ES2947741T3

ES2947741T3 - Preparación y uso de un barredor de especies reactivas de oxígeno

Info

Publication number: ES2947741T3
Application number: ES21212401T
Authority: ES
Inventors: Jia-Ning Xiang; Zude Qi; Dezheng Ning; Xianbo Liu
Original assignee: XWPharma Ltd
Current assignee: XWPharma Ltd
Priority date: 2017-09-04
Filing date: 2017-09-04
Publication date: 2023-08-17
Anticipated expiration: 2037-09-04
Also published as: EP3679051A1; CN111356699A; US20200199108A1; EP3988561B1; US20210061791A1; EP3679051B1; EP3988561A1; EP3679051A4; US10889572B2; JP2020532554A; CN111356699B; US11312703B2; CN115475229A; ES2909718T3; WO2019041361A1; JP6976618B2; EP3988561C0

Abstract

Un compuesto de fórmula (I), sus sales farmacéuticamente aceptables y sus enantiómeros o diastereómeros individuales. Composiciones y métodos útiles para el tratamiento o supresión de enfermedades, retrasos en el desarrollo y síntomas relacionados con el estrés oxidativo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Preparación y uso de un barredor de especies reactivas de oxígeno

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La presente solicitud es una solicitud divisional de EP17923551.0. La presente invención proporciona compuestos para su uso en métodos de tratamiento o erradicación de enfermedades, retrasos en el desarrollo y síntomas relacionados con el estrés oxidativo. Más concretamente, los métodos comprenden administrar una cantidad eficaz de un compuesto, que es un modulador de apoptosis y ferroptosis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] Mientras que las ERO (especies reactivas de oxígeno) localizadas son fundamentales para el desarrollo y metabolismo biológicos de la célula eucariota, el flujo excesivo de ERO sin restricciones conduce a disfunciones y/o muerte celulares (p. ej., artículos: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3484374/pdf/nihms412463.pdf y http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X16317715, acceso el 7 de julio de 2017).

[0003] Desde su hallazgo en 2012, la ferroptosis ha surgido como una vía mecanística fundamental para el exceso de flujo de ERO (especialmente en la mitocondria), que en última instancia conduce a la muerte celular no apoptótica (p. ej., artículos: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4764384/ y https://www.ncbi.nlm.nih gov/pmc/articles/PMC5072448/. acceso el 7 de julio de 2017). Como el elemento fundamental de la ferroptosis, la pérdida de actividad de la glutatión peroxidasa 4 (GPx4) posibilita un exceso mortal de ERO, que después conduce a la destrucción celular por estrés oxidativo (p. ej., peroxidación de los fosfolípidos poliinsaturados de la membrana) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5003261/, acceso el 7 de julio de 2017). Dado que la GPx4 usa la glutatión (GSH) como cofactor fundamental para captar las ERO, el déficit de producción de GSH puede surgir a partir de la inducción bloqueada (p. ej., por medio de pequeños compuestos conocidos, como erastina y exceso de glutamatos) de su sistema Xc- 'contracorriente' (un antitransportador glutamato/cistina). Por otro lado, inducir el exceso de flujo de ERO por medio de ferroptosis puede destruir ciertas células cancerígenas (p. ej., artículo: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5345622/pdf/JCMM-21-648.pdf, acceso el 7 de julio de 2017).

[0004] Según los artículos anteriores, así como las referencias sobre otros inhibidores atribuibles a sus mecanismos de acción antiferróptoticos (p. ej., ferrostatinas: solicitudes de patente US 2016/0297748 y WO 2013/152039, quinonas, como MitoQ: http://www.discoverymedicine.com/Robin-A-J-Smith/2011/02/07/mitochondria-targeted-antioxidants-astherapies/), pequeños péptidos, como SS-31: (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4267688/, acceso el 7 de julio de 2017, y la publicación de patente WO2004070054 (A2)); nitróxidos, como XJB-5-131 y análogos de JP4-039: (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5043442/pdf/oc6b00199.pdf, acceso 7 de julio de 2017, y publicación de patente WO2012112851 (A2)). También se ha empleado XJB-5-131 en la práctica de la inhibición de la ferroptosis, donde desempeña un papel fundamental en la peroxidación lipídica intramitocondrial de la ferroptosis. Asimismo, el compuesto de referencia ferrostatina-1 y XJB-5-131 puede compartir mecanismos de acción similares o que ambos compuestos actúen en la misma vía de señalización. La ferroptosis se puede vincular a una variedad de enfermedades vastamente conocidas que se agrupan en términos generales entorno al sistema nervioso periférico (SNP) o central (SNC).

[0005] SNP: enfermedades cardiovasculares (p. ej., aterosclerosis, miocardiopatía hipertensiva, insuficiencia cardíaca congestiva, accidente cerebrovascular, etc.), metabólicas (p. ej., diabetes y sus complicaciones relacionadas como neuropatía, hiperlipidemia, etc.), urinarias (p. ej., lesión renal aguda (LRA)), relacionadas con la edad (p. ej., atrofia muscular esquelética, y degeneración macular seca asociada a la edad (DMAE seca, https://en.rn.wikipedia.org/wiki/Macular degeneration, acceso el 17 de julio de 2017) y traumatismo (p. ej., lesión por radiación, rabdomiolisis inducida, traumatismo craneoencefálico, cirugía mayor, etc.). En el caso de la LRA (https://en m.wikipedia.org/wiki/Acute kidney injury, acceso el 7 de julio de 2017), la FDA de EE. UU. hoy en día aún tiene pendiente aprobar un fármaco para curar específicamente esta enfermedad, que afecta especialmente al 30 % aprox. de los pacientes de EE. UU. hospitalizados en unidades de cuidados intensivos. Cuando la LRA progresa por desgracia a los estadios tardíos/crónicos, la hemodiálisis y, en última instancia el remplazo renal, se convierten en las principales opciones de tratamiento restantes.

[0006] SNC: enfermedades neuromotoras (p. ej., de Parkinson, de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, epilepsia, etc.) y cognitivas (p. ej., de Alzheimer (p. ej., https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4679930/pdf/fnins-09-00469.pdf, acceso el 7 de julio de 2017)). En el caso de la epilepsia, que afecta a más de 50 millones de personas en todo el mundo, una minoría significativa (20-30 %) de los pacientes son/se vuelven resistentes a más de 20 de los fármacos aprobados actualmente (p. ej., https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5068473/pdf7ndt-12-2605.pdf, acceso el 7 de julio de 2017). Sin lugar a duda, la investigación en curso probablemente vinculará más enfermedades debidas a la ferroptosis y más inhibidores de esta desde su hallazgo en 2012. Por consiguiente, como ha quedado ejemplificado por la LRA y la epilepsia, también se necesitan mejores fármacos (probablemente novedosos) urgentemente para otras enfermedades que se vincularán a la ferroptosis en el futuro.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

[0007] La presente invención proporciona compuestos que modulan la ferroptosis en un sujeto; incluye ciertos derivados de TEMPO, y su preparación. Los compuestos de la presente invención se pueden usar para prevenir, tratar, aliviar un cierto trastorno o una enfermedad en un paciente.

[0008] La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado de entre Compuesto (III), Compuesto (XXVIII), Compuesto (XXIV), Compuesto (XXX), Compuesto (Xx XI), Compuesto (XXXII), Compuesto (Xx X iII), Compuesto (XXXIV), Compuesto (XXXV), Compuesto (XXXVI), Compuesto (x Xx VII), Compuesto (Xx XVIII), Compuesto (XXXIX), Compuesto (XXXXIV), Compuesto (XXXXV), Compuesto (XXXXVI), y Compuesto (XXXx V iI), o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, para su uso en un método de inhibición de la ferroptosis en un paciente:

[0009] La presente divulgación se refiere a compuestos de fórmula (I), sales farmacéuticamente aceptables de este, y enantiómeros o diastereómeros individuales de este

donde

x es 0 o 1;

G está ausente, O, NH o CH₂;

W es:

Donde Ri, R2, R3, o R4 es alquilo C1-C6, R5 es OH, u O,

n es 0,1,2 o 3,

L está ausente, o se selecciona de entre un grupo que consiste en: alquilo C1-C10, alcoxilo C1-C10, cicloalquilo, alquilcicloalquilo C1-C10, heterocicloalquilo, alquilheterocicloalquilo C1-C10, arilo, alquilarilo C1-C10, heteroarilo, y alquilheteroarilo C1-C10, donde dicho cicloalquilo o heterocicloalquilo tiene entre aprox. 3 y aprox. 7 carbonos en el anillo, y dicho arilo o heteroarilo tiene entre aprox. 5 y aprox. 10 carbonos en el anillo;

PEP es una fracción peptídica que tiene la siguiente estructura:

donde un símbolo * denota un centro quiral en una configuración (S) o (R);

B está ausente, N, NH, u O;

Xi se selecciona de entre un grupo que consiste en H, -(C = O)-O-Rm, -(SO)-O-Rm, -(SOz)-O-Rm,-(SO₂)-N-(Rm)₂y -(C = O)-N-(Rm)₂, donde Rm es alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, alquenilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo, alquilcicloalquilo C1-C6, heterocicloalquilo, alquilheterocicloalquilo C1-C6, arilo, alquilarilo C1-C6, heteroarilo, o alquilheteroarilo C1-C6, donde dicho cicloalquilo o heterocicloalquilo tiene entre aprox. 3 y aprox. 7 carbonos en el anillo, y dicho arilo o heteroarilo tiene entre aprox. 5 y aprox.10 carbonos en el anillo;

Rn se selecciona de entre -O-X3, -S-X3, -NH-X3, o ~N-X4a(X4b);

X2 o X3 se selecciona de entre un grupo que consiste en H, alquilo C1-C10, alquenilo C1-C10, arilo, alquilarilo C1-C6, heteroarilo, y alquilheteroarilo C1-C6, donde dicho arilo o heteroarilo tiene entre 5 y 6 carbonos en el anillo; X4a y X4b se seleccionan por separado de entre alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido; X4a y X4b pueden, opcionalmente, formar juntos heterocicloalquilo C₃-C8, heterocicloalquilo C₃-C8 sustituido.

A está ausente, o se selecciona de entre un grupo que consiste en: alanina, leucina, isoleucina, fenilalanina, metionina, prolina, glicina, triptófano, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, histidina, lisina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, y valina, cada uno de los cuales puede estar en una configuración D o L; el residuo de amino está desprotegido o protegido por un grupo protector seleccionado de entre un grupo que consiste en Cbz y Fmoc;

con la condición de que PEP no sea uno de los siguientes:

[0010] Los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la presente invención, y enantiómeros y diastereómeros individuales de estos, son útiles como moduladores de ferroptosis. Por consiguiente, la invención se dirige a un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la presente invención, y enantiómeros y diastereómeros individuales de este para su uso en la reducción de las especies reactivas de oxígeno (ERO) en una célula, que comprende que una célula entre en contacto con una cantidad eficaz de dicho compuesto como un modulador de ferroptosis.

[0011] Los compuestos de la presente invención son útiles en métodos para modular la ferroptosis en un sujeto, que comprende exponer al sujeto a una cantidad eficaz de al menos un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la presente invención, y enantiómeros y diastereómeros individuales de este, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, un portador, un adyuvante, un disolvente, una sustancia de soporte o una combinación de estos, y cantidades terapéuticamente eficaces adicionales de uno o más ingredientes activos auxiliares opcionales.

[0012] Cualquier modo de realización divulgado en la presente memoria se puede combinar con otros modos de realización siempre que no sean contradictorios entre sí, aunque los modos de realización se describan según diferentes aspectos de la invención. Además, cualquier rasgo técnico de un modo de realización se puede aplicar al rasgo técnico correspondiente en otros modos de realización siempre que no sean contradictorios entre sí, aunque los modos de realización se describan según diferentes aspectos de la invención.

[0013] Lo anterior tan solo resume ciertos aspectos divulgados en la presente memoria y no pretende ser de naturaleza restrictiva. Estos aspectos y otros aspectos y modos de realización, rasgos y beneficios adicionales de la invención quedarán patentes a partir de la siguiente descripción detallada y mediante la práctica de la invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Y MODOS DE REALIZACIÓN CONCRETOS

[0014] La mayoría de las denominaciones químicas en la presente memoria se generaron por medio de la nomenclatura IUPAC. Algunas denominaciones químicas se generaron por medio de diferentes nomenclaturas o denominaciones comerciales o alternativas conocidas en la materia. En caso de conflicto entre denominaciones y estructuras, prevalecerán las estructuras.

DEFINICIONES Y TERMINOLOGÍA GENERAL

[0015] Ahora se hará referencia en detalle a ciertos modos de realización de la invención, ejemplos que se ilustran en las estructuras y fórmulas que acompañan. La invención pretende abarcar todas las alternativas, modificaciones y equivalentes que se pueden incluir dentro del alcance de la presente invención, tal como definen las reivindicaciones. Un experto en la materia reconocerá muchos métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria que se podrían emplear en la práctica de la presente invención.

[0016] Se aprecia además que ciertos rasgos de la invención que, por claridad, se describen en el contexto de modos de realización independientes, también se pueden proporcionar combinados en un único modo de realización. En cambio, varios rasgos de la invención que, por brevedad, se describen en el contexto de un solo modo de realización, también se pueden proporcionar por separado o en cualquier subcombinación adecuada.

[0017] A no ser que se definan de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la materia a la que pertenece esta invención.

[0018] Tal como se usa en la presente memoria, las siguientes definiciones serán de aplicación a no ser que se indique lo contrario. A efectos de esta invención, se identifican los elementos químicos de acuerdo con la tabla periódica de los elementos químicos, versión CAS, y el Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed. 1994. Asimismo, los ingredientes generales de química orgánica se describen en Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y March's Advanced Organic Chemistry by Michael B. Smith and Jerry March, John Wiley & Sons, New York: 2007.

[0019] Tal como se usa anteriormente, y a lo largo de esta divulgación, se entenderá que los siguientes términos, a no ser que se indique lo contrario, tienen los siguientes significados. Si falta alguna definición, prevalecerá la definición convencional conocida por el experto en la materia. Si alguna definición proporcionada en la presente memoria entra en conflicto con una definición proporcionada en cualquier publicación citada o es diferente a esta, prevalecerá la definición proporcionada en la presente memoria.

[0020] Tal como se usa en la presente memoria, los términos «incluyendo», «que contiene» y «comprendiendo/que comprende» se usan en su sentido abierto no limitativo.

[0021] Tal como se usa en la presente memoria, las formas singulares «un/una», «el/la» incluyen referentes plurales a no ser que el contexto claramente indique lo contrario.

[0022] Para proporcionar una descripción más concisa, algunas de las expresiones cuantitativas dadas en la presente memoria no se califican con el término «aprox.». Se entiende que, tanto si el término «aprox.» se usa explícitamente o no, cualquier cantidad dada en la presente memoria se refiere al valor real dado, y también se refiere a la aproximación a dicho valor dado que se deduciría razonablemente según los conocimientos básicos de la materia, incluyendo equivalentes y aproximaciones debido a las condiciones experimentales y/o de medición para dicho valor dado. Cada vez que un rendimiento se de en forma de un porcentaje, este rendimiento se refiere a una masa de la entidad para la que se indica el rendimiento con respecto a la cantidad máxima de la misma entidad que se podría obtener en las condiciones estequiométricas concretas. Las concentraciones que se dan como porcentajes se refieren a las relaciones de masa, a menos que se indique lo contrario.

Definiciones químicas

[0023] Tal como se usa en la presente memoria, «alquilo» se refiere a un grupo de hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene entre 1 y 12 átomos de carbono. Los grupos de alquilo representativos incluyen, entre otros, metilo, etilo, n-propil, isopropilo, 2-metil-1 -propil, 2-metil-2-propil, 2-metil-1 -butil, 3-metil-1-butil, 2-metil-3-butil, 2,2-dimetil-1-propil, 2-metil-1 -pentil, 3-metil-1-pentil, 4-metil-1 -pentil, 2-metil-2-pentil, 3-metil-2-pentil, 4-metil-2-pentil, 2,2-dimetil-1-butil, 3,3-dimetil-1 -butil, 2-etil-1-butil, butilo, isobutilo, t-butil, n-pentil, isopentilo, neopentilo, n-hexil, y similares, y grupos alquilo más largos, como heptilo, octilo, y similares. Tal como se usa en la presente memoria, «alquilo inferior» se refiere a un alquilo que tiene entre 1 y 6 átomos de carbono.

[0024] El término «alquilamino», tal como se usa en la presente memoria, denota un grupo amino como se define en la presente memoria donde se reemplaza un átomo de hidrógeno del grupo amino por un grupo alquilo como se define en la presente memoria. Los grupos aminoalquilo se pueden definir mediante la siguiente fórmula general -NH-alquil. Esta fórmula general incluye grupos de las siguientes fórmulas generales: -NH-C1-C10 alquil y -NH-C1-C6 alquil Los ejemplos de grupos aminoalquilo incluyen, entre otros, aminometilo, aminoetilo, aminopropilo, aminobutilo.

[0025] El término «alcoxilo», tal como se usa en la presente memoria, incluye -O-(alquil), donde el alquilo se ha definido anteriormente.

[0026] Tal como se usa en la presente memoria, «alcoxialquilo» significa -(alquilenil)-O-(alquil), donde cada «alquilo» es independientemente un grupo alquilo definido anteriormente.

[0027] El término «amina», tal como se usa en la presente memoria se refiere a un grupo -NH₂.

[0028] «Arilo» se refiere a un grupo aromático mono-, bi- o tricíclico, donde todos los anillos del grupo son aromáticos. Para los sistemas bi- o tricíclicos, los anillos aromáticos individuales se fusionan entre sí. Los grupos arilo ejemplares incluyen, entre otros, fenilo, naftaleno y antraceno.

[0029] «Ariloxilo», tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo -O-(aril) donde el arilo se define como anteriormente.

[0030] «Arilalquilo», tal como se usa en la presente memoria se refiere a un grupo -(alquilenil)-(aril), donde el alquilenilo y el arilo se definen como anteriormente. Los ejemplos no limitativos de arilalquilos comprenden un grupo alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos arilalquilo adecuados incluyen bencilo, 2-fenetil y naftalenilmetilo.

[0031] «Arilalcoxi», tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo -(alquilenil)-aril, donde el alquilenilo y el arilo se definen como anteriormente.

[0032] Los términos «deuterio», «deuterado», tal como se usan en la presente memoria, se refieren a que son, o que están sustituidos por, un isótopo estable de hidrógeno que tiene un protón y un neutrón.

[0033] El término «halógeno», tal como se usa en la presente memoria, se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo. El término «halo» representa cloro, fluoro, bromo o yodo.

[0034] El término «haloalquilo» denota un grupo alquilo como se ha definido anteriormente donde uno o más, por ejemplo, uno, dos o tres de los átomos de hidrógeno del grupo alquilo se reemplazan con un átomo de halógeno, por ejemplo, fluoro, bromo o cloro, en concreto, fluoro. Los ejemplos de haloalquilo incluyen, entre otros, monofluoro-, difluoro-, o trifluoro-metil, -etil o -propil, por ejemplo, 3,3,3-trifluoropropil, 2-fluoroetil, 2,2,2-trifluoroetil, fluorometilo, difluorometilo, o trifluorometilo, o bromoetilo o cloroetilo. De manera similar, el término «fluoroalquilo» se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente sustituido por uno o más, por ejemplo, uno, dos o tres átomos de flúor.

[0035] El término «haloalcoxilo», tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un grupo -O-(haloalquil) donde el haloalquilo se define como anteriormente. Los grupos haloalcoxilo ejemplares son bromoetoxilo, cloroetoxilo, trifluorometoxilo y 2,2,2-trifluoroetoxi.

[0036] El término «hidroxilo» se refiere a un grupo -OH.

[0037] El término «hidroxialquilo» denota un grupo alquilo que está sustituido por al menos un grupo hidroxilo, por ejemplo, uno, dos o tres grupo(s) hidroxilo. La porción de alquilo del grupo hidroxialquilo proporciona el punto de conexión al resto de la molécula. Los ejemplos de grupos hidroxialquilo incluyen, entre otros, hidroximetilo, hidroxietilo, 1-hidroxipropil, 2-hidroxiisopropil, 1,4-dihidroxibutil, y similares.

[0038] El término «oxo» significa un grupo = O y puede estar unido a un átomo de carbono o a un átomo de azufre. El término «N-óxido» se refiere a la forma oxidada de un átomo de nitrógeno.

[0039] Tal como se usa en la presente memoria, el término «cicloalquilo» se refiere a un carbociclo saturado o parcialmente saturado, monocíclico, policíclico fusionado, policíclico con puente o espiro policíclico que tiene entre 3 y 12 átomos de carbono en el anillo. Una categoría no limitativa de los grupos cicloalquilo son carbociclos monocíclicos saturados o parcialmente saturados que tienen entre 3 y 6 átomos de carbono. Los ejemplos ilustrativos de grupos cicloalquilo incluyen, entre otros, las siguientes fracciones:

[0040] El término «cicloalcoxi» se refiere a un grupo -O-(cicloalquil).

[0041] El término «heterocicloalquilo», tal como se usa en la presente memoria, se refiere al cicloalquilo, tal como se define en esta aplicación, siempre que uno o más de los carbonos en el anillo indicados estén reemplazados por una fracción seleccionada de entre -O-, -N = , -C(O)-, -S-.

[0042] Tal como se usa en la presente memoria, el término «heteroarilo» se refiere a un heterociclo aromático monocíclico, o policíclico fusionado, que tiene entre tres y 15 átomos en el anillo que se seleccionan de entre carbono, oxígeno, nitrógeno, selenio y azufre. Los grupos heteroarilo adecuados no incluyen sistemas de anillo que se deban cargar para ser aromáticos, como el pirilio. Algunos anillos heteroarilo adecuados de 5 miembros (como un heteroarilo monocíclico o como parte de un heteroarilo policíclico) tienen un átomo de oxígeno, azufre o nitrógeno, o uno de nitrógeno más uno de oxígeno o de azufre, o 2, 3, o 4 átomos de nitrógeno. Algunos anillos heteroarilo adecuados de 6 miembros (como un heteroarilo monocíclico o como parte de un heteroarilo policíclico) tienen 1, 2, o 3 átomos de nitrógeno. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, entre otros, piridinilo, imidazolilo, imidazopiridinilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinnolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo.

[0043] Los expertos en la materia reconocerán que las especies de heteroarilo y los grupos cicloalquilo enumerados o ilustrados anteriormente no son exhaustivos, y que también se pueden seleccionar especies adicionales en el alcance de estos términos definidos.

[0044] Tal como se describen en la presente memoria, los compuestos divulgados en la presente memoria se pueden sustituir opcionalmente por uno o más sustituyentes, o como ejemplifican las clases, subclases y especies concretas de la invención.

[0045] Tal como se usa en la presente memoria, el término «sustituido» significa que el grupo o la fracción especificada lleva uno o más sustituyentes adecuados. Tal como se usa en la presente memoria, el término «no sustituido» significa que el grupo especificado no lleva sustituyentes. Tal como se usa en la presente memoria, el término «sustituido opcionalmente» significa que el grupo especificado no está sustituido o está sustituido por el número especificado de sustituyentes. Cuando el término «sustituido» se usa para describir un sistema estructural, se pretende que la sustitución se produzca en cualquier posición de valencia permitida en el sistema.

[0046] Tal como se usa en la presente memoria, «uno o más sustituyentes» denota de una al máximo número posible de sustituciones que se pueden producir en cualquier posición de valencia permitida en el sistema. En un cierto modo de realización, uno o más sustituyentes significa 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes. En otro modo de realización, uno o más sustituyentes significa 1, 2 o 3 sustituyentes.

[0047] Se asume que cualquier átomo representado en la presente memoria con una valencia insatisfecha tiene el número suficiente de átomos de hidrógeno para satisfacer la valencia del átomo.

[0048] Cuando cualquier variable (p. ej., alquilo, alquilenilo, heteroarilo, R1, R2, o Ra) aparece en más de un lugar en cualquier fórmula o descripción proporcionada en la presente memoria, la definición de esa variable en cada caso es independiente de su definición en cualquier otro caso.

[0049] Los intervalos numéricos, tal como se usan en la presente memoria, pretenden incluir números enteros consecutivos. Por ejemplo, un intervalo expresado como «entre 0 y 4» o «0-4» incluye 0, 1, 2, 3 y 4, mientras que un intervalo expresado como el «10-20 %» incluye el 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 % y el 20 %. De manera similar, los intervalos numéricos también pretenden incluir números enteros fraccionarios consecutivos. Por ejemplo, un intervalo expresado como el «1-2 %» incluiría el 1.0 %, 1.1 %, 1.2 %, 1.3 %, 1.4 %, 1.5 %, 1.6 %, 1.7 %, 1.8 %, 1.9 % y el 2.0 %.

[0050] Cuando se muestra una fracción multifuncional, el punto de unión con el núcleo se indica mediante una línea o guion. Por ejemplo, ariloxi- se refiere a una fracción en la que un átomo de oxígeno es el punto de unión con la molécula central mientras el arilo se une al átomo de oxígeno.

Definiciones adicionales

[0051] Tal como se usa en la presente memoria, el término «sujeto» engloba mamíferos y no mamíferos. Los ejemplos de mamíferos incluyen, entre otros, cualquier miembro del grupo de los mamíferos: seres humanos; primates no humanos, como chimpancés y otras especies de monos y simios; animales de granja, como ganado bovino, equino, ovino, caprino, porcino; animales domésticos, como conejos, perros y gatos; y animales de laboratorio, incluyendo roedores, como ratas, ratones, cobayas y similares. Los ejemplos de no mamíferos incluyen, entre otros, aves, peces y similares. En un modo de realización de la presente invención, el mamífero es un ser humano.

[0052] «Paciente» incluye tanto seres humanos como animales.

[0053] El término «inhibidor» se refiere a una molécula, como un compuesto, un fármaco o un activador enzimático, o una hormona que bloquea o interfiere de otro modo con una actividad biológica concreta.

[0054] El término «modulador» se refiere a una molécula, como un compuesto de la presente invención, que aumenta o reduce, o que afecta de otro modo a la actividad de una proteína, un receptor y/o unos canales iónicos dados.

[0055] Los términos «cantidad eficaz» o «cantidad terapéuticamente eficaz» se refieren a una cantidad suficiente del agente para proporcionar el resultado biológico deseado. Ese resultado puede ser la reducción y/o alivio de las manifestaciones clínicas, síntomas o causas de una enfermedad o afección médica, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una «cantidad eficaz» para uso terapéutico es la cantidad de un compuesto, o de una composición que comprende el compuesto, que es necesaria para proporcionar un cambio clínicamente relevante en un estado de enfermedad, síntoma o afección médica. Una persona con conocimientos básicos en la materia puede determinar una cantidad «eficaz» en cualquier caso concreto mediante la experimentación rutinaria. Por consiguiente, la expresión «cantidad eficaz» generalmente se refiere a la cantidad en la que la sustancia activa tiene un efecto terapéuticamente deseado.

[0056] Tal como se usa en la presente memoria, los términos «tratar» y «tratamiento» abarcan tanto el tratamiento «preventivo» como «curativo». Con tratamiento «preventivo» se pretende indicar un aplazamiento en el desarrollo de la enfermedad, de un síntoma de una enfermedad, o de una afección médica, contener los síntomas que puedan aparecer o reducir del riesgo de desarrollo o recurrencia de una enfermedad o síntoma. El tratamiento «curativo» incluye reducir la gravedad o contener el agravamiento de una enfermedad, un síntoma o una afección existentes. Por consiguiente, el tratamiento incluye aliviar o prevenir el agravamiento de los síntomas existentes de la enfermedad, prevenir que aparezcan síntomas, aliviar o prevenir las causas metabólicas subyacentes de los síntomas, inhibir el trastorno o la enfermedad, p. ej., detener el desarrollo del trastorno o la enfermedad, mitigar el trastorno o la enfermedad, provocar la regresión del trastorno o la enfermedad; mitigar una afección provocada por la enfermedad o el trastorno, o frenar los síntomas de la enfermedad o el trastorno.

[0057] Tal como se usa en la presente memoria, se debe entender que los términos «administración de un» y «administrar un» compuesto significan proporcionar un compuesto de la invención, composición farmacéutica que comprende un compuesto o un profármaco de un compuesto de la invención a un individuo que lo necesite. Se reconoce que un experto en la materia no limitativa puede tratar a un paciente que actualmente padece enfermedades o trastornos relacionados, o proporcionar un tratamiento profiláctico a un paciente que padece las enfermedades o los trastornos por medio de una cantidad efectiva del compuesto de la presente invención.

[0058] El término «composición», como se usa en la presente memoria, pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que derive, directa o indirectamente, de las combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Se pretende que este término, con respecto a la composición farmacéutica, abarque un producto que comprenda el/los ingrediente(s) activo(s) y los ingrediente(s) inerte(s) que componen el portador, así como cualquier otro producto que derive, directa o indirectamente, de una combinación, formación compleja o agregación de dos o más ingredientes cualquiera, o de los otros tipos de reacciones o efectos combinados para provocar la disociación de uno o más de los ingredientes. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas divulgadas en la presente memoria abarcan cualquier composición elaborada al mezclar un compuesto de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

Descripciones químicas adicionales

[0059] Cualquier fórmula dada en la pretende memoria pretende representar compuestos que tienen estructuras representadas mediante la fórmula estructural, así como ciertas modificaciones o formas. Por ejemplo, los compuestos de cualquier fórmula dada en la presente memoria pueden tener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se considera que todos los estereoisómeros, incluyendo los isómeros ópticos, enantiómeros y diastereómeros, de los compuestos de la fórmula general, y mezclas de estos, se encuentran dentro del alcance de la fórmula. Además, ciertas estructuras pueden existir como isómeros geométricos (es decir, isómeros cis y trans), como tautómeros o como atropisómeros. Se contemplan en la presente memoria todas estas formas isoméricas, y mezclas de estas, como parte de la presente invención. Por consiguiente, cualquier fórmula dada en la presente memoria pretende representar un racemato, una o más formas enantioméricas, una o más formas diastereoméricas, una o más formas tautoméricas o atropisoméricas, y mezclas de estas.

[0060] «Estereoisómero» se refiere a compuestos que tienen una composición química idéntica, pero que difieren respecto de la disposición de los átomos o grupos en el espacio. Los estereoisómeros incluyen enantiómero, diastereómeros, confórmero (rotámero), isómero geométrico (cis/trans), atropisómero, etc.

[0061] «Quiral» se refiere a moléculas que tienen la propiedad no superponible con su imagen especular, mientras que el término «aquiral» se refiere a las moléculas que son superponibles con su imagen especular.

[0062] «Enantiómeros» se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.

[0063] «Diastereómeros» se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares entre sí Los diastereómeros tienen propiedades físicas diferentes, p. ej., puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales o actividades biológicas. Se puede separar una mezcla de diastereómeros por medio de procedimientos analíticos de alta resolución como electroforesis y cromatografía, como CLAR.

[0064] Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en la presente memoria provienen por lo general de S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; y Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994.

[0065] Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de luz polarizada. Al describir un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, se usan para denotar la configuración absoluta de la molécula sobre su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos d o l o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación del plano de luz polarizada mediante el compuesto, donde (-) o l significan que el compuesto es levorrotatorio. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrorrotatorio. Se puede hacer referencia a un estereoisómero específico como un enantiómero, y una mezcla de estos estereoisómeros se denomina mezcla enantiomérica. Se hace referencia a una mezcla 50 : 50 de enantiómeros como una mezcla racémica o un racemato, que se puede producir cuando no ha habido esteroselección o estereoespecificidad en una reacción o un proceso químico.

[0066] Cualquier átomo asimétrico (p. ej., de carbono o similares) del/de los compuesto(s) divulgados en la presente memoria puede estar en configuración racémica o enriquecida enantioméricamente, por ejemplo, (R)-, (S)- o (R, S)-. En ciertos modos de realización, cada átomo asimétrico tiene al menos un 50 % de exceso enantiomérico, al menos un 60 % de exceso enantiomérico, al menos un 70 % de exceso enantiomérico, al menos un 80 % de exceso enantiomérico, al menos un 90 % de exceso enantiomérico, al menos un 95 % de exceso enantiomérico, o al menos un 99 % de exceso enantiomérico en la configuración (R)- o (S)-.

[0067] Dependiendo de la elección de materiales y procedimientos de partida, los compuestos pueden estar presentes en forma de uno de los estereoisómeros posibles o como mezclas de estos, como mezclas de racematos y diastereoisómeros, dependiendo del número de átomos de carbono asimétricos. Los isómeros ópticamente activos (R)- y (S)- se pueden preparar mediante sintones quirales o reactivos quirales, o separarse por medio de técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un doble enlace, el sustituyente puede estar en configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, un sustituyente cicloalquilo puede tener una configuración cis- o trans- en comparación con otro sustituyente de la misma estructura de cicloalquilo.

[0068] Se puede separar cualquier mezcla resultante de estereoisómeros según las diferencias fisicoquímicas de los constituyentes, en los isómeros geométricos puros o esencialmente puros, enantiómeros, diastereómeros, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada. Cualquier racemato resultante de productos finales o intermedios se puede separar en antípodas ópticas mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, p. ej., mediante la separación de las sales diastereoméricas de estos. Los productos racémicos también se pueden separar mediante cromatografía quiral, p. ej., cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) con un adsorbente quiral. También se pueden preparar los enantiómeros preferidos mediante síntesis asimétricas. Véanse, por ejemplo, Jacques, et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Principles of Asymmetric Synthesis (2nd Ed. Robert E. Gawley, Jeffrey Aubé, Elsevier, Oxford, UK, 2012); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972); Chiral Separation Techniques: A Practical Approach (Subramanian, G. Ed., Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany, 2007).

[0069] Se pueden separar las mezclas diastereoméricas en sus diastereómeros individuales según sus diferencias físicas y químicas mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, como, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar al convertir la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica mediante la reacción con un compuesto ópticamente activo adecuado (p. ej., un auxiliar quiral, como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher, o la formación de una mezcla de sales diastereoméricas), la separación de los diastereómeros y la trasformación (p. ej., hidrolización o desalación) de los diastereómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Los enantiómeros también se pueden separar por medio de la columna quiral de CLAR.

[0070] Los compuestos para uso según la invención pueden formar sales farmacéuticamente aceptables, que también están dentro del alcance de esta invención. Una «sal farmacéuticamente aceptable» se refiere a una sal de un ácido libre o a una base de un compuesto de fórmula (I) que no es tóxica, es tolerable fisiológicamente, es compatible con la composición farmacéutica en la que se formula, y es, por lo demás, adecuada para formulación y/o administración a un sujeto. Se entiende que la referencia a un compuesto en la presente memoria incluye la referencia a una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto a no ser que se indique lo contrario.

[0071] Las sales compuestas incluyen sales ácidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Además, cuando un compuesto dado contiene tanto una fracción básica, como, entre otros, una piridina o un imidazol y una fracción ácida, como, entre otros, un ácido carboxílico, un experto en la materia reconocerá que el compuesto puede existir como un ion dipolar («sal interna»); estas sales se incluyen en el término «sal» tal como se usa en la presente memoria. Las sales de los compuestos para uso según la invención se pueden preparar, por ejemplo, al hacer reaccionar un compuesto con una cantidad de un ácido o una base adecuada, como una cantidad equivalente, en un medio como uno en que la sal precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización.

[0072] Las sales ejemplares incluyen, entre otras, sales de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato de ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, ácido citrato, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato («mesilato»), etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, y de pamoato (es decir, 1,1'-metileno-bis(2-hidroxi-3-naftoato)). Una sal farmacéuticamente aceptable puede implicar la inclusión de otra molécula como un ion acetato, un ion succinato u otro contraión. El contraión puede ser cualquier fracción orgánica o inorgánica que estabilice la carga del compuesto original. Además, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo con carga en su estructura. Los casos en que varios átomos con carga son parte de una sal farmacéuticamente aceptable pueden tener varios contraiones. De ahí que una sal farmacéuticamente aceptable pueda tener uno o más átomos con carga y/o uno o más contraiones.

[0073] Las sales de adición de ácido ejemplares incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcanforsulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, lactatos, maleatos, metanosulfonatos, naftalenosulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos (también conocidos como tosilatos) y similares.

[0074] Las sales básicas ejemplares incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos, como sales de sodio, de litio y de potasio, sales de metales alcalinotérreos como sales de calcio y de magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas), como diciclohexilaminas, terc-butil aminas, y sales con aminoácidos, como arginina, lisina y similares. Los grupos básicos que contienen nitrógeno se pueden cuartenizar con agentes, como haluros de alquilo inferior (p. ej., cloruros, bromuros y yoduros de butilo, metilo y etilo), sulfatos de dialquilo (p. ej., sulfatos de dimetilo, dietilo y dibutilo), haluros de cadena larga (p. ej., cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo), haluros de aralquilo (p. ej., bromuros de bencilo y fenetilo) y otros.

[0075] Asimismo, los ácidos y las bases considerados, en general, adecuados para la formación de sales farmacéuticamente útiles a partir de compuestos farmacéuticos se tratan, por ejemplo, en P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; y en The Orange Book (Food & Drug Administration, MD, disponible en la FDA).

[0076] Asimismo, cualquier compuesto descrito en la presente memoria pretende referirse también a cualquier forma no disuelta, o a un hidrato, solvato o polimorfo de este compuesto, y mezclas de este, incluso si estas formas no se enumeran explícitamente. «Solvato» significa una asociación física de un compuesto de la invención con una o más moléculas de disolvente. Esta asociación física implica diversos grados de enlace iónico y covalente, incluyendo el enlace de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato será capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o más moléculas de disolvente se incorporen en la red cristalina de un sólido cristalino. «Solvato» abarca tanto la fase de disolución como los solvatos aislables. Los solvatos adecuados incluyen los formados con disolventes farmacéuticamente aceptables como agua, etanol y similares. En algunos modos de realización, el disolvente es agua y los solvatos son hidratos.

[0077] Uno o más compuestos para uso según la invención se pueden transformar opcionalmente en un solvato. Los métodos de preparación de solvatos son conocidos, en general. Así, por ejemplo, M. Caira et al., J. Pharmaceutical Sci.,

93(3), 601-611 (2004), describe la preparación de los solvatos del fluconazol antifúngico en acetato de etilo, así como del agua. Se describen preparaciones similares de solvatos, hemisolvato, hidratos y similares en E. C. van Tonder et al, AAPS PharmSciTech., 5(1), article 12 (2004); y A. L. Bingham et al, Chem. Commun., 603-604 (2001). Un proceso representativo no limitativo implica disolver el compuesto de la invención en una cantidad adecuada de disolvente (disolvente orgánico o agua o una mezcla de estos) a una temperatura más alta que la ambiente, y enfriar la solución a una velocidad suficiente para formar cristales, que luego se aíslan mediante métodos estándar. Las técnicas analíticas como, por ejemplo, espectroscopia infrarroja, muestran la presencia del disolvente (o agua) en los cristales en forma de solvato (o hidrato).

[0078] La presente divulgación también se refiere a metabolitos farmacéuticamente activos de los compuestos de fórmula (I)a o (I)b, y usa estos metabolitos en los métodos de la invención. Un «metabolito farmacéuticamente activo» significa un producto farmacológicamente activo del metabolismo en el cuerpo de un compuesto de fórmula (I)a o (I)b o una sal de este. Se pueden determinar los metabolitos activos de un compuesto por medio de técnicas habituales conocidas o disponibles en la materia. Véanse, p. ej., Bertolini et al., J. Med. Chem. 1997, 40, 2011-2016; Shan et al., J.

Pharm. Sci. 1997, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res. 1995, 34, 220-230; Bodor, Adv. Drug Res. 1984, 13, 255

331; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); and Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991).

[0079] Cualquier fórmula dada en la presente memoria también pretende representar formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas mediante las fórmulas dadas en la presente memoria a excepción de que uno o más átomos se reemplazan con un átomo que tiene una masa atómica o un número másico seleccionados. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar a los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, cloro y yodo, como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, y 125I, respectivamente. marcados isotópicamente son útiles en los estudios metabólicos (por ejemplo, con 14C), estudios cinéticos de reacción

(con, por ejemplo, 2H o 3H), técnicas de detección o diagnóstico por imagen [como la tomografía de emisión de positrones

(PET, por sus siglas en inglés) o tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT, por sus siglas en inglés) incluyendo ensayos de distribución tisular de fármaco o sustrato, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. En concreto, un compuesto marcado 18F o 11C puede ser especialmente adecuado para estudios de TEP o SPECT. Además, la sustitución con isótopos más pesados como el deuterio (es decir, 2H) puede plantear ciertas ventajas terapéuticas derivadas de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, vida media in vivo aumentada o requisitos de posología reducidos. Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención se pueden preparar, en general, al llevar a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas o en los ejemplos y las preparaciones descritas a continuación al sustituir un reactivo marcado isotópicamente disponible fácilmente por un reactivo no marcado isotópicamente.

[0080] Se pretende que el uso de los términos «sal», «solvato», «polimorfo» y similares, con respecto a los compuestos descritos en la presente memoria, se apliquen por igual a la sal, el solvato y las formas polimorfas de enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, atropisómeros y racematos de los compuestos de la invención.

Abreviatura:

DESCRIPCIÓN DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

[0081] La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado de entre Compuesto (III), Compuesto (XXVIII), Compuesto (XXIV), Compuesto (XXX), Compuesto (Xx XI), Compuesto (XXXII), Compuesto (Xx X iII), Compuesto (XXXIV), Compuesto (XXXV), Compuesto (Xx Xv I), Compuesto (x Xx VII), Compuesto (Xx XVIII), Compuesto (XXXIX), Compuesto (XXXXIV), Compuesto (XXXXV), Compuesto (XXXXVI), y Compuesto (XXXx V iI), o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, para su uso en un método de inhibición de la ferroptosis en un paciente. Un aspecto de esta divulgación consiste en los compuestos, las composiciones, los kits y los antídotos para modular la transmisión de glutamato en mamíferos que tienen un compuesto de fórmula (I), sales farmacéuticamente aceptables de estos y enantiómeros o diastereómeros individuales de estos

donde

x es 0 o 1;

G está ausente, O, NH o CH₂;

W es:

Donde R1, R2, R3, o R4 es alquilo C1-C6, R5 es OH, u O,

n es 0,1,2 o 3,

L está ausente, o se selecciona de entre un grupo que consiste en alquilo C1-C10, alcoxilo C1-C10, cicloalquilo, alquilcicloalquilo C1-C10, heterocicloalquilo, alquilheterocicloalquilo C1-C10, arilo, alquilarilo C1-C10, heteroarilo, y alquilheteroarilo C1-C10, donde dicho cicloalquilo o heterocicloalquilo tiene entre aprox. 3 y aprox. 7 carbonos en el anillo, y dicho arilo o heteroarilo tiene entre aprox. 5 y aprox. 10 carbonos en el anillo;

PEP es una fracción peptídica que tiene la siguiente estructura:

donde un símbolo * denota un centro quiral en una configuración (S) o (R);

Bestá ausente, N, NH, o O;

X1 se selecciona de entre un grupo que consiste en H, -(C = O)-O-Rm, -(SO)-O-Rm, -(SOz)-O-Rm, -(SO₂)-N-(Rm)₂y -(C = O)-N-(Rm)₂, donde Rm es alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, alquenilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo, alquilcicloalquilo C1-C6, heterocicloalquilo, alquilheterocicloalquilo C1-C6, arilo, alquilarilo C1-C6, heteroarilo, o alquilheteroarilo C1-C6,

donde dicho cicloalquilo o heterocicloalquilo tiene entre aprox. 3 y aprox. 7 carbonos en el anillo, y dicho arilo o heteroarilo tiene entre aprox. 5 y aprox.10 carbonos en el anillo;

Rn se selecciona de entre -O-X3, -S-X3, -NH-X3, o ~N-X4a(X4b);

A está ausente, o se selecciona de entre un grupo que consiste en: alanina, leucina, isoleucina, fenilalanina, metionina, prolina, glicina, triptófano, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, histidina, lisina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, y valina, cada uno de los cuales puede estar en una configuración D o L; el residuo de amino está desprotegido, o protegido por un grupo protector seleccionado de entre un grupo que consiste en Cbz y Fmoc;

con la condición de que PEP no sea uno de los siguientes:

[0082] El compuesto de fórmula (I) se ilustra además mediante el siguiente grupo compuesto que consiste en:

y sales farmacéuticamente aceptables de este.

[0083] La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado de entre Compuesto (III), Compuesto (XXVIII), Compuesto (XXIV), Compuesto (XXX), Compuesto (Xx XI), Compuesto (XXXII), Compuesto (XXXIII), Compuesto (XXXIV), Compuesto (XXXV), Compuesto (XXXVI), Compuesto (XXXVII), Compuesto (XXXVIII), Compuesto (XXXIX), Compuesto (XXXXIV), Compuesto (x Xx XV), Compuesto (XXXXVI), y Compuesto (XXXx V iI), o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, para su uso en un método de inhibición de la ferroptosis en un paciente.

[0084] Un aspecto de la presente invención está relacionado con compuestos de la presente invención para su uso en el tratamiento, prevención, inhibición o eliminación de un trastorno o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo en un paciente.

[0085] Un aspecto de la presente invención está relacionado con los compuestos de la presente invención para su uso como un modulador de ferroptosis y para su uso en el tratamiento, la prevención, la inhibición o la eliminación de un trastorno o una enfermedad o una afección médica en un paciente al modular la ferroptosis en dicho paciente.

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA DE LOS COMPUESTOS DIVULGADOS EN LA PRESENTE MEMORIA Y PREPARACIÓN Y ADMINISTRACIÓN

[0086] La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende compuestos de la presente divulgación, p. ej., compuestos de ejemplo. De acuerdo con los ejemplos específicos, la composición farmacéutica puede además comprender un excipiente, portador, adyuvante, disolvente farmacéuticamente aceptables y una combinación de estos.

[0087] La presente divulgación proporciona un método para tratar, prevenir o aliviar una enfermedad o un trastorno, que comprende administrar una cantidad segura y eficaz de una composición farmacéutica que contiene compuestos divulgados en la presente memoria con, opcionalmente, uno o más agentes activos terapéuticos auxiliares. La cantidad del compuesto de la composición farmacéutica divulgada en la presente memoria se refiere a una cantidad que puede ser efectivamente detectada para modular la ferroptosis en muestras biológicas y en un paciente. Se puede administrar el ingrediente activo a sujetos que necesiten este tratamiento en dosis que proporcionarán la eficacia farmacéutica ideal, que no se limita a los efectos terapéuticos deseados, en la vía de administración y en la duración del tratamiento. La posología variará de un paciente a otro dependiendo de la naturaleza y gravedad de la enfermedad, del peso del paciente, la dieta en particular que siga el paciente, el tratamiento concomitante y otros factores que reconocerán los expertos en la materia.

[0088] La posología real empleada puede variar dependiendo de las necesidades del paciente y la gravedad de la afección tratada. La determinación de la pauta posológica adecuada para una situación concreta no excede las habilidades en la materia. Por comodidad, la dosis diaria total se puede dividir y administrar en porciones durante el día según sea necesario. La cantidad y frecuencia de administración de los compuestos divulgados en la presente memoria y/o de sus sales farmacéuticamente aceptables se regulará de acuerdo con el criterio del médico tratante en función de factores como la edad, la afección y el tamaño del paciente, así como la gravedad de los síntomas tratados.

[0089] También se apreciará que ciertos compuestos divulgados en la presente memoria pueden existir de forma libre para el tratamiento, o si procede, como un derivado farmacéuticamente aceptable o un profármaco de estos. Un derivado farmacéuticamente aceptable incluye sales, ésteres, sales de estos ésteres farmacéuticamente aceptables o cualquier otro aducto o derivado que, al administrarse a un paciente que lo necesite, proporciona, directa o indirectamente, un compuesto como se describe en la presente memoria o un metabolito o residuo terapéuticamente eficaz de este.

[0090] Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar y empaquetar a granel donde una cantidad segura y eficaz de un compuesto de fórmula (I) divulgado en la presente memoria se puede extraer y luego administrar al paciente, como con polvos o jarabes. En general, se administran al paciente niveles de dosificación de entre 0.0001 y 10 mg/kg de peso corporal al día para lograr una modulación eficaz de la transmisión disfuncional de glutamato. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar y empaquetar en forma de dosis unitarias donde cada unidad físicamente independiente contiene una cantidad segura y eficaz de un compuesto de fórmula (I) divulgado en la presente memoria.

[0091] Cuando las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación también contienen uno o más ingredientes activos, además de un compuesto de la presente divulgación, la relación en peso del compuesto de la presente divulgación con el segundo ingrediente activo puede variar y depender de la dosis efectiva de cada ingrediente. Así, por ejemplo, cuando un compuesto de la presente divulgación se combina con otro agente, la relación en peso del compuesto de la presente divulgación con el otro agente oscilará en general entre aprox. 1000 : 1 y aprox. 1 : 1000, como entre aprox. 200 : 1 y 1 : 200. Las combinaciones de un compuesto de la presente divulgación y otros ingredientes activos estarán, en general, dentro del intervalo anteriormente mencionado, pero se debería usar una dosis efectiva de cada ingrediente activo en la combinación en cada caso.

[0092] «Excipiente farmacéuticamente aceptable», tal como se usa en la presente memoria se refiere a un material, una composición o un vehículo farmacéuticamente aceptables implicados en dar forma o consistencia a la composición farmacéutica. Cada excipiente debe ser compatible con los demás ingredientes de la composición farmacéutica cuando se entremezclan, de manera que los efectos combinados que reducirían esencialmente la eficacia del compuesto divulgado en la presente memoria cuando se administra a un paciente y que darían lugar a composiciones farmacéuticamente inaceptables. Además, cada excipiente debe ser de una pureza suficientemente alta para que sea farmacéuticamente aceptable.

[0093] Los excipientes farmacéuticamente aceptables variarán dependiendo de la forma concreta de dosificación elegida. Además, los excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir para que tengan una función concreta en la composición. Por ejemplo, se pueden elegir ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables por su capacidad para facilitar la producción de formas de dosificación uniformes. Ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para facilitar la producción de formas de dosificación estables. Ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para facilitar el porte o transporte de los compuestos divulgados en la presente memoria de un órgano o parte del cuerpo a otro órgano o parte del cuerpo una vez administrado al paciente. Ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para mejorar la adhesión del paciente al tratamiento.

[0094] Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen los siguientes tipos de excipientes: diluyentes, rellenos, aglutinantes, disgregantes, lubrificantes, deslizantes, agentes de granulación, agentes de recubrimiento, agentes humectantes, disolventes, codisolventes, agentes de suspensión, emulsionantes, edulcorantes, agentes saborizantes, agentes enmascaradores del sabor, agentes colorantes, agentes antiaglomerantes, humectantes, agentes quelantes, plastificantes, agentes para aumentar la viscosidad, antioxidantes, conservantes, estabilizadores, tensoactivos y agentes amortiguadores. El experto en la materia apreciará que ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables pueden tener más de una función o pueden tener funciones alternativas dependiendo de la cantidad de excipiente presente en la formulación y de qué otros ingredientes están presentes en la formulación.

[0095] Los expertos en la materia poseen el conocimiento y la habilidad en la materia para poder seleccionar excipientes farmacéuticamente aceptables en cantidades adecuadas. Además, existen recursos disponibles para los expertos en la materia que describen excipientes farmacéuticamente aceptables y que pueden ser útiles para seleccionar excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados. Los ejemplos incluyen Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited), y The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).

[0096] En Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York, se divulgan varios portadores usados en la formulación de composiciones farmacéuticamente aceptables y técnicas conocidas para la preparación de estas. Excepto en la medida en que cualquier medio portador sea incompatible con los compuestos divulgados en la presente memoria, como al producir cualquier efecto biológico no deseado o al tener un efecto combinado nocivo con cualquier/cualesquiera otro(s) compuesto(s) de la composición farmacéuticamente aceptable, cuyo uso se contempla en el alcance de esta divulgación.

[0097] Las composiciones farmacéuticas divulgadas en la presente memoria se preparan por medio de técnicas y métodos conocidos para los expertos en la materia. Se describen algunos de los métodos usados normalmente en la materia en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).

[0098] Por lo tanto, otro aspecto de la presente divulgación está relacionado con un método para preparar una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene el compuesto divulgado en la presente memoria y un excipiente farmacéuticamente aceptable, portador, adyuvante, vehículo o una combinación de estos, el método comprende mezclar varios ingredientes. La composición farmacéutica que contiene el compuesto divulgado en la presente memoria se puede preparar, por ejemplo, a una temperatura ambiente y presión normales.

[0099] El compuesto de la divulgación se formulará, por lo general, en una forma de dosificación adaptada para administración al paciente mediante la vía de administración deseada. Por ejemplo, las formas de dosificación incluyen las adaptadas para (1) administración por vía oral, como comprimidos, cápsulas, pastillas, píldoras, grageas, polvos, jarabes, elixires, suspensiones, soluciones, emulsiones, sobres y obleas; (2) administración por vía parenteral, como soluciones, suspensiones y polvos estériles para reconstitución; (3) administración por vía transdérmica, como parches transdérmicos; (4) administración por vía rectal, como supositorios; (5) inhalación, como aerosoles, soluciones y polvos secos; y (6) administración por vía tópica, como cremas, pomadas, lociones, soluciones, ungüentos, pulverizadores, espumas y geles.

[0100] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden proporcionar como comprimidos de capa, comprimidos triturados, pastillas para chupar masticables, comprimidos de disolución rápida, comprimidos multicapa, o comprimidos con recubrimiento entérico, comprimidos recubiertos de azúcar o con cubierta pelicular. Los comprimidos con recubrimiento entérico son comprimidos de capa recubiertos con sustancias que resisten la acción del ácido gástrico, pero se disuelven o desintegran en el intestino, que por consiguiente protege los ingredientes activos del ambiente ácido del estómago. Los recubrimientos entéricos incluyen, entre otros, ácidos grasos, grasas, salicilato de fenilo, ceras, goma laca, goma laca amónica y acetoftalatos de celulosa. Los comprimidos recubiertos de azúcar son comprimidos de capa con un recubrimiento de azúcar alrededor, que puede ser beneficioso para enmascarar sabores u olores desagradables y proteger los comprimidos contra la oxidación. Los comprimidos con cubierta pelicular son comprimidos de capa recubiertos por una capa o película delgada de un material hidrosoluble. Los recubrimientos peliculares incluyen, entre otros, hidroxietilcelulosa, carboximetil celulosa sódica, polietilenglicol 4000 y acetoftalato de celulosa. Los recubrimientos peliculares presentan las mismas características generales que el recubrimiento de azúcar. Los comprimidos multicapa son comprimidos de capa hechos mediante más de un ciclo de compresión, incluyendo comprimidos de varias capas, y comprimidos recubiertos a presión o en seco.

[0101] La forma de dosificación del comprimido se puede preparar a partir del ingrediente activo de forma pulverizada, cristalina o granulada, por sí solo o junto con uno o más portadores o excipientes descritos en la presente memoria, incluyendo aglutinantes, disgregantes, polímeros para liberación controlada, lubrificantes, diluyentes y/o colorantes. Los agentes saborizantes y edulcorantes son especialmente útiles en la formación de comprimidos masticables y pastillas para chupar.

[0102] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden proporcionar como cápsulas duras o blandas, que se pueden elaborar a partir de gelatina, metilcelulosa, almidón o alginato de calcio. La cápsula de gelatina dura, también conocida como cápsula de llenado en seco (DFC, por sus siglas en inglés), consta de dos secciones, una que se desliza sobre la otra, que por consiguiente rodea el ingrediente activo por completo. La cápsula elástica blanda (SEC, por sus siglas en inglés) es una cubierta blanda globular, como una cubierta de gelatina blanda, que se plastifica mediante la adición de glicerina, sorbitol o un polialcohol similar. Las cubiertas de gelatina blanda pueden contener un conservante para impedir el crecimiento de microorganismos. Los conservantes adecuados son los que se describen en la presente memoria, incluyendo metil- y propilparabenos, y ácido ascórbico. Las formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas proporcionadas en la presente memoria se pueden encapsular en una cápsula. Las formas de dosificación líquidas y semisólidas adecuadas incluyen soluciones y suspensiones en carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos. Las cápsulas que contienen estas soluciones se pueden preparar como se describe en las pat. de EE. UU. N.° 4,328,245; 4,409,239; y 4,410,545. Las cápsulas también se pueden recubrir de formas conocidas por los expertos en la materia para modificar o mantener la disolución del ingrediente activo.

[0103] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden proporcionar en formas de dosificación líquidas o semisólidas, incluyendo emulsiones, soluciones, suspensiones, elixires y jarabes. Una emulsión es un sistema bifásico en que un líquido se dispersa en forma de pequeños glóbulos en otro líquido, que puede ser aceite en agua o agua en aceite. Las emulsiones pueden incluir un líquido o disolvente no acuosos, un agente emulsionante y un conservante farmacéuticamente aceptables. Las suspensiones pueden incluir un agente de suspensión y conservante farmacéuticamente aceptables. Las soluciones acuosas alcohólicas pueden incluir un acetal farmacéuticamente aceptable, como un di(alquil inferior)acetal de un aldehído de alquilo inferior, p. ej., acetaldehído dietil acetal; y un disolvente miscible en agua que tenga uno o más grupos hidroxi, como propilenglicol y etanol. Los elixires son soluciones claras, edulcoradas e hidroalcohólicas. Los jarabes son soluciones acuosas concentradas de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, y que también pueden contener un conservante. Para una forma de dosificación líquida, por ejemplo, una solución en un polietilenglicol se puede diluir con una cantidad suficiente de un portador líquido farmacéuticamente aceptable, p. ej., agua, que se debe medir de forma adecuada para su administración.

[0104] Otras formas de dosificación líquidas y semisólidas incluyen, entre otras, las que contienen el/los ingrediente(s) activo(s) proporcionados en la presente memoria y un mono- o polialquilenglicol dialquilado, incluyendo 1,2-dimetoximetano, diglima, triglima, tetraglima, polietilenglicol-350-dimetiléter, polietilenglicol-550-dimetiléter, polietilenglicol-750-dimetiléter, donde 350, 550, 750 se refieren al peso molecular medio aproximado del polietilenglicol. Estas formulaciones pueden comprender, además, uno o más antioxidantes, como butilhidroxitolunol (BHT), butilhidroxianisol (BHA), galato de propilo, vitamina E, hidroquinona, hidroxicumarinas, etanolamina, lecitina, cefalina, ácido ascórbico, ácido málico, sorbitol, ácido fosfórico, bisulfito, metabisulfito de sodio, tiodipropiónico y sus ésteres, y ditiocarbamatos.

[0105] Si procede, las formulaciones de unidades de dosificación para administración por vía oral se pueden microencapsular. La formulación también se puede preparar para prolongar o mantener la liberación, como, por ejemplo, al recubrir o integrar un material concreto en polímeros, cera o similares.

[0106] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria para administración por vía oral también se pueden proporcionar en forma de liposomas, micelas, microesferas o nanosistemas. Las formas de dosificación micelar se pueden preparar según se describe en la pat. EE. UU. N.° 6,350,458.

[0107] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria también se pueden proporcionar como gránulos o polvos efervescentes o no efervescentes, que se deben reconstituir en forma de dosificación líquida. Los portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables usados en los gránulos o polvos no efervescentes pueden incluir diluyentes, edulcorantes y agentes humectantes. Los portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables usados en los gránulos o polvos efervescentes pueden incluir ácidos orgánicos y una fuente de dióxido de carbono.

[0108] Los agentes colorantes y saborizantes se pueden usar en todas las formas de dosificación anteriores.

[0109] Los compuestos divulgados en la presente memoria se pueden acoplar a polímeros solubles como portadores de medicamentos dirigidos. Estos polímeros pueden abarcar polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidofenol, polihidroxietilaspartamidofenol u óxido de polietileno polilisina, sustituidos por radicales de palmitoilo. Los compuestos además se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables adecuados para lograr una liberación controlada de un medicamento, por ejemplo, ácido poliláctico, poli-épsilon-caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidroxipiranos, policianoacrilatos y copolímeros bloque reticulados o anfipáticos de hidrogeles.

[0110] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden formular como formas de dosificación de liberación inmediata o modificada, incluyendo formas de liberación retardada, sostenida, pulsátil, controlada, dirigida y programada.

[0111] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden coformular con otros ingredientes activos que no deterioren la acción terapéutica deseada, o con otras sustancias que complementen la acción deseada.

[0112] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden administrar por vía parenteral mediante inyección, infusión o implantación para administración local o sistémica. La administración por vía parenteral, tal como se usa en la presente memoria, incluye administración por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular, intrasinovial y subcutánea.

[0113] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden formular en cualquier forma de dosificación que sea adecuada para administración por vía parenteral, incluyendo soluciones, suspensiones, emulsiones, micelas, liposomas, microesferas, nanosistemas y formas sólidas adecuadas para soluciones o suspensiones en líquido antes de inyectarse. Estas formas de dosificación se pueden preparar de acuerdo con métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia de las ciencias farmacéuticas (véase Remington: The Science and Practice of Pharmacy, arriba).

[0114] Las composiciones farmacéuticas destinadas a la administración por vía parenteral pueden incluir uno o más portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo, entre otros, vehículos acuosos, vehículos miscibles en agua, vehículos no acuosos, agentes antimicrobianos o conservantes contra el crecimiento de microorganismos, estabilizadores, potenciadores de la solubilidad, agentes isotónicos, agentes amortiguadores, antioxidantes, anestésicos locales, agentes de suspensión y dispersión, agentes humectantes o emulsionantes, agentes complejantes, agentes secuestrantes o quelantes, crioprotectores, lioprotectores, agentes espesantes, agentes reguladores del pH y gases inertes.

[0115] Los vehículos acuosos adecuados incluyen, entre otros, agua, suero, suero fisiológico, solución tampón de fosfatos (STF), inyección de cloruro sódico, solución inyectable de Ringer, inyección de dextrosa isotónica, inyección de agua estéril, solución láctica inyectable de Ringer y de dextrosa. Los vehículos no acuosos incluyen, entre otros, aceites fijos de origen vegetal, aceite de ricino, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de menta, aceite de alazor, aceite de sésamo, aceite de soja, aceites vegetales hidrogenados, aceite de soja hidrogenado, triglicéridos de cadena media de aceite de coco y aceite de palmiste. Los vehículos miscibles en agua incluyen, entre otros, etanol, 1,3-butanodiol, polietilenglicol líquido (p. ej., polietilenglicol 300 y polietilenglicol 400), propilenglicol, glicerina, N-metil-2-pirrolidona, N, N-dimetilacetamida y dimetil sulfóxido.

[0116] Los agentes antimicrobianos o conservantes adecuados incluyen, entre otros, fenoles, cresoles, mercuriales, alcohol bencílico, clorobutanol, metilo y propilo p-hidroxibenzoatos, timerosal, cloruro de benzalconio (p. ej., cloruro de bencetonio), metil- y propilparabenos, y ácido sórbico. Los agentes isotónicos adecuados incluyen, entre otros, cloruro de sodio, glicerina y dextrosa. Los agentes amortiguadores adecuados incluyen, entre otros, fosfato y citrato. Los antioxidantes adecuados son los descritos en la presente memoria, incluyendo bisulfito y metabisulfito de sodio. Los anestésicos locales adecuados incluyen, entre otros, clorhidrato de procaína. Los agentes de suspensión y dispersión son los descritos en la presente memoria, incluyendo carboximetil celulosa sódica, hidroxipropil metilcelulosa y polivinilpirrolidona. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen los descritos en la presente memoria, incluyendo monolaurato de sorbitán polioxietilenado, monooleato de sorbitán polioxietilenado 80 y oleato de trietanolamina. Los agentes secuestrantes o quelantes incluyen, entre otros, AEDT. Los agentes reguladores del pH incluyen, entre otros, hidróxido de sodio, ácido clorhídrico, ácido cítrico y ácido láctico. Los agentes complejantes adecuados incluyen, entre otros, ciclodextrinas, incluyendo a-ciclodextrina, S-ciclodextrina, hidroxipropil-S-ciclodextrina, sulfobutiléter-S-ciclodextrina y sulfobutiléter 7-S-ciclodextrina (CAPTISOL®, CyDex, Lenexa, Kans.).

[0117] Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se pueden formular para la administración de dosis únicas o múltiples. Las formulaciones de dosis únicas se empaquetan en una ampolla, un vial o una jeringuilla. Las formulaciones parenterales de dosis múltiples deben contener un agente antimicrobiano en concentraciones bacteriostáticas o fungistáticas. Todas las formulaciones parenterales deben ser estériles, como se conoce y se practica en la materia.

[0118] En un modo de realización, las composiciones farmacéuticas se proporcionan como soluciones estériles listas para usar. En otro modo de realización, las composiciones farmacéuticas se proporcionan como productos secos solubles estériles, incluyendo polvos liofilizados y comprimidos hipodérmicos que se deben reconstituir con un vehículo estéril antes de usarse. En otro modo de realización distinto, las composiciones farmacéuticas se proporcionan como suspensiones estériles listas para usar. En otro modo de realización distinto, las composiciones farmacéuticas se proporcionan como productos secos insolubles estériles que se deben reconstituir con un vehículo antes de usarse. En un modo de realización adicional, las composiciones farmacéuticas se proporcionan como emulsiones estériles listas para usar.

[0119] Las composiciones farmacéuticas se pueden formular como una suspensión, un líquido sólido, semisólido o tixotrópico, para administración como un depósito implantado. En un modo de realización, las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente memoria se dispersan en una matriz interna sólida, que está rodeada por una membrana polimérica exterior que es insoluble en fluidos corporales, pero que permite que se difunda a través el ingrediente activo en las composiciones farmacéuticas.

[0120] Las matrices internas adecuadas incluyen polimetilmetacrilato, polibutilmetacrilato, cloruro de polivinilo plastificado o no plastificado, nailon plastificado, tereftalato de polietileno plastificado, caucho natural, poliisopreno, poliisobutileno, polibutadieno, polietileno, copolímeros de etilvinilacetato, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, copolímeros de carbonato de silicona, polímeros hidrofílicos, como hidrogeles de ésteres de ácido acrílico y metacrílico, colágeno, alcohol polivinílico reticulado y acetato de polivinilo hidrolizado parcialmente reticulado.

[0121] Otras membranas poliméricas exteriores adecuadas incluyen polietileno, polipropileno, copolímeros de etileno/propileno, copolímeros de etileno/acrilato de etilo, copolímeros de etileno/acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, caucho de neopreno, polietileno clorado, cloruro de polivinilo, copolímeros de cloruro de vinilo con acetato de vinilo, cloruro de vinilideno, etileno y propileno, ionómero de tereftalato de polietileno, cauchos de epiclorhidrina de caucho butílico, copolímero de etileno/alcohol vinílico, terpolímero de etileno/acetato de vinilo/alcohol vinílico y copolímero de etileno/viniloxietanol.

[0122] La composición farmacéutica divulgada en la presente memoria se prepara en una forma de dosificación adaptada para administrarse a un paciente mediante inhalación como, por ejemplo, un polvo seco, un aerosol, una suspensión o una composición en solución. La presente divulgación proporciona una forma de dosificación adaptada para administrarse a un paciente mediante inhalación como un polvo seco. La presente divulgación proporciona una forma de dosificación adaptada para su administración a un paciente mediante inhalación como un polvo seco. Por lo general, para que las composiciones de polvo seco lleguen al pulmón mediante inhalación comprenden un compuesto divulgado en la presente memoria o una sal farmacéuticamente aceptable de este polvo muy fino junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables en forma de polvos muy finos. Los excipientes farmacéuticamente aceptables aptos específicamente para uso en polvos secos son conocidos por los expertos en la materia e incluyen lactosa, almidón, manitol, y mono-, di- y polisacáridos. Se puede preparar polvo muy fino mediante, por ejemplo, micronización y molienda. En general, el compuesto de tamaño reducido (p. ej. micronizado) se puede definir mediante un valor D50 de entre aprox.

1 y aprox. 10 micras (por ejemplo, medido por medio de difracción láser).

[0123] Se pueden formar aerosoles al suspender o disolver un compuesto divulgado en la presente memoria o una sal farmacéuticamente aceptable de este en un propelente licuado. Los propelentes adecuados incluyen halocarbonos, hidrocarburos y otros gases licuados. Los propelentes representativos incluyen: triclorofluorometano (propelente 11), diclorofluorometano (propelente 12), diclorotetrafluoroetano (propelente 114), tetrafluoretano (HFA-134a), 1,1-difluoroetano (HFA-152a), difluorometano (HFA-32), pentafluoroetano (HFA-12), heptafluoropropano (HFA-227a), perfluoropropano, perfluorobutano, perfluoropentano, butano, isobutano y pentano. Por lo general, los aerosoles que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este se administrarán al paciente por medio de un inhalador dosificador (ID). Estos dispositivos son conocidos los expertos en la materia.

[0124] El aerosol puede contener excipientes farmacéuticamente aceptables usados, por lo general, con ID, como tensoactivos, lubrificantes, codisolventes y otros excipientes que mejoran la estabilidad física de la formulación, para mejorar el funcionamiento de la válvula, para mejorar la solubilidad o para mejorar el sabor.

[0125] Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración por vía transdérmica se pueden presentar como parches discretos destinados a permanecer en contacto estrecho con la epidermis del paciente durante un periodo de tiempo prolongado. Por ejemplo, el ingrediente activo se puede liberar del parche mediante iontoforesis, como se describe de forma general en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

[0126] Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administrarse por vía tópica se pueden formular como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, ungüentos, geles, pulverizadores, aerosoles y aceites. Las pomadas, cremas y geles se pueden formular, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición de un agente espesante y/o gelificante y/o disolventes adecuados. Por consiguiente, estas bases pueden, por ejemplo, incluir agua y/o un aceite, como aceite de parafina o un aceite vegetal, como aceite de cacahuete o aceite de ricino, o un disolvente, como polietilenglicol. Los agentes espesantes y gelificantes que se pueden usar de acuerdo con el tipo de base incluyen vaselina, estearato de aluminio, alcohol de cetoestearilo, polietilenglicoles, lanolina, cera de abejas, carboxipolimetileno y derivados de celulosa, y/o monoestearato de glicerilo y/o agentes emulsionantes no iónicos.

[0127] Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y en general también contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizadores, agentes de dispersión, agentes de suspensión o agentes espesantes.

[0128] Cualquier base en polvo adecuada, como talco, lactosa o almidón, puede servir de soporte para la formación de polvos para aplicación externa. Se pueden formular gotas con una base acuosa o no acuosa que comprendan también uno o más agentes de dispersión, agentes solubilizantes, agentes de suspensión o conservantes.

[0129] Los preparados tópicos se pueden administrar por medio de una o más aplicaciones al día en la zona afectada; el uso de vendajes oclusivos sobre zonas de piel puede ser beneficioso. Se puede lograr la administración continuada o prolongada por medio de un sistema de reservorio adhesivo.

USOS DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

[0130] Los compuestos de la invención divulgados en la presente memoria se usan en una cantidad que se puede detectar de forma efectiva para modular la ferroptosis en muestras biológicas o en un trastorno o enfermedad relacionados, en un paciente. Estos usos se pueden incluir en la fabricación de un medicamento para tratar, prevenir, mejorar o mitigar un trastorno o enfermedad en un sujeto, así como otros medicamentos para modular la ferroptosis, y los compuestos de esta invención tienen propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas superiores, menos efectos secundarios tóxicos.

[0131] En concreto, la cantidad del compuesto de la presente invención puede demostrar que modula la ferroptosis de forma detectable y eficaz en muestras biológicas o en un trastorno o una enfermedad relacionados, en un sujeto. Los compuestos de la invención se pueden usar para prevenir, tratar o aliviar enfermedades relacionadas con la ferroptosis en pacientes.

[0132] En un modo de realización, las terapias divulgadas en la presente memoria comprenden la administración de una cantidad segura y eficaz del compuesto de la invención a pacientes que la necesiten. Cada ejemplo divulgado en la presente comprende el método de tratamiento de las enfermedades anteriores que comprende la administración de una cantidad segura y eficaz del compuesto de la invención a pacientes que la necesiten.

[0133] En un modo de realización, el compuesto de la invención se puede administrar por medio de una vía de administración adecuada, incluyendo tanto la administración sistémica como la administración tópica. La administración sistémica incluye la administración por vía oral, la administración por vía parenteral, la administración por vía transdérmica y la administración por vía rectal. La administración por vía parenteral se refiere a vías de administración distintas a la enteral o transdérmica, y por lo general es mediante inyección o infusión. La administración por vía parenteral incluye inyección o infusión intravenosa, intramuscular y subcutánea. La administración por vía tópica incluye la aplicación en la piel, así como la administración por vía intraocular, intravaginal, inhalada e intranasal. En un modo de realización, el compuesto de la invención se puede administrar por vía oral. En otro modo de realización, el compuesto de la invención se puede administrar mediante inhalación. En un modo de realización adicional, el compuesto de la invención se puede administrar por vía intranasal.

[0134] En un modo de realización, el compuesto de la invención se puede administrar una sola vez o según una pauta posológica donde se administran varias dosis en intervalos de tiempo variables durante un periodo de tiempo dado. Por ejemplo, se pueden administrar las dosis una, dos, tres o cuatro veces al día. En un modo de realización, se administra una dosis una vez al día. En un modo de realización adicional, se administra una dosis dos veces al día. Las dosis se pueden administrar hasta que se logre el efecto terapéutico deseado o se mantenga indefinidamente el efecto terapéutico deseado. Las pautas posológicas adecuadas del compuesto de la invención dependen de las propiedades farmacocinéticas de ese compuesto, como su absorción, distribución y, vidas medias del metabolismo y su eliminación, que puede determinar el experto en la materia. Asimismo, las pautas posológicas, incluyendo la duración en que se administran dichas pautas, del compuesto de la invención dependen del trastorno tratado, la gravedad del trastorno tratado, la edad y la condición física del paciente tratado, la historia clínica del paciente que se debe tratar, el tipo de tratamiento concomitante, el efecto terapéutico deseado y los factores similares dentro de los conocimientos y experiencia del experto en la materia. Estos expertos en la materia también comprenderán que las pautas posológicas adecuadas pueden requerir ajustes debido a la tolerancia de cada paciente a la pauta posológica o a lo largo del tiempo según cambian las necesidades de cada paciente.

[0135] Se pueden administrar los compuestos de la presente invención simultáneamente, o antes o después de uno o más agentes terapéuticos distintos. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por separado, o por la misma o diferente vía de administración, o juntos.

[0136] La combinación de la presente invención puede ser una dosis unitaria de 1-1000 mg aprox. de ingredientes activos para un sujeto de 50-70 kg aprox., preferiblemente 1-500 mg aprox. o 1-250 mg aprox. o 1-150 mg aprox. o 0.5 100 mg o 1-50 mg aprox. de ingredientes activos. Una posología terapéuticamente eficaz de un compuesto o las combinaciones de estos, dependen de la especie del sujeto, del peso corporal, la edad y la condición individual, del trastorno o la enfermedad tratados o de la gravedad de estos. Un médico, clínico o veterinario con habilidades básicas en la materia puede determinar fácilmente la cantidad eficaz de cada uno de los ingredientes activos necesarios para prevenir, tratar o inhibir la evolución del trastorno o enfermedad.

[0137] Las propiedades de dosificación anteriormente citadas se pueden correlacionar con ensayos in vitro e in vivo preferentemente con mamíferos, p. ej., ratones, ratas, perros, primates no humanos, como monos, u órganos, tejidos y preparados aislados de estos. Los compuestos de la presente invención se pueden aplicar in vitro en forma de soluciones, p. ej., preferiblemente soluciones acuosas, e in vivo por vía tópica, inhalatoria, enteral o parenteral, preferentemente intravenosa, p. ej., como una suspensión o en una solución acuosa.

[0138] En un modo de realización, una posología terapéuticamente eficaz del compuesto divulgado en la presente memoria es entre 0.1 mg aprox. y 1,000 mg aprox. al día. Las composiciones farmacéuticas deberían proporcionar una dosis de entre 0.1 mg aprox. y 1,000 mg aprox. del compuesto. En un modo de realización en particular, las formas de dosificaciones farmacéuticas unitarias se preparan para proporcionar entre 1 mg aprox. y 1,000 mg aprox., 10 mg aprox. y 500 mg aprox., 20 mg aprox. y 200 mg aprox., 25 mg aprox. y 100 mg aprox., o 30 mg aprox. y 60 mg aprox. del ingrediente activo o de una combinación de ingredientes esenciales por forma de dosificación unitaria. En un modo de realización en particular, las formas de dosificaciones farmacéuticas unitarias se preparan para proporcionar 1 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg, 1000 mg aprox. del ingrediente activo.

MODO DE REALIZACIÓN PREFERIDO DE LA INVENCIÓN

PROCEDIMIENTOS SINTÉTICOS GENERALES

[0139] Se proporcionan los ejemplos siguientes para que la invención se pueda entender por completo.

[0140] En general, los compuestos divulgados en la presente memoria se pueden preparar mediante los métodos descritos en la presente memoria, donde los sustituyentes son como se definen en la fórmula (I) anteriormente, excepto que se indique más adelante. Se presentan los siguientes esquemas y ejemplos no limitativos para ejemplificar aún más la invención.

[0141] Los profesionales expertos en la materia reconocerán que las reacciones químicas descritas se pueden adaptar fácilmente para preparar varios compuestos distintos divulgados en la presente memoria, y se considerarán dentro del alcance divulgado en la presente memoria los métodos alternativos de preparación de los compuestos divulgados en la presente memoria. Los expertos en la materia reconocerán que los materiales de partida pueden variar y que se pueden emplear pasos adicionales para producir compuestos abarcados por las presentes invenciones, como muestran los siguientes ejemplos. En algunos casos, la protección de ciertas funcionalidades reactivas puede ser necesaria para lograr algunas de las transformaciones anteriores. En general, esta necesidad de grupos protectores, así como las condiciones necesarias para unir y eliminar estos grupos quedarán patentes para los expertos en la materia de síntesis orgánica. Por ejemplo, la síntesis de los compuestos no ejemplificados de acuerdo con la invención se puede llevar a cabo con éxito mediante modificaciones evidentes para los expertos en la materia, al proteger de forma adecuada a los grupos interferentes, al utilizar otros reactivos adecuados conocidos en la materia distintos a los descritos, y/o al hacer modificaciones rutinarias de las condiciones de reacción. Alternativamente, se reconocerá que las condiciones de reacción conocidas o la reacción divulgada en la presente invención son de aplicación para la preparación de otros compuestos divulgados aquí.

[0142] En los ejemplos descritos a continuación, a no ser que se indique lo contrario, todas las temperaturas se expresan en grados Celsius. Los reactivos se adquirieron de proveedores comerciales como Aldrich Chemical Company, Arco Chemical Company y Alfa Chemical Company, y se usaron sin mayor purificación, a no ser que se indique lo contrario.

Preparación de compuestos

[0143] Los compuestos de la presente invención, incluyendo sales, ésteres, hidratos o solvatos de estos, se pueden preparar mediante cualquier técnica de síntesis orgánica conocida y se pueden sintetizar por medio de cualquiera de las numerosas rutas sintéticas posibles.

[0144] Se pueden llevar a cabo las reacciones para preparar compuestos de la presente invención en disolventes adecuados, que un experto en la materia de la síntesis orgánica puede seleccionar fácilmente. Los disolventes adecuados pueden ser esencialmente no reactivos con los materiales de partida (reactivos), productos intermedios o productos a las temperaturas en que se llevan a cabo las reacciones, p. ej., las temperaturas que pueden variar entre el punto de congelación del disolvente y el punto de ebullición del disolvente. Se puede llevar a cabo una reacción dada en un disolvente o una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo del paso de reacción concreto, un experto en la materia puede seleccionar los disolventes adecuados para un paso de reacción concreto.

[0145] Se pueden monitorizar las reacciones de acuerdo con cualquier método adecuado conocido en la materia. Por ejemplo, se puede monitorizar la formación del producto mediante medios espectroscópicos, como la espectrometría de resonancia magnética nuclear (p. ej., 1H o 13C), espectroscopia infrarroja, espectrofotometría (p. ej., UV-visible), espectrometría de masas, o mediante métodos cromatográficos como la cromatografía líquida de alta resolución (CLAR), cromatografía líquida-espectroscopia de masas (LC-MS) o cromatografía en capa fina (CCF). Los expertos en la materia pueden purificar compuestos mediante una variedad de métodos, incluyendo la cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) ("Preparative LC -MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization" Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem. 2004, 6(6), 874-883) y la cromatografía en columna a presión atmosférica con gel de sílice. CLAR, cromatografía líquida de alta resolución; J, constante de acoplamiento (en RMN); min, minuto(s); h, hora(s); RMN, resonancia magnética nuclear; prep, preparativa.

[0146] Se pueden sintetizar los compuestos de la presente invención por medio de los métodos descritos a continuación, junto con métodos sintéticos conocidos en la materia de la química orgánica sintética, o variaciones de estos, como entienden los expertos en la materia. Los métodos preferidos incluyen, entre otros, los métodos descritos a continuación. Concretamente, se pueden sintetizar los compuestos de la presente invención de fórmula (I) mediante los siguientes pasos resumidos en los esquemas sintéticos generales ejemplares indicados a continuación, y las abreviaciones de los reactivos o de los grupos químicos de los reactivos incluidos en los esquemas sintéticos se resumen en los ejemplos.

Esquema 1: la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar compuestos de estructura A

[0147] La síntesis hacia la estructura A se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (1, Journal o f the American Chemical Society, 2005, 127, 12460-12461; 2, Organic Letter, 2011, 13, 2318-2321; Journal o f Organic Chemistry, 2010, 75, 941-944), pero no se limita a estos procedimientos divulgados. Los derivados de sulfonamida 1 condensados con el compuesto 2 en presencia de Cp2ZrHCl para dar el compuesto enantiómero 3 , al que se le retiró más adelante el grupo protector y se oxidó hasta el compuesto ácido 4. Con la ayuda de un auxiliar quiral de Evans, se añadió otro centro quiral al compuesto 4 para proporcionar la estructura A .

Esquema 2: la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar compuestos de estructura B.

[0148] La síntesis hacia la estructura B se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (Bulletin o f the Chemical Society o f Japan, 1993, 66, 3113-3115; documento US7528174B2), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Esquema 3: la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar compuestos de estructura C .

oc

[0149] La síntesis hacia la estructura C se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (ACS Central Science, 2016, 2 (9), pp 653-659; Journal o f Medicinal Chemistry, 1986, 959-971; Journal of Medicinal Chemistry, 1984, 27, 684-691), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Esquema 4: la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar compuestos de estructura D.

[0150] La síntesis hacia la estructura D se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (documento US2007161573A1; documento US2009042808A1; Journal o f Medicinal Chemistry, 1984, 27,1351-1354), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Esquema 5: la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar compuestos de estructura E.

[0151] La síntesis hacia la estructura E se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (documento US2007161573A1; documento US2009042808A1; Journal o f the American Chemical Society, 2005, 127, 5742-5743; Journal o f Organic Chemistry, 2004, 69, 7851-7859), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Esquema 6: cuando PEP (véase la definición) de A es valina, la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar los compuestos de estructura F.

[0152] La síntesis hacia la estructura F se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (documento US2007161573A1; Journal o f the American Chemical Society, 2005, 127, 5742-5743; International Journal o f Peptide and Protein Research, 1996; 47, 460-466), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Esquema 7: cuando PEP de A es valina, la siguiente secuencia de reacción se usa para sintetizar los compuestos de estructura H.

[0153] La síntesis hacia la estructura H se puede llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos relevantes divulgados en las referencias (documento US2007161573A1; Journal o f Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007, 320, 1050-1060), pero no se limita a estos procedimientos divulgados.

Preparación y caracterización de compuestos ejemplares

[0154] Los compuestos que abarca la presente divulgación se pueden preparar por medio de diferentes esquemas. A continuación, se describen los procesos de preparación detallados de los compuestos ejemplares por medio de varios esquemas y también se indican los resultados de caracterización.

[0155] A no ser que se indique lo contrario, todos los reactivos se adquirieron de proveedores comerciales sin mayor purificación. Se emplearon métodos normalizados de secado del disolvente cuando fue necesario. Las placas utilizadas para la cromatografía en capa fina (CCF) fueron gel de sílice E. Merck 60F254 (0,24 nm de espesor) prerrevestidas sobre capas de aluminio, y luego visualizadas en luz UV (365 nm y 254 nm) o mediante tinción con un 5 % de ácido dodecamolibdofosforico en etanol y calentamiento posterior. La cromatografía en columna se llevó a cabo con gel de sílice (200-400 malla) de proveedores comerciales. Los espectros de RMN de 1H se registraron en un espectómetro de RMN Agilent 400-MR (400.00 MHz para 1 H) a temperatura ambiente. La señal del disolvente se usó como referencia para la RMN de 1H (CDCl3, 7.26 ppm; CD3^oD, 3.31 ppm; DMSO-CÍ6, 2.50 ppm; D2O, 4.79 ppm). Los siguientes acrónimos y abreviaturas de la RMN se usaron para explicar las multiplicidades: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuarteto, sa = singlete ancho, dd = doble doblete, td = triple doblete, dt = doble triplete, dc = doble cuarteto, m = multiplete.

Ejemplos

[0156] Cabe destacar que los modos de realización de la presente invención descritos en detalle a continuación son ejemplares para explicar la presente invención solamente, y no se deberían interpretar como limitativos del presente alcance de la invención. Se pueden implementar los ejemplos que carecen de una tecnología o condición específica de acuerdo con la tecnología o condición de la literatura de la materia o de acuerdo con las instrucciones del producto. Los reactivos o instrumentos sin fabricantes están disponibles a través de medios de compra convencionales. Los expertos en la materia reconocerán que los materiales de partida pueden variar y que se pueden emplear pasos adicionales para producir compuestos abarcados por las presentes invenciones, como muestran los siguientes ejemplos.

Ejemplo I de referencia

Bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato (I)

[0157]

Paso 1: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)-1-metoxi-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1 -carboxilato (61)

[0158] A una solución del compuesto 60 (1.5 g, 6.97 mmol) y (S)-metil 2-amino-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (2.6 g, 8.37 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (2.7 g, 20.91 mmol) y Ha Tu (3.4 mL, 9.06 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con MgSO₄y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 5 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 61 (1.5 g, 56 %) en forma de una espuma blanca.

[0159] RMN de 1H: (400 MHz, CDCl3) 57.35-7.29 (m, 5 H), 5.08 (s, 2 H), 4.56 (s, 1 H), 4.26 (s, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 3.45 (s, 2 H), 3.21-3.20 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 2.80 (s, 2 H), 1.93-1.86 (m, 2 H), 1.68-1.63 (m, 2 H), 1.53 (m, 2 H), 1.44 (m, 9 H).

Paso 2: síntesis de (S)-metil 5-(((benciloxi)carbonil)amino)-2-((5)-pirrolidina-2-carboxamido)pentanoato (62)

[0160] A una solución del compuesto 61 (1.4 g, 2.93 mmol) en CH₂CI2 (10 mL) a 0 °C se añadió TFA (3.0 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C. Se concentró el disolvente al vacío, y se añadieron CH₂Cl2 (10 mL) y solución acuosa de Na2CO₃al 5 % hasta alcanzar el pH 8-9. La capa acuosa se extrajo con CH₂Ch (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío para dar el producto 62 (980 mg, 91 %) en forma de un producto oleoso.

Paso 2: síntesis de (S)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (63)

[0161] A una solución del compuesto 62 (250 mg, 0.66 mmol) y el compuesto 59 (200 mg, 0.55 mmol, el procedimiento fue de acuerdo con las referencias: 1, Journal of the American Chemical Society, 2005, 127, 12460-12461; 2, Organic Letter, 2011, 13, 2318-2321) en CH₂Ch (50 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (142 mg, 1.10 mmol) y HATU (272 mg, 0.72 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con MgSO₄y se concentró para dar el producto bruto 63 (426 mg, 100 %, bruto) en forma de una espuma blanca que se usó en el siguiente paso sin mayor purificación.

[0162] MS (ESI): [M H+] = 721.9.

Paso 3: síntesis de (S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)ácido pentanoico (64)

[0163] Se trató una solución del compuesto 63 (426 mg, 0.55 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LOH.H₂O (46 mg, 1.10 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron en vacío para obtener el producto 64 (395 mg, 100 %), que se empleó para el siguiente paso sin purificación.

[0164] MS (ESI): [M H+] = 707.9.

Paso 4: síntesis de bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato (65)

[0165] Se trató una solución del compuesto bruto 64 (395 mg, 0.55 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con HATU (274 mg, 0.72 mmol), DIPEA (142 mg, 1.1 mmol) y 4-AT (113 mg, 0.66 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (3 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron. El material bruto se purificó mediante pre-CLAR (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto I (110 mg, 24 %) en forma de un sólido naranja.

[0166] MS (ESI): [M H+] = 860.7.

Ejemplo II de referencia

íerc-Butil ((4S,7S,£)-7-bencil-8-((S)-2-(((R)-1-((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamoil)pirrolidin-1-il)-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il)carbamato (II)

[0167]

Paso 1: síntesis de (5)-ferc-butil 2-(((R)-1-metoxi-3-metiM-oxobutan-2-N)carbamoN)pirroNdma-1-carboxNato (72)

[0168] A una solución del compuesto 71 (4.0 g, 18.58 mmol) y (A)-metil 2-amino-3-metilbutanoato (3.8 g, 22.29 mmol) en CH₂Cl2 (40 mL) a 0°C se añadieron DIPEA (2.8 g, 13 mmol) y HATU (5.6 mL, 33 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con Na₂SO₄y se concentró para dar el producto 72 (5.6 g, 92 %) en forma de un sólido de espuma blanca.

[0169] RMN de 1H: (400 MHz, CDCls) 54.53 (s, 1 H), 4.33 (s, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 3.48 (s, 2 H), 2.14-2.20 (m, 3 H), 1.89 1.86 (t, J = 4.0 Hz, 2 H), 1.47 (s, 9 H), 0.96-0.94 (d, J = 8.0 Hz, 3 H), 0.88-0.89 (d, J = 4.0 Hz, 3 H).

Paso 2: síntesis de (R)-metil 3-metil-2-((S)-pirrolidina-2-carboxamido)butanoato (73)

[0170] A una solución del compuesto 72 (120 mg, 0.37 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadió TFA (1.0 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C. Se concentró el disolvente, y se añadieron CH₂Cl2 (5 mL) y solución de Na2CO3 al 5 % hasta alcanzar el pH 8-9. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con CH₂Ó2 (10 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na₂SO₄y se concentraron para dar el producto 73 (72 mg, 86 %) en forma de un aceite.

Paso 3: síntesis de (R)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanoato (74)

[0171] A una solución del compuesto 73 (85 mg, 0.37 mmol) y el compuesto 9 (110 mg, 0.30 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (80 mg, 0.60 mmol) y HATU (148 mL, 0.39 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con MgSO₄y se concentró para dar el producto bruto 74 (65 mg, 38 %) en forma de una espuma blanca que se usó en el siguiente paso sin mayor purificación.

[0172] MS (ESI): [M H+] = 572.3.

Paso 4: síntesis de (R)-2-((S)-1-((2S, 5S, £)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-7-metiloct-3-enoN)pirroNdma-2-carboxamido)-3-ácido metilbutanoico (75)

[0173] Se trató una solución del compuesto 74 (60 mg, 0.11 mmol) en THF/MeOH = 4/1 (2/0.5 mL) con LiOH.H₂O (6 mg, 0.14 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (10 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secaron con Na2SO₄, y se concentraron para obtener el producto 75 (51.0 mg, 84 %), que se empleó en bruto para la reacción de acoplamiento.

Paso 5: síntesis de terc-butil ((4S,7S,E)-7-bencN-8-((S)-2-(((R)-1-((1-oxN-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-N)ammo)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamoil)pirrolidin-1-il)-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il)carbamato (II)

[0174] Se trató una solución del compuesto bruto 75 (50 mg, 0.09 mmol) en CH₂Cl2 seco (5 mL) a 0 °C con HATU (45 mg, 0.12 mmol), DIPEA (35.0 mg, 0.27 mmol) y 4-amino-TEMPO (30 mg, 0.18 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (10 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 5 : 1 a 1 : 1) para dar el producto II (38 mg, 84 %) en forma de un sólido naranja.

[0175] MS (ESI): [M H+] = 711.5.

Ejemplo III

Metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi) carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoM]pirroMdm-2-M]formamido}-5-({[(1-oxM-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carboml}ammo)pentanoato (III)

[0176]

Paso 1: síntesis de metil 2-amino-5-({[(9H-fluoren-9-il)metoxi] carbonil} amino)pentanoato (82)

[0177] Se trató una solución del compuesto 81 (1 g, 2.2 mmol) en metanol (10 mL) a 0 °C con SOCl2 (530 mg, 4.4 mmol), y se agitó la mezcla a 25 °C durante 16 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida para dar un producto sólido marrón 82 (800 mg, 98 %).

[0178] MS (ESI): [M H+] = 369.0.

Paso 2: síntesis de terc-butil (2S)-2-{[5-({[(9H-fluoren-9-il)metoxi]carbonil} amino)-1-metoxi-1-oxopentan-2-il]carbamoil}pirrolidina-1 -carboxilato (83)

[0179] A la solución del compuesto 82 (800 mg, 2.2 mmol) en CH₂Ch (20 mL) a 0 °C se añadieron Boc-Pro-OH (710 mg, 3.3 mmol) y DIPEA (0.55 mL, 3.3 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 2.0 mL, 3.3 mmol) lentamente a 0 °C, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución de Na2CO₃al 5 %, se secó con MgSO₄, y se concentró al vacío para dar un producto sólido de espuma 83 (750 mg, 63 %).

[0180] MS (ESI): [M H+] = 566.3.

Paso 3: síntesis de metil 5-({[(9H-fluoren-9-N)metoxi]carbonN}amino)-2-{[(2S)-pirroNdm-2-il]formamido}pentanoato (84)

[0181] Al compuesto 83 (750 mg, 1.3 mmol) a 0 °C se añadieron HCl en MeOH (4 M, 4 mL, 16 mmol) y CH₂CI2 (10 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C cuando se usó LC-MS para monitorizar el progreso de la reacción. Se concentró el disolvente en vacío para dar el producto de amina desprotegida 84 (600 mg, 100 %).

[0182] MS (ESI): [M H+] = 466.3.

Paso 4: síntesis de metil 2-[[(2S)-1-[(2R,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi) carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(9H-fluoren-9-il)metoxi]carbonil}amino)pentanoato (85)

[0183] A una solución del compuesto 84 (600 mg, 1.3 mmol) y el producto intermedio 59 (0.2 g, 0.6 mmol) suspendido en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (0.4 mL, 2 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 0.9 mL, 1 mmol) lentamente a 0 °C, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 18 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO3 al 5 % (10 mL) y agua (20 mL), y la capa orgánica se secó con MgSO₄y se concentró al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice con disolvente de elución, éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3 para obtener un producto oleoso 85 (210 mg, 43 %).

[0184] MS (ESI): [M H+] = 809.6.

Paso 5: síntesis de metil 5-amino-2-{[(2S)-1-[(2R,3E,5S)-2-bencN-5-{[(ferc-butoxi)carbonM]ammol-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido} pentanoato (86)

[0185] A una solución del compuesto 85 (210 mg, 0.26 mmol) en 10 mL de DMF se añadió Et3N (1 mL, 7.5 mmol), la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El producto bruto 86 no se purificó y se usó directamente en el siguiente paso.

[0186] MS (ESI): [M H+] = 587.3.

Paso 6: síntesis de metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi) carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carboniMamino)pentanoato (87)

[0187] Se trató una solución de 4-hidroxi-TEMPO (180 mg, 1.04 mmol) en 5 mL de DMF con N, N'-carbonato de disuccinimidilo (77) (260 mg, 1.04 mmol) y piridina (200 μL, 0.2 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 40 °C durante 16 horas. La solución se enfrío hasta alcanzar la temperatura ambiente y el compuesto 78 se usó directamente en el siguiente paso.

[0188] A una solución del 86 (bruto del paso previo) en 10 mL de DMF se añadió el producto intermedio 78. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 16 h, se usó LC-MS para monitorizar el progreso de la reacción. La reacción se apagó con agua (10 mL) y se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), la fase orgánica combinada se lavó con agua (3 * 20 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL) y se secó con Na2SO4, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un residuo bruto y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar un producto sólido amarillo III (8 mg, 4 %, en dos pasos).

[0189] MS (ESI): [M H+] = 785.6.

Ejemplo IV de referencia

Bencil N-[(4S)-4-[(2E)-2-([(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencN-5-{[(ferc-butoxi)carbonN]ammo}-7-metiloct-3-enoN]pirroNdm-2-il]formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil] carbamato (IV)

[0190]

Paso 1: síntesis de (R)-2-((S)-1-(terc-butoxicarboml)pirrolidina-2-carboxamido)-3-ácido metilbutanoico (92)

[0191] Se trató una solución del compuesto 91 (2.0 g, 6.1 mmol) en THF/MeOH = 4 : 1 (10/2.5 mL) con LiOH.HzO (384 mg, 9.14 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secaron con Na₂SO₄, y se concentraron para obtener el producto 92 (1.8 g, 95 %) como una espuma blanca que se empleó para la siguiente reacción de acoplamiento.

Paso 2: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((R)-1-(((S)-5-(((benciloxi)carboml)ammo)-1-metoxM-oxopentan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (94)

[0192] A una solución del compuesto 92 (1.5 g, 4.77 mmol) y el compuesto 93 (1.8 g, 5.73 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (1.8 g, 14.31 mmol) y HATU (2.4 mL, 6.20 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con MgSO₄y se concentró para dar el producto bruto 94 (1.2 g, 45 %) en forma de una espuma blanca.

[0193] RMN de 1H: (400 MHz, CDCls) 57.35-7.30 (m, 5 H), 5.08 (s, 3 H), 4.55-4.54 (d, J = 4.0 Hz,1 H), 4.30-4.26 (t, J = 8.0 Hz,2 H), 3.72 (s, 3 H), 3.47 (s, 3 H), 3.21-3.18 (t, J = 4.0 Hz,2 H), 2.80 (s, 1 H), 1.89-1.71 (m, 3 H), 1.54 (s, 2 H), 1.54 1.52 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 1.45 (s, 9 H), 1.27-1.24 (m, 2 H), 0.98-0.90 (m, 6 H).

Paso 3: síntesis de (S)-metil 5-(((benciloxi)carboml)ammo)-2-((R)-3-metil-2-((S)-pirrolidma-2-carboxamido)butanamido)pentanoato (95)

[0194] A una solución del compuesto 94 (1.2 g, 2.08 mmol) en CH₂Cl2 (9 mL) a 0 °C se añadió TFA (3.0 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C. Se concentró el disolvente en vacío, y se añadieron CH₂Cl2 (10 mL) y solución acuosa de Na2CO3 al 5 % hasta alcanzar el pH 8-9. La capa acuosa se extrajo con CH₂Cl2 (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con Na2SO₄y se concentró al vacío para dar el producto 95 (970 mg, 98 %) en forma de una espuma blanca.

[0195] MS (ESI): [M H+] = 477.6.

Paso 4: síntesis de (S)-metil 2-((R)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (97)

[0196] A una solución del compuesto 95 (314 mg, 0.66 mmol) y el compuesto 59 (200 mg, 0.55 mmol) en CH₂CI2 (5 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (142 mg, 1.1 mmol) y HATU (274 mL, 0.72 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL), se secó con MgSO₄y se concentró al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice con el disolvente de elución éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3 para dar el producto 97 (106 mg, 50 %) en forma de una espuma blanca.

[0197] MS (ESI): [M H+] = 820.7.

Paso 5: síntesis de (S)-2-((R)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((íerc-butoxicarbonM)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)ácido pentaoico (98)

[0198] Se trató una solución del compuesto 97 (465 mg, 0.55 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LOH.H₂O (462 mg, 1.10 mmol en 0.5 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron al vacío para obtener el producto 98 (380 mg, 86 %), que se empleó para la reacción de acoplamiento.

[0199] MS (ESI): [M H+] = 806.6.

Paso 6: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencN-5-{[(íerc-butoxi)carbonN]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (99)

[0200] Se trató una solución del compuesto en bruto 98 (380 mg, 0.47 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con HATU (232 mg, 0.61 mmol), DIPEA (121.0 mg, 0.94 mmol) y 4-AT (97 mg, 0.57 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La mezcla se extrajo con CH₂Ch (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron al vacío. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 99 (83.0 mg, 18 %) en forma de un sólido naranja.

[0201] MS (ESI): [M H+] = 959.7.

Paso 7: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencN-5-{[(íerc-butoxi)carbonN]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-3-metilbutanamido] -4- [(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (IV)

[0202] A una solución del compuesto 99 (30 mg, 0.03 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (6 mg, 0.03 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto IV (29 mg, 93 %) en forma de un sólido blanco.

[0203] MS (ESI): [M H+] = 960.6.

[0204] RMN de 1H: (400 MHz, CDCla) 88.12-7.96 (m, 5 H), 7.34-7.16 (m, 10 H), 5.43-5.32 (m, 3 H), 5.00 (s, 3 H), 4.30 4.12 (m, 6 H), 2.99-2.92 (m, 4 H), 2.62-2.50 (m, 3 H), 1.97-1.91 (m, 13 H), 1.42-1.23 (m, 21 H), 0.86-0.71 (m, 14 H).

Ejemplo V de referencia

Bencil N-[(4R)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (V)

[0205]

Paso 1: síntesis de (R)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (106)

[0206] A una solución del compuesto 62 (520 mg, 1.38 mmol) y el compuesto 59 (398.0 mg, 1.10 mmol) en CH₂CI2 (10 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (356 mg, 2.76 mmol) y HATU (682 mL, 1.79 mmol), y se agitó durante 3 h a 25 °C. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NHaCl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL), se secó con Na₂SO₄y se concentró al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice con el disolvente de elución éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3 para dar el producto bruto 106 (830 mg en bruto, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0207] MS (ESI): [M H+] = 721.9.

Paso 2: síntesis de (R)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)ácido pentanoico (107)

[0208] Se trató una solución del compuesto 106 (830 mg, 1.10 mmol) en THF/MeOH = (10/2.5 mL) con LiOH.H₂O (56 mg, 1.32 mmol en 0.5 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, entonces el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron al vacío para obtener el producto 107 (730 mg, 94 %), que se empleó para la reacción de acoplamiento.

[0209] MS (ESI): [M H+] = 707.0.

Paso 3: síntesis de bencil N-[(4R)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-oxi¡-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (108)

[0210] Se trató una solución del compuesto bruto 107 (730 mg, 1.03 mmol) en CH₂Cl2 seco (5 mL) a 0 °C con HATU (509 mg, 1.34 mmol), DIPEA (266 mg, 2.06 mmol) y 4-^aT (212 mg, 1.24 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (2 * 10 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con Na₂SO₄y se concentraron. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 108 (160 mg, 18 %) en forma de un sólido naranja.

[0211] MS (ESI): [M H+] = 860.6.

Paso 4: síntesis de bencil N-[(4R)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato (V)

[0212] A una solución del compuesto 108 (152 mg, 0.18 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (32 mg, 0.18 mmol). Tras agitar a 25 °C durante 1 h, el disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto V (90 mg, 59 %) en forma de un sólido blanco.

[0213] RMN de 1H: (400 MHz, CDCls) 57.28-7.08 (m, 10 H), 5.57-5.52 (m, 1 H), 5.41-5.39 (m, 1 H), 5.09-5.01 (m, 2 H), 4.21 (s, 1 H), 4.16 (s, 2 H), 4.00 (s, 1 H), 3.50 (s, 1 H), 3.35 (s, 1 H), 3.33-3.12 (m, 3 H), 2.67 (s, 1 H), 2.15-1.71 (m, 18 H), 1.55-1.19 (m, 24 H), 0.80-0.79 (d, J = 4.0 Hz, 6 H).

[0214] MS (ESI): [M H+] = 861.9.

Ejemplo VI de referencia

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2R)-2-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (VI)

[0215]

Paso 1: síntesis de (R)-metil 1-((2S,5SE)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-carboxilato (113)

[0216] A una solución del compuesto 111 (165.0 mg, 1.0 mmol) y el compuesto 59 (300 mg, 0.83 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (268 mg, 2.08 mmol) y HATU (410 mL, 1.08 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con MgSO₄y se concentró en vacío para dar el producto bruto 113 (410 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca que se usó en el siguiente paso sin mayor purificación.

[0217] MS (ESI): [M H+] = 473.6.

Paso 2: síntesis de (R)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-ácido carboxílico (114)

[0218] Se trató una solución del compuesto 113 (410 mg, 0.83 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con UOH.H₂O (42 mg, 1.0 mmol, en 0.5 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, entonces el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron al vacío para obtener el producto 114 (390 mg, 100 %), que se empleó sin purificación para la reacción de acoplamiento.

[0219] MS (ESI): [M H+] = 459.

Paso 3: síntesis de terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencN-8-[(2E)-2-[(1-oxN-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (115)

[0220] Se trató una solución del compuesto en bruto 114 (390 mg, 0.83 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con HATU (410 mg, 1.08 mmol), DIPEA (268 mg, 2.08 mmol) y 4-AT (172 mg, 1.00 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron al vacío. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 115 (150 mg, 30%) en forma de un sólido naranja.

[0221] MS (ESI): [M H+] = 612.5.

Paso 4: síntesis de terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencN-8-[(2E)-2-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (VI)

[0222] A una solución del compuesto 115 (150 mg, 0.25 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (43 mg, 0.25 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, se eliminó el disolvente al vacío. El residuo resultante se disolvió en CH₂Ch (10 mL) y se lavó con agua. El residuo se purificó mediante pre-CLAR (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto VI (91 mg, 60 %) en forma de un sólido blanco.

[0223] RMN de 1H: (400 MHz, CDCla) 87.30-7.03 (m, 4 H), 5.63-5.57 (m, 1 H), 5.37-5.32 (m, 1 H), 4.50-4.48 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.40 (s, 1 H), 4.15-4.14 (m, 2 H), 3.50-3.43 (m, 3 H), 3.15-2.78 (m, 5 H), 2.07 (s, 1 H), 2.82 (s, 1 H), 1.58-1.25 (m, 30 H), 0.88-0.87 (d, J = 4.0 Hz, 6 H).

[0224] MS (ESI): [M H+] = 613.6.

Ejemplo VII de referencia

Bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2R)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoN]pirrolidm-2-il]formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (VII)

[0225]

Paso 1: síntesis de (S)-2-((R)-1-(terc-butoxicarboml)pirrolidma-2-carboxamido)-3-ácido metilbutanoico (122)

[0226] Se trató una solución del compuesto 121 (6.8 g, 18.58 mmol) en THF/MeOH = 4 : 1 (40 mL) con L¡OH.H₂O acuoso (940 mg, 22.30 mmol) en agua (2 mL). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, entonces el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secaron con Na₂SO₄, y se concentraron para obtener el producto 122 (4.6 g, 79 %) como una espuma blanca que se empleó para la reacción de acoplamiento.

[0227] MS (ESI): [M H+] = 314.9.

Paso 2: síntesis de (R)-terc-butil 2-(((S)-1-(((S)-5-(((benciloxi)carboml)ammo)-1-metoxi-1-oxopentan-2-il)ammo)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (124)

[0228] A una solución del compuesto 122 (2.0 g, 6.37 mmol) y el compuesto 123 (2.4 g, 7.64 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (2.1 g, 15.93 mmol) y HATU (3.1 mL, 8.28 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con MgSO₄y se concentró al vacío para dar el producto bruto 124 (2.2 g, 61 %) en forma de una espuma blanca que se usó en el siguiente paso sin mayor purificación.

[0229] MS (ESI): [M H+] = 577.7.

Paso 3: síntesis de (S)-metil 5-(((benciloxi)carbonil)amino)-2-((S)-3-metil-2-((R)-pirrolidina-2-carboxamido)butanamido)pentanoato (125)

[0230] A una solución del compuesto 124 (2.2 g, 3.82 mmol) en CH₂Cl2 (12 mL) a 0 °C se añadió TFA (3.0 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C. Se concentró el disolvente al vacío, y se añadieron CH₂Cl2 (10 mL) y solución acuosa de Na₂CO₃al 5% hasta alcanzar el pH 8-9. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con CH₂Cl2 (20 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO₄y se concentraron para dar el producto 125 (314 mg, 72 %) en forma de una espuma blanca.

[0231] MS (ESI): [M H+] = 477.6.

Paso 4: síntesis de (S)-metil 2-((R)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (126)

[0232] A una solución del compuesto 125 (314 mg, 0.66 mmol) y el compuesto 59 (200 mg, 0.55 mmol) en CH₂Cl₂(5 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (142 mg, 1.1 mmol) y HATU (274 mL, 0.72 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4O (20 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL), se secó con MgSO₄y se concentró al vacío. Los residuos se purificaron mediante gel de sílice en cromatografía en columna con disolvente de elución, éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3) para dar el producto bruto 126 (460 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0233] MS (ESI): [M H+] = 820.7.

Paso 5: síntesis de (S)-2-((S)-2-((R)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)ácido pentanoico (127)

[0234] Se trató una solución del compuesto 126 (460 mg, 0.55 mmol) en THF/MeOH (4.0/2.0 mL) con LiOHH₂O (56 mg, 1.10 mmol, en 0.5 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, entonces el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron para obtener el producto 127 (370 mg, 84 %), que se empleó para la siguiente reacción de acoplamiento.

[0235] MS (ESI): [M H+] = 806.6.

Paso 6: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2E)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonil] amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametipiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (128)

[0236] Se trató una solución del compuesto bruto 127 (370 mg, 0.46 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con HATU (227 mg, 0.60 mmol), DIPEA (119 mg, 0.92 mmol) y 4-AT (94 mg, 0.55 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (10 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron en vacío. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 128 (81 mg, 18 %) en forma de un sólido naranja.

[0237] MS (ESI): [M H+] = 959.8.

Paso 7: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2E)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-3-metilbutanamido] -4- [(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (VII)

[0238] A una solución del compuesto 128 (76 mg, 0.08 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (14 mg, 0.08 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, se eliminó el disolvente al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto VII (32 mg, 42 %) en forma de un sólido blanco.

[0239] RMN de 1H: (400 MHz, CDCla) 87.57-7.03 (m, 8 H), 5.74 (m, 2 H), 5.09-5.07 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 4.40-3.08 (m, 14 H), 2.75-2.04 (m, 16 H), 1.75-1.0 (m, 39 H).

[0240] MS (ESI): [M H+] = 960.7.

Ejemplo VIII de referencia

1-Oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-{[(benciloxi)carbonil]amino}-1-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (VIII)

[0241]

Paso 1: síntesis de bencil ((S)-4-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,£)-5-ammo-2-bencil-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)ammo)-5-oxopentil)carbamato (132) [0242] A una solución del compuesto 131 (200 mg, 0.21 mmol, la síntesis del proceso fue de acuerdo con el Journal of the American Chemical Society, 2005, 127, 12460-12461) en ^cH₂Cl₂(5 mL) a 0 °C se añadió TFA (0.2 mL). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 1 h a 25 °C. Se concentró el disolvente, y se añadieron CH₂Cl2 (5 mL) y solución acuosa de Na₂CO₃al 5 % hasta alcanzar el pH 8-9. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con CH₂Cl2 (20 mL). Las orgánicas combinadas se secaron con Na₂SO₄y se concentraron en vacío para dar el producto 132 (176 mg, 97 %) en forma de un aceite rojo.

Paso 2: síntesis de 1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-{[(benciloxi)carbonil]amino}-1 -[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (VIII)

[0243] A una solución agitada del compuesto 132 (176 mg, 0.2 mmol) y el compuesto 78 (68.5 mg, 0.25 mmol) en DMF (5.0 mL) se añadió K^bP04.3H20 (66.5 mg, 0.25 mmol). La mezcla se agitó luego a 25 °C durante 16 h. La reacción se apagó con agua (10 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con Na₂SO₄y se concentró en vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 2 : 1 a 1 : 10) para dar el producto VIII (106 mg, 50 %) en forma de un sólido rojo amarronado.

[0244] MS (ESI): [M H+] = 1058.0.

Ejemplo IX de referencia

Bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (IX)

[0245]

Paso 1: síntesis de bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3£,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato (IX)

[0246] A una solución del compuesto I (85 mg, 0.10 mmol) en MeOH seco (3 mL) Se añadió Vc (17 mg, 0.10 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, se eliminó el disolvente al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto IX (47 mg, 55 %) en forma de un sólido blanco.

[0247] RMN de 1H: (400 MHz, CDCls) 57.27-7.07 (m, 10 H), 5.55-5.46 (m, 1 H), 5.35 (s, 1 H), 5.25-5.22 (m, 1 H), 5.01 (s, 2 H), 4.3-4.23 (m, 3 H), 3.63 (s, 1 H), 3.44 (s, 1 H), 3.31 (s, 1 H), 3.30 (s, 1 H), 3.09-3.06 (m, 4 H), 2.47 (s, 1 H), 2.10 (s, 8 H), 1.94 (s, 2 H), 1.84-1.47 (m, 6 H), 1.42-1.10 (m, 23 H), 0.81-0.75 (m, 6 H).

[0248] MS (ESI): [M H+] = 861,7.

Ejemplo X de referencia

Ciclopropilmetil N-[(4S,5£,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1K)-1-{[(1S)-4-{[(benciloxi)carboml]ammo} -1- [(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (X)

[0249]

Paso 1: síntesis de bencil ((S)-4-((ft)-2-((S)-1-((2S,5S,£)-5-ammo-2-bencil-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)-5-oxopentil)carbamato (132)

[0250] A una solución del compuesto 131 (200 mg, 0.21 mmol) en CH₂Cl₂(3 mL) a 0 °C se añadió TFA (1.0 mL). La solución resultante se agitó 10 min a 0 °C, y 3 h a 25 °C. Se concentró el disolvente al vacío, y se añadieron CH₂Ch (10 mL) y solución acuosa de Na₂CO₃al 5% hasta alcanzar el pH 8-9. Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con CH₂Cl2(10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (2 * 10 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró para dar el producto 136 (171 mg, 95 %) en forma de una espuma roja.

Paso 2: síntesis de ciclopropilmetil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1R)-1-{[(1S)-4-{[(benciloxi)carboml]ammo} -1- [(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (138)

[0251] A una solución del compuesto 136 (171 mg, 0.20 mmol) y el compuesto 137 (51 mg, 0.24 mmol, la síntesis del procedimiento fue de acuerdo con el ejemplo del compuesto 78) en DMF (5.0 mL) a 25 °C se añadió K3PO₄.3H₂O (64.0 mg, 0.24 mmol). La mezcla de la reacción se agitó durante 16 h a 25 °C. La mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (10 mL) y agua (10 mL) La fase orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 138 (76 mg, 40 %) en forma de una espuma roja amarronada.

[0252] MS (ESI): [M H+] = 957.9.

Paso 3: síntesis de ciclopropilmetil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1R)-1-{[(1S)-4-{[(benxiloxi)carboml]amino}-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (X)

[0253] A una solución del compuesto 138 (74 mg, 0.08 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (14 mg, 0.08 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, se eliminó el disolvente al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto X (30 mg, 41 %) en forma de un sólido blanco.

[0254] RMN de 1H: (400 MHz, CDCla) 88.13 (s,1 H), 7.32-7.06 (m, 10 H), 6.76-6.75 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 5.47-5.34 (m, 3 H), 5.04 (m, 2 H), 4.45-3.78 (m, 8 H), 3.38-3.07 (m, 6 H), 2.16-1.81 (m, 19 H), 1.45-0.54 (m, 25 H), 0.61 (s, 2 H), 0.26 (s, 2 H).

[0255] MS (ESI): [M H+] = 959.3.

Ejemplo XI de referencia

Bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S)-1-[(2R,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidina-2-carbonil] pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato(XI)

[0256]

Paso 1: síntesis de ferc-butil (2S)-2-[(2S)-2-{[(2S)-5-{[(benciloxi)carboml] amino}-1-metoxi-1-oxopentan-2-il]carbamoil}pirrolidina-1-carbonil] pirrolidina -1-carboxilato (144)

[0257] A la solución del aminocompuesto 62 (1.8 g, 4.4 mmol) en CH₂CI2 (20 mL) a 0 °C se añadieron Boc-Pro-OH (1.4 g, 6.6 mmol) y DIPEA (1.2 mL, 6.6 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 3.7 mL, 6.6 mmol) lentamente a 0 °C, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO3 al 5 % (20 mL), se secó con MgSO₄, y se concentró en vacío para dar un producto oleoso 144 (2.2 g, 87 %).

[0258] MS (ESI): [M H+] = 575.3.

Paso 2: síntesis de metil (2S)-5-{[(bencNoxi)carboml]ammo}-2-{[(2S)-1-[(2S)-pirroNdma-2-carboml]pirroNdm-2-il]formamido}pentanoato (145)

[0259] A una solución del compuesto 144 (2.2 g, 3.8 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) a 0 °C se añadió HCl en MeOH (4 M, 10 mL, 40 mmol). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 2 h a 25 °C cuando se usó LC-MS para monitorizar el progreso de la reacción. Se concentró el disolvente en vacío para dar el producto de amina desprotegida 145 (1.9 g, 90 %).

[0260] MS (ESI): [M H+] = 475.2.

Paso 3: síntesis de metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S)-1-[(2ft, 3E, 5S)-2-bencN-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidina-2-carbonil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}pentanoato (146)

[0261] A una solución del compuesto 145 (0.5 g, 1.0 mmol) y el producto intermedio 59 (0.2 g, 0.6 mmol) suspendido en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (0.4 mL, 2 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 0.9 mL, 1 mmol) lentamente a 0 °C, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 18 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na₂CO₃al 5 % (10 mL) y agua (10 mL), y la capa orgánica se secó con MgSO₄y se concentró en vacío. El semisólido residual se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice con el disolvente de elución éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3 para obtener el producto 146 (160 mg, 32 %).

[0262] MS (ESI): [M H+] = 818.5.

Paso 4: síntesis de (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S)-1-[(2E,3E,5S)-2-bencN-5-{[(íerc-butoxi) carbonM]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidina-2-carbonil]pirrolidin-2-il] formamido}-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}ácido pentanoico (147) [0263] Se trató una solución del compuesto 146 (160 mg, 0.20 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LiOHHzO (10 mg, 0.22 mmol, en 0.2 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 4 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3-4. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron en vacío para obtener el producto oleoso 147 (120 mg, 75 %).

[0264] MS (ESI): [M H+] = 804.5.

Paso 5: síntesis de bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S)-1-[(2R,3E,5S)-2-bencN-5-{[(ferc-butoxi)carbonM]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidina-2-carbonil] pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-Oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbamoil]butil]carbamato (148)

[0265] Se trató una solución del compuesto bruto 147 (120 mg, 0.15 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con HATU (60 mg, 0.15 mmol), DIPEA (25 mg, 0.18 mmol) y 4-AT (30 mg, 0.18 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 16 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). Se separó la capa acuosa y se extrajo con CH₂Cl2 (20 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron en vacío. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 148 (80 mg, 56 %) en forma de un sólido naranja.

[0266] MS (ESI): [M H+] = 957.7.

Paso 6: síntesis de bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S)-1-[(2R,3E,5S)-2-bencN-5-{[(ferc-butoxi)carbonN]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidina-2-carbonil] pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (XI)

[0267] A una solución del compuesto 148 (80 mg, 0.08 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (15 mg, 0.08 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 60 min, se eliminó el disolvente al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XI (15 mg, 19 %) en forma de un sólido blanco.

[0268] RMN de 1H: (400MHz, CDCla) 87.35-7.20 (m, 7 H), 7.20-7.10 (m, 5 H), 5.6-5.30 (m, 2 H), 5.1-4.9 (m, 2 H), 4.6 4.3 (m, 4 H), 3.4-3.2 (m, 6 H), 2.4-1.8 (m, 8 H), 1.8-1.6 (m, 14 H), 1.6-1.2 (m, 22 H), 0.8-0.6 (m, 8 H).

[0269] MS (ESI): [M H+] = 958.8.

Ejemplo XII de referencia

Bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2E,3E, 5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-2-ciclopropilacetamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbamoil] butil]carbamato (XII)

[0270]

Debería ser DIPEA no DIPEA; define EDCI y HOBt en la lista de abreviaturas

Paso 1: síntesis de metil (2S)-5-{[(bencMoxi)carboml]ammo}-2-[(2S)-2-{[(ferc-butoxi)carbonM]ammo}-2-ciclopropilacetamido]pentanoato (152)

[0271] A una solución de Orn(Z)-OMe (151) (1.5 g, 4.7 mmol) y (S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-2-ácido cidopropilacético (1.0 g, 4.7 mmol) suspendido en CH₂Ch (20 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (1.0 mL, 6 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 4 mL, 6.0 mmol) lentamente a 0 °C, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na₂CO₃al 5 % (10 mL) y agua (2 x 10 mL), y la capa orgánica se secó con MgSO₄y se concentró en vacío. Los semisólidos residuales se convierten en una sustancia seca similar al cemento 152 (1.5 g, 68 %).

[0272] MS (ESI): [M H+] = 478.1.

Paso 2: síntesis de metil (25)-2-[(25)-2-amino-2-ciclopropilacetamido]-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}pentanoato (153)

[0273] A una solución del compuesto 152 (1.5 g, 3.0 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) a 0 °C se añadió HCl en MeOH (4 M, 5 mL, 20 mmol). La solución resultante se agitó durante 10 min a 0 °C, y 2 h a 25 °C cuando se usó LC-MS para monitorizar el progreso de la reacción. Se concentró el disolvente en vacío para dar el producto de amina desprotegida 153 (1.0 g, 83 %).

[0274] MS (ESI): [M H+] = 378.0.

Paso 3: síntesis de terc-butil (2S)-2-{[(S)-{[(2S)-5-{[(benciloxi)carbonil] amino}-1-metoxi-1-oxopentan-2-il]carbamoil}(ciclopropil) metil]carbamoil} pirrolidina-1-carboxilato (154)

[0275] A la solución del compuesto amina 153 (1.0 g, 2.6 mmol) en CH₂CI2 (20 mL) a 0 °C se añadieron Boc-Pro-OH (840 mg, 3.9 mmol) y DIPEA (0.64 mL, 3.9 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 2.2 mL, 3.9 mmol) lentamente, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO3 al 5 % (10 mL), se secó con MgSO₄, y se concentró en vacío para dar un producto sólido de espuma 154 (1.1 g, 90 %).

[0276] MS (ESI): [M H+] = 575.3.

Paso 4: síntesis de metil (2S)-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}-2-[(2S)-2-ciclopropil-2-{[(2S)-pirrolidin-2-il] formamido} acetamido] pentanoato (155)

[0277] A una solución del compuesto 154 (1.1 g, 1.9 mmol) en CH₂Ch (10 mL) a 0 °C se añadió HCl en MeOH (4 M, 5 mL, 20 mmol). La solución resultante se agitó 10 min a 0 °C, y 2 h a 25 °C cuando se usó LC-MS para monitorizar el progreso de la reacción. Se concentró el disolvente en vacío para dar el producto de amina desprotegida 155 (0.8 g, 89 %).

[0278] MS (ESI): [M H+] = 475.3.

Paso 5: síntesis de metil (2S)-2-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2E,3E,5S)-2-bencN-5-{[(terc-butoxi)carbonM]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-2-ciclopropilacetamido] -5- {[(benciloxi)carbonil]amino}pentanoato (156)

[0279] A una solución del compuesto 155 (0.5 g, 1.0 mmol) y el producto intermedio 59 (0.2 g, 0.6 mmol) suspendido en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (0.4 mL, 2 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 0.9 mL, 1 mmol) lentamente, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 18 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO3 al 5 % (10 mL) y agua (2 * 10 mL), y la capa orgánica se secó con MgSO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice con disolvente de eluciónéter de petróleo/EtOAc = 1 : 3, para obtener un producto oleoso 156 (120 mg, 24 %).

[0280] MS (ESI): [M H+] = 818.5.

Paso 6: síntesis de (2S)-2-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2E,3E,5S)-2-bencN-5-{[(terc-butoxi)carbonM] amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il] formamido}-2-ciclopropilacetamido]-5-{[(benciloxi)carbonil] amino} ácido pentanoico (157)

[0281] Se trató una solución del compuesto 156 (120 mg, 0.15 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LOH.H₂O (10 mg, 0.22 mmol, en 0.2 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 4 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3-4. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron en vacío para obtener el producto oleoso 157 (100 mg, 83 %).

[0282] MS (ESI): [M H+] = 804.5.

Paso 7: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2E,3E,5S)-2-bencN-5-{[(terc-butoxi)carbonM] amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-2-ciclopropilacetamido]-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (158)

[0283] Se trató una solución del compuesto bruto 157 (100 mg, 0.12 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con EDCI (35 mg, 0.18 mmol), HOBt (25 mg, 0.18 mmol), DIEA (25 mg, 0.18 mmol) y 4-AT (30 mg, 0.18 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 16 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Ch (20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron. El material en bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 158 (30 mg, 26 %) en forma de un sólido naranja.

[0284] MS (ESI): [M H+] = 957.7.

Paso 8: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2ft,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-2-cidopropilacetamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbamoil] butil]carbamato (XII)

[0285] A una solución del compuesto 158 (30 mg, 0.03 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (10 mg, 0.05 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 60 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante pre-CLAR (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XII (4 mg, 13 %) en forma de un sólido blanco.

[0286] RMN de 1H: (400MHz, CDCls) 57.35-7.20 (m, 7 H), 7.20-7.10 (m, 5 H), 5.62-5.30 (m, 2 H), 5.15-4.91 (m, 2 H), 4.6- 4.3 (m, 4 H), 3.40-3.2 (m, 6 H), 2.41-1.82 (m, 8 H), 1.80-1.65 (m, 14 H), 1.60-1.20 (m, 22 H), 0.88-0.61 (m, 8 H).

[0287] MS (ESI): [M H+] = 958.8.

Ejemplo XIII de referencia

Bencil N-[(4ft)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-amino-2-bencil-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2.2.6.6- tetrametil-piperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato diclorhidrato (XIII)

[0288]

Paso 1: síntesis de bencil N-[(4ft)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-amino-2-bencil-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-piperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato diclorhidrato (XÜI)

[0289] A una solución del compuesto V (20 mg, 0.02 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) se añadió HCl en MeOH (5 mL, 3M) y se agitó a 25 °C durante 1 h. Se eliminó el disolvente y se purificó mediante CL^aR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XIII (4.6 mg, 31 %) en forma de un sólido blanco.

[0290] MS (ESI): [M H+] = 761.6.

Ejemplo XIV de referencia

Bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E, 5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonil]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido} propanamido]-4-[(1 -hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil] carbamato (XIV)

[0291]

Define HOBt y EDCI en la lista de abreviaturas

Paso 1: síntesis de metil (2S)-2-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido} propanamido]-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}pentanoato (163)

[0292] A una solución del compuesto 161 (465 mg, 0.96 mmol, el procedimiento fue de acuerdo con el Journal o f the American Chemical Society, 2005, 127, 12460-12461) y el compuesto 59 (290 mg, 0.80 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron HOBt (130.0 mg), ^eD^cI (185.0 mg, 0.96 mmol) y TEA (242.0 mg, 0.96 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con HCl acuoso (1M, 5 mL), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con Na₂SO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía en columna (gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar lugar al producto 163 (210 mg, 28 %) en forma de una espuma blanca.

[0293] MS (ESI): [M H+] = 792.6.

Paso 2: síntesis de (2S)-2-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E, 5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido} propanamido]-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}ácido pentanoico (164)

[0294] Se trató una solución del compuesto 163 (210 mg, 0.26 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con UOH.H₂O (33 mg, 0.80 mmol, en 0.2 mL de agua). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío. La mezcla resultante se trató con EtOAc (10 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL), se secaron con Na₂SO₄, y se concentraron para obtener el producto 164 (170 mg, 84 %) en forma de una espuma blanca que se empleó para la siguiente reacción de acoplamiento.

[0295] MS (ESI): [M H+] = 778.4.

Paso 3: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-benzyl-5-{[(ferc-butoxy)carbonyl]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido} propanamido]-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (165)

[0296] Se trató una solución del compuesto bruto 164 (170 mg, 0.22 mmol) en CH₂Cl2 seco (5 mL) a 0 °C con HOBt (39.0 mg, 0.29 mmol), EDCI (55.0 mg, 0.29 mmol), TEA (44.0 mg, 0.44 mmol), y 4-AT (44.0 mg, 0.26 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 16 h, luego se lavó la mezcla de la reacción con solución acuosa de NaHCO₃al 5 % (10 mL) y luego HCl acuoso (10 mL, 1M). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (10 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se concentraron en vacío para dar el producto bruto 165 (230 mg, bruto) en forma de un sólido rojo amarronado.

[0297] MS (ESI): [M H+] = 931.8.

Paso 4: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-m etiloct-3-enoil]pirrolid in-2-il]form am ido} propanamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbam oil]butil] carbamato (XIV)

[0298] A una solución del compuesto 165 (230 mg, 0.25 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (44 mg, 0.08 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante pre-CLAR (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XIV (16 mg, 42 %) en forma de un sólido blanco.

[0299] MS (ESI): [M H+] = 932.8.

Ejemplo XV de referencia

Bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-amino-2-bencil-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]sal de ácido trifluoroacético de carbamato (XV)

[0300]

Paso 1: síntesis de bencil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-ammo-2-bencil-7-metiloct-3-enoil] p irrolidin-2-il] formamido}-3-metilbutanamido]-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]sal de ácido trifluoroacético de carbamato (XV)

[0301] A una solución del compuesto 166 (50 mg, 0.05 mmol, el procedimiento fue de acuerdo con el Journal o f the American Chemical Society, 2005, 127, 12460-12461) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadió TFA (0.2 mL). Se agitó la solución resultante a 0 °C durante 2 h. El disolvente se concentró en vacío y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XV (16 mg, 36 %) en forma de un sólido blanco.

[0302] MS (ESI): [M H+] = 859.7.

Ejemplo XVI de referencia

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]-2-(4-hidroxifenil) etil]carbamoil}pirrolidin-1 -il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XVI)

[0303]

Paso 1: síntesis de ferc-butil (2S)-2-{[(2S)-3-(4-hidroxifeml)-1-metoxi-1-oxopropan-2-M]carbamoM}pirroMdma-1-carboxilato (173)

[0304] A una solución del compuesto 171 (1.7 g, 8.2 mmol) y el compuesto 172 (1.8 g, 7.8 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadieron T3P (2.7 g, 8.6 mmol) y T^{e a}(1.7 g, 17.2 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (10 mL, 1 M), y solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL). La capa orgánica se secó con Na₂SO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 5 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 173 (1.8 g, 60 %) en forma de una espuma blanca.

[0305] MS (ESI): [M H+] = 393.1.

Paso 2: síntesis de metil (2S)-3-(4-hidroxifenil)-2-t[(2S)-pirrolidin-2-il]formamido}propanoato (174)

[0306] A una solución del compuesto 173 (1.8 g, 4.59 mmol) en CH₂Ch (5 mL) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M) y se agitó a 25 °C durante 2 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 174 (1.5 g, 100 %) como una espuma blanca.

[0307] MS (ESI): [M H+] = 293.1.

Paso 3: síntesis de metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi) carbonil] amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-3-(4-hidroxifenil)propanoato (176)

[0308] A una solución del compuesto 174 (220 mg, 0.67 mmol) y el compuesto 59 (220 mg, 0.61 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron HOBt (100 mg, 0.73 mmol), EDCI (140 mg, 0.73 mmol) y DlpEA (200 mg, 1.53 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con HCl acuoso (5 mL, 1 M), solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL), se secó con Na₂SO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar lugar al producto 176 (110 mg, 28 %) en forma de una espuma blanca.

[0309] MS (ESI): [M H+] = 636.3.

Paso 4: síntesis de (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonN] amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-3-(4-hidroxifenil) ácido propiónico (177)

[0310] Se trató una solución del compuesto 176 (100 mg, 0.16 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LiOH.H₂O (14 mg, 0.32 mmol, en 0.2 mL de agua). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío. La mezcla resultante se trató con EtOAc (10 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 2-3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secaron con Na₂SO₄, y se concentraron para obtener el producto 177 (91 mg, 92 %), que se empleó en bruto para la siguiente reacción de acoplamiento.

[0311] MS (ESI): [M H+] = 622.4.

Paso 5: síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]-2-(4-hidroxifenil)etil]carbamoil} pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (178)

[0312] Se trató una solución del compuesto bruto 177 (90 mg, 0.15 mmol) en CH₂Cl2 seco (5 mL) a 0 °C con HOBt (26 mg, 0.18 mmol), EDCI (38 mg, 0.2 mol), DIPEA (39 mg, 0.3 mmol), y 4-AT (31 mg, 0.18 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 16 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Cl2 (20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO₄y se concentraron en vacío para dar el producto bruto 178 (105 mg, 90 %) en forma de un sólido rojo amarronado.

[0313] MS (ESI): [M H+] = 775.6.

Paso 6: síntesis de terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]-2-(4-hidroxifenil) etil] carbamoil}pirrolidin-1 -il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XVI)

[0314] A una solución del compuesto 178 (105 mg, 0.14 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (27 mg, 0.16 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XVI (42 mg, 34 %) en forma de un sólido blanco.

[0315] MS (ESI): [M H+] = 776.6.

Ejemplo XVII de referencia

Bencil N-[(4S)-4-{[(2ft)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1 -hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil] butil] carbamato (XVII)

[0316]

Paso 1: síntesis de ferc-butilo 2-{[(2S)-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}-1-metoxi-1-oxopentan-2-il]carbamoil}pirrolidina-1 -carboxilato (183)

[0317] A una solución del compuesto 181 (4.8 g, 15.22 mmol) y el compuesto 182 (3.6 g, 16.74 mmol) en CH₂Cl2 (50 mL) a 0 °C se añadieron DIPEA (4.3 g, 33.48 mmol) y T3P (5.8 g, 18.26 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (5 mL, 1 M) y solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO₄y se concentró en vacío. El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 5 : 1 a 1 : 1) para dar lugar al producto 183 (5.4 g, 75 %) en forma de una espuma blanca.

Paso 2: síntesis de metil (2S)-5-{[(benc¡lox¡)carboml]ammo}-2-{[(2R)-p¡rrol¡dm-2-¡l]formam¡do}pentanoato (184)

[0318] A una solución del compuesto 183 (5.4 g, 11.31 mmol) en CH₂Ch (10 mL) se añadió HCl en MeOH (5 mL, 3 M) y se agitó a 25 °C durante 2 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 184 (3.9 g, 93 %) en forma de un sólido blanco.

[0319] MS (ESI): [M H+] = 378.2.

Paso 3: síntes¡s de met¡l (2S)-2-{[(2R)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(íerc-butox¡)carboml] am¡no}-7-met¡loct-3-eno¡l] p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-5-{[(benc¡lox¡)carbon¡l]am¡no}pentanoato (186)

[0320] A una solución del compuesto 184 (276 mg, 0.67 mmol) y el compuesto 59 (220 mg, 0.61 mmol) en CH₂Ch (5 mL) a 0 °C se añadieron HOBt (99 mg, 0.73 mmol), DIPEA (197 mg, 1.53 mmol) y EDCI (139.0 mg, 0.73 mmol). La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (5 mL, 1 M) y solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO₄y se concentró en vacío. El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 186 (140 mg, 32 %) en forma de un sólido blanco.

[0321] MS (ESI): [M H+] = 721.6.

Paso 4: síntes¡s de (2S)-2-{[(2R)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(íerc-butox¡)carboml]ammo}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-5-{[(benc¡lox¡) carbon¡l]am¡no}ác¡do pentano¡co (187)

[0322] Se trató una solución del compuesto 186 (140 mg, 0.19 mmol) en THF/MeOH = 4/1 (4/1 mL) con LiOH.HzO (16 mg, 0.38 mmol, en 0.2 mL de agua). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 2 h, luego el disolvente se eliminó al vacío. La mezcla resultante se trató con EtOAc (10 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH = 2-3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron para obtener el producto 187 (118 mg, 88 %), que se empleó para la siguiente reacción de acoplamiento.

[0323] MS (ESI): [M H+] = 707.5.

Paso 5: síntes¡s de benc¡l N-[(4S)-4-{[(2E)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(íerc-butox¡)carboml]ammo}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-4-[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)carbamo¡l]but¡l]carbamato (188)

[0324] A una solución del compuesto 187 (118 mg, 0.17 mmol) y 4-AT (34 mg, 0.20 mmol) en CH₂Ch (5 mL) a 0 °C se añadieron HOBt (30 mg, 0.22 mmol), DIPEA (44 mg, 0.34 mmol) y EDCI (42 mg, 0.22 mmol). La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (5 mL, 1 M) y solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL). La capa orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se concentró para dar el producto bruto 188 (160 mg) en forma de un sólido blanco.

[0325] MS (ESI): [M H+] = 860.7.

Paso 6: síntes¡s de benc¡l N-[(4S)-4-{[(2E)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(íerc-butox¡)carboml]ammo}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-4-[(1-h¡drox¡-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)carbamo¡l]but¡l] carbamato (XVII)

[0326] A una solución del compuesto 188 (160.0 mg, 0.18 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (32 mg, 0.18 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 60 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XVII (48 mg, 31 %) en forma de un sólido blanco.

[0327] MS (ESI): [M H+] = 861.8.

Ejemplo XVIII de referencia

(S)-Metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-7-metiloct-3-enoN)pirroNdma-2-carboxamido)-5-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XVIII)

[0328]

Paso 1: síntesis de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonN)ammo)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((fercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil) pirrolidina-2-carboxamido)pentanoato (195)

[0329] A una solución del compuesto 84 (0.5 mg, 1.0 mmol) y (2S,5S,£)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 433 mg, 1.2 mmol) en CH₂Ch (5 mL) se añadieron T3P (413 mg, 1.3 mmol) y DIPEA (284 mg, 2.2 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL) y se secó con Na₂SO₄. Los residuos se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 195 (380 mg, 47 %) en forma de un sólido blanco.

[0330] MS (ESI): [M H+] = 809.6.

Paso 2: síntesis de (S)-metil 5-ammo-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)pentanoato (196) A una solución del compuesto 195 (380 mg, 0.47 mmol) en DMF (5 mL) a 0 °C se añadió una solución de TBAF (5 % en peso en THF, 6 mL). La reacción se agitó durante 30 min. La mezcla 196 (275 mg, 100 %) se usó para el paso siguiente sin ningún tratamiento.

[0331] MS (ESI): [M H+] = 587.4.

Paso 3: síntesis de (S)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-((((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (197)

[0332] A una solución del compuesto 196 (275 mg, 0.47 mmol) y 1, 3-dioxoisoindolin-2-il (1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbonato (78) (203 mg, 0.56 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (121 mg, 0.94 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 2 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2 x 10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL) y se secó con Na2SO₄. El residuo se concentró a presión reducida y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto 197 (30 mg, 8 %) en forma de un sólido rojo pálido.

[0333] MS (ESI): [M H+] = 785.6.

Paso 4: síntesis de (S)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XVIII)

[0334] A una solución del compuesto 197 (25 mg, 0.03 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (5.3 mg, 0.03 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XVIII (7 mg, 28 %) en forma de un sólido blanco.

[0335] MS (ESI): [M H+] = 787.4.

Ejemplo XX de referencia

ferc-Butil N-(4-{[(2S)-1-[(2ft,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil)carbamato (XX)

[0336]

Paso 1: síntesis de metil 2-{[(2S)-1-[(2ft,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi) carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(9H-fluoren-9-il)metoxi]carbonil}amino)pentanoato (213)

[0337] A la solución del compuesto 84 (300 mg, 0.65 mmol) y el producto intermedio 59 (0.2 g, 0.6 mmol) suspendido en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadió DIPeA (0.4 mL, 2 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 0.9 mL, 1 mmol) lentamente, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 18 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO₃al 5 % (10 mL) y agua (2 x 10 mL), y la capa orgánica se secó con MgSO4 y se concentró en vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice con disolvente de elución, éter de petróleo/EtOAc = 1 : 3), para obtener un producto oleoso 213 (210 mg, 43 %).

[0338] MS (ESI): [M H+] = 809.6.

Paso 2: síntesis de 2-{[(2S)-1-[(2ft,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carbonil] amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-{[(terc-butoxi) carbonil]amino}ácido pentanoico (214)

[0339] Se trató una solución del compuesto 213 (210 mg, 0.26 mmol) en THF/MeOH (4.0/1.0 mL) con LiOH.HzO (20 mg, 0.40 mmol en 0.2 mL de agua). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 4 h, luego el disolvente se eliminó al vacío. La mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3-4. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina acuosa saturada (3 x 10 mL), se secaron con Na2sO₄, y se concentraron para obtener el producto bruto de 100 mg. El producto bruto se añadió a CH₂Cl2 (10 mL), luego a Boc2O (60 mg, 0.26 mmol) y DIPEA (20 mg, 0.26 mmol), la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La reacción se apagó con HCl (1 M) hasta alcanzar el pH 3-4, y se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con agua (2 x 10 mL), solución salina acuosa saturada (3 x 10 mL), se secó con Na2SO₄, y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un producto oleoso 214 (150 mg, 86 %).

[0340] MS (ESI): [M H+] = 673.4.

Paso 3: síntesis de ferc-butil N-(4-{[(2S)-1-[(2ft,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil)carbamato (XX)

[0341] A una solución del compuesto de ácido 214 (150 mg, 0.22 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) a 0 °C se añadieron 4-AT (75 mg, 0.44 mmol) y DIPEA (60 mg, 0.44 mmol). Se añadió T3P (50 % en EtOAc, 0.2 mL, 0.4 mmol) lentamente, y se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con solución acuosa de Na2CO₃al 5 % (10 mL), se secó con MgSO4 y se concentró en vacío. El residuo oleoso se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil ^xB^pC18 (Suma, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XX (6 mg, 3 %)

[0342] MS (ESI): [M H+] = 826.7.

Ejemplo XXI de referencia

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2K)-2-{[(1S)-4-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbamoil] butil] carbamoil} pirrolidin- 1-il] -2-metil-8-oxooct-5-en-4-il] carbamato (XXI) [0343]

Paso 1: síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2ft)-2-{[(1S)-4-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbamoil] butil] carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il] carbamato (216)

[0344] A una solución del compuesto XX (20 mg, 0.02 mmol) en MeOH (10 mL) se añadió Vc (10 mg, 0.10 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 60 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXI (15 mg, 75 %) en forma de un sólido blanco.

[0345] MS (ESI): [M H+] = 827.7.

Ejemplo XXII de referencia

(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-amino-2-bencil-7-metiloct-3-enoil] Pirrolidin-2-il]formamido}-5-carbamimidamido-N-(1 -oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)pentanamida (XXII)

[0346]

Paso 1: síntesis de ferc-butil (2S)-2-{[(2S)-1-metoxi-5-[W'-(4-metoxi-2,6-dimetilbencenosulfonil)carbamimidamido]-1-oxopentan-2-il]carbamoil} pirrolidina-1-carboxilato (223)

[0347] A una solución del compuesto 221 (360 mg, 0.9 mmol) y el compuesto 222 (213 g, 0.99 mmol) en CH₂Cl2 (3 mL) a 0 °C se añadieron T3P (343 mg, 1.1 mmol) y DIPEA (232 mg, 1.8 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO3 acuoso al 5 %, HCl acuoso (5 mL, 1 M), y solución acuosa saturada de salmuera (3 * 10 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró para dar el producto 223 (390 mg, 72 %) en forma de una espuma blanca.

[0348] MS (ESI): [M H+] = 598.3.

Paso 2: síntesis de metil (2S)-5-[N-(4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfoml) carbamimidamido]-2-{[(2S)-pirrolidin-2-il]formamido}pentanoato (224)

[0349] A una solución del compuesto 223 (390 mg, 0.65 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M), se agitó a 25 °C durante 2 h. Luego el disolvente se eliminó para dar el producto 224 (323 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0350] MS (ESI): [M H+] = 498.2.

Paso 3: síntesis de metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml] amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-[N'-(4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfoml)carbamimidamido]pentanoato (226)

[0351] A una solución del compuesto 224 (200 mg, 0.4 mmol) y el compuesto 59 (160 mg, 0.44 mmol) en CH₂Cl2 (3 mL) a 0 °C se añadieron HOBt (70 mg, 0.52 mmol), EDCI (100 mg, 0.52 mmol) y DIP^eA (103 mg, 0.80 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL), se lavó con HCl acuoso (10 mL, 1 M), se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 226 (120 mg, 36 %) en forma de una espuma blanca.

[0352] MS (ESI): [M H+] = 841.1.

Paso 4: síntesis de (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íerc-butoxi)carboml] amino} - 7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-[N'-(4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencenosulfonil)carbamimidamido]ácido pentanoico (227)

[0353] Se trató una solución del compuesto 226 (120 mg, 0.14 mmol) en THF/MeOH (4.0/2.0 mL) con LOH.H ₂O (12 mg, 0.28 mmol en 0.2 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, entonces el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (20 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (2 * 20 mL), se secaron con Na2SO4, y se concentraron para obtener el producto 227 (100 mg, 86 %), que se usó para el siguiente paso sin purificación.

[0354] MS (ESI): [M H+] = 827.6.

Paso 5: síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(1-oxyiL-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]-4-[N-(4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencenosulfoml)carbamimidamido]butil]carbamoil}pirrolidm-1 -il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (228)

[0355] Se trató una solución del compuesto bruto 227 (100 mg, 0.12 mmol) en CH₂Ch seco (3 mL) a 0 °C con HOBt (22 mg, 0.16 mmol), EDCI (31 mg, 0.16 mmol), DIPEA (31.0 mg, 0.24 mmol) y 4-AT (22.0 mg, 0.13 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Ch (10 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4 y se concentraron para dar el producto bruto 228 (120 mg, bruto) en forma de un sólido naranja.

[0356] MS (ESI): [M H+] = 980.8.

Paso 6 : síntesis de (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3£,5S)-5-amino-2-bencil-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-5-carbamimidamido-N-(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)pentanamida (XXII)

[0357] Se agitó una solución del compuesto 228 (20 mg, 0.02 mmol) en TFA (1 mL) a 25 °C durante 4 h y luego se eliminó el disolvente. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), TFA al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXII (4.2 mg, 31 %) en forma de una espuma blanca.

[0358] MS (ESI): [M H+] = 699.5.

Ejemplo XXIII de referencia

(2E)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-ammo-2-bencil-7-metiloct-3-enoil] Pirrolidin-2-il]formamido}-N-(1-hidroxi -2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)-3-metilbutanamida (XXIII)

[0359]

Paso 1: síntesis de (S)-ferc-butil (2S)-2-{[(2R)-1-metoxi-3-metiM-oxobutan-2-il]carbamoil}pirrolidma-1-carboxilato (233)

[0360] A una solución del compuesto 231 (2.0 g, 9.30 mmol) y el compuesto 232 (1.7.0 g, 10.23 mmol) en CH₂CI2 (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (3.5 g) y DIPEA (2.4 g, 18.6 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío. La mezcla se disolvió en EtOAc (10mL), se lavó con NaHcO₃acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL), se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío para dar el producto bruto 233 (2.0 g, 67 %) en forma de una espuma blanca.

[0361] MS (ESI): [M H+] = 329.0.

Paso 2: síntesis de (2R)-2-{[(2S)-1-[(ferc-butoxi)carboml]pirrolidin-2-il] formamido}-3-ácido metilbutanoico (234)

[0362] Se trató una solución del compuesto 233 (2.0 g, 6.1 mmol) en THF/MeOH (12.0/3.0 mL) con LiOH.HzO (33.0 mg, 0.80 mmol en 0.2 mL de agua). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 3 h, luego el disolvente se eliminó al vacío y la mezcla resultante se trató con EtOAc (10 mL) y HCl acuoso (1 M) hasta alcanzar el pH 3-4. La fase orgánica se separó de la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL), se secaron con Na₂SO4, y se concentraron en vacío para obtener el producto 234 (1.6 g, 84 %) como una espuma blanca, que se usó para el siguiente paso sin purificación.

[0363] MS (ESI): [M H+] = 315.0.

Paso 3: síntesis de ferc-butil (2S)-2-{[(1R)-1-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil] -2-metilpropil]carbamoil}pirrolidina- 1-carboxilato (235)

[0364] Se trató una solución del compuesto bruto 234 (1.8 g, 5.73 mmol) en CH₂Cl2 seco (5 mL) a 0 °C con T3P (2.2 g, 6.88 mmol), DIPEA (1.5 g, 11.46 mmol), y 4-AT (1.1 g, 6.31 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 mL), se lavó con NaHCO3 acuoso al 5 % (10 mL), y solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío para dar el producto bruto 235 (1.4 g, 54 %) en forma de una espuma blanca.

[0365] MS (ESI): [M H+] = 468.3.

Paso 4: síntesis de (2R)-M-(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)-3-metil-2-{[(2S)-pirrolidm-2-il]formamido}clorhidrato de butanamida (236)

[0366] Se agitó una solución del compuesto 235 (1.4 g, 3.0 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 236 (0.7 g, 64 %) en forma de un aceite rojo.

[0367] MS (ESI): [M H+] = 368.3.

Paso 5: síntesis de (2ft)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-5-ammo-2-bencil-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-N-(1-hidroxi -2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)-3-metilbutanamida (XXIII)

[0368] A una solución del compuesto 236 (223 mg, 0.61 mmol) y el producto intermedio 59 (200 mg, 0.55 mmol) en CH₂CI2 (5 mL) a 0 °C se añadieron T3P (210 mg, 0.66 mmol) y DIPEA (142 mg, 1.1 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío. La mezcla se disolvió en EtOAc (10 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), y solución acuosa saturada de salmuera (2 x 10 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXIII (6.4 mg, rendimiento 4 %) en forma de un sólido blanco.

[0369] MS (ESI): [M H+] = 712.6;

Ejemplo XXIV de referencia

Bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-{[(4-hidroxi-2,6-dimetilfenil)metil]carbamoil}butil]carbamato (XXIV)

[0370]

Paso 1: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((S)-1-((4-(benciloxi)-3,5-dimetilbencil)ammo)-5-(((benciloxi)carboml)ammo)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (243)

[0371] A una solución del compuesto 241 (1.5 g, 3.25 mmol, este compuesto se sintetizó a partir del compuesto 193) y el compuesto 242 (870 mg, 3.6 mmol) en C ^C h (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (1.3 g, 4.25 mmol) y DlpEA (840 mg, 6.5 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara a 25°C y se agitó durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío. La mezcla se disolvió en EtOAc (10 mL), se lavó con NaHcO₃acuoso al 5 % (10 mL), y solución acuosa saturada de salmuera (2 x 20 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío para dar el producto bruto 243 (1.5 g, 85 %) en forma de una espuma blanca.

[0372] MS (ESI): [M H+] = 687.4.

Paso 2: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-5-amino-1-((4-hidroxi-3,5-dimetilbencil)ammo)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (244)

[0373] A una solución del compuesto 243 (1.5 g, 2.19 mmol) en MeOH (10 mL) se añadió Pd/C (0.1 g, 10 %) a 25 °C en una atmósfera de gas de hidrógeno con globo. Se agitó la mezcla a 25 °C durante 16 h. Luego la reacción se filtró y se concentró en vacío para dar el producto 244 (0.75 g, 75 %) en forma de un sólido blanco.

[0374] MS (ESI): [M H+] = 463.2.

Paso 3: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)-1-((4-hidroxi-3,5-dimetilbencil)amino)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (245)

[0375] A una solución del compuesto 244 (750 mg, 1.62 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron TEA (245 mg, 2.43 mmol) y CbzCl (290 mg, 1.7 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (10 mL). La fase orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de salmuera (2 x 10 mL), se secó con Na2SO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía en columna (gel de sílice, éter de petróleo/EtoAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar lugar al producto 245 (580 mg, 60 %) en forma de un sólido blanco.

[0376] MS (ESI): [M H+] = 597.3.

Paso 4: síntesis de bencil ((S)-5-((4-hidroxi-3,5-dimetilbencil)amino)-5-oxo-4-((S)-pirrolidma-2-carboxamido)pentil)carbamato (246)

[0377] Se agitó una solución del compuesto 245 (0.4 g, 0.67 mmol) en HCl en MeOH (5 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 246 (350 mg, 98 %) en forma de un sólido blanco.

[0378] MS (ESI): [M H+] = 497.3.

Paso 5: síntesis de bencil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-{[(4-hidroxi-2,6-dimetilfeml)metil]carbamoil}butil] carbamato (XXIV)

[0379] A una solución del compuesto 246 (350 mg, 0.66 mmol) y el compuesto 59 (250 mg, 0.69 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) a 0 °C se añadieron T3P (251 mg, 0.79 mmol) y DIPEA (170 mg, 1.32 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), y solución acuosa saturada de salmuera (3 x 10 mL), se secó con Na₂SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXIV (110 mg, rendimiento 20 %) en forma de sólido blanco.

[0380] MS (ESI): [M H+] = 840.7.

Ejemplo XXV de referencia

1-Hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-{[(benciloxi)carboml]amino}-1-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil] butil] carbamoil}-2-metilpropil] carbamoil}pirrolidin-1 -il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato diclorhidrato (XXV)

[0381]

Debería ser VIII no 246

Paso 1: síntesis de 1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(25)-2- {[(15)-1- {[(1S)-4-{[(benciloxi)carbonil] amino} -1- [(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il] carbamato diclorhidrato (XXV)

[0382] A una solución del compuesto VIII (30 mg, 0.028 mmol) en MeOH seco (3 mL) se añadió Vc (5 mg, 0.028 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXV (27 mg, 84 %) en forma de un sólido blanco.

[0383] MS (ESI): [M H+] = 1060.0.

Ejemplo XXVI y XXVII de referencia

Bencil N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-([(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]pentil]carbamato (XXVI) y Bencil N-[(5s )-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(fercbutoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpipe-ridin-4-il)carbamoil]pentil]carbamato (XXVII)

[0384]

Paso 1: síntesis de (S)-metil 2-amino-6-(((benciloxi)carbonil)amino)hexanoato (252)

[0385] A una solución del 251 (2 g, 5.26 mmol) en MeOH (20 mL) se añadió SOCl2 (6.21 g, 52.6 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, y se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 252 (1.74 g, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0386] MS (ESI): [M H+] = 294.9.

Paso 2: síntesis de (S)-íerc-butil 2-(((S)-6-(((benciloxi)carbonil)amino)-1-metoxM-oxohexan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (253)

[0387] A una solución del compuesto 252 (1.74 g, 5.26 mmol), (S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (1.7 g, 7.89 mmol) en CH₂Ch (20 mL) se añadieron DIPEA (2.04 g, 15.78 mmol) y T3P (4.35 g, 6.84 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 10 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se concentró para obtener el denominado compuesto 253 (2.6 g, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0388] MS (ESI): [M H+] = 492.2.

Paso 3: síntesis de (S)-metil 6-(((benciloxi)carbonil)amino)-2-((S)-pirrolidina-2-carboxa-mido)hexanoato (254)

[0389] El compuesto 253 (2.6 g, 5.26 mmol) y HCl en MeOH (40 mL, 3 M) se añadieron a un matraz de un solo cuello de 50 mL, luego se agitó la mezcla a 25 °C durante 1 h. La solución orgánica se concentró y se secó con una bomba de vacío para obtener el denominado compuesto 254 (2.25 g, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0390] MS (ESI): [M H+] = 392.1.

Paso 4: síntesis de (S)-metil 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarboml)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-6-(((benciloxi)carbonil)amino)hexanoato (255)

[0391] A una solución del compuesto 254 (270 mg, 0.63 mmol) se añadió (2S,5S,E)-2-bencil-5-((tercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (250 mg, 0.69 mmol) y DIPeA (244 mg, 1.89 mmol) en CH₂Ch (20 mL). Después de añadir T3P (521 mg, 0.82 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C, se agitó la mezcla a 25 °C durante 12 h y luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y se lavó con H ₂O (3 * 50 mL). La fase orgánica se recogió, se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el denominado compuesto 255 (463 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0392] MS (ESI): [M H+] = 735.5.

Paso 5: síntesis de (S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-6 -(((benciloxi)carbonil)amino)ácido hexanoico (256)

[0393] A una solución del compuesto 255 (463 mg, 0.63 mmol) en MeOH/THF/H ₂O (5 mL/5 mL/5 mL) se añadió L O H H ₂O (132 mg, 3.15 mmol). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 4 h, se concentró en vacío. El residuo se acidificó hasta alcanzar el pH 3 con HCl acuoso (1 M), diluido con EtOAc (50 mL) y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 25 mL). La fase orgánica se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 256 (454 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0394] MS (ESI): [M H+] = 721.5.

Paso 6 : síntesis de Bencil N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]pentil]carbamato (XXVI)

[0395] A una solución del compuesto 256 (454 mg, 0.63 mmol), 4-AT (129 mg, 0.76 mmol), DIPEA (244 mg, 1.89 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) se añadió T3P (521 mg, 0.82 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Después de añadir EtOAc (100 mL), la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 50 mL), y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), NH3 H ₂O al 0.5% en eluyente) para obtener el denominado producto XXVI (103 mg, 19 %) en forma de un sólido rosa.

[0396] MS (ESI): [M H+] = 874.7.

Paso 7: síntesis de bencil N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpipe-ridin-4-il)carbamoil]pentil]carbamato (XXVII)

[0397] A una solución del compuesto XXVI (73 mg, 0.08 mmol) en MeOH (5 mL) se añadió Vc (14 mg, 0.08 mmol). Se agitó la solución resultante a 25 °C durante 30 min, luego la solución orgánica se concentró en vacío y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.5% en eluyente) para obtener el producto XXVII (73 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0398] MS (ESI): [M H+] = 875.8.

Ejemplo XXVIII

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-carbamoil-4-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi] carbonil} amino-)butil] carbamoil} pirrolidin- 1-il] -2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXVIII)

[0399]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (4,5-diamino-5-oxopentil)carbamato (262)

[0400] Al compuesto 261 (500 mg, 1.1 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M), luego se agitó la mezcla a 25 °C durante 1 h. La solución orgánica se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 262 (428 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0401] MS (ESI): [M H+] = 354.0.

Paso 2: síntesis de (S)-íerc-butil 2-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carboml)amino)-1-ammo-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (263)

[0402] A una solución del compuesto 262 (428 mg, 1.1 mmol), (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (355 mg, 1.5 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 50 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na2SO4, y luego se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 263 (605 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0403] MS (ESI): [M H+] = 551.2.

Paso 3: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-5-amino-5-oxo-4-((5)-pirrolidina-2-carboxamido)pentil)carbamato (264)

[0404] Se añadieron el compuesto 263 (135 mg, 0.25 mmol) y HCl en MeOH (5 mL, 3 M) a un matraz de un solo cuello de 50 mL, luego se agitó la mezcla a 25 °C durante 1 h. La solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 264 (110 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0405] MS (ESI): [M H+] = 451.1.

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-carba-moilbutil]carbamato (265)

[0406] A una solución del compuesto 264 (110 mg, 0.25 mmol), (2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (91 mg, 0.25 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadieron DIPEA (97 mg, 0.75 mmol) y T3P (207 mg, 0.33 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se recogió, se secó con Na2SO4 y luego se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para obtener el denominado compuesto 265 (153 mg, 77 %) en forma de un sólido blanco.

[0407] MS (ESI): [M H+] = 794.5.

Paso 5: síntesis de íerc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-carbamoil-4-({[(1 oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino-)-butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXVIII)

[0408] A una solución del compuesto 265 (150 mg, 0.18 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (144 mg, 0.94 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron a la mezcla DMAP (44 mg, 0.36 mmol) y compuesto 266 (130 mg, 0.36 mmol, el procedimiento para el 266 fue de acuerdo con ^cs Central Science, 2016, 2 (9): 653-659). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 40 min, se diluyó con CH₂Ch (50 mL) y la fase orgánica se lavó con H₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se concentró en vacío y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado producto XXVIII (12 mg, 9 %) en forma de un sólido rosa.

[0409] MS (ESI): [M H+] = 770.6.

Ejemplo XXIX y XXX

Propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato (XXIX) y Propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-5-({[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato (XXX)

[0410]

Paso 1: síntesis de (S)-isopropil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-amino-pentanoato (272)

[0411] A una solución del compuesto 271 (500 mg, 1.1 mmol) en propan-2-ol (10 mL) se añadió SOCl2 (1 mL). La mezcla se agitó a 100 °C durante 24 h, y se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 272 (476 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0412] MS (ESI): [M H+] = 397.1.

Paso 2: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonN)ammo)-1-isopropoxi-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (273)

[0413] A una solución del compuesto 272 (476 mg, 1.1 mmol), (S)-1-(fe/-c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (355 mg, 1.65 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na₂SO₄, y se concentró para obtener el denominado compuesto 273 (653 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0414] MS (ESI): [M H+] = 594.4.

Paso 3: síntesis de (S)-isopropil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((S)-pirrolidina-2-carboxamido)pentanoato (274)

[0415] Al 273 (653 mg, 1.1 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M), luego se agitó la mezcla a 25 °C durante 1 h. La solución orgánica se concentró con una bomba de vacío para obtener el denominado compuesto 274 (543 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0416] MS (ESI): [M H+] = 494.2.

Paso 4: síntesis de (S)-isopropil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((S)-1-((2S, 5S, E)-2-bencil-5-((tercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)pentanoato (275)

[0417] A una solución del compuesto 274 (543 mg, 1.1 mmol), (2S, 5S, £)-2-bencil-5-((ferc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (397 mg, 1.1 mmol) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) en c H₂CI2 (10 mL) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO₄, y luego se concentró en vacío y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluido con EtOAc para obtener el denominado compuesto 275 (513 mg, 56 %) en forma de un sólido blanco.

[0418] MS (ESI): [M H+] = 837.6.

Paso 5: síntesis de propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato (XXIX)

[0419] A una solución del compuesto 275 (250 mg, 0.3 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) se añadió DBU (227 mg, 1.5 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (73 mg, 0.6 mmol) y compuesto 266 (217 mg, 0.6 mmol) a la mezcla. La mezcla se agitó a 25 °C durante 40 min, luego la mezcla se diluyó con CH₂Cl2 (50 mL) y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado compuesto XXIX (72 mg, 29 %) en forma de un sólido rosa.

[0420] MS (ESI): [M H+] = 813.6.

Paso 6 : síntesis de propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato (XXX)

[0421] A una solución del compuesto XXIX (50 mg, 0.06 mmol) en MeOH (5 mL) se añadió Vc (11 mg, 0.06 mmol). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 30 min, se concentró la solución orgánica en vacío y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), NH3 H₂O al 0.5% en eluyente) para obtener el denominado compuesto XXIX (13 mg, 27 %) en forma de un sólido blanco.

[0422] MS (ESI): [M H+] = 814.7.

Ejemplo XXXI y XXXII

Propan-2-Il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carboml}ammo)hexanoato (XXXI) y Propan-2-il (2S)-2-{[(2 S)-1 -[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-[(1-oxil-2,2,5,5-tetrametilpirrolidin-3-il)formamido]-hexanoato (XXXII)

[0423]

Paso 1: síntesis de propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)hexanoato (XXXI)

[0424] A una solución del compuesto 275 (350 mg, 0.41 mmol) en CH₂CI2 (15 mL) se añadió DBU (313 mg, 2.1 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (100 mg, 0.82 mmol) y compuesto 266 (296 mg, 0.82 mmol) a la mezcla. Después de agitar a 25 °C durante 1 h, la mezcla se diluyó con C ^C h (50 mL) y se lavó con H ₂O (3 x 20mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado compuesto (80 mg, 22 %) en forma de un sólido rosa.

[0425] MS (ESI): [M H+] = 827.7.

Paso 2: síntesis de propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-[(1-oxil-2,2,5,5-tetrametilpirrolidm-3-il)formamido]-hexanoato (XXXII)

[0426] A una solución del compuesto 275 (225 mg, 0.26 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (395 mg, 2.6 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron el 287 (45 mg, 0.26 mmol) y T3P (215 mg, 0.34 mmol, 50 % en EtOAc) a la mezcla. Se agitó la mezcla a 25 °C durante 10 h, se diluyó con CH₂Ch (50 mL) y se lavó con H ₂O (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y luego se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado compuesto ^xX^xII (10 mg, 5 %) en forma de un sólido blanquecino.

[0427] MS (ESI): [M H+] = 797.7.

Ejemplo XXXIII y XXXIV

Propan-2-il (2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonillamino)hexanoato (XXXIII) y (2E)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)ácido hexanoico (XXXIV)

[0428]

Paso 1: síntesis de (S)-isopropil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-aminohexanoato (292)

[0429] A una solución del compuesto 291 (500 mg, 1.07 mmol) en propan-2-ol (10 mL) se añadió SOCl₂(0.5 mL). La mezcla se agitó a 100 °C durante 10 h, y se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 292 (439 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0430] MS (ESI): [M H+] = 411.1.

Paso 2: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((ft)-6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carboml)ammo)-1-isopropoxM-oxohexan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (293)

[0431] A una solución del compuesto 292 (439 mg, 1.07 mmol), (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (345 mg, 1.61 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) se añadieron DIPEA (414 mg, 3.21 mmol) y T3P (885 mg, 1.39 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego se concentró. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na2SO₄, y luego se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 293 (650 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0432] MS (ESI): [M H+] = 608.3.

Paso 3: síntesis de (ft)-isopropil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((S)-pirrolidina-2-carboxamido)hexanoato (294)

[0433] Al compuesto 293 (650 mg, 1.07 mmol) se añadió HCl en MeOH (5 mL, 3 M). La solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 294 (544 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco, después de agitar a 25 °C durante 1 h.

[0434] MS (ESI): [M H+] = 508.2.

Paso 4: síntesis de (R)-isopropil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carboml)ammo)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((fercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)hexanoato (295)

[0435] A una solución del compuesto 294 (544 mg, 1.07 mmol) en CH₂CI2 (10 mL) se añadieron (2S, 5S, E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 386 mg, 1.07 mmol), DIPEA (414 mg, 3.21 mmol) y T3P (884 mg, 1.4 mmol, 50% en EtOAc) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 25 °C durante 12 h, luego se concentró. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se recogió y se secó con Na₂SO4, y luego se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el denominado compuesto 295 (911 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0436] MS (ESI): [M H+] = 851.6.

Paso 5: síntesis de propan-2-il (2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)hexanoato (XXXIII)

[0437] A una solución del compuesto 295 (250 mg, 0.3 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (277 mg, 1.5 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (73 mg, 0.6 mmol) y compuesto 266 (217 mg, 0.6 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h, se diluyó con CH₂Ch (50 mL) y se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAr preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado compuesto XXXIII (100 mg, 40 %) en forma de un sólido rosa.

[0438] MS (ESI): [M H+] = 827.7.

Paso 6 : síntesis (2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)ácido hexanoico (XXXIV)

[0439] A una solución del compuesto 295 (280 mg, 0.33 mmol) en THF/MeOH/H ₂O (10 mL/10 mL/5 mL) se añadió LiOH.HzO (69 mg, 1.65 mmol). Se agitó la mezcla de la reacción a 25 °C durante 10 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. El residuo se diluyó con EtOAc (20 mL) y se acidificó hasta alcanzar el pH 3 con HCl acuoso (1 M), luego se filtró el sólido inorgánico y se concentró el filtrado en vacío para obtener un sólido amarillo claro. A una solución del sólido amarillo en CH₂Ch (15 mL) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) y compuesto 266 (238 mg, 0.66 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h, luego se concentró y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado producto XXXIV (12 mg, 5 %) en forma de un sólido rosa.

[0440] MS (ESI): [M H+] = 785.6.

Ejemplo XXXV

íerc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(dietilcarbamoM)-4-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carbonil}amino)-butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXV)

[0441]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil ferc-butil (5-(dietilamino)-5-oxopentano-1,4-diil)dicarbamato (302) [0442] A una solución del compuesto 301 (500 mg, 1.1 mmol), dietilamina (241 mg, 3.3 mmol) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50% en EtOAc). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 2 h, luego se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na2SO₄, y luego se concentró para obtener el denominado compuesto 302 (560 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0443] MS (ESI): [M H+] = 510.2.

Paso 2: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (4-amino-5-(dietilamino)-5-oxopentil)carbamato (303)

[0444] Al compuesto 302 (560 mg, 1.1 mmol) se añadieron HCl en MeOH (5 mL, 3 M) y EtOAc (5 mL). Después de agitar a 25 °C durante 1 h, la solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 303 (450 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0445] MS (ESI): [M H+] = 410.1.

Paso 3: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonN)ammo)-1-(dietilammo)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (304)

[0446] A una solución del compuesto 303 (450 mg, 1.1 mmol), (S)-1-(ferc-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (355 mg, 1.65 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) se añadieron DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 12 h, luego se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na₂SO₄, y luego se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 304 (667 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0447] MS (ESI): [M H+] = 607.4.

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-5-(dietilamino)-5-oxo-4-((S)-pirrolidina-2-carboxamido)pentil)carbamato (305)

[0448] Al compuesto 304 (667 mg, 1.1 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M). La mezcla se agitó a 25 °C durante 30 min, y se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 305 (557 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0449] MS (ESI): [M H+] = 507.2.

Paso 5: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidm-2-il]formamido}-4-(dietilcarbamoil)butil]carbamato (306)

[0450] A una solución del compuesto 305 (557 mg, 1.1 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) se añadieron ((2S, 5S, EJ-2-bencil-5-((ferc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59) (397 mg, 1.1 mmol), DIPEA (426 mg, 3.3 mmol) y T3P (910 mg, 1.43 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se recogió y se secó con Na2SO₄, y luego se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el denominado compuesto 306 (935 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0451] MS (ESI): [M H+] = 850.6.

Paso 6 : síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(dietilcarbamoil)-4-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)-butil]carbamoil}pirrolidin-1 -il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXV)

[0452] A una solución del compuesto 306 (350 mg, 0.41 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (313 mg, 2.1 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (100 mg, 0.82 mmol) y el 266 (296 mg, 0.82 mmol) a la mezcla. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h, luego la mezcla se diluyó con CH₂Cl2 (50 mL) y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado producto XXXV (42 mg, 12 %) en forma de un sólido rosa.

[0453] MS (ESI): [M H+] = 826.9.

Ejemplo XXXVI

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(terc-butilcarbamoil)-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carbonil}amino)pentil]-carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXVI)

[0454]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil ferc-butil (6-(ferc-butilamino)-6-oxohexano-1,5-diil)dicarbamato (312)

[0455] A una solución del compuesto 311 (500 mg, 1.07 mmol), f-BuNH (234 mg, 3.21 mmol) se añadieron DIPEA (414 mg, 3.21 mmol) en CH₂Ch (20 mL) y T3P (885 mg, 1.39 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CCF previa (éter de petróleo/EtOAc = 1 : 1) para obtener el denominado compuesto 312 (427 mg, 76 %) en forma de un sólido blanco.

[0456] MS (ESI): [M H+] = 524.2.

Paso 2: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (5-ammo-6-(terc-butNammo)-6-oxohexM)carbamato (313)

[0457] Al compuesto 312 (427 mg, 0.81 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M). Después de agitar a 25 °C durante 0.5 h, la solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 313 (343 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0458] MS (ESI): [M H+] = 424.1.

Paso 3: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((S)-6-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonN)ammo)-1-(terc-butNammo)-1-oxohexan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (314)

[0459] A 0 °C a una solución del compuesto 313 (343 mg, 0.81 mmol) y (S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (261 mg, 1.21 mmol) en C ^C h (15 mL) se añadieron DIPEA (314 mg, 2.43 mmol) y T3P (670 mg, 1.1 mmol, 50 % en EtOAc). La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, luego se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na₂SO4, y luego se concentró para obtener el denominado compuesto 314 (503 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0460] MS (ESI): [M H+] = 621.3.

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-6-(terc-butNammo)-6-oxo-5-((S)-pirroNdina-2-carboxamido)hexil)carbamato (315)

[0461] Al compuesto 314 (503 mg, 0.81 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, la solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 315 (422 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0462] MS (ESI): [M H+] = 521.2.

Paso 5: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencN-5-{[(terc-butoxi)carbonN]ammo}-7-metiloct-3-enoM]pirroMdm-2-M]formamido}-5-(terc-butMcarbamoM)pentM]carbamato (316)

[0463] A una solución del compuesto 315 (422 mg, 0.81 mmol), (2S, 5S, E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (293 mg, 0.81 mmol), DIPEA (313 mg, 2.43 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió T3P (670 mg, 1.05 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. Después de agitar a 25 °C durante 12 h, la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para obtener el denominado compuesto 316 (700 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0464] MS (ESI): [M H+] = 864.6.

Paso 6 : síntesis de terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencN-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(terc-butMcarbamoM)-5-({[(1-oxN-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentil]-carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXVI)

[0465] A una solución del compuesto 316 (350 mg, 0.41 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (313 mg, 2.1 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (100 mg, 0.82 mmol) y compuesto 266 (296 mg, 0.82 mmol) a la mezcla. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h, se diluyó con CH₂Cl2 (50 mL) y se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se concentró en vacío y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado compuesto XXXVI (84 mg, 24 %) en forma de un sólido rosa.

[0466] MS (ESI): [M H+] = 840.6.

Ejemplo XXXVII

terc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carboml}ammo)-1-[(propan-2-il)carbamoil]pentil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXVII)

[0467]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (6-(isopropilamino)-6-oxohexano-1,5-diil)dicarbamato (322)

[0468] A una solución del compuesto 321 (500 mg, 1.07 mmol), propan-2-amina (190 mg, 3.21 mmol), DIPEA (414 mg, 3.21 mmol) en CH₂Cl2 (20 mL) se añadió T3P (885 mg, 1.39 mmol, 50 % en EtOAc) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h, la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y luego se concentró en vacío y se purificó mediante CCF preparativa (placa de gel de sílice de 1.5 mm de grosor, éter de petróleo/EtOAc = 1 : 1) para obtener el denominado compuesto 322 (341 mg, 63 %) en forma de un sólido blanco.

[0469] MS (ESI): [M H+] = 510.15

Paso 2: síntesis de (S )-(9H-fluoren-9-il)metil (5-amino-6-(isopropilamino)-6-oxohexil)carbamato (323)

[0470] Al compuesto 322 (341 mg, 0.67 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M). Después de agitar a 25 °C durante 0.5 h, la solución orgánica se concentró en vacío al vacío para obtener el denominado compuesto 323 (274 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0471] MS (ESI): [M H+] = 410.0.

Paso 3: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((S)-6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carboml)ammo)-1-(isopropilammo)-1-oxohexan-2 -il)carbamoil)pirrolidina-1 -carboxilato (324)

[0472] A una solución del compuesto 323 (274 mg, 0.67 mmol), (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (216 mg, 1.01 mmol) en CH₂Cl2 (15 mL) se añadieron DIPEA (260 mg, 2.01 mmol) y T3P (554 mg, 0.87 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 x 20 mL). Se recogió la fase orgánica y se secó con Na2SO4, y luego se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 324 (407 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0473] MS (ESI): [M H+] = 607.3

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-6-(isopropilammo)-6-oxo-5-((S)-pirrolidma-2-carboxamido)hexil)carbamato clorhidrato (325)

[0474] Al compuesto 325 (407 mg, 0.67 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, la solución orgánica se concentró en vacío al vacío para obtener el denominado compuesto 325 (340 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0475] MS (ESI): [M H+] = 507.2.

Paso 5: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3£,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-[(pro-pan-2-il)carbamoil]pentil]carbamato (326)

[0476] A una solución del compuesto 325 (340 mg, 0.67 mmol), (2S, 5S, E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 242 mg, 0.67 mmol), DIPEA (259 mg, 2.01 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió T3P (554 mg, 0.87 mmol, 50 % en EtOAc). Se agitó la mezcla a 25 °C durante 12 h, luego la solución orgánica se concentró en vacío. Se añadió EtOAc (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se recogió y se secó con Na₂SO4, y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el denominado compuesto 326 (570 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0477] MS (ESI): [M H+] = 850.5.

[0478] RMN de 1H: (400MHz, CDCla) 8 7.76-7.69 (m, 2 H), 7.61-7.59 (m, 2 H), 7.40-7.36 (m, 2 H), 7.32-7.30 (m, 2 H), 7.25-7.22 (m, 2 H), 7.19-7.12 (m, 3 H), 5.59 (dd, 1 H, J = 15.0, 8.5 Hz), 5.42 (dd,1 H, J = 15.0, 5.0 Hz), 4.42-4.41 (m, 1 H), 4.35-4.34 (m, 2 H), 4.20-4.18 (m, 1 H), 4.12-4.03 (m, 2 H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 3.38-3.34 (m, 1 H), 3.18-3.10 (m, 3 H), 2.79 2.74 (m, 1 H), 1.90-1.62 (m, 9 H), 1.45-1.07 (m, 25 H), 0.89-0.85 (m, 6 H).

Paso 6 : síntesis de ferc-butil N-[(4S,5£,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-yl)oxi]carbonil}amino)-1-[(propan-2-il)carbamoil]pentil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXVII)

[0479] A una solución del compuesto 326 (350 mg, 0.41 mmol) en CH₂Ch (15 mL) se añadió DBU (313 mg, 2.1 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 min. Se añadieron DMAP (100 mg, 0.82 mmol) y compuesto 266 (296 mg, 0.82 mmol) a la mezcla. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h, se diluyó con CH₂Ch (50 mL) y se lavó con H ₂O (3 * 20 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1% en eluyente) para obtener el denominado producto XXXVII (75 mg, 22 %) en forma de un sólido rosa.

[0480] MS (ESI): [M H+] = 826.7.

Ejemplo XXXVIII y XXXIX

(S)-Metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,£)-2-bencil-5-((íerc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXVIII) y (S)-metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,£)-2-bencil-5-((íerc-butoxicarbonii)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXIX)

[0481]

Paso 1: síntesis de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)pentanoato (332)

[0482] A una solución de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-aminopentanoato (331, 1.0 g, 2.5 mmol) y (S)-2-((íerc-butoxicarbonil)amino)-3-ácido metilbutanoico (705 mg, 3.3 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) se añadieron T3P (2.2 g, 3.3 mmol) y DIPEA (645 g, 5.0 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante l 6 h. La mezcla de la reacción se extrajo con CH₂Cl2 (3 x 10 mL). La mezcla de la reacción se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (5 mL, 1 M) y solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO₄y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = 5 : 1 - 1 : 1) para dar el producto 332 (1.0 g, 91 %) en forma de un sólido blanco.

[0483] MS (ESI): [M H+] = 568.4.

Paso 2: síntesis de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)pentanoato (333)

[0484] Se agitó una solución del compuesto 332 (1.0 g, 1.8 mmol) en HCl en MeOH (20 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 333 (841 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0485] MS (ESI): [M H+] = 468.2.

Paso 3: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-1-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-1-metoxi-1-oxopentan-2-il)amino)-3-metil-1 -oxobutan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1 -carboxilato (334)

[0486] A una solución del compuesto 333 (905 mg, 1.8 mmol) y (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (464.0 mg, 2.2 mmol) en CH₂Ch (10 mL) se añadieron T3P (731 mg, 2.3 mmol) y DIPEA (510 g, 4.0 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). La fase orgánica se lavó con HCl acuoso (10 mL, 1 M), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL) y se secó con Na2SO4. La fase orgánica se concentró a presión reducida para dar el producto 334 (110 mg, 28 %) en forma de una espuma blanca.

[0487] MS (ESI): [M H+] = 665.5.

Paso 4: síntesis de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonN)ammo)-2-((S)-3-metil-2-((S)-pirroMdma-2-carboxamido)butanamido)pentanoato (335)

[0488] Se agitó una solución del compuesto 334 (0.96 g, 1.4 mmol) en HCl en MeOH (20 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 335 (840 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0489] MS (ESI): [M H+] = 565.3.

Paso 5: síntesis de (S)-metil 5-((((9H-fluoren-9-il) metoxi) carbonil) amino) -2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)pentanoato (336)

[0490] A una solución del compuesto 335 (0.84 g, 1.4 mmol) y (2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 606 mg, 1.7 mmol) en CH₂Ch (10 mL) se añadieron T3P (572 g, 1.8 mmol) y DIPeA (400 mg, 3.1 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 * 10 mL). La fase orgánica se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), y se secó con Na₂SO4. La fase orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 336 (810 mg, 90 %) en forma de un sólido blanco.

[0491] MS (ESI): [M H+] = 908.7.

Paso 6 : síntesis de (S)-metil 5-ammo-2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((íerc-butoxicarbonM)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)pentanoato (337)

[0492] Se añadió una solución de TBAF (5 % en peso en THF, 6 mL) a 0 °C a una solución del compuesto 336 (680 mg, 0.75 mmol) en DMF (8 mL). La reacción se agitó durante 30 min. La mezcla del compuesto 337 (514 mg, 100 %) se usó para el siguiente paso sin tratamiento.

[0493] MS (ESI): [M H+] = 686.5.

Paso 7: síntesis de (S)-metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((íerc-butoxicarbonM)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXVIII)

[0494] A una solución del compuesto 337 (514 mg, 0.75 mmol) y 1,3-dioxoisoindolin-2-il (1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbonato (266) (325 mg, 0.9 mmol) en CH₂Ch (8 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (194 mg, 1.5 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 2 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 * 10 mL). La capa orgánica combinada se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXVIII (75 mg, 11 %) en forma de un sólido rojo.

[0495] MS (ESI): [M H+] = 884.7

Paso 8 : (S)-metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,£)-2-bencil-5-((íerc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXIX)

[0496] A una solución del compuesto XXXVIII (40 mg, 0.05 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (8.0 mg, 0.05 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXIX (25 mg, 63 %) en forma de un sólido blanco.

[0497] MS (ESI): [M H+] =885.8.

Ejemplo XXXX y XXXXI de referencia

(S)-1-Oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXX) y (S)-1 -hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidma-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXXI)

[0498]

Paso 1: síntesis de (S)-1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il 2-((S)-1-((2S,5S,E) -2-bencil-5-((tercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXX)

[0499] A una solución del compuesto 64 (380 mg, 0.54 mmol) y 4-hidroxi-TEMPO (112 mg, 0.65 mmol) en CH₂CI2 (5 mL) a 0 °C se añadieron T3P (446 mg, 1.4 mmol), y DIPEA (153 mg, 1.2 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se diluyó con CH₂Ch (5 mL) y se lavó con NaHCO3 acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), y se secó con Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXX (90 mg, 19 %) en forma de un sólido rojo.

[0500] MS (ESI): [M H+] = 861.7.

Paso 2: síntesis de (S)-1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il 2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((tercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-5-(((benciloxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXXI)

[0501] A una solución del compuesto XXXX (60 mg, 0.07 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (13 mg, 0.07 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo resultante se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXI (36 mg, 60 %) en forma de un sólido blanco.

[0502] MS (ESI): [M H+] = 862.7.

Ejemplo XXXXII y XXXXIII de referencia

1-Oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidm-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)carbamoil]butil]carbamato (XXXXII) y 1-Hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(tercbutoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (XXXXIII)

[0503]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil ferc-butil (5-((1-oxN-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-N)ammo)-5-oxopentano-1,4-diil)dicarbamato (342)

[0504] A una solución del compuesto 341 (1.0 g, 2.2 mmol) y 4-AT (451 mg, 2.64 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) se añadieron T3P (909 mg, 2.86 mmol), y DIPEA (369 mg, 2.86 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se diluyó con CH₂Cl2 (10 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con Na2sO₄. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar el producto bruto 2 (0.8 g, 62 %) en forma de un sólido rojo.

[0505] MS (ESI): [M H+] = 608.3.

Paso 2: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (4-amino-5-((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)-5-oxopentil)carbamato (343)

[0506] Se agitó una solución del compuesto 342 (0.8 g, 1.3 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 343 (654 mg, 100 %) en forma de un sólido blanco.

[0507] MS (ESI): [M H+] = 509.2.

Paso 3: síntesis de (S)-ferc-butil 2-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi) carbonil) amino)-1-((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)-1 -oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1 -carboxilato (344)

[0508] A una solución del compuesto 343 (654 mg, 1.29 mmol) y (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (333 mg, 1.55 mmol) en CH₂Cl2 (5 mL) se añadieron T3P (1.1 g, 1.68 mmol), y DIPEA (366 mg, 2.84 mmol) a 0 °C. Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se diluyó con CH₂Q 2 (5 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (5 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), se secó con Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar el producto bruto 344 (630 mg, 69 %) en forma de un sólido amarillo.

[0509] MS (ESI): [M H+] = 706.3

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-5-((1-hydroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)-5-oxo-4-((S)-pirrolidina-2-carboxamido)pentil)carbamato (345)

[0510] Se agitó una solución del compuesto 344 (630 mg, 0.89 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) a 25 °C durante 2 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 345 (538 mg, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0511] MS (ESI): [M H+] = 606.4.

Paso 5: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(4S)-4-t[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencN-5-{[(íerc-butoxi)carbonN]ammo}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il] formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (346)

[0512] A una solución del compuesto 345 (0.3 g, 0.5 mmol) y (2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59) (217 mg, 0.6 mmol) en CH₂Ch (5 mL) a 0 °C se añadieron T3P (420 mg, 0.65 mmol, 50 % en EtOAc) y DIPEA (142 mg, 1.1 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se diluyó con CH₂Ch (10 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso, solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), y se secó con Na₂SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar el producto bruto 346 (220 mg, 46 %) en forma de un sólido amarillo.

[0513] MS (ESI): [M H+] = 949.8.

Paso 6 : síntesis de íerc-butil ((4S,7S,E)-8-((S)-2-(((S)-5-ammo-1-((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-N)ammo)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidin-1-il)-7-bencil-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il)carbamato (347)

[0514] A una solución del compuesto 346 (220 mg, 0.23 mmol) en CH₂Ch (5 mL) se añadió DBU (70 mg, 0.46 mmol) a 25 °C. La reacción se agitó a 25 °C durante 30 min. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 347 (167 mg, 100 %) en forma de un aceite rojo sin purificación para usarse en el siguiente paso.

[0515] MS (ESI): [M H+] = 727.6.

Paso 7: síntesis de 1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íercbutoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil] pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil]butil]carbamato (XXXXII)

[0516] A una solución del compuesto 347 (167 mg, 0.23 mmol) y 1, 3-dioxoisoindolin-2-il (1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbonato (266) (159 mg, 0.46 mmol) en CH₂Ch (5 mL) a 0 °C se añadió DIPEA (60 mg, 0.46 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. Después de añadir CH₂Ch (10 mL), la fase orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), y se secó con Na₂SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXII (80 mg, rendimiento 38 %) en forma de un sólido rojo.

[0517] MS (ESI): [M H+] = 924.8.

Paso 8 : síntesis de 1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(íercbutoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-4-[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)carbamoil] butil] carbamato (XXXXIII)

[0518] A una solución del compuesto XXXXII (70 mg, 0.08 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (13 mg, 0.08 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo resultante se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXIII (28 mg, 38 %) en forma de un sólido blanco.

[0519] MS (ESI): [M H+] = 925.8.

Ejemplo XXXXIV y XXXXV

íerc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencN-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-oxM-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-N)oxi]carboml}ammo)-1-[(propan-2-il) carbamoil]butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXIV) y íerc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-N)oxi]carbonN}ammo)-1-[(propan-2-il) carbamoil]butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXV)

[0520]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (5-(isopropilamino)-5-oxopentano-1,4-diil)dicarbamato (352)

[0521] A una solución del compuesto 351 (700 mg, 1.54 mmol) y propan-2-amina (136 mg, 2.31 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (1.3 g, 2.0 mmol) y DIPEA (300 mg, 3.31 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con NaHCO3 acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (10 mL, 1 M), solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), y se secó con Na₂SO4. El residuo se concentró en vacío y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 352 (580 mg, 76 %) en forma de una espuma blanca.

[0522] MS (ESI): [M H+] = 496.2.

[0523] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) 57.77-7.76 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 7.59-7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.41-7.39 (t, J = 4.0, 8.0 Hz, 2 H), 7.37-7.32 (d, J = 4.0, 4.0 Hz, 2 H), 6.18 (s, 1 H), 5.20-5.19

[0524] (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 5.03 (s, 1 H), 4.43-4.0- (m, 5 H), 3.38 (s, 1 H), 3.18-3.15 (m, 1 H), 1.78 (s, 1 H), 1.58 (s, 3 H), 1.44 (s, 9 H), 1.14-1.09 (s, 6 H).

Paso 2: síntesis de (S )-(9H-fluoren-9-il)metil (4-amino-5-(isopropilamino)-5-oxopentil)carbamato (353)

[0525] Se agitó una solución del compuesto 352 (580 mg, 1.17 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) a 25 °C durante 2 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 353 (462 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0526] MS (ESI): [M H+] = 396.1.

Paso 3: síntesis de (S)-terc-butil 2-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil) amino)-1-(isopropilamino)-1-oxopentan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (354)

[0527] A una solución del compuesto 353 (462 mg, 1.17 mmol) y (S)-1-(fe/'c-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (302 mg, 1.4 mmol) en CH₂Cl2 (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (484 mg, 1.5 mmol) y DlpEA (302 mg, 2.34 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), HCl acuoso (10 mL, 1 M), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), y se secó con Na2SO₄. El disolvente se eliminó en vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 354 (490 mg, 85 %) en forma de una espuma blanca.

[0528] MS (ESI): [M H+] = 593.4.

[0529] RMN de 1H: (400 MHz, CDCh) 87.76-7.74 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.58-7.57 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 7.40-7.37 (t, J = 4.0, 8.0 Hz, 2 H), 7.30-7.28 (t, J = 4.0, 4.0 Hz, 2 H), 6.97 (s, 1 H), 6.71 (s, 1 H), 5.25 (s, 1 H), 4.45-4.18 (m, 5 H), 4.0 (s, 1 H), 3.46-3.14 (m, 4 H), 2.11 (s, 3 H), 1.93-1.73 (s, 3 H), 1.62-1.55 (m, 3 H), 1.43 (s, 9 H), 1.12-1.11 (d, J = 4.0 Hz, 6 H).

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-5-(isopropilammo)-5-oxo-4-((S)-pirrolidma-2-carboxamido)pentil)carbamato (355)

[0530] Una solución del compuesto 354 (490 mg, 1.0 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) se agitó a 25 °C durante 2 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 355 (392 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0531] MS (ESI): [M H+] = 493.3.

Paso 5: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(ferc-butoxi)carboml]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il] formamido}-4-[(propan-2-il)carbamoil]butil]carbamato (356)

[0532] A una solución del compuesto 355 (392 mg, 0.80 mmol) y (2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 346 mg, 0.96 mmol) en CH₂Ch (5 mL) a 0 °C se añadieron T3P (318 mg, 1.0 mmol) y DIPEA (220 g, 1.7 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de la reacción se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 * 10 mL). La capa orgánica combinada se lavó con HCl acuoso (10 mL, 1 M), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL) y se secó con Na2SO4. Después, el residuo se concentró en vacío y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 356 (320 mg, 48 %) en forma de una espuma blanca.

[0533] MS (ESI): [M H+] = 836.5.

[0534] RMN de 1H: (400 MHz, CDCh) 87.76-7.75 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 7.59-7.58 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 7.40-7.38 (t, J = 40, 40 Hz, 2 H), 7.31-7.29 (t, J = 40, 40 Hz, 2 H), 7.24-7.23 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 7.19-7.17 (t, J = 4.0, 4.0 Hz, 1 H), 7.14 7.13 (d, J = 4.0 Hz, 2 H), 6.86-6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.49-6.48 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 5.61-5.57 (m, 1 H), 5.39-5.34 (m, 1 H), 5.15-5.13 (m, 1 H), 4.43-4.32 (m, 3 H), 4.21-4.19 (t, J = 4.0, 4.0 Hz, 1 H), 4.07-4.03 (m, 1 H), 3.53 (s, 1 H), 3.38-3.32 (m, 1 H), 3.19-3.12 (m, 2 H), 2.78-2.75 (m, 1 H), 2.07-1.18 (m, 4 H), 1.79-1.63 (m, 6 H), 1.54 -1.41 (m, 12 H), 1.28-1.14 (m, 9 H), 0.87-0.82 (m, 6 H).

Paso 6 : síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carbonil}amino)-1-[(propan-2-il) carbamoil]butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXIV)

[0535] A una solución del compuesto 356 (320 mg, 0.38 mmol) en CH₂Ch (5 mL) se añadió DBU (289 mg, 1.9 mmol) a 25 °C. La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 30 min y se usó en el siguiente paso sin purificación. La mezcla se trató con 1,3-dioxoisoindolin-2-il (1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbonato (266) (262 mg, 0.76 mmol) y DIPEA (98 mg, 0.76 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 30 min, luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Ch (3 * 20 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se concentraron en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXVI (150 mg, 49 %) en forma de un sólido rojo.

[0536] MS (ESI): [M H+] = 812.6.

Paso 7: síntesis de ferc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carbonil}amino)-1-[(propan-2-il) carbamoil]butil]carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXV)

[0537] A una solución del compuesto XXXXIV (70 mg, 0.09 mmol) en MeOH seco (2 mL) se añadió Vc (16.0 mg, 0.09 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 30 min, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo resultante se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 x 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXV (50 mg, 68 %) en forma de un sólido blanco.

[0538] MS (ESI): [M H+] = 813.6.

Ejemplo XXXXVI

(S)-Ciclohexil 2-((R)-1-((2S,5S,£)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoN)pirroNdma-2-carboxamido)-6-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)hexanoato (XXXXVI)

[0539]

Paso 1: síntesis de (S)-ciclohexil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)hexanoato (362)

[0540] A una solución del compuesto 361 (700 mg, 1.6 mmol) y ciclohexanol (190 mg, 1.9 mmol) en CH₂Ch (5 mL) at 0 °C se añadieron DCC, debería estar definido en la lista de abreviaturas, (392 mg, 1.9 mmol), y D^mA^p(232 mg, 1.9 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se apagó con agua (10 mL), y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL), la fase orgánica se lavó con NaHCO₃acuoso, solución acuosa saturada de salmuera (3 x 20 mL), y se secó con Na₂SO4. Los residuos se concentraron a presión reducida para dar el producto bruto 362 (570 mg, 65 %) en forma de un sólido blanco.

[0541] MS (ESI): [M H+] = 551.2.

Paso 2: síntesis de (S)-ciclohexil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-aminohexanoato (363)

[0542] Una solución del compuesto 362 (570 mg, 1.04 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) se agitó a 25 °C durante 2 h y luego el disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 363 (468 mg, 100 %) en forma de una espuma blanca.

[0543] MS (ESI): [M H+] = 451.1.

Paso 3: síntesis de (R)-íerc-butil 2-(((S)-6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi) carbonil) amino)-1-(ciclohexNoxi)-1-oxohexan-2-il)carbamoil)pirrolidina-1-carboxilato (364)

[0544] A una solución del compuesto 363 (468 mg, 1.04 mmol) y (R)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (268 mg, 1.25 mmol) en CH₂Ch (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (860 mg, 1.35 mmol, 50 % en EtOAc), y DIPEA (295 mg, 2.3 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla de la reacción se diluyó con CH₂Ch (10 mL), se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (5 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL), se secó con Na2SO4 y se concentró en vacío para dar el producto bruto 364 (530 mg, 82 %) en forma de un sólido blanco.

[0545] MS (ESI): [M H+] = 648.3.

Paso 4: síntesis de (S)-ciclohexil 6-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-((R)-pirrolidina-2-carboxamido)hexanoato (365)

[0546] Se agitó una solución del compuesto 364 (530 mg, 0.82 mmol) en HCl en MeOH (10 mL, 3 M) a 25 °C durante 3 h. El disolvente se eliminó en vacío para dar el producto 365 (449 mg, 100 %) en forma de un aceite incoloro.

[0547] MS (ESI): [M H+] = 548.3.

Paso 5: síntesis de (S)-ciclohexil 6-((((9H-fluoren-9-N)metoxi)carbonM)ammo)-2-((R)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((tercbutoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)hexanoato (366)

[0548] A una solución del compuesto 365 (449 mg, 0.82 mmol) y (2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 355 mg, 0.98 mmol) en CH₂Ch (10 mL) a 0 °C se añadieron T3P (623 mg, 0.98 mmol, 50 % en EtOAc), y DIPEA (233 mg, 1.8 mmol). Se dejó que la mezcla de la reacción se calentara hasta alcanzar los 25 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se apagó con agua (10 mL) y se extrajo con EtOAc (3 * 10 mL). La fase orgánica combinada se lavó con NaHCO₃acuoso al 5 % (10 mL), solución acuosa saturada de salmuera (3 * 20 mL) y se secó con Na₂SO4. Los residuos, después de concentrarse en vacío, se purificaron mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = de 3 : 1 a 1 : 1) para dar el producto 366 (380 mg, 52 %) en forma de un sólido blanco.

[0549] MS (ESI): [M H+] = 891.8.

Paso 6: síntesis de (S)-ciclohexil 6-ammo-2-((R)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((íerc-butoxicarbonM)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)hexanoato (367)

[0550] A una solución del compuesto 366 (380 mg, 0.43 mmol) en CH₂Ch (5 mL) se añadió DBU (327 mg, 2.15 mmol) a 25 °C, y se agitó la reacción a 25 °C durante 30 min. El disolvente se eliminó para dar el producto 367 (293 mg, 100 %) en forma de un aceite amarillo, que se usó en el siguiente paso sin purificación.

[0551] MS (ESI): [M H+] = 669.9.

Paso 7: síntesis de (S)-ciclohexil 2-((R)-1-((2S,5S,E)-2-bencN-5-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-6-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)hexanoato (XXXXVI)

[0552] Se trató una solución del compuesto bruto 367 (293 mg, 0.43 mmol) en CH₂Ch seco (5 mL) a 0 °C con 1,3-dioxoisoindolin-2-il (1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) carbonato (266) (178 mg, 0.52 mmol) y DIPEA (67 mg, 0.52 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25 °C durante 30 min, se diluyó con CH₂Ch (10 mL) y luego se apagó con solución acuosa saturada de NH4O (20 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con CH₂Ch (10 mL), y las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se concentraron en vacío. El residuo se purificó mediante CLAR preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), HCl al 0.1 % en eluyente) para dar el producto XXXXVI (35 mg, 10 %) en forma de un sólido rojo.

[0553] MS (ESI): [M H+] = 867.6.

Ejemplo XXXXVII

ferc-Butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1 S)-1 -{[(1 S)-4-({[(1 -oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidm-4-il)oxi]carbonil}amino)-1 -[(propan-2 -il)carbamoil]butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pirrolidm-1-il]-2 -metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXVII)

[0554]

Paso 1: síntesis de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil ferc-butil (5-(isopropilamino)-5-oxopentano-1,4-diil)dicarbamato (372)

[0555] A una solución del compuesto 371 (1 g, 2.2 mmol), propan-2-amina (389 mg, 6.6 mmol), DIPEA (851 mg, 6.6 mmol) en DCM (30 mL) se añadió T3P (1.82 g, 2.9 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 10 h, y luego se concentró al vacío. Se añadió EA (100 mL) al residuo y se lavó con H₂O (3 x 50 mL). Se recogió la fase orgánica después de que se secara con Na₂SO4 y se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 372 (1.09 g, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0556] MS (ESI): [M H+] = 496.1.

Paso 2: síntesis de (S )-(9H-fluoren-9-il)metil (4-amino-5-(isopropilamino)-5-oxopentil)carbamato (373)

[0557] Al compuesto 372 (1.09 g, 2.2 mmol) se añadieron HCl en MeOH (15 mL, 3 M) y EA (15 mL), luego la mezcla se agitó a 25 °C durante 0.5 h. La solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 373 (870 mg, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0558] MS (ESI): [M H+] = 396.2.

Paso 3: síntesis de (9H-fluoren-9-il) metil N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(terc-butoxi)carboml]ammo}-3-metilbutanamido]-4-[(propan-2-il)carbamoil]butil]carbamato (374)

[0559] A una solución del 373 (870 mg, 2.2 mmol), (S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-3-ácido metilbutanoico (477 mg, 2.2 mmol), DIPEA (851 mg, 6.6 mmol) en DCM (30 mL) se añadió T3P (1.82 g, 2.9 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h y se concentró en vacío. Se añadió ^eA (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H₂O (3 x 50 mL). Se recogió la fase orgánica después de que se secara con Na₂SO4 y se concentró en vacío para obtener el denominado compuesto 374 (1.31 g, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0560] MS (ESI): [M H+] = 595.3.

Paso 4: síntesis de (9H-fluoren-9-il)metil N-[(4S)-4-[(2S)-2-ammo-3-met¡lbutanam¡do]-4-[(propan-2-¡l)carbamo¡l] butil] carbamato (375)

[0561] Se añadieron el 374 (1.31 g, 2.2 mmol) y HCl en MeOH (20 mL, 3M) a un matraz de un solo cuello de 50 mL, luego se agitó la mezcla a 25 °C durante 1 h. La solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 5 (1.09 g, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0562] MS (ESI): [M H+] = 495.3.

Paso 5: síntesis de (S )-terc-butil 2-(((S)-1-(((S)-5-((((9H-fluoren-9-¡l)metox¡)carboml)ammo)-1-(¡soprop¡lammo)-1-oxopentan-2-il)am¡no)-3-met¡l-1-oxobutan-2-¡l)carbamo¡l)p¡rrol¡d¡na-1-carbox¡lato (376)

[0563] A una solución del 375 (1.09 g, 2.2 mmol), (S)-1-(ferc-butoxicarbonil)pirrolidina-2-ácido carboxílico (710 mg, 3.3 mmol), DIPEA (851 mg, 6.6 mmol) en DCM (30 mL) se añadió T3P (1.82 mg, 2.8 mmol) a 0 °C.

[0564] Se agitó la mezcla a 25 °C durante 2 h, luego se concentró al vacío. Se añadió EA (100 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 50 mL). Se recogió la fase orgánica después de que se secara con Na₂SO4 y se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 376 (1.52 g, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0565] MS (ESI): [M H+] = 692.4.

Paso 6 : síntes¡s de (9H-fluoren-9-¡l)met¡l ((S)-5-(¡soprop¡lam¡no)-4-((S)-3-met¡l-2-((S)-p¡rrol¡d¡na-2-carboxam¡do)butanam¡do)-5-oxopent¡l)carbamato (377)

[0566] A la solución de EA (10 mL) del 376 (800 mg, 1.16 mmol) se añadió HCl en MeOH (10 mL, 3 M) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 0.5 h. La solución orgánica se concentró al vacío para obtener el denominado compuesto 377 (684 mg, 100 %) en forma de un sólido amarillo.

[0567] MS (ESI): [M H+] = 592.2.

Paso 7: síntes¡s de (9H-fluoren-9-¡l)met¡l N-[(4S)-4-[(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(tercbutox¡)carbon¡l]am¡no}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-3-met¡lbutanam¡do]-4-[(propan-2-¡l)carbamo¡l]but¡l]carbamato (378)

[0568] A una solución del 377 (592 mg, 1 mmol), (2S, 5S, E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-ácido enoico (59, 453 mg, 1.25 mmol), DIPEA (387 mg, 3 mmol) en Dc M (30 mL) se añadió T3P (827 mg, 1.3 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 10 h, y luego se concentró en vacío. Se añadió EA (50 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 50 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró en vacío, y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE/EA = 1 : 1) para obtener el denominado compuesto 378 (580 mg, 62 %) en forma de un sólido amarillo.

[0569] MS (ESI): [M H+] = 935.6.

[0570] RMN de 1H (400 MHz, CDCh) 87.76-7.75 (m, 2 H), 7.59-7.57 (m, 2 H), 7.41-7.37 (m, 2 H), 7.32-7.28 (m, 2 H), 7.24-7.11 (m, 5 H), 5.65-5.30 (m, 2 H), 4.53-3.99 (m, 8 H), 3.74-3.09 (m, 6 H), 2.77-2.75 (m, 1 H), 2.29-1.84 (m, 8 H), 1.52 0.79 (m, 36 H).

Paso 8 : síntes¡s de terc-but¡l N-[(4S,5E,7S)-7-benc¡l-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡dm-4-¡l)ox¡]carbon¡l}am¡no)-1-[(propan-2-¡l)carbamo¡l]but¡l] carbamo¡l}-2-met¡lprop¡l]carbamo¡l}p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-2-met¡l-8-oxooct-5-en-4-¡l] carbamato (XXXXVII)

[0571] A una solución del 378 (200 mg, 0.21 mmol) en DCM (5 mL) se añadió DBU (163 mg, 1.07 mmol). Después de agitar a 25 °C durante 0.5 h, se añadió 1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il carbonochloridate (56 mg, 0.25 mmol). La mezcla se agitó durante 4 h a 25 °C. Se añadió DCM (50 mL) al residuo y la capa orgánica se lavó con H ₂O (3 * 50 mL). La fase orgánica se secó con Na₂SO4 y se concentró y se purificó mediante c La R preparativa (Venusil XBP C18 (5 um, 30 * 250 mm), NH3 H ₂O al 0.5% en eluyente) para obtener el denominado producto Xx Xx VII (0.4 mg, 0.2 %) en forma de un sólido rosa.

[0572] MS (ESI): [M H+] = 911.6.

Ejemplo XXXXVNI. Cribado primario mediante ensayo de ferroptosis

[0573] Líneas celulares y medios: Se obtuvieron células HT-1080 (fibrosarcoma) de la American Type Culture Collection. Se cultivaron células en medios EMEM, FBS inactivado por calor al 10 % y mezcla de penicilina-estreptomicina (Invitrogen). Se mantuvieron células a 37 °C y CO₂al 5 % en una incubadora de cultivo de tejidos.

[0574] Ensayo de viabilidad celular. Sembrar 10000 células/pocillo de HT-1080 con 195 uL de medio de crecimiento en placas de 96 pocillos de fondo negro y transparente (Cat# Corning3904) y dejar que las células se adhieran durante la noche. Al día siguiente, diluir el compuesto de la prueba mediante dilución doble en 12 puntos con un medio que contenga 400 ^M de erastina. Transferir 5 uL de la solución de los compuestos al medio de cultivo en pocillos por triplicado. 30 horas más tarde, añadir el reactivo de ensayo de viabilidad celular Cell Titer-Glo® Luminescent (Cat#, Promega G8081) para medir la viabilidad de las células HT-1080 de acuerdo con el protocolo de fabricación. En resumen, aspirar 100 uL del medio y añadir 50 uL del reactivo CellTiter-Glo® Luminescent a cada pocillo e incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente para estabilizar la señal luminiscente. Sellar las placas y centrifugar durante 1 minuto a 1000 rpm para eliminar las burbujas. Agitar las placas durante 1 minuto en un agitador orbital. Realizar la lectura de la placa para detectar la señal luminiscente mediante el lector EnSpire Multimode Plate Reader (PerkinElmer). El % de actividad restante se usa para evaluar la ferroptosis inducida por erastina en células HT-1080 y se expresa mediante la siguiente fórmula:

% de actividad restante = 100 * [(muestra - fondo _media )/ (vehículo - fondo ^{m e d ia} )] Muestra: Lectura del compuesto de ensayo

Vehículo: Lectura de la muestra del vehículo

Fondo: Lectura del tratamiento exclusivo con erastina

[0575] La curva dosis-respuesta se representa gráficamente por medio del análisis de regresión no lineal (ecuación de fórmula 201) en XLFit ( software complementario de Excel) para el % medio de actividad restante de los triplicados, y luego se calculan los valores de EC50. En este ensayo antiferroptosis se incluyen ferrostatina-1 y XJB-5-131 como referencia. Los criterios de aceptación se establecieron en base al resultado histórico, media ± de 2.58* de DE en la escala logarítmica, mientras que Z’ >0.5.

Tabla 1. Resumen de la inhibición de ferroptosis en célula HT-1080 de los compuestos de ejemplo

[0576] El compuesto de fórmula (I) preferiblemente tiene una IC₅₀menor de 1 ^jM, preferiblemente menor de 200 nM.

Ejemplo XXXXIX. Ensayo de apoptosis

[0577] Líneas celulares y medios. Se obtuvieron células 3T3-L1 de la American Type Culture Collection. Se cultivaron células en medios completos DMEM, FBS al 10 % y mezcla de penicilina-estreptomicina (Invitrogen). Se mantuvieron células a 37 °C y CO₂al 5 % en una incubadora de cultivo de tejidos.

[0578] Ensayo de apoptosis. El ensayo Caspase-Glo®3/7 de Promega utiliza un sustrato luminogénico que contiene la secuencia DEVD, que ha demostrado ser selectiva de la caspasa-3 y -7. Usamos este ensayo para cribar nuestros compuestos en función de la inhibición de apoptosis. En resumen, se sembraron 40 uL de 3000 células 3T3-L1 por pocillo en placas de 384 pocillos, se dejó que las células se adhirieran durante la noche. Al día siguiente, preparar la actinomicina D como el agente inductor de apoptosis en 100 uM de DMSO madre. Preparar los compuestos de la prueba en 10 mM de DMSO madre. Diluir en serie el compuesto en 10 puntos mediante dilución triple con DMSO. Tratar previamente las células 3T3-L1 con el compuesto de la prueba mediante la transferencia de 40 nL de concentración madre en serie en pocillos por triplicado mediante la transferencia acústica de fluido, incubar durante 2 horas. Después, transferir 40 nL de 100 j M de actinomicina D (la concentración final es de 100 nM) a los pocillos elegidos por medio de la transferencia acústica de fluido. Incubar las placas de ensayo a 37 °C, CO2 al 5 %, incubadora al 95 % de humedad durante 48 horas. Para el ensayo de caspasa, añadir 20 uL/pocillo de reactivo Caspase-Gio® 3/7 (Promega) a los pocillos de la prueba. Incubar durante 30 min a temperatura ambiente para estabilizar la señal luminiscente. Realizar la lectura de la placa para detectar la señal luminiscente mediante el lector EnSpire Multimode Plate Reader (PerkinElmer). Calcular el valor de EC50 por medio de la ecuación de fórmula 201: y = (A ((B - A) / (1 ((x /C)AD)))) del XLFit ( software complementario de Excel), donde

A: Media promedio de las muestras del vehículo

B: Media promedio de las células tratadas con 100 nM AcD

C: E C 50

D: HillSlope

Se usó el factor Z' para describir el rendimiento de la prueba de cribado. El valor del factor Z' fue >0.5 en todas las placas de la prueba, lo que indicó que el ensayo era apto y que el valor de IC₅₀era fiable para todos los compuestos analizados.

Tabla 2. Resumen de la inhibición de apoptosis en célula 3T3-L1 mediante actinomicina D de los compuestos de ejemplo.

[0579] El compuesto de fórmula (I) preferiblemente tiene una IC₅₀de menos de 10 j M, preferiblemente menos de 1 |jM.

Ejemplo XXXXXI. Modelo animal de lesión renal aguda (LRA) por isquemia-reperfusión (IR)

[0580] Se anestesiaron ratones con hidrato de cloral al 5 % (400 mg/kg hidrato de cloral al 5 %). Se indujo la isquemia renal bilateral mediante la aplicación de pinzas microvasculares no traumáticas alrededor de los pedículos renales derecho e izquierdo. Se confirmó la isquemia por el blanqueamiento de los riñones. Tras 30 minutos de isquemia, se retiraron las pinzas y se confirmó visualmente la reperfusión. No se sometió a isquemia a los animales intervenidos en cirugías placebo. Durante el intervalo de isquemia, se mantuvo hidratados a los animales con suero fisiológico infundido por vía intraperitoneal y se les mantuvo sobre almohadillas térmicas para que mantuvieran la temperatura corporal.

[0581] Se asignó a los animales al azar a los grupos siguientes: control simulado, IR con suero o IR con artículo de prueba (5.0 mg/kg, 15 mg/kg). El tratamiento se administró por vía subcutánea 2 h antes de la aparición de la isquemia, cuando apareció la reperfusión y 2 horas después de la reperfusión. Se recogieron muestras de suero y orina a las 24 horas y se almacenaron a -20 °C hasta su análisis. Se analizaron los marcadores oxidativos, y la histopatología por microscopía óptica y electrónica de los riñones en momentos diferentes tras la aparición de reperfusión durante 24 horas.

[0582] El efecto de los compuestos de ejemplo no solo disminuye la creatinina y el BUN a un nivel de funcionalidad normal, sino que también ha demostrado la protección frente al daño histológico del riñón en IR renal.

[0583] Por último, cabe señalar que existen otros modos para poner en práctica la invención. Por lo tanto, los modos de realización de la presente invención se deben describir como ejemplos, pero la presente invención no se limita a los contenidos descritos, se pueden hacer modificaciones adicionales dentro del alcance de la presente invención o los equivalentes añadidos en las cláusulas.

[0584] La referencia a lo largo de esta especificación a «un modo de realización», «algunos modos de realización», «otro ejemplo», «un ejemplo», «un ejemplo específico» o «algunos ejemplos» significa que un rasgo, una estructura, un material o una característica concreta descrita en relación con el modo de realización o ejemplo se incluye en al menos un modo de realización o ejemplo de la presente divulgación. Por consiguiente, la aparición de frases como «en algunos modos de realización», «en un modo de realización», «en otro ejemplo», «en un ejemplo», «en un ejemplo específico», o «en algunos ejemplos» en varios apartados a lo largo de esta especificación no se refiere necesariamente al mismo modo de realización o ejemplo de la presente divulgación. Además, se pueden combinar rasgos, estructuras, materiales o características concretos de cualquier manera adecuada en uno o más modos de realización o ejemplos.

[0585] Aunque se han mostrado y descrito modos de realización explicativos, los expertos en la materia entenderán que los modos de realización anteriores no deben interpretarse como limitativos de la presente divulgación, y se pueden realizar cambios, alternativas y modificaciones en los modos de realización sin alejarse del alcance de la presente divulgación.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto seleccionado de entre Compuesto (III), Compuesto (XXVIII), Compuesto (XXIV), Compuesto (XXX), Compuesto (XXXI), Compuesto (XXXII), Compuesto (XXXIII), Compuesto (XXXIV), Compuesto (XXXV), Compuesto (XXXVI), Compuesto (XXXVII), Compuesto (XXXVIII), Compuesto (XXXIX), Compuesto (XXXXIV), Compuesto (XXXXV), Compuesto (XXXXVI), y Compuesto (XXXXVII), o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, para su uso en un método de inhibición de la ferroptosis en un paciente:

2. Compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde la inhibición de la ferroptosis comprende prevenir, tratar o atenuar una enfermedad asociada a la ferroptosis.

3. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, donde el compuesto es (metil (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi) carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato) (111) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

4. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto es ((2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(l-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato) (XXIX) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

5. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto es (propan-2-il(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-5-({[(1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentanoato") (XXX) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

6. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto es (propan-2-il(2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-7-metiloct-3-enoil]pirrolidin-2-il]formamido}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)hexanoato) (XXXI) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

7. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto es ((S)-metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-3-metilbutanamido)-5-((((1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)pentanoato (XXXVIII) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

8. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto es ((S)-ciclohexil 2-((E)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metiloct-3-enoil)pirrolidina-2-carboxamido)-6-((((1-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi)carbonil)amino)hexanoato (XXXXVI) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

9. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto se selecciona de entre:

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(dietilcarbamoil)-4-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)-butil]carbamoil}pirrolidin-1-il/-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato) (XXXV);

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-benc¡l-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-(terc-but¡lcarbamoil)-5-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)oxi]carbonil}amino)pentil]-carbamoil}pirrolidin-1-il]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato) (XXXVI);

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)ox¡] carbonil}amino)-1-[(propan-2-il) carbamo¡l]but¡l]carbamo¡l}pirrol¡d¡n-1-¡l]-2-met¡l-8-oxooct-5-en-4-¡l]carbamato) (X^xX^xIV);

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-benc¡l-8-[(2S)-2-{[(1S)-4-({[(1-h¡drox¡-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)ox¡]carbon¡l} am¡no)-1-[(propan-2-¡l) carbamo¡l]but¡l]carbamo¡l}p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-2-met¡1-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato (XXXXV); y

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-benc¡l-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetramet¡lp¡perid¡n-4-¡l)ox¡]carbon¡l}am¡no)-1-[(propan-2-¡l)carbamo¡l]but¡l]carbamo¡l}-2-met¡lprop¡l]carbamoil}p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-il]carbamato) (XXXXVII);

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.

10. Compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el compuesto se selecciona de entre:

(terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-benc¡l-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-carbamo¡l-4-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetrametilp¡per¡d¡n-4-il)oxi]carbon¡l}am¡no-)but¡l] carbamoil}p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-2-metil-8-oxooct-5-en-4-¡l]carbamato) (xXVlII); (propan-2-il (2S)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-bencil-5-{[(terc-butox¡)carbon¡l]am¡no}-7-metiloct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-il]formam¡do}-6-[(1-ox¡l-2,2,5,5-tetramet¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)formam¡do]-hexanoato) (XXXII); ((2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(terc-butox¡)carbon¡l]amino}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-6-({[(1-oxil-2,2,6,6-tetramet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)ox¡]carbon¡l}am¡no)hexanoato) (XXXIII);

((S)-metil 2-((S)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-bencil-5-((terc-butox¡carbon¡l)am¡no)-7-metiloct-3-eno¡l)p¡rrol¡d¡na-2-carboxam¡do)-3-met¡lbutanam¡do)-5-((((1-h¡drox¡-2,2,6,6-tetrametilp¡per¡d¡n-4-¡l)oxi)carbonil)am¡no)pentanoato) (XXXIX);

((2R)-2-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-benc¡l-5-{[(terc-butox¡)carbon¡l]amino}-7-met¡loct-3-eno¡l]p¡rrol¡d¡n-2-¡l]formam¡do}-6-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetrametilp¡per¡d¡n-4-¡l)ox¡]carbon¡l}am¡no)ác¡do hexanoico) (XXXIV); y (terc-butil N-[(4S,5E,7S)-7-bencil-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[(1-ox¡l-2,2,6,6-tetramet¡lpiper¡d¡n-4-¡l)ox¡]carbon¡l}am¡no)-1-[(propan-2-¡l)carbamo¡l]pent¡l]carbamo¡l}p¡rrol¡d¡n-l-¡l]-2-met¡l-8-oxooct-5-en-4-¡l]carbamato (XXXVII); o

una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.