ES2993464T3 - Antibody compositions - Google Patents
Antibody compositions Download PDFInfo
- Publication number
- ES2993464T3 ES2993464T3 ES17745672T ES17745672T ES2993464T3 ES 2993464 T3 ES2993464 T3 ES 2993464T3 ES 17745672 T ES17745672 T ES 17745672T ES 17745672 T ES17745672 T ES 17745672T ES 2993464 T3 ES2993464 T3 ES 2993464T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- concentration
- polysorbate
- tnfa
- composition
- glycerol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 125
- 229940127130 immunocytokine Drugs 0.000 claims abstract description 78
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 279
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 153
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 93
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 87
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 87
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 87
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 87
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 76
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 74
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 61
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 61
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 61
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 60
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 60
- 229940127145 L19-IL2 immunocytokine Drugs 0.000 claims description 59
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 43
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 42
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 38
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 31
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 30
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 30
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 27
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 27
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 26
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 26
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 13
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 8
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- 108010004882 L19-IL2 immunocytokine Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 138
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 69
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 32
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 27
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 21
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 21
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 16
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 14
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 13
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000012623 DNA damaging agent Substances 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 229940127147 L19-TNF immunocytokine Drugs 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;dihydrate Chemical compound O.O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 2
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- 239000012905 visible particle Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-SNFLSGHGSA-N (7S,9S)-7-[(4-amino-5-hydroxy-6-methyl-2-oxanyl)oxy]-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxy-1-oxoethyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7H-tetracene-5,12-dione Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)C1CC(N)C(O)C(C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-SNFLSGHGSA-N 0.000 description 1
- INAUWOVKEZHHDM-PEDBPRJASA-N (7s,9s)-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-7-[(2r,4s,5s,6s)-5-hydroxy-6-methyl-4-morpholin-4-yloxan-2-yl]oxy-4-methoxy-8,10-dihydro-7h-tetracene-5,12-dione;hydrochloride Chemical compound Cl.N1([C@H]2C[C@@H](O[C@@H](C)[C@H]2O)O[C@H]2C[C@@](O)(CC=3C(O)=C4C(=O)C=5C=CC=C(C=5C(=O)C4=C(O)C=32)OC)C(=O)CO)CCOCC1 INAUWOVKEZHHDM-PEDBPRJASA-N 0.000 description 1
- NOPNWHSMQOXAEI-PUCKCBAPSA-N (7s,9s)-7-[(2r,4s,5s,6s)-4-(2,3-dihydropyrrol-1-yl)-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7h-tetracene-5,12-dione Chemical compound N1([C@H]2C[C@@H](O[C@@H](C)[C@H]2O)O[C@H]2C[C@@](O)(CC=3C(O)=C4C(=O)C=5C=CC=C(C=5C(=O)C4=C(O)C=32)OC)C(=O)CO)CCC=C1 NOPNWHSMQOXAEI-PUCKCBAPSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- -1 185 mM trehalose) Chemical compound 0.000 description 1
- VVVDGSCGBGBGFN-UHFFFAOYSA-O 2-[decoxy(hydroxy)phosphoryl]oxyethyl-trimethylazanium Chemical compound CCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C VVVDGSCGBGBGFN-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIMDLWDNDGKDTJ-QLKYHASDSA-N 3'-deamino-3'-(3-cyanomorpholin-4-yl)doxorubicin Chemical compound N1([C@H]2C[C@@H](O[C@@H](C)[C@H]2O)O[C@H]2C[C@@](O)(CC=3C(O)=C4C(=O)C=5C=CC=C(C=5C(=O)C4=C(O)C=32)OC)C(=O)CO)CCOCC1C#N YIMDLWDNDGKDTJ-QLKYHASDSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100174180 Caenorhabditis elegans fos-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920002675 Polyoxyl Polymers 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125683 antiemetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 238000013152 interventional procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 231100000822 oral exposure Toxicity 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000009163 protein therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N rubitecan Chemical compound C1=CC([N+]([O-])=O)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229950009213 rubitecan Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 230000007046 spindle assembly involved in mitosis Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 229960000653 valrubicin Drugs 0.000 description 1
- ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N valrubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@](CC2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC(OC)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)(O)C(=O)COC(=O)CCCC)[C@H]1C[C@H](NC(=O)C(F)(F)F)[C@H](O)[C@H](C)O1 ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2013—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
La presente invención se refiere a formulaciones estables que pueden prepararse con una alta concentración de agente activo utilizando pequeñas cantidades de detergentes y a métodos para producir dichas formulaciones. En particular, la presente invención se refiere a formulaciones que contienen la inmunocitocina L19-TNFα. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Composiciones de anticuerpo
Campo de la invención
La presente invención se refiere a formulaciones estables que pueden prepararse a alta concentración de agente activo usando bajas cantidades de detergentes y a métodos de producción de dichas formulaciones. En particular, la presente invención se refiere a formulaciones que contienen la inmunocitocina L19-TNFa.
Antecedentes de la invención
La mayoría de las proteínas tienden a agregarse y a formar precipitados a medida que aumenta su concentración. La concentración de proteínas a la que se produce la agregación y la precipitación varía de una proteína a otra. Mientras que la agregación y/o precipitación de proteínas reduce sustancialmente la eficacia de las proteínas terapéuticas, muchas terapias basadas en proteínas requieren formulaciones a alta concentración de proteínas para su suministro al paciente. Por tanto, en algunas terapias con proteínas, la eficacia terapéutica es limitada porque no pueden producirse formulaciones a alta concentración o no pueden conservarse durante un periodo de tiempo útil debido a la agregación y/o precipitación de las proteínas. Con las formulaciones de proteínas para administración local esto puede suponer un problema ya que a menudo sólo pueden suministrarse pequeños volúmenes. Además, una formulación que permite una mayor concentración de proteína significa que se necesitan menos viales por cada ciclo de tratamiento. Un menor número de viales facilita la gestión de los lotes producidos, incluidas unas condiciones de transporte y conservación más sencillas. Se trata de una característica especialmente valiosa, cuando los viales deban conservarse a -80° como en el caso de L19-TNFa.
Polisorbato
Los polisorbatos son tensioactivos que se producen haciendo reaccionar el poliol, sorbitol, con óxido de etileno. El número que figura en el nombre del polisorbato indica el número de moles promedio de óxido de etileno que han reaccionado por mol de sorbitol. A continuación, el sorbitán polioxietilenado se hace reaccionar con ácidos grasos obtenidos de grasas y aceites vegetales, como el ácido láurico, ácido palmítico, ácido esteárico y ácido oleico. En el comercio se dispone de polisorbatos tales como polisorbato20 y polisorbato80.
Los polisorbatos ayudan a otros ingredientes a disolverse en un disolvente en el que normalmente no se disolverían. También ayudan a formar emulsiones reduciendo la tensión superficial de las sustancias a emulsionar.
Por consiguiente, el polisorbato, p. ej., el que se comercializa con la marca registrada "Tween", puede utilizarse para estabilizar proteínas terapéuticas inyectables porque no es pirogénico, no hemolítico y sólo ligeramente irritante. Puede aumentar la solubilización impidiendo la unión no específica que conduce a la agregación y/o precipitación. Las concentraciones más altas de polisorbato suelen dar lugar a una mayor estabilidad de la solución de proteínas. Sin embargo, los polisorbatos pueden ser tóxicos. Tras la administración intravenosa repetida, se observaron efectos sobre el hígado, el bazo y los riñones en crías de animales expuestas a la mezcla de polisorbato80:polisorbato20, produciéndose algunas muertes. En ratas y hámsters, la exposición oral repetida al polisorbato20 produjo daños en diversos lugares, incluido el tubo gastrointestinal, hígado y riñones. Por lo tanto, las fórmulas farmacéuticas deben limitarse, en la medida de lo posible, al uso de polisorbatos para administración parenteral.
Enfoques terapéuticos contra el melanoma
En pacientes con melanoma localmente avanzado, es decir, en estadio IIIB/C o estadio IVM1a, se ha demostrado que la inyección intralesional de metástasis accesibles representa una vía terapéutica atractiva con ventajas peculiares sobre otros enfoques (1).
Como agentes que se han investigado para el tratamiento intralesional del melanoma se incluyen el bacilo de Calmette-Guerin (BCG) y citocinas como el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF,granulocytemacrophage colony stimulating factor)(2), el interferón (INF)-a (3) y -p (4) y la interleucina 2 (IL2) (5-9). En algunos estudios, 72 pacientes con melanoma en estadio IIIB, IIIC e IVM1a recibieron inyecciones intratumorales de la citocina tres veces por semana, con una dosis diaria máxima de 16 millones de unidades internacionales (MUI) de interleucina-2 recombinante (IL2 - Proleukin™) o variable, según la carga tumoral individual de los pacientes (6, 7). Las nuevas lesiones que aparecían durante el tratamiento también se inyectaban y se continuaba el tratamiento hasta que todas las lesiones, incluidas las que aparecieron durante el tratamiento, finalmente retrocedieron.
El factor de necrosis tumoral a (TNFa) es una citocina producida por muchos tipos de células, principalmente monocitos y macrófagos activados. Se expresa como una proteína precursora transmembrana integral de 26 kDa a partir de la cual se libera mediante escisión proteolítica una proteína madura de aproximadamente 17 kDa. El TNFa bioactivo soluble es un homotrímero que interacciona con dos receptores diferentes de la superficie celular (10) p55TNFR (50-60 kDa) y p75TNFR (75-80 kDa).
El TNFa puede inducir la necrosis hemorrágica de tumores sólidos trasplantados,in vivo(11), y puede ejercer actividad citotóxicain vitrofrente a algunas líneas celulares tumorales (12).
La eficacia antitumoral del TNFa en algunos modelos animales fomentó la esperanza de su posible uso como agente terapéutico en el cáncer humano. Sin embargo, ensayos clínicos realizados para demostrar la eficacia antitumoral del TNFa, demostraron que la administración sistémica de dosis terapéuticamente eficaces iba acompañada de niveles inaceptablemente altos de toxicidad sistémica, siendo la hipotensión el efecto tóxico limitante de la dosis más frecuente. Por otra parte, el TNFa tiene una eliminación muy rápida del torrente circulatorio (semivida plasmática generalmente inferior a 30 minutos) (13), lo que disminuye muy rápidamente la concentración hemática por debajo de los niveles terapéuticos. Se han obtenido buenos resultados clínicos en seres humanos únicamente en tratamientos loco-regionales de tumores no diseminados (p. ej., perfusión aislada de miembros para sarcoma y melanoma) (14).
La actividad antitumoral del TNFa en muchos modelos animales parece deberse a una combinación de un efecto tóxico directo (junto con factores derivados del tumor que sinergizan con el TNFa) sobre las células endoteliales de la vasculatura tumoral en crecimiento (15), así como a alteraciones de las propiedades hemostáticas de las células endoteliales proliferantes en la angiogénesis tumoral (16). También hay pruebas de un efecto citotóxico directo sobre las células tumorales. Los efectos indirectos (mediados por el hospedador) del TNFa, tales como la inducción de la inmunidad dependiente de linfocitos T, pueden contribuir a la regresión tumoral en modelos animales (17).
A diferencia del tratamiento sistémico, la aplicación local de fármacos da lugar a una mayor concentración en el lugar de la enfermedad, lo que conduce a un mejor resultado terapéutico con menos efectos secundarios sistémicos. A diferencia de la cirugía, que normalmente se limita a unas pocas lesiones operables, los procedimientos intervencionistas intralesionales pueden permitir el tratamiento de la diseminación metastásica difusa distribuida por amplias regiones anatómicas.
Inmunocitocinas
Las inmunocitocinas son proteínas de fusión recombinantes en las que las citocinas de interés se fusionan con fragmentos de anticuerpos en los extremos C o N, que actúan como vehículos de suministro/diana. La fracción de anticuerpo favorece la acumulación preferente y la residencia prolongada en regiones en las que el antígeno afín al anticuerpo se encuentra a alta concentración. Por lo tanto, el dominio del anticuerpo se selecciona para unirse a antígenos prevalentes en el lugar de la enfermedad, de este modo, se mejora la actividad terapéutica y se preservan los órganos normales (18).
L19-TNFa, también conocido como "FIBROMUN", es una inmunocitocina, que consiste en tres polipéptidos cada uno de ellos compuesto por TNFa humano (hTNFa) fusionado en su extremo N, a través de un conector, al extremo C del anticuerpo monoclonal recombinante L19 (Figura 1). En esta fusión, L19 es una molécula de anticuerpo en el formato scFV, que reconoce el extradominio B (EDB) de la fibronectina (FN) con corte y empalme alternativo, un marcador de angiogénesis tumoral (19). El dominio soluble del TNFa se homotrimeriza, de ahí que el propio L19-TNFa sea un trímero que comprende tres dominios L19 scFV. La secuencia de aminoácidos de cada polipéptido L19-TNFa se expone en la SEQ ID NO: 1.
La FN que contiene el EDB está presente en la vasculatura recién formada de la mayoría de los tumores sólidos y neoplasias hemáticas (20), pero no lo está en casi todos los tejidos adultos sanos (a excepción de los tejidos del ciclo reproductor femenino). La construcción de L19-TNFa se desvela en el documento WO01/062298 (21). Mediante inmunohistoquímica, se demostró que la proteína de fusión L19-TNFa tiñe fuertemente los vasos sanguíneos del tumor de glioblastoma. Cantidades sustanciales de L19-TNFa permanecen en el tumor durante horas e incluso días después de la administración intratumoral. La localización de la proteína de fusión L19-TNFa en la neovasculatura tumoral se confirmó mediante análisis microrradiográfico. Se demostró la acumulación de la proteína de fusión radiomarcada en los vasos sanguíneos del tumor del ratón F9. No se detectó acumulación de la proteína de fusión radiomarcada en los vasos de los demás órganos de los ratones portadores de tumores.
L19-IL2, también conocida como "DARLEUKIN" es una inmunocitocina, que consiste en IL2 humana fusionada en su extremo N, a través de un conector, al extremo C del anticuerpo monoclonal recombinante L19 (Figura 2 y (21)). En esta construcción, L19 es un anticuerpo en el formato scFV, que reconoce el EDB, como se ha indicado anteriormente. La dimerización a través del dominio IL2 da lugar a la formación de homodímeros L19-IL2. La secuencia de aminoácidos de cada polipéptido L19-IL2 se expone en la SEQ ID NO: 2.
Las formas dirigidas de IL2 inyectadas por vía intralesional en metástasis de melanoma, muestran un tiempo de residencia prolongado en las lesiones, en comparación con la forma no dirigida, permitiendo así una acción inmunológica prolongada, una reducción de la frecuencia de las administraciones y una menor duración del tratamiento (22). Los datos clínicos preliminares mostraron que este enfoque es eficaz en el control regional de la progresión de la enfermedad, aumento del tiempo hasta la metástasis a distancia y pruebas del efecto sobre las poblaciones de células inmunitarias circulantes (23).
Además, datos preclínicos (24) han demostrado que una combinación de L19-IL2 con L19-TNFa en un modelo de ratón inmunocompetente singénico de cáncer indujo remisiones completas cuando se administró como una única inyección intratumoral, mientras que los dos componentes no conducían a una remisión curativa cuando se administraban independientemente (25).
En el documento WO2007/128563 se desvelan formulaciones de inmunocitocinas L19 (27). Sin embargo, no se ha desvelado, ni siquiera sugerido, ningún enfoque satisfactorio para formular formulaciones de L19-TNFa de alta concentración, antes de la presente divulgación.
Francesco Papadiaet al.(2012) describen la perfusión aislada de extremidades con la proteína de fusión anticuerpo monoclonal humano-citocina, L19-TNF, dirigida a tumores y melfalán e hipertermia leve en pacientes con melanoma localmente avanzado en las extremidades.
El documento WO2007/149334 se refiere a formulaciones antagonistas del VEGF adecuadas para la administración intravítrea.
Kathrin Schwageret al.(2013) describen la erradicación del cáncer cuando se utiliza la inmunocitocina L19-IL2 junto con el bloqueo de CTLA-4 o L19-TNF.
Sumario de la invención
En el presente documento se desvelan composiciones tampón que permiten formular L19-TNFa a concentraciones de 0,2 mg/ml o superiores. Sorprendentemente, se descubrió que la estabilidad de las formulaciones de L19-TNFa a estas concentraciones sólo era posible utilizando tampón de fosfato o tampón Hepes, pero no en otros tipos de tampón. Además, se descubrió que la estabilidad de las formulaciones de L19-TNFa era inesperadamente sensible a la cantidad de detergente, específicamente al polisorbato. Sólo en las composiciones de tampón de fosfato de la invención podría formularse L19-TNFa con baja cantidad de polisorbato (pero no en tampones Hepes).
En los tampones fosfato de la invención, una concentración de aproximadamente 0,01-0,03 % (v/v) de polisorbato es particularmente buena, y notablemente baja teniendo en cuenta que se descubrió que el 0,1 %-0,2 % era óptimo para la estabilidad de la solución en formulaciones de tampón Hepes tales como Hepes-7, Hepes-8 y Hepes-9, que se analizan a continuación. Sorprendentemente, en el presente documento se demuestra que una concentración de polisorbato20 tan baja como del 0,01 % (v/v) era capaz de mantener L19-TNFa soluble en tampones fosfato.
La concentración máxima de Tween/polisorbato recomendada para su uso en seres humanos es del 0,1 %. Existen varias formas de Tween/polisorbato, como el Tween/polisorbato-20, Tween/polisorbato40, Tween/polisorbato-60 y Tween/polisorbato-80.
La invención proporciona tampones que son adecuados para la inyección en un sujeto, y adecuados para disolver la inmunocitocina L19-TNFa a una concentración de al menos 0,2 mg/ml.
En un aspecto, se proporciona una composición que comprende L19-TNFa como se expone en la SEQ ID NO: 1, disuelta en un tampón de fosfato de sodio que comprende una sal a una concentración de al menos aproximadamente 1.5 mM, polisorbato a una concentración de aproximadamente 0,005 % a aproximadamente 0,1% (v/v), y un estabilizador, en donde el pH del tampón de fosfato de sodio es superior a 7,5 e inferior a 9; en donde la sal es NaCl; el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5% p/v; y la concentración del estabilizador es de aproximadamente 65 a aproximadamente 185 mM. Como se desvela en el presente documento, esta composición tampón permite disolver la inmunocitocina L19-TNFa a una concentración superior a 0,2 mg/ml. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la concentración de la inmunocitocina L19-TNFa es de al menos aproximadamente 0,2 mg/ml.
En algunas realizaciones, el pH de la composición puede estar dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 7,6-8,9 o 7,7-8,8, más preferentemente 7,8-8,8 u 8,5 o aproximadamente 8,5. Lo más preferentemente, el pH de la composición es de 8 o de aproximadamente 8.
También se proporciona una composición que comprende la inmunocitocina L19-TNFa como se expone en la SEQ ID NO:1, disuelta en un tampón de fosfato de sodio que comprende NaCl a una concentración de 5-50 mM, polisorbato a una concentración de 0,005-0,03 % (v/v), y un estabilizador, en donde el pH del tampón de fosfato de sodio es de 7,5-8,5, en donde el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1.5 % p/v; en donde la concentración del estabilizador es de aproximadamente 65 mM a aproximadamente 185 mM; y en donde la concentración de la inmunocitocina L19-TNFa es de al menos 0,2 mg/ml.
También se proporciona una composición que comprende la inmunocitocina L19-TNFa como se expone en la SEQ ID NO:1, disuelta en un tampón de fosfato de sodio que comprende NaCl a una concentración de aproximadamente 5 50 mM, polisorbato a una concentración de aproximadamente 0,005-0,03 % (v/v), y un estabilizador, en donde el pH del tampón de fosfato de sodio es de aproximadamente 7,5-8,5, en donde el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5%p/v; en donde la concentración del estabilizador es de aproximadamente 65 mM a aproximadamente 185 mM; y en donde la concentración de la inmunocitocina L19-TNFa es de al menos aproximadamente 0,2 mg/ml.
En cualquiera de las realizaciones desveladas en el presente documento, el polisorbato puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento (presentado como v/v) o alrededor de dicho intervalo: 0,005-0,03 %, 0,008-0,03 % o 0,01-0,03 % o 0,005-0,1 % o más preferentemente 0,01 0,02 %. Lo más preferentemente, el polisorbato está presente al 0,01 % o a aproximadamente al 0,01 %, (v/v). En algunas realizaciones, la concentración de polisorbato puede ser ligeramente superior, p. ej., hasta una concentración máxima del 0,04 % (v/v), aproximadamente del 0,04 % (v/v), 0,05 % (v/v), aproximadamente del 0,05 % (v/v), 0,06 % (v/v), aproximadamente del 0,06 % (v/v), 0,07 % (v/v), aproximadamente del 0,07 % (v/v), aproximadamente del 0,07 % (v/v), 0,08 % (v/v), aproximadamente del 0,08 % (v/v), 0,09 % (v/v), aproximadamente del 0,09 % (v/v), 0,1 % (v/v) o aproximadamente del 0,1 % (v/v). El polisorbato puede ser polisorbato20 o polisorbato 80. Preferentemente, el polisorbato es polisorbato20. Se utiliza una sal para mantener la isotonicidad. El experto apreciará que la sal debe ser una sal farmacéuticamente aceptable. La sal es preferentemente cloruro de sodio, aunque también pueden utilizare otras sales, tales como, cloruro de potasio, sulfato de magnesio, cloruro de magnesio, cloruro de calcio o fosfato de calcio. La sal puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 1,5-90 mM, 2-80 mM, 5-75 mM, 10-50 mM, preferentemente 10-40 mM, más preferentemente 20-30 mM. En algunas realizaciones, la sal está presente a 30 mM o aproximadamente a 30 mM. En realizaciones preferidas, la sal es NaCl.
En algunas realizaciones, la sal es NaCl. El NaCl puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 10-50 mM, preferentemente 10 40 mM, más preferentemente 20-30 mM. Lo más preferentemente, el NaCl está presente a 30 mM o aproximadamente a 30 mM.
Para estabilizar la proteína en su conformación natural se utiliza un estabilizador. En la técnica se conocen bien estabilizadores adecuados para soluciones de proteínas. El estabilizador puede ser un azúcar. El estabilizador puede seleccionarse del grupo que consiste en manitol, trehalosa, sacarosa, sorbitol, maltosa y xilitol. Los resultados proporcionados en el presente documento demuestran que los distintos tipos de estabilizador son eficaces. El estabilizador (p. ej., un azúcar) está presente a una concentración de aproximadamente 65 mM a aproximadamente 185 mM o preferentemente dentro o alrededor de un intervalo de 65-85 mM.
Lo más preferentemente es que el estabilizador sea manitol. El manitol puede estar presente a una concentración de aproximadamente 65 mM a aproximadamente 185 mM o preferentemente dentro o alrededor de un intervalo de 65 85 mM. Lo más preferentemente, el manitol está presente a 75 mM o aproximadamente a 75 mM.
La inmunocitocina L19-TNFa puede estar presente a una concentración como la que se expone en el presente documento o alrededor de dicha concentración: al menos 0,3 mg/ml, al menos 0,4 mg/ml, al menos 0,5 mg/ml, al menos 0,6 mg/ml o al menos 0,8 mg/ml. Preferentemente, la inmunocitocina L19-TNFa está presente a 0,45 mg/ml o a aproximadamente 0,45 mg/ml, aunque en algunas realizaciones también pueden preferirse concentraciones más altas. La inmunocitocina L19-TNFa puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 0,1-2,0 mg/ml, 0,2-1,5 mg/ml, 0,3-1,0 mg/ml, 0,4 0,8 mg/ml o 0,4-0,6 mg/ml.
El polisorbato puede ser polisorbato20. En algunas realizaciones, el pH de la composición puede estar dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 7,6-8,4 o 7,7-8,3, más preferentemente 7,8-8,8, 7,8-8,2 o 7,9-8,1. Lo más preferentemente, el pH de la composición es de 8 o de aproximadamente 8.
El tampón de fosfato de sodio puede comprender glicerol. El glicerol puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento (presentado como p/v) o alrededor de dicho intervalo: 0,5-1,5%, 1-1,5%, 1-1,2%. Lo más preferentemente, el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a una concentración del 1 % en p/v o de aproximadamente el 1 % en p/v.
El fosfato de sodio puede comprender EDTA. El EDTA puede estar presente a una concentración dentro de un rango como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 1-20 mM, preferentemente 2-15 mM o más preferentemente 3-10 mM o 6-9 mM. Lo más preferentemente es que el tampón de fosfato de sodio que comprende EDTA esté presente a 5 mM o a aproximadamente 5 mM. Sin embargo, el EDTA no es necesario para la estabilidad de la propia formulación, pero es útil como conservante.
El tampón de fosfato de sodio puede comprender NaH<2>PO<4>. El NaH<2>PO<4>puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 1-100 mM, preferentemente 2-50 mM, 3-30 mM, 5-25 mM, 8-23 mM, 10-20 mM o más preferentemente 12-18 mM. Lo más preferentemente, el NaH<2>PO<4>está presente a una concentración de 15 mM o de aproximadamente 15 mM. El tampón de fosfato de sodio puede comprender Na<2>HPO<4>. El Na<2>HPO<4>puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 1-100 mM, preferentemente 2-50 mM, 3-30 mM, 4-25 mM, 5-20 mM, 6-18 mM o más preferentemente 7-15 mM. Lo más preferentemente es que el Na<2>HPO<4>esté presente a una concentración de 10 mM o 10 mM.
En algunas realizaciones, el tampón de fosfato de sodio puede comprender KCl. El KCl puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 0,1-10 mM, 0,2-5 mM, 0,5-3 mM, preferentemente 1-2 mM, más preferiblemente 1,1-1,9, 1,2-1,9, 1,3-1,8, 1,4-1,7 mM 0 1,4-1,6. En algunas realizaciones, no hay KCl. Sin embargo, en algunas realizaciones, el KCl puede estar presente a una concentración mucho más alta, por ejemplo de hasta 5 mM o de aproximadamente 5 mM, 10 mM o de aproximadamente 10 mM, 20 mM o de aproximadamente 20 mM, 30 mM o de aproximadamente 30 mM, 40 mM o de aproximadamente 40 mM, 50 mM o de aproximadamente 50 mM, 100 mM o de aproximadamente 100 mM. Lo más preferentemente, el tampón de fosfato de sodio comprende KCl a una concentración de 1,5 mM o de aproximadamente 1,5 mM.
Ventajosamente, el tampón de fosfato de sodio comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a un pH de 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. Ventajosamente, la concentración de inmunocitocina L19-TNFa es de al menos 0,4 mg/ml.
También se prefieren tampones de fosfato de sodio que comprenden aproximadamente NaH<2>PO<4>15 mM y aproximadamente Na<2>HPO<4>10 mM a un pH de 8,0, aproximadamente manitol 75 mM, aproximadamente glicerol al 1 % (p/v), aproximadamente KCl 1,5 mM, aproximadamente NaCl 30 Mm y aproximadamente polisorbato20 al 0,01 %. Ventajosamente, la concentración de inmunocitocina L19-TNFa es de al menos aproximadamente 0,4 mg/ml.
Asimismo, ventajosamente, el tampón de fosfato de sodio comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a un pH de 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, polisorbato20 al 0,01 % y EDTA 5 mM. Ventajosamente, la concentración de inmunocitocina L19-TNFa es de al menos 0,4 mg/ml.
También se prefieren tampones de fosfato de sodio que comprenden aproximadamente NaH<2>PO<4>15 mM y aproximadamente Na<2>HPO<4>10 mM a un pH de 8,0, aproximadamente manitol 75 mM, aproximadamente glicerol al 1 % (p/v), aproximadamente KCl 1,5 mM, aproximadamente NaCl 30 mM, aproximadamente polisorbato20 al 0,01 % y aproximadamente EDTA 5 mM. Ventajosamente, la concentración de inmunocitocina L19-TNFa es de al menos aproximadamente 0,4 mg/ml.
En otro aspecto, las composiciones desveladas en el presente documento se proporcionan para su uso en un método de tratamiento del cáncer en el cuerpo humano o animal mediante terapia. Dicho tratamiento implica la administración de la composición a un ser humano o animal, preferentemente un ser humano, en donde la administración comprende inyectar la composición en un tumor o lesión o administrar la composición por infusión.
Las composiciones de la invención son particularmente adecuadas para su uso en el tratamiento de sarcomas. Entre los tipos de sarcoma se incluye angiosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma fibroblástico, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, osteosarcoma, rabdomiosarcoma y sarcoma de tejidos blandos.
En algunas realizaciones, la composición comprende además la inmunocitocina L19-IL2.
El cáncer tratado puede ser un tumor primario. El cáncer tratado puede ser un tumor metastásico.
Las composiciones de la invención son particularmente adecuadas para su uso en el tratamiento de cánceres de piel, p. ej., tumor cutáneo maligno, melanoma o carcinoma, ya que su ubicación se presta a la inyección local directa. También pueden tratarse otros tumores del organismo, y las inyecciones pueden dirigirse a tumores de tejidos blandos u órganos internos, p. ej., mediante ecografía (26).
El tratamiento de acuerdo con la invención puede utilizarse en un contexto quirúrgico, donde la inyección se realiza antes, durante o después de la cirugía tumoral.
Ventajosamente, la inmunocitocina L19-IL2 como se expone en la SEQ ID NO:2 también se administra al paciente tratado con la inmunocitocina L19-TNFa. Cuando el tratamiento implica la administración de la inmunocitocina L19-IL2, el método también puede comprender mezclar una composición del primer aspecto con una formulación de inmunocitocina L19-IL2, antes de la administración. Como se describe a continuación, las composiciones de L19-TNFa y L19-IL2 se administran por separado.
La inmunocitocina L19-TNFa y las inmunocitocinas L19-IL2 pueden proporcionarse como formulaciones independientes para permitir su administración secuencial (en cualquier orden), que incluye prácticamente la administración simultánea en la que las inmunocitocinas L19-TNFa y L19-IL2 se administran prácticamente al mismo tiempo. Por ejemplo, el método de tratamiento puede comprender la inyección de la formulación de L19-TNFa y, a continuación, la inyección inmediata de la formulación de L19-IL2 (o viceversa).
La administración secuencial también puede utilizarse para administrar la segunda inmunocitocina después un periodo de tiempo posterior a la administración de la primera inmunocitocina. Por ejemplo, las inmunocitocinas pueden inyectarse en 24 horas, 12 horas, 1 hora, o preferentemente con 30 minutos de diferencia. Preferentemente, las inmunocitocinas se administran con pocos minutos de diferencia. Las dos inmunocitocinas pueden inyectarse en el mismo punto en el lugar del tumor o en puntos diferentes. Puede administrarse una inyección combinada de ambas inmunocitocinas. Puede ser preferible administrar una dosis en múltiples inyecciones, por ejemplo, inyectar en múltiples localizaciones sobre el tumor o alrededor del lugar del tumor, o facilitar la administración de un mayor volumen total de inmunocitocina.
La inmunocitocina L19-TNFa y las inmunocitocinas L19-IL2 pueden proporcionarse como una preparación combinada.
Ventajosamente, la formulación de L19-TNFa y la formulación de L19-IL2 pueden proporcionarse como formulaciones independientes aunque un médico las administre simultáneamente. Una formulación de L19-TNFa de acuerdo con la invención puede mezclarse con una formulación de L19-IL2 antes de su administración al paciente. Las formulaciones de L19-TNFa y L19-IL2 pueden mezclarse menos de 1 hora antes de la administración, menos de 30 minutos antes de la administración, menos de 15 minutos antes de la administración, menos de 5 minutos antes de la administración, menos de 2 minutos antes de la administración o menos de 1 minuto antes de la administración. En otro enfoque, el médico administra la formulación de L19-TNFa y la formulación de L19-IL2 prácticamente al mismo tiempo, sin mezcla previa.
La invención también proporciona un método de preparación de una formulación adecuada para su uso como medicamento inyectable contra el cáncer, comprendiendo el método proporcionar una composición de acuerdo con la invención, y mezclar dicha composición con una formulación de inmunocitocina L19-IL2. Este método puede realizarse inmediatamente antes de administrar la mezcla a un paciente.
Preferentemente, la inmunocitocina L19-IL2 se formula en un tampón de fosfato que comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de 1-50 mM, NaCl a una concentración de 1-50 mM, KCl a una concentración de 1-2 mM, manitol a una concentración de 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de 0,05-0,2 % (v/v), Glicerol a una concentración de 0,5-2 % y EDTA a una concentración de 1-20 mM y un pH de 5,5-7,0.
La inmunocitocina L19-IL2 también se formula en un tampón de fosfato que comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de 1-50 mM, NaCl a una concentración de 1-50 mM, KCl a una concentración de 1-2 mM, manitol a una concentración de 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de 0,05-0,3 % (v/v) y Glicerol a una concentración de 0,5-2 % y un pH de 5,5-7,0. En algunas realizaciones, se utiliza una concentración de polisorbato80 (v/v) del 0,28 % o de aproximadamente el 0,28 %.
De manera alternativa, la inmunocitocina L19-IL2 puede formularse en un tampón de fosfato que comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,2 % (v/v), Glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2 % y EDTA a una concentración de aproximadamente 1-20 mM y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
De manera alternativa, la inmunocitocina L19-IL2 también puede formularse en un tampón de fosfato que comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1 50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50 200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,3 % (v/v) y Glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2 % y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
El NaH<2>PO<4>puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 2-25 mM, 3-20 mM, más preferentemente 5-15 mM. Lo más preferentemente es que el NaH<2>PO<4>esté presente a 6,7 mM o a aproximadamente 6,7 mM. El NaCl puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 5-40 mM o 10-30 mM o más preferentemente 15-25 mM. Lo más preferentemente es que el NaCl esté presente a 20 mM o a aproximadamente 20 mM. El KCl puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 1,2-2,0mM, más preferentemente 1,5-1,8 mM. Lo más preferentemente, el KCl está presente a 1,8 mM o a aproximadamente 1,8 mM.
El manitol puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 80-180 mM o más preferentemente 100-150 mM. Lo más preferentemente, el manitol está presente a 133 mM o aproximadamente a 133 mM. El polisorbato80 puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 0,1-0,3 %, 0,07-0,18 % o más preferentemente, 0,08-0,15 %. Lo más preferentemente, el polisorbato80 está presente al 0,1 % (v/v) o aproximadamente al 0,1 % (v/v).
El glicerol puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento (presentado como p/v) o alrededor de dicho intervalo: 0,7-1,8%o más preferentemente 0,8-1,5 %. Lo más preferentemente, el glicerol está presente al 1 % (p/v) o aproximadamente al 1 % (p/v). El EDTA puede estar presente a una concentración dentro de un intervalo como el que se expone en el presente documento o alrededor de dicho intervalo: 2-15 mM o más preferentemente 3-10 mM o 6-9 mM. Lo más preferentemente es que el EDTA esté presente a 5 mM o a aproximadamente 5 mM. El pH es preferentemente 6,0-6,8, más preferentemente 6,1-6,5 mM o 6,2-6,4. Lo más preferentemente, el pH es de 6,3 o de aproximadamente 6,3. En una realización preferida, no hay EDTA.
Preferentemente, la formulación de L19-IL2 comprende NaH<2>PO<4>6,7 mM, NaCl 20 mM, KCl 1,8 mM, manitol 133 mM, polisorbato80 al 0,1 % (v/v), glicerol al 1 % (p/v) y EDTA 5 mM y tiene un pH de 6,3.
Lo más preferentemente, la formulación de L19-IL2 comprende NaH<2>PO<4>6,7 mM, NaCl 20 mM, KCl 1,8 mM, manitol 133 mM, polisorbato80 al 0,1-0,3 % (v/v) y glicerol al 1 % (p/v) y tiene un pH de 6,3.
De manera alternativa, la formulación de L19-IL2 comprende aproximadamente NaH<2>PO<4>6,7 mM, aproximadamente NaCl 20 mM, aproximadamente KCl 1,8 mM, aproximadamente manitol 133 mM, aproximadamente polisorbato80 al 0,1 % (v/v), aproximadamente glicerol al 1 % (p/v) y aproximadamente EDTA 5 mM y tiene un pH de aproximadamente 6,3.
De manera alternativa, la formulación de L19-IL2 comprende aproximadamente NaH<2>PO<4>6,7 mM, aproximadamente NaCl 20 mM, aproximadamente KCl 1,8 mM, aproximadamente manitol 133 mM, aproximadamente polisorbato 80 al 0,1-0,3 % (v/v) y aproximadamente glicerol al 1 % (p/v) y tiene un pH de aproximadamente 6,3.
La invención también proporciona kits. Un kit de acuerdo con la invención puede comprender una preparación deshidratada (p. ej., liofilizada) de inmunocitocina L19-TNFa en un primer recipiente, y una solución de tampón de la invención como se desvela en el presente documento. Un kit puede comprender además una preparación liofilizada de inmunocitocina L19-IL2 en un segundo recipiente y una segunda solución de tampón como se desvela en el presente documento. En algunas realizaciones, el kit puede comprender una preparación de las inmunocitocinas L19-TNFa y/o L19-IL2 en forma de una solución líquida estéril, en donde la inmunocitocina se disuelve en un disolvente o en un tampón adecuado como se describe en el presente documento. Las soluciones de inmunocitocinas de la invención son preferentemente apirógenas. El experto entenderá que, cuando se proporciona independientemente de una composición de inmunoconjugado deshidratada o líquida, el tampón se proporcionará en un recipiente independiente.
Los kits pueden incluir instrucciones para disolver las inmunocitocinas, y/o mezclar las inmunocitocinas, y/o administrar las inmunocitocinas a un paciente con cáncer.
También se proporciona un kit que comprende un primer recipiente que contiene una composición de acuerdo con la invención. Como se ha indicado, el kit puede contener un segundo recipiente que comprenda una preparación de inmunocitocina L19-IL2. Los kits también pueden incluir elementos para facilitar la administración de las inmunocitocinas al paciente, p. ej., jeringuillas y similares.
Breve descripción de las figuras
Figura 1.Estructura esquemática de la cadena polipeptídica de L19-TNFa (cuadro superior) y secuencia de aminoácidos de L19-TNFa (cuadro inferior). (En la SEQ ID NO: 1 se expone la secuencia de aminoácidos de L19-TNFa).
Figura 2.Estructura esquemática de la cadena polipeptídica de L19-IL2 (cuadro superior) y secuencia de aminoácidos de L19-IL2 (cuadro inferior). (En la SEQ ID NO: 2 se expone la secuencia de aminoácidos de L19-IL2).
Figura 3.Diagrama del esquema de clonación de L19-TNFa.
Figura 4.Diagrama del esquema de clonación de L19-IL2.
Figura 5.Absorbancia a 280 nm de la inmunocitocina L19-TNFa en la solución de tampón inicial en puntos temporales en meses durante un periodo de 60 meses. La línea horizontal muestra el límite de detección inferior.
Figura 6.Transferencia Western del precipitado procedente de la formulación inicial de L19-TNFa, recuperada por centrifugación para obtener un sedimento que se resuspendió y se procesó frente a L19-TNFa disuelto como patrón. Carril 1: patrón de L19-TNFa (condiciones reductoras); carril 2: patrón de L19-TNFa (condiciones no reductoras); carril 3: sedimento de L19-TNFa (condiciones reductoras); Carril 4: sedimento de L19-TNFa (condiciones no reductoras).
Figura 7.Tratamiento de un paciente con L19-TNFa en tampón de fosfato junto con L19-IL2. El TAC del día 0 muestra la presencia de la lesión de melanoma (cuadro superior) y el TAC tomado seis meses después del inicio del tratamiento, muestra que la lesión ha desaparecido por completo (cuadro inferior).
Figura 8.Tratamiento de un paciente con L19-TNFa en tampón de fosfato junto con Doxorrubicina. Un paciente con condrosarcoma se trató con 2 ciclos de L19-TNFa (17 ug/kg - 3 inyecciones semanales por ciclo) y doxorrubicina (60 mg/m21 inyección semanal por ciclo). La lesión específica en el pulmón muestra estabilización del crecimiento en la TC después de 2 ciclos de tratamiento.
Descripción detallada
Las siguientes aplicaciones de la presente invención se proporcionan a modo de ejemplo y no de limitación.
En algunas realizaciones, la composición de la invención puede administrarse sola o junto con otros tratamientos, ya sea de manera simultánea o secuencial dependiendo de la afección que vaya a tratarse.
Los tratamientos que implican las composiciones de la invención pueden incluir la administración de dosis adecuadas de un compuesto contra el cáncer. Los compuestos contra el cáncer son compuestos citotóxicos que inhiben el crecimiento, la división y/o la proliferación de las células cancerosas. Los compuestos contra el cáncer pueden, en algunas circunstancias, tener un efecto sobre las células normales no cancerosas de un paciente. Un compuesto contra el cáncer puede, por ejemplo, inhibir el ciclo celular o activar la apoptosis. Entre los compuestos adecuados contra el cáncer que inhiben el ciclo celular, se incluyen agentes dañinos para el ADN y agentes antimitóticos, incluidos los inhibidores del ensamblaje del huso mitótico. Un agente dañino para el ADN es un compuesto quimioterápico que induce DSB(double-strand break,roturas de doble cadena) de ADN en el ADN celular, inhibiendo o suprimiendo así la replicación del ADN. En la técnica se conocen muchos compuestos adecuados para su uso en el tratamiento del cáncer, que incluyen, por ejemplo, bleomicina hidroxiurea, mitomicina y actinomicina e inhibidores de la actividad de la topoisomerasa I y II, incluidas las antraciclinas como la daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitoxantrona y valrrubicina, etopósido y tenipósido, y miembros de la familia de los tecanos, p. ej., irinotecán, topotecán, rubitecán. Los agentes dañinos para el ADN pueden utilizarse como se describe en el presente documento en cualquier forma o formulación conveniente. Por ejemplo, puede emplearse cualquier forma adecuada de isómero, sal, solvato, químicamente protegida, o profármaco de un agente dañino para el ADN en particular.
En algunas realizaciones preferidas, el agente dañino para el ADN puede ser doxorrubicina ((8S, 10S)-10-(4-amino-5-hidroxi-6-metil-tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-6,8,11-trihidroxi-8-(2-hidroxiacetíl)-1-metoxi-7, 8, 9, 10-tetrahidrotetracen-5,12-diona) tal como morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina y desoxidoxorrubicina. La doxorrubicina es un agente intercalante de las antraciclinas que se utiliza ampliamente en el tratamiento del cáncer con nombres comerciales tales como Adriamycin™ y Rubex™.
En algunas realizaciones, la composición de la invención puede administrarse junto con doxorrubicina.
Generalmente es conveniente proporcionar la composición de la invención y la doxorrubicina como moléculas independientes. Estas pueden proporcionarse como una preparación combinada o como formulaciones independientes para permitir la administración simultánea o secuencial. El médico puede determinar la forma más adecuada de administrar al paciente la dosis única de cada L19-TNFa y doxorrubicina.
Por ejemplo, el método de tratamiento puede comprender la administración de la composición de la invención y la doxorrubicina en inyecciones independientes, simultánea o secuencialmente.
Cuando se usa la administración secuencial, las inmunocitocinas se administran preferentemente en un plazo de 24 horas, 12 horas, 1 hora o más preferentemente con 30 minutos de diferencia.
La cantidad de L19-TNFa administrada dependerá del tamaño y de la naturaleza del tumor, entre otros factores. Por ejemplo, la dosis de L19-TNFa puede estar en el intervalo de 10 -17 pg/kg y la dosis de doxorrubicina ser de 60 mg/m2. El médico determinará una cantidad terapéuticamente eficaz para su administración.
Otros tratamientos que pueden usarse junto con la invención incluyen la administración de dosis adecuadas de fármacos analgésicos, tales como fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ácido acetilsalicílico (Aspirina), paracetamol, ibuprofeno o ketoprofeno) u opiáceos tales como morfina, o antieméticos. Cuando las inmunocitocinas se administran para el tratamiento del cáncer, éstas se inyectan por vía parenteral. En una realización, las inmunocitocinas se inyectan en el lugar del tumor, preferentemente mediante inyección intratumoral. La inyección peritumoral, p. ej., la inyección intradérmica local, es otro método adecuado para administrar la inmunocitocina localmente en un lugar del tumor. En algunas realizaciones, el inmunoconjugado L19-TNFa puede administrarse mediante infusión, p. ej., infusión intravenosa / sistémica. Las realizaciones de la invención en las que el inmunoconjugado L19-TNFa está presente a baja concentración, son particularmente adecuadas para la administración por infusión.
El tratamiento de un tumor de acuerdo con la presente invención puede incluir la erradicación completa del tumor. La desaparición de cualquier indicio de tumor vital después de la interrupción de las inyecciones, representa el tratamiento completo del tumor. La desaparición del tumor puede determinarse cuando éste no tiene volumen discernible o ya no es visible. El tratamiento puede comprender un tratamiento para erradicar el tumor y prevenir su nuevo crecimiento.
Los pacientes se supervisan preferentemente durante un período de seguimiento de al menos un mes, preferentemente de al menos seis meses o de al menos un año, después de la administración de la combiterapia de inmunocitocinas. La desaparición del tumor y la ausencia de su nuevo crecimiento, podrán observarse en el período de seguimiento. Puede observarse ausencia de nuevo crecimiento tumoral.
La cantidad de L19-TNFa y la cantidad de L19-IL2 administrada dependerá del tamaño y de la naturaleza del tumor, entre otros factores. Por ejemplo, la dosis de L19-TNFa puede estar en el intervalo de 20 jg - 2 mg, p. ej., 100-1000 |jg, 200-600 jg o entre 300-400 jg . La dosis puede ser de 50-500 jg (p. ej., 100-400 jg ) por tratamiento. La dosis de L19-IL2 puede estar en el intervalo de 1-15 Mio UI (p. ej., 10-13 Mio UI) por tratamiento. El tratamiento puede consistir en 13 Mio UI de L19-IL2 y 400 jg de L19-TNF en un volumen aproximado de 2,0 ml como inyección intratumoral. la dosis de L19-IL2 puede estar en el intervalo de 20 jg - 3 mg, p. ej., 100-2500 jg , 300-2000 jg o entre 500-1800 jg . Estos son sólo ejemplos y, por supuesto, pueden utilizarse diferentes dosis. Las formulaciones de esta invención permiten administrar mayores dosis sin necesidad de un gran volumen. El médico determinará una cantidad terapéuticamente eficaz para su administración.
Los métodos pueden comprender el tratamiento de un tumor en un paciente mediante la inyección de la formulación de L19-TNFa, opcionalmente con la formulación de L19-IL2 en el lugar del tumor, en donde el tumor desaparece en ausencia de dosis adicionales de la(s) inmunocitocina(s). Opcionalmente, pueden administrarse dosis adicionales.
En caso de recidiva tumoral después del periodo de seguimiento, o si se desarrollan otros tumores, los pacientes pueden recibir un tratamiento adicional con terapia de inmunocitocinas de acuerdo con la invención, para extirpar el tumor posterior.
Las moléculas de ácido nucleico que codifican las inmunocitocinas, y partes de las mismas, pueden utilizarse en relación con las composiciones y métodos de la invención definidos en las reivindicaciones. La molécula de ácido nucleico puede ser un vector, p. ej., un plásmido adecuado para la expresión de la secuencia de nucleótidos. Normalmente, la secuencia de nucleótidos está unida operativamente a un elemento regulador, tal como un promotor de la transcripción. En las Figuras 3 y 4 se muestran vectores ilustrativos para la expresión de L19-TNFa y L19-IL2, respectivamente. El experto apreciará que pueden construirse fácilmente otros vectores de ADN capaces de expresar las inmunocitocinas L19-TNFa y L19-IL2 de las Figuras 1 y 2. El uso de dichos vectores de ADN también se incluye en el alcance de esta invención cuando se usan en relación con las composiciones y métodos definidos en las reivindicaciones.
Las moléculas de ácido nucleico pueden estar contenidas en una célula hospedadora, que puede ser una célula transfectada con las moléculas de ácido nucleico, o una hija de dicha célula. Pueden utilizarse células, especialmente células eucariotas, p. ej., células HEK y CHO, o células bacterianas, p. ej.,Escherichia coli,que contengan las moléculas de ácido nucleico.
Las inmunocitocinas de la invención pueden producirse mediante técnicas recombinantes, por ejemplo expresando ADN recombinante que codifique la inmunocitocina en una célula. Normalmente la expresión se realiza en una célula hospedadora que contenga ácido nucleico, como se ha descrito anteriormente. Por lo tanto, la expresión puede comprender cultivar dicha célula hospedadora. Para L19-TNFa, la trimerización de las subunidades puede producirse en la célula o durante la purificación de las proteínas de fusión de la célula (21), (24).
Ejemplo 1: Formulaciones de inmunocitocina L19-TNFa en tampón Hepes
Se prepararon las siguientes formulaciones para alcanzar una concentración de L19-TNFa de 0,4 mg/ml. Se obtuvieron formulaciones que permitían producir y conservar concentraciones más elevadas de L19-TNFa sin que se produjera precipitación.
El componente de tampón primario era Hepes, y el pH del tampón, las concentraciones de sal y de polisorbato se modificaron.
Las muestras de cada formulación de L19-TNFa se conservaron a -80 °C ± 5 °C y se sometieron a múltiples ciclos de congelación y descongelación. Se utilizaron tres criterios de aceptación para determinar si cada tampón proporciona una formulación de L19-TNFa aceptable: 123
1. Claridad visual = solución transparente sin partículas visibles,
2. Estabilidad a A280 = menos del 5 % de pérdida de absorbancia a 280 nm en comparación con el valor original, y
3. Pureza del trímero = pureza superior al 95 %, evaluada mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC,size exclusión chromatography).
Se prepararon tampones Hepes a pH 7,5 y 8,0:
Hepes-1 comprende Hepes 30 mM a pH 7,5, EDTA 5 mM, manitol 75 mM y glicerol al 1,8%(p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-2 comprende Hepes 30 mM a pH 7,5, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,1 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-3 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM y glicerol al 1,8 % (p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-4 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,005 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-5 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,01 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-6 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,05 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-7 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,1 %.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Hepes-8 comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,2 %.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Se prepararon formulaciones adicionales para alcanzar una concentración de L19-TNFa de0,2 mg/ml:
Hepes-A comprende Hepes 30 mM a pH 7,5, EDTA 5 mM, manitol 75 mM y glicerol al 1,8 % (p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-B comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM y glicerol al 1,8 % (p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hepes-C comprende Hepes 15 mM a pH 8,0, EDTA 5 mM, manitol 75 mM, glicerol al 1,8 % (p/v) y polisorbato20 al 0,1 %.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Las formulaciones basadas en Hepes mostraron partículas en suspensión, que sólo pudieron disolverse en algunos casos utilizando polisorbato20 al 0,1 % o al 0,2 %.
Después de la optimización, el tampón más preferido basado en Hepes para L19-TNFa fue Hepes 15 mM, Manitol 75 mM, polisorbato20 al 0,2 % (v/v), Glicerol al 1,8 % (p/v), EDTA 5 mM, pH 8,0 - este tampóncumple los tres criterios de aceptacióny se denominaHepes-9.
L19-TNFa se formuló en el tampón Hepes-9 a una concentración final de 0,092 mg/ml y se analizó su estabilidad. Esta formulación de inmunocitocina L19-TNFa se conservó a -80° durante hasta 60 meses, durante los cuales se supervisó la concentración de proteína midiendo la absorbancia a 280 nm.
La figura 5 muestra que la absorbancia a 280 nm no disminuye sustancialmente a lo largo del periodo de 60 meses, lo que indica que el tampón Hepes-9 inicial es adecuado para la conservación a largo plazo. La línea horizontal muestra el límite de detección inferior. La inmunocitocina L19-TNFa es estable en el tampón inicial conservado a -80° durante hasta 60 meses. 1 mg de L19-TNFa corresponde aproximadamente a una DO = 1,3.
Ejemplo 2: Aumento de concentración de formulaciones de L19-TNFa
El tampón Hepes-9 descrito en el Ejemplo 1 no era adecuado para concentraciones más altas de L19-TNFa cuando se partía de concentraciones más bajas. Por ejemplo, cuando se aumentó la concentración de 0,092 mg/ml hasta 0,4 - 0,45 mg /ml, aparecieron pequeñas partículas en la suspensión y después de la centrifugación se recuperó un sedimento visible.
Después de concentrar la solución de inmunocitocina L19-TNFa en el tampón Hepes-9, el producto se conservó a 2 8 °C y a -80 °C durante 24 horas. En ambos casos seguían siendo visibles pequeñas partículas blancas en suspensión. La absorbancia a 280 nm (A<280>nm) de la solución se leyó después de la centrifugación y se registró una pérdida de DO del 6 %-8 %. Además, cuando el producto se filtró después de su conservación a 2-8 °C, se registró una pérdida de la lectura de A<280>nm del 16 %, como se muestra en la Tabla 1.
Tabla 1
Ejemplo 3: Identificación del precipitado
Para confirmar que la pérdida de absorbancia después de la concentración se debía realmente a una precipitación de L19-TNFa, se resuspendió el sedimento en solución y se realizó una transferencia Western, utilizando un anticuerpo anti-TNFa y un sustrato quimioluminiscente.
La figura 6 muestra bandas en el peso molecular de L19-TNFa tanto en la solución estándar como en el sedimento en condiciones reductoras y no reductoras. Esto indica que cuando aumenta la concentración de L19-TNFa en el tampón Hepes-9, la proteína precipita. Carril 1: patrón de Ll9-TNFa (condiciones reductoras); carril 2: patrón de L19-TNFa (condiciones no reductoras); carril 3: sedimento de L19-TNFa (condiciones reductoras); Carril 4: sedimento de L19-TNFa (condiciones no reductoras).
Ejemplo 4: Diversas formulaciones de inmunocitocina L19-TNFa
Se prepararon las siguientes formulaciones para alcanzar una concentración de L19-TNFa de 0,4 mg/ml. Se obtuvieron formulaciones que permitían producir y conservar concentraciones más elevadas de L19-TNFa sin que se produjera precipitación.
Se modificó el componente de tampón primario, el pH del tampón, las concentraciones de sal y de polisorbato. Las muestras de cada formulación de L19-TNFa se conservaron a -80 °C ± 5 °C y se sometieron a múltiples ciclos de congelación y descongelación. Se utilizaron tres criterios de aceptación para determinar si cada tampón proporciona una formulación de L19-TNFa aceptable:
1. Claridad visual = solución transparente sin partículas visibles,
2. Estabilidad a A280 = menos del 5 % de pérdida de absorbancia a 280 nm en comparación con el valor original, y
3. Pureza del trímero = pureza superior al 95 %, evaluada mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC,size exclusión chromatography).
Se prepararon tampones basados en Tris a pH 8,0 y 8,5:
Tris-1 comprende Tris 15 mM a pH 8,0 con manitol 75 mM y NaCl 30 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Tris-2 comprende Tris 15 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, NaCl 30 mM y glicerol al 1 % (p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Tris-3 comprende Tris 15 mM a pH 8,5 y manitol 75 mM y NaCl 30 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Tris-4 comprende Tris 15 mM a pH 8,5, manitol 75 mM, NaCl 30 mM y glicerol al 1 % (p/v). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Los tampones de acetato se prepararon a pH 5:
Acetato-1 comprende NaAc 20 mM a pH 5,0, Sacarosa al 8,5 % (p/v), EDTA 130 pM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Acetato-2 comprende NaAc 20 mM a pH 5,0, Sacarosa al 8,5 % (p/v), EDTA 130 pM, polisorbato20 al 0,1 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Se prepararon tampones de histidina a pH 6, 8 y 9:
Hist-1 comprende histidina 20 mM a pH 6,0, Sacarosa al 8,5 % (p/v), EDTA 130 pM. No se cumplió ninguno de loscriterios de aceptación.
Hist-2 comprende histidina 20 mM a pH 8,0, Sacarosa al 8,5 % (p/v), EDTA 130 pM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Hist-3 comprende histidina 20 mM a pH 9,0, Sacarosa al 8,5 % (p/v), EDTA 130 pM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Se preparó tampón de citrato a pH 6,6
Citrato-1 comprende Citrato de sodio 5,6 g/l, ácido cítrico 0,21 g/l, trehalosa dihidrato 70 g/l, polisorbato80 0,2 g/l, glicerol al 1 %(p/v), EDTA 5 mM, pH 6,6. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero, lo que indica partículas en suspensión o agregación del trímero.
El tampón de borato se preparó a pH 7,4
Borato-1 comprende borato de sodio 1,1 g/l, ácido bórico 3,5 g/l, manitol 55 mM, glicerol al 1 % p/v, EDTA 5 mM, pH 7,4. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
El tampón de carbonato se preparó a pH 7,0 y pH 8,0
Carbonato-1 comprende Na<2>CO<3>al 0,42 % (p/v), Glucosa al 5 %, NaCl al 0,9 % (p/v), glicerol al 1 % p/v, KCl 1.5 mM, EDTA 5 mM, pH 7,0. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Carbonato-2 comprende Na<2>CO<3>al 0,42 % (p/v), Glucosa al 5 %, NaCl al 0,9 % (p/v), glicerol al 1 % p/v, KCl 1.5 mM, EDTA 5 mM, pH 8,0. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Todos los tampones basados en tris, acetato, histidina, citrato, borato y carbonato que se analizaron, mostraron partículas en suspensión y no se tuvieron en cuenta para investigaciones posteriores.
Ejemplo 5: Formulaciones de inmunocitocina L19-TNFa en tampón de fosfato
A continuación se investigaron los tampones de fosfato. De nuevo, se prepararon muestras para alcanzar una concentración de L19-TNFa de 0,4 mg/ml. Las muestras se conservaron a -80 °C ± 5 °C y se sometieron a múltiples ciclos de congelación y descongelación.
Se prepararon tampones de fosfato a pH 6,3, 6,5, 7,0 y 8,0 utilizando fosfato de sodio monobásico, con y sin fosfato de sodio dibásico:
Fos-1 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 6,5, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v) y KC 1,5 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-2 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v) y KC 1,5 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-3 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM y polisorbato20 al 0,05 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-4 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,05 %. No se cumplieron los criterios de claridad visual ni de estabilidad a A280 pero sí el de pureza del trímero.
Fos-5 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM y polisorbato20 al 0,2 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-6 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,2 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-7 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, KCl 1,5 mM y NaCl 30 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-8 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM y polisorbato20 al 0,05 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-9 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-10 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1%(p/v), KCl 1,5 mM, NaCI 20 mM y polisorbato20 al 0,02 %. Se cumplieron los criterios de pureza del trímero y estabilidad a A280 pero no el de claridad visual.
Fos-11 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,03 %. Se cumplieron los criterios de pureza del trímero y estabilidad a A280 pero no el de claridad visual.
Fos-12 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,2 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-13 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 20 mM y polisorbato20 al 0,05 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-14 comprende NaH<2>PO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM y polisorbato20 al 0,2 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-15 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y pureza del trímero pero no el de estabilidad a A280.
Fos-16 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1,5 % (p/v), KCl 1.5 mM, NaCl 10 mM y polisorbato20 al 0,01 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-17 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 10 mM y polisorbato20 al 0,01 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-18 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 100 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1.5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-19 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-20 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 50 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 10 mM y polisorbato20 al 0,01 %. Se cumplieron los criterios de claridad visual y estabilidad a A280 pero no el de pureza del trímero.
Fos-21 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, polisorbato20 al 0,01 % y EDTA 5 mM.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Fos-22 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, sacarosa 75 mM, KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, glicerol al 1 % p/v, polisorbato20 al 0,01 % (v/v) y EDTA 5 mM.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Fos-23 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, trehalosa dihidrato 70 g/l (es decir, trehalosa 185 mM), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, glicerol al 1 % p/v, polisorbato20 al 0,01 % (v/v) y EDTA 5 mM.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Fos-24 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, glicerol al 1 % p/v, polisorbato80 al 0,01 % y EDTA 5 mM.Se cumplieron los tres criterios de aceptación.
Fos-25 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM, glicerol al 1 % p/v, aceite de ricino polioxil 35 al 0,02 % (p/v) y EDTA 5 mM. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-26 comprende Na<2>HPO<4>6,7 mM a pH 6,3, manitol 133 mM, KCl 1,8 mM, NaCl 20 mM y EDTA 5 mM. Fos-26 es un ejemplo comparativo, basado en un tampón de la técnica anterior denominado "PBS-Siena" en el documento WO2007/128563 (27). No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-27 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,03 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Lo más preferible es que se cumplan los tres criterios de aceptación.
Las pruebas realizadas utilizando, p. ej., Fos-22 y Fos-23 muestran que, independientemente del tipo de estabilizador, se pueden conservar soluciones solubles de L19-TNFa de alta calidad.
No se ha observado que la reducción de la concentración de L19-TNFa en cada tampón reduzca la estabilidad de la formulación.
Los tampones más preferidos seleccionados para las pruebas clínicas en curso fueronFos-19 y Fos-21.La diferencia entre estos tampones es la presencia de EDTA en Fos-21 y la ausencia de EDTA en Fos-19. Aunque no se observa que la presencia o ausencia de EDTA afecte a la solubilidad de L19-TNFa, ni a la estabilidad de la solución de L19-TNFa, EDTA puede ser útil como conservante.
Se siguió investigando la importancia del KCL.El tampón de fosfato Fos-19 se preparó sin KCl de la siguiente manera.Fos-28 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Se descubrió que el KCl no era esencial en la formulación. Una concentración de KCl en el intervalo de 1,5-1,8 mM contribuyó a mantener la isotonicidad de la solución, impidiendo un cambio brusco del pH durante la congelación de la formulación.
Se descubrió que, en ausencia de polisorbato, las muestras no eran estables (p. ej.,Fos-26, borato-1 o Fos-25). (En Fos-25 el polisorbato se sustituye por el tensioactivo, aceite de ricino polioxil 35).
Ejemplo 6: Efecto del pH en el tampón de Fosfato Fos-19
Adicionalmente se investigó el pH del tampón de fosfato Fos-19.Se preparó tampón de fosfato Fos-19 a pH 6,5, 7,0, 7,5, 7,8, 8,5, 8,8 y 9,0.
Fos-29 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 6,5, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-30 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 7,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-31 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 7,5, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Fos-32 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 7,8, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-33 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,5, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-34 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,8, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación
Fos-35 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 9,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %. No se cumplió ninguno de los criterios de aceptación.
Por lo tanto, se descubrió que sólo los valores de pH superiores a 7,5 e inferiores a 9 eran adecuados para las formulaciones de tampón de fosfato
Ejemplo 7: estudios sobre la concentración de sal y de fosfato en el tampón de Fosfato Fos-19
La sal NaCl se sustituyó por otra sal (p. ej., KCl). Se eliminó el NaCl del Fos-19 y se sustituyó por KCl a una concentración de 1,5 mM o 30 mM.
Fos-36 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-37 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Por lo tanto, se demostró que se pueden utilizar diferentes sales en las formulaciones de tampón de fosfato.
Se analizaron tampones de fosfato (variantes de Fos-19) que comprendían diversas concentraciones de NaH<2>PO<4>y Na2HPO4.
Fos-38 comprende NaH<2>PO<4>10 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1%(p/v), KCl 1,5 mM, NaCI 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-39 comprende NaH<2>PO<4>20 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM manitol, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-40 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>15 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), KCl 1,5 mM, NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Ejemplo 8: Estudios adicionales sobre tampones Fostato, con respecto a glicerol, KCl y Tween80
Se realizaron investigaciones adicionales utilizando el Fos-28 (NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %). Fos-28 corresponde a Fos-19 sin KCl.
(i) Se analizaron diversas concentraciones de glicerol (p/v):
Se analizaron concentraciones de glicerol del 0,5 % y 1,5 %(p/v).
Fos-41 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 0,5 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-42 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1,5 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato20 al 0,01 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Por lo tanto, se descubrió que podía utilizarse una concentración de glicerol tan baja como el 0,5 % en formulaciones de tampón fosfato que superen los tres criterios de aceptación.
(ii) Diversas concentraciones de Tween80:
Se analizó el tampón de fosfato (Fos-28) que comprende diversas concentraciones de Tween80 en lugar de Tween20. Fos-43 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), NaCl 30 mM y polysorbate80 al 0,005 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-44 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato80 al 0,03 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Fos-45 comprende NaH<2>PO<4>15 mM y Na<2>HPO<4>10 mM a pH 8,0, manitol 75 mM, glicerol al 1 % (p/v), NaCl 30 mM y polisorbato80 al 0,1 %.Se cumplieron todos los criterios de aceptación.
Por lo tanto, se descubrió que podía utilizarse una concentración de polisorbato 80 tan baja como el 0,005 % para formulaciones de tampón de fosfato.
Ejemplo 9: Combinación de las formulaciones de L19-TNFa y L19-IL2
A continuación, se investigó si el nuevo tampón de formulación de L19-TNFa disuelto en Fos-19 era adecuado para su combinación con L19-IL2 en el entorno clínico.
Se realizaron diversas mezclas de L19-TNFa en el tampón Fos-19 con L19-IL2 en un tampón que comprendía NaH<2>PO<4>6,7 mM, NaCl 20 mM, KCl 1,8 mM, manitol 133 mM, polisorbato80 al 0,1 % (v/v), glicerol al 1 % (p/v) y EDTA 5 mM y tiene un pH de 6,3. Estas formulaciones se mezclaron entre sí y las mezclas resultantes se analizaron tanto en el momento 0 como al cabo de 3 horas a temperatura ambiente. Se consideró que en las intervenciones médicas, la mezcla no superaría en ningún caso las 3 horas de incubación, ya que los dos productos se mezclan y se inyectan casi inmediatamente. Las mezclas se prepararon añadiendo L19-TNFa a la solución de L19-IL2 y viceversa. Los resultados se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2
La cantidad de proteínas se calculó mediante cromatografía de intercambio catiónico cuantitativa. La bioactividad se calculó tomando como referencia el patrón de TNFa o IL2. IR = Inmunorreactividad
Es importante destacar que, al cabo de 3 horas, se recuperó una solución transparente sin pérdida de proteínas ni agregados. Se descubrió que, en general, la mezcla era estable.
Ejemplo 10: Tratamiento de un paciente con L19-TNFa en tampón de fosfato junto con L19-IL2
La nueva formulación de L19-TNFa, disuelta en Fos-21 junto con L19-IL2, que se encontraba en un tampón que comprendía NaH<2>PO<4>6,7 mM, NaCl 20 mM, KCl 1,8 mM, manitol 133 mM, polisorbato80 al 0,28 % (v/v) y glicerol al 1 % (p/v) y que tenía un pH de 6,3, se analizó después en un entorno clínico.
Un paciente de 59 años se diagnosticó de melanoma en estadio IIIB y presentó una metástasis retroauricular inyectable.
El paciente recibió cuatro tratamientos mediante inyección intralesional con L19-TNFa disuelto en Fos-21 junto con L19-IL2. El primer y segundo tratamientos consistieron en una dosis de 13 Mio UI de L19IL2 y 400 |jg de L19-TNFa. El tercero fue 3/4 de la dosis de L19-TNFa y L19-IL2 y el cuarto tratamiento fue 1/2 de la dosis de L19-TNFa y L19-IL2.
Resultados
El TAC del Día 0 muestra la presencia de la lesión de melanoma (Figura 5, cuadro superior). El TAC tomado seis meses después del inicio del tratamiento, muestra que la lesión ha desaparecido por completo (Figura 5, cuadro inferior).
Ejemplo 11: Tratamiento de un paciente que tiene un sarcoma con L19-TNFa en tampón de fosfato junto con Doxorrubicina
Un paciente con condrosarcoma se trató con 2 ciclos de L19-TNFa (17 ug/kg - 3 inyecciones semanales por ciclo) y doxorrubicina (60 mg/m21 inyección semanal por ciclo), administrados mediante infusión.
La lesión específica en pulmón mostró estabilización del crecimiento en el TAC después de 2 ciclos de tratamiento (Figura 8).
SECUENCIAS SEQ ID NO:1 = L19-TNFa
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSSGTTYYADSVKGRF
TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPFPYFDYWGQGTLVTVSSGDGSSGGSGGASEIVLTQSP
GTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYYASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTI
SRLEPEDFAVYYCQQTGRIPPTFGQGTKVEIKEFSSSSGSSSSGSSSSGVRSSSRTPSDKPVAHVVAN
PQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLWPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSY
QTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGII
AL SEQ ID NO:2 = L19-IL2
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSSGTTYYADSVKGRF
TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPFPYFDYWGQGTLVTVSSGDGSSGGSGGASEIVLTQSP
GTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYYASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTI
SRLEPEDFAVYYCQQTGRIPPTFGQGTKVEIKEFSSSSGSSSSGSSSSGAPTSSSTKKTQLQLEHLLL
DLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLIS
NINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTREFERENCIAS
1. Testori A, Faries MB, Thompson JF, Pennacchioli E, Deroose JP, van Geel AN, Verhoef C, Verrecchia F, Soteldo J (2011) Local and intralesional therapy of in-transit melanoma metastases. J Surg Oncol 104 (4):391-396. doi: 10.1002/jso.22029
2. Si Z, Hersey P, Coates AS (1996) Clinical responses and lymphoid infiltrates in metastatic melanoma following treatment with intralesional g M-CSF. Melanoma Res 6 (3):247-255.
3. von Wussow P, Block B, Hartmann F, Deicher H (1988) Intralesional interferon-alpha therapy in advanced malignant melanoma. Cancer 61 (6):1071-1074.
4. Kubo H, Ashida A, Matsumoto K, Kageshita T, Yamamoto A, Saida T (2008) Interferon-beta therapy for malignant melanoma: the dose is crucial for inhibition of proliferation and induction of apoptosis of melanoma cells. Arch Dermatol Res 300 (6):297-301. doi: 10.1007/s00403-008-0841-6
5. Gutwald JG, Groth W, Mahrle G (1994) Peritumoral injections of interleukin 2 induce tumour regression in metastatic malignant melanoma. Br J Dermatol 130 (4):541-542.
6. Radny P, Caroli UM, Bauer J, Paul T, Schlegel C, Eigentler TK, Weide B, Schwarz M, Garbe C (2003) Phase II trial of intralesional therapy with interleukin-2 in soft-tissue melanoma metastases. Br J Cancer 89 (9):1620-1626. doi: 10.1038/sj.bjc.6601320
7. Weide B, Derhovanessian E, Pflugfelder A, Eigentler TK, Radny P, Zelba H, Pfohler C, Pawelec G, Garbe C (2010) High response rate after intratumoral treatment with interleukin-2: results from a phase 2 study in 51 patients with metastasized melanoma. Cancer 116 (17):4139-4146. doi: 10.1002/cncr.25156
8. Boyd KU, Wehrli BM, Temple CL (2011) Intra-lesional interleukin-2 for the treatment of in-transit melanoma. J Surg Oncol 104 (7):711-717. doi: 10.1002/jso.21968
9. Dehesa LA, Vilar-Alejo J, Valeron-Almazan P, Carretero G (2009) Experience in the treatment of cutaneous intransit melanoma metastases and satellitosis with intralesional interleukin-2. Actas Dermosifiliogr 100 (7):571-585.
10. Tartaglia L. A., et al (1993) Ligand Passing: The 75-kDa Tumor Necrosis Factor (TNF) Receptor Recruits TNF for Signaling by the 55-kDa<t>N<f>' Receptor. J. Biol. Chem., 268: 18542-18548.
11. Carswell E. A., et al, (1975) An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72: 3666-3670,
12. Helson L., et al, (1975) Effect of tumour necrosis factor on cultured human melanoma cells. Nature, 258: 731 732.
13. Blick M.et al.(1987) Phase I Study of Recombinant Tumor Necrosis Factor in Cáncer Patients Cáncer Res.
47: 2989.
14. Franker D. L., et al, (1994) Isolated limb perfusion with high-dose tumor necrosis factor for extremity melanoma and sarcoma. Important Adv. Oncol. 179-192.
15. Clauss M.,et al.(1990) A Polypeptide Factor Produced by Fibrosarcoma Cells That Induces Endothelial Tissue Factor and Enhances the Procoagulant Response to Tumor Necrosis Factor/Cachectin. J. Biol. Chem., 265:7078-7083.
16. Clauss.,et al.(1990) Vascular permeability factor: a tumor-derived polypeptide that induces endothelial cell and monocyte procoagulant activity, and promotes monocyte migration. J. Exp. Med., 172:1535-1545.
17. Palladino Jr. M. A.,et al.(1987) Characterization of the antitumor activities of human tumor necrosis factoralpha and the comparison with other cytokines: induction of tumor-specific immunity. J. Immunol., 138:4023-4032.
18. Pasche N, Neri D (2012) Immunocytokines: a novel class of potent armed antibodies. Drug Discov Today 17 (11-12):583-590. doi: 10.1016/j.drudis.2012.01.007
19. Documento WO99/058570
20. Carnemolla B, Borsi L, Balza Eet al.(2002) Enhancement of the antitumor properties of interleukin-2 by its targeted delivery to the tumor blood vessel extracellular matrix. Blood 99 (5):1659-1665. doi: 10.1182/blood.V99.5.1659
21. Documento WO01/062298
22. Pretto F, Elia G, Castioni N, Neri D (2014) Preclinical evaluation of IL2-based immunocytokines supports their use in combination with dacarbazine, paclitaxel and TNF-based immunotherapy. Cancer Immunol Immunother 63 (9):901-910. doi: 10.1007/s00262-014-1562-7
23. Weide B, Eigentler TK, Pflugfelder Aet al.(2014) Intralesional treatment of stage III metastatic melanoma patients with L19-IL2 results in sustained clinical and systemic immunologic responses. Cancer Immunol Res 2 (7):668-678. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-13-0206
24. Danielli R., Patuzzo R., Di Giacomo AM.Et al.,(2014) A phase II study of intratumoral application of L19IL2/L19TNF in melanoma patients in clinical stage III or stage IV M1a with presence of injectable cutaneous and/or subcutaneous lesions. J Clin Oncol, 32 (5s) (Suppl; abstr TPS9103A)
25. Documento WO13/045125
26. Weideet al.(2010) High response rate after intratumoral treatment with interleukin-2. Cancer 4139-4146. 27. Documento WO2007/128563
Claims (16)
1. Una composición que comprende L19-TNFa como se expone en la SEQ ID NO: 1, disuelta en un tampón de fosfato de sodio que comprende una sal a una concentración de al menos aproximadamente 1,5 mM, polisorbato a una concentración de aproximadamente 0,005 % a aproximadamente 0,1 % (v/v), y un estabilizador, en donde el pH del tampón de fosfato de sodio es superior a 7,5 e inferior a 9
en donde la sal es NaCl;
en donde el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 % p/v;
y en donde la concentración del estabilizador es de aproximadamente 65 mM a aproximadamente 185 mM.
2. La composición de la reivindicación 1,
en donde el tampón de fosfato de sodio comprende NaH<2>PO<4>en una concentración de aproximadamente 5-25 mM; y/o
en donde el tampón de fosfato de sodio comprende Na<2>HPO<4>a una concentración de aproximadamente 5-20 mM.
3. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el tampón de fosfato de sodio comprende KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM; y/o
en donde el tampón de fosfato de sodio comprende EDTA a una concentración de aproximadamente 1-20 mM.
4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el estabilizador es un azúcar, opcionalmente en donde el azúcar se selecciona del grupo que consiste en manitol, trehalosa, sacarosa, sorbitol, maltosa y xilitol, opcionalmente además en donde el azúcar es manitol.
5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el NaCl está a una concentración de aproximadamente 10-30 mM.
6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el tampón de fosfato de sodio comprende polisorbato a una concentración de aproximadamente 0,005 a aproximadamente 0,03 %.
7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración de la inmunocitocina L19-TNFa es de al menos aproximadamente 0,2 mg/ml, opcionalmente en donde la concentración de la inmunocitocina L19-TNFa es de al menos de aproximadamente 0,4 mg/ml.
8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polisorbato es polisorbato20.
9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su uso en un método de tratamiento terapéutico del cáncer en el cuerpo humano o animal, comprendiendo el método la inyección de la composición en un tumor o en una lesión o la administración de la composición por infusión.
10. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el cáncer es un cáncer de piel, opcionalmente: en donde el cáncer es un tumor primario, y/o en donde el cáncer es un carcinoma o un sarcoma.
11. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde el método comprende la etapa preliminar de mezclar la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 con una preparación de inmunocitocina L19-IL2; opcionalmente en donde la preparación de inmunocitocina L19-IL2 comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1 50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50 200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,3 % (v/v), y glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2 % y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
12. Un método de preparación de una formulación adecuada para su uso como medicamento inyectable contra el cáncer, comprendiendo el método proporcionar una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, y mezclar dicha composición con una preparación de inmunocitocina L19-IL2; opcionalmente en donde la preparación de inmunocitocina L19-IL2 comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1 50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1 2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,3% (v/v), y glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2% y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
13. La composición para el uso de acuerdo con las reivindicaciones 9 o 10, en donde el método comprende inyectar la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 y doxorrubicina.
14. Un kit que comprende un primer recipiente que comprende una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 y un segundo recipiente que comprende una preparación de una inmunocitocina L19-IL2; opcionalmente en donde la preparación de inmunocitocina L19-IL2 comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,3 % (v/v), y glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2 % y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
15. Un kit que comprende una preparación deshidratada o líquida de inmunocitocina L19-TNFa en un primer recipiente, y una primera solución de tampón que comprende un tampón de fosfato de sodio que comprende una sal a una concentración de al menos aproximadamente 1,5 mM, polisorbato a una concentración de aproximadamente 0,005 % a aproximadamente 0,1 % (v/v), y un estabilizador, en donde el pH del tampón de fosfato de sodio es superior a 7,5 e inferior a 9,
en donde la sal es NaCl;
en donde el tampón de fosfato de sodio comprende glicerol a aproximadamente 0,5-1,5 % p/v;
y en donde la concentración del estabilizador es de aproximadamente 65 mM a 185 mM.
16. El kit de la reivindicación 15, que comprende además una preparación deshidratada o líquida de inmunocitocina L19-IL2 en un segundo recipiente y una segunda solución de tampón que comprende NaH<2>PO<4>a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, NaCl a una concentración de aproximadamente 1-50 mM, KCl a una concentración de aproximadamente 1-2 mM, manitol a una concentración de aproximadamente 50-200 mM, polisorbato80 a una concentración de aproximadamente 0,05-0,3 % (v/v), y glicerol a una concentración de aproximadamente 0,5-2 % y un pH de aproximadamente 5,5-7,0.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1612317.6A GB201612317D0 (en) | 2016-07-15 | 2016-07-15 | Antibody compositions |
| PCT/EP2017/067870 WO2018011404A1 (en) | 2016-07-15 | 2017-07-14 | Antibody compositions |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2993464T3 true ES2993464T3 (en) | 2024-12-30 |
Family
ID=56890667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES17745672T Active ES2993464T3 (en) | 2016-07-15 | 2017-07-14 | Antibody compositions |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11351257B2 (es) |
| EP (2) | EP3484446B1 (es) |
| DK (1) | DK3484446T3 (es) |
| ES (1) | ES2993464T3 (es) |
| FI (1) | FI3484446T3 (es) |
| GB (1) | GB201612317D0 (es) |
| HR (1) | HRP20241637T1 (es) |
| HU (1) | HUE069391T2 (es) |
| LT (1) | LT3484446T (es) |
| PL (1) | PL3484446T3 (es) |
| PT (1) | PT3484446T (es) |
| RS (1) | RS66141B1 (es) |
| SI (1) | SI3484446T1 (es) |
| SM (1) | SMT202500088T1 (es) |
| WO (1) | WO2018011404A1 (es) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG11201705728RA (en) | 2015-02-04 | 2017-08-30 | Boehringer Ingelheim Int | Methods of treating inflammatory diseases |
| GB201612317D0 (en) | 2016-07-15 | 2016-08-31 | Philogen Spa | Antibody compositions |
| GB201703062D0 (en) * | 2017-02-24 | 2017-04-12 | Arecor Ltd | Stabilized antibody protein solutions |
| US11608357B2 (en) | 2018-08-28 | 2023-03-21 | Arecor Limited | Stabilized antibody protein solutions |
| EP3372241A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-12 | Ares Trading S.A. | Liquid pharmaceutical composition |
| EP3372242A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-12 | Ares Trading S.A. | Liquid pharmaceutical composition |
| WO2019185792A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Philogen S.P.A | Cancer treatment using immunoconjugates and immune check-point inhibitors |
| WO2020249757A1 (en) | 2019-06-14 | 2020-12-17 | Philogen S.P.A | Immunoconjugates comprising a single chain diabody and interleukin-15 or interleukin-15 and a sushi domain of interleukin-15 receptor alpha |
| TW202535466A (zh) * | 2019-09-09 | 2025-09-16 | 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 | 抗-il-23p19抗體調配物 |
| EP4135751B1 (en) * | 2020-04-14 | 2024-07-31 | Philogen S.p.A. | Formulations of compositions comprising a recombinant protein comprising interleukin-12 and an antibody binding the extra-domain b of fibronectin |
| FI4153232T3 (fi) * | 2020-05-22 | 2024-09-25 | Philogen Spa | Tnf-a-immunokonjugaattihoito aivokasvainten hoitoon |
| AU2023240296A1 (en) | 2022-03-21 | 2024-11-07 | Philogen S.P.A | TNFα IMMUNOCONJUGATE PREPARATION |
| CA3246548A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-09-28 | Philogen S.P.A | Immunoconjugate preparation IL2 |
| EP4580652A1 (en) * | 2022-09-01 | 2025-07-09 | Philogen S.p.A. | Tnf alpha and interleukin-2 combination therapy for non-melanoma skin cancer |
| WO2025172582A1 (en) * | 2024-02-15 | 2025-08-21 | Philogen S.P.A | Methods for treating melanoma |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4457916A (en) | 1982-08-31 | 1984-07-03 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for stabilizing Tumor Necrosis Factor and a stable aqueous solution or powder containing the same |
| TWI259837B (en) | 1998-05-11 | 2006-08-11 | Eidgenossische Tech Hochscule | Specific binding molecules for scintigraphy, conjugates containing them and therapeutic method for treatment of angiogenesis |
| DK1719528T3 (da) | 2000-02-24 | 2012-01-09 | Philogen Spa | Sammensætninger og fremgangsmåder til behandling af angiogenese i patologiske læsioner |
| MX2008013575A (es) | 2006-05-08 | 2008-11-04 | Philogen Spa | Citoquinas dirigidas a anticuerpos para terapia. |
| PT2944306T (pt) | 2006-06-16 | 2021-02-15 | Regeneron Pharma | Formulações antagonistas de vegf adequadas para administração intravitreal |
| WO2008121615A2 (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-09 | Medimmune, Inc. | Antibody formulation |
| LT2170390T (lt) | 2007-06-14 | 2019-01-10 | Biogen Ma Inc. | Natalizumabo antikūnų kompozicijos |
| EP2760886B1 (en) * | 2011-09-26 | 2019-10-02 | Philogen S.p.A. | Immunocytokine combination therapy |
| CN105873601A (zh) * | 2013-05-02 | 2016-08-17 | 马柏克辛斯公司 | TNFR:Fc融合多肽的替代配方 |
| JP2017512814A (ja) | 2014-04-07 | 2017-05-25 | シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド | 抗ｃｄ１９抗体および抗体−薬物結合体のための安定な製剤 |
| BR112016020009A2 (pt) * | 2014-04-10 | 2017-10-17 | Obi Pharma Inc | anticorpo, composição farmacêutica, método para inibir a proliferação de células cancerígenas, hibridoma |
| GB201507908D0 (en) | 2015-05-08 | 2015-06-24 | Philogen Spa | IL2 and TNF immunoconjugates |
| GB201612317D0 (en) | 2016-07-15 | 2016-08-31 | Philogen Spa | Antibody compositions |
-
2016
- 2016-07-15 GB GBGB1612317.6A patent/GB201612317D0/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-07-14 PT PT177456720T patent/PT3484446T/pt unknown
- 2017-07-14 PL PL17745672.0T patent/PL3484446T3/pl unknown
- 2017-07-14 ES ES17745672T patent/ES2993464T3/es active Active
- 2017-07-14 DK DK17745672.0T patent/DK3484446T3/da active
- 2017-07-14 LT LTEPPCT/EP2017/067870T patent/LT3484446T/lt unknown
- 2017-07-14 HR HRP20241637TT patent/HRP20241637T1/hr unknown
- 2017-07-14 SI SI201731562T patent/SI3484446T1/sl unknown
- 2017-07-14 FI FIEP17745672.0T patent/FI3484446T3/fi active
- 2017-07-14 RS RS20241219A patent/RS66141B1/sr unknown
- 2017-07-14 EP EP17745672.0A patent/EP3484446B1/en active Active
- 2017-07-14 SM SM20250088T patent/SMT202500088T1/it unknown
- 2017-07-14 EP EP23169312.8A patent/EP4233843A3/en active Pending
- 2017-07-14 WO PCT/EP2017/067870 patent/WO2018011404A1/en not_active Ceased
- 2017-07-14 HU HUE17745672A patent/HUE069391T2/hu unknown
- 2017-07-14 US US16/317,902 patent/US11351257B2/en active Active
-
2022
- 2022-05-25 US US17/824,482 patent/US12023381B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK3484446T3 (da) | 2024-11-04 |
| EP4233843A3 (en) | 2023-09-27 |
| PT3484446T (pt) | 2024-11-21 |
| PL3484446T3 (pl) | 2025-02-24 |
| EP4233843A2 (en) | 2023-08-30 |
| FI3484446T3 (fi) | 2024-11-21 |
| US12023381B2 (en) | 2024-07-02 |
| LT3484446T (lt) | 2024-11-25 |
| WO2018011404A1 (en) | 2018-01-18 |
| HUE069391T2 (hu) | 2025-03-28 |
| SI3484446T1 (sl) | 2025-01-31 |
| HRP20241637T1 (hr) | 2025-02-14 |
| US20210093720A1 (en) | 2021-04-01 |
| EP3484446B1 (en) | 2024-09-25 |
| GB201612317D0 (en) | 2016-08-31 |
| EP3484446A1 (en) | 2019-05-22 |
| SMT202500088T1 (it) | 2025-03-12 |
| US20230165960A1 (en) | 2023-06-01 |
| US11351257B2 (en) | 2022-06-07 |
| RS66141B1 (sr) | 2024-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2993464T3 (en) | Antibody compositions | |
| ES2373966T3 (es) | Composiciones y procedimientos para el tratamiento de la angiogénesis en lesiones patológicas. | |
| ES2279649T3 (es) | Compuestos trombopoyeticos. | |
| US10195253B2 (en) | Immunocytokine combination therapy | |
| BR112013013548B1 (pt) | Proteína de fusão anticancerígena | |
| JP6825181B2 (ja) | 膵炎を治療するための薬剤の製造におけるｉｌ−２２二量体の使用 | |
| JP2011157393A (ja) | 組換え炭水化物結合ポリペプチドの安定型凍結乾燥生薬製剤 | |
| BRPI0808943A2 (pt) | Método de tratamento do câncer por administração de combinações de il-18 humano | |
| CN105531284A (zh) | 细胞穿透肽和包含其的缀合物 | |
| JP7221545B2 (ja) | ホスファチジルセリン標的化融合分子およびそれらの使用方法 | |
| US20210330747A1 (en) | Pharmaceutical Compositions and Pharmaceutical Products of Heterodimeric Human Interleukin-15 (hetIL-15) | |
| AU2020311050B2 (en) | Stable formulations of recombinant proteins | |
| WO2019113072A1 (en) | Immune-stimulating peptides and checkpoint inhibitors, and uses thereof for treating cancer | |
| TWI362941B (en) | Methods for effecting regression of tumoer mass and size in a metastasized tumor | |
| KR20150092109A (ko) | 주사용 암 조성물 | |
| TW524693B (en) | Cancer cell nuclease activator | |
| ES2742856T3 (es) | Composiciones farmacéuticas y procedimientos para el tratamiento y prevención del cáncer metastático | |
| CN102993314A (zh) | 一种抗肿瘤融合蛋白及其制备方法和用途 | |
| JP2007501813A (ja) | 新生血管形成と関連した症状を治療および診断するためのインターロイキン−２０ | |
| US20220143130A1 (en) | Peptides Having Immunomodulatory Properties | |
| ES2540862T3 (es) | Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos bovino y sus variantes | |
| WO2008037225A1 (es) | Composiciones terapéuticas para potenciar el efecto de la terapia con anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico | |
| CA3180694A1 (en) | Homing peptide-guided decorin conjugates for use in treating epidermolysis bullosa | |
| JP4748639B2 (ja) | 肝臓疾患治療剤 | |
| JP2024546686A (ja) | 癌を治療するための組成物及び方法 |