ES2970115T3 - Composiciones para el tratamiento de la granulomatosis con poliangeítis - Google Patents

Abstract

La presente especificación describe métodos y usos para el tratamiento de un síndrome vasculítico. Los métodos divulgados comprenden administrar una composición que comprende un inhibidor de la proteinasa 3 (PR3) a un paciente que lo necesita. También se divulgan composiciones que comprenden un inhibidor de PR3 divulgado en el presente documento para uso en el tratamiento de un síndrome vasculítico, así como el uso de una composición que comprende un inhibidor de PR3 divulgado en el presente documento en el tratamiento de un síndrome vasculítico. La presente especificación también describe el uso de una composición que comprende un inhibidor de PR3 aquí descrito en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un síndrome vasculítico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones para el tratamiento de la granulomatosis con poliangeítis

Antecedentes

La granulomatosis con poliangeítis (GPA o granulomatosis de Wegener) es una forma rara e incurable de vasculitis (inflamación de los vasos sanguíneos) que afecta a la nariz, los pulmones, los riñones y otros órganos. La GPA se caracteriza por la inflamación de los vasos sanguíneos (vasculitis). En la GPA, el daño orgánico se produce como resultado de la inflamación en la vasculitis que afecta a los vasos sanguíneos pequeños y medianos, y de un tipo de lesión tisular denominada inflamación granulomatosa. Un granuloma es un tipo de inflamación que suele observarse en las biopsias de los órganos afectados.

Según la página web del American College of Rheumatology, 3 de cada 100.000 personas en Estados Unidos padecen GPA. Según los informes publicados, se estima que la incidencia en EE.u U. llega a 8,6 por 1.000.000 o 2.580 nuevos casos al año. Se calcula que la prevalencia en EE.UU. oscila entre 26 y 90 casos tratados por cada 1.000.000 de habitantes al año o más de 7.800 casos al año (Watts R, Epidemiology of Systemic Vasculitis, 1995). La enfermedad es difícil de diagnosticar y los tratamientos disponibles actualmente son inadecuados. Lo más frecuente es que la GPA afecte a los senos paranasales, los pulmones y los riñones, pero también puede afectar a los ojos, los oídos, la piel, los nervios, las articulaciones y otros órganos. Debido a la variedad de órganos potencialmente afectados, puede desarrollarse una amplia gama de síntomas a lo largo de días o meses. En el 90 % de las personas, los primeros síntomas aparecen en las vías respiratorias (por ejemplo, nariz, senos paranasales y pulmones) e incluyen congestión nasal, hemorragias nasales frecuentes, dificultad para respirar y tos que puede producir flemas sanguinolentas. Otros síntomas tempranos pueden ser dolor articular, disminución de la audición, erupciones cutáneas, enrojecimiento de los ojos y/o cambios en la visión, fatiga, fiebre, pérdida de apetito y de peso, sudores nocturnos y entumecimiento o pérdida de movimiento en los dedos de manos y pies o en las extremidades.

Las opciones de tratamiento disponibles actualmente para la GPA son inadecuadas y los pacientes experimentan una disminución de la esperanza de vida y de la calidad de vida. Además, todos los tratamientos disponibles para la GPA presentan problemas de seguridad y funcionan según el mismo principio general de supresión de la respuesta reactiva del organismo y del sistema inmunitario. El tratamiento crónico con glucocorticoides conduce por sí mismo a múltiples síndromes. Sólo la mitad de los pacientes tratados con Rituximab en reagudización tienen una respuesta positiva al tratamiento y múltiples líderes de opinión clave han planteado dudas sobre la justificación de repetir la dosificación con Rituximab. En el estudio pivotal de Rituximab en el tratamiento de la GPA, el número y la gravedad de los acontecimientos adversos no se consideraron significativamente diferentes entre Rituximab y Ciclofosfamida (CYC, un agente inmunosupresor altamente tóxico, que provoca esterilidad, problemas renales, etc.). Aunque pueden ser eficaces para salvar la vida del paciente, estos tratamientos no están exentos de problemas de seguridad y calidad de vida; además, no abordan la causa de la enfermedad en sí. Actualmente existe una necesidad insatisfecha de tratamientos de igual o mayor eficacia que tengan un perfil de seguridad mejorado. La dosificación crónica a largo plazo con A1PI ha demostrado en una amplia población ser segura con un perfil de acontecimientos adversos benigno. Los mayores retos en el tratamiento de la GPA son el mantenimiento de la remisión de la enfermedad y evitar la morbilidad y mortalidad relacionadas con el tratamiento.

Además, más del 70% de los pacientes con GPA PR3 positivo recaerán y, aunque se ha aprobado el Rituximab para el tratamiento de la indicación, los líderes médicos en el campo de la reumatología opinan que esto ha cambiado las necesidades de los pacientes en lugar de eliminarlas.

Por ejemplo, Perez et al., Rheumatology, 2012 informa del tratamiento de un paciente con una deficiencia grave de A1AT asociada a un genotipo PIZZ con el tratamiento estándar que comprende metilprednisona y prednisona. El documentoUS 2014/228301 analiza la idea de utilizar un inhibidor de la alfa-1-proteinasa para tratar a un paciente con un genotipo deficiente de A1PI que padece GPA.

De acuerdo con lo anterior, existe la necesidad de un nuevo tratamiento eficaz de la GPA que evite los efectos secundarios a largo plazo obtenidos con las terapias actualmente disponibles y se centre en el tratamiento de la afección subyacente en lugar de suprimir el sistema inmunitario.

Sumario

La invención se refiere a una composición que comprende un inhibidor de la proteinasa 3 (PR3) para su uso en el tratamiento de la granulomatosis con poliangitis (GPA) en un paciente que no tiene un genotipo deficiente de A1PI, en el que el inhibidor de la PR3 es el inhibidor de la proteasa a-1 (A1PI), en el que la composición comprende una cantidad eficaz de dicho A1PI, y en el que la administración de la composición al paciente inhibe la función fisiológica de la PR3 tratando así la GPA.

El inhibidor de PR3 según la invención actual es A1 PI. En general, un inhibidor de PR3 puede ser una proteína, un fragmento polipeptídico de la misma o una variante de la misma o una molécula pequeña. Ejemplos no limitantes de un inhibidor de PR3 divulgados en la presente invención incluyen un inhibidor de a-1 proteasa (A1 PI), una serpina B1, una trappina-2, una elafina, una eglina c, una a-1 antiquimotripsina modificada, una a-2 macroglobulina, un azapéptido, un anticuerpo de PR3 o fragmento de anticuerpo del mismo, un derivado de 1,2,5-tiadiazolidin-3-ona 1,1 dióxido, un derivado de N-hidroxisuccinimida,7-NH<2>-4-Cl-3-(2-bromoetoxi)isocumarina, 3,4-dicloroisocumarina, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValP(OPh)2, Boc-Val-Pro- ValP(OPh)2, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValCh2Cl, o SURAMIN™. Un síndrome vasculítico es la granulomatosis con poliangeítis (GPA o granulomatosis de Wegener).

Otros aspectos de la presente memoria descriptiva divulgan un kit que comprende un inhibidor de PR3.

Breve descripción de los dibujos

Las figuras 1A-C representan la superficie celular del neutrófilo con el receptor PR3 expuesto y activado. Sin A1 PI, ANCA se une al receptor PR3 (Figura 1A). El A1 PI exógeno escinde el dominio activo del receptor PR3 (Figura 1B) que elimina la capacidad de ANCA de unirse al receptor y activar el neutrófilo (Figura 1C).

La figura 2 representa un gráfico de barras que muestra la inhibición por A1 PI de la producción de IL-6 en función de la dosis.

Descripción detallada

La presente invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas.

De acuerdo con lo anterior, la presente divulgación aborda la necesidad de una terapia nueva y eficaz para la GPA, que aborde directamente el mecanismo de acción de la enfermedad y evite los efectos secundarios tanto a corto como a largo plazo que se obtienen con las terapias actuales.

La GPA forma parte de un grupo más amplio de síndromes vasculíticos, todos los cuales presentan un ataque autoinmune por un tipo anormal de anticuerpos circulantes denominados ANCA (anticuerpos citoplasmáticos antineutrófilos) contra vasos sanguíneos de tamaño pequeño y mediano. Los ANCA pueden dividirse en cuatro patrones cuando se visualizan mediante inmunofluorescencia: ANCA citoplasmático (c-ANCA), C-ANCA (atípico), ANCA perinuclear (p-ANCA) y ANCA atípico (a-ANCA), también conocido como x-ANCA. Los ANCA se asocian a vasculitis de vasos pequeños, como la granulomatosis con poliangeítis (antes conocida como granulomatosis de Wegener), la poliangeítis microscópica, la glomerulonefritis necrotizante primaria pauciinmune semilunar (un tipo de poliangeítis microscópica renal limitada), el síndrome de Churg-Strauss y las vasculitis inducidas por fármacos. El c-ANCA dirigido a la proteinasa 3 (PR3) está presente en el 80-90% de la granulomatosis con poliangeítis, en el 20-40% de la poliangeítis microscópica, en el 20-40% de la glomerulonefritis semilunar pauciinmune y en el 35% del síndrome de Churg-Strauss. la c-ANCA (atípica) está presente en el 80% de la fibrosis quística (con BPI como el antígeno diana) y también en la enfermedad inflamatoria intestinal, la colangitis esclerosante primaria y la artritis reumatoide (con anticuerpos frente a múltiples dianas antigénicas). los p-ANCA con especificidad<m>P<o>se encuentran en el 50% de las poliangeítis microscópicas, el 50% de las glomerulonefritis necrotizantes semilunares pauciinmunes primarias y el 35% del síndrome de Churg-Strauss. Los p-ANCA con especificidad frente a otros antígenos se asocian a la enfermedad inflamatoria intestinal, la artritis reumatoide, la vasculitis inducida por fármacos, la hepatopatía autoinmune, los síndromes inducidos por fármacos y las infecciones parasitarias. Los ANCA atípicos se asocian a vasculitis sistémica inducida por fármacos, enfermedad inflamatoria intestinal y artritis reumatoide.

La PR3 es una proteasa de serina que se encuentra en la superficie de la membrana de los neutrófilos quiescentes y activados. Los neutrófilos aislados de pacientes con GPA presentan un aumento de PR3 en la superficie celular en comparación con los pacientes sin GPA. Este aumento de la superficie PR3 se produce tanto en individuos con deficiencia grave de A1PI como en pacientes con niveles normales de A1PI circulante. Como ya se ha mencionado, la GPA se caracteriza por un ataque autoinmune por ANCA. En la GPA, los c-ANCA circulantes se unen a la superficie PR3 de los neutrófilos. La unión de ANCA activa estos neutrófilos, lo que los lleva a atacar y dañar los vasos sanguíneos.

El inhibidor de proteinasa alfa-1 ("A1PI"; también conocido como "Alfa 1 antitripsina", "A1AT", "Alfa-1-antiproteinasa" o "Serpina A1") es un inhibidor fisiológico de la PR3. El A1PI exógeno escinde el dominio activo del receptor PR3 de la superficie celular de un neutrófilo. Esta escisión del receptor PR3 impide la unión del ANCA citoplasmático (c-ANCA) al receptor PR3, impidiendo así la reticulación PR3-FcyR1 1a necesaria para la activación de las células neutrófilas. Se han estudiado in vitro los neutrófilos aislados de pacientes con g Pa y se ha confirmado que A1PI puede bloquear la unión y la activación de los neutrófilos por IgG anti-PR3 tanto en adultos sanos como en pacientes con GPA. Aunque ha habido numerosos informes que señalan la mayor incidencia de GPA en la población con deficiencia de alfa-1 tripsina (AATD), nadie ha ido más allá para probar el potencial del compuesto como tratamiento de la enfermedad, independientemente de los niveles circulantes de A1PI.

La mayoría de los pacientes con GPA no tienen una cantidad disminuida de A1PI endógeno. Dicho esto, los sujetos que tienen una cantidad disminuida de A1PI endógeno pueden tener un mayor riesgo de GPA. Por tanto, se puede considerar que los sujetos que tienen cualquiera de los alelos S o Z del gen A1PI pertenecen a una población con más probabilidades de padecer GPA o con riesgo de desarrollar GPA. El riesgo es elevado en pacientes con genotipos homocigotos (Z<z>o SS) u homocigotos compuestos (SZ), aunque existe un riesgo menor de GPA en pacientes portadores de una copia de cualquiera de los alelos S o Z. (Mahr et al. Artritis Rehem. Diciembre de 2010; 62(12): 3760-3767). Sin embargo, aunque existe un mayor riesgo, no todos los sujetos con una deficiencia endógena de A1PI desarrollan GPA. Por tanto, la característica clave del diagnóstico de GPA y la idoneidad para la administración de las presentes composiciones es la presencia de c-ANCA en el sujeto y no el genotipo A1PI.

Por tanto, se divulga en la presente memoria un inhibidor de PR3 o inhibidor de PR3 para su uso en el tratamiento de un síndrome vasculítico divulgado en la presente memoria. Un inhibidor de PR3 es un agente que inhibe la función fisiológica de PR3, tal como por ejemplo uniéndose a PR3, disminuyendo, impidiendo o inhibiendo la unión de c-ANCA a PR3, o que impide la degranulación activada por PR3 de los neutrófilos. Un inhibidor de PR3 puede ser un inhibidor reversible de PR3 o un inhibidor irreversible de PR3. Un inhibidor reversible de PR3 es una composición con un ingrediente activo que tiene afinidad por PR3 mediante interacciones no covalentes. Un inhibidor irreversible de PR3 que interactúa usando interacciones covalentes estables con PR3. Un inhibidor de PR3 puede ser un inhibidor no específico de PR3 o un inhibidor específico de PR3. En particular, muchos inhibidores no específicos de la PR3 son también inhibidores de la elastasa de neutrófilos humana (HNE) y, en ocasiones, de la catepsina G (CG). Un inhibidor de PR3 puede incluir, sin limitación, A1PI, elafina, preelafina (es decir, trappina-2), serpina B1, a-2 macroglobulinas, a-2 macroglobulina, eglina C, una a-1 antiquimotripsina (ACT) modificada, azapéptidos y anticuerpos contra PR3.

Los presentes usos también contemplan un agente para eliminar el dominio de PR3 que el cuerpo está reconociendo para la producción de autoanticuerpos. Al eliminar la diana, la concentración de ANCA puede disminuir debido a la falta de estímulo para las células b del sistema inmunitario.

Los inhibidores de PR3 incluyen, pero no se limitan a: proteínas, péptidos, anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen selectivamente a PR3, y moléculas pequeñas. Ejemplos de proteínas para su uso en la presente memoria pueden incluir A1PI, serpina B1, trappina-2, elafina, a-2 macroglobulina, a-1 antiquimotripsina modificada, eglina c, azapéptidos, y fragmentos y variantes de los mismos. Un compuesto de "molécula pequeña" para su uso en la presente memoria puede ser, por ejemplo, un derivado de 1,2,5-tiadiazolidin-3-ona 1,1 dióxido, un derivado de N-hidroxisuccinimida, 7-NH<2>-4-Cl-3-(2-bromoetoxi)isocumarina, 3,4-dicloroisocumarina, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValP(OPh)2, Boc-Val-Pro-ValP(OPh)2, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValCh2Cl, y SURAMIN™.

Una proteína modificada o una "variante" de una proteína como se describe en la presente memoria es una proteína que tiene una o más adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos. Como se explica más adelante, estas adiciones, deleciones o sustituciones pueden ser conservadoras o no conservadoras. Una "sustitución conservadora de aminoácidos", como se utiliza en la presente memoria, es aquella en la que un residuo de aminoácido se sustituye por otro residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares, incluyendo cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Los intercambios más frecuentes son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/lle, Leu/Val, Ala/Glu y Asp/Gly, en ambas direcciones. Los intercambios de aminoácidos en proteínas y péptidos, que generalmente no alteran la actividad de las proteínas o péptidos, son conocidos en la técnica (H. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, Nueva York, 1979).

El término "derivado de una proteína" se refiere a un péptido que tiene uno o más residuos químicamente derivados por reacción de un grupo funcional lateral. Tales moléculas derivadas incluyen, por ejemplo, aquellas moléculas en las que los grupos amino libres se han derivado para formar clorhidratos de amina, grupos ptolueno sulfonilo, grupos carbobenzoxi, grupos t-butiloxicarbonilo, grupos cloroacetilo o grupos formilo. Los grupos carboxilo libres pueden ser derivados para formar sales, ésteres metílicos y etílicos u otros tipos de ésteres o hidrazidas. Los grupos hidroxilo libres pueden ser derivados para formar derivados O-acílicos u O-alquílicos. El nitrógeno imidazólico de la histidina puede ser derivado para formar N-im-bencilhistidina. También se incluyen como derivados aquellos péptidos que contienen uno o más aminoácidos derivados naturales de los veinte aminoácidos estándar. Por ejemplo: la 4-hidroxiprolina puede sustituir a la prolina; la 5-hidroxilisina puede sustituir a la lisina; la 3-metilhistidina puede sustituir a la histidina; la homoserina puede sustituir a la serina; y la ornitina puede sustituir a la lisina.

Las variantes pueden caracterizarse por la identidad de secuencia o por el número de adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos. Los fragmentos o isoformas de las proteínas descritas en la presente memoria pueden incluir adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos, que, de nuevo, pueden caracterizarse por la identidad de secuencia o el número de cambios de aminoácidos.

El término "homología de secuencia" o "identidad de secuencia", como se utiliza en la presente memoria, se refiere al porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias polipeptídicas. Para determinar el porcentaje de identidad entre dos secuencias polipeptídicas, se alinean las secuencias de aminoácidos de esas dos secuencias, preferentemente mediante el algoritmo Clustal W (Thompson, J D, Higgins D G, Gibson T J, 1994, Nucleic Acids Res. 22 (22): 4673-4680), junto con la matriz de puntuación BLOSUM 62 (Henikoff S, and Henikoff J. G., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci.<u>S<a>89: 10915-10919) y una penalización por apertura de brecha de 10 y una penalización por extensión de brecha de 0,1, de forma que se obtenga la coincidencia de orden más alto entre dos secuencias en las que al menos el 50% de la longitud total de una de las secuencias esté implicada en el alineamiento. Otros procedimientos que pueden utilizarse para alinear secuencias son el procedimiento de alineación de Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol., 1970, 48: 443), revisado porSmith and Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2: 482) de forma que se obtenga la coincidencia de mayor orden entre las dos secuencias y se determine el número de aminoácidos idénticos entre las dos secuencias. Otros procedimientos para calcular el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos son generalmente reconocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, los descritos por Carillo and Lipton (SIAM J. Applied Math., 1988, 48:1073) y los descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, e.d. Oxford University Press, Nueva York, 1988Biocomputing: Informatics and Genomics Projects. Por lo general, se emplean programas informáticos para estos cálculos. Los programas informáticos que pueden utilizarse a este respecto incluyen, pero no se limitan a, GCG (Devereux et al., Nucleic Acids Res., 1984, 12: 387) BLASTP, BLASTN y FASTA (Altschul et al., J. Molec.

Biol., 1990: 215: 403). En un aspecto, las presentes variantes de secuencia modificada tienen al menos un 70%, al menos un 75%, al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 87%, al menos un 90%, al menos un 91%, al menos un 92%, al menos un 93%, al menos un 94%, al menos un 95%, al menos un 96%, al menos un 97%, al menos un 98%, al menos un 99% o un 100% de identidad de secuencia con otra secuencia, ya sea en una base local o de longitud completa.

Si es a nivel local, la localidad se determina por una región de la secuencia no modificada o nativa, o un motivo específicamente identificado de la secuencia no modificada o nativa. En un aspecto, la localidad es al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17, al menos 18, al menos 19, al menos 20, al menos 25, al menos 30, al menos 35, al menos 40, al menos 45, al menos 50, al menos 55, al menos 60, al menos 65, al menos 70, o al menos 75 ácidos nucleicos o aminoácidos de la secuencia no modificada o nativa.

En una realización, un inhibidor de PR3 es A1PI o una variante del mismo. A1PI es una serpina (gen "serpina A1"). A1PI tiene tres isoformas, siendo la primera la secuencia de 418 aminoácidos de SEQ ID NO: 1. El segundo son los aminoácidos 1-359 de SEQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, y siendo la tercera isoforma una secuencia que tiene los aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1. El péptido señal en las secuencias A1PI son los aminoácidos 1-24 de SEQ ID NO: 1. La glicosilación cuando se expresa en humanos se produce en las posiciones de aminoácidos 70 (N-ligado), 107 (N-ligado) y 271 (N-ligado). Una S-cisteinilcisteína puede aparecer en la posición aminoacídica 256 de SEQ ID NO: 1. La A1PI se comercializa en formulaciones intravenosas como ZEMAIRA™ (CSL Behring), ARALAST™ (BAXTER), ARALAST NP™ (BAXTER), GLASSIA™ (Baxter), PROLASTIN™ (Grifols Therapeutics), PROLASTIN-C™ (Grifols Therapeutics).

En aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, o aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1. En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, aminoácidos 1-359 de SEQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, o aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, como máximo el 70%, como máximo el 75%, como máximo el 80%, como máximo el 85%, como máximo el 86%, como máximo el 87%, como máximo el 88%, como máximo el 89%, como máximo el 90%, como máximo el 91%, como máximo el 92%, como máximo el 93%, como máximo el 94%, como máximo el 95%, como máximo el 96%, como máximo el 97%, como máximo el 98% o como máximo el 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, aminoácidos 1-359 de SEQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, o aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1.

En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene, por ejemplo, al menos 5 aminoácidos, al menos 6 aminoácidos, al menos 7 aminoácidos, al menos 8 aminoácidos, al menos 9 aminoácidos, al menos 10 aminoácidos, al menos 11 aminoácidos, al menos 12 aminoácidos, al menos 13 aminoácidos, al menos 14 aminoácidos, al menos 15 aminoácidos, al menos 16 aminoácidos, al menos 17 aminoácidos, al menos 18 aminoácidos, al menos 19 aminoácidos, al menos 20 aminoácidos, al menos 21 aminoácidos, al menos 22 aminoácidos, al menos 23 aminoácidos, al menos 24 aminoácidos, al menos 25 aminoácidos, al menos 26 aminoácidos, al menos 27 aminoácidos, al menos 28 aminoácidos, al menos 29 aminoácidos, al menos 30 aminoácidos, al menos 31 aminoácidos, al menos 32 aminoácidos, al menos 33 aminoácidos, al menos 34 aminoácidos, al menos 35 aminoácidos, al menos 36 aminoácidos, al menos 37 aminoácidos, al menos 38 aminoácidos, al menos 39 aminoácidos o al menos 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 1, aminoácidos 1 359 de SEQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, o aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene, por ejemplo, como máximo 5 aminoácidos, como máximo 6 aminoácidos, como máximo 7 aminoácidos, como máximo 8 aminoácidos, como máximo 9 aminoácidos, como máximo 10 aminoácidos, como máximo 11 aminoácidos, como máximo 12 aminoácidos, como máximo 13 aminoácidos, como máximo 14 aminoácidos, como máximo 15 aminoácidos, como máximo 16 aminoácidos, como máximo 17 aminoácidos, como máximo 18 aminoácidos, como máximo 19 aminoácidos, como máximo 20 aminoácidos, como máximo 21 aminoácidos, como máximo 22 aminoácidos, como máximo 23 aminoácidos, como máximo 24 aminoácidos, como máximo 25 aminoácidos, como máximo 26 aminoácidos, como máximo 27 aminoácidos, como máximo 28 aminoácidos, como máximo 29 aminoácidos, como máximo 30 aminoácidos, como máximo 31 aminoácidos, como máximo 32 aminoácidos, como máximo 33 aminoácidos, como máximo 34 aminoácidos, como máximo 35 aminoácidos, como máximo 36 aminoácidos, como máximo 37 aminoácidos, como máximo 38 aminoácidos, como máximo 39 aminoácidos o como máximo 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 1, aminoácidos 1-359 de SeQ ID NO: 1 con la adición de VRSP en el C-terminal, o aminoácidos 1-306 de SEQ ID NO: 1.

También en otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es un A1PI que tiene los siguientes cambios de aminoácidos en SEQ ID NO: 1: S4L, el aminoácido 12 puede estar suprimido, L23P, D26H, D26A, T37A, H39L, A58T, L61P, R63C, L65P, S69F, el aminoácido 75 puede faltar, S75F, A84T, G91E, T92I, T96A, T109M, P112T, I116N, R125H, G139S, G139D y N140G, G172R, G172W, Q180E, T174H, los aminoácidos 190-198 cambian de QGKIVDVLK a GFQNAILVR, E228K, E229D, V237A, T273N, D280V, D280G, E288V, el aminoácido 305 puede suprimirse, V326I, S354F, A360T, D365N, E366K, M382R, P386H, P386T, E387K, P393L, E400D, G410L, N414S y P415H.

En una realización, un inhibidor de PR3 es la serpina B1 o una variante de la misma. Las serpinas son inhibidores suicidas irreversibles de las serina proteasas. Las serpinas interactúan con su diana mediante un mecanismo que implica la escisión del bucle del centro reactivo (RCL) de la serpina entre los residuos P1 y P1' y su inserción completa en la hoja A de la serpina, lo que provoca el desplazamiento de polo a polo de la proteasa unida covalentemente dentro del complejo. (Jegot et al., FASEB J., 25: 3019-3031,2011). La unión de la serpina B1 modificada a neutrófilos activados demostró una disminución de la unión entre PR3 y ANCA. (Jegot et al., FASEB J., 25: 3019-3031, 2011). La serpina B1 es una secuencia de 379 aminoácidos de SeQ ID NO: 2. serpina B1 RCL es un segmento de aminoácidos de serpina B1 localizado en los residuos 339-349 de SEQ ID NO: 2 y que tiene la secuencia de aminoácidos GIATFCMLMPE (SEQ ID NO: 3).

En aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es una serpina B1 que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es una serpina B1 que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es una serpina B1 que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, como máximo el 70 %, como máximo el 75%, como máximo el 80%, como máximo el 85%, como máximo el 86%, como máximo el 87%, como máximo el 88%, como máximo el 89%, como máximo el 90%, como máximo el 91%, como máximo el 92%, como máximo el 93%, como máximo el 94%, como máximo el 95%, como máximo el 96%, como máximo el 97%, como máximo el 98% o como máximo el 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2.

En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es una Serpina B1 que tiene, por ejemplo al menos 5 aminoácidos, al menos 6 aminoácidos, al menos 7 aminoácidos, al menos 8 aminoácidos, al menos 9 aminoácidos, al menos 10 aminoácidos, al menos 11 aminoácidos, al menos 12 aminoácidos, al menos 13 aminoácidos, al menos 14 aminoácidos, al menos 15 aminoácidos, al menos 16 aminoácidos, al menos 17 aminoácidos, al menos 18 aminoácidos, al menos 19 aminoácidos, al menos 20 aminoácidos, al menos 21 aminoácidos, al menos 22 aminoácidos, al menos 23 aminoácidos, al menos 24 aminoácidos, al menos 25 aminoácidos, al menos 26 aminoácidos, al menos 27 aminoácidos, al menos 28 aminoácidos, al menos 29 aminoácidos, al menos 30 aminoácidos, al menos 31 aminoácidos, al menos 32 aminoácidos, al menos 33 aminoácidos, al menos 34 aminoácidos, al menos 35 aminoácidos, al menos 36 aminoácidos, al menos 37 aminoácidos, al menos 38 aminoácidos, al menos 39 aminoácidos o al menos 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 2. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es una serpina B1 que tiene, por ejemplo, como máximo 5 aminoácidos, como máximo 6 aminoácidos, como máximo 7 aminoácidos, como máximo 8 aminoácidos, como máximo 9 aminoácidos, como máximo 10 aminoácidos, como máximo 11 aminoácidos, como máximo 12 aminoácidos, como máximo 13 aminoácidos, como máximo 14 aminoácidos, como máximo 15 aminoácidos, como máximo 16 aminoácidos, como máximo 17 aminoácidos, como máximo 18 aminoácidos, como máximo 19 aminoácidos, como máximo 20 aminoácidos, como máximo 21 aminoácidos, como máximo 22 aminoácidos, como máximo 23 aminoácidos, como máximo 24 aminoácidos, como máximo 25 aminoácidos, como máximo 26 aminoácidos, como máximo 27 aminoácidos, como máximo 28 aminoácidos, como máximo 29 aminoácidos, como máximo 30 aminoácidos, como máximo 31 aminoácidos, como máximo 32 aminoácidos, como máximo 33 aminoácidos, como máximo 34 aminoácidos, como máximo 35 aminoácidos, como máximo 36 aminoácidos, como máximo 37 aminoácidos, como máximo 38 aminoácidos, como máximo 39 aminoácidos o como máximo 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 2.

En otro aspecto de esta realización, una serpina B1 puede modificarse fuera del RCL, pero también contiene hasta 1, hasta 2 o hasta 3 sustituciones de aminoácidos en la región RCL de SEQ ID NO: 3.

En otro aspecto de esta realización, la serpina B1 puede modificarse en uno o más de sus dos sitios funcionales: F343-C344 de SEQ ID NO: 2 (interactúa con CG); y C344-M345 de SEQ ID NO: 2 (escindido por PR3 y HNE para iniciar la unión irreversible de la proteasa). F343 es el P1 para reaccionar con CG, y es P2 para inhibir PR3 y HNE, y reacciona con el residuo de proteasa 99 de PR3. En otro aspecto de esta realización, F343 se sustituye con asparagina (Asp) que suprime la escisión por CG y mejora la escisión por PR3. En otro aspecto de esta realización, M345 se sustituye por una arginina (Arg), que ayuda con la escisión de HNE.

En otro aspecto de esta realización, el RCL modificado puede ser cualquiera de: GIATDCMLMPE (SEQ ID NO: 4), GIATDCRMLMPE (SEQ ID NO: 5), GIATDARLMPE (SEQ ID NO: 6), GDATDARLMPE (SEQ ID NO: 7), GISTDARLMPE (SEQ ID NO: 8) (inhibidor preferido de P<r>3 porque sólo es escindido lentamente por HNE). En una realización, un inhibidor de PR3 es trappina-2 o una variante del mismo. La trappina-2 (también conocida como "preelafina") es el precursor de la elafina. La elafina es el producto maduro de trappina-2, que representa los 57 aminoácidos C-terminales de trappina-2 (aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9). La elafina es un inhibidor de la proteinasa epitelial y también se conoce como antileucoproteinasa derivada de la piel (SKALP), inhibidor de la peptidasa 3 o inhibidor específico de la elastasa (ESI). La trappina-2 tiene 117 aminoácidos de longitud y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9. Otras fuentes son las secuencias de proteínas que aparecen en GENBANK.TM. No. de acceso NP002629, P19957, NP003055, BAA02441, JH0614, AAB34627, CAA79223 y AAB26371, consultados el 5 de noviembre de 2014. Número EntrezGene 5266. Pueden producirse enlaces disulfuro entre los aminoácidos 76 y 105, 83 y 109, 92 y 104, y 98 y 113 de SEQ ID NO: 9. La trappina-2, un inhibidor de la proteasa, tiene un dominio N-terminal único que le permite reticularse con proteínas de la matriz extracelular mediante la transglutaminasa. Este dominio (aminoácidos 31-47 y/o 55-71 de SEQ ID NO: 9) contiene varios motivos repetidos (representados por esta entrada) con la secuencia consenso Gly-Gln-Asp-Pro-Val-Lys (SEQ ID NO: 10), y éstas juntas pueden anclar toda la molécula a las proteínas de la matriz extracelular, tal como la laminina, la fibronectina, la beta-cristalina, el colágeno IV, el fibrinógeno y la elastina, mediante enlaces cruzados catalizados por la transglutaminasa. Todo el dominio es rico en glutamina y lisina, lo que permite a la(s) transglutaminasa(s) catalizar la formación de un enlace isopéptido intermolecular épsilon-(gammaglutamil)lisina [PMID: 17964057]. El producto génico preelafina consta de 117 aminoácidos: el iniciador Met, un péptido señal putativo de 22 aminoácidos, una pro-secuencia de aminoácidos 23-60 de SEQ ID NO: 9, y los 57 aminoácidos C-terminales de la elafina madura (aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9).

En aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es un trappina-2 que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 26-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 35-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 31-47 de SEQ ID NO: 9, o los aminoácidos 55-71 de SEQ ID NO: 9. En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es una trappina-2 que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 9, aminoácidos 26-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 35-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 31-47 de SEQ ID NO: 9, o los aminoácidos 55-71 de SEQ ID NO: 9. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es una trappina-2 que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, como máximo el 70%, como máximo el 75%, como máximo el 80%, como máximo el 85%, como máximo el 86%, como máximo el 87%, como máximo el 88%, como máximo el 89%, como máximo el 90%, como máximo el 91%, como máximo el 92%, como máximo el 93%, como máximo el 94%, como máximo el 95%, como máximo el 96%, como máximo el 97%, como máximo el 98% o como máximo el 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 9, aminoácidos 26-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 35-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 31-47 de SEQ ID NO: 9, o los aminoácidos 55-71 de SEQ ID NO: 9.

En otros aspectos de esta realización, un inhibidor de PR3 es una trappina-2 que tiene, por ejemplo al menos 5 aminoácidos, al menos 6 aminoácidos, al menos 7 aminoácidos, al menos 8 aminoácidos, al menos 9 aminoácidos, al menos 10 aminoácidos, al menos 11 aminoácidos, al menos 12 aminoácidos, al menos 13 aminoácidos, al menos 14 aminoácidos, al menos 15 aminoácidos, al menos 16 aminoácidos, al menos 17 aminoácidos, al menos 18 aminoácidos, al menos 19 aminoácidos o al menos 20 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 9, aminoácidos 26-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 35-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 31-47 de SEQ ID NO: 9, o los aminoácidos 55-71 de SEQ ID NO: 9. En otros aspectos más de esta realización, un inhibidor de PR3 es un trappina-2 que tiene, por ejemplo, como máximo 5 aminoácidos, como máximo 6 aminoácidos, como máximo 7 aminoácidos, como máximo 8 aminoácidos, como máximo 9 aminoácidos, como máximo 10 aminoácidos, como máximo 11 aminoácidos, como máximo 12 aminoácidos, como máximo 13 aminoácidos, como máximo 14 aminoácidos, como máximo 15 aminoácidos, como máximo 16 aminoácidos, como máximo 17 aminoácidos, como máximo 18 aminoácidos, como máximo 19 aminoácidos o como máximo 20 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas en relación con SEQ ID NO: 9, aminoácidos 26-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 35-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 61-117 de SEQ ID NO: 9, aminoácidos 31-47 de SEQ ID NO: 9, o los aminoácidos 55-71 de SEQ ID NO: 9.

En una realización, una trappina-2 incluye secuencias de aminoácidos que tienen sustituciones en los aminoácidos 17, 34, 91 y 92 de SEQ ID NO: 9. En una realización, la una trappina-2 puede incluir hasta 4, hasta 3, hasta 2, o hasta 1 aminoácido de las sustituciones de aminoácidos como sigue: T17M, T34P, R91C o C92A en comparación con SEQ ID NO: 9.

El gen elafina reside dentro de un locus de 700 kilobases en el cromosoma 20q13 que contiene catorce genes que codifican proteínas del dominio de la proteína ácida del suero (WAP) (por ejemplo, las posiciones aminoacídicas 69-117 de SEQ ID NO: 9). La propia elafina es una proteína que contiene un dominio WAP La elafina pertenece a la familia de genes trappina y recibió el nombre sistemático de trappina-2 en una clasificación reciente. La familia trappina se define por un dominio N-terminal de sustrato transglutaminasa y un núcleo C-terminal de cuatro disulfuros. Se ha sugerido que las trappinas desempeñan un papel en la regulación de la inflamación y en la protección contra el daño tisular en los epitelios estratificados. La elafina es un inhibidor de la elastasa leucocitaria y de la proteinasa-3 y, además, es un sustrato de las transglutaminasas. La proteína se expresa de forma constitutiva en diversos epitelios, incluidos los de los folículos pilosos, el esófago, la vagina y la cavidad oral. La elafina no está presente en la piel humana normal, pero se induce fuertemente en afecciones inflamatorias como la psoriasis y la cicatrización de heridas. La proteína de longitud completa se traduce como una proteína de 12,3 kDa y 117 aminoácidos denominada preelafina o trappina-2. La escisión del péptido señal da lugar a una proteína madura con una masa molecular de 9,9 kDa. La proteína secretada de 9,9 kDa es la forma principal que se encuentra en el medio de cultivo. En los extractos de piel está presente una forma de 6 kDa que comprende los 57 aminoácidos más C-terminales. En el suero, tanto la forma de 9,9 kDa como la de 6 kDa parecen estar presentes. En suero/plasma de individuo sano está presente aproximadamente 10-50 ng/ml de elafina.

Las constantes de velocidad de asociación y disociación para elafina se midieron como constante de velocidad de asociación de 4,0 *10'6M-1s-1, constante de velocidad de disociación de 1,7 ><10'3s'1, y constante de inhibición de 4,2 ><10'10 M. (Ying and Simon, American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology, V. 24, 2001, pp. 83-89). La constante de disociación de equilibrio (Ki) para la asociación proteinasa-3/elafina es de 20 nM. Las asociaciones proteinasa-3/trappina-2 tienen un Ki de 12 nm. Sin embargo, se ha comprobado que los valores de Ki tanto para la trappina como para la elafina se sitúan en el intervalo subnanomolar (Véase, por ejemplo, Nobar et al, FEBS 272 (2005) 588305893 abstract).

Otros inhibidores proteínicos o peptídicos de PR3 incluyen Alfa-2 macroglobulina, Eglin C (Rao et al., J. Biol. Chem 1991; 266:9540-8), una alfa-1 antiquimotripsina (ACT) modificada (Grouas et al., Biochem Biophys Res Commun 1997, 33: 697-9 que describe una variante recombinante de ACT (LEX032) obtenida por bioingeniería), y azapéptidos (Korkmaz et al., Current Pharmaceutical Design, 2013, v. 19, No. 6, pp. 966-76). Un ejemplo de un azapéptido de interés tiene estructuras de Abz-VADCAQ-EDDnp (SEQ ID NO: 12) y Abz-VADCRDRQ-EDDnp (SEQ ID NO: 13), Abz-VAECCQ-EDDnp (SEQ ID NO: 14) y Abz-QPMDVVQSVPQ-EDDnp (SEQ ID NO: 15). (EDDnp= N-(2,4-dinitrofenil)etilendiamina); Abz= ácido orto-aminobenzoico).

Los anticuerpos contra PR3 o fragmentos de los mismos se unen a uno o más epítopos de PR3. Ejemplos del epítopo incluyen una única secuencia de aminoácidos, una estructura tridimensional formada por una secuencia de aminoácidos, una secuencia de aminoácidos que tiene una cadena de azúcar unida a ella, una estructura tridimensional formada por una secuencia de aminoácidos que tiene una cadena de azúcar unida a ella, y similares, que un anticuerpo monoclonal reconoce y a los que se une. El anticuerpo puede ser policlonal o monoclonal.

PR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11. Aminoácidos 1-25 de SEQ ID NO: 11 son una secuencia de señales. PR3 tiene sitios activos en los aminoácidos 71, 118 y 203 de SEQ ID NO: 11. Aminoácidos 26 y 27 y 249-256 de SEQ ID NO: 11 se escinden durante el procesamiento, y la proteína madura incluye los aminoácidos 28-248 de SEQ ID NO: 11.

En otros aspectos de esta realización, una PR3 tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 11 o los aminoácidos 28-248 de SEQ ID NO: 11. En otros aspectos más de esta realización, una PR3 tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, como máximo el 70%, como máximo el 75%, como máximo el 80%, como máximo el 85%, como máximo el 86%, como máximo el 87%, como máximo el 88%, como máximo el 89%, como máximo el 90%, como máximo el 91%, como máximo el 92%, como máximo el 93%, como máximo el 94%, como máximo el 95%, como máximo el 96%, como máximo el 97%, como máximo el 98% o como máximo el 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 11 o los aminoácidos 28-248 de SEQ ID NO: 11.

En otros aspectos de esta realización, un PR3 tiene, por ejemplo, al menos 5 aminoácidos, al menos 6 aminoácidos, al menos 7 aminoácidos, al menos 8 aminoácidos, al menos 9 aminoácidos, al menos 10 aminoácidos, al menos 11 aminoácidos, al menos 12 aminoácidos, al menos 13 aminoácidos, al menos 14 aminoácidos, al menos 15 aminoácidos, al menos 16 aminoácidos, al menos 17 aminoácidos, al menos 18 aminoácidos, al menos 19 aminoácidos, al menos 20 aminoácidos, al menos 21 aminoácidos, al menos 22 aminoácidos, al menos 23 aminoácidos, al menos 24 aminoácidos, al menos 25 aminoácidos, al menos 26 aminoácidos, al menos 27 aminoácidos, al menos 28 aminoácidos, al menos 29 aminoácidos, al menos 30 aminoácidos, al menos 31 aminoácidos, al menos 32 aminoácidos, al menos 33 aminoácidos, al menos 34 aminoácidos, al menos 35 aminoácidos, al menos 36 aminoácidos, al menos 37 aminoácidos, al menos 38 aminoácidos, al menos 39 aminoácidos o al menos 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 11 o los aminoácidos 28-248 de SEQ ID NO: 11. En otros aspectos más de esta realización, un PR3 tiene, por ejemplo, como máximo 5 aminoácidos, como máximo 6 aminoácidos, como máximo 7 aminoácidos, como máximo 8 aminoácidos, como máximo 9 aminoácidos, como máximo 10 aminoácidos, como máximo 11 aminoácidos, como máximo 12 aminoácidos, como máximo 13 aminoácidos, como máximo 14 aminoácidos, como máximo 15 aminoácidos, como máximo 16 aminoácidos, como máximo 17 aminoácidos, como máximo 18 aminoácidos, como máximo 19 aminoácidos, como máximo 20 aminoácidos, como máximo 21 aminoácidos, como máximo 22 aminoácidos, como máximo 23 aminoácidos, como máximo 24 aminoácidos, como máximo 25 aminoácidos, como máximo 26 aminoácidos, como máximo 27 aminoácidos, como máximo 28 aminoácidos, como máximo 29 aminoácidos, como máximo 30 aminoácidos, como máximo 31 aminoácidos, como máximo 32 aminoácidos, como máximo 33 aminoácidos, como máximo 34 aminoácidos, como máximo 35 aminoácidos, como máximo 36 aminoácidos, como máximo 37 aminoácidos, como máximo 38 aminoácidos, como máximo 39 aminoácidos o como máximo 40 aminoácidos, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos contiguas y/o no contiguas relativas a SEQ ID NO: 11 o los aminoácidos 28-248 de SEQ ID NO: 11.

En otro aspecto de esta realización, un PR3 puede incluir hasta 12, hasta 11, hasta 10, hasta 9, hasta 8, hasta 7, hasta 7, hasta 6, hasta 5, hasta 4, hasta 3, hasta 2, o hasta 1 de las deleciones o sustituciones de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 como sigue: A2R, S38I, P40PI, Q46E, R48A, S64D, A70P, V119I, A135T, T136S, y/o el aminoácido 255 pueden ser suprimidos.

En otro aspecto de esta realización, el anticuerpo reconoce uno o más de Lys99, Ser195, Asp102, y His57 de SEQ ID NO: 11.

Un anticuerpo que se une a PR3 con alta afinidad es un anticuerpo que tiene suficiente afinidad por un anticuerpo terapéutico, preferentemente un anticuerpo que se une a<p>R3 con constante de disociación valor KD inferior a 1*10<7>M, inferior a 1*10<8>M, inferior a 1*10<9>M inferior a7x10<' 10>M, o inferior a 2*10<' 10>M en términos de afinidad. Por lo tanto, el anticuerpo de la presente invención puede exhibir altos efectos terapéuticos. En una realización, el anticuerpo se disocia lentamente de la unión a p R3.

En una realización, el epítopo es un epítopo lineal, y el anticuerpo o fragmento de anticuerpo reconoce específicamente una secuencia de al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, o al menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 11, o una secuencia que tenga al menos un 70%, al menos un 75%, al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 86%, al menos un 87%, al menos un 88%, al menos un 89%, al menos un 90%, al menos un 91%, al menos un 92%, al menos un 93%, al menos un 94%, al menos un 95%, al menos un 96%, al menos un 97%, al menos un 98%, al menos un 99%, o al menos un 100% de identidad de secuencia con la región correspondiente de SEQ ID NO: 11.

Los anticuerpos pueden ser anticuerpos completos o porciones de un anticuerpo capaces de unirse selectivamente a PR3 e inhibir la interacción de PR3 con c-ANCA o la degranulación de neutrófilos. El término "anticuerpo", como se utiliza en la presente memoria, pretende incluir anticuerpos, cadenas de inmunoglobulinas, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos quiméricos y variantes de anticuerpos que contengan una o más estructuras características de un anticuerpo. Las estructuras características de un anticuerpo incluyen fragmentos de anticuerpo, regiones bisagra de anticuerpo, la región Fc, una cadena pesada de longitud completa, una cadena ligera de longitud completa, una región variable, una región constante, una CDR (1, 2 o 3), etc. Los anticuerpos también incluyen anticuerpos quiméricos y proteínas de fusión. Las estructuras de los anticuerpos pueden proceder de inmunoglobulinas tales como IgM, IgG, IgE, IgA o IgD.

Además, los presentes usos contemplan la administración de moléculas pequeñas. Un compuesto de "molécula pequeña" para su uso en la presente memoria puede ser, por ejemplo, un derivado de 1,2,5-tiadiazolidin-3-ona 1,1 -dióxido, un derivado de N-hidroxisuccinimida, 7-NH<2>-4-Cl-3-(2-bromoetoxi)isocumarina, 3,4-dicloroisocumarina, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValP(OPh)2, Boc-Val-Pro- ValP(OPh)2, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValCh2Cl, N-tosil-L-fenilalanina-clorometilcetona (TPCK) y SURAMIN™. Las moléculas pequeñas de interés pueden encontrarse en Korkmaz et al., Current Pharmaceutical Design, 2013, 19, 966-976.

Como se utiliza en la presente memoria, el término "sujeto" se refiere a cualquier mamífero y, en particular, a un ser humano, y también se denomina paciente. Un "sujeto necesitado de tratamiento" para el GPA según los procedimientos divulgados en la presente invención es un sujeto que tiene GPA, un sujeto que tiene c-ANCA, o un sujeto que está en riesgo de GPA.

La principal población de pacientes de interés son los pacientes diagnosticados con GPA (es decir, Granulomatosis de Wegener (WG)). Esta población se caracteriza por la presencia de c-ANCA.

En una realización, la dosis administrada semanalmente oscila entre 1-1000 mg/kg, 1-500 mg/kg, 1-200 mg/kg, 1-100 mg/kg, 1-50 mg/kg, 10-500 mg/kg, 10-250 mg/kg, 10-200 mg/kg, 10-150 mg/kg, 10-100 mg/kg, 10-50 mg/kg, 50-1000 mg/kg, 50-500 mg/kg, 50-250 mg/kg, 50-200 mg/kg, 50-150 mg/kg, 50-100 mg/kg, 20-500 mg/kg, 20-250 mg/kg, 20-200 m/kg, 20-150 mg/kg, 20-100 mg/kg, 60-120 mg/kg o 20-60 mg/kg. En una realización, cuando se administra la proteína, por ejemplo con A1PI, un intervalo de dosificación puede oscilar entre 60-240 mg/kg de peso corporal administrado una vez a la semana. En una realización, A1PI se administra a 20 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg, 90 mg/kg, 100 mg/kg, 120 mg/kg, 140 mg/kg, 160 mg/kg o 180 mg/kg.

En una realización, el régimen de dosificación durante el curso del tratamiento incluye una "dosis de carga" y una "dosis de mantenimiento" La terapia puede iniciarse con una "dosis de carga" (es decir, una dosis inicial más alta del fármaco que puede administrarse al principio del tratamiento antes de administrar una dosis de mantenimiento más baja durante un largo periodo de tiempo) La dosis de mantenimiento puede incluir un 25%, 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 66%, 70%, 75%, 80% o más del principio activo contenido en la dosis de carga. En una realización, el régimen de dosificación durante el curso del tratamiento incluye una dosis de carga, una o más dosis "escalonadas" y una dosis de mantenimiento. Una dosis "escalonada" es una dosificación intermedia entre la dosis de carga y la dosis de mantenimiento.

Si se administra por vía intravenosa, la velocidad de administración puede variar en función de la concentración del fármaco, la potencia del fármaco y las características del paciente. Es deseable que la velocidad de administración sea suficiente para administrar una dosis completa en un periodo comprendido entre 5 minutos y 1 hora, entre 5 minutos y 45 minutos, entre 10 minutos y 40 minutos, entre 15 minutos y 35 minutos, entre 5 minutos y 30 minutos, o entre 10 minutos y 30 minutos. En una realización, la velocidad de administración puede ser de aproximadamente 0,2 ml/kg/min.

La administración de una composición o formulación puede ser una vez al mes, una vez cada dos semanas, una vez a la semana, una vez al día, dos veces al día o más a menudo. La frecuencia puede disminuir durante una fase de mantenimiento del tratamiento, por ejemplo, una vez cada dos semanas en lugar de cada semana o cada día. La dosis y la frecuencia de administración pueden ajustarse según el criterio del médico tratante, por ejemplo, teniendo en cuenta los signos clínicos, los signos patológicos y los síntomas clínicos y subclínicos de una enfermedad de las tratadas con los presentes procedimientos, así como el historial clínico del paciente. Por ejemplo, pueden estar indicadas dosis o frecuencias de administración más altas, o una duración más prolongada del tratamiento cuando un paciente presenta síntomas de GPA o un brote de vasculitis, o si el paciente tiene antecedentes de GPA previa. En los ejemplos se ofrecen ejemplos específicos de dosificación y frecuencia.

En una realización, la dosis administrada será rAAV hA1PI a niveles de dosis comprendidos en genomas vectoriales (VG)/kg de peso corporal mediante inyección intramuscular, inyección subcutánea, infusión intravenosa o inhalación nebulizada.

En una realización, la dosis administrada será una dosis de carga de la proteína administrada antes del uso del rAAV hA1 PI a niveles de dosis que comprenden genomas del vector (VG)/kg de peso corporal mediante inyección intramuscular, inyección subcutánea, infusión intravenosa o inhalación nebulizada.

La duración del tratamiento, es decir, el número de días, meses o años, será determinada fácilmente por un médico que trate al sujeto; sin embargo, el número de días de tratamiento puede oscilar entre aproximadamente 1 día y aproximadamente 365 días o más. Por ejemplo, la duración del tratamiento de una dosis de carga puede ser sólo la primera administración, o puede ser un ciclo de una dosis semanal durante un periodo de dos semanas a un mes o más. Un período de tratamiento escalonado después de la dosis de carga inicial puede variar desde una dosis semanal hasta una dosis semanal durante 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas o más. A continuación, un periodo de dosificación de mantenimiento posterior puede oscilar entre un mes, 5, semanas, 6 semanas, 7 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, 18 semanas, 20 semanas, 24 semanas, 25 semanas, 28 semanas, 30 semanas, 6 meses, 8 meses, un año, dos años, o más. En una realización, la duración del periodo de mantenimiento puede durar el resto de la vida del paciente para suprimir los síntomas crónicos o la recurrencia o reagudización. En una realización, este tratamiento de por vida es la terapia de suplementación A1PI. Tal como se prevé en los presentes procedimientos y se expone más adelante, la eficacia del tratamiento puede supervisarse durante el curso del mismo para determinar si ha tenido éxito o si es necesario un tratamiento adicional (o modificado). Como se utilizan en la presente memoria, los términos "terapéuticamente eficaz" y "cantidad eficaz", utilizados indistintamente, aplicados a una dosis o cantidad se refieren a una cantidad de una composición, compuesto o formulación farmacéutica que es suficiente para dar lugar a una actividad deseada tras su administración a un sujeto que la necesite.

En el contexto de la presente invención, el término "terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de una composición, compuesto o formulación farmacéutica que es suficiente para reducir, eliminar o retrasar al menos un síntoma de una enfermedad o afección especificada en la presente memoria, por ejemplo, GPA. Cuando se administra una combinación de agentes activos, la cantidad eficaz de la combinación, o de los agentes individuales, puede o no incluir cantidades de cada agente que habrían sido eficaces si se hubieran administrado individualmente. La dosificación de la formulación terapéutica variará en función de la naturaleza de la enfermedad o afección, el historial médico del paciente, la frecuencia de administración, la forma de administración, elaclaramiento del agente del hospedador y otros factores similares. La dosis inicial puede ser mayor, seguida de dosis de mantenimiento más pequeñas. La dosis puede administrarse, por ejemplo, semanal, quincenal, diaria, quincenal, etc., para mantener un nivel de dosificación eficaz.

Como se utiliza en la presente memoria, "tratar" o "tratamiento" de un estado, trastorno o condición (por ejemplo, GPA) incluye: (1) prevenir o retrasar la aparición de síntomas clínicos o subclínicos del estado, trastorno o afección en desarrollo en un mamífero que pueda estar afectado o predispuesto al estado, trastorno o afección pero que aún no experimente o muestre síntomas clínicos o subclínicos del estado, trastorno o afección; y/o (2) inhibir el estado, trastorno o afección, incluyendo detener, reducir o retrasar el desarrollo de la enfermedad o una recaída de la misma (en caso de tratamiento de mantenimiento) o al menos un síntoma clínico o subclínico de la misma; y/o (3) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión del estado, trastorno o afección o de al menos uno de sus síntomas clínicos o subclínicos; y/o (4) provocar una disminución de la gravedad de uno o más síntomas de la enfermedad. El beneficio para un sujeto a tratar es estadísticamente significativo o al menos perceptible para el paciente o el médico.

El tratamiento puede incluir la inhibición de los niveles de c-ANCA o la inhibición de la unión de c-ANCA a PR3, o la inhibición de la activación de neutrófilos por PR3, o la inhibición de la degranulación de neutrófilos en un sujeto durante al menos un tiempo predeterminado en el sujeto. Por ejemplo, un marco temporal predeterminado puede ser, por ejemplo, al menos una semana, al menos dos semanas, al menos tres semanas, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses o al menos 12 meses. En una realización, el plazo predeterminado es de al menos 6 meses.

El tratamiento puede incluir la inhibición de la vasculitis en un sujeto. Cuando se inhibe la vasculitis, la puntuación de actividad de la vasculitis de Birmingham modificada para la granulomatosis de Wegener (BVAS para WG) disminuye durante al menos un periodo de tiempo predeterminado. Por ejemplo, un marco temporal predeterminado puede ser, por ejemplo, al menos una semana, al menos dos semanas, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 2 años, al menos 3 años o más. En una realización, el plazo predeterminado es de al menos 6 meses.

El tratamiento puede incluir la inhibición del número o la gravedad de los brotes de la enfermedad en un sujeto. En una realización, el número o la gravedad de los brotes de la enfermedad disminuyen al menos en un 25%, al menos en un 30%, al menos en un 35%, al menos en un 40%, al menos en un 50%, al menos en un 60%, al menos en un 70%, al menos en un 75%, al menos en un 80% o al menos en un 90% durante un periodo de tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses o al menos un año. En una realización, la disminución de la gravedad o la aparición de brotes es de al menos un 50% durante al menos seis meses.

El tratamiento puede incluir la prolongación del periodo antes de la recaída del GPA en un sujeto. Por ejemplo, la prórroga puede ser por un periodo de tiempo predeterminado de, por ejemplo, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 2 años, al menos 3 años o más. En una realización, el plazo predeterminado es de al menos 6 meses.

Además, tratar puede significar una disminución en la ocurrencia o severidad de uno o más de los siguientes síntomas: Dolor articular sin hinchazón evidente; inflamación articular; elevación documentada de la temperatura, por ejemplo, temperatura oral (38,0 °C) (no atribuida a otras causas), petequias (pequeñas manchas rojas), púrpura palpable o equimosis (placas grandes) en la piel o supuración (en ausencia de traumatismo) en las mucosas; necrosis tisular extensa debida a isquemia grave (por ejemplo, dígito); úlceras bucales (no atribuidas a otras causas); conjuntivitis bucal; epiescleritis bucal; masa/proptosis retroorbitaria; uveítis; escleritis; exudados retinianos (excluidos los exudados duros); hemorragias retinianas; secreción nasal sanguinolenta; costras nasales; ulceración nasal (no debida a traumatismo); sensibilidad o dolor en los senos paranasales o evidencia radiográfica de sinusitis; colapso del puente nasal; inflamación de las glándulas salivales; inflamación subglótica; sordera de transmisión; sordera causada por lesión del nervio auditivo o de la cóclea; pericarditis; isquemia mesentérica (definida como dolor abdominal intenso, diarrea sanguinolenta, perforación/infarto intestinal); pleuresía; nódulos o cavidades torácicos (nuevos); pseudotumor o ulceración del árbol traqueobronquial (excluidos los causados por tumores o infecciones); hemorragia alveolar; disnea que requiera ventilación artificial; hematuria sin cilindros RBC (>1 en el análisis de orina; >10 rbc/hpf); cilindros RBC en el sedimento urinario; aumento de la creatinina > 30% o disminución del aclaramiento de creatinina > 25%; meningitis (cefalea intensa /- rigidez de nuca, atribuida a meningitis inflamatoria tras la exclusión de infección, hemorragia y otras causas); accidente cerebrovascular; lesión de la médula espinal; parálisis de nervios craneales, neuropatía periférica sensorial (por ejemplo, distribución en guante o media de la pérdida sensorial); mononeuritis motora múltiple; pérdida de peso (>2 kg en un periodo de 28 días no atribuida a otras causas); convulsiones; afectación genitourinaria; lesiones valvulares cardíacas; infartos cutáneos (hemorragias en astilla, infartos digitales); infiltrados pulmonares (no debidos a hemorragia alveolar, cavidad); pérdida de pulsos/amenaza de pérdida de extremidad; angina de pecho; cardiomiopatía; pancreatitis; o D/C aural. Una vez más, la disminución en la aparición o gravedad de estos síntomas puede ocurrir durante un período de tiempo predeterminado, por ejemplo, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 2 años, al menos 3 años o más. En una realización, el marco temporal predeterminado es de al menos 6 meses.

La disminución de la gravedad o aparición puede ser una disminución en comparación con el mismo sujeto o grupo de sujetos durante un periodo de tiempo determinado o en comparación con un sujeto o grupo de sujetos a los que no se les ha administrado las presentes composiciones.

En una realización, el inhibidor de PR3 se administra solo. En otra realización, el PR3 se administra en combinación con otro agente farmacéuticamente activo o terapéutico. En una realización, el agente farmacéuticamente activo o terapéutico es un corticosteroide, tal como prednisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, prednisolona acetato de cortisona, metilprednisolona y variantes de los mismos. En otra realización, el agente activo adicional es ciclofosfamida, metotrexato o azotiprina.

Las composiciones y formulaciones que incluyen un inhibidor de PR3 ("agente") como se describe en la presente memoria pueden administrarse por vía oral, tópica o parenteral, o por cualquier otro procedimiento adecuado conocido en la técnica. El término "parenteral" incluye la inyección o deposición o liberación sostenida a través de vehículos o dispositivos (por ejemplo, intravenosos, subconjuntivales, subtenonianos, epiesclerales, intraesclerales, subesclerales, intraperitoneales, epidurales, intratecales, intramusculares, intraluminales, intratraqueales, epidérmicos, intradérmicos, subdérmicos o subcutáneos). Además, los diferentes agentes administrados en la terapia combinada divulgada en la presente memoriapueden administrarse por diferentes vías. Por ejemplo, un inhibidor de PR3 divulgado en la presente memoria puede inyectarse por vía intravenosa, inyectarse por vía subcutánea, inhalarse o, en algunas formulaciones, tomarse por vía oral.

Si bien es posible utilizar un agente divulgado en la presente memoria para la terapia tal cual, puede ser preferible administrar el agente como una formulación farmacéutica, por ejemplo, en mezcla con un excipiente farmacéutico adecuado, diluyente o portador seleccionado con respecto a la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica estándar. Las formulaciones farmacéuticas incluyen al menos un compuesto activo, en asociación con un excipiente, diluyente y/o portador farmacéuticamente aceptable.

La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en la presente memoria para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del ámbito del buen juicio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable.

Una composición divulgada en la presente memoria puede comprender además uno o más componentes farmacéuticamente aceptables (o componentes farmacéuticos), incluyendo, sin limitación, tampones, conservantes, ajustadores de tonicidad, sales, antioxidantes, agentes ajustadores de osmolalidad, sustancias fisiológicas, sustancias farmacológicas, agentes de carga, agentes emulsionantes, agentes humectantes, agentes edulcorantes o aromatizantes, y similares. Pueden utilizarse diversos tampones y medios para ajustar el pH para preparar una composición farmacéutica divulgada en la presente memoria descriptiva, siempre que la preparación resultante sea farmacéuticamente aceptable. Tales tampones incluyen, sin limitación, tampones de acetato, tampones de citrato, tampones de fosfato, solución salina tamponada neutra, solución salina tamponada con fosfato y tampones de borato. Se entiende que pueden utilizarse ácidos o bases para ajustar el pH de una composición según sea necesario. Los antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, metabisulfito sódico, tiosulfato sódico, acetilcisteína, butilhidroxianisol e hidroxitolueno butilado. Los conservantes útiles incluyen, sin limitación, cloruro de benzalconio, clorobutanol, timerosal, acetato fenilmercúrico, nitrato fenilmercúrico, una composición estabilizada de oxicloro, tal como, por ejemplo, PURITE®y quelantes, tales como, por ejemplo, DTPA o DTPA-bisamida, DTPA cálcico y CaNaDTPA-bisamida. Los ajustadores de tonicidad útiles en una composición farmacéutica incluyen, sin limitación, sales como, por ejemplo, cloruro sódico, cloruro potásico, manitol o glicerina y otro ajustador de tonicidad farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede suministrarse en forma de sal y puede formarse con muchos ácidos, incluyendo, pero no limitando a, clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que las correspondientes formas de base libre. Se entiende que estas y otras sustancias conocidas en la técnica de la farmacología pueden incluirse en una composición farmacéutica.

Una composición en la presente memoria divulgada puede comprender además uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores farmacéuticamente aceptables útiles en las composiciones inmunogénicas divulgadas en la presente memoria incluyen cualquier agente compatible que no sea tóxico para un individuo en las dosificaciones y concentraciones empleadas, y que no tenga sustancialmente ningún efecto perjudicial a largo plazo o permanente cuando se administra, y engloba términos tales como vehículo farmacológicamente aceptable, estabilizador, solubilizante, diluyente, aditivo, auxiliar o excipiente. Dicho portador generalmente se mezcla con un compuesto activo, o se permite diluir o encerrar el compuesto activo y puede ser un agente sólido, semisólido o líquido. Se entiende que los principios activos pueden ser solubles o pueden administrarse como suspensión en el portador o diluyente deseado. Un portador descrito en la presente memoria también puede actuar como adyuvante. Puede utilizarse cualquiera de una variedad de portadores farmacéuticamente aceptables incluyendo, sin limitación, medios acuosos tales como, por ejemplo, agua, solución salina, glicina, ácido hialurónico y similares; portadores sólidos tales como, por ejemplo, manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio y similares; disolventes; medios de dispersión; recubrimientos; agentes antibacterianos y antifúngicos; agentes isotónicos y retardadores de la absorción; o cualquier otro ingrediente inactivo. La selección de un portador farmacológicamente aceptable puede depender del modo de administración. Excepto en la medida en que cualquier portador farmacológicamente aceptable sea incompatible con el principio activo, se contempla su uso en composiciones farmacéuticamente aceptables. Pueden encontrarse ejemplos no limitativos de usos específicos de tales portadores farmacéuticos en PHARMACEUTICAL DOSAGE Fo Rm S AND DRUG DELIVERY SYSTEMS (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7a ed. 1999); REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20a ed.

2000); GOODMAN & GILMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10a ed. 2001); y HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL EXCIPIENTS (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4a edición 2003).

Se apreciará que la cantidad de un agente divulgado en la presente memoria requerida para el uso en el tratamiento variará con la vía de administración, la naturaleza de la condición para la cual se requiere el tratamiento, y la edad, el peso corporal y la condición del paciente, y será en última instancia a discreción del médico o veterinario tratante. Las composiciones contendrán por lo general una cantidad eficaz del agente o agentes activos, solos o en combinación. En una realización, el agente activo se administra en combinación con un glucocorticoide, tal como prednisona o prednisolona. Las dosis preliminares pueden determinarse según ensayos con animales, y el escalado de las dosis para la administración humana puede realizarse según las prácticas aceptadas en la técnica.

La presente divulgación proporciona kits para tratar el PAM en un sujeto. Los kits pueden incluir el inhibidor de PR3 descrito en la presente memoria. El artesano experto apreciará que las dosificaciones de los inhibidores de PR3 anteriores pueden variarse sin apartarse de la naturaleza de la presente divulgación, y por tanto otras dosificaciones también están comprendidas en la presente divulgación. El artesano experto sabrá qué dosificaciones de los inhibidores de PR3 divulgados en la presente memoria pueden administrarse de forma segura y eficaz a un sujeto según el estándar de cuidado y conocimiento en la técnica, y pueden incluir los inhibidores de PR3 descritos en la presente memoria.

Un kit puede incluir la composición inhibidora de PR3 divulgada en la presentememoria . En determinadas realizaciones, el kit es para el tratamiento de GPA. Además, el kit puede incluir instrucciones para su uso. El kit puede incluir además opcionalmente (por ejemplo, comprender, consistir esencialmente en, consistir en) jeringas o aplicadores precargados con los agentes mencionados y/o viales que contengan uno o más de los agentes.

Los kits, independientemente del tipo, pueden incluir generalmente uno o más recipientes en los que se colocan los agentes biológicos (por ejemplo, inhibidores) y, preferentemente, se distribuyen en alícuotas adecuadas. Los componentes de los kits pueden envasarse en medio acuoso o en forma liofilizada.

Muchos de los presentes inhibidores de PR3, en particular los inhibidores proteicos o peptídicos, pueden fabricarse por medios convencionales, tales como la recombinación. Además, los presentes inhibidores pueden aislarse del plasma de mamíferos (incluido el humano) o ser producidos por las propias células del organismo mediante transfección vírica.

De acuerdo con la presente invención, pueden emplearse técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, ADN recombinante, inmunología, biología celular y otras técnicas relacionadas dentro de la habilidad de la técnica. Véase, por ejemplo Sambrook et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3a ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, N.Y.; Sambrook et al., (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2a ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press Cold Spring Harbor, N.Y; Ausubel et al., eds. (2005) Current Protocols in Molecular Biology.. John Wiley and Sons, Inc.: Hoboken, N.J; Bonifacino et al., eds. (2005) Current Protocols in Cell Biology. John Wiley and Sons, Inc.: Hoboken, N.J; Coligan et al., eds. (2005) Current Protocols in Immunology, John Wiley and Sons, Inc: Hoboken, N.J; Coico et al., eds. (2005) Current Protocols in Microbiology, John Wiley and Sons, Inc: Hoboken, N.J; Coligan et al., eds. (2005) Current Protocols in Protein Science, John Wiley and Sons, Inc: Hoboken, N.J; Enna et al., eds. (2005) Current Protocols in Pharmacology John Wiley and Sons, Inc.: Hoboken, N.J.; Hames et al., eds. (1999) Protein Expression: A Practical Approach. Oxford University Press Oxford; Freshney (2000) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. 4a ed. Wiley-Lissentre otros. Los Protocolos vigentes enumerados más arriba se actualizan varias veces al año.

Las composiciones pueden incluir secuencias de ADN o ARN que codifican las proteínas o péptidos inhibidores de PR3 descritos en la presente memoria, incluidas secuencias de ADN o ARN que codifican anticuerpos o fragmentos de anticuerpos.

El término "recombinante", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un polipéptido producido a través de un hospedador biológico, seleccionado entre un sistema de expresión de mamíferos, un sistema de expresión de células de insecto, un sistema de expresión de levadura y un sistema de expresión bacteriano.

De acuerdo con lo anterior, las moléculas de ácido nucleico divulgadas en la presente memoria pueden incorporarse de manera conocida en un vector de expresión apropiado que garantice una buena expresión de las proteínas de la invención. Los posibles vectores de expresión incluyen, pero no se limitan a, cósmidos, plásmidos o virus modificados (por ejemplo, retrovirus de replicación defectuosa, adenovirus y virus adenoasociados), siempre que el vector sea compatible con la célula hospedadora utilizada. Los vectores de expresión son "adecuados para la transformación de una célula hospedadora", lo que significa que los vectores de expresión contienen una molécula de ácido nucleico de la invención y secuencias reguladoras seleccionadas en función de las células hospedadoras que se utilizarán para la expresión, que está unida operativamente a la molécula de ácido nucleico. Por unido operativamente se entiende que el ácido nucleico está unido a secuencias reguladoras de manera que permite la expresión del ácido nucleico.

Por lo tanto, la presente memoria descriptiva contempla un vector de expresión recombinante que contiene una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína o péptido inhibidor de PR3, o un fragmento de la misma, y las secuencias reguladoras necesarias para la transcripción y traducción de la proteína-secuencia insertada.

Las secuencias reguladoras adecuadas pueden derivarse de diversas fuentes, incluidos genes bacterianos, fúngicos, víricos, de mamíferos o de insectos (por ejemplo, véanse las secuencias reguladoras descritas en Goeddel, Gene Expression Technology Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)). La selección de las secuencias reguladoras apropiadas depende de la célula hospedadora elegida, como se explica más adelante, y puede ser realizada fácilmente por un experto en la técnica. Ejemplos de tales secuencias reguladoras incluyen: un promotor transcripcional y un potenciador o secuencia de unión a la ARN polimerasa, una secuencia de unión ribosómica, incluyendo una señal de iniciación de la traducción. Además, dependiendo de la célula hospedadora elegida y del vector empleado, pueden incorporarse al vector de expresión otras secuencias, tales como un origen de replicación, sitios adicionales de restricción del ADN, potenciadores y secuencias que confieran inducibilidad a la transcripción.

Los vectores de expresión recombinante también pueden contener un gen marcador seleccionable que facilite la selección de células hospedadoras transformadas o transfectadas con una molécula recombinante de la invención. Ejemplos de genes marcadores seleccionables son genes que codifican una proteína tal como G418 e higromicina que confieren resistencia a determinados fármacos, p-galactosidasa, cloranfenicol acetiltransferasa, luciferasa de luciérnaga, o una inmunoglobulina o porción de la misma tal como la porción Fc de una inmunoglobulina preferentemente IgG. La transcripción del gen marcador seleccionable se controla mediante cambios en la concentración de la proteína marcadora seleccionable, tal como la p-galactosidasa, la cloranfenicol acetiltransferasa o la luciferasa de luciérnaga. Si el gen marcador seleccionable codifica una proteína que confiere resistencia a los antibióticos, tal como la resistencia a la neomicina, las células transformantes pueden seleccionarse con G418. Las células que hayan incorporado el gen marcador seleccionable sobrevivirán, mientras que las demás morirán. Esto permite visualizar y ensayar la expresión de los vectores de expresión recombinantes de la invención y, en particular, determinar el efecto de una mutación sobre la expresión y el fenotipo. Se apreciará que los marcadores seleccionables pueden introducirse en un vector separado del ácido nucleico de interés.

Los vectores de expresión recombinante también pueden contener genes que codifican una unidad estructural de fusión que proporciona una mayor expresión de la proteína recombinante; una mayor solubilidad de la proteína recombinante; y ayuda en la purificación de la proteína recombinante diana actuando como ligando en la purificación por afinidad. Por ejemplo, puede añadirse un sitio de corte proteolítico a la proteína recombinante diana para permitir la separación de la proteína recombinante de la unidad estructural de fusión tras la purificación de la proteína de fusión. Los vectores de expresión de fusión típicos incluyen pGEX (Amrad Corp., Melbourne, Australia), pMal (New England Biolabs, Beverly, Mass.) y pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, N.J.) que fusionan la glutatión S-transferasa (GST), la proteína de unión a maltosa E o la proteína A, respectivamente, a la proteína recombinante.

Los vectores de expresión recombinantes pueden introducirse en células hospedadoras para producir una célula hospedadora transformada. Los términos "transformado con", "transfectado con", "transformación" y "transfección" pretenden abarcar la introducción de ácido nucleico (por ejemplo, un vector) en una célula mediante una de las muchas técnicas posibles conocidas en la técnica. El término "célula hospedadora transformada", como se utiliza en la presente memoria, pretende incluir también las células capaces de glicosilación que han sido transformadas con un vector de expresión recombinante de la invención. Las células procariotas pueden transformarse con ácido nucleico mediante, por ejemplo, electroporación o transformación mediada por cloruro de calcio. Por ejemplo, el ácido nucleico puede introducirse en células de mamífero mediante técnicas convencionales tales como la coprecipitación de fosfato cálcico o cloruro cálcico, la transfección mediada por DEAE-dextrano, la lipofectina, la electroporación o la microinyección. Pueden encontrarse procedimientos adecuados para transformar y transfectar células hospedadoras en Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3a edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001), y otros libros de texto de laboratorio.

Las células hospedadoras adecuadas incluyen una amplia variedad de células hospedadoras eucariotas y procariotas. Por ejemplo, las proteínas de la invención pueden expresarse en células de levadura o células de mamífero. Pueden encontrarse otras células hospedadoras adecuadas en Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1991)). Además, las proteínas de la invención pueden expresarse en células procariotas, tales como Escherichia coli (Zhang et al., Science 303(5656): 371-3 (2004)). Además, puede utilizarse un sistema de expresión basado en Pseudomonas, tal como Pseudomonas fluorescens (Publicación de la Solicitud de la Patente de los Estados Unidos No. US 2005/0186666, Schneider, Jane C et al.).

Las células hospedadoras de levaduras y hongos incluyen, pero no se limitan a Saccharomyces cerevisiae, los géneros Pichia o Kluyveromyces y diversas especies del género Aspergillus. Ejemplos de vectores para la expresión en la levadura S. cerevisiae son pYepSec1 (Baldari. et al., Embo J. 6:229-234 (1987)), pMFa (Kurjan and Herskowitz, Cell 30:933-943 (1982)), pJRY88 (Schultz et al., Gene 54:113-123 (1987)) y pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, California). Los protocolos para la transformación de levaduras y hongos son bien conocidos para los expertos en la técnica (véase, Hinnen et al. Natl. Acad. Sci. USA 75:1929 (1978); Itoh et al., J. Bacteriology 153:163 (1983), y Cullen et al. (Bio/Technology 5:369 (1987)).

Las células de mamíferos incluyen, entre otras: COS (por ejemplo, ATCC No. CRL 1650 o 1651), BHK (por ejemplo, ATCC No. CRL 6281), CHO (ATCC No. CCL 61), HeLa (por ejemplo, ATCC No. CCL 2), 293 (ATCC No.

1573) y células NS-1. Los vectores de expresión adecuados para dirigir la expresión en células de mamífero suelen incluir un promotor (por ejemplo, derivado de material vírico tal como el polioma, el adenovirus 2, el citomegalovirus y el virus Simian 40), así como otras secuencias de control transcripcional y traslacional. Ejemplos de vectores de expresión de mamíferos incluyen pCDM8 (Seed, B., Nature 329:840 (1987)) y pMT2PC (Kaufman et al., EMBO J. 6:187-195 (1987)).

Dadas las enseñanzas proporcionadas en la presente memoria, los promotores, terminadores y procedimientos para introducir vectores de expresión de un tipo apropiado en células vegetales, aviares y de insectos también pueden lograrse fácilmente. Por ejemplo, las proteínas de la invención pueden expresarse a partir de células vegetales (véase Sinkar et al., J. Biosci (Bangalore) 11 :47-58 (1987), que revisa el uso de vectores Agrobacterium rhizogenes; véase también Zambryski et al., Genetic Engineering, Principles and Methods, Hollaender and Setlow (eds.), Vol. VI, pp. 253-278, Plenum Press, Nueva York (1984), que describe el uso de vectores de expresión para células vegetales, incluidos, entre otros, PAPS2022,<p>A<p>S2023 y PAPS2034).

Las células de insecto incluyen células y líneas celulares de las especies Bombyx, Trichoplusia o Spodotera. Los vectores de baculovirus disponibles para la expresión de proteínas en células de insecto cultivadas (células SF 9) incluyen la serie pAc (Smith et al., Mol. Cell. Biol. 3:2156-2165 (1983)) y la serie pVL (Lucklow, V. A., and Summers, M. D., Virology 170:31-39 (1989)).

Alternativamente, las proteínas de la invención también pueden expresarse en animales transgénicos no humanos tales como ratas, conejos, ovejas y cerdos (Hammer et al. Nature 315:680-683 (1985); Palmiter et al. Science 222:809-814 (1983); Brinster et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:4438-4442 (1985); Palmiter and Brinster Cell 41:343-345 (1985) y U.S. Pat. No. 4,736,866).

Las proteínas de la invención también pueden prepararse mediante síntesis química utilizando técnicas bien conocidas en la química de proteínas tales como la síntesis en fase sólida (Merrifield, J. Am. Chem. Assoc.

85:2149-2154 (1964); Frische et al., J. Pept. Sci. 2(4): 212-22 (1996)) o síntesis en solución homogénea (Houbenweyl, Methods of Organic Chemistry, ed. E. Wansch, Vol. 15 I and II, Thieme, Stuttgart (1987)).

Los pacientes con niveles detectables de ANCA y deficiencia de A1PI que provoquen daños en los pulmones pueden beneficiarse de la terapia de aumento. La terapia de refuerzo consiste en infusiones intravenosas, normalmente semanales, de proteína alfa-1 antitripsina purificada de donantes de plasma sanos. El objetivo es aumentar el nivel de proteína alfa-1 en la sangre y los pulmones para ralentizar o detener la progresión de la enfermedad pulmonar alfa-1. En los pacientes que también tienen niveles detectables de ANCA, el aumento de A1 PI escindiría efectivamente todos los receptores PR3 de los neutrófilos circulantes en los pacientes con GPA. La terapia de refuerzo se prepara a partir de una combinación de plasma sanguíneo humano que ha sido sometido a pruebas de detección de hepatitis A, B y C y de VIH, así como de otros virus infecciosos. Todos los fabricantes utilizan procedimientos antivirales adicionales durante el procedimiento de purificación. De los efectos secundarios notificados, las quejas más frecuentes son dolores de cabeza, dolores musculares y articulares y síntomas temporales similares a los de la gripe.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos no limitativos se proporcionan únicamente con fines ilustrativos para facilitar una comprensión más completa de las realizaciones representativas ahora contempladas. Estos ejemplos no deben interpretarse como limitativos de ninguna de las realizaciones descritas en la presente memoria descriptiva, incluidas las relativas a los compuestos y composiciones farmacéuticas divulgados en la presente invención.Ejemplo 1

Ensayos basados en células

La actividad de la IL-1p procesada por la proteinasa 3 (PR3) se bloquea con plasma A1PI (Sigma Aldrich, Cat# A9024, también denominada AAT) en células A549 humanas (un modelo de actividad de serina proteasa, ATCC® CCL-185™). Las células A549 humanas se estimularon en interleucina-1p precursora preincubada con PR3 (pro IL-1p, Sigma Aldrich, libre de componentes animales, recombinante, expresada en E. coli, >98% (SDS-PAGE), >98% (HPLC), cultivo celular probado) en presencia de concentraciones crecientes de A1PI derivado de plasma durante la noche. Al día siguiente se recogió el medio de cultivo celular y se midió la IL-6 mediante ELISA (Thermo Scientific, Human IL-6 ELISA Kit).

El A1PI disminuyó significativamente la producción de IL-6 de manera dependiente de la dosis (Tabla 1, La figura 2). En comparación con el control, los cultivos tratados con PR3 o interleucina-1p precursora mostraron una estimulación insignificante de la producción de IL-6 (control 0,15 ng/ml de IL-6 frente a 0,21 ng/ml y 0,23 ng/ml de producción de IL-6 para PR3 y pro IL-1p, respectivamente). Como era de esperar, los cultivos tratados tanto con PR3 como con interleucina-1p precursora mostraron un aumento significativo de la producción de IL-6 (0,92 ng/ml). Sin embargo, el tratamiento de los cultivos con cantidades crecientes de A1PI mostró una disminución dependiente de la dosis en la producción de IL-6 (Tabla 1). El intervalo fisiológico normal de A1PI en suero es de aproximadamente 80 mg/dL u 800.000 ng/ml. Como tales, estos resultados tienen relevancia fisiológica.

Ejemplo 2

Ensayo de citotoxicidad

Un cultivo celular proporciona un modelo de los vasos sanguíneos utilizando HUVEC (células endoteliales de la vena umbilical humana) cultivadas hasta un 80-90% de confluencia como representación de la pared del vaso sanguíneo. A continuación se muestra un modelo de GPA en cultivo celular utilizando HUVEC y neutrófilos de sangre humana que son cebados y activados por c-ANCA de la misma manera que la enfermedad. Las HUVEC se sensibilizan al daño inflamatorio mediante la exposición previa a BCNU e ionomicina. En el estado de enfermedad de la granulomatosis con poliangeítis (GPA/Wegener), los neutrófilos activados atacan las paredes de los vasos sanguíneos. En este estudio se evaluaron dos compuestos, A1PI (a-1-antitripsina; Sigma Aldrich Cat. No. A9024, lote SLBL9794V, 90% de pureza) y elafina (AnaSpec Cat. No. AS-61641, lote 1360190, 95% de pureza), y su capacidad para mitigar el daño inducido a HUVEC como modelo del endotelio vascular en comparación con el control negativo a1-antiquimotripsina (Athens Research & Technology, Cat. No. 16-16 012400, lote AX2014-02, >95% de pureza). Se eligió a1-antiquimotripsina como control negativo debido a su similitud estructural con A1 PI y a su falta de actividad contra el receptor PR3. la a1-antiquimotripsina inhibe la catepsina G de los neutrófilos y la quimasa de los mastocitos.

Las HUVEC confluentes se marcaron con calceína-AM como marcador fluorescente. La calceína-AM es un colorante permeante celular que puede utilizarse para determinar la viabilidad celular en HUVEC (y en la mayoría de las células eucariotas). En las células vivas, la calceína AM no fluorescente se convierte en calceína verde fluorescente en el momento de la captación tras la hidrólisis del acetoximetil éster por las esterasas intracelulares. El colorante calceína-AM requiere cantidades muy pequeñas de células manteniendo la misma sensibilidad que el ensayo tradicional de51 Cr. Una vez absorbida por la célula, la calceína libre es generalmente impermeable a la membrana y sólo permea a través de las uniones de las brechas. Aunque se produce alguna fuga durante el periodo de incubación, esto se tiene en cuenta mediante el uso de un control de HUVEC solas, etiquetadas con calceína-AM y utilizadas para determinar el nivel de fluorescencia de referencia que tiene en cuenta los procedimientos celulares normales.

Los neutrófilos de sangre periférica se cebaron para aumentar la expresión del receptor PR-3 (proteinasa 3) con 50 U/ml de TNF. Una elevada proporción de neutrófilos de membrana PR3 positivos es un factor de riesgo para el desarrollo de vasculitis, y los niveles elevados de PR3 de membrana se asocian a una mayor tasa de recaída en pacientes con granulomatosis de Wegener. A continuación, se agregaron neutrófilos activados (5 x105 neutrófilos/pocillo) a HUVEC etiquetadas con calceína para producir una respuesta inflamatoria. Se evaluaron cuatro concentraciones de dosis de A1PI (0,25, 0,5, 1,0 y 2,0 mg/ml) y una dosis de elafina (0,25 mg/ml) para prevenir la activación de los neutrófilos y la lisis de las células. Se evaluó una concentración de dosis del control negativo a1 antiquimotripsina (0,25 mg/ml).

Se agregaron tres a-PR-3 MoAbs [anticuerpos monoclonales (15 pg/ml de a-PR3 WGM2 y 5 pg/ml cada uno de a-PR34A5 y a-PR 6A6, para un total de 25 pg/ml)] para activar los neutrófilos para que atacaran las HUVEC, causando la lisis de las HUVEC. los clones a-pR34A5 y a-PR36A6 se obtuvieron de Eurodiagnostica y el a-PR3 WGM2 de Abcam. Estos 3 clones se seleccionaron para proporcionar un modelo de la respuesta policlonal que se observaría in vivo y representar tres sitios de unión en el receptor PR-3 (Van Der Geld, Characterization of monoclonal antibodies to PR3 as candidate tools for epitope mapping or human anti-PR3 autoantibodies, 1999). Tras agregar los neutrófilos activados, los compuestos de ensayo y los mAbs a-PR3, las células se incubaron durante 4 horas a 37 °C. Tras la incubación, se evaluó la fluorescencia del sobrenadante. Cuando los neutrófilos atacan las HUVEC y se produce la lisis celular, la etiqueta fluorescente de calceína se libera de las membranas dañadas y se mide en los sobrenadantes.

A1PI y elafina mostraron una respuesta funcional con el control negativo a1 antiquimotripsina que no proporcionó un cambio significativo en la liberación de fluorescencia (Tabla 2). A1 PI proporcionó una respuesta dependiente de la dosis y de naturaleza direccional. La fluorescencia media se determinó a partir de alícuotas de 3 * 100 pl del sobrenadante de cada pocillo, con 6 pocillos para cada condición (18 réplicas en total). Las HUVEC lisadas con un detergente proporcionaron criterios para una liberación del 100%. Los ensayos de fluorescencia se realizaron utilizando un lector TECAN Genios y el software Magellan.

Ejemplo 3

Tratamientos de GPA con un inhibidor de PR3

Un paciente se queja de sangrado por las fosas nasales y, tras un examen físico completo y pruebas diagnósticas, un médico le diagnostica GPA. El paciente presenta niveles normales de A1P<i>, pero también niveles detectables de c-ANCA, con reagudizaciones frecuentes. Se administra al paciente A1PI exógeno por vía intravenosa a razón de 60 mg/kg/semana durante un periodo de seis meses. Sus síntomas, tales como la hemorragia nasal, se reducen tras seis meses de tratamiento y se considera que el GPA está "en remisión" Esta reducción de un síntoma del GPA indica el éxito del tratamiento con una composición farmacéutica descrita en la presente memoria.

Un paciente se queja de sangrado por las fosas nasales y, tras un examen físico completo y pruebas diagnósticas, un médico le diagnostica GPA. El paciente presenta niveles normales de A1Pi, pero también niveles detectables de c-ANCA, con reagudizaciones frecuentes. Al paciente se le administra una dosis inicial de carga de A1PI exógena por vía intravenosa de 180 mg/kg, y una semana después se le administra A1PI exógena de 120 mg/kg/semana durante un periodo de siete semanas. Posteriormente se le administra una dosis de A1 PI exógena de 60 mg/kg/semana durante un periodo de 16 semanas. Sus síntomas, tales como el sangrado de las fosas nasales, se reducen tras un mes de tratamiento y los brotes posteriores se suprimen durante el tratamiento. Los brotes se suprimen durante un tiempo tras el cese del tratamiento. Esta reducción de un síntoma del GPA indica el éxito del tratamiento con una composición farmacéutica descrita en la presente memoria. Un paciente se queja de sangrado por las fosas nasales y, tras un examen físico completo y pruebas diagnósticas, un médico le diagnostica GPA. El paciente tiene niveles normales de A1PI pero también niveles detectables de c-ANCA. Se administra al paciente una dosis inicial de carga de A1PI exógena por vía intravenosa de 120 mg/kg/semana durante cuatro semanas. Posteriormente se le administra una dosis de A1PI exógena de 60 mg/kg/semana durante 20 semanas. Sus síntomas, tales como la hemorragia nasal, se reducen tras un mes de tratamiento. Esta reducción de un síntoma del GPA indica el éxito del tratamiento con una composición farmacéutica descrita en la presente memoria.

Un paciente se queja de dificultad para respirar y, tras un examen físico completo y pruebas diagnósticas, un médico le diagnostica GPA debido a niveles detectables de ANCA y deficiencia de A1PI que provoca daños en los pulmones. Una terapia de aumento de la proteína a-1 antitripsina se prepara a partir de un mezcla de plasma sanguíneo humano de donantes de plasma sanos que ha sido cribado para la hepatitis A, B y C y analizado para el HIV, así como para otros virus infecciosos. Durante el procedimiento de purificación se utilizan procedimientos antivirales adicionales. Se administran al paciente infusiones intravenosas semanales de proteína a-1 antitripsina. Sus síntomas, tales como la dificultad para respirar, se reducen tras un mes de tratamiento. Esta reducción de un síntoma del GPA indica el éxito del tratamiento con una composición farmacéutica descrita en la presente memoria.

Las agrupaciones de realizaciones, elementos o etapas alternativas de la presente invención no deben interpretarse como limitaciones. Cada miembro del grupo puede mencionarse y reivindicarse individualmente o en combinación con otros miembros del grupo divulgados en la presente memoria. Se prevé que uno o más miembros de un grupo puedan ser incluidos o eliminados de un grupo por razones de conveniencia y/o patentabilidad. Cuando se produce una inclusión o supresión de este tipo, se considera que la memoria descriptiva contiene el grupo modificado, cumpliendo así la descripción escrita de todos los grupos Markush utilizados en las reivindicaciones adjuntas.

A menos que se indique lo contrario, todos los números que expresan una característica, elemento, cantidad, parámetro, propiedad, término, etc. utilizados en la presente memoria descriptiva y reivindicaciones deben entenderse modificados en todos los casos por el término "aproximadamente" Enla presente memoria, el término "aproximadamente" significa que la característica, elemento, cantidad, parámetro, propiedad o término así calificado abarca un intervalo de más o menos un diez por ciento por encima y por debajo del valor de la característica, elemento, cantidad, parámetro, propiedad o término indicado. De acuerdo con lo anterior, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos establecidos en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar. Por ejemplo, como los instrumentos de espectrometría de masas pueden variar ligeramente en la determinación de la masa de un analito dado, el término "aproximadamente" en el contexto de la masa de un ion o la proporción masa/carga de un ion se refiere a /-0,50 unidad de masa atómica. Como mínimo, y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada indicación numérica debe interpretarse al menos a la luz del número de dígitos significativos declarados y aplicando técnicas ordinarias de redondeo.

A pesar de que los intervalos y valores numéricos que establecen el amplio alcance de la invención son aproximaciones, los rangos y valores numéricos establecidos en los ejemplos específicos se reportan con la mayor precisión posible. Cualquier intervalo o valor numérico, sin embargo, contiene inherentemente determinados errores resultantes necesariamente de la desviación estándar encontrada en sus respectivas mediciones de prueba. La recitación de intervalos numéricos de valores en este documento sólo pretende servir como un procedimiento abreviado de referirse individualmente a cada valor numérico separado que cae dentro del intervalo. A menos que se indique lo contrario, cada valor individual de un intervalo numérico se incorpora a la presente memoria descriptiva como si se recitara en la presente memoria individualmente.

Los términos "uno", "una", "el" y referencias similares utilizadas en el contexto de la descripción de la presente invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones siguientes) deben interpretarse para abarcar tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en la presente memoria o se contradiga claramente por el contexto. Además, los indicadores ordinales - tales como "primero", "segundo", "tercero", etc. -para los elementos identificados se utilizan para distinguir entre los elementos, y no indican o implican un número requerido o limitado de tales elementos, y no indican una posición u orden particular de tales elementos a menos que se indique específicamente lo contrario. Todos los procedimientos descritos en la presente memoria pueden realizarse en cualquier orden adecuado, a menos que se indique lo contrario en la presente memoria o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o del lenguaje ejemplar (por ejemplo, "como") que se proporciona en la presente memoria tiene por objeto simplemente iluminar mejor la presente invención y no supone una limitación del alcance de la invención reivindicada de otro modo. Ningún lenguaje de la presente memoria descriptiva debe interpretarse como indicativo de ningún elemento no reivindicado esencial para la práctica de la invención.

Cuando se utiliza en las reivindicaciones, ya sea tal como se presentó o añadido por enmienda, el término transitorio abierto "que comprende" (y frases transitorias abiertas equivalentes del mismo como incluyendo, conteniendo y teniendo) abarca todos los elementos, limitaciones, etapas y/o características expresamente recitados solos o en combinación con materia no recitada; los elementos, limitaciones y/o características nombrados son esenciales, pero pueden agregarse otros elementos, limitaciones y/o características no nombrados y aun así formar una construcción dentro del alcance de la reivindicación. Las realizaciones específicas divulgadas en la presente memoria pueden limitarse aún más en las reivindicaciones utilizando las frases de transición cerradas "que consiste en" o "que consiste esencialmente en" en lugar de o como una modificación de "que comprende" Cuando se utiliza en las reivindicaciones, ya sea tal como se presentó o agregada por enmienda, la frase transitoria cerrada "que consiste en" excluye cualquier elemento, limitación, etapa o característica que no se recite expresamente en las reivindicaciones. La expresión transitoria cerrada "que consiste esencialmente en" limita el alcance de una reivindicación a los elementos, limitaciones, pasos y/o características expresamente citados y a cualesquiera otros elementos, limitaciones, etapas y/o características que no afecten materialmente a la(s) característica(s) básica(s) y novedosa(s) de la materia reivindicada. Por tanto, el significado de la frase transitoria abierta "que comprende" se define como que abarca todos los elementos, limitaciones, etapas y/o características específicamente mencionados, así como cualquier elemento opcional, adicional y no especificado. El significado de la frase transitoria cerrada "que consiste en" se define como que sólo incluye aquellos elementos, limitaciones, etapas y/o características específicamente mencionados en la reivindicación, mientras que el significado de la frase transitoria cerrada "que consiste esencialmente en" se define como que sólo incluye aquellos elementos, limitaciones, etapas y/o características específicamente mencionados en la reivindicación y aquellos elementos, limitaciones, etapas y/o características que no afectan materialmente a la(s) característica(s) básica(s) y novedosa(s) del objeto reivindicado. Por lo tanto, la frase transitoria abierta "que comprende" (y sus frases transitorias abiertas equivalentes) incluye en su significado, como caso limitativo, la materia reivindicada especificada por las frases transitorias cerradas "que consiste en" o "que consiste esencialmente en" Como tales, las realizaciones descritas en la presente memoria o reivindicadas con la frase "que comprende" se describen, habilitan y apoyan de forma expresa o inherente e inequívoca en la presente memoria para las frases "que consiste esencialmente en" y "que consiste en"

Por último, la terminología empleada en la presente memoria tiene por objeto describir únicamente realizaciones particulares, y no pretende limitar el alcance de la presente invención, que se define únicamente por las reivindicaciones. De acuerdo con lo anterior, la presente invención no se limita precisamente a lo que se muestra y describe.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un inhibidor de la proteinasa 3 (PR3) para su uso en el tratamiento de la granulomatosis con poliangitis (GPA) en un paciente que no tiene un genotipo deficiente de A1PI, en el que el inhibidor de la PR3 es a-1 inhibidor de la proteasa (A1PI), en el que la composición comprende una cantidad eficaz de dicho A1PI, y en el que la administración de la composición al paciente inhibe la función fisiológica de PR3 tratando así la GpA.

2. La composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el inhibidor de PR3 debe administrarse semanal o quincenalmente.

3. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en la que el inhibidor de PR3 debe administrarse por vía sistémica.

4. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que el inhibidor de PR3 debe administrarse por vía inhalatoria, enteral o parenteral.

5. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que el inhibidor de PR3 debe administrarse por vía intravenosa, inhalatoria, oral, intramuscular, intraarterial, nasal, intracardíaca, subcutánea o transmucosa.

6. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.

7. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que el tratamiento produce una inhibición o reducción de la vasculitis, los niveles de c-ANCA, la activación de neutrófilos o la degranulación de neutrófilos.

8. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que el tratamiento produce una reducción de la Puntuación de Actividad de Vasculitis de Birmingham Modificada para Granulomatosis de Wegener (BVAS para GPA), una inhibición o reducción de los brotes de la enfermedad, una prolongación del periodo antes de la recaída, o una disminución de la aparición o gravedad de uno o más de: Dolor articular sin hinchazón evidente; inflamación articular; elevación documentada de la temperatura, petequias, púrpura palpable, equimosis en la piel o supuración en las mucosas; necrosis tisular extensa debida a isquemia grave; úlceras bucales (no atribuidas a otras causas); conjuntivitis bucal; epiescleritis bucal; masa/proptosis retroorbitaria; uveítis; escleritis; exudados retinianos; hemorragias retinianas; secreción nasal sanguinolenta; costras nasales; ulceración nasal; sensibilidad o dolor en los senos paranasales; evidencia radiográfica de sinusitis; colapso del puente nasal; inflamación de las glándulas salivales; inflamación subglótica; sordera de transmisión; sordera causada por lesiones del nervio auditivo o de la cóclea; pericarditis; isquemia mesentérica; pleuresía; nódulos o cavidades torácicos; pseudotumor o ulceración del árbol traqueobronquial; hemorragia alveolar; disnea que requiere ventilación artificial; hematuria sin cilindros RBC; cilindros RBC en el sedimento urinario; aumento de la creatinina > 30% o disminución del aclaramiento de creatinina > 25%; meningitis; accidente cerebrovascular; lesión de la médula espinal; parálisis de los nervios craneales, neuropatía periférica sensorial; mononeuritis motora múltiple; pérdida de peso; convulsiones; afectación genitourinaria; lesiones valvulares cardíacas; infartos cutáneos; infiltrados pulmonares; pérdida de pulsos/amenaza de pérdida de un miembro; angina de pecho; cardiomiopatía; pancreatitis; o D/C aural.

9. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la que el tratamiento produce una inhibición, reducción o disminución de uno o más síntomas durante un periodo de al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 2 años o al menos 3 años o más.

10. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en la que la dosis de inhibidor de PR3 que se debe administrar semanalmente oscila entre 1-1000 mg/kg, 1 -500 mg/kg, 1-200 mg/kg, 1-100 mg/kg, 1-50 mg/kg, 10-500 mg/kg, 10-250 mg/kg, 10-200 mg/kg, 10-150 mg/kg, 10-100 mg/kg, 10-50 mg/kg, 50 1000 mg/kg, 50-500 mg/kg, 50-250 mg/kg, 50-200 mg/kg, 50-150 mg/kg, 50-100 mg/kg, 20-500 mg/kg, 20-250 mg/kg, 20-200 mg/kg, 20-150 mg/kg, 20-100 mg/kg o 20-60 mg/kg.

11. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en la que la dosis a administrar diariamente oscila entre 0,05 pg/kg y 5 mg/kg, 0,1 pg/kg y 5 mg/kg, 1 pg/kg y 5 mg/kg, 50 pg/kg y 5 mg/kg, 0,1 mg/kg y 5 mg/kg, o 1 mg/kg y 5 mg/kg.

12. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que el paciente tiene niveles detectables de anticuerpos citoplasmáticos-anticitoplasma de neutrófilos (c-ANCA).

13. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y 12, en la que la composición se administra en un régimen de dosificación que comprende una dosis de carga y una dosis de mantenimiento.

14. La composición para su uso según la reivindicación 13, en la que la dosis de mantenimiento comprende un 25 % o más del A1PI contenido en la dosis de carga.