021] Basándose en experimentos en los que se priva de litio a animales, el litio se considera un nutriente esencial para el funcionamiento del cuerpo humano. A diferencia de otros iones biológicamente activos, la concentración de litio en los fluidos animales pluricelulares no está estrechamente regulada. Su concentración puede variar mucho.

[0023] El litio, aunque tiene una actividad biológica elevada, se tolera a concentraciones muy variables en el fluido corporal. La falta de regulación biológica del litio parece deberse a la ausencia de sitios de unión específicos del litio y de filtros de selectividad. Por tanto, el litio ejerce sus numerosos efectos fisiológicos y bioquímicos compitiendo con otros elementos por sitios macromoleculares relativamente específicos de otros cationes, en particular el sodio y el magnesio (Towards a unified understanding of Lithium action, Topical Review, 2017, 586).

[0025] El litio y el magnesio poseen radios iónicos similares (0,60 y 0,65 Angstrom, respectivamente) y propiedades fisicoquímicas parecidas que les permiten competir con éxito para unirse a varios sitios de las enzimas dependientes del magnesio (Lithium: the pharmacodynamic actions of the amazing ion Ther. Adv. Psychopharmacol. (2013) 3(3) 163­ 176). Estos radios iónicos permiten al litio y al magnesio atravesar fácilmente las membranas celulares.

[0027] El ion Li+ activa mecanismos de supervivencia y recuperación como la inhibición del inositol monofosfatasa (IMPasa) / inositol polifosfato 1-fosfatasa (IPPasa, glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3)). Así, el litio produce notables respuestas protectoras, antiapoptóticas, antianóxicas, de plasticidad celular y de resiliencia. (Un nuevo paradigma completamente integrado para el modo de acción del litio - el litio utiliza mecanismos celulares latentes a prueba de fallos - Neuropsychiatric Disease and Treatment 2017:13275-302).

[0029] La diana del litio, la glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3), es una serina/treonina quinasa que desempeña un papel regulador en el metabolismo celular de los mamíferos. Regula la neurogénesis, la polarización neuronal y el crecimiento de los axones en el sistema nervioso central en desarrollo. Es constitutivamente activa en todos los tejidos (Role of glycogen synthase kinase-3b in ketamine-induced developmental neuroapoptosis in rats - British Journal of Anaesthesia 110 (S1): i3-i9 (2013)).

[0031] [0012]El litio inhibe la GSK-3, mejorando así la actividad del BDNF (factor neurotrófico derivado del cerebro), como se ha demostrado in vitro e in vivo. El papel del litio en el aumento de la expresión del BDNF, más el papel del BDNF en la supervivencia de las neuronas, ha llevado a sugerir que el litio desempeña un papel en el tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas. La vía de señalización Wnt está implicada en enfermedades neurodegenerativas y cáncer. Se ha demostrado que la inhibición por litio de GSK-3 inhibe específicamente la vía de señalización Wnt (Towards a unified understanding of Lithium action, Topical Review, 2017, 586).

[0033] El tratamiento preventivo con litio, mediante la inhibición de GSK3p, evita el aumento de la actividad de GSK3p inducida por taxol en ratas, lo que reduce simultáneamente las actividades de AKT (proteína quinasa B) y mTOR (diana mecanicista de la rapamicina), impidiendo así el desarrollo de dolor neuropático inducido por taxol (Inhibition of glycogen synthase kinase 3beta activity with lithium prevents and attenuates paclitaxel-induced neuropathic pain Neuroscience.

[0034] 2013 Diciembre 19; 254).

[0036] El litio tiene propiedades antiinflamatorias que reducen tanto las citocinas proinflamatorias como los niveles de interleucina TNF-alfa. Por otro lado, el litio regula la biosíntesis de diferentes neurotransmisores y/o receptores asociados como la serotonina y el glutamato. El litio tiene un efecto antialodinámico, así como un efecto estimulante sobre la producción de betaendorfina cerebral, un agonista MOR con fuertes propiedades analgésicas. (El litio revierte la alodinia mecánica a través de un mecanismo p dependiente de opioides Molecular Pain 2018 Volumen 14: 1-8)

[0038] El litio también contribuye a la homeostasis del calcio y bloquea la activación por el calcio de las vías de señalización dependientes-pro-apoptóticas, lo que confirma su acción citoprotectora(Molecular actions and therapeutic potential o f lithium in preclinical and clinical studies of CNS disordersPharmacol Ther. 2010 noviembre; 128(2): 281-304).

[0040] Dado que el ión Li+ inhibe la enzima GSK-3, que es una enzima importante en la encrucijada de varios sistemas de señalización, afecta a pluriple objetivos aguas abajo, incluyendo: señalización de glutamato ionotrópico, pluriple factores de transcripción, y la vía de integración relacionada con Wingless (Wnt)/p catenina. La señalización Wnt interviene en procesos cerebrales estructurales como el desarrollo neuronal, la formación de sinapsis, y la plasticidad neuronal. (LITHIUM IN THE TREATMENT OF BIPOLAR DISORDER: PHARMACOLOGY AND PHARMACOGENETICS Mol Psychiatry. 2015 Junio; 20(6): 661-670).

[0042] El complejo de dos fosfatos metálicos ATP-Mg-Li se forma a concentraciones normales de ATP y Mg2+ que se encuentran en el plasma o el citoplasma. Además, los niveles elevados de ATP correspondientes a la actividad biológica o en respuesta al estrés en el citoplasma, los orgánulos (por ejemplo, las mitocondrias) y la matriz extracelular sirven como depósitos potenciales para acumular iones de litio (Li+). Se ha descubierto que el complejo bimetálico fosfato ATP-Mg-Li es la forma bioactiva del litio a través de la unión conjunta con Mg2+ a fosfatos que tienen ligandos o cofactores receptores o enzimas. El complejo ATP-Mg-Li hace posible que los iones de litio puedan actuar modulando la función normal del ATP como ligando de los receptores de purina de la superficie celular, de los que existen dos subtipos: P2X, que son canales iónicos que median la afluencia de iones de calcio extracelular (Ca2+) al citoplasma, y P2Y, que son receptores acoplados a proteínas G (GPCR) que activan la vía del segundo mensajero del inositol trisfosfato para liberar iones de calcio de las reservas intracelulares, con el fin de modular la señalización en el sistema nervioso central y la periferia. (A Molecular Model for Lithium's Bioactive Form - Biophysical Journal 111, 294-300, 26 de julio, 2016).

[0044] El potasio también es un elemento esencial. Es el catión más abundante en el líquido intracelular, donde desempeña un papel clave en el mantenimiento de la función celular, especialmente en las células excitables como los músculos y los nervios. La carencia de potasio está asociada a la intolerancia a la glucosa y a la diabetes. La interacción del K+ con el Na+ extracelular aumenta el movimiento del agua promoviendo los intercambios y equilibrios iónicos, incluidos los del litio (Potassium Intake, Bioavailability, Hypertension, and Glucose Control Nutrients 2016, 8, 444).

[0046] La desregulación de la actividad de estos tres iones está implicada en la inflamación neurogénica, particularmente en el sistema Neuro-Immuno-Cutáneo-Endocrino (NICE). La inflamación neurogénica está asociada al dolor neuropático (dolor neuropático periférico diabético, dolor neuropático tras tratamiento médico oncológico,...), dolor musculoesquelético (lumbalgia, fibromialgia, osteoartritis, síndrome de dolor regional complejo), dolor orofacial, dolor post-herpético, rosácea, psoriasis, dermatitis atópica, prurigo nodural, urticaria, cicatrices dolorosas o no dolorosas (cicatrices de quemaduras, quirúrgicas,...), pie diabético (sequedad - callosidades - úlceras,...) y heridas entre otros.

[0048] Estas desregulaciones tienen un impacto individual y conjunto.

[0050] Un enfoque equilibrado simultáneo se justifica para aportar una respuesta terapéutica a la inflamación neurogénica y a sus repercusiones fisiológicas como la degeneración celular, la hiperqueratosis, la xerosis, la descamación, la herida y, las sensaciones de quemazón, las descargas eléctricas, el hormigueo, el picor, así como el dolor periférico a nivel neurocutáneo, entre otras...

[0052] Solución de la invención

[0054] Los presentes inventores han descubierto que una composición que contiene una mezcla particular de litio, magnesio y potasio, en proporciones molares específicas, permite, y ella sola, prevenir y/o tratar la inflamación neurogénica de manera particularmente eficaz, especialmente en administración tópica.

[0056] La invención se refiere a un complejo sinérgico bioactivo pluri-iónico que proporciona respuestas biológicas potenciadas a la inflamación neurogénica.

[0057] Es una composición pluri-iónica que comprende sales minerales, incluyendo al menos una sal mineral de litio, de magnesio y de potasio, en las siguientes proporciones molares:

[0058] litio 1 - magnesio [0,13 - 0,34] - potasio [1,20-2,40],

[0060] Preferentemente, la concentración de litio en la composición está comprendida entre 0,1 y 10 mmol/kg.

[0062] Preferiblemente, la relación molar entre magnesio y litio es [0,14 - 0,32], preferiblemente [0,15 - 0,30], preferiblemente [0,18 - 0,25]. Preferentemente, la relación molar entre potasio y litio es [1,30 - 2,30], preferentemente [1,30 -2,15], preferentemente [1. -2,15], preferentemente [1,55-1,75], preferentemente [1,58-1,72], preferentemente de nuevo [1,61-1,70].

[0064] Una sal mineral según la invención se refiere a una sal que no contiene carbono, a excepción de las sales de carbonato.

[0066] Este complejo pluri-iónico bioactivo consiste en una combinación novedosa de "magnesio - litio - potasio" según un algoritmo específico de proporciones molares. La adaptación de uno de los componentes, en función de la respuesta terapéutica a la inflamación neurogénica, conduce a la adaptación proporcional de las concentraciones de los otros dos elementos.

[0068] Esta novedosa combinación algorítmica permite, en particular por aplicación tópica, romper simultáneamente el círculo vicioso proinflamatorio que se alimenta a sí mismo, restablecer la homeostasis celular en estos iones que se encuentra alterada en numerosas patologías, promover la competencia dinámica por los sitios de unión de estos iones con el fin de obtener respuestas fisiológicas correctoras (enzimáticas, metabólicas, neurotransmisiones...), y generar una respuesta sinérgica potenciada que reforzará la respuesta celular a la injuria con el fin de gestionar la inflamación neurogénica de forma rápida y sostenible.

[0070] Su acción favorece el restablecimiento de la homeostasis alterada por la inflamación neurogénica, en particular la del magnesio y su forma iónica Mg2+, cuyas concentraciones pueden verse significativamente afectadas, y contribuye a restablecer el funcionamiento fisiológico celular óptimo, mejorando el metabolismo celular y restaurando las funciones citoprotectoras a nivel cutáneo y neurocutáneo, así como la actividad antiapoptosis a nivel neuronal.

[0072] Su acción favorece el reequilibrio del potasio y restablece su papel clave en el mantenimiento de la función celular, especialmente en las células excitables como las nerviosas. Además, favorece la interacción del potasio con el sodio, en forma iónica del K+ con el Na+ extracelular y aumenta los movimientos de fluidos favoreciendo los intercambios y equilibrios iónicos, especialmente los del litio. El litio tiene una fuerte actividad biológica, al no disponer de un sistema propio encargado de regular su concentración que puede variar significativamente en los fluidos intra y extracelulares, su ingesta externa debe adaptarse en función de la necesidad terapéutica, coordinada y ponderada.

[0074] El complejo pluri-iónico bioactivo reúne litio, magnesio y potasio, que ejercen sus múltiples efectos fisiológicos y bioquímicos, descritos anteriormente.

[0076] El litio combina sus importantes propiedades antiinflamatorias con acciones reguladoras de la biosíntesis de neurotransmisores como la serotonina y el glutamato, un efecto estimulante sobre la producción de beta-endorfina cerebral que reduce el dolor.

[0078] El litio y el magnesio están relacionados. Se ha descubierto que el complejo ATP-Mg-Li de dos metales-fosfato es la forma bioactiva del litio que actúa por coenlace con el Mg2+ a fosfatos que tienen ligandos o cofactores receptores o enzimas. Este complejo de dos metales y fosfato se forma en concentraciones normales de ATP y Mg2+ que se encuentran en el plasma o el citoplasma. Además, en situaciones de estrés que elevarán los niveles de ATP en el citoplasma, orgánulos como las mitocondrias, la matriz extracelular servirán como reservorios potenciales para acumular Li+.

[0080] [0035] Sólo la combinación específica de las relaciones molares según la invención asegura una ausencia de toxicidad celular, garantizando así el respeto de la homeostasis de los tejidos, especialmente la de los tejidos nerviosos más sensibles, y permite obtener una eficacia importante para la prevención y/o el tratamiento de la inflamación neurogénica. Sólo las composiciones que responden a la definición según la invención permiten en particular una acción protectora de las neuronas, una acción protectora y restauradora de las neuritas (axones-dendritas) y de las vainas de mielina contra los daños causados por el cisplatino, tratamiento reconocido como inductor de la inflamación neurogénica. Sin prejuzgar los mecanismos subyacentes a la obtención de un efecto tan sorprendente, cabe pensar que sólo esta combinación de litio, magnesio y potasio, en las relaciones molares según la invención, permite optimizar las actividades biológicas de cada uno de estos elementos, en el entorno complejo del organismo humano y animal, implicando a la vez efectos inhibidores a nivel del ciclo vicioso proinflamatorio, un restablecimiento de la homeostasis celular en estos iones que se encuentran alterados, en particular la del magnesio, y su forma iónica Mg2+ esencial para el funcionamiento óptimo de las mitocondrias, un efecto de competencia dinámica a nivel de los canales iónicos así como para los sitios de fijación de estos iones, asociado a un aumento de los movimientos de fluidos intra y extracelulares con el fin de reducir la toxicidad del litio, en particular, una activación de las respuestas inmunitarias, enzimáticas, metabólicas y de neurotransmisión, una respuesta sinérgica potenciada que reforzará la resistencia y la respuesta celular a la injuria mediante una acción citoprotectora a nivel cutáneo y neurocutáneo, una restauración del potencial de excitabilidad neuronal, así como una inhibición de las vías de apoptosis activadas por el ATP extracelular.

[0081] El litio está presente en la composición en una concentración comprendida entre 0,1 y 100 mmol/kg. La concentración de litio en la composición se sitúa preferentemente entre 0,5 y 50 mmol/kg, preferentemente entre 1 y 25 mmol/kg, por ejemplo entre 1,1 y 6 mmol/kg, o entre 1,7 y 6 mmol/kg. En caso de aplicación tópica, la exposición efectiva de las células diana depende de la formulación y/o del estado de la piel. Idealmente, las células diana no se exponen a concentraciones superiores a 10 mmol/kg, ya que de lo contrario se corre el riesgo de que la toxicidad supere los beneficios para el tratamiento de la inflamación neurogénica. Por debajo de 0,1 mmol/kg, su eficacia también es insuficiente.

[0082] En el contexto de una aplicación tópica, la composición de la invención pretende simultáneamente restablecer la homeostasis celular en estos iones, en particular el Mg2+, promover una competencia dinámica por los sitios de fijación, y generar una respuesta sinérgica potenciada.

[0083] Preferiblemente, la composición según la invención es una composición acuosa, preferiblemente con un pH entre 6,0 y 7,5. El pH se ajusta, si es necesario, con la ayuda de soluciones tampón, de modo que, dependiendo del vector de aplicación tópica, ya sea agua en forma de aerosol, por ejemplo, o un gel, crema o gel-crema, o incluso otro vector. Lo ideal es que este pH tenga una acidez moderada del orden de 6,5 ± 7,5 para optimizar la penetración celular y transmembrana de los iones.

[0084] La composición de la invención se refiere a la prevención y/o al tratamiento de la inflamación neurogénica, y en particular a nivel del sistema Neuro-Inmuno-Cutáneo-Endocrino (NICE).

[0085] La inflamación neurogénica está asociada al dolor neuropático (dolor neuropático periférico diabético, dolor neuropático tras tratamiento médico), dolor musculoesquelético (lumbalgia, fibromialgia, osteoartritis, dolor regional complejo), dolor orofacial, dolor post-herpético, rosácea, psoriasis, dermatitis atópica, prurigo nodural, urticaria, cicatrices dolorosas o no dolorosas (cicatrices de quemaduras, cirugías...), pie diabético (sequedad - callosidades - úlceras) y heridas, entre otros.

[0086] En efecto, este complejo bioactivo pluri-iónico "magnesio - litio - potasio" según la invención aporta una respuesta terapéutica ajustable a las repercusiones fisiológicas y citológicas de las patologías neurocutáneas, tales como hiperqueratosis, xerosis, descamación, herida..., a nivel cutáneo, como sensaciones de quemazón, descargas eléctricas, hormigueo, picor y dolor periférico a nivel neurocutáneo, entre otras...

[0087] La composición de la invención puede utilizarse para la prevención y/o el tratamiento de la inflamación neurogénica cutánea y el restablecimiento de la homeostasis del sistema Neuro-Inmuno-Cutáneo-Endocrino, en particular por vía tópica.

[0088] Al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio significa que estas especies están presentes en forma iónica en el agua. Los cationes Li+, Mg2+ y K+ están asociados a uno o varios aniones, es decir, pueden proceder de sales mixtas y/o cada uno de una sal diferente.

[0089] Ventajosamente, el litio se introduce en la composición en forma de cloruro de litio, hidróxido de litio, carbonato de litio y/o cualquier otra sal mineral farmacéuticamente aceptable. Preferiblemente, para uso tópico, la composición incluye cloruro de litio.

[0090] Ventajosamente, el magnesio se introduce en la composición en forma de cloruro de magnesio, carbonato de magnesio, hidróxido de magnesio, óxido de magnesio, sulfato de magnesio, silicato de magnesio, y/o cualquier otra sal mineral farmacéuticamente aceptable.

[0091] Preferiblemente, para uso tópico, la composición incluye cloruro de magnesio, opcionalmente en forma hidratada.

[0092] Ventajosamente, el potasio se introduce en la composición en forma de cloruro potásico, bromuro potásico, yoduro potásico, fosfato potásico, carbonato potásico, hidróxido potásico, silicato potásico, sulfato potásico, y/o cualquier otra sal mineral farmacéuticamente aceptable. Preferiblemente, para uso tópico, la composición incluye cloruro potásico.

[0093] La composición de la invención puede comprender otras sales minerales.

[0094] La composición puede comprender, por ejemplo, al menos una sal de silicio, preferentemente un silicato como el silicato de sodio (Na<2>SiÜ<3>), opcionalmente hidratado, silicato de potasio, y/o cualquier otra sal mineral farmacéuticamente aceptable, especialmente en aplicación tópica.

[0095] El silicio es un cofactor de la prolil hidroxilasa que participa en la estimulación de los fibroblastos. Disminuye la permeabilidad de los capilares, tiene un efecto antiedematoso, calmante y refrescante, acorta el tiempo de aparición de la granulación en las quemaduras profundas en particular, acelera la epidermización y, por tanto, el proceso de curación.

[0096] Desempeña un papel en la regulación del ciclo celular de los linfocitos que, en última instancia, afecta a la respuesta inmunitaria e inflamatoria.

[0097] El silicio disminuye el nivel de expresión en las heridas del óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), el factor de crecimiento epidérmico (EGF), la cadena ligera de células B activada kappa-factor nuclear (NF-<k>B), diversas citoquinas (TNF-a e IL-1p).

[0098] En función de la inflamación neurogénica cutánea subyacente a la patología propuesta, se adapta la proporción de silicio en relación con otras sales.

[0099] La composición puede comprender, por ejemplo, al menos una sal mineral de manganeso, como cloruro de manganeso, sulfato de manganeso, carbonato de manganeso, y/o cualquier otra sal mineral de manganeso farmacéuticamente aceptable, especialmente en aplicación tópica.

[0100] El manganeso interviene en la fisiología y biología de los tejidos nerviosos a través de su papel como cofactor en muchos procesos enzimáticos. También tiene un efecto beneficioso para la cicatrización de heridas a través de la modulación de las integrinas que provoca la aceleración de la migración de los queratinocitos. El manganeso también desempeña un papel esencial en la regulación de la tolerancia a la glucosa al actuar en sinergia con el magnesio, lo que permite, en particular, reducir el estrés metabólico nervioso y epidérmico.

[0101] La composición puede incluir, por ejemplo, al menos una sal mineral de plata, como el nitrato de plata por sus propiedades antibacterianas, para el tratamiento de heridas crónicas (úlceras, escaras), heridas agudas (quemaduras, heridas traumáticas, heridas quirúrgicas, etc.).

[0102] La composición puede comprender, por ejemplo, al menos una sal mineral de zinc, como citrato, oroato, sulfato de zinc... que desempeña un papel importante en muchos procesos enzimáticos vitales, como la síntesis de ADN y proteínas, la cicatrización de heridas, el metabolismo de la insulina, el desarrollo y el buen funcionamiento del sistema nervioso...

[0103] La composición puede comprender, por ejemplo, al menos una sal mineral de cobre, como el carbonato de cobre. El cobre es el componente de varias enzimas que intervienen en el metabolismo de los hidratos de carbono, las grasas y el hierro. Tiene un papel antioxidante.

[0104] Una composición tópica es una composición destinada a ser aplicada directamente sobre la parte del cuerpo a tratar (curativa o preventiva). Puede ser la piel. También puede ser una mucosa, como la mucosa oral. La composición de la invención puede ser de uso cutáneo, es decir, destinada a un uso externo sobre la piel. Preferiblemente, la composición se presenta en forma de crema o gel, es decir, puede contener los excipientes necesarios para la formación de un gel o una crema.

[0105] Las sales minerales de la composición de la invención se disuelven en agua, es decir que el disolvente principal de la composición es preferentemente el agua. El agua representa entonces al menos el 50% en peso de la composición, preferiblemente al menos el 75% en peso, al menos el 80%, y preferiblemente al menos el 90%. La composición puede incluir otros ingredientes líquidos, en particular para favorecer la absorción dérmica de las sales minerales, como sustancias grasas, emolientes, emulsionantes, tensioactivos, glicerina, o cualquier otro agente que los expertos en la técnica consideren útil.

[0106] La composición de la invención también puede comprender otras moléculas, aditivos o excipientes, por ejemplo conservantes, antibióticos, agentes estabilizadores, espesantes, antioxidantes. Estos aditivos pueden ser útiles para la conservación de la composición de la invención, así como para la textura final de la composición.

[0107] Por ejemplo, pueden utilizarse agentes gelificantes para formular la composición en forma de gel para extender sobre la piel. Para una formulación en forma de aerosol, la viscosidad se mantendrá preferiblemente bastante baja.

[0108] La composición puede incluir, por ejemplo, una o más vitaminas, como la vitamina E. La vitamina E es un potente antioxidante y modula la función inmunitaria.

[0109] La invención también se refiere a un método de preparación de la composición que comprende las etapas de:

[0110] Si es necesario, el pH de una solución acuosa se ajusta entre 6,5 y 7,5;

[0111] Se añaden a la solución acuosa una o varias soluciones concentradas que contengan al menos una sal mineral de litio, de magnesio y de potasio para obtener las siguientes proporciones molares: litio 1 - magnesio [0,13 - 0,34] - potasio [1,20-2,40].

[0112] Preferiblemente, se obtiene una concentración de litio comprendida entre 0,1 y 10 mmol/kg.

[0113] [0066] Preferentemente, una o más soluciones concentradas que comprenden al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio se añade a una temperatura superior a 50 ° C.

[0114] Cuando la composición contiene una sal de silicio, ésta se disuelve previamente en una solución acuosa aislada, preferiblemente añadida antes del ajuste del pH. El pH de esta solución puede ajustarse, utilizando cloruro de hidrógeno, por ejemplo, opcionalmente tamponado con hidróxido de sodio, por ejemplo, para alcanzar valores comprendidos entre 6,5 y 7,5 y, a continuación, añadirse a la composición que contiene litio, magnesio y potasio.

[0115] Una solución concentrada que comprende al menos una sal mineral de litio, magnesio y/o potasio se concentra preferentemente de 100 a 1000 veces con respecto a la concentración final de la composición, preferentemente de 300 a 800 veces.

[0116] El límite de solubilidad de las sales utilizadas determina la concentración potencial máxima de esta solución concentrada. El uso de una solución concentrada en minerales evita la reprecipitación de estos minerales. Para ello, es esencial ajustar el pH.

[0117] La invención también se refiere a una composición tópica según la invención, que comprende, en agua, al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio, caracterizada por las siguientes relaciones molares: litio 1 - magnesio [0,13 -0,34] - potasio [1,20 - 2,40], y una concentración de litio entre 0,1 y 10 mmol / kg, para tratamiento dérmico.

[0118] La composición tópica es preferiblemente una solución, gel, crema o aerosol.

[0119] La invención se refiere al uso de la composición según la invención como medicamento, para uso humano o veterinario.

[0120] También se refiere al uso de la composición según la invención como dispositivo médico.

[0121] También se refiere al uso cosmético no terapéutico de la composición según la invención.

[0122] Preferentemente, la composición según la invención se utiliza por vía tópica, tanto para su uso terapéutico como para su uso cosmético.

[0123] La composición según la invención puede, en particular, utilizarse para la prevención y/o el tratamiento, en particular por vía tópica, de la inflamación neurogénica, y en particular para romper el círculo vicioso proinflamatorio, garantizar la protección de las neuronas, la protección y la reparación de las neuritas (axones-dendritas) y de las vainas de mielina, el restablecimiento del funcionamiento celular y de la homeostasis de los tejidos, especialmente a nivel del sistema Neuro-Inmuno-Cutáneo-Endocrino.

[0124] La inflamación neurogénica puede estar asociada a dolor neuropático (dolor neuropático periférico diabético, dolor neuropático tras tratamiento médico), dolor musculoesquelético (lumbalgia, fibromialgia, osteoartritis, dolor regional complejo), dolor orofacial, dolor postherpético, rosácea, psoriasis, dermatitis atópica, prurigo nodural, urticaria, cicatrices dolorosas o no dolorosas (cicatrices de quemaduras, cirugías...), pie diabético (sequedad - callosidades - úlceras) y/o heridas.

[0125] El tratamiento tópico, especialmente dérmico, puede ser la prevención o el tratamiento de patologías Neuro-Inmuno-Cutáneas-Endocrinas (NICE) en las que interviene la inflamación neurogénica. El tratamiento dérmico puede estar destinado a la reparación de la piel o la reparación de heridas, incluidas las heridas por quemaduras. En este caso, la presencia de silicio es deseable, ya que confiere un efecto refrescante, reduce la permeabilidad capilar y regula el paso de mediadores y células inmunitarias proinflamatorias, acelera la granulación y la reepitelización estructurada.

[0126] La composición tópica de la invención para la reparación de la piel puede absorberse ventajosamente sobre un vendaje, preferentemente envasado de forma estéril.

[0127] La invención también se refiere a un método de prevención y/o tratamiento de una enfermedad, en particular una inflamación neurogénica, en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición según la invención, preferentemente por vía tópica, en particular sobre la piel y/o las mucosas.

[0128] El sujeto puede ser cualquier sujeto que lo necesite, en particular un sujeto que sufra o pueda sufrir una inflamación neurogénica. Es preferible que sea un ser humano o un animal.

[0129] La invención también se refiere a un método de tratamiento cosmético que comprende administrar una composición según la invención a un sujeto, preferentemente por vía tópica, en particular sobre la piel y/o las mucosas. El sujeto puede ser un ser humano o un animal.

[0130] La invención se comprenderá mejor mediante la siguiente descripción.

[0131] Ejemplo 1 - Solución 1 concentrada en metasilicato de sodio

[0132] Se disuelven 45 g de metasilicato de sodio pentahidratado (212 mmol; CAS 10213-79-3, producto VWR N.° 28092) en 500 g de agua pura (miliQ) para obtener la solución 1.

[0133] Ejemplo 2 - Solución 2 concentrada en litio, magnesio y potasio

[0134] 36,7 g de cloruro de litio (866 mmol; CAS 7447-41-8; VWR Analar NORMAPUR® Reag. Ph. Eur. para análisis), 38,5 g de cloruro de magnesio hexahidratado (189,4 mmol; CAS 7791-18-6, producto AMRESCO n.° 0288) y 104,84 g de cloruro de potasio (1406 mmol; CAS 7447-40-7; VWR Potassium chloride GPR RECTAPUR®) se disuelven en 500 g de agua pura (milliQ) para obtener la solución 2.

[0135] Ejemplo 3 - Solución 3 concentrada en manganeso

[0136] Se disuelven 550 mg de cloruro de manganeso (II) tetrahidratado (2,78 mmol; CAS 13446-34-9, VWR NORMAPUR® ACS para análisis) en 500 g de agua pura (milliQ) para obtener la solución 3.

[0137] Ejemplo 4 - Solución 4

[0138] En un recipiente se introducen 10,05 kg de glicerina vegetal, 2,01 kg de etilhexanoato de cetearilo (Massocare™ Co ), 1,00 kg de emulsionante Montanov TM L y 0,67 kg de Lipocire™ A SG (Gattefossé) y se calientan a 82 ° C.

[0139] Ejemplo 5 - Composición 1

[0140] En un tanque DUMEK de 100 kg equipado con agitación, se introducen 50,527 kg de agua de ósmosis. Se añadieron 72,76 g de solución 1 (o 28,3 mmol de elemento Si). La solución se calienta a 80 °C ± 2 °C y se agita. Durante el aumento de temperatura de la solución, se ajusta el pH añadiendo ácido clorhídrico concentrado (5,9 g) para alcanzar un pH de 7,13.

[0141] A continuación se añaden 68,71 g de solución 2 (o 87,5 mmol de Li, 19,1 mmol de Mg y 142,0 mmol de K) y 50,52 g de solución 3 (o 0,3 mmol de Mn) y se homogeneiza.

[0142] A continuación, se añade la solución 4 a 82 °C y se homogeneiza.

[0143] A continuación, se enfría a 65 ° C ± 2 ° C y se añaden 737 g de polilacrilato de sodio (Safit Care T SP) que tiene aquí una función espesante y luego se homogeneiza.

[0144] A continuación, se enfrió la solución a 55 °C, se introdujeron 670 g de dimeticona (Xiameter PMX 1503 Fluid) y se homogeneizó. La dimeticona se utiliza aquí por su efecto filmógeno, que reduce la deshidratación y proporciona un efecto calmante.

[0145] A continuación, se introducen 804 g de Mikrokill™ COS (Lonza) como conservante y se homogeneiza.

[0146] La solución se enfría entonces a 27 ° C y se añaden 335 g de acetato de vitamina E y se homogeneiza para obtener 67,00 kg de la composición final caracterizada por un pH de 6,1 y una densidad de 1,018 (un volumen 65,81L).

[0147] La concentración final de elementos minerales de la composición 1 (gel - crema) es, por tanto:

[0148] 0,42 mmol/kg Si

[0149] 1,31 mmol/kg Li

[0150] 0,28 mmol/kg Mg

[0151] 2,12 mmol/kg K

[0152] 0,004 mmol/kg Mn.

[0153] Ejemplo 6 - Actividad biológica

[0154] Las propiedades neuroprotectoras preventivas y curativas de las composiciones pluri-iónicas definidas a continuación han sido estudiadas en cultivos in vitro de neuronas sensoriales.

[0155] Las neuronas sensoriales forman parte del sistema nervioso periférico. Sus cuerpos celulares están situados en los ganglios raquídeos dorsales ("Dorsal Rooth Ganglia" D.R.G.) a lo largo de la médula espinal y emitirán prolongaciones hacia las extremidades más distales. Una de las propiedades de las neuronas sensoriales es su capacidad para regenerar sus prolongaciones tras la sección de los nervios. Esta propiedad está relacionada con la presencia de células de Schwann, células nutricias y mielinizantes del sistema nervioso periférico que liberan factores de crecimiento específicos para el crecimiento de los axones.

[0156] [0098] El modelo in vitro utilizado es un cultivo de neuronas sensoriales mielinizadas por células de Schwann (Callizot et al.,2011, Exp Cell Res 317:2374-2383). Este modelo, miniaturizado en 96 pocilios, permite analizar los efectos de las moléculas en el desarrollo de las neuronas sensoriales y en la mielinización de los axones por las células de Schwann.

[0158] Protocolo de cocultivo de neuronas sensoriales y células de Schwann: Las ratas hembras con 15 días de gestación se sacrificaron por dislocación cervical (ratas Wistar; January Lab) y los fetos se extrajeron del útero. Se recogieron DRG embrionarios y se colocaron en un medio helado de Leibovitz 15 (L15; PanBiotech, Ref P04-27055, lote: 4590720) con un 2% de penicilina-estreptomicina (PS; PanBiotech, ref: P06-07100, lote: 7390220) y 1% de albúmina de suero bovino (BSA; PanBiotech, Ref: P06-1391100, lote: H200403). Los DRG se disociaron por tripsinización durante 20 minutos (min) a 37°C (Trypsin EDTA 1X; PanBiotech, Ref: P10-023100, lote: 3590720). La reacción se detuvo añadiendo medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; PanBiotech, Ref: P04-03600, lote: 4080720) conteniendo DNasa I grado II (0,1 mg/ml; PanBiotech, Ref: P60-37780100, lote: H181015) y 10% de suero fetal de ternera (FCS; Invitrogen, Ref: 10270106, lote: 2232584). A continuación, las células se disociaron mecánicamente mediante 3 pasadas por una pipeta de 10 ml. A continuación, las células se centrifugaron a 180 x g durante 10 min a 4 °C sobre una capa de BSA (3,5%) en medio L15. El sobrenadante se desechó y los gránulos celulares se resuspendieron en un medio de cultivo definido compuesto por Neurobasal (Invitrogen, Ref: 21103049, lote: 2176355) suplementado con un 2% de B27; (Invitrogen, ref: 17504-044, lote: 2193553), L-glutamina (2 mM; PanBiotech, Ref: P04-80100, lote: 3301019), 2% PS y 50ng/mL NGF (Sigma, Ref: N1408, L lote lote: SLCG1641). A continuación, se contaron las células viables en un citómetro Neubauer mediante la prueba de exclusión con azul tripán. Las células se sembraron a una densidad de 12000 a 20000 células/pocillo en placas de 96 pocillos (precubiertas con poli-D-lisina; Greiner, Ref: 655940, lote: E20093UL) y se han cultivado a 37°C en atmósfera humidificada de aire (95%) / CO2 (5%). La mitad del medio se cambiaba cada 2 días con medio fresco. Las células se mantienen de 7 a 12 días para permitir la proliferación de células de Schwann y neuronas sensoriales. El día 8, el medio se complementa con 50 pg/mL de ácido ascórbico (AA; Sigma, Ref 092902, lote: 05316HJ-438) para iniciar la diferenciación de las células basales de Schwann en células de Schwann mielinizantes.

[0160] En estas condiciones, tras 5 días de cultivo con AA, las vainas de mielina se detectan con un anticuerpo anti-MAG (glicoproteína antígeno de mielina), un marcador temprano de mielina.

[0162] A. Estudio de las propiedades neuroprotectoras de las composiciones pluriiónicas sobre las neuronas sensoriales mielinizadas tras una intoxicación por Cisplatino: protocolo curativo

[0164] El objetivo de este estudio es evaluar el efecto neuroprotector de composiciones pluri-iónicas, a 3 concentraciones diferentes de litio, tras el envenenamiento por cisplatino de neuronas sensoriales mielinizadas en cultivo. En este cultivo, la composición pluri-iónica se incubará al mismo tiempo que el cisplatino.

[0166] A.1. Protocolo

[0168] A.1.1. Preparación, exposición y tratamiento con cisplatino: protocolo curativo

[0170] Dicloruro de cis-diammineplatino (II) (cisplatino; Sigma, ref: P4394, lote: MKCL0026) se reconstituyó en medio a 10 mg /ml (solución madre). El entorno de control se preparó en las mismas condiciones. Tras 12 días de cultivo con AA, las neuronas sensoriales primarias fueron tratadas durante 24 horas con composiciones pluri-iónicas en presencia o ausencia de envenenamiento con cisplatino. El preparado de cisplatino se utilizó en las neuronas a una concentración final de 12 pM diluido en medio de control durante 24 horas de incubación. Las composiciones pluriiónicas ensayadas se obtienen por disolución en agua de cloruro de litio, cloruro de magnesio hexahidratado y cloruro de potasio, y contienen:

[0172] 1. KY21400: Li 10,37 mmol/kg, Mg 2,27 mmol/kg, K 16,88 mmol/kg

[0173] 2. KY21310: Li 5,76 mmol/kg, Mg 1,26 mmol/kg, K 9,38 mmol/kg

[0174] 3. KY21200: Li 1,73 mmol/kg, Mg 0,38 mmol/kg, K 2,81 mmol/kg

[0176] Se probaron las siguientes condiciones:

[0178] • Medio de control

[0180] • Control cisplatino (12pM, 24h)

[0182] • Composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 o KY21200 cisplatino (12pM, 24h)

[0184] • Composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 o KY21200

[0186] • Control iones individuales a distintas concentraciones

[0188] • Control cisplatino (12pM, 24h) iones individuales a distintas concentraciones

[0190] El cultivo se realizó con 6 pocillos por condición.

[0191] A.1.2. Criterio de valoración primario: medición del número total de neuronas sensoriales y evaluación de la longitud de las neuritas y de la longitud de la vaina de mielina en las neuronas sensoriales tras la intoxicación con cisplatino y sin intoxicación.

[0192] Después de 24 horas de tratamiento en presencia o ausencia de cisplatino, las células fueron fijadas por una solución de ácido acético / etanol (5/95) durante 5 min a -20 ° C, las condiciones de control también fueron fijadas siguiendo el mismo procedimiento. A continuación, se permeabilizaron las células y se bloquearon los sitios inespecíficos con una solución salina de tampón fosfato (PBS; PanBiotech; ref: P04-36500, lote: 2620121) con un 0,1% de saponina (Sigma; ref: S7900, lote: BCBL8667V) y 1% FCS durante 15 min a 30 min a temperatura ambiente. A continuación, las células se incubaron con un anticuerpo policlonal anti-neurofilamento de conejo (NF; 1/500, Sigma; ref: N0142, lote: 083M4833) y con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-MAG (1/400, Sigma; ref: MAB1567, lote: 3227322) en una solución de p BS que contiene 1% de FCS, 0,1% de saponina, durante 12 horas a 4°C.

[0193] Para evaluar la toxicidad de los iones individuales, se fijan las células después de 3 días de tratamiento. Las células se incuban con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-beta-tubulina (1/2000, Sigma; Ref T8660-.2mL; lote: 034M4790V) en un tampón de bloqueo a 4°C durante 12 horas.

[0194] Estos anticuerpos se revelaron con una IgG antimouse de cabra Alexa Fluor 488 (1/400, Molecular probe, ref: A11001, lote: 2247988) y una IgG anti-conejo de cabra Alexa Fluor 568 (1/400, Molecular probe, ref: A11011, lote: 2017252) en PBS con 1% de FCS, 0,1% de saponina, durante 1 hora a temperatura ambiente. Los núcleos celulares se marcaron con un marcador fluorescente (solución de Hoechst, Sigma; ref: H-33258, lote: 046M4048V) en el mismo tampón.

[0195] Para cada condición, se tomaron 20 imágenes por pocillo utilizando InCell AnalyzerTM 2200 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Las imágenes de cada pocillo de cultivo se tomaron en las mismas condiciones. El análisis se realizó con el software Developer (GE Healthcare). Se proporcionó un total de 6 datos por condición experimental.

[0196] A.1.3. Estadísticas

[0197] Los datos se expresaron en media ± e.s. (de 6 datos por condición, 1 cultivo). Se realizó un análisis global de los datos mediante un análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) siguiendo la prueba de Dunnett.

[0198] El nivel de significación se fija en p <0,05. Los resultados para los que el valor p es mayor o igual a 0,05 se consideran no significativos ("n.s.") y, por tanto, no concluyentes.

[0199] A.2. Resultados

[0200] A.2.1. Efecto de la composición pluri-iónica en la supervivencia de las neuronas sensoriales

[0201] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas solas, KY21400, KY21310 y KY21200 durante 24 horas no modula la supervivencia celular (respectivamente 95%, 96% y 101% del control).

[0202] El cisplatino a 12 pM induce una disminución significativa de la supervivencia de las neuronas sensoriales (61% de muerte celular con p <0,001).

[0203] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200, durante las 24h de lesión con cisplatino, es capaz de prevenir parcial y significativamente la muerte celular de las neuronas (respectivamente 32% con p <0,05, 31% con p <0,05 y 32% de células muertas con p <0,05).

[0204] A.2.2. Efecto de las composiciones pluri-iónicas sobre la longitud de las neuritas de las neuronas sensoriales[0115]El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200 durante 24 horas en células sanas, induce un ligero pero no significativo aumento de la longitud de las neuritas en neuronas sensoriales (respectivamente 31%, 34% y 54% del control).

[0205] El cisplatino a 12 pM induce una disminución significativa de la longitud de las neuritas en las neuronas sensoriales (65% de pérdida de neuritas con p <0,01).

[0206] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas según la invención KY21310 y KY21200 es capaz de preservar eficazmente la longitud de neuritas de neuronas sensoriales de lesiones de cisplatino durante 24 horas (respectivamente 19% con p <0,05 y 11% de pérdida de neuritas con p <0,05).

[0207] Sin embargo, el tratamiento con la composición pluri-iónica KY21400 es capaz de preservar parcialmente pero no significativamente la longitud de las neuritas de las neuronas sensoriales de la lesión de cisplatino durante 24 horas (28% de pérdida de neuritas).

[0208] Paralelamente, también se evaluó en las mismas condiciones el efecto de iones aislados o combinados dos a dos sobre la supervivencia de las neuronas sensoriales y la longitud de las neuritas. Todas las soluciones se preparan a partir de los cloruros de los iones analizados.

[0209] Los resultados se muestran en la Tabla 1.

[0210] Tabla 1.

[0213]

[0215] Las líneas 12 a 13 de la tabla muestran que el litio combinado con sólo uno de los iones magnesio o potasio es altamente tóxico a 40 mg/kg, mientras que deja de ser tóxico en presencia de los otros dos iones a las mismas concentraciones. Así pues, la combinación de los tres iones litio, magnesio y potasio tiene un efecto sinérgico.

[0216] Se probó en paralelo la capacidad de los iones aislados para preservar la supervivencia de las neuronas sensoriales y la longitud de las neuritas. Los resultados figuran en la Tabla 2.

[0217] Tabla 2.

[0220]

[0222] Ninguno de los iones individuales preserva significativamente a las neuronas sensoriales de la apoptosis inducida por cisplatino, mientras que las combinaciones pluri-iónicas probadas a concentraciones similares sí lo hacen. Lo mismo ocurre con las combinaciones de potasio y magnesio, que no mejoran significativamente la supervivencia de las neuronas sensoriales. Esta diferencia se debe probablemente a la reducción de la toxicidad de las combinaciones pluri-iónicas en comparación con los iones aislados, lo que permite que el efecto protector prevalezca sobre la toxicidad.

[0223] El manganeso también se probó en las mismas condiciones con concentraciones que oscilaban entre 0,15 mg/kg y 1,2 mg/kg, sin demostrar ningún efecto significativo sobre la supervivencia de las neuronas o la longitud de las neuritas.

[0224] También se han probado otras combinaciones de litio-magnesio-potasio según la invención. Se muestran en la Tabla 3.

[0225] Tabla 3.

[0227]

[0228] _ ______

[0230] Las composiciones C12 a C16 están fuera de los intervalos de relaciones molares según la invención, mientras que las otras composiciones, C1 a C11, son representativas del algoritmo de la invención.

[0232] El efecto de las combinaciones de iones sobre la supervivencia de las neuronas sensoriales y la longitud de las neuritas se evaluó en las mismas condiciones descritas anteriormente. Todas las soluciones se preparan a partir de los cloruros de los iones analizados.

[0234] Los resultados se muestran en la Tabla 4.

[0236] Tabla 4.

[0239]

[0242] Los resultados anteriores demuestran que las composiciones de la invención reducen significativamente la apoptosis de las neuronas sensoriales inducida por el cisplatino en todos los intervalos reivindicados. Cuando el potasio y/o el magnesio están por debajo y/o por encima de los intervalos de relaciones molares según la invención (C12 a C16), la combinación deja de funcionar.

[0244] A.2.3. Efecto de las composiciones pluri-iónicas sobre la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales (protocolo preventivo)

[0245] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200 durante 24 horas en células sanas no modula la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales (respectivamente 89%, 97% y 89% del control).

[0246] El cisplatino a 12 pM induce una disminución significativa de la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales (78% de pérdida de mielina con p <0,001).

[0247] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21310 y KY21200 preserva significativamente la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales de las lesiones de cisplatino durante 24 horas (respectivamente 46% con p <0,05 y 34% de pérdida de mielina con p <0,01).

[0248] Sin embargo, el tratamiento con la composición pluri-iónica KY21400 induce un aumento leve pero no significativo de la longitud de la vaina de mielina tras una lesión por cisplatino durante 24 horas (66% de la pérdida de mielina). B. Efecto neuroprotector de composiciones pluriiónicas en neuronas sensoriales primarias mielinizadas de rata tras lesión por cisplatino: protocolo de protección

[0249] El objetivo de este estudio fue investigar el efecto neuroprotector de las composiciones pluri-iónicas tras la lesión por cisplatino en neuronas sensoriales mielinizadas de rata.

[0250] B.1. Protocolo

[0251] B.1.1. Preparación, exposición y tratamiento del cisplatino

[0252] Dicloruro de cis-diammineplatino (II) (cisplatino; Sigma, ref: P4394, lote: MKCL0026) se reconstituyó en medio a 10 mg /ml (solución madre). El entorno de control se preparó en las mismas condiciones. Tras 12 días de cultivo con AA, las neuronas sensoriales primarias fueron pretratadas durante 2 horas con la composición pluri-iónica a 3 concentraciones y luego intoxicadas con cisplatino. El preparado de cisplatino se utilizó en las neuronas a una concentración final de 12 pM diluido en medio de control durante 24 horas de incubación.

[0253] Las composiciones pluri-iónicas ensayadas contenían, en agua:

[0254] 1. KY21400: Li 10,37 mmol/kg, Mg 2,27 mmol/kg, K 16,88 mmol/kg

[0255] 2. KY21310: Li 5,76 mmol/kg, Mg 1,26 mmol/kg, K 9,38 mmol/kg

[0256] 3. KY21200: Li 1,73 mmol/kg, Mg 0,38 mmol/kg, K 2,81 mmol/kg

[0257] Se evaluaron las siguientes condiciones:

[0258] • Medio de control

[0259] • Control cisplatino (12pM, 24h)

[0260] • Composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 o KY21200 cisplatino (12pM, 24h)

[0261] • Composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 o KY21200.

[0262] Este estudio se realizó con 6 pocillos por condición y se duplicó para validar los resultados. Los datos tomados y analizados son los resultados sumados de los 2 estudios.

[0263] B.1.2. Criterio de valoración primario: medición del número total de neuronas sensoriales y evaluación de la longitud de las neuritas y de la longitud de la vaina de mielina en neuronas sensoriales tras intoxicación con cisplatino y sin intoxicación.

[0264] Después de 24 horas de tratamiento en presencia o ausencia de cisplatino, las células fueron fijadas por una solución de ácido acético / etanol (5/95) durante 5 min a -20 ° C, las condiciones de control también fueron fijadas siguiendo el mismo procedimiento. A continuación, se permeabilizaron las células y se bloquearon los sitios inespecíficos con una solución salina de tampón fosfato (PBS; PanBiotech; ref: P04-36500, lote: 2620121) con un 0,1% de saponina (Sigma; ref: S7900, lote: BCBL8667V) y FCS al 1% durante 15 min a temperatura ambiente. A continuación, las células se incubaron con un anticuerpo policlonal anti-neurofilamento de conejo (NF; 1/500, Sigma; ref: N0142, lote: 083M4833) y con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-MAG (1/400, Sigma; ref: MAB1567, lote: 3227322) en una solución de p BS que contiene 1% de FCS, 0,1% de saponina, durante 12 horas a 4°C.

[0265] Estos anticuerpos se revelaron con un Alexa Fluor 488 antimouse IgG de cabra (1/400, Molecular probe, ref: A11001, lote: 2247988) y una IgG de conejo anti-cabra Alexa Fluor 633 (1/400, Molecular probe, ref: A21070, lote: 1700326) en PBS con 1% de FCS, 0,1% de saponina, durante 1 hora a temperatura ambiente. Los núcleos celulares se marcaron con un marcador fluorescente (solución de Hoechst, Sigma; ref: H-33258, lote: 046M4048V) en el mismo tampón.

[0266] Para cada condición, se tomaron 20 imágenes por pocilio utilizando InCell AnalyzerTM 2200 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Las imágenes de cada pocillo de cultivo se tomaron en las mismas condiciones. El análisis se realizó con el software Developer (GE Healthcare). Se proporcionó un total de 6 datos por condición experimental para cada uno de los 2 estudios.

[0267] B.1.3. Estadísticas

[0268] Los datos se expresaron en promedio ± ej. (de 6 datos por condición por cultivo para 2 cultivos). Se realizó un análisis global de los datos mediante un análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) siguiendo la prueba de Dunnett. El nivel de significación se fija en p <0,05.

[0269] B.2. Resultados

[0270] B.2.1. Efecto de la composición pluri-iónica en la supervivencia de las neuronas sensoriales

[0271] El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200 durante 24 horas en células sanas no modula la supervivencia celular (respectivamente 91%, 89% y 95% del control).

[0272] El cisplatino a 12 pM induce una disminución importante y significativa de la supervivencia de las neuronas (64% de muerte celular con p <0,0001). El pretratamiento con la composición pluri-iónica KY21400, KY21310 y KY21200, dos horas antes y durante las 24 horas de lesión por cisplatino, permite salvar parcial y significativamente a las neuronas de la muerte celular (respectivamente 35% con p <0,0001, 30% con p <0,0001 y 30% de muerte celular con p <0,0001). B.2.2. Efecto de la composición pluri-iónica sobre la longitud de las neuritas de las neuronas sensoriales

[0273] El tratamiento con la composición pluri-iónica KY21400 durante 24 horas no tiene ningún impacto sobre la longitud de las neuritas de las neuronas sensoriales (111% del control).

[0274] El tratamiento con la composición pluri-iónica KY21200 durante 24 horas aumenta significativamente la longitud de las neuritas de las neuronas sensoriales (140% del control con p <0,01).

[0275] El cisplatino a 12 pM induce una disminución significativa de la longitud axonal de las neuronas sensoriales (51% de pérdida de neuritas con p <0,0001).

[0276] Un pretratamiento de dos horas con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200 es capaz de preservar eficazmente la longitud de neurita de las neuronas sensoriales de la lesión de cisplatino durante 24 horas (respectivamente 83% con p <0,01, 100% con p <0,0001 y 102% del control con p <0,0001).

[0277] B. 2.3. Efecto de la composición pluri-iónica en la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales[0149]El tratamiento con las composiciones pluri-iónicas KY21400 y KY21200 durante 24 horas en células sanas induce un ligero pero no significativo aumento de la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales (respectivamente, 138% y 129% del control). El tratamiento con la composición pluri-iónica KY21310 durante 24 horas en células sanas no tiene ningún impacto en la longitud de la vaina de mielina (111% del control).

[0278] El cisplatino a 12 pM induce una disminución significativa de la longitud de la vaina de mielina de las extensiones de neuronas sensoriales (69% de pérdida de mielina con p <0,0001).

[0279] Un pretratamiento de dos horas con las composiciones pluri-iónicas KY21400, KY21310 y KY21200 preserva significativamente la longitud de la vaina de mielina de las neuronas sensoriales de la lesión por cisplatino durante 24 horas (respectivamente 29% con p <0,001, 37% con p <0,01 y 29% de pérdida de mielina con p <0,001).

[0280] En comparación, ninguno de los iones individuales a las concentraciones utilizadas en las combinaciones KY21400, KY21310 y KY21200 demostró un efecto protector significativo sobre la longitud de la vaina de mielina.

[0281] El manganeso también se probó en las mismas condiciones a concentraciones que oscilaban entre 0,15 mg/kg y 1,2 mg/kg, sin demostrar ningún efecto significativo sobre la longitud de la vaina de mielina.

[0282] C. Análisis de los beneficios del tratamiento con composición pluri-iónica KY21400 de queratinocitos humanos cultivados en condiciones de estimulación Th2 en un modelo de piel sensible 2D mediante cribado transcriptómico de 93 genes.

[0283] [0154]Objetivo: evaluar los efectos protectores y restauradores de la composición pluri-iónica KY21400 (Li 10,37 mmol/kg, Mg 2,27 mmol/kg, K 16,88 mmol/kg) en un modelo in vitro de queratinocitos 2D sometido a un cóctel de citoquinas que imita un entorno de tipo Th2 mediante análisis transcriptómico (TLDA; TaqMan Low Density Array) de la regulación de la expresión génica de 93 dianas epidérmicas (por RT-qPCR). Este modelo, adaptado de un modelo 3d descrito en el artículo de investigación de Hubaux et al. 2018, permite reproducir in vivo alteraciones como las encontradas en la dermatitis atópica cutánea y en la piel sensible con tendencia atópica. Esto incluye una hiperproliferación leve y la modificación de un panel de genes relacionados con la inflamación, la homeostasis lipídica, la barrera cutánea y el picor.

[0284] El modelo in vitro utiliza cultivos de queratinocitos epidérmicos derivados del prepucio humano normal (NHEKs, Lonza, 00192906). Las células se cultivaron en medio Epilife (Fisher Scientific, M-EPI-500-A) suplementado con un suplemento de crecimiento de queratinocitos humanos (HKGS, Fisher Scientific, S-001-5) y antibióticos (Gentamicina, Fisher Scientific, 15710-049). Las células se mantuvieron en una incubadora húmeda a 37°C con una atmósfera del 5% de CO2.

[0285] C.1.Protocol

[0286] C.1.1. Inducción de modelos inflamados con Th2

[0287] Las células fueron estimuladas con tres citoquinas ligadas a Th2 (IL-4, IL-13 e IL-25), conocidas por desempeñar un papel importante en el desarrollo de la dermatitis atópica y por alterar la función de la barrera epidérmica. Las tres interleucinas se aplicaron a una monocapa celular subconfluyente a concentraciones de 50 ng/ml para la IL-4 y la IL-13, y de 20 ng/ml para la IL-25, durante 48 horas para inducir modulaciones de la expresión génica que recuerdan a la dermatitis atópica y la piel sensible.

[0288] C.1.2. Tratamiento con la composición pluri-iónica KY21400 Simultáneamente a la estimulación con Th2, las células se incubaron con la composición pluri-iónica KY21400, se diluyeron en medio de cultivo, se filtraron y se aplicaron durante 48 h.

[0289] C.2. Análisis de los cambios en la expresión génica

[0290] C.2.1. Extracción de ARN total

[0291] Al final del tratamiento de 48 horas con estimulación Th2 y KY21400, se extrajo el ARN total utilizando el kit Qiagen RNeasy (Qiagen; 74106). Las células se enjuagaron con PBS frío y se lisaron con el tampón suministrado en el kit. La extracción se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del fabricante. El ARN recogido se almacenó a -80°C.

[0292] C.2.2. Análisis de la integridad del ARN

[0293] La concentración de ARN se determinó por espectrofotometría (QIAxpert, Qiagen) y la calidad del ARN se analizó por electroforesis capilar (Agilent Bioanalyzer 2100 - Agilent RNA 6000 Nano Kit, 5067-1511).

[0294] La integridad del ARN total se evaluó visualizando bandas de ARN ribosómico intacto. Para el ARN total de los eucariotas superiores, el tamaño de las bandas ribosómicas debe ser de 1,9 kb para el ARN 18S y de 4,7 kb para el ARN 28S. La intensidad de la banda correspondiente al ARN 28S debe ser mayor que la intensidad de la banda correspondiente al ARN 18S. Pueden estar presentes pequeñas bandas difusas que representan ARN de bajo peso molecular (ARNt y ARN ribosómico 5S). La degradación del ARN se manifestará en forma de difuminación de las bandas de ARN ribosómico y ruido de fondo de alto peso molecular.

[0295] C.2.3. Síntesis de ADNc

[0296] La transcripción inversa se realizó con el kit de ARN a ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems; 438706) a partir de ARN total siguiendo las instrucciones del fabricante. A continuación, el ADNc se almacenó a -20 °C hasta su utilización en las reacciones en cadena de la polimerasa.

[0297] C.2.4. Validación del sistema de pruebas mediante ensayos TaqMan individuales

[0298] Para controlar el impacto de la estimulación Th2 y validar el sistema de prueba, se realizó una amplificación de dianas seleccionadas de las que se ha informado en la literatura que están reguladas en respuesta a ese desafío específico o que están reguladas en la dermatitis atópica. Los 5 genes diana son: ABCA1(casete de unión a ATP A1), c A2 (anhidrasa carbónica 2), CCL2 (motivo de ligando de quimiocina C-C 2), NELL2 (similar a EGFL neuronal 2) y POSt N (periostina).

[0299] Las secuencias diana de los genes de interés se amplificaron utilizando pruebas de expresión génica TaqMan (Applied Biosystems). Estos kits contienen una sonda TaqMan y dos cebadores específicos premezclados a una concentración de 18 pM para cada cebador y 5 pM para la sonda. Esta mezcla se concentra 20 veces. Las sondas TaqMan se injertaron con un fluoróforo (FAM) en su extremo 5' y con un inhibidor de fluorescencia 3'.

[0300] [0164]Las PCR se realizaron con el sistema de PCR en tiempo real Quantstudio7 (Applied Biosystems). En resumen, se mezclaron 4 pl de ADNc (4 ng) con 10 pl de TaqMan Fast Advanced Master Mix (Applied Biosystems; 4444557), 1 pl de TaqMan Gene Expression Assay y 5 pl de agua sin ARNasa. Los ciclos térmicos se programaron con una primera etapa de desnaturalización a 95 ° C durante 20s. El protocolo de amplificación fue seguido de 40 ciclos (1 s a 95°C y 20 s a 60°C).

[0301] Para normalizar los resultados, se utilizó un gen doméstico, YWHAZ(Tirosina 3-Monooxigenasa) en las mismas muestras de ADNc. Se realizó en paralelo un control sin ADNc como control negativo de amplificación. Esto permitió verificar la ausencia de contaminantes. Los niveles de expresión relativos se calcularon mediante el método comparativo Ct (AACt).

[0302] 2.5. Gestión de matrices TaqMan, qPCR y análisis Ct

[0303] Los chips microfluídicos TaqMan qPCR (o chips TaqMan de baja densidad; TLDA) fueron diseñados por StratiCell y fabricados por encargo por Applied Biosystems. Entre los genes representados, se estudiaron 3 genes de control interno o genes domésticos y 93 genes de interés.

[0304] Los chips TaqMan se han procesado siguiendo las instrucciones del fabricante (Micro Fluidic Card Getting Started Guide, Applied Biosystems).

[0305] El ADNc se mezcló con un tampón específico (TaqMan Fast Advanced Master Mix, 4444557, Applied Biosystems) antes de ser inyectado en los chips y dispersado en los pocillos por centrifugación. Los chips se sellaron y la qPCR se ejecutó utilizando el sistema de<p>C<r>en tiempo real Quantstudio7 (Applied Biosystems) y su software (QuantStudio Real-Time PCR v1.3. software, Applied Biosystems).

[0306] Se obtuvieron ciclos umbral (Ct) para cada gen. Los archivos de resultados se exportaron desde el dispositivo qPCR y se analizaron mediante el software DataAssist (v3.01, Applied Biosystems) diseñado para realizar una cuantificación relativa de la expresión génica mediante el método comparativo Ct (AACt), a través de una combinación de análisis estadísticos.

[0307] Los datos obtenidos para el estado no tratado y estimulado por Th2 se compararon con el estado no tratado y no estimulado. La condición estimulada por Th2 y tratada con la composición pluri-iónica KY21400 se comparó con la condición no tratada/estimulada por Th2. Los valores Ct se normalizaron a la media de los Cts de dos genes domésticos presentes en el chip (YWHAZ y B2M). El valor umbral máximo de Ct se fijó en 36 ciclos, lo que significa que los genes con valores de Ct superiores a 36 no se tuvieron en cuenta en el análisis.

[0308] C.2.6. Análisis estadístico

[0309] Para los resultados estadísticos, el análisis se realizó mediante una prueba t de Student emparejada para la comparación de las condiciones tratadas con respecto a la condición de control específica con *p<0,05; **p<0,01 y ***p<0,001.

[0310] C.3. Resultados

[0311] C.3.1. Efecto del complejo pluri-iónico KY21400 sobre los marcadores genéticos de la inflamación

[0312] El tratamiento con el complejo KY21400 contrarrestó significativamente los aumentos de expresión inducidos por la estimulación Th2 para los genes TNFAIP6 (p=0,0006), CXCL10 (p=0,009) y CXCL11 (p=0,0271) implicados en la respuesta inflamatoria.

[0313] C.3.2. Efecto del complejo pluri-iónico KY21400 sobre los marcadores génicos de la homeostasis lipídica de la piel humana[0173]El tratamiento con KY21400 induce una modificación global de la homeostasis lipídica mediante modulaciones diferenciales en la expresión de genes implicados en la síntesis de ceramidas, ácidos grasos / triacilgliceroles y colesteroles, su metabolismo y transporte dentro de los queratinocitos. El tratamiento con el complejo KY21400 revirtió significativamente los efectos de la estimulación Th2 sobre la expresión del gen ABCG1 (p=0,0211), una disminución del gen GPAT3 (p=0,0188), un aumento de las expresiones de los genes SULT1E1 (p=0,o096), FA2H (p=0,0385), NR1H2 (p=0,0045) implicados en la homeostasis cutánea lipídica.

[0314] C.3.3. Efecto del complejo pluri-iónico KY21400 sobre los marcadores génicos de la diferenciación de los queratinocitos terminales y el metabolismo del ácido hialurónico.

[0315] El tratamiento con KY21400 restaura significativamente la expresión de dos genes para la diferenciación terminal de los queratinocitos y el metabolismo del ácido hialurónico, lo que sugiere un impacto favorable sobre las propiedades de barrera y la espongiosis encontradas en la dermatitis atópica y el eczema. HAS3 y CASP14, genes implicados en la hidratación epidérmica y la diferenciación terminal de los queratinocitos, mostraron una expresión génica significativamente descendente (p=0,0422) y ascendente (p=0,0346) con el tratamiento con KY21400, respectivamente. KY21400 induce una inesperada regulación a la baja de la expresión de los dos genes SPRR1A (p=0,0025) e IVL (p=0,0054), implicados en la formación de la envoltura corneal. KY21400 reguló a la baja el gen que codifica el receptor de ácido hialurónico CD44 (p=0,0378).

[0316] C.3.4. Efecto del complejo pluri-iónico KY21400 sobre los marcadores genéticos de hipersensibilidad y prurito[0175]El tratamiento de los queratinocitos con el complejo KY21400 invirtió el efecto observado tras la estimulación con un cóctel Th2 de citoquinas signo de un efecto preventivo del desarrollo potencial de hipersensibilidad y picor. Entre los genes estudiados, tres de ellos ven disminuir su expresión, o incluso volver al nivel basal con el tratamiento: NGF (p= 0,0141), ANOS1 (p = 0,0294) y SEMA3A (p = 0,0034).

[0317] C. 3.5. Efecto del complejo pluri-iónico KY21400 sobre marcadores génicos específicos de la dermatitis atópica[0176]El tratamiento con KY21400 redujo la expresión de CA2 (p=0,0064), lo que sugiere un efecto específico de este complejo contra la dermatitis atópica.

[0318] D. Evaluación preliminar del tratamiento tópico en sujetos con dolor neuropático periférico diabético

[0319] Se ha preparado un gel-crema según la invención para su uso por pacientes diabéticos con dolor neuropático periférico. El gel crema se prepara según el método del ejemplo 5 y comprende 75,70% de solución acuosa obtenida a partir de 72 g de solución 1, cuyo pH se ajusta entre 7 y 7,5, 136 g de solución 2 y 100 g de solución 3.

[0320] Las concentraciones finales de los minerales analizados por ICP-MS en el gel-crema son:

[0321] - 12 ppm de Li o 1,31 mmol / kg de Li (relación molar = 1)

[0322] - 9,4 ppm mg o 0,38 mmol/kg Mg (relación molar = 0,29)

[0323] - 107 ppm de K o 2,72 mmol /kg de K (relación molar = 2,07)

[0324] - 11,7 ppm de Si, y

[0325] - 0,31 ppm Mn.

[0326] Los pacientes seleccionados tienen una puntuación de al menos 4 basada en el cuestionario estándar DN4 utilizado para el diagnóstico del dolor neuropático, diagnóstico validado por electromiograma. Los pacientes seleccionados se aplicaron el gel crema además de su tratamiento farmacológico habitual (duloxetina, pregabalina, gabapentina,...) sin cambiar las dosis de tratamiento durante el estudio.

[0327] Durante un mes, los pacientes se aplicaron el gel-crema en los miembros inferiores hasta debajo de la rodilla, y posiblemente entre los dedos de los pies, a razón de 2 veces al día: por la mañana y por la noche, siendo la primera aplicación por la noche.

[0328] Se realizaron evaluaciones:

[0329] - Antes de la primera aplicación

[0330] - 10 minutos después de la primera aplicación

[0331] - Antes de la segunda aplicación a la mañana siguiente

[0332] - El 15.° día de uso

[0333] - El trigésimo día de uso.

[0334] La evaluación consiste en puntuar en una escala de 0 (no presente) a 10 (extremadamente presente), seis criterios representativos de los síntomas del dolor neuropático periférico diabético.

[0335] Los pacientes incluyen 13 mujeres y 11 hombres con una edad media de 63,8 años y tienen una puntuación DN4 media de 6,6. 9 pacientes han tenido síntomas durante 1 a 5 años, 9 pacientes han tenido síntomas durante 5 a 10 años, y 5 pacientes han tenido síntomas durante más de 10 años. Resultados: Después de 1 mes, el 58% de los pacientes (14) informan de una reducción del dolor 30% o superior, de los cuales el 46% indican una reducción del dolor 50% o superior.

[0336] Los detalles de los resultados al mes por tipo de síntoma doloroso se dan en la Tabla 5 a continuación.

[0337] Tabla 5

[0340]

[0342] [0185]Este estudio muestra la eficacia del gel crema en la reducción del dolor neuropático periférico diabético más allá del simple efecto placebo (estimado en un 20%). No se observaron efectos secundarios.

[0343] Además, al cabo de un mes, 16 pacientes comunicaron espontáneamente una mejora de la calidad del sueño y del humor, una mejora del equilibrio en bipedestación y del perímetro de marcha, así como una recuperación de la sensibilidad plantar y de las piernas.

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES

1. Composición pluri-iónica que comprende sales minerales, incluyendo al menos una sal mineral de litio, de magnesio y de potasio,caracterizada porlas siguientes relaciones molares:

litio 1 - magnesio [0,13 - 0,34] - potasio [1,20-2,40].

2. Composición pluri-iónica según la reivindicación 1, donde la concentración de litio está comprendida entre 0,1 y 10 mmol / kg.

3. Composición pluri-iónica según la reivindicación 1 o 2, donde la relación molar de potasio está comprendida entre 1,55 y 1,75.

4. Composición pluri-iónica según una de las reivindicaciones 1 a 3, donde la relación molar de magnesio está comprendida entre 0,15 y 0,30.

5. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende litio en forma de cloruro de litio, carbonato de litio y/o hidróxido de litio.

6. Una composición según una de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende magnesio en forma de cloruro de magnesio, carbonato de magnesio, hidróxido de magnesio, óxido de magnesio, sulfato de magnesio, y/o silicato de magnesio.

7. Una composición según una de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende potasio en forma de cloruro potásico, bromuro potásico, yoduro potásico, fosfato potásico, carbonato potásico, hidróxido potásico, silicato potásico, y/o sulfato potásico.

8. Método de preparación de la composición según una de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende las etapas de:

- Si es necesario, el pH de una solución acuosa se ajusta entre 6,0 y 7,5;

- Se añaden a la solución acuosa una o más soluciones concentradas que comprenden al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio para obtener las siguientes proporciones molares:

litio 1 - magnesio [0,13 - 0,34] - potasio [1,20-2,40].

9. Método según la reivindicación 8, según el cual se añade una o más soluciones concentradas que comprenden al menos una sal mineral de litio, magnesio y potasio a una temperatura superior a 50 ° C.

10. Método según una de las reivindicaciones 8 a 9, según el cual, la solución concentrada que comprende al menos una sal mineral de litio, magnesio y/o potasio se concentra de 100 a 1000 veces con respecto a la concentración final de la composición.

11. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso como medicamento de uso humano.

12. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 7 para uso como fármaco veterinario.

13. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 7 para uso como dispositivo médico.

14. Composición para su uso según una de las reivindicaciones 11 a 13 por vía tópica.

15. Composición para su uso según una de las reivindicaciones 11 a 13 para la prevención y/o tratamiento tópico de la inflamación neurogénica.

16. Composición para su uso según la reivindicación 15, según la cual la inflamación neurogénica está asociada a dolor neuropático, dolor musculoesquelético, dolor orofacial, dolor post-herpético, rosácea, psoriasis, dermatitis atópica, prurigo nodural, urticaria, cicatrices dolorosas o no, pie diabético, y/o heridas.