ES2917886T3 - Nuevos compuestos de lipofenol y utilizaciones de los mismos - Google Patents
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Abstract
La presente invención se relaciona con un compuesto de fórmula (i) en el que: - i es 0 o 1; J es 0 o 1; k es 0 o 1; - R1 y R2 son en particular H, (C1-C12) alquilo, o un grupo de fórmula C (O) R; - R es un radical alquilo, lineal o ramificado, que comprende al menos 19 átomos de carbono; - R3 es H y K = 0 cuando J = 1; o, cuando j = 0, r3 es -c (o) r o -l -c (o) r; - l, u y l“ son enlazadores; en donde, cuando j = 0, al menos uno de los grupos R1; R2 y R3 comprenden un radical R. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Nuevos compuestos de lipofenol y utilizaciones de los mismos
La presente invención se refiere a nuevos compuestos de lipofenol, a compuestos de lipofenol para la utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo, seleccionada de entre el grupo que consiste en: enfermedades inflamatorias e infecciosas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades metabólicas, cáncer, patologías retinianas, y enfermedades neurodegenerativas.
Las especies reactivas de carbonilo, tales como azúcares, a-dicarbonilos o metabolitos derivados de la oxidación de lípidos, están implicadas en las reacciones de glicación y reticulación de los nucleófilos (como las proteínas -reacciones de Maillard), y de este modo afectan la viabilidad celular provocando lesiones tisulares. Las patologías asociadas con el envejecimiento, tal como la degeneración macular relacionada con la edad (AMD), pero asimismo otras enfermedades neurodegenerativas tales como el Alzheimer y el Parkinson, son el resultado del estrés carbonílico, fuertemente relacionado con el estrés oxidativo.
Entre ellas, las patologías retinianas (AMD, principalmente) son un problema de salud pública importante en el mundo. Pruebas circunstanciales recopiladas durante varios años han implicado a la lipofuscina del epitelio pigmentario de la retina (RPE) en la etiología de la AMD atrófica y la degeneración macular genética como la enfermedad de Stargardt. Los componentes principales de la lipofuscina RPE son el conjugado bisretinoide A2E, sus fotoisómeros, y sus metabolitos oxidados. La biosíntesis patológica de A2E ocurre cuando las moléculas de todo-frans-retinal (AfR, constituyente clave del ciclo visual), en lugar de sufrir una reducción destoxificante a retinol, se acumulan y reaccionan con la fosfatidiletanolamina (PE) a través de un estrés dual carbonílico y oxidativo (COS) (N. L. Mata, J. Weng, G. H. Travis, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000, 41, S144-S144; y J. R. Sparrow, E. Gregory-Roberts, K. Yamamoto, A. Blonska, S. K. Ghosh, K. Ueda, J. Zhou, Prog. Retin. Eye Res. 2012, 31, 121-135). Este aldehído reactivo en sí asimismo presenta una toxicidad directa, implicada en la distrofia retiniana.
Así, se proponen derivados anti-COS, capaces de reducir la toxicidad del principal estresor carbonílico, AfR, para reducir la formación de A2E y ralentizar el ritmo de depósito de lipofuscina. La bibliografía reciente abordó la cuestión de la capacidad de los (poli)fenoles, que ya es conocido que son potentes antioxidantes, para atrapar asimismo entidades carbonílicas electrófilas tóxicas reactivas, demostrando que son potentes antiestresores carbonílicos (C. Y. Lo, W. T. Hsiao, X. Y. Chen, J. Food Sci. 2011, 76, H90-96; documentos WO 2009/063440 y WO 2009/063439).
Uno de ellos está representado por el floroglucinol, monómero de los abundantes florotaninos en las algas pardas, principio activo de los fármacos espasmolíticos comercializados, y que ya se ha identificado que reduce los daños por estrés oxidativo en células cultivadas. Se ha dado a conocer recientemente la eficacia del floroglucinol para eliminar la acroleína, 4-hidroxi-frans-2-nonenal (HNE) (dos aldehídos tóxicos a,p-insaturados derivados de la peroxidación de lípidos) y metilglioxal) en condiciones fisiológicas. Una desventaja del uso de dicho compuesto para tratar patologías de la retina es su baja solubilidad en lípidos, lo que afectaría la biodisponibilidad y reduciría las concentraciones plasmáticas.
El documento WO 2005/069998 A2 describe un compuesto activador de sirtuina.
SAMPLI, POLYXENI ET AL describen "Schimperiol, a new meroterpenoid from the brown alga Stypopodium schimperi", NATURAL PRODUCT LETTERS, 14(5), 365-372, 2000, DOI: 10.1080/10575630008043769 como compuesto anticancerígeno.
El documento WO2012/032509 describe conjugados de ácidos grasos poliinsaturados, en particular el compuesto MWL080, como inhibidores de COX-2, y su utilización para tratar la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, y Matsuyama et al. (Bioorganic & Medicinal chemistry letters, vol 9, n014, 19 de julio de 1999) describen los compuestos 2 y 3 y su utilización como inhibidores de ACAT para el tratamiento de hipocolesterolemia y arteriosclerosis, pero ninguno de estos documentos describe los compuestos de la presente invención ni su actividad biológica anti-COS.
De este modo, existe la necesidad de mejorar la eficacia de los derivados anti-COS, y especialmente de mejorar la biodisponibilidad de tales derivados anti-COS.
Un objetivo de la presente invención es proporcionar nuevos compuestos que presenten una actividad anti-COS.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos que presenten una actividad anti-COS con una liposolubilidad mejorada.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos que presenten una actividad anti-COS con una biodisponibilidad mejorada.
Los objetos de la presente invención se definen en las reivindicaciones.
La presente descripción se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I):
en la que:
- i es 0 o 1;
- j es 0 o 1;
- k es 0 o 1;
- Ri se selecciona de entre el grupo que consiste en: H, radicales alquilo (C1-C12), cicloalquilo (C3-C6), y arilo (C6-Cio); o R1 puede formar un radical heterocicloalquilo con el átomo de oxígeno que lo porta; o R1 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define a continuación;
- R2 se selecciona de entre el grupo que consiste en: H, radicales alquilo (C1-C12), cicloalquilo (C3-C6), y arilo (C6-C10); o R2 puede formar un radical heterocicloalquilo con el átomo de oxígeno que lo porta; o R2 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define a continuación;
- R es un radical alquilo, lineal o ramificado, posiblemente interrumpido por uno o varios dobles enlaces, que presenta de 19 a 23 átomos de carbono, y en el que uno o varios átomos de hidrógeno pueden estar sustituidos por átomos de deuterio;
- R3 es H y k=0 cuando j=1; o, cuando j=0, R3 es un grupo de fórmula -C(O)R o -L-C(O)R, siendo R como se define anteriormente;
- L es un enlazador que presenta la fórmula (L1):
en la que:
- A1 es un radical alquileno que comprende de 3 a 6 átomos de carbono;
- X1 es un radical -C(O)- o un radical alquileno que comprende de 1 a 6 átomos de carbono;
- X2 es un radical -C(O)- o un radical alquileno que comprende de 1 a 6 átomos de carbono;
- L' es un enlazador de fórmula -(A)p-(X)q-C(O)-, en la que:
• p es 1;
• q es 0 o 1;
• A es un radical alquileno que comprende de 1 a 6 átomos de carbono,
• X es -O-, -N(Rb)- o un radical alquileno que comprende de 1 a 6 átomos de carbono, siendo Rb H o un grupo alquilo que comprende de 1 a 6 átomos de carbono;
- L" es un enlazador seleccionado de entre el grupo que consiste en: radicales arileno (C6-C i0), alquileno (Ci-C i2), alquileno (C1-C12)-arileno (C6-C10), arileno (C6-C10)-alquileno (C1-C12), -CH=CH-arileno (C6-C10), y alquileno (C1-C12)-CH=CH-arileno (C6-C10); en la que, cuando j=0, por lo menos uno de los grupos R1, R2 y R3 comprende un radical R; siempre que el compuesto de fórmula (I) sea distinto del siguiente compuesto:
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables, para la utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo, seleccionada de entre el grupo que consiste en: enfermedades inflamatorias e infecciosas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades metabólicas, cáncer, patologías retinianas, y enfermedades neurodegenerativas.
En el contexto de la presente invención:
- la expresión "Ct-Cz" significa una cadena basada en carbono que puede presentar de t a z átomos de carbono; por ejemplo, C1-C3 significa una cadena basada en carbono que puede presentar de 1 a 3 átomos de carbono;
- la expresión "un grupo alquilo" significa: un grupo alifático hidrocarbonado, saturado, lineal o ramificado, que comprende, a menos que se indique lo contrario, de 1 a 12 átomos de carbono. A título de ejemplo, se pueden citar los grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, o pentilo;
- el término "alquileno" (o "alquilideno") se refiere a un radical hidrocarbonado divalente, que puede ser lineal o ramificado, que comprende de t a z átomos de carbono, y en particular de 1 a 12 átomos de carbono, y preferentemente de 1 a 6 átomos de carbono. Cuando dicho radical es lineal, se puede representar por la fórmula (CH2)k, en la que k es un número entero que varía de t a z , y en particular de 1 a 12, y preferentemente de 1 a 6;
- la expresión "un grupo cicloalquilo" significa: un grupo cíclico basado en carbono que comprende, a menos que se mencione de otro modo, de 3 a 6 átomos de carbono. A título de ejemplo, se pueden citar los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc.;
- la expresión "grupo arilo" significa: un grupo aromático cíclico que comprende entre 6 y 10 átomos de carbono. A título de ejemplo de grupos arilo, se pueden citar los grupos fenilo o naftilo;
- el término "arileno" se refiere a un sistema anular hidrocarbonado monocíclico, bicíclico o tricíclico, aromático, que comprende de 6 a 14 átomos de carbono, en el que cualquier átomo anular capaz de sustitución puede estar sustituido con un sustituyente. Un grupo arileno preferido es fenileno;
- la expresión "un heterocicloalquilo" significa: un grupo monocíclico o bicíclico, saturado o parcialmente insaturado, de 4 a 10 miembros, que comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, S o N; el grupo heterocicloalquilo puede estar unido al resto de la molécula mediante un átomo de carbono o mediante un heteroátomo; la expresión heterocicloalquilo bicíclico incluye biciclos condensados y anillos de tipo espiro.
A modo de heterocicloalquilo saturado que comprende de 5 a 6 átomos, se puede citar oxetanilo, tetrahidrofuranilo, dioxolanilo, pirrolidinilo, azepinilo, oxazepinilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, tetrahidrotiofenilo, ditiolanilo, tiazolidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, dioxanilo, morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, tetrahidrotiopiranilo, ditianilo, tiomorfolinilo, o isoxazolidinilo.
Cuando el heterocicloalquilo está sustituido, la o las sustituciones pueden estar en uno (o más) átomo o átomos de carbono y/o en el o los heteroátomos. Cuando el heterocicloalquilo comprende varios sustituyentes, éstos pueden estar portados por un mismo átomo o por átomos diferentes.
Los radicales "alquilo", "cicloalquilo", "arilo", y "heterocicloalquilo" mencionados anteriormente pueden estar sustituidos con uno o más sustituyentes. Entre estos sustituyentes, se pueden mencionar los siguientes grupos: amino, hidroxilo, tiol, oxo, halógeno, alquilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, ariloxi, arilalcoxi, ciano, trifluorometilo,
carboxi, o carboxialquilo;
- la expresión "un átomo de halógeno" significa: un flúor, un cloro, un bromo, o un yodo;
- la expresión "un grupo alcoxi" significa: un radical -O-alquilo, en el que el grupo alquilo es como se definió anteriormente. A título de ejemplo, se pueden citar grupos -O-alquilo (C1-C4), y en particular el grupo -O metilo, el grupo -O-etilo, como grupo -O-alquilo de C3, el grupo -O-propilo, el grupo -O-isopropilo, y como grupo -O-alquilo de C4, el grupo -O-butilo, -O-isobutilo, u -O-terc-butilo;
- la expresión "un alquiltio" significa: un grupo -S-alquilo, siendo el grupo alquilo como se define anteriormente;
- la expresión "un alquilamino" significa: un grupo -NH-alquilo, siendo el grupo alquilo como se define anteriormente;
- la expresión "un ariloxi" significa: un grupo -O-arilo, siendo el grupo arilo como se define anteriormente; - la expresión "un arilalcoxi" significa: un grupo aril-alcoxi-, siendo los grupos arilo y alcoxi como se definen anteriormente;
- la expresión "un carboxialquilo" significa: un grupo HOOC-alquilo-, siendo el grupo alquilo como se define anteriormente. Como ejemplos de grupos carboxialquilo, se pueden citar en particular carboximetilo o carboxietilo;
- la expresión "un carboxilo" significa: un grupo COOH;
- la expresión "un oxo" significa: "=O".
Cuando un radical alquilo está sustituido con un grupo arilo, se utiliza la expresión radical "arilalquilo" o "aralquilo". Los radicales "arilalquilo" o "aralquilo" son radicales aril-alquilo-, siendo los grupos arilo y alquilo como se define anteriormente. Entre los radicales arilalquilo, se pueden citar en particular los radicales bencilo o fenetilo.
Los compuestos descritos en la presente memoria pueden presentar centros asimétricos. Los compuestos de la presente invención que contienen un átomo asimétricamente sustituido pueden aislarse en formas ópticamente activas o racémicas. Es bien conocido en la técnica cómo preparar formas ópticamente activas, tal como la síntesis a partir de materiales de partida ópticamente activos. Se pretenden todas las formas quirales, diastereoméricas, racémicas, y todas las formas isoméricas geométricas de un compuesto, a menos que se indique específicamente la estereoquímica o la forma isomérica.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de la invención y que no son indeseables biológicamente o de otro modo. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden preparar a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos, mientras que las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se pueden preparar a partir de bases inorgánicas y orgánicas. Para una revisión de sales farmacéuticamente aceptables, ver Berge, et al. ((1977) J. Pharm. Sci, vol. 66, 1). Por ejemplo, las sales incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico, y similares, así como sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, fumárico, metanosulfónico, y toluenosulfónico, y similares.
Según la presente descripción, en la fórmula (I), R puede estar interrumpido por uno o varios dobles enlaces. En tal forma de realización, R asimismo puede denominarse radical alquenilo, que es un grupo hidrocarbonado formado cuando se elimina un átomo de hidrógeno de un grupo alqueno.
Dentro de la presente solicitud, R corresponde a un resto de un ácido graso (teniendo dicho ácido graso la fórmula RCOOH).
Según una forma de realización particular, el o los posibles dobles enlaces de R es o son dobles enlaces de configuración Z.
El término "alquenilo", como se utiliza en la presente memoria, incluye grupos hidrocarbonados no aromáticos, parcialmente insaturados.
Según una forma de realización de la descripción, en la fórmula (I), R puede comprender uno o varios átomos de deuterio.
Según la presente descripción, en la fórmula (I), A'i puede ser un radical alquileno que comprende de 1 a 6 átomos de carbono, interrumpido por uno o varios heteroátomos, tales como átomos de oxígeno. Como ejemplo, A '1 puede comprender uno o varios grupos de fórmula -(OCH2CH2)-.
Los compuestos de la invención son compuestos de lipofenol, y de este modo, derivados de fenol. Comprenden un grupo fenilo que puede portar una o varias funciones fenol, siendo cada una posiblemente alquilada o acilada. Cada compuesto según la invención comprende por lo menos una cadena lipídica que corresponde al radical R. Los compuestos de la invención asimismo pueden denominarse conjugados fenólico con ácido grasos ya que comprenden un núcleo fenólico al que se une por lo menos una cadena de ácido graso.
La presente descripción se refiere a principios activos que son capaces de eliminar al mismo tiempo los radicales libres y los estresores de carbonilo (anti-COS), y de este modo están destinados al tratamiento de enfermedades que implican tanto estrés carbonílico como oxidativo.
Según la presente invención, los compuestos de fórmula (I) comprenden por lo menos un radical R.
Cuando j=1, los compuestos comprenden necesariamente un radical R en el grupo fenilo.
Cuando j=0, por lo menos uno de los grupos R1, R2 y R3 comprende un radical R.
Según una forma de realización, R3 es un grupo de fórmula C(O)R.
Según una forma de realización, R3 es un grupo de fórmula C(O)R, y R1 y R2 son H.
Según una forma de realización, R3 es un grupo de fórmula C(O)R, y por lo menos uno de R1 y R2 es distinto de H.
Según una forma de realización, R3 es un grupo de fórmula C(O)R, R1 es distinto de H, y R2 es H.
Según una forma de realización, R3 es un grupo de fórmula C(O)R, y R1 y R2 son grupos alquilo como se definen anteriormente.
Según una forma de realización, en la fórmula (I), cuando j=0, como máximo uno de los grupos R1, R2 y R3 es H. Según una forma de realización, en la fórmula (I), cuando j=0, por lo menos uno de los grupos R1, R2 y R3 es un grupo alquilo como se define anteriormente. preferentemente, dicho grupo alquilo es un grupo isopropilo.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos para la utilización que presentan la fórmula siguiente (I-1):
en la que L', R y R2 son como se definen anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-1) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que i=1, j=1, k=0, y R1 y R3 son H.
Según un ejemplo de la descripción, en la fórmula (I-1), R2 es un grupo alquilo (Alk) como se define anteriormente en la fórmula (I). Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
Según un ejemplo de la descripción, en la fórmula (I-1), R2 es H. Tales compuestos pueden representarse mediante
la fórmula siguiente:
La presente descripción asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-1-1):
en la que L', R y Ri son como se definen anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-1-1) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que i=1, j=1, k=0, y R2 y R3 son H.
Según un ejemplo de la descripción, en la fórmula (I-1-1), R1 es un grupo alquilo como se define anteriormente, y en particular un grupo isopropilo.
Según un ejemplo de la descripción, en la fórmula (I-1-1), L' es un enlazador de fórmula -A-O-C(O)-, siendo A como se define anteriormente en la fórmula (I). preferentemente, L' es -(CH2)3-O-C(O)-.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-2):
en la que k, L", R1 y R3 son como se definen anteriormente en la fórmula (I), y R1 es un grupo alquilo (C1-C12), o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables. En estos compuestos, la parte lipídica (correspondiente al grupo R) está comprendida en el grupo R3. Dependiendo de la naturaleza de R1, asimismo puede estar comprendida en este grupo (si R1 es un grupo C(O)R).
Los compuestos de fórmula (I-2) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0 y R2 es H. preferentemente, en la fórmula (I-2), k=0. Como antes, los compuestos de fórmula (I-2) son distintos del siguiente compuesto
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), R1 es H. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), Ri es un grupo alquilo (Ci-Ci2). Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), R3 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define anteriormente. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
En esta fórmula, k es preferentemente
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), R1 es H y R3 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define anteriormente. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
En esta fórmula, k es preferentemente
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), R1 es un grupo alquilo (C1-C12) (Alk) como se define anteriormente en la fórmula (I), y R3 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define anteriormente. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
En esta fórmula, k es preferentemente
Según una forma de realización, en la fórmula (I-2), R1 es un grupo alquilo (C1-C12) (Alk) como se define anteriormente en la fórmula (I), k=0, y R3 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define anteriormente. Tales compuestos presentan la fórmula siguiente (I-2-1):
Preferentemente, en la fórmula (I-2-1), Alk es un grupo metilo, isopropilo, o n-propilo, y todavía más preferentemente, es un grupo isopropilo.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-5):
en la que R es como se define anteriormente en la fórmula (I), y Ri es un grupo alquilo que comprende de 1 a 12 átomos de carbono,
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-5) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=0, R1 es un grupo alquilo como se define anteriormente, y R2 es H.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-5-1):
en la que R es como se define anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-5-1) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=0, R1 y R3 son OCOR como se define anteriormente, y R2 es H.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-6):
en la que k, L", R1, R2, y R3 son como se definen anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-6) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-6), k=0. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
Según una forma de realización, en la fórmula (I-6) y (I-6-1), R3 es C(O)R, siendo R como se define anteriormente. Tales compuestos pueden representarse mediante la fórmula siguiente:
Según una forma de realización, en la fórmula (I-6) y (I-6-1), Ri y R2 son ambos grupos alquilo como se define anteriormente.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-6) y (I-6-1), R1 y R2 son ambos grupos alquilo (C1-C12) como se define anteriormente, y R3 es C(O)R, siendo R como se define anteriormente.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-6) y (I-6-1), R1, R2 y R3 son C(O)R, siendo R como se define anteriormente.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-3):
en la que A1, X1, X2, R, y R1 son como se definen anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-3) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=0, R2 es H, R3 es -L-C(O)R, en la que R es como se define anteriormente y L es un enlazador de fórmula (L1).
Según una forma de realización, en la fórmula (I-3), R1 es un grupo alquilo como se define anteriormente, y preferentemente un grupo isopropilo.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-3), X1 y X2 son -C(O)-.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-3), A1 es un radical alquileno lineal, que presenta preferentemente 3 átomos de carbono.
De este modo, la presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-3-1):
en la que R y R1 son como se definen anteriormente en la fórmula (I), siendo R1 preferentemente un grupo alquilo, tal como un grupo isopropilo.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-4):
en la que R es como se define anteriormente en la fórmula (I),
y Ri es un grupo alquilo que comprende de 1 a 12 átomos de carbono, preferentemente un grupo isopropilo, o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-4) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=1, R1 es un grupo alquilo como se define anteriormente, R2 es H, L" es -CH=CH-fenileno-, y R3 es -C(O)R, en el que R es como se define anteriormente.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-4-1):
en la que
R es como se define anteriormente en la fórmula (I),
R2 es H o un grupo alquilo que comprende de 1 a 12 átomos de carbono,
R3 es H o un grupo alquilo que comprende de 1 a 12 átomos de carbono,
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-4-1) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=1, R1 es -C(O)R, en el que R es como se define anteriormente, R2 es H o un grupo alquilo, L" es -CH=CH-fenileno-, y R3 es H o un grupo alquilo.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R2 es H.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R3 es un grupo alquilo, preferentemente un grupo isopropilo. Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R2 es H, y R3 es un grupo alquilo, preferentemente un grupo isopropilo.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R3 es H.
Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R2 es un grupo alquilo, preferentemente un grupo isopropilo. Según una forma de realización, en la fórmula (I-4-1), R3 es H, y R2 es un grupo alquilo, preferentemente un grupo isopropilo.
La presente invención asimismo se refiere a compuestos que presentan la fórmula siguiente (I-4-2):
en la que R es como se define anteriormente en la fórmula (I),
o sus sales, racematos, diastereómeros, o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de fórmula (I-4-2) corresponden a compuestos de fórmula (I) en la que j=0, k=1, Ri es H, R2 es -C(O)R, en el que R es como se define anteriormente, L" es -CH=CH-fenileno-, y R3 es H.
Según una forma de realización, en la fórmula (I), R1 es un grupo alquilo (C1-C12), preferentemente un grupo alquilo (C1-C6). Según una forma de realización preferida, R1 es un grupo isopropilo.
Según un ejemplo de la descripción, en los compuestos de la invención, R es un grupo alquilo lineal o ramificado, posiblemente interrumpido por uno o varios dobles enlaces, que comprende de 19 a 23 átomos de carbono. Según una forma de realización preferida, R es un grupo lineal.
Según un ejemplo de la descripción, en los compuestos de la invención, R es un grupo alquilo lineal o ramificado, posiblemente interrumpido por uno o varios dobles enlaces, que comprende de 19 a 23 átomos de carbono, y en el que uno o varios átomos de hidrógeno están sustituidos por átomos de deuterio.
Según una forma de realización, en los compuestos de la invención, R es un grupo alquilo lineal o ramificado, interrumpido mediante por lo menos un doble enlace, que comprende de 19 a 21 átomos de carbono.
Según una forma de realización, en los compuestos de la invención, R es un grupo alquilo lineal o ramificado, interrumpido mediante por lo menos tres dobles enlaces, preferentemente por lo menos cinco dobles enlaces, que comprende de 19 a 21 átomos de carbono.
Según una forma de realización, dichos dobles enlaces presentan la configuración Z.
Según una forma de realización preferida, R es un grupo lineal.
Según una forma de realización, en los compuestos de la invención, R es el siguiente radical:
Tal radical corresponde al resto del ácido docosahexenoico (DHA).
Según una forma de realización, en los compuestos de la invención, R es el resto del ácido eicosapentaenoico (EPA).
Según otra forma de realización, en los compuestos de la invención, R es uno de los siguientes radicales:
Los ejemplos de compuestos según la descripción son los siguientes:
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto que presenta la fórmula (I-2-1) como se define anteriormente,
comprendiendo dicho procedimiento:
una etapa de hacer reaccionar un ácido graso RCOOH con un compuesto que presenta la fórmula siguiente (A-1):
siendo GP un grupo protector de hidroxilo, en particular TIPS (triisopropilsililo), para obtener un compuesto de fórmula (A-2):
llevándose a cabo dicha etapa en particular en un disolvente, tal como diclorometano, en presencia de DCC/DMAP, preferentemente a temperatura ambiente,
siendo la duración de esta etapa preferentemente de 5 horas, y
- una etapa de desprotección del compuesto (A-2) para obtener un compuesto de fórmula (I-2-1).
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar compuestos que presentan la fórmula siguiente (B-1):
en la que Ri y R2 son grupos alquilo, comprendiendo dicho procedimiento una etapa de hacer reaccionar un ácido graso RCOOH con un compuesto que presenta la fórmula siguiente (B-2):
llevándose a cabo dicha etapa en particular en un disolvente, tal como diclorometano, en presencia de DCC/DMAP, preferentemente a temperatura ambiente,
siendo la duración de esta etapa preferentemente de 5 horas.
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto que presenta la fórmula (C-1) como se define anteriormente,
comprendiendo dicho procedimiento:
- una etapa de hacer reaccionar un ácido graso RCOOH con un compuesto que presenta la fórmula siguiente (C-2):
siendo GP un grupo protector de hidroxilo, en particular TIPS (triisopropilsililo), para obtener un compuesto de fórmula (C-3):
llevándose a cabo dicha etapa en particular en un disolvente, tal como diclorometano, en presencia de DCC/DMAP, preferentemente a temperatura ambiente,
siendo la duración de esta etapa preferentemente de 5 horas, y
- una etapa de desprotección del compuesto (C-3) para obtener un compuesto de fórmula (C-1).
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto que presenta la fórmula (D-1) como se define anteriormente,
comprendiendo dicho procedimiento:
- una etapa de hacer reaccionar un ácido graso RCOOH con un compuesto que presenta la fórmula siguiente (D-2):
siendo GP un grupo protector de hidroxilo, en particular TIPS (triisopropilsililo), para obtener un compuesto de fórmula (D-3):
llevándose a cabo dicha etapa en particular en un disolvente, tal como diclorometano, en presencia de DCC/DMAP, preferentemente a temperatura ambiente,
siendo la duración de esta etapa preferentemente de 5 horas, y
- una etapa de desprotección del compuesto (D-3) para obtener un compuesto de fórmula (D-1).
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto que presenta la fórmula (E-1) como se define anteriormente,
comprendiendo dicho procedimiento hacer reaccionar un ácido graso RCOOH con un compuesto que presenta la fórmula (D-1) mencionada anteriormente,
llevándose a cabo dicha etapa en particular en un disolvente, tal como diclorometano, en presencia de DCC/DMAP, preferentemente a temperatura ambiente, siendo la duración de esta etapa preferentemente de 5 horas.
Los compuestos de fórmula (E-1) asimismo se pueden preparar haciendo reaccionar el ácido graso con floroglucinol en las mismas condiciones operativas descritas anteriormente.
La presente descripción asimismo se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto que presenta la fórmula (F-1)
en la que Xi, Ai, X2 y R son como se definen anteriormente en la fórmula (I-3), comprendiendo dicho procedimiento: - una etapa de hacer reaccionar un compuesto que presenta la fórmula siguiente (F-2):
con un compuesto que presenta la fórmula siguiente (F-3):
siendo GP un grupo protector de hidroxilo, en particular TIPS (triisopropilsililo), para obtener un compuesto de fórmula (F-4):
- y una etapa de desprotección del compuesto (F-4) para obtener el compuesto de fórmula (F-1) como se define anteriormente.
En los procedimientos mencionados anteriormente, las etapas de desprotección pueden llevarse a cabo implementando métodos bien conocidos por la persona experta.
La presente invención asimismo se refiere a una composición farmacéutica tal como se define en las reivindicaciones, que comprende un compuesto según la invención, en asociación con un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
La presente descripción se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que presenta una de las fórmulas mencionadas anteriormente, y en particular que presenta la fórmula (I), (I-1), (1-1-1), (I-2), (I-2-1), (I-3), (I-3-1), (I-4), (I-4-1), (I-5), (I-5-1), (I-6) o (I-6-1), en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente descripción asimismo se refiere a un fármaco, que comprende un compuesto que presenta la fórmula (I) como se define anteriormente.
Si bien es posible que los compuestos de la descripción que presentan la fórmula (I) se administren solos, se prefiere presentarlos como composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas, tanto para uso veterinario como humano, útiles según la presente invención comprenden por lo menos un compuesto que presenta la fórmula (I) como se define anteriormente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables y posiblemente otros ingredientes terapéuticos.
En ciertas formas de realización preferidas, los principios activos necesarios en la terapia de combinación se pueden combinar en una única composición farmacéutica para la administración simultánea.
Como se usa en la presente memoria, la expresión "farmacéuticamente aceptable" y las variaciones gramaticales de la misma, ya que se refieren a composiciones, vehículos, diluyentes y reactivos, se usan indistintamente, y representan que los materiales son capaces de administrarse a un mamífero sin la producción de efectos fisiológicos indeseables tales como náuseas, mareos, molestias gástricas, y similares.
La preparación de una composición farmacológica que contiene principios activos disueltos o dispersos en ella es bien conocida en la técnica y no necesita limitarse sobre la base de la formulación. Típicamente tales composiciones se preparan como inyectables ya sea como disoluciones líquidas o suspensiones; sin embargo, asimismo se pueden preparar formas sólidas adecuadas para disolución o suspensión en líquido antes del uso. La preparación asimismo se puede emulsionar. En particular, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en forma de dosificación sólida, por ejemplo cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos, grageas, o gránulos.
La elección del vehículo y el contenido de sustancia activa en el vehículo generalmente se determinan según la solubilidad y las propiedades químicas del compuesto activo, el modo particular de administración, y las disposiciones que deben observarse en la práctica farmacéutica. Por ejemplo, para la preparación de comprimidos, se pueden utilizar excipientes tales como lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dicálcico, y agentes disgregantes tales como almidón, ácidos algínicos, y ciertos silicatos complejos combinados con lubricantes tales como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio, y talco. Para preparar una cápsula, es ventajoso utilizar lactosa y polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se utilizan suspensiones acuosas, pueden contener agentes emulsionantes o agentes que facilitan la suspensión. Asimismo pueden usarse diluyentes tales como sacarosa, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, glicerol, y cloroformo, o mezclas de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar en una formulación adecuada a seres humanos y animales mediante administración tópica o sistémica, incluyendo la administración oral, rectal, nasal, bucal, ocular, sublingual, transdérmica, tópica, vaginal, parenteral (incluyendo subcutánea, intraarterial, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal, y epidural), intracisternal, e intraperitoneal. Se apreciará que la vía preferida puede variar con, por ejemplo, la afección del receptor.
Las formulaciones se pueden preparar en forma de dosificación unitaria por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Tales métodos incluyen la etapa de asociar el principio activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente el principio activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después, si es necesario, dando forma al producto.
La presente invención asimismo se refiere al compuesto de fórmula (I) como se define anteriormente, para su utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto el estrés oxidativo como el carbonílico como se define en las reivindicaciones.
Según la presente invención, la expresión "patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo" se refiere a una patología (o enfermedad) que implica una alquilación anormal de importantes moléculas biológicas intra o extracelulares: proteínas, ácidos nucleicos, glutationa, etanolamina, y muchas otras similares. Esta formación de enlaces perjudiciales se debe a la reacción entre las funciones nucleófilas de estas moléculas con electrófilos reactivos (especies de carbonilo), es decir, el estrés carbonílico (que conduce a la glicación o reacciones de Maillard), o asimismo a las especies de oxígeno reactivas oxidantes (ROS), es decir, dicho estrés oxidativo.
En el contexto de la invención, la expresión "estrés carbonílico" es el metabolismo anormal que resulta de la reactividad electrófila mejorada de las especies de carbonilo, es decir, los estresores de carbonilo, tales como los
ósidos (glucosa, fructosa, y similares) y sus derivados (osonas, glioxal, metilglioxal, ácido glioxílico, y similares), pero asimismo, tales como los aldehídos formados por peroxidación lipídica (malondialdehído, 4-hidroxinonenal = 4-HNE, y similares).
Un compuesto según la invención presenta una actividad antiestrés carbonílico debido a que es capaz de reducir eficazmente la toxicidad del estresor carbonílico. Entonces podría limitar la formación de productos glicados patológicos tales como lipofuscinas.
En el contexto de la invención, la expresión "estrés oxidativo" es el resultado de una reacción de oxidación por radicales anormal que tiene lugar cuando se forma una ROS tras la fuga de electrones durante el procedimiento de respiración. Si esto ocurre en las membranas bicapa y en presencia de dioxígeno, el radical alquilo se oxida al radical peróxido de alquilo, que reacciona después extrayendo un protón y un electrón a otro lípido de la membrana, lo que inicia una reacción de oxidación en cadena. Este estrés oxidativo no solo provoca la formación de nuevos enlaces o la ruptura de los lípidos, sino asimismo los procesos de peroxidación nocivos, que eventualmente conducen a la inflamación a través de la cascada de eicosanoides y la liberación de las citocinas.
Un compuesto según la invención presenta una actividad antiestrés oxidativo y es capaz de eliminar los estresores oxidativo (ROS), y de este modo es capaz de evitar la formación de productos de oxidación tóxicos y la respuesta inflamatoria, para detener cualquier reacción de oxidación en cadena, por lo tanto, en el caso de la enfermedad de Stargardt, la producción de la lipofuscina A2E.
Según la presente invención, la patología que implica estrés carbonílico y oxidativo se selecciona de entre el grupo que consiste en: enfermedades inflamatorias e infecciosas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades metabólicas, cáncer, patologías retinianas, y enfermedades neurodegenerativas.
Según la presente invención, la expresión "enfermedades inflamatorias" se refiere a enfermedades caracterizadas por una inflamación crónica. Por "inflamación" se entiende los fenómenos por los que el cuerpo humano se defiende habitualmente de las agresiones y que pueden manifestarse en diversos síntomas tales como hinchazón, calor, o enrojecimiento de la piel.
En el contexto de la invención, la expresión "enfermedad infecciosa" se refiere a una enfermedad causada por microorganismos patógenos, tales como bacterias, virus, parásitos, u hongos. Las enfermedades infecciosas incluyen la influenza (o gripe).
En el contexto de la invención, una "enfermedad cardiovascular" se refiere a una enfermedad que afecta al corazón o a los vasos sanguíneos (arterias y venas). Más particularmente, una enfermedad cardiovascular según la invención designa una enfermedad, lesión o síntoma asociado a un procedimiento de aterogénesis que afecta al sistema cardiovascular. Incluye especialmente las afecciones en las que se desarrolla una placa de ateroma, así como las complicaciones por la formación de una placa de ateroma (estenosis, isquemia) y/o debido a su evolución hacia un ictus isquémico agudo (trombosis, embolia, infarto, rotura arterial).
Las enfermedades cardiovasculares incluyen arteriopatía coronaria, cardiopatía coronaria, hipertensión, aterosclerosis, en particular aterosclerosis ilíaca o femoral, angina de pecho, trombosis, insuficiencia cardíaca, accidente cerebrovascular, aneurisma vascular, calcificación vascular, infarto de miocardio, disritmia cardíaca, estenosis vascular e infarto, y demencia vascular.
En el contexto de la invención, una "enfermedad metabólica" denota una enfermedad que altera el metabolismo normal. Preferentemente, la enfermedad metabólica según la invención es un trastorno del metabolismo de los hidratos de carbono.
Como se usa en la presente memoria, un "trastorno del metabolismo de los hidratos de carbono" denota una enfermedad en la que se altera el metabolismo de los hidratos de carbono, por ejemplo de la glucosa. Los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono incluyen la diabetes, tal como la diabetes tipo II, la glucemia alta en ayunas, el sobrepeso, y la obesidad.
Según la presente invención, por el término "cáncer" se entienden tumores sólidos malignos y/o cánceres hematológicos diseminados y/o sus metástasis. Los términos "metástasis" o "enfermedades metastásicas" se refieren a tumores malignos secundarios que están formados por células de un tumor maligno primario, que se han trasladado a otra localización. La expresión "cánceres hematológicos" se refiere a tipos de cáncer que afectan la sangre, la médula ósea, y los ganglios linfáticos, tales como mielomas, linfomas, o leucemias.
En el contexto de la invención, la expresión "patología retiniana" se refiere a una enfermedad o trastorno de la retina.
Las patologías de la retina incluyen la enfermedad de Stargardt, que es una distrofia retiniana hereditaria vinculada a mutaciones de un gen que codifica un transportador lipídico (retiniano) del subtipo A4 del casete de unión a ATP
(ABCA4) (Allikmets et al., 1997).
La expresión "enfermedad neurodegenerativa" se usa a lo largo de la memoria descriptiva para identificar una enfermedad que está provocada por daño al sistema nervioso central y puede identificarse por muerte neuronal. La muerte de las células neuronales observada en una enfermedad neurodegenerativa suele ir precedida de una disfunción neuronal, a veces de varios años. Por lo tanto, la expresión "enfermedad neurodegenerativa" incluye una enfermedad o trastorno que se caracteriza por una disfunción neuronal, y finalmente por la muerte de las células neuronales. Los ejemplos de enfermedades neurodegenerativas incluyen demencia asociada al VIH, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, y enfermedad de Pick.
La presente invención asimismo se refiere al compuesto de fórmula (I) como se define anteriormente, para su utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo, seleccionada de entre el grupo que consiste en: aterosclerosis, diabetes tipo II, cáncer, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, degeneración macular relacionada con la edad (AMD), enfermedad de Stargardt, y virus de la gripe grave.
En el contexto de la descripción, el término "tratar" o "tratamiento", como se usa en la presente memoria, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso, o prevenir el trastorno o afección al que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de tal trastorno o afección.
Figuras
La figura 1 se refiere a los resultados de dosis-respuesta del compuesto 13b. Representa la supervivencia de las células ARPE-19 en presencia de AtR (25 j M).
La figura 2 se refiere a la protección dependiente de la dosis del compuesto 13b de cultivos de células de retina neural expuestos a atRal (**: P<0.005 y ***: P<0.0005). Las columnas blancas corresponden a células incubadas con atRal 50 j M, las columnas grises corresponden a células incubadas con atRal 75 j M, y las columnas negras corresponden a células incubadas con atRal 100 j M.
La figura 3 se refiere a la respiración mitocondrial en células ARPE-19 (*: P<0.05, **: P<0.005, ***: P<0.0005, y ns: no significativo) expuestas a atRal, en presencia o ausencia de 13b. Las columnas blancas corresponden a la inhibición del complejo CI, las columnas rayadas corresponden a la inhibición del complejo CII, y las columnas negras corresponden a la inhibición de ambos complejos.
La figura 4 se refiere a la protección dependiente de la dosis de varios compuestos de la invención de cultivos de células ARPE-19 expuestos a atRal, en condiciones para demostrar sus propiedades eliminadoras (Cotratamiento). Representa la supervivencia de las células ARPE-19 en presencia de AtR (25 j M ) para varias dosis de cada compuesto (5 j M, 10 j M, 40 j M, y 80 j M). PG-DHA corresponde al compuesto 6, PG-di DHA corresponde al compuesto 7, PG-tri DHA corresponde al compuesto 8, PG-OMe-DHA corresponde al compuesto 13a, PG-di OMe-DHA corresponde al compuesto 15a, y PG-OiP-DHA corresponde al compuesto 13b.
La figura 5 se refiere a la medida de la actividad intrínseca de cada complejo (enzimología) de la cadena respiratoria mitocondrial (MRC) y su nivel de expresión proteica.
La figura 6 se refiere a la caracterización de la muerte celular inducida por atRAL. Las columnas con rayas representan el porcentaje de células ARPE-19 vivas, las columnas en negro representan el porcentaje de células apoptóticas tempranas, y las columnas blancas representan el porcentaje de células apoptóticas/necróticas tardías.
La figura 7 se refiere a la comparación de las eficacias antioxidantes del floroglucinol (columnas blancas) y PG-OiP-DHA (columnas rayadas) en células primarias del RPE. Representa la viabilidad celular (%) para estos compuestos a diferentes concentraciones.
La figura 8 se refiere a la comparación de las eficacias anticarbonílicas del floroglucinol (columnas blancas) y PG-OiP-DHA (columnas rayadas) en células primarias del RPE. Representa la viabilidad celular (%) para estos compuestos a diferentes concentraciones.
La figura 9 se refiere a la comparación de las eficacias anticarbonílicas de floroglucinol (columnas blancas) y PG-OiP-DHA (columnas rayadas) en condiciones para demostrar sus propiedades eliminadoras (Cotratamiento), en células primarias del RPE. Representa la viabilidad celular (%) para estos compuestos a diferentes concentraciones.
La figura 10 representa algunos compuestos según la invención como se explica en el ejemplo 12, y la figura
11 se refiere a la comparación de las eficacias anticarbonílicas en estirpes celulares RPE de los compuestos de la figura 10.
La figura 12 se refiere a la protección dependiente de la dosis de varios compuestos de la invención de cultivos de células ARPE-19 expuestos a afRal, en condiciones para demostrar su acción intracelular (pretratamiento). Representa la supervivencia de las células ARPE-19 en presencia de AfR (25 |j M). Para cada compuesto, la columna de la izquierda corresponde a la dosis de 10 j M, y la columna de la derecha corresponde a la dosis de 40 j M.
La figura 13 se refiere a la comparación de las eficacias anticarbonílicas de los derivados de PG con (columnas rayadas) y sin un grupo alquilo (columnas blancas) en estirpes celulares ARPE-19.
La figura 14 se refiere a la eficacia de PG-OiP-DHA en la protección de la actividad mitocondrial, y la figura 15 se refiere al análisis de la expresión de la proteína MRC.
Ejemplos
Ejemplo 1: síntesis de conjugados de DHA-floroglucinol
El DHA utilizado en la siguiente síntesis se extrajo del aceite de hígado de bacalao mediante un procedimiento desarrollado para concentrar los PUFA a partir de aceite de pescado o de algas. El procedimiento se llevó a cabo en una sola etapa, en la que se saponificó el aceite de hígado de pescado en presencia de NaOH, se extrajeron los ácidos grasos libres mediante extracción líquido-líquido, y se separaron del material no saponificable. Después, los ácidos grasos monoinsaturados se eliminaron mediante complejación con urea, sobre la base de la diferencia en la configuración espacial de los ácidos grasos según su grado de instauración. Este procedimiento de cristalización permitió aislar una mezcla bruta de DHA y EPA (ácido eicosapentaenoico C20:5 n-3), que tras la purificación en fase inversa dio un 5% de DHA (a partir de aceite de hígado de bacalao) con un 85% de pureza (consistiendo las impurezas en ácidos grasos monoinsaturados tales como el ácido palmitoleico (C16:1 n-7) y el ácido oleico (C18:1 n-9)).
Para obtener conjugados de floroglucinol-DHA con un rendimiento aceptable, se seleccionó un grupo protector de sililo, tal como el triisopropilsililo (TIPS), debido a su desprotección eficiente en condiciones suaves en presencia de un enlace de éster.
El siguiente esquema ilustra la etapa implementada para preparar los conjugados de DHA-floroglucinol de la invención.
El floroglucinol diprotegido 2 se preparó de manera original, partiendo de la protección total del floroglucinol 1 usando 3 equivalentes de TIPS-OTf en THF, seguido de una monodesililación lenta usando trihidrofluoruro de trietilamina (3 equiv. Et3N-3HF) durante 4 h. El procedimiento permitió preparar el intermedio 2 con un rendimiento global de 59% en las dos etapas (solo se pudo obtener un 30% mediante un procedimiento de disililación directa). Usando la misma cantidad de Et3N-3HF y aumentando el tiempo de reacción (de 4 h a 8 h) se obtuvo el derivado 8 monoprotegido en un 62%, mientras que una monosililación controlada (1 eq. TIPS-OTf, a 0°C) no proporcionó más de 38%. Después, las reacciones de acoplamiento se llevaron a cabo usando reactivos DCC/DMAP clásicos y proporcionaron los conjugados 4 y 5 de DHA con un rendimiento del 74% y 66% respectivamente. La desprotección de los grupos TIPS se realizó utilizando Et3N-3HF en THF a temperatura ambiente, y proporcionó el lipofenol 6 y 7 deseado con un rendimiento del 78% y 86%, sin escisión del enlace de éster o degradación del resto poliinsaturado.
El conjugado Tri-DHA 8 se obtuvo con un rendimiento mucho mejor, a partir de di-DHA-floroglucinol 7 (73%), que del acoplamiento directo de floroglucinol con 3 equivalentes de DHA (solo 8%). La conversión de acoplamiento débil podría explicarse por la restricción estérica o una menor reactividad del floroglucinol en comparación con sus derivados sililados.
Las etapas implementadas como se mencionó anteriormente se describen a continuación en detalle.
Procedimiento de extracción de DHA a partir de aceite de hígado de bacalao: Se disolvió aceite de hígado de
bacalao comercialmente disponible (5 g, comercialmente disponible, Cooper, Francia) en una mezcla de etanol y agua (35 ml, 95/5) en presencia de NaOH (1.50 g) en atmósfera de argón. La mezcla se protegió de la luz con papel aluminio, y se calentó a 82°C durante 2 h. La fracción etanólica se evaporó, y el residuo se disolvió en hexano (30 ml) después de calentar. Después, se añadió agua (25 ml) a la capa orgánica, y el material insaponificable se eliminó con extracción repetida con hexano de la fase acuosa (4x30 ml de hexano). La fase acuosa que contenía los jabones se acidificó a pH 2 utilizando disolución de HCl (50%). Los ácidos grasos se extrajeron con hexano (4x25 ml). La fase orgánica se concentró a presión reducida para proporcionar 4.62 g de un aceite bruto de ácidos grasos. Al residuo bruto se le añadieron urea (13.86 g) y etanol al 95% (55 ml). La mezcla se calentó a 60°C-70°C, protegida de la luz, hasta que la mezcla se convirtió en una disolución homogénea transparente. Después, la mezcla se mantuvo a temperatura ambiente, y entonces se colocó a 4°C durante 24 h. Los cristales formados se separaron del líquido por filtración. El filtrado obtenido se diluyó con agua (35 ml) y se acidificó a pH 4-5 con disolución de HCl (6 N). Se añadió hexano (70 ml), y la disolución se agitó completamente durante 1 hora. La capa de hexano que contenía los ácidos grasos liberados se separó de la capa acuosa y se lavó con agua tres veces (3x40 ml). La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a presión reducida para proporcionar 820 mg de una mezcla bruta de PUFA, que se purificó por HPLC preparativa (columna Atlantis Prep OBD™ 10 pm (19x250 mm), H2O/MeOH 13/87 isocrático, detección 217 nm) para proporcionar DHA puro (266 mg, 5% p/p)). RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 5.43-5.30 (m, 12H, CH=CH), 2.85-2.80 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.42-2.40 (m, 4H, CH2-C=O, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); MS (ESI) m/z 327 [M-H]-.
2-metil-2-((1E,3E,5E)-4-metil-6-(2,6,6-trimetilciclohex-1-enil)hexa-1,3,5-trienil)-2H-cromeno-5,7-diol; Cromeno A: A una disolución agitada de frans-retinal (200 mg, 0.35 mmoles) en etanol (8 ml), se le añadieron floroglucinol (48.28 mg, 0.35 mmoles) y ácido acético (40 pl, 0.35 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas, protegida de la luz con papel de aluminio. Después de concentrar el disolvente a presión reducida, el residuo obtenido se disolvió en AcOEt (20 ml) y se lavó con agua (10 ml). La capa orgánica se recuperó, se secó con MgSO4, y se concentró a presión reducida. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (90/10 a 85/15 pentano/AcOEt) para proporcionar Cromeno A (112.4 mg, 41%) como un sólido contaminado por un 13% de un subproducto. El Cromeno A se aisló después de la purificación mediante HPLC preparativa para proporcionar una caracterización completa (gradiente de hexano/AcOEt, t0'= 100/0, t15'=90/10, t45'=80/20, t75'=70/30; 15 ml/min, columna luna 5p Silica 100A 250x21.20 mm, detección 254 nm).
Rf (CH2Cl2/MeOH) 0.4; RMN 1H (500 MHz; CD3OD) 8h 6.63 (dd, J= 11.5 Hz, J = 15.5 Hz, 1H, H11), 6.63 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H15), 6.14 (d, J = 16.5 Hz, 1H, H7), 6.03 (d, J = 16.5 Hz, 1H, Ha), 5.98 (d, J = 11.0 Hz, 1H, H10), 5.85 y 5.81 (d, J = 2.0 Hz, 1H, y d, J = 2.5 Hz, 1H, H ^ y H20), 5.75 (d, J = 15.0 Hz, 1H, H12), 5.39 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H14), 2.02-2.00 (m, 2H, H4(CH2)), 1.86 (s, 3H, H25 (CH3)), 1.68 (s, 3H, H24CH3)), 1.67-1.60 (m, 2H, Ha(CH2)), 1.49 (s, 3H, H26(CHa)), 1.48-1.46 (m, 2H, H2 (CH2)), 1.00 (s, 6H, H22, H23 (CH3)); RMN 13C (125 MHz; CDCla 8c 159.7 (C19), 156.4 (C21/17), 139.1 (C8), 139.0 (C6), 137.1 (C12), 137.0 (C9), 130.4 (C10), 129.9 (C5), 127.6 (C7), 126.3 (C15), 123.1 (C14), 119.1 (C11), 103.9 (C16), 96.3 (C20/18), 78.5 (C13), 40.7 (C2), 35.1 (C1), 33.9 (C4), 29.3 (C22/23), 27.6 (C26), 21.8 (C24), 20.3 (C3), 12.6 (C25); HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C26H31O3391.2278; encontrado 391.2272; HPLC rt: 11.26 min, (Atlantis C18 5pm (4.6x250 mm), H2O 0.1%TFA/ACN, t0'=25/75, t25'=20/80, t28'=0/100, t33'=0/100 , detección 298 nm).
Procedimiento general para la etapa de acoplamiento entre DHA y derivados polifenólicos: DHA (1.1 equiv., 0.30 mmoles) y cada uno de los derivados fenólicos en cuestión (1 equiv., 0.27 mmoles) se disolvieron en C ^ C h seco (6 ml). A la disolución se le añadieron DCC (1.1 equiv., 0.30 mmoles) y DMAP (0.1 equiv., 0.03 mmoles), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h bajo nitrógeno. La mezcla se dejó 2 h a 4°C para inducir la cristalización de la diciclohexilurea. A continuación, el residuo de urea se separó por filtración, y el filtrado se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y se concentró a presión reducida. La purificación del material bruto se realizó mediante cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el lipofenol deseado.
Procedimiento general para la desprotección del grupo protector TIPS en derivados de DHA-polifenoles: A una disolución del polifenol DHA protegido apropiado (1 equiv., 0.19 mmoles) en THF anhidro (13 ml), se le añadió gota a gota trihidrofluoruro de trietilamonio (Et3N-3HF, 3 equiv., 0.57 mmoles para compuestos monoprotegidos, o 6 equiv., 1.14 mmoles para derivados diprotegidos). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h a 6 h, hasta completar la reacción. Se añadió AcOEt (40 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (15 ml) y salmuera (15 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el lipofenol desprotegido.
1,3,5-tris(triisopropilsililoxi)benceno 1: A una disolución agitada de floroglucinol (1 g, 7.90 mmoles) en THF seco (60 ml), se le añadieron gota a gota trietilamina (3.68 ml, 23 mmoles) y trifluorometanosulfonato de triisopropilsililo (TIPS-OTf) (7 ml, 23 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió AcOEt (60 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (40 ml) y salmuera (40 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (99/1 hexano/AcOEt) para proporcionar el floroglucinol triprotegido 1 (4.64 g, 98%) como un aceite amarillo.
Rf (pentano) 0.28; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.07 (s, 3H, CHaro), 1.27-1.18 (m, 9H, CH-Si), 1.09 (d, J = 7.3 Hz, 54H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 157.4, 105.8, 18.1, 12.8; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado
para C33H67O3SÍ3595.4392; encontrado 595.4395.
3,5-bis(triisopropilsililoxi)fenol 2: el floroglucinol triprotegido 1 (5.01 g, 8.43 mimóles) se disolvió en THF seco (200 ml). Se añadió gota a gota Et3N-3 HF (2.90 ml, 17.70 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se siguió mediante TLC, y se detuvo para evitar en lo posible la formación de un derivado didesprotegido. Se añadió AcOEt (200 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (200 ml) y salmuera (100 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (95/5 pentano/AcOEt) para proporcionar el floroglucinol diprotegido 2 (2.25 g, 60%) como un aceite amarillo. El derivado monoprotegido 3 se aisló en un 18% como un sólido blanco (0.45 g).
Rf (pentano/AcOEt 80/20) 0,8; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.03 (t, J = 2.0 Hz, 1H, CHaro), 6.01 (d, J = 2.0 Hz, 2H, CHaro), 1.27-1.19 (m, 6 H, CH-Si), 1.09 (d, J = 7.3 Hz, 36H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 157.8, 157.0, 105.1, 101.1, 18.1, 12.8; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C24H45O3Si2437.2907; encontrado 437.2911.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3,5-bis(triisopropilsililoxi)fenilo 4: el acoplamiento del di-TlPS-floroglucinol 2 (130 mg, 0.29 mmoles) y DHA (104 mg, 0.32 mmoles) se llevó a cabo según el procedimiento general, y proporcionó 4 (164 mg, 74%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99.7/0.3 a 99/1).
Rf (hexano/AcOEt 99/1) 0.23; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.29-6.27 (m, 1H, CHaro), 6.25-6.24 (m, 2H, CHaro), 5.45-5.30 (m, 12H, CH=CH), 2.87-2.81 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.57 (t, J = 7.3 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.52-2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.26-1.18 (m, 6H, CH-Si), 1.08 (d, J = 7.5 Hz, 36H, (CHa)2C), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 171.1, 157.1, 151.8, 132.0, 129.6, 128.6, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.0, 109.2, 106.9, 34.4, 25.6, 25.5, 22.7, 20.6, 17.8, 14.2, 12.7; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C46H77O4Si2749.5354; encontrado 749.5363.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3,5-dihidroxifenilo 6: la desprotección del DHA-floroglucinol protegido 4 (50 mg, 0.07 mmoles) se llevó a cabo utilizando el procedimiento general, y proporcionó 6 (23 mg, 78%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 9/1 a 75/25).
Rf (hexano/AcOEt 70/30) 0.36; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.06 (s, 3H, CHaro), 5.48-5.28 (m, 12H, CH=CH), 2.87-2.79 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.63 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.53-2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.06 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.96 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 172.7, 157.3, 151.8, 132.0, 129.9, 128.6, 128.4, 128.3, 128.3, 128.1, 128.0, 127.8, 127.8, 127.2, 127.0, 101.9, 101.1, 34.3, 25.6, 25.6, 25.6, 25.5, 22.7, 20.5, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C28H35O4435.2535; encontrado 435.2538.
5-(triisopropilsililoxi)benceno-1,3-diol 3: el floroglucinol triprotegido 1 (200 mg, 0.33 mmoles) se disolvió en THF seco (12 ml). Se añadió gota a gota Et3N-3HF (164 pl ml, 1 mmol), y la reacción se siguió mediante TLC, y se detuvo para reducir al máximo la formación del derivado monodesprotegido. Después de 6 h de agitación a temperatura ambiente, se añadió 1 equivalente adicional de Et3N-3HF a la mezcla. La reacción se detuvo después de 8 h. Se añadió AcOEt (15 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/AcOEt 95/5) para proporcionar el floroglucinol monoprotegido 3 (59 mg, 62%) como un sólido blanco. El derivado diprotegido 2 se aisló en un 13% como un aceite amarillo (20 mg).
Rf (hexano/AcOEt 70/30) 0.34; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 5.99 (d, J = 2.0 Hz, 2H, CHaro), 6.01 (t, J = 2.0 Hz, 1H, CHaro), 1.27-1.18 (m, 3H, CH-Si), 1.08 (d, J = 7.5 Hz, 18H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 158.2, 157.3, 100.5, 96.5, 18.0, 12.8; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C-,5H25O3Si 281.1573; encontrado 281.1570.
(4,4',7,7',10,10',13,13',16,16',19,19' Z)-didocosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 5-(triisopropilsililoxi)-1,3-fenileno 5: el acoplamiento del mono-TIPS-floroglucinol 3 (86 mg, 0.30 mmoles) y DHA (200 mg, 0.60 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 5 (183 mg, 66%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (pentano/AcOEt 98/2).
Rf (pentano/AcOEt 98/2) 0.34; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.51 (s, 3H, CHaro), 5.47-5.28 (m, 24H, CH=CH), 2.87 2.80 (m, 20H, CH2 bis-alílico), 2.60-2.57 (m, 4H, CH2-C=O), 2.51-2.47 (m, 4H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 4H, CH2 alílico), 1.27-1.22 (m, 3H, CH-Si), 1.08 (d, J = 7.5 Hz, 18H, (CHa^C), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 6H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 170.9, 157.0, 151.4, 132.0, 129.7, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.4, 127.0, 110.9, 108.0, 34.2, 25.6, 25.6, 25.5, 22.6, 20.5, 17.8, 14.2, 12.5; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C5gHa7O5Si 903.6317; encontrado 903.6321.
(4,4',7,7',10,10',13,13',16,16',19,19'Z)-didocosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 5-hidroxi-1,3-fenileno 7: la desprotección del DHA-floroglucinol protegido 5 (168 mg, 0.19 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento
general, y proporcionó 7 (119 mg, 86%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 90/10).
Rf (hexano/ AcOEt 90/10) 0.19; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.48 (s, 3H, CHaro), 5.48-5.29 (m, 24H, CH=CH), 2.88-2.80 (m, 20H, CH2 bis-alílico), 2.60 (t, J = 7.1 Hz, 4H, CH2-C=O), 2.52-2.48 (m, 4H, CH2 alílico), 2.08 (quint, J = 7.5 Hz, 4H, CH2 alílico), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 6H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 171.1, 156.7, 151.6, 132.0, 129.8, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.3, 127.0, 107.6, 106.7, 34.2, 25.6, 25.6, 25.6, 25.5, 22.6, 20.5, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C50H67O5747.4989; encontrado 747.4994.
(4,4',4",7,7',7",10,10',10",13,13',13",16,16',16",19,19',19"Z)-tridocosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de benceno-1,3,5-triilo 8: el acoplamiento del di-DHA-floroglucinol 7 (108 mg, 0.14 mmoles) y DHA (46 mg, 0.15 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 8 (108 mg, 73%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 98/2).
Rf (hexano/AcOEt 95/5) 0.29; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.82 (s, 3H, CHaro), 5.48-5.28 (m, 36H, CH=CH), 2.87 2.79 (m, 30H, CH2 bis-alílico), 2.59 (t, J = 7.5 Hz, 6H, CH2-C=O), 2.46-2.50 (m, 6H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 6H, CH2 alílico), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 9H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 170.9, 151.4, 132.3, 130.1, 128.8, 128.6, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 127.6, 127.3, 112.9, 34.5, 25.9, 25.9, 25.8, 22.8, 20.8, 14.5; HRMS (ESI-TOF-ASAP+) m/z: [M+H]+ calculado para C72H97O61057.7280; encontrado 1057.7285.
Ejemplo 2: síntesis de conjugados de DHA-floroglucinol alquilados.
La alquilación, tal como la metilación, es una de las metabolizaciones más abundantes de los (poli)fenoles dietéticos después de la ingestión. De este modo, parece interesante evaluar el impacto de la O-alquilación de la función fenólica sobre la eficacia de la acción de captura del carbonilo. En cuanto al mecanismo de formación de cromeno a partir de floroglucinol y trans-retinal, la O- y C-alquilación puede verse influida por la introducción de dicho sustituyente alquílico. La nucleofilia desarrollada por los átomos de carbono de tales anillos aromáticos puede ajustarse por la presencia del efecto electrónico inductivo, y hace a los derivados del floroglucinol más reactivos con electrófilos de tipo blando carbonílicos de frans-retinal.
Para acceder al floroglucinol-DHA alquilado, se investigó la síntesis de floroglucinol 11 monoalquilado y monoprotegido para permitir la introducción del resto lipídico en la última etapa de la ruta sintética.
La dificultad de la estrategia residía en realizar una monoalquilación y/o monosililación selectiva del floroglucinol simétrico en presencia de funciones fenólicas de idéntica reactividad. Usando una disolución de MeOH, o iPrOH saturada con HCl gaseoso, se podría realizar la monoalquilación a partir del floroglucinol, con un rendimiento aceptable, reduciendo la proporción de derivados dialquilados observados usando reactivos de O-alquilación de uso común tales como DMS o el reactivo de 2-bromopropano. La protección total del floroglucinol con el grupo protector TIPS (10), seguido del procedimiento de monodesprotección, proporcionó el floroglucinol monometilado/isopropilado y protegido deseado 11 con un 58% y 54% en dos etapas.
Utilizando las mismas condiciones de acoplamiento (DCC/DMAP) que para el lipofenol 6, los monoalquil y dialquil floroglucinoles 11 y 14 se acoplaron a DHA y produjeron los conjugados de DHA con floroglucinol alquilado 13 y 15 con un rendimiento excelente a moderado, después de la eliminación de los grupos TIPS en presencia de Et3N-3HF para derivados protegidos.
Las etapas implementadas como se mencionó anteriormente se describen a continuación en detalle.
5-metoxibenceno-1,3-diol 9a: a una suspensión de floroglucinol (0.40 g, 3.17 mmoles) en dioxano (1 ml) se le añadió una disolución recién preparada de MeOH saturada con HCl seco (gas) (4 ml, 17N). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se añadió una cantidad adicional de disolución saturada de HCl (1 ml), y la reacción se mantuvo a 70°C durante 1 h. Los disolventes se evaporaron a vacío, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2Ch/MeOH 98/2) para proporcionar 9a (0.28 mg, 62%) como un sólido blanco. El residuo dimetilado 14a se aisló con un rendimiento del 25%.
Rf (CH2Cl2/MeOH 95/5) 0.47; RMN 1H (500 MHz; MeOD) 6h 5.88 (s, 3H, CHaro), 3.69 (s, 3H, CH3O); RMN 13C(125 MHz; CDCh) 6c 161.7, 158.1, 95.7, 94.0, 55.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C7H7O3139.0395; encontrado 139.0397.
5-isopropoxibenceno-1,3-diol 9b: a una suspensión de floroglucinol (0.40 g, 3.17 mmoles) en dioxano (1 ml) se le añadió una disolución recién preparada de iPOH saturada con HCl seco (gas) (4 ml, 32N). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió una cantidad adicional de la disolución saturada de HCl (1 ml), y la reacción se mantuvo a 70°C durante 7 h. Los disolventes se evaporaron a vacío, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2Ch/MeOH 98/2) para proporcionar 9b (0.27 mg, 51%) como un sólido blanco. El derivado dialquilado 14b se aisló con un rendimiento del 13%.
Rf (CH2Cl2/MeOH 95/5) 0.4; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 6h 5.99 (d, J = 1.9 Hz, 2H, CHaro), 5.96 (t, J = 1.9 Hz, 1H, CHaro), 5.70 (br, 2H, OH), 4.45 (quint, J = 7.5 Hz, 1H, CH), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 6c 160.0, 158.1, 95.8, 95.5, 70.0, 22.0; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C9H11O3167.0708; encontrado 167.0710.
5-metoxi-1,3-bis(triisopropilsililoxi)benceno 10a: el floroglucinol-OMe 9a (100 mg, 0.71 mmoles) se disolvió en CH2Cl2 seco (6 ml) y THF seco (600 pl). A la disolución se le añadieron gota a gota diisopropiletilamina (257 pl, 1.50 mmoles) y TIPS-OTf (403 pl, 1.50 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Se añadió una cantidad adicional de DIPEA y TIPS-OTf para completar la reacción. Después de 6 h de reacción, se añadió AcOEt (15 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexano/AcOEt 99/1) para proporcionar el floroglucinol-OMe diprotegido 10a (311 mg, 96%) como un aceite incoloro.
Rf (hexano/AcOEt 95/5) 0.80; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 6h 6.09-6.08 (m, 2H, CHaro), 6.07-6.06 (m, 1H, CHaro), 3.73 (s, 3H, CH3O), 1.27-1.21 (m, 6H, CH-Si), 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 36H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 6c 161.3, 157.8, 105.0, 99.7, 55.5, 18.2, 13.0; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C25H49O3Si2453.3214; encontrado 453.3226.
5-isopropoxi-1,3-bis(triisopropilsililoxi)benceno 10b: el floroglucinol-OiP 9b (231 mg, 1.37 mmoles) se disolvió en CH2Cl2 seco (24 ml). Se añadieron gota a gota a la disolución diisopropiletilamina (617 pl, 3.60 mmoles) y TIPS
OTf (969 |jl, 3.60 mimóles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Se añadió AcOEt (30 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (15 ml) y salmuera (15 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexano/AcOEt 99.5/0.5) para proporcionar el floroglucinol-OiP diprotegido 10b (573 mg, 87%) como un aceite incoloro.
Rf (hexano/AcOEt 95/5) 0.88; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.07-6.06 (m, 2H, CHaro), 6.04-6.02 (m, 1H, CHaro), 4.42 (quint, J = 6.0 Hz, 1H, CHp), 1.29 (d, J = 6.0 Hz, (CHa^Cp), 1.26-1.19 (m, 6H, CH-Si), 1.09 (d, J = 6.0 Hz, 36H, (CH3)2Ct/ps); RMN 13C (125 MHz; CDCla) 8c 159.5, 157.7, 105.0, 101.9, 70.2, 22.3, 18.2, 12.9; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C27H53OaSi2481.3527; encontrado 481.3537.
3-metoxi-5-(triisopropilsililoxi)fenol 11a: el floroglucinol diprotegido 10a (92 mg, 0.19 mmoles) se disolvió en THF seco (6.50 ml). Se añadió gota a gota EtaN-3HF (33 jl, 0.19 mmoles), y la reacción se siguió mediante TCL, y se detuvo para reducir tanto como fuera posible la proporción del derivado completamente desprotegido. Después de 7 h de agitación a temperatura ambiente, se añadió AcOEt (15 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 95/5 a 70/30) para proporcionar el floroglucinol monoprotegido 11a (37 mg, 61%) como un sólido blanco. El derivado totalmente desprotegido se aisló con un 11% (3.20 mg).
Rf (hexano/AcOEt 70/30) 0.6; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.05 (s, 1H, CHaro), 6.02-6.00 (m, 2H, CHaro), 4.86 (br, 1H, OH), 3.73 (s, 3H, CHaO), 1.29-1.20 (m, 3H, CH-Si), 1.09 (d, J = 7.5 Hz, 18H, (CHa)2C); RMN 1aC (125 MHz; CDCla) 8c 161.3, 157.9, 157.2, 100.1, 98.8, 94.6, 55.2, 17.9, 12.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C16H27OaSi 295.1729; encontrado 295.1730.
3-isopropoxi-5-(triisopropilsililoxi)fenol 11b: el floroglucinol diprotegido 10b (100 mg, 0.21 mmoles) se disolvió en THF seco (6 ml). Se añadió EtaN-3HF (68 jl, 0.42 mmoles) a la mezcla, y la reacción se siguió mediante TLC y se detuvo para reducir tanto como fuera posible la formación del derivado totalmente desprotegido. Después de 5 h de agitación a temperatura ambiente, se añadieron a la mezcla 15 ml de AcOEt, y la capa orgánica se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexano/AcOEt 95/5) para proporcionar el floroglucinol monoprotegido 11b (42 mg, 62%) como aceite incoloro. El derivado completamente desprotegido se aisló con un 14% (5 mg).
Rf (hexano/AcOEt 70/30) 0.7; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.04 (t, J = 2.5 Hz, 1H, CHaro), 6.01 (t, J = 2.5 Hz, 1H, CHaro), 5.99 (t, J = 2.5 Hz, 1H, CHaro), 4.87 (br, 1H, OH), 4.44 (quint, J = 6.0 Hz, 1H, CHp), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H, (CHa)2Cp), 1.28-1.20 (m, 3H, CH-Si), 1.10 (d, J = 7.5 Hz, 18H, (CHâ Crnps); RMN 1aC (125 MHz; CDCla) 8c 159.6, 157.9, 157.0, 100.7, 100.0, 96.6, 70.0, 22.0, 17.9, 12.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]' calculado para C-^Ha-iOaSi 323,2042; encontrado 323.2045.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-metoxi-5-(triisopropilsililoxi)fenilo 12a: el acoplamiento del floroglucinol-OMe protegido 11a (96 mg, 0.32 mmoles) y DHA (106 mg, 0.32 mmoles) siguiendo el procedimiento general, proporcionó 12a (120 mg, 60%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99/1).
Rf (hexano/ AcOEt 99/1) 0.28; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.30 (s, 1H, CHaro), 6.25-6.23 (m, 2H, CHaro), 5.48 5.28 (m, 12H, CH=CH), 3.74 (s, 3H, CHaO), 2.87-2.79 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.60-2.57 (m, 2H, CH2-C=O), 2.52 2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.29-1.20 (m, 3H, CH-Si), 1.09 (d, J = 7.4 Hz, 18H, (CHa)2C), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CHa); RMN 1aC (125 MHz; CDCla) 8c 171.2, 160.8, 157.4, 152.0, 132.0, 129.6, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.8, 127.5, 127.0, 106.3, 103.8, 100.4, 55.4, 34.3, 25.6, 25.6, 25.5, 22.7, 20.5, 17.8, 14.2, 12.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para Ca8H5gO4Si 607.4183; encontrado 607.4185.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-isopropoxi-5-(triisopropilsililoxi)fenilo 12b: el acoplamiento del mono-TIPS-mono-isopropilfloroglucinol 11b (100 mg, 0.31 mmoles) y DHA (101 mg, 0.31 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 12b (132 mg, 67%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99/1).
Rf (hexano/AcOEt 99/1) 0.30; RMN 1H (500 MHz; CDCla) 8h 6.29 (t, J = 2.0 Hz,1H, CHaro), 6.24 (t, J = 2.0 Hz,1H, CHaro), 6.21 (t, J = 2.0 Hz,1H, CHaro), 5.49-5.29 (m, 12H, CH=CH), 4.45 (quint, J = 6.0 Hz, 1H, CHp), 2.88-2.81 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.60-2.57 (m, 2H, CH2-C=O), 2.52-2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.08 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.32 (d, J = 6.0 Hz, 6 H, (CHa^Cp), 1.28-1.22 (m, 3H, CH-Si), 1.10 (d, J = 7.5 Hz, 18H, (CHâ Crnps), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CHa); RMN 1aC (125 MHz; CDCla) 8c 171.1, 159.1, 157.3, 151.9, 132.0, 129.6, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.8, 127.6, 127.0, 106.0, 105.3, 102.3, 70.1, 34.3, 25.6, 25.6, 25.5, 22.7, 21.9, 20.5, 17.9, 14.2, 12.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C40H6aO4Si 635.4496; encontrado 635.4502.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-hidroxi-5-metoxifenilo 13a: la desprotección del DHAfloroglucinol-OMe protegido 12a (75 mg, 0.12 mimóles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 13a (49 mg, 88%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 90/10).
Rf (hexano/AcOEt 80/20) 0.29; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.25 (s, 1H, CHaro), 6.22 (s, 1H, CHaro), 6.18 (s, 1H, CHaro), 5.49-5.28 (m, 12H, CH=CH), 5.21 (br, 1H, OH), 3.75 (s, 3H, CH3O), 2.88-2.80 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.60 (t, J = 7.3 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.52-2.46 (m, 2H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.3 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCla) 8c 171.8, 161.2, 157.2, 152.0, 132.0, 129.7, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.4, 127.0, 101.9, 100.0, 99.4, 34.3, 25.6, 25.6, 25.5, 22.7, 20.5, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C29H39O4451.2848; encontrado 451.2851.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo 13b: la desprotección del DHA-floroglucinol protegido 12b (120 mg, 0.19 mmoles) se llevó a cabo a través del procedimiento general, y proporcionó 13b (82 mg, 90%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 90/10).
Rf (hexano/AcOEt 90/10) 0.30; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.25 (t, J = 2.0 Hz, 1H, CHaro), 6.21 (t, J = 2.0 Hz, 1H, CHaro), 6.17 (t, J = 2.0 Hz,1H, CHaro), 5.48-5.29 (m, 12H, CH=CH), 4.95 (br, 1H, OH), 4.47 (quint, J = 6.0 Hz, 1H, CHp), 2.89-2.81 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.61-2.58 (m, 2H, CH2-C=O), 2.54-2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.08 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.32 (d, J = 6.0 Hz, 6 H, (CHskCp), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 171.3, 159.6, 156.9, 152.1, 132.0, 129.7, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.8, 127.5, 127.0, 101.9, 101.5, 100.8, 70.2, 34.3, 25.6, 25.6, 25.6, 25.5, 22.7, 21.9, 20.5, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]-calculado para C31H41O4477.3005; encontrado 477.3007.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3,5-dimetoxifenilo 15a: el acoplamiento del di-OMefloroglucinol 14a (47 mg, 0.30 mmoles) y DHA (100 mg, 0.30 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 15a (110 mg, 77%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 97/3).
Rf (hexano/AcOEt 95/5) 0.36; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h6.33 (t, J = 2.0 Hz, 1H, CHaro), 6.25 (d, J = 2.0 Hz, 2H, CHaro), 5.49-5.28 (m, 12H, CH=CH), 3.76 (s, 6 H, CH3O), 2.88-2.79 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.60 (t, J = 7.3 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.54-2.49 (m, 2H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.3 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 8c 171.4, 161.0, 152.1, 131.9, 129.8, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.4, 126.9, 100.1, 98.1, 55.4, 34.3, 25.6, 25.5, 25.4, 22.7, 20.4, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C30H41O4465.3005; encontrado 465.3011.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3,5-diisopropoxifenilo 15b: el acoplamiento del di-OiP-floroglucinol 14b (96 mg, 0.45 mmoles) y DHA (150 mg, 0.45 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 15b (168 mg, 70%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 97/3).
Rf, (hexano/AcOEt 95/5) 0.57; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.28 (s, 1H, CHaro), 6.19 (s, 2H, CHaro), 5.48-5.28 (m, 12H, CH=CH), 4.46 (quint, J = 5.9 Hz, 2H, CH), 2.89-2.78 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.59 (t, J = 7.4 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.53-2.48 (m, 2H, CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.3 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 12H, (CHs^C), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C(125 MHz; CDCh) 8c 171.2, 159.3, 152.1, 131.9, 129.6, 128.5, 128.3, 128.2, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.5, 126.9, 101.4, 101.2, 70.0, 34.2, 25.6, 25.5, 25.4, 22.7, 21.9, 20.5, 14.2; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C34H49O4521.3631; encontrado 521.3636.
Ejemplo 2-1: síntesis del conjugado propil-DHA-floroglucinol
5-propilbenceno-1,3-diol (9c): a una suspensión de floroglucinol (0.40 g, 3.17 mmoles) en dioxano (1 ml) se añadió una disolución preparada de propanol saturada con HCl seco (gas) (4 ml). La reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 4 h. Se añadió una cantidad adicional de la disolución saturada de HCl (1 ml), y la reacción se mantuvo a 70°C durante 1 h. Los disolventes se evaporaron a vacío, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2Ch/MeOH 98/2) para proporcionar 9c (154 mg, 65%) como un sólido blanco. Rf (CH2Cl2/MeOH 95/5) 0.6; RMN 1H (500 MHz; MeOD) 8h 5.87 (s, 3H, CHaro), 4.89 (br, 2H, OH), 3.82 (t, J = 6.5 Hz, 2H, CH2-O), 1.74 (sex, J = 7.2 Hz, 2H, CH2-C), 1.01 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3) A
5-propil-1,3-bis(triisopropilsililoxi)benceno (10c): el floroglucinol-OPropil 9c (300 mg, 1.78 mmoles) se disolvió en CH2Cl2 seco (30 ml). Se añadieron gota a gota a la disolución diisopropiletilamina (641 pl, 3.75 mmoles) y TIPS-OTf (1.01 ml, 3.75 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se añadió AcOEt (30 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (20 ml) y salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/AcOEt 99.5/0.5) para proporcionar el floroglucinol-OPropil diprotegido 10c (402 mg, 47%) como un aceite incoloro, que participó directamente en la monodesprotección selectiva.
3-propil-5-(triisopropilsililoxi)fenol (11c): el floroglucinol diprotegido 10c (400 mg, 0.83 mmoles) se disolvió en THF seco (30 ml). Se añadió gota a gota Et3N-3HF (277 pl, 1.66 mmoles), y la reacción se siguió mediante TCL y se detuvo para reducir tanto como fuera posible la proporción del derivado completamente desprotegido. Después de 7 horas de agitación a temperatura ambiente, se añadió AcOEt (30 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (20 ml) y salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/AcOEt 97/3) para proporcionar el floroglucinol monoprotegido 11c (137 mg, 51%) como un aceite blanco.
Rf (hexano/AcOEt 9.5/0.5) 0.5; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.04 (t, J = 2.5Hz, 1H, CHaro), 6.01 (t, J = 2 Hz, 1H, CHaro), 5.98 (t, J = 2 Hz, 1H, CHaro), 4.63 (br, 1H, OH), 3.83 (t, J = 6.5 Hz, 2H, CH2O),1.76 (sext, J = 7 Hz, 2H, CH2-C), 1.27-1.20 (m, 3H, CH-Si), 1.09 (d, J = 7 Hz, 18H, (CHs^C), 1.01 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3).
(4,7,10,13,16,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-propoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (12c)
El acoplamiento del floroglucinol-propilo monoprotegido 11c (100 mg, 0.30 mmoles) y DHA (109 mg, 0.33 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 12c (96 mg, 50%) como un aceite amarillo después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99/1).
Rf (Hexano/AcOEt 95/5) 0.45; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.31 (t, J = 2.2, 1H), 6.26 (t, J = 2.1, 1H), 6.23 (t, J = 2.1, 1H), 5.54 - 5.26 (m, 12H), 3.85 (t, J = 6.6, 2H), 2.93 - 2.77 (m, 10H), 2.61 - 2.58 (m, 2H), 2.55 - 2.47 (m, 2H), 2.14 -2.02 (m, 2H), 1.80 - 1.75 (m, 4H), 1.32 - 1.20 (m, 6H), 1.11 (d, J = 7.3, 18H), 1.02 (t, J = 7.4, 3H), 0.98 (t, J = 7.5, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8171.34, 160.51, 157.45, 152.05, 132.12, 129.74, 128.66, 128.44, 128.37, 128.36, 128.20, 128.19, 128.18, 128.12, 127.99, 127.70, 127.13, 106.14, 104.32, 101.16, 69.73, 34.42, 25.76, 25.74, 25.65, 22.90, 22.61, 18.01, 18.00, 14.40, 12.73, 10.62.
(4,7,10,13,16,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-hidroxi-5-propoxifenilo (13c)
La desprotección del DHA-floroglucinol-propilo protegido 12c (95 mg, 0.14 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 13c (58 mg, 87%) como un aceite incoloro después de 4h30 de reacción y
purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 95/5).
Rf (Hexano/AcOEt 90/10) 0.21; RMN 1H (500 MHz, CDCla) 86.23 (m, 1H), 6.20 (m, 1H), 6.15 (m, 1H), 5.52 -5.27 (m, 12H), 3.83 (t, J = 6.5, 2H), 2.92 - 2.78 (m, 10H), 2.66 - 2.57 (m, 1H), 2.57 - 2.47 (m, 2H), 2.09 - 2.06 (m, 3H), 1.79 - 1.73 (m, 3H), 1.03 - 0.95 (m, 6 H); RMN 13C (126 MHz, CDCI3) 8 172.12, 160.87, 157.37, 152.07, 132.17, 129.88, 128.69, 128.48, 128.40, 128.38, 128.20, 128.20, 128.09, 128.00, 127.55, 127.14, 101.79, 100.66, 100.02, 69.84, 34.44, 25.75, 25.73, 22.87, 22.54, 20.67, 14.39, 10.58.
Ejemplo 3: síntesis del conjugado de DHA-resveratrol.
Como se presentó anteriormente, el mecanismo de captura de un estresor carbonílico (AtR) por parte del floroglucinol requeriría la presencia de un patrón de resorcinol en el esqueleto fenólico. Este marco se encuentra en muchos otros polifenoles naturales (el anillo A de los flavonoides, por ejemplo), pero asimismo en los estilbenoides y especialmente en el resveratrol, que es un vinilogo perfecto del floroglucinol. Debido a la importancia de la reactividad del resorcinol para eliminar AtR, DHA se unió al hidroxilo en la posición 4' del resveratrol, para permitir que los grupos 3- y 5-hidroxilo estuvieran disponibles para formar el derivado de cromeno. En comparación con la serie de floroglucinol, la estrategia prevista para la síntesis de estilbenoides presenta dificultades adicionales, ya que requiere una protección selectiva del fenol en las posiciones 3 y 5, a pesar de la estrecha reactividad de los tres grupos hidroxilo del resveratrol. Para superar este inconveniente, el resveratrol se aciló regioselectivamente por la lipasa B Candida antartica (CALB o Novozyme 435, que presentan una alta selectividad por el grupo hidroxilo en la posición 4') en presencia de acetato de vinilo para proporcionar un único producto protegido, el 4'-0-acetilresveratrol 16, con un 57%. Los hidroxilos en las posiciones 3 y 5 se protegieron usando TIPS-OTf para obtener 17, que se sometió a desprotección de acetilo en presencia de una disolución metanólica de MeONa con excelente rendimiento. El resveratrol desprotegido en 4' 18 se acopló entonces con DHA (19), como se llevó a cabo en la serie de floroglucinol, y se sometió a desprotección de TIPS para obtener resveratrol-DHA 20 con un rendimiento total del 20%.
Las etapas implementadas como se mencionó anteriormente se describen a continuación en detalle.
(E)-acetato de 4-(3,5-dihidroxiestiril)fenilo 16: el resveratrol (200 mg, 0.88 mmoles) se disolvió en 2-metilbutan-2-ol (20 ml) y acetato de vinilo (5 ml) en presencia de la lipasa soportada de Candida antarctica (Novozyme 435, CalB, 1 g). La mezcla se agitó con un evaporador rotatorio a 40°C durante 4 días. La lipasa se separó por filtración, y se lavó dos veces con AcOEt y éter dietílico. El filtrado obtenido se concentró a presión reducida, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2Ch/MeOH 99/1 hasta 90/10) para proporcionar el 4'O-acetil resveratrol 16 (135 mg, 57%) como un sólido blanco. El 27% del material de partida se recuperó después de la purificación (5 mg).
Rf (CH2Cl2/MeOH 95/5) 0.30; RMN 1H (500 MHz; CD3OD) 8h 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H, H2and Ha) 7.07 (d, J = 7.6 Hz, 2H, H3' y H5) 7.04 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H8), 6.97 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H7), 6.49 (s, 2H, H2, Ha), 6.21-6.19 (m, 1H, H4), 2.27 (s, 3H, CH3(oac)); RMN 13C (125 MHz; MeOD) 8c 171.1, 159.7, 151.5, 140.6, 136.58, 130.24, 128.3, 128.3, 122.9, 106.1, 103.2, 20.9; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C ^ H - ^ 271.0964; encontrado 271.0972.
(E)-Acetato de 4-(3,5-bis(triisopropilsililoxi)estiril)fenilo 17: el resveratrol-4'-OAc 16 (100 mg, 0.37 mmoles) se disolvió en THF seco (6 ml). Se añadieron gota a gota a la disolución trietilamina (109 pl, 0.78 mmoles) y TIPS-OTf (208 pl, 0.78 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió una misma cantidad de Et3N y TIPS-OTf para completar la reacción. Después de 3 horas adicionales de reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo obtenido se disolvió en 10 ml de AcOEt, y se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4) y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/AcOEt 80/20) para proporcionar el resveratrol protegido 17 (152 mg, 71%) como un aceite incoloro.
Rf (pentano/AcOEt 95/5) 0.5; RMN 1H (500 MHz; CDCl3) 8h 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 2H, H2 y Ha), 7.09 (d, J = 8.0 Hz, 2H, H3 y Ha), 6.98 (d, J = 16.3 Hz, 1H, Ha), 6.92 (d, J = 16.3 Hz, 1H, H7), 6.65 (s, 2H, H2, ^ ) , 6.37-6.36 (m, 1H, H4), 2.31 (s, 3H, CH3(oac)), 1.26 (m, 6 H, CH-Si), 1.12 (d, J = 7.6 Hz, 36H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCl3) 8c 169.7, 157.3, 150.2, 139.0, 135.3, 129.3, 127.8, 127.7, 122.0, 111.6, 111.5, 21.4, 18.2, 13.9; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C34H55O4Si2583.3633; encontrado 583.3640.
(E)-4-(3,5-bis(triisopropilsililoxi)estiril)fenol 18: el resveratrol protegido 17 (239 mg, 0.41 mmoles) se disolvió en MeOH seco (2 ml) y CH2Ch (1 ml). Se añadió a la disolución una cantidad catalítica de metanolato de sodio (6.60 mg, 0.12 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió una cantidad de NaOMe hasta completar la reacción. Después de 5 h de reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexano/AcOEt 95/5) para proporcionar el resveratrol desprotegido en 4' 18 (214 mg, 97%) como un aceite incoloro.
Rf (hexano/AcOEt 90/10) 0.41; RMN 1H (500 MHz; CD3OD) 8h 7.38 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H2 y Ha), 6.95 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H8), 6.84 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H7), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H3 y Ha), 6.64-6.63 (m, 2H, H2, ^ ) , 6.30-6.29 (m, 1H, H4), 1.30-1.22 (m, 6H, CH-Si), 1.14 (d, J = 7.5 Hz, 36H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; MeOD) 8c 158.5, 158.3, 141.3, 130.1, 129.9, 129.0, 126.5, 116.5, 112.1, 111.4, 18.4, 13.9; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C32H53O3Si2541.3527; encontrado 541.3536.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 4-((E)-3,5-bis(triisopropilsililoxi)estiril)fenilo 19: el acoplamiento del resveratrol diprotegido 18 (103 mg, 0.18 mmoles) y DHA (67 mg, 0.20 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 19 (130 mg, 80%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99/1).
Rf (hexano/AcOEt 95/5) 0.73; RMN 1H (500 MHz; CDCl3) 8h 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H2 y Ha ), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Hay Ha), 6.98 (d, J = 16.5 Hz, 1H, H8), 6.92 (d, J = 16.5 Hz, 1H, H7), 6.64 (d, J = 2.3 Hz, 2H, H2, ^ ) , 6.36 (t, J = 2.3 Hz 1H, H4), 5.50-5.29 (m, 12H, CH=CH), 2.90-2.80 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.64 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.55-2.51 (m, 2H, CH2 alílico), 2.08 (quint, J = 7.0 Hz, 2H, CH2 alílico), 1.29-1.22 (m, 6 H, CH-Si), 1.12 (d, J = 7.5 Hz, 36H, (CH3)2C); 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCl3) 8c 171.8, 157.4, 150.4, 139.1, 135.3, 132.3, 130.0, 129.3, 128.9, 128.7, 128.6, 128.6, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 127.9, 127.8, 127.7, 127.3, 122.0, 111.7, 111.6, 34.6, 25.9, 25.9, 25.8, 23.1, 20.9, 18.2, 14.6, 13.0; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C54H83O4S¡2851.5824; encontrado 851.5825.
(4,7,10,13,16,19 Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 4-((E)-3,5-dihidroxifenilestiril)fenilo 20: la desprotección del DHA-resveratrol protegido 19 (142 mg, 0.17 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 20 (55 mg, 61%) como un sólido blanco después de 7 h de reacción y purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 95/5 hasta 70/30).
Rf (hexano/AcOEt 70/30) = 0.22; RMN 1H (500 MHz; CDC13) 8h 7.45 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H2 y Ha ), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H, Hay Ha), 6.95 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H8), 6.85 (d, J = 16.2 Hz, 1H, H7), 6.51 (d, J = 2.1 Hz, 2H, H2, ^ ) , 6.26 (t, J = 2.1 Hz, 1H, H4), 5.52-5.29 (m, 12H, CH2 bis-alílico), 5.13 (br, 2H, OH), 2.90-2.80 (m, 10H, CH2 alílico), 2.66 (t, J = 7.4 Hz, 2H, CH2-C=O), 2.52-2.56 (m, 2H, CH2 alílico), 2.08 (quint, J = 7.8 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.98 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCl3) 8c 172.3, 157.3, 150.4, 140.0, 135.2, 132.4, 130.1, 128.9, 128.7, 128.6, 128.6, 128.6, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 127.8, 127.7, 127.3, 122.1, 106.4, 102.7, 34.6, 25.9, 25.8, 23.1, 20.9, 14.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C36H43O4539.3155; encontrado 539.3160.
Ejemplo 3-1: síntesis del conjugado de DHA-resveratrol en la posición 3.
f-butilmetiléter
n-BuOH
N ovozym e 435
El resveratrol protegido 17 (1 g, 1.7 mimóles) del ejemplo 3 se disolvió en THF seco (60 ml), se añadió gota a gota trihidrofluoruro de trietilamonio (554 pl, 3.4 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se añadió AcOEt (60 ml) a la mezcla, y la capa orgánica se lavó con agua (20 ml) y salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 95/5 hasta 80/20) para proporcionar el resveratrol monoprotegido 26 (350 mg, 48%) como un sólido blanco. El resveratrol diprotegido se aisló con un 26% como un sólido blanco (118 mg).
Rf (Hexano/AcOEt 70/30) 0.6; RMN 1H (500 MHz, CDCla) 87.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.92 (q, J = 15.0 Hz, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.32 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 2.32 (s, 3H), 1.33 - 1.22 (m, 3H), 1.12 (d, J = 7.3 Hz, 18H); RMN 13C (126 MHz, CDCla) 8 170.23, 157.52, 156.89, 150.06, 139.24, 135.21, 128.88, 127.92, 127.61, 121.85, 111.26, 107.01, 106.28, 21.30, 18.06, 12.78.
(4,7,10,13,16,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-((E)-4-acetoxiestiril)-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (27)
El acoplamiento del resveratrol monoprotegido 26 (470 mg, 1.1 mmoles) y DHA (397 mg, 1.2 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 27 (391 mg, 49%) como un sólido blanco después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 98/2).
Rf (Hexano/AcOEt 90/10) 0.5; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 87.49 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.97 (q, J = 16.2 Hz, 2H), 6.85 (t, J = 1.9 Hz, 2H), 6.53 (t, J = 2.1Hz, 1H), 5.54 - 5.22 (m, 12H), 2.93 - 2.76 (m, 10H), 2.63 -2.60 (m, 2H), 2.58 -2.49 (m, 2H), 2.13 -2.01 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.31 -1.25 (m, 3H), 1.12 (d, J = 7.3, 18H), 0.97 (t, J = 7.5, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8171.44, 169.55, 157.06, 151.81, 150.32, 139.23, 134.91, 132.15, 129.80, 128.70, 128.67, 128.48, 128.39, 128.38, 128.28, 128.20, 128.18, 128.11, 127.99, 127.68, 127.66, 127.13, 121.93, 115.79, 112.89, 112.26, 34.45, 25.77, 25.76, 25.74, 25.65, 22.90, 21.27, 20.68, 18.04, 14.41, 12.75.
(4,7,10,13,16,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-((E)-4-hidroxiestiril)-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (28)
El DHA-resveratrol protegido 27 (345 mg, 0.47 mimóles) se disolvió en í-butilmetiléter (55 ml) y n-BuOH (2 ml). La lipasa soportada Candida Antárctica (Novozyme 435, CalB, 345 mg) se añadió a esta disolución, y la mezcla se agitó con un evaporador rotatorio a 40°C durante 3 días. La lipasa se separó por filtración, y se lavó con 5x30 ml de AcOEt y 2x30 ml de éter dietílico. El filtrado obtenido se concentró a presión reducida, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 95/5 hasta 90/10) para proporcionar el compuesto 28 (291 mg, 89%) como un aceite amarillo.
Rf (Hexano/AcOEt 90/10) 0.55; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 87.37 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 6.88 - 6.78 (m, 5H), 6.50 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.52 - 5.26 (m, 12H), 2.95 - 2.74 (m, 10H), 2.67 - 2.59 (m, 2H), 2.54 -2.52 (m, 2H), 2.14 -2.00 (m, 2H), 1.34 - 1.20 (m, 3H), 1.11 (d, J = 7.3 Hz, 18H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCla) 8 171.54, 157.01, 155.52, 151.75, 139.68, 132.15, 130.09, 129.79, 129.18, 128.67, 128.47, 128.38, 128.37, 128.20, 128.18, 128.16, 128.12, 127.99, 127.69, 127.12, 125.99, 115.72, 115.52, 112.42, 112.04, 34.46, 25.76, 25.75, 25.73, 25.64, 22.90, 20.67, 18.03, 14.39, 12.75.
(4,7,10,13,16,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexenoato de 3-hidroxi-5-((E)-4-hidroxiestiril)fenilo (29)
La desprotección del DHA-resveratrol protegido 28 (330 mg, 0.47 mmoles) se llevó a cabo con el procedimiento general, y proporcionó 29 (191 mg, 75%) como un sólido blanco después de 4h30 de reacción y purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 80/20).
Rf (Hexano/AcOEt 70/30) 0.33; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 87.34 (d, J = 8.6, 2H), 6.95 (d, J = 16.3, 1H), 6.83 -6.73 (m, 5H), 6.46 (t, J = 2.1, 1H), 5.55 -5.25 (m, 12H), 5.12 (d, J = 21.8, 2H), 2.95 -2.74 (m, 10H), 2.60 -2.66 (m, 2H), 2.59 - 2.49 (m, 2H), 2.11 - 2.03 (m, 2H), 1.64 (s, 2H), 0.97 (t, J = 7.5, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8 172.03, 156.61, 155.65, 151.87, 140.32, 132.22, 129.95, 129.92, 129.68, 128.73, 128.54, 128.44, 128.43, 128.26, 128.23, 128.23, 128.12, 128.03, 127.59, 127.16, 125.50, 34.49, 25.80, 25.78, 25.76, 25.68, 22.94, 20.71, 14.43.
Ejemplo 4: síntesis del conjugado de 1-floroglucinol-2-DHA-glicerofosfatidilcolina.
El DHA podría acumularse en la retina y el cerebro a través de la absorción específica de lisofosfatidilcolina que contiene DHA (1-Liso-2-DHA-PC o LisoPCDHA 21). Dado que el DHA en la posición sn-2 de LisoPCDHA se considera como la forma fisiológica de esta LisoPC poliinsaturada, la reacción de acoplamiento del resto fenólico se llevó a cabo en la posición sn-1. Se desarrolló un método, basado en la sn1-LisoPCDHA 21, intermedio perfecto para acceder al lipofenol deseado a partir de un acoplamiento químico con un floroglucinol portador de un enlazador ácido. Para obtener cuantitativamente el compuesto 21, se llevó a cabo la hidrólisis enzimática en EtOH/H2O 95/5. Usando 200% (p/p) de enzima y un tiempo de reacción de 40 h, la reacción condujo a un 50% de LisoPC-DHA purificado 21. Añadiendo otra porción de enzima después de 9 h, y reduciendo el tiempo de reacción total a 29 h, aumenta el rendimiento de LisoPC-DHA hasta 85%. Parece que un tiempo de reacción más largo facilita la migración de DHA a la posición sn-1, para formar 1-DHA-2-LisoPC, que, a su vez, se convierte en el sustrato de la lipozima para la regeneración de la glicerofosfocolina. La monitorización mediante HPLC del material bruto reveló que en esas condiciones se observó una proporción muy pequeña de migración después de 29 h de reacción. Además, según el análisis de RMN HMBC de 21 aislado, el d Ha en la posición sn-2 se confirmó por la presencia de un acoplamiento entre el carbono de la función carboxilo de DHA y el protón de CH del resto de glicerol.
Se seleccionó un conector corto para unir las partes lipídica y fenólica con el fin de mantener las propiedades hidrófilas en la posición sn-1, para limitar la lipofilia y para imitar tanto como sea posible el vector fisiológico LisoPCDHA. Se introdujo un enlazador de glutarilo en el esqueleto de floroglucinol usando anhídrido glutárico en presencia de DMAP (23). Después, la etapa de acoplamiento proporcionó el conjugado de fosfolípidos 24 (65%), que se sometió a la desprotección del grupo TIPS y condujo a la 1-glutaril-floroglucinol-2-DHA-PC deseada 25 con un rendimiento global del 20% en 6 etapas a partir de compuestos comercialmente disponibles.
1-liso-2-docosahexenoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina 21: el PC-16:0-DHA comercialmente disponible (Coger, Francia) (25 mg, 0.03 mmoles) se disolvió en etanol al 96% (250 j l ) en presencia de la lipozima soportada (inmovilizada de Mucor miehei) (25 mg). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 9 h, y se añadió a la mezcla una cantidad adicional de enzima soportada (25 mg). Después de 29 h de reacción total, la enzima soportada se separó por filtración, y se lavó con EtOH absoluto (3x3 ml) y cloroformo (3x3 ml). El filtrado se concentró a vacío y se purificó en cartucho Sepak SiOH (CHCh/MeOH 100/0 hasta 60/40) para proporcionar el sn1-Liso-PC-DHA 21 (15 mg, 85%) como un aceite incoloro. Se recuperó 15% del material de partida (4 mg) después de la purificación.
Rf (CHCla/MeOH/H2O 65/25/4) 0.19; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 6h 5.41-5.29 (m, 12H, CH=CH), 4.96-4.91 (m, 1H, CH-O), 4.34-4.28 (m, 2H, CH2-O), 4.06-4.00 (m, 1H, CH2(a)-O), 3.98-3.92 (m, 1H, CH2(b)-O), 3.80-3.75 (m, 2H, CH2-N), 3.69-3.65 (m, 2H, CH2-O), 3.32 (s, 9H, (CH3)3-N+), 2.85-2.79 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.37-2.34 (m, 4H, CH2-C=O y CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCla) 6c 172.9, 132.2, 129.5, 128.8, 128.6, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 127.2, 73.7, 66.4, 63.3, 60.0, 59.6, 54.5, 34.3, 25.8, 25.8, 25.8, 25.8, 25.8, 22.8, 20.8, 14.5; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C30H51NO7P 568.3403; encontrado 568.3409; HPLC rt: 25.80 min, (Atlantis C18 5 jm (4.6x250 mm), A: MeOH/H2O/ACN 90/35/2.5, B: MeOH/H2O/ACN 100/4/2.
ácido 5-(3,5-bis(triisopropilsililoxi)fenoxi)-5-oxopentanoico 23: el floroglucinol diprotegido 2 (100 mg, 0.23 mmoles) se disolvió en CH2Ch (5 ml) en presencia de piridina (27 jl, 0.23 mmoles). Se añadieron anhídrido glutárico (39 mg, 0.34 mmoles) y DMAP (3 mg, 0.02 mmoles) a la disolución a temperatura ambiente, y la reacción se calentó a 40°C. Se añadieron equivalentes adicionales de reactivos (1.5 equiv. para anhídrido glutárico, y 0.1 equiv. para DMAP) después de un día de agitación. La reacción se detuvo después de 4 días mediante la adición de agua (10 ml). La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó (MgSO4), y se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/AcOEt 90/10) para proporcionar el glutarato floroglucinol diprotegido 23 (90 mg, 71%) como un aceite incoloro.
Rf (pentano/AcOEt 60/40) 0.50; RMN 1H, CDCh, 500 MHz; 6ppm: 6.28 (t, J = 2.2 Hz, 1H, CHaro), 6.25 (d, J = 2.2 Hz, 2H, CHaro), 2.61 (t, J = 7.4 Hz, 2H, CH2glut), 2.51 (t, J = 7.3 Hz, 2H, CH2glut), 2.06 (quint, J = 7.3 Hz, 2H, CH2glut), 1.27-1.20 (m, 6H, CH-Si), 1.08 (d, J = 7.3 Hz, 36H, (CH3)2C); RMN 13C (125 MHz; CDCh) 6c 178.2, 170.8, 157.1,
151.6, 109.3, 106.7, 33.2, 32.7, 19.7, 17.8, 12.6; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M-H]- calculado para C29H51O6SÍ2 551.3224; encontrado 551.3214.
1-[5-(3,5-bis(triisopropilsililoxi)fenoxi)-5-oxopentanoil]-2-docosahexenoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina 24: lisoPC-d Ha 21 (15 mg, 0.02 mmoles) y el floroglucinol glutárico diprotegido 23 (16 mg, 0.02 mmoles) se disolvieron en CH2CI2 seco (2 ml). Se añadieron a la disolución DCC (6 mg, 0.03 mmoles) y DMAP (1 mg, 8.30 emoles), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h bajo nitrógeno. El disolvente se evaporó a presión reducida, y el residuo obtenido se purificó en cartucho Sepak SioH (CHCh/MeOH 100/0 hasta 60/40) para proporcionar el polifenólico-PC-DHA deseado 24 (19 mg, 65%) como un aceite incoloro. Se recuperó el 33% del material de partida (5 mg) durante la purificación.
Rf (CHCla/MeOH/H2O 65/25/4) 0.40; RMN 1H (500 MHz; CDCh) 8h 6.28 (t, J = 2.5 Hz, 1H, CHaro), 6.23 (t, J = 2.5 Hz, 2H, CHaro), 5.41-5.28 (m, 12H, CH=CH), 5.25-5.20 (m, 1H, CH-O), 4.43 (dd, J = 3.0 Hz, J = 12.0 Hz, 1H, CH2(a)-O), 4.36-4.30 (m, 2H, CH2-O), 4.17 (dd, J = 6.5 Hz, J = 12.0 Hz, 1H, CH2(b)-O), 4.02-3.95 (m, 2H, CH2-O), 3.80 3.77 (m, 2H, CH2-N), 3.35 (s, 9H, (CH3)3-N+), 2.84-2.79 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.57 (t, J = 7.5 Hz, 2H, CH2-C=O(glut)), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H, CH2-C=O(glut)), 2.39-2.35 (m, 4H, CH2-C=0(dha) y CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 2.00 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2(glut)), 1.24-1.18 (m, 6H, CH-Si), 1.08 (d, J = 7.5 Hz, 36H, (CH3)2C), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCl3) 8c 172.8, 172.7, 171.2, 157.4, 151.9, 132.2, 129.5, 128.7, 128.5, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.2, 109.5, 107.0, 70.8, 66.8, 63.4, 63.3, 59.4, 54.9, 34.3, 33.5, 33.2, 25.8, 25.8, 25.7, 22.8, 20.8, 20.1, 18.1, 14.5, 12.8; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C59H10iNO12PSi21102.6594; encontrado 1102.6608.
1-[5-(3,5-dihidroxifenoxi)-5-oxopentanoil]-2-docosahexenoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina 25: a una disolución de 24 (17 mg, 0.01 mmoles) en THF seco (0.50 ml) se le añadió Et3N-3HF (10 pl, 0.06 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El disolvente se evaporó a presión reducida, y el residuo obtenido se purificó en cartucho Sepak SiOH (CHCl3/MeOH 100/0 hasta 80/20) para proporcionar el polifenólico-PC-DHA desprotegido deseado 25 (10.20 mg, 84%) como un aceite incoloro.
Rf (CHCla/MeOH/H2O 65/25/4) 0.30; RMN 1H (500 MHz; CDCl3) 8h 6.43 (s, 1H, CHaro), 6.10 (s, 2H, CHaro), 5.42 5.28 (m, 12H, CH=CH), 5.18-5.14 (m, 1H, CHO), 4.42-4.37 (m, 1H, CH2(a)-O), 4.21-4.13 (m, 3H, CH2(b)-O y CH2-O ), 4.04-3.98 (m, 2H, CH2-O), 3.52-3.46 (m, 2H, CH2-N), 3.03 (s, 9H, (CH3)3-N+), 2.84-2.81 (m, 10H, CH2 bis-alílico), 2.56-2.51 (m, 2H, CH2-C=O(glut)), 2.46-2.41 (m, 2H, CH2-C=O(glut)), 2.37-2.33 (m, 4H, CH2-C =O(dha) y CH2 alílico), 2.07 (quint, J = 7.5 Hz, 2H, CH2 alílico), 2.01-1.95 (m, 2H, CH2(glut)), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3); RMN 13C (125 MHz; CDCla) 8c 172.7, 172.6, 172.1, 159.5, 152.5, 132.2, 129.5, 128.8, 128.5, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.3, 128.1, 128.0, 127.2, 101.4, 101.2, 70.5, 66.1, 63.5, 62.3, 59.7, 54.0, 34.0, 33.1, 33.0, 25.9, 25.8, 25.8, 25.8, 22.8, 20.8, 20.4, 14.5; HRMS (ESI-TOF) m/z: [M+H]+ calculado para C41H61NO12P 790.3931; encontrado 790.3940; HPLC rt: 24.12 min, (Atlantis C185pm (4.6x250mm), A: MeOH/H2O/ACN 90/35/2.5, B: MeOH/H2O/ACN 100/4/2.5, tci'=100/0, t15'=100/0, t30'=0/100, t50'=0/100 , detección 272 nm).
Ejemplo 5: síntesis del conjugado de EPA-floroglucinol
Preparación de (5,8,11,14,17 Z)-eicosa-5,8,11,14,17-pentenoato de 3,5-dihidroxifenilo
El acoplamiento del di-TIPS-floroglucinol 2 (652 mg, 1.48 mmoles) y EPA (543 mg, 1.79 mmoles) se llevó a cabo según el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó el floroglucinol-EPA protegido (753 mg, 70%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99.7/0.3).
La desprotección de este EPA-floroglucinol protegido (830 mg, 1.15 mmoles) se llevó a cabo utilizando el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó el (5,8,11,14,17 Z)-eicosa-5,8,11,14,17-pentenoato de 3,5-dihidroxifenilo (455 mg, 96%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 9/1 hasta 7 /3 ).
Rf (hexano/AcOEt 7/3) 0.3; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.09 (s, 3H), 5.46 - 5.30 (m, 10H), 2.85 - 2.80 (m, 8H), 2.57 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.20 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.10 - 2.05 (m, 2H), 1.83 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8 173.8, 157.6, 152.0, 132.3, 129.5, 128.8, 128.8, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.1, 127.2, 102.1, 101.4, 34.0, 26.7, 25.9, 25.8, 25.7, 24.8, 20.8, 14.5.
Ejemplo 6: síntesis del conjugado de EPA-floroglucinol alquilado
Preparación de (5,8,11,14,17 Z)-eicosa-5,8,11,14,17-pentenoato 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo
El acoplamiento del mono-TIPS-mono-isopropil-floroglucinol 11b (70 mg, 0.22 mmoles) y EPA (65 mg, 0.22 mmoles) se llevó a cabo según el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó el mono-isopropilfloroglucinol-EPA protegido (71 mg, 54%) como un aceite incoloro después de la purificación en cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99.5/0.5).
La desprotección de este EPA-floroglucinol protegido (65 mg, 0.11 mmoles) se llevó a cabo utilizando el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó (5,8,11,14,17 Z)-eicosa-5,8,11,14,17-pentenoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (37 mg, 76%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 9/1).
Rf (hexano/AcOEt 9/1) 0.3; RMN 1H (500 MHz, CDCls) 56.22 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.18 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.14 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.64 (br, 1H), 5.48 - 5.28 (m, 10H), 4.44 (quint, J = 6.0 Hz, 1H), 2.83 -2.80 (m, 8H), 2.56-2.53 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.12 - 2.02 (m, 2H), 1.82 (quint, J = 7.5 Hz, 2H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCls) 5172.7, 159.8, 157.5, 152.3, 132.4, 129.4, 129.0, 128.9, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.2, 127.3, 101.9, 101.9, 101.3, 70.6, 34.0, 26.8, 25.9, 25.9, 25.8, 25.8, 25.0, 22.2, 20.9, 14.6.
Ejemplo 7
:
síntesis del conjugado de docosanoico-floroglucinol alquilado
Preparación de docosanoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo
Ácido docosanoico (136.6 mg, 0.40 mmoles) y el mono-TIPS-mono-isopropil-floroglucinol 11b (100 mg, 0.30 mmoles) se disolvieron en CH2Cl2 seco (6 ml) y DMF seca (1.5 ml). Se añadieron DCC (82.7, 0.40 mmoles) y DMAP (5 mg, 0.04 mmoles) a la disolución, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h bajo nitrógeno, y después durante la noche a 50°C. Posteriormente, la mezcla se dejó 2 h a 4°C para inducir la cristalización de la diciclohexilurea. A continuación, el residuo de urea se separó por filtración, y el filtrado se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida. La purificación del material bruto se llevó a cabo mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano/AcOEt 99.5/0.5) para proporcionar (95 mg, 48%) del derivado protegido como un aceite incoloro.
La desprotección de este docosanoico-floroglucinol protegido (90 mg, 0.14 mmoles) se llevó a cabo utilizando el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó docosanoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (56 mg, 82%) como un sólido blanco después de la purificación en cromatografía de gel de sílice (hexano/AcOEt 9/1). Rf (hexano/AcOEt 9.5/0.5) 0.3; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 56.22 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.17 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.14 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.07 (br, 1H), 4.44 (hept, J = 6.1 Hz, 1H), 2.52 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.75-1.69 (m, 2H), 1.42-1.34 (m, 4H), 1.30 (d, J = 6.1 Hz, 6H), 1.28 - 1.22 (m, 30H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 5173.1, 159.8, 157.7, 152.4, 102.0, 101.9, 101.26, 70.6, 34.8, 32.3, 30.0, 30.0, 29.7, 29.8, 29.7, 29.6, 29.4, 25.2, 23.0, 22.3, 14.5.
Ejemplo 8: preparación de (9,12,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (PG-OiP-ALA)
(9,12,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoato de 3-isopropoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (34)
El acoplamiento del mono-TIPS-mono-isopropil-floroglucinol 11b (70 mg, 0.22 mmoles) y ALA (60 mg, 0.22 mmoles) se llevó a cabo según el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó el monoisopropil-floroglucinol-ALA protegido 34 (101 mg, 80%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 99.5/0.5).
Rf (hexano/AcOEt 99/1) 0.2; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 56.28 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.23 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.20 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.42 - 5.29 (m, 6H), 4.44 (sept, J = 6.0 Hz, 1H), 2.82 - 2.80 (m, 4H), 2.50 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.11 2.04 (m, 4H), 1.72 (quint, J = 7.5 Hz, 2H), 1.43-1.34 (m, 8H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H),1.27-1.19 (m, 3H), 1.09 (d, J = 7.3 Hz, 18H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 5 172.3, 159.5, 157.7, 152.3, 132.3, 130.6, 128.6, 128.6, 128.1, 127.4, 106.4, 105.6, 102.7, 70.5, 34.8, 29.9, 29.5, 29.5, 29.4, 27.5, 25.9, 25.9, 25.2, 22.3, 20.9, 18.2, 14.6, 12.9.
(9,12,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (35)
La desprotección del ALA-floroglucinol protegido 34 (90 mg, 0.15 mimóles) se llevó a cabo utilizando el procedimiento general utilizado en el ejemplo 1, y proporcionó el compuesto 35 PG-OiP-ALA (56 mg, 58%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (hexano/AcOEt 9/1).
Rf (hexano/AcOEt 8/2) 0.5; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.22 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.17 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.13 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.87 (Br, 1H), 5.42 - 5.29 (m, 6H), 4.44 (sept, J = 6.0 Hz, 1H), 2.82 - 2.80 (m, 4H), 2.52 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.11-2.04 (m, 4H), 1.73 (quint, J = 7.5 Hz, 2H), 1.43-1.32 (m, 8H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCla) 8173.1, 159.8, 157.6, 152.3, 132.3, 130.6, 128.6, 128.6, 128.1, 127.4, 102.0, 101.9, 101.3, 70.6, 34.8, 29.9, 29.5, 29.4, 29.4, 27.5, 25.9, 25.8, 25.2, 22.2, 20.9, 14.6.
Ejemplo 9: síntesis de ácido graso deuterado-alquil-floroglucinol.
11,11,14,14-D4-(9,12,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoato de 3-isopropoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (30)
El acoplamiento del mono-TIPS-mono-isopropil-floroglucinol 11b (104 mg, 0.32 mmoles) y ALA(D4) (100 mg, 0.35 mmoles) (ALA(D4) se adquirió de la compañía Retrotope) se llevó a cabo con el procedimiento general como se explica en el ejemplo 1, y proporcionó 30 (133 mg, 71%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 99/1).
Rf (Hexano/AcOEt 95/5) 0.6; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.28 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.23 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.20 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.46 -5.26 (m, 6H), 4.44 (hept, J = 6.0 Hz, 1H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.15 -1.99 (m, 4H), 1.80 - 1.65 (m, 2H), 1.45 - 1.32 (m, 8H), 1.31 (d, J = 6.1 Hz, 6H), 1.29 -1.19 (m, 3H), 1.10 (d, J = 5.0 Hz, 19H), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8 132.10, 130.38, 128.30, 127.76, 127.12, 106.14, 105.41, 102.47, 22.09, 18.00, 14.40, 12.71.
11,11,14,14-D4-(9,12,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (31)
La desprotección del ALA(D4)-mono-isopropil-floroglucinol protegido 30 (120 mg, 0.20 mimóles) se llevó a cabo mediante el procedimiento general como se explica en el ejemplo 1, y proporcionó 31 (67 mg, 77%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 95/5).
Rf (Hexano/AcOEt 90/10) 0.19; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.22 (t, J = 2.2, 1H), 6.17 (t, J = 2.1, 1H), 6.13 (t, J = 2.1, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.45 -5.28 (m, 6H), 4.44 (hept, J = 6.1, 1H), 2.53 (t, J = 7.6, 2H), 2.18 -1.97 (m, 4H), 1.81 -I . 65 (m, 2H), 1.44 - 1.32 (m, 8H), 1.30 (d, J = 6.1,6H), 0.98 (t, J = 7.5, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCla) 8172.94, 159.60, 157.44, 152.13, 132.10, 130.37, 128.33, 128.28, 127.78, 127.12, 101.77, 101.74, 101.10, 70.41, 34.55, 29.69, 29.26, 29.21,29.16, 27.31, 24.99, 22.04, 20.67, 14.41.
I I , 11-D2-(9,12Z)-octadeca-9,12-dienoato de 3-isopropoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenilo (32)
El acoplamiento del mono-TIPS-mono-isopropil-floroglucinol 11b (104 mg, 0.32 mmoles) y LA(D2) (100 mg, 0.35 mmoles) (LA(D2) se adquirió de la compañía Retrotope) se llevó a cabo con el procedimiento general del ejemplo 1, y proporcionó 32 (153 mg, 81%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 99/1).
Rf (Hexano/AcOEt 95/5) 0.75; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.28 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.23 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.20 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 5.45 - 5.27 (m, 4H), 4.44 (hept, J = 6.1 Hz, 1H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.12 - 1.99 (m, 4H), I . 74 - 1.71 (m, 2H), 1.46 - 1.17 (m, 23H), 1.09 (d, J = 7.2 Hz, 18H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8 172.05, 159.23, 157.47, 152.12, 130.37, 130.17, 128.07, 127.90, 106.14, 105.41, 102.47, 70.26, 34.54, 31.64, 29.72, 29.47, 29.29, 29.23, 29.19, 27.32, 27.31, 25.02, 22.69, 22.09, 18.00, 17.99, 14.19, 12.72, 12.71.
I I , 11-D2-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoato de 3-hidroxi-5-isopropoxifenilo (33)
La desprotección del LA(D2)-mono-isopropil-floroglucinol protegido 32 (130 mg, 0.22 mmoles) se llevó a cabo a través del procedimiento general como se explica en el ejemplo 1, y proporcionó 33 (84 mg, 88%) como un aceite incoloro después de la purificación por cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/AcOEt 95/5).
Rf (Hexano/AcOEt 90/10) 0.23; RMN 1H (500 MHz, CDCh) 86.22 (t, J = 2.2, 1H), 6.17 (t, J = 2.1, 1H), 6.13 (t, J = 2.1, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.46 - 5.28 (m, 4H), 4.44 (hept, J = 6.1, 1H), 2.56 -2.49 (m, 2H), 2.11 - 1.99 (m, 4H), 1.73 (m, 2H), 1.47 - 1.32 (m, 10H), 1.30 (d, J = 10.0, 6H), 0.89 (t, J = 7.0, 3H); RMN 13C (126 MHz, CDCh) 8 172.93, 159.62, 157.43, 152.15, 130.39, 130.17, 128.09, 127.91, 101.78, 101.76, 101.10, 70.41, 34.56, 31.64, 29.72, 29.47, 29.27, 29.22, 29.17, 27.33, 27.31, 25.01, 22.70, 22.05, 14.20.
Ejemplo 10: efecto del lipofenol sobre la toxicidad del todo-trans-retinal en la estirpe celular ARPE-19.
Con el fin de evaluar la capacidad de los lipofenoles para proteger las células contra la toxicidad del todo-frans-retinal, los derivados sintetizados se incubaron en cultivos celulares del epitelio pigmentario de la retina (estirpes celulares ARPE-19). El ensayo biológico se basa en la medida de la supervivencia celular después del tratamiento con lipofenol antes de la incubación (procedimiento de preincubación) con el estresor carbonílico AtR. Se determinó que la concentración tóxica de AtR (25 j M ) reducía la supervivencia celular en 60 a 70%. El efecto de los lipofenoles sobre la viabilidad celular a 10 j M y 40 j M se presenta en la tabla 1 y la figura 12. Los resultados se expresan como % de supervivencia celular en células tratadas (lipofenol/todo-frans-retinal) frente a células no tratadas (tomadas como 100%).
Las células ARPE-19 se obtuvieron de la ATCC, y se cultivaron siguiendo las instrucciones en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM)/Ham'F12 (GIBCO) que contenía suero bovino fetal al 10% (v/v), antibióticos al 1% (v/v), en atmósfera de 95% de aire/5% de CO2 a 37°C. Las células ARPE-19 se depositaron en placas de 96 pocillos (3*104 células/pocillo), y se cultivaron 24 h para alcanzar la confluencia antes del tratamiento con el fármaco. Los cultivos celulares recibieron un medio sin suero que contenía fármacos a diferentes concentraciones (10-40 j M ) durante una hora, y se añadió trans-retinal (25 j M ) durante 4 horas más antes de enjuagar con el medio. La viabilidad de las células en muestras por triplicado se determinó 16-20 h después con un ensayo colorimétrico de MTT. Después de 2 h de incubación con 0.5 mg/ml de MTT, el formazano púrpura insoluble producido se disolvió en d M s O. La absorbancia a 570 nm y 655 nm de los pocillos individuales se midió con un lector de microplacas (BioRad 550). El porcentaje de células viables se calculó como [(OD570 muestra - OD655 muestra)/(OD570 control - OD655 control)] * 100, correspondiendo los controles a células incubadas con DMSO al 0.2% y DMF al 0.14%.
La tabla 1 a continuación muestra los resultados de la viabilidad de las células ARPE-19 en presencia de lipofenol y AfR.
[a] Incubación de lipofenoles 1 h, seguida de incubación con AfR a 25 j M durante 4 h. La viabilidad celular se mide mediante un ensayo de MTT después de 16-20 h. Cada experimento se ha llevado a cabo por triplicado
La evaluación biológica mostró que el floroglucinol era de moderada a débilmente activo, con un aumento de la supervivencia de las células del RPE de 10% a 40 j M.
El aumento de las partes de DHA conduce a derivados activos capaces de alcanzar el 50% de la supervivencia celular como se observa para 8 (PG-TriDHA). El mono DHA-lipofenol alquilado 13a reveló ser tan activo como 8. El mayor aumento de viabilidad (70%) se observó para 13b (derivado mono-isopropílico) de una manera dependiente de la dosis (figura 1).
Para confirmar el interés en la concepción del conjugado de lipofenol 13b, se evaluó una mezcla de DHA y monoisopropil floroglucinol 9b (en las mismas condiciones), y presentó una toxicidad importante, comparable a la observada por el tratamiento con DHA solo. Este resultado respalda firmemente que la introducción de un resto de PUFA en el esqueleto de polifenoles O-alquilados es un enfoque prometedor para obtener derivados potentes.
Ejemplo 11: evaluación biológica de los efectos protectores del floroglucinol-isopropil-DHA (compuesto 13b) frente a los estreses carbonílico y oxidativo inducidos por el todo-trans-retinal en la retina.
Después de la estimulación con luz, el cromóforo visual 11-c/s-retinal, que está unido covalentemente a las opsinas fotorreceptoras para formar los pigmentos visuales (rodopsina), se fotoisomeriza a todo-frans-retinal (afRal). Este último desencadena la fototransducción mediante la activación de la opsina antes de ser liberada en las membranas del disco del segmento externo del fotorreceptor (POS). Un exceso de todo-frans-retinal libre después de una exposición de alto nivel a la luz es muy reactivo con las aminas, y puede causar tanto estrés oxidativo como carbonílico agudo. Esta acumulación de retinal empeora cuando las mutaciones de pérdida de función en los genes
ABCA4 y/o RDH8/12, que codifican parejas proteicas que liberan retinal de la membrana y la reducen a retinol, están presentes en pacientes con retinopatías. El epitelio pigmentario de la retina (RPE), cuyas microvellosidades apicales se yuxtaponen al POS, contribuye a la renovación del POS mediante la fagocitosis diaria. Este último conducirá a la acumulación de lipofuscina, y sus niveles excesivos eventualmente causarán la muerte del RPE como parte del proceso patofisiológico en varias enfermedades que amenazan la vista, tales como la enfermedad de Stargardt y la degeneración macular relacionada con la edad. La formación de derivados bisretinoides (RALdi, A2E) en la lipofuscina puede contribuir a la generación de material no degradable y puede ser tóxico para RPE nuevamente a través del estrés oxidativo y carbonílico.
Acción citoprotectora del compuesto 13b en cultivos de células de retina neural
El efecto del compuesto 13b sobre la viabilidad celular se examinó después de la coincubación con afRal. Los cultivos celulares se incubaron con 13b (10 a 100 j M), y se añadió afRal (50-75-100 j M ) 1 h después, para una coincubación de 4 h. A continuación, las células se cultivaron en medio sin suero durante 16-20 h, y su viabilidad se determinó con un ensayo de MTT. Se encontró que todas las concentraciones de afRal causaron citotoxicidad, que se revirtió de manera sólida por el tratamiento con 13b de una manera dependiente de la dosis (figura 2). Por lo tanto, se demostró que la citotoxicidad de afRal en la retina neural podría ser neutralizada de manera eficiente por un conjugado de floroglucinol-DHA alquilado.
Respiración mitocondrial
El estrés oxidativo tiene su origen en reacciones fisiológicas que tienen lugar prácticamente en el interior de cada célula de un organismo. La producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) acompaña, por ejemplo, al metabolismo energético basado en ATP derivado de la fosforilación oxidativa que tiene lugar en las mitocondrias de una célula. En condiciones fisiológicas, las ROS son neutralizadas por mecanismos de defensa enzimáticos y no enzimáticos efectivos, que contribuyen al mantenimiento de un equilibrio adecuado. Sin embargo, un exceso de ROS, resultante de su sobreproducción en condiciones patofisiológicas, alterará el equilibrio, y conducirá eventualmente a consecuencias perniciosas para la célula. Maeda et al. (JBC 284(22), 2009) han dado a conocer que afRal altera la fosforilación oxidativa mitocondrial. Por lo tanto, la respiración mitocondrial se midió en la estirpe celular ARPE-19 usando oxígrafo después de la exposición a afRal 25 j M y/o 13b 40 j M (figura 3). AfRal inhibe fuertemente la actividad de los complejos CI y CII, mientras que 13b invierte parcialmente esta inhibición, no mostrando 13b una inhibición significativa de la actividad de cada complejo.
Tales resultados confirmaron el envenenamiento mitocondrial por afRal y el rescate por floroglucinol-isopropil-DHA.
Ejemplo 12: actividad protectora de los conjugados de lipofenol frente a atRAL en células del RPE (estirpe celular ARPE-19 y cultivos primarios del RPE)
Efectos protectores de los lipofenoles en las estirpes celulares ARPE-19 en presencia de afRAL (25 j M)
Además de los resultados de los ejemplos 10 y 11, los lipofenoles de la invención se incubaron en cultivos celulares del epitelio pigmentario de la retina (estirpes celulares ARPE-19), y el ensayo biológico se basa en la medida de la supervivencia celular después del tratamiento con el lipofenol antes de la incubación durante 4 horas con el estresor carbonílico AtR a 25 j M (procedimiento de cotratamiento).
El cotratamiento se llevó a cabo con lipofenoles sobre ARPE-19 (figura 4). La incubación durante 4 h con afRAL disminuyó la viabilidad celular hasta 35%. La protección de ARPE-19 por floroglucinol (PG) fue dependiente de la dosis, pero débil (menos de 10%). Por el contrario, la mayoría de los derivados de PG fueron más protectores; en particular, la presencia de dos o tres DHA unidos a PG proporcionó una fuerte protección (hasta 73% de supervivencia), así como la monoalquilación (metílica e isopropílica) fueron suficientes para proteger el 60% de las células. Se confirmó que PG-OiP-DHA se encuentra entre los más eficientes (74%). Curiosamente, el resveratrol-DHA asimismo era muy potente, mientras que el DHA parecía ser tóxico.
Actividades enzimáticas mitocondriales y expresión de proteínas
En un contexto celular, se ha demostrado que PG-OiP-DHA (compuesto 13b) es capaz de restaurar parcialmente la respiración oxidativa mitocondrial deteriorada por el afRAL (ejemplo 10). Debido a que esta reparación podría producirse dirigiéndose a toda la cadena oxidativa o a cada complejo respiratorio individual, esta potencia se investigó más a fondo midiendo la actividad intrínseca de cada complejo de la cadena respiratoria mitocondrial (MRC) (enzimología) y su nivel de expresión proteica (figura 5). Las actividades enzimáticas indicaron que los complejos II y IV se vieron afectados por afRAL, y se conservaron significativamente mediante PG-OiP-DHA. La actividad de la citrato sintasa (CS) disminuyó notablemente con el tratamiento de afRAL, sugiriendo una pérdida de masa mitocondrial relacionada con muerte celular necrótica. Esto fue respaldado por la pérdida de la expresión de la proteína MRC. En conjunto, PG-OiP-DHA mostró un efecto protector sobre la actividad mitocondrial.
Caracterización de la muerte celular inducida por afRAL
Se realizaron más investigaciones para definir la muerte celular inducida por afRAL (apoptótica frente a necrótica) y validar el efecto protector de PG-OiP-DHA (figura 6). Las células se incubaron durante 4 h con afRAL 25 j M, PG-OiP-DHA (compuesto 13b) 40 j M, o ambos. Las ARPE-19 tratadas se marcaron con anexina V-FITC (A) y yoduro de propidio (PI) para separar por citometría de flujo las células sanas (sin marcaje), las células con apoptosis temprana (A+ y PI-), y las células necróticas (A+ y PI+). En las células tratadas con CTL o con PG-OiP-DHA, solo murió de 6 a l0%. Después de 4 h en RAL, la muerte celular alcanzó el 46%, principalmente en la etapa necrótica (41%). La coincubación con PG-OiP-DHA redujo notablemente tanto la muerte celular total (18%) como las células necróticas (16%).
Cultivos primarios de RPE
a. Pretratamiento 24 h, H2O2450 j M 2 h; ensayo de viabilidad celular
Para comparar las eficacias antioxidantes de floroglucinol (10% de ganancia de supervivencia) y PG-OiP-DHA (20%) en el RPE (figura 7). Estos resultados sugieren que ambos contribuyeron mediante el pretratamiento a reducir el daño oxidativo inducido por H2O2, y PG-OiP-DHA parece ser más protector en las células del RPE primarias.
b. Pretratamiento 24 h, afRAL 25 j M 4 h; ensayo de viabilidad celular
Para comparar las eficacias anticarbonílicas de floroglucinol (18% de ganancia de supervivencia) y PG-OiP-DHA (42%) en el RPE (figura 8). Estos resultados sugieren que ambos contribuyeron mediante el pretratamiento a reducir el daño celular inducido por afRAL, y PG-OiP-DHA parece ser más protector a concentraciones más altas en las células del RPE primarias.
c. Coincubación 4 h con afRAL 25 j M; ensayo de viabilidad celular
Para comparar las eficacias anticarbonílicas de floroglucinol (22% de ganancia de supervivencia) y PG-OiP-DHA (69%) en una afección para evaluar sus propiedades de eliminación en células del RPE primarias (figura 9). Estos resultados muestran que ambos contribuyeron mediante el cotratamiento a reducir el daño celular inducido por afRAL, y el PG-OiP-DHA parece ser más protector en concentraciones más bajas.
Ejemplo 13: efecto del ácido graso poliinsaturado (PUFA) y de la alquilación isopropílica para la protección
Efecto de la presencia de un resto de PUFA
Se realizaron algunos experimentos (en estirpes celulares ARPE-19) para comparar las eficacias anticarbonílicas de PG-OiP-ALA (C18:3 u>-3) (compuesto 35), PG-OiP-EPA (C20:5 w-3) (compuesto del ejemplo 6), PG-OiP-DHA (C22:6 w-3) (compuesto 13b), y C22 saturado (compuesto del ejemplo 7) (figuras 10 y 11).
El intervalo de eficacia fue DHA>EPA=ALA>C22, lo que demuestra que la presencia de PUFA fue lo más ventajoso para la actividad. Sin embargo, no hubo correlación entre la eficacia y el número o la posición de los dobles enlaces.
Efecto de la presencia de un grupo alquilo
Se realizaron varios experimentos (en estirpes celulares ARPE-19) para estudiar el efecto de la presencia de un grupo alquilo, en particular de un grupo isopropilo.
Estos experimentos comparan las eficacias anticarbonílicas de PG-EPA y PG-DHA (sin parte alquílica) y los correspondientes PG-OiP-EPA y PG-OiP-DHA (figura 13). Cualquiera que sea el PUFA, el isopropilo era necesario para la protección adecuada.
Actividades enzimáticas mitocondriales y expresión de proteína MRC
Se realizaron varios experimentos para validar la eficacia de PG-OiP-DHA en la protección de la actividad mitocondrial (figura 14). Las actividades enzimáticas indicaron que los complejos II y IV se vieron afectados por afRAL, y se conservaron significativamente mediante PG-OiP-DHA. Estos resultados fueron respaldados por el análisis de la expresión de la proteína MRC (figura 15).
Claims (18)
1. Compuesto de fórmula (I):
en el que:
- i es 0 o 1;
- j es 0 o 1;
- k es 0 o 1;
- R1 se selecciona de entre el grupo que consiste en: H, radicales alquilo (C1-C12), cicloalquilo (C3-C6), y arilo (C6-C10); o R1 puede formar un radical heterocicloalquilo con el átomo de oxígeno que lo porta; o R1 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define a continuación;
- R2 se selecciona de entre el grupo que consiste en: H, radicales alquilo (C1-C12), cicloalquilo (C3-C6), y arilo (C6-C10); o R2 puede formar un radical heterocicloalquilo con el átomo de oxígeno que lo porta; o R2 es un grupo de fórmula C(O)R, siendo R como se define a continuación;
- R es un radical alquilo, lineal o ramificado, interrumpido por uno o varios enlaces dobles, que presenta de 19 a 23 átomos de carbono, y en el que uno o varios átomos de hidrógeno pueden estar sustituidos por átomos de deuterio;
- R3 es H y k=0 cuando j=1; o, cuando j=0, R3 es un grupo de fórmula -C(O)R o -L-C(O)R, siendo R como se define anteriormente;
- L es un enlazador que presenta la fórmula (L1):
en el que:
- A1 es un radical alquileno que presenta de 3 a 6 átomos de carbono;
- X1 es un radical -C(O)- o un radical alquileno que presenta de 1 a 6 átomos de carbono;
- X2 es un radical -C(O)- o un radical alquileno que presenta de 1 a 6 átomos de carbono;
- L' es un enlazador de fórmula -(A)p-(X)q-C(O)-, en el que:
• p es 1;
• q es 0 o 1;
• A es un radical alquileno que presenta de 1 a 6 átomos de carbono,
• X es -O-, -N(Rb)- o un radical alquileno que presenta de 1 a 6 átomos de carbono, Rb siendo H o un grupo alquilo que presenta de 1 a 6 átomos de carbono;
- L" es un enlazador seleccionado de entre el grupo que consiste en: radicales arileno (C6-C10), alquileno (C1-C12), alquileno (C1-C12)-arileno (C6-C10), arileno (C6-C10)-alquileno (C1-C12), -CH=CH-arileno (C6-C10), y alquileno (C1-C12)-CH=CH-arileno (C6-C10);
en el que, cuando j=0, por lo menos uno de los grupos R1, R2 y R3 comprende un radical R; siempre que el compuesto de fórmula (I) sea distinto del compuesto siguiente:
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables, para la utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo seleccionada de entre el grupo que consiste en: enfermedades inflamatorias e infecciosas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades metabólicas, cáncer, patologías retinianas, y enfermedades neurodegenerativas.
2. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, en el que, cuando j=0, a lo sumo uno de los grupos R1, R2 y R3 es H.
3. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que presenta la fórmula siguiente (I-1):
en el que L', R y R2 son como se definen en la reivindicación 1,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
4. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que presenta la fórmula siguiente (I-2):
en el que k, L", R1 y R3 son como se definen en la reivindicación 1,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
5. Compuesto para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R1 es un grupo alquilo (C1-C12), preferentemente un grupo alquilo (C1-C6), y más preferentemente un grupo isopropilo.
6. Compuesto que presenta la fórmula siguiente (I-2):
en el que k, L" y R3 son como se definen en la reivindicación 1,
y Ri es un grupo alquilo (Ci-C i2),
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
7. Compuesto según la reivindicación 6, que presenta la fórmula siguiente (I-2-1):
en el que Alk es un grupo alquilo (C1-C12), y R es como se define en la reivindicación 1, o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
8. Compuesto que presenta la fórmula siguiente (I-3):
en el que A1, X1, X2, R y R1 son como se definen en la reivindicación 1,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
9. Compuesto según la reivindicación 6, que presenta la fórmula siguiente (I-4):
en el que R es como se define en la reivindicación 1,
y R1 es un grupo alquilo que presenta de 1 a 12 átomos de carbono,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
10. Compuesto que presenta la fórmula siguiente (I-4-2):
en el que R es como se define en la reivindicación 1,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
11. Compuesto que presenta la fórmula siguiente (I-5-1):
en el que R es como se define en la reivindicación 1,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
12. Compuesto que presenta la fórmula siguiente (I-6-1):
en el que:
- o Ri y R2 son ambos grupos alquilo (Ci-C i2), y R3 es C(O)R, siendo R como se define en la reivindicación 1;
- o R1, R2 y R3 son C(O)R, siendo R como se define en la reivindicación i,
o sus sales, racematos, diastereómeros o enantiómeros farmacéuticamente aceptables.
13. Compuesto según la reivindicación 6, que presenta la fórmula siguiente:
14. Compuesto para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en el que R es un grupo alquilo lineal o ramificado, interrumpido mediante por lo menos un enlace doble, que presenta de 19 a 21 átomos de carbono.
15. Compuesto para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en el que R es el radical siguiente:
16. Composición farmacéutica que comprende el compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, o el compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en la que R es el radical como se define en la reivindicación 14 o 15, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
17. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 15, para la utilización para el tratamiento de una patología que implica tanto estrés carbonílico como oxidativo seleccionada de entre el grupo que consiste en: enfermedades inflamatorias e infecciosas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades metabólicas, cáncer, patologías retinianas, y enfermedades neurodegenerativas.
18. Compuesto para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y la reivindicación 17, en el que la patología que implica estrés carbonílico y oxidativo se selecciona de entre el grupo que consiste en: aterosclerosis, diabetes tipo II, cáncer, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, degeneración macular relacionada con la edad (AMD), enfermedad de Stargardt, y virus de la gripe graves.
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