ES2912613T3 - Membrane support, kit for testing a liquid sample using the same, and method of manufacturing the same - Google Patents
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Abstract
Un soporte de membrana (3) para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida, el soporte de membrana (3) comprendiendo: un trayectoria de flujo (2), una microestructura (7) formada en la parte inferior de la trayectoria de flujo (2), una zona de detección (3y) para detectar la sustancia objetivo en la muestra líquida; y un marcador provisto en por lo menos una parte de la trayectoria de flujo (2) en un lado en sentido ascendente de la zona de detección (3y), el marcador estando constituido por: una partícula que tiene un diámetro de 500 nm o más y de 100 μm o menos, y un anticuerpo o un antígeno unido a la partícula, en donde el anticuerpo y el antígeno son capaces de reaccionar específicamente con una sustancia objetivo en la muestra líquida, y una sustancia de detección inmovilizada en la zona de detección (3y) del soporte de membrana (3), tal sustancia de detección es capaz de producir un cambio de color al mantener una sustancia objetivo, de tal manera que la sustancia objetivo a la que se va a unir el marcador puede detectarse en la zona de detección (3y) y el color de la zona de detección (3y) cambiará al unirse el marcador.A membrane support (3) for detecting a target substance in a liquid sample, the membrane support (3) comprising: a flow path (2), a microstructure (7) formed at the bottom of the flow path ( 2), a detection zone (3y) for detecting the target substance in the liquid sample; and a marker provided in at least a part of the flow path (2) on an upstream side of the detection zone (3y), the marker being constituted of: a particle having a diameter of 500 nm or more and 100 µm or less, and an antibody or an antigen bound to the particle, wherein the antibody and the antigen are capable of specifically reacting with a target substance in the liquid sample, and a detection substance immobilized in the detection zone (3y) of the membrane support (3), such detection substance is capable of producing a color change by holding a target substance, such that the target substance to which the marker is to be attached can be detected in the area detection zone (3y) and the color of the detection zone (3y) will change when the marker is attached.
Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Soporte de membrana, kit para probar una muestra líquida usando el mismo, y método de fabricación del mismo Campo técnicoMembrane support, kit for testing a liquid sample using the same, and method of manufacturing the same Technical field
La presente invención se refiere a un soporte de membrana. Además, se describen un método para producir el soporte de membrana, un kit de prueba que comprende el soporte de membrana y el método para producir el kit de prueba.The present invention relates to a membrane support. Furthermore, a method for producing the membrane support, a test kit comprising the membrane support, and the method for producing the test kit are described.
Técnica anteriorprior art
Recientemente, han llamado la atención los reactivos de Pruebas en el Punto de Cuidado (POCT) que usan, por ejemplo, reacciones de antígeno-anticuerpo para determinar la contracción de enfermedades infecciosas, embarazo, nivel de azúcar en sangre y similares. Los reactivos POCT, que son reactivos de prueba usados cerca de sujetos o usados directamente por los sujetos, tienen características como capacidad de determinación de resultados de prueba en poco tiempo, funcionamiento simple y bajo coste. En virtud de estas características, los reactivos POCT se usan frecuentemente, por ejemplo, en exámenes médicos en la etapa de síntomas leves y exámenes médicos regulares y se usan como una importante herramienta de examen en la atención médica domiciliaria que se espera que se expanda a partir de ahora.Recently, Point-of-Care Testing (POCT) reagents using, for example, antigen-antibody reactions to determine contraction of infectious diseases, pregnancy, blood sugar level, and the like have drawn attention. POCT reagents, which are test reagents used near subjects or used directly by subjects, have features such as ability to determine test results in a short time, simple operation, and low cost. By virtue of these characteristics, POCT reagents are frequently used, for example, in medical examinations at the stage of mild symptoms and regular medical examinations, and are used as an important examination tool in home health care which is expected to expand to from now on.
En la mayoría de los reactivos POCT, la determinación se realiza introduciendo una muestra líquida, como sangre, en un kit de prueba y detectando una sustancia objetivo predeterminada contenida en la muestra líquida. Como método para detectar una sustancia objetivo predeterminada a partir de una muestra líquida, se usa frecuentemente la inmunocromatografía. La inmunocromatografía es una técnica para detectar una sustancia objetivo mediante la adición de una gota de líquido en un soporte de membrana de un kit de prueba, lo que permite que la gota de líquido se mueva sobre el soporte de membrana, permitiendo que una sustancia objetivo se una a las partículas marcadoras (en lo sucesivo, también denominadas simplemente como la partícula) unidas a un anticuerpo o antígeno que reacciona específicamente con la sustancia objetivo y suspendido o disuelto en una muestra líquida, y permitiendo que estas partículas se unan más específicamente a una sustancia (en lo sucesivo denominada sustancia de detección) inmovilizada en el soporte de membrana para producir un cambio de color o peso, y detectar el cambio. La sustancia de detección también puede denominarse reactivo.In most POCT reagents, the determination is made by introducing a liquid sample, such as blood, into a test kit and detecting a predetermined target substance contained in the liquid sample. As a method for detecting a predetermined target substance from a liquid sample, immunochromatography is frequently used. Immunochromatography is a technique for detecting a target substance by adding a liquid droplet to a membrane support of a test kit, allowing the liquid droplet to move on the membrane support, allowing a target substance to bind to marker particles (hereinafter also referred to simply as the particle) attached to an antibody or antigen that specifically reacts with the target substance and suspended or dissolved in a liquid sample, and allowing these particles to bind more specifically to a substance (hereinafter referred to as detection substance) immobilized on the membrane support to cause a change in color or weight, and detect the change. The detection substance may also be called a reagent.
Como técnica para detectar una sustancia objetivo, se conoce bien una técnica para detectar un cambio de color producido usando partículas marcadoras. Los ejemplos de partículas marcadoras incluyen partículas de látex coloreadas, partículas de látex fluorescentes y partículas coloidales metálicas.As a technique for detecting a target substance, a technique for detecting a color change produced using label particles is well known. Examples of marker particles include colored latex particles, fluorescent latex particles, and metallic colloidal particles.
En el método de detección que usa partículas marcadoras como se ha mencionado anteriormente, se sabe que a medida que aumenta el tamaño de las partículas marcadoras, se mejora la sensibilidad. La bibliografía de patentes 1 a 2 muestran que, en inmunodiagnóstico usando turbidimetría, si aumenta el diámetro del látex, aumenta la intensidad de dispersión de la luz y aumenta la sensibilidad.In the detection method using marker particles as mentioned above, it is known that as the size of the marker particles increases, the sensitivity improves. Patent Literature 1 to 2 show that, in immunodiagnosis using turbidimetry, if the diameter of the latex increases, the intensity of light scattering increases and the sensitivity increases.
Como reactivo POCT para determinar ópticamente un cambio de color, se usa a menudo un kit de tipo de flujo lateral que usa una membrana de nitrocelulosa. La membrana de nitrocelulosa tiene muchos microporos y una muestra líquida se mueve a través de los microporos con la ayuda de la fuerza capilar. Por el contrario, los poros de la membrana de nitrocelulosa son tan finos como del orden de varios pm. Debido a esto, había un límite superior para el diámetro de las partículas marcadoras.As a POCT reagent for optically determining a color change, a lateral flow type kit using a nitrocellulose membrane is often used. The nitrocellulose membrane has many micropores and a liquid sample moves through the micropores with the help of capillary force. In contrast, the pores of the nitrocellulose membrane are as fine as on the order of several pm. Because of this, there was an upper limit to the diameter of the marker particles.
Además, la membrana de nitrocelulosa, que se deriva de un producto natural, tiene poros de tamaño no uniforme. Debido a esto, se fijó que el diámetro de las partículas marcadoras a desarrollar fuera menor para no producir problemas como obstrucciones; mientras que la sensibilidad fue baja.Furthermore, the nitrocellulose membrane, which is derived from a natural product, has pores of non-uniform size. Due to this, the diameter of the marker particles to be developed was set to be smaller so as not to cause problems such as obstructions; while the sensitivity was low.
La bibliografía de patentes 1 a 4 muestra que el intervalo medible de concentración en turbidimetría puede ampliarse usando dos tipos o más de partículas de látex de diferente diámetro en combinación.Patent literature 1 to 4 shows that the measurable range of concentration in turbidimetry can be extended by using two or more types of latex particles of different diameter in combination.
Sin embargo, en la inmunocromatografía, como se usó un soporte de membrana de nitrocelulosa que tiene microporos, el tamaño de una partícula marcadora es limitado. Aún se desconocía el efecto del uso combinado de dos o más tipos de partículas de látex de diferente diámetro sobre el rendimiento.However, in immunochromatography, since a nitrocellulose membrane support having micropores was used, the size of a label particle is limited. The effect of the combined use of two or more types of latex particles of different diameter on performance was not yet known.
La bibliografía de patente 5 divulga un kit de prueba de muestras líquidas que tiene una microestructura formada en el mismo en lugar de usar un soporte de membrana de nitrocelulosa; sin embargo, no se divulga el efecto del diámetro del látex sobre el rendimiento.Patent Literature 5 discloses a liquid sample test kit having a microstructure formed therein instead of using a nitrocellulose membrane support; however, the effect of latex diameter on performance is not disclosed.
La bibliografía de patentes 6 y 7 divulga soportes de membrana con partículas inmovilizadas. The 6 and 7 patent literature discloses membrane supports with immobilized particles.
La bibliografía de patente 8 divulga otro soporte de membrana.Patent literature 8 discloses another membrane support.
La bibliografía de patente 9 divulga un soporte de membrana con partículas de látex coloreadas.Patent literature 9 discloses a membrane support with colored latex particles.
Lista de citascitation list
Bibliografía de patentesPatent bibliography
Bibliografía de patentes 1: Publicación de Patente Japonesa Examinada N° S63-14783Patent Literature 1: Japanese Examined Patent Publication No. S63-14783
Bibliografía de patentes 2: Patente Japonesa N° 2588l 74Patent Bibliography 2: Japanese Patent No. 2588l 74
Bibliografía de patentes 3: Patente Japonesa N° 3513075Patent Literature 3: Japanese Patent No. 3513075
Bibliografía de patentes 4: Patente Japonesa N° JP3652029BPatent Literature 4: Japanese Patent No. JP3652029B
Bibliografía de patentes 5: WO 2016/098740Patent Literature 5: WO 2016/098740
Bibliografía de patentes 6: US 7824611 B2Patent Literature 6: US 7824611 B2
Bibliografía de patentes 7: US 2005/136552 A1Patent Literature 7: US 2005/136552 A1
Bibliografía de patentes 8: WO 2011/045436 A1Patent Literature 8: WO 2011/045436 A1
Bibliografía de patentes 9: WO9119980Patent Literature 9: WO9119980
Sumario de la invenciónSummary of the invention
Problema técnicotechnical problem
La presente invención se realizó en vista de los problemas mencionados anteriormente y está dirigida a proporcionar un soporte de membrana que permita una detección altamente sensible.The present invention was made in view of the above mentioned problems and is directed to providing a membrane support which allows highly sensitive detection.
Solución al problemaSolution to the problem
Más específicamente, la presente invención es como sigue.More specifically, the present invention is as follows.
Un soporte de membrana para un kit de prueba para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida, el soporte de membrana comprendiendo:A membrane support for a test kit for detecting a target substance in a liquid sample, the membrane support comprising:
una trayectoria de flujo,a flow path,
una microestructura formada en la parte inferior de la trayectoria del flujo,a microstructure formed at the bottom of the flow path,
una zona de detección para detectar la sustancia objetivo en la muestra líquida; ya detection zone for detecting the target substance in the liquid sample; Y
un marcador provisto en por lo menos una parte de la trayectoria del flujo en un lado en sentido ascendente de la zona de detección, el marcador estando constituido por:a marker provided in at least a part of the flow path on an upstream side of the detection zone, the marker consisting of:
una partícula que tiene un diámetro de 500 nm o más y 100 pm o menos, y un anticuerpo o un antígeno unido a la partícula, en donde el anticuerpo y el antígeno pueden reaccionar específicamente con una sustancia objetivo en la muestra líquida, en dondea particle having a diameter of 500 nm or more and 100 pm or less, and an antibody or an antigen bound to the particle, wherein the antibody and the antigen can specifically react with a target substance in the liquid sample, wherein
una sustancia de detección está inmovilizada en la zona de detección del soporte de membrana, sustancia de detección que puede producir un cambio de color al retener una sustancia objetivo, de tal manera que la sustancia objetivo a la que se debe unir el marcador puede detectarse en la zona de detección y el color de la zona de detección cambiará tras unirse al marcador.a detection substance is immobilized on the detection zone of the membrane support, which detection substance can cause a color change by retaining a target substance, such that the target substance to which the label is to bind can be detected in the detection zone and the color of the detection zone will change after joining the marker.
De acuerdo con una realización preferida, se divulga el soporte de membrana en donde la distancia horizontal media entre las partes convexas adyacentes que constituyen la microestructura es por lo menos 3 veces el diámetro de la partícula y 300 pm o menos.According to a preferred embodiment, the membrane support is disclosed in which the average horizontal distance between adjacent convex parts constituting the microstructure is at least 3 times the particle diameter and 300 pm or less.
De acuerdo con otra realización preferida, se divulga el soporte de membrana en donde la partícula es una o más seleccionadas del grupo que consiste en una partícula de látex coloreada y una partícula de látex fluorescente.According to another preferred embodiment, the membrane support is disclosed wherein the particle is one or more selected from the group consisting of a colored latex particle and a fluorescent latex particle.
De acuerdo con otra realización preferida, se divulga el soporte de membrana en donde la zona de detección puede producir un cambio de color cuando se detecta la sustancia objetivo, de tal manera que la sustancia objetivo a la que se va a unir el marcador puede detectarse en la zona de detección y en donde el color de la zona de detección cambiará tras unirse al marcador.According to another preferred embodiment, the membrane support is disclosed in which the detection zone can produce a color change when the target substance is detected, in such a way that the target substance to which the marker is going to bind can be detected. in the detection zone and where the color of the detection zone will change after joining the marker.
De acuerdo con un aspecto adicional, se divulga un método para fabricar un soporte de membrana que comprende inmovilizar una sustancia de detección que puede producir un cambio de color manteniendo una sustancia objetivo en la zona de detección del soporte de membrana como se ha descrito anteriormente.According to a further aspect, a method of making a membrane support is disclosed which comprises immobilizing a detection substance capable of producing a color change by holding a target substance in the detection zone of the membrane support as described above.
Además, se describen un kit de prueba que comprende el soporte de membrana y un método para producir el soporte de membrana. Furthermore, a test kit comprising the membrane support and a method for producing the membrane support are described.
Efectos ventajosos de la invenciónAdvantageous effects of the invention
De acuerdo con el soporte de membrana de la presente invención, puede llevarse a cabo una prueba altamente sensible.According to the membrane support of the present invention, a highly sensitive test can be carried out.
Breve descripción de los dibujosBrief description of the drawings
La Figura 1 muestra una vista superior esquemática de un kit de prueba que comprende el soporte de membrana de acuerdo con una realización de la presente invención.Figure 1 shows a schematic top view of a test kit comprising the membrane support according to an embodiment of the present invention.
La Figura 2 muestra una vista superior esquemática de un soporte de membrana que es una realización de la presente invención.Figure 2 shows a schematic top view of a membrane support that is an embodiment of the present invention.
La Figura 3 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de microestructuras que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).Figure 3 shows (a) a plan view (top view) of microstructures which is an embodiment of the present invention; and (b) a perspective view of a convex portion constituting the microstructure shown in (a).
La Figura 4 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).Figure 4 shows (a) a plan view (top view) of a microstructure which is an embodiment of the present invention; and (b) a perspective view of a convex portion constituting the microstructure shown in (a).
La Figura 5 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).Figure 5 shows (a) a plan view (top view) of a microstructure which is an embodiment of the present invention; and (b) a perspective view of a convex portion constituting the microstructure shown in (a).
La Figura 6 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).Figure 6 shows (a) a plan view (top view) of a microstructure which is an embodiment of the present invention; and (b) a perspective view of a convex portion constituting the microstructure shown in (a).
La Figura 7 muestra una vista en sección de un soporte de membrana que tiene una microestructura que es una realización de la presente invención.Figure 7 shows a sectional view of a membrane support having a microstructure which is an embodiment of the present invention.
La Figura 8 muestra (a) una vista superior de microestructuras de acuerdo con una realización de la presente invención; y muestra (b) una vista en sección de un soporte de membrana que tiene las microestructuras que se muestran en (a). Descripción de realizacionesFigure 8 shows (a) a top view of microstructures according to one embodiment of the present invention; and shows (b) a sectional view of a membrane support having the microstructures shown in (a). Description of achievements
A continuación se describirán realizaciones de la presente invención.Embodiments of the present invention will be described below.
Un soporte de membrana de acuerdo con una realización es un soporte de membrana para un kit de prueba de muestras líquidas, que detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida.A membrane support according to one embodiment is a membrane support for a liquid sample test kit, which detects a target substance in a liquid sample.
En la presente, la sustancia objetivo, que no está limitada, puede ser cualquier sustancia siempre que pueda someterse a una reacción antígeno-anticuerpo con varios patógenos, varios marcadores clínicos, anticuerpos o antígenos. Los ejemplos de la sustancia objetivo incluyen, pero no se limitan particularmente a, antígenos de virus como virus de la gripe, norovirus, adenovirus, virus RS, HAV, HBs y VIH; antígenos de bacterias como MRSA, estreptococos del grupo A, estreptococos del grupo B y bacterias Legionella; toxinas producidas por bacterias, Micoplasma, Chlamydia trachomatis, hormonas como la gonadotropina coriónica humana; y proteína C reactiva, mioglobina, troponina miocárdica, varios marcadores tumorales, agroquímicos, hormonas ambientales, anticuerpos contra Treponema pallidum (TP) (TPAb) y anticuerpos contra pylori. Si la sustancia objetivo es particularmente un elemento que debe detectarse y tratarse rápidamente, como el virus de la gripe, el norovirus, la proteína C reactiva, la mioglobina y la troponina miocárdica, el kit de prueba de muestras líquidas y el soporte de membrana de acuerdo con la realización son extremadamente útiles. La sustancia objetivo puede ser un antígeno, que únicamente induce una respuesta inmunitaria, o puede ser un hapteno, que no puede inducir una respuesta inmunitaria por sí mismo pero puede inducir una respuesta inmunitaria si se une a un anticuerpo a través de una reacción de antígenoanticuerpo. La sustancia objetivo habitualmente se suspende o disuelve en una muestra líquida. La muestra líquida puede ser una muestra obtenida suspendiendo o disolviendo la sustancia objetivo en, por ejemplo, una solución tampón.Herein, the target substance, which is not limited, may be any substance as long as it can undergo antigen-antibody reaction with various pathogens, various clinical markers, antibodies or antigens. Examples of the target substance include, but are not particularly limited to, antigens of viruses such as influenza virus, norovirus, adenovirus, RS virus, HAV, HBs, and HIV; antigens from bacteria such as MRSA, group A streptococci, group B streptococci, and Legionella bacteria; toxins produced by bacteria, Mycoplasma, Chlamydia trachomatis, hormones such as human chorionic gonadotropin; and C-reactive protein, myoglobin, myocardial troponin, various tumor markers, agrochemicals, environmental hormones, Treponema pallidum (TP) antibodies (TPAb), and anti-pylori antibodies. If the target substance is particularly an item that needs to be detected and treated quickly, such as influenza virus, norovirus, C-reactive protein, myoglobin and myocardial troponin, the liquid sample test kit and membrane support of according to the realization are extremely useful. The target substance can be an antigen, which only induces an immune response, or it can be a hapten, which cannot induce an immune response by itself but can induce an immune response if bound to an antibody through an antigen-antibody reaction. . The target substance is usually suspended or dissolved in a liquid sample. The liquid sample may be a sample obtained by suspending or dissolving the target substance in, for example, a buffer solution.
El kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización (en lo sucesivo denominado también simplemente "kit de prueba") detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida. La Figura 1 es una vista superior esquemática de un kit de prueba. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 1, un kit de prueba 18 comprende un soporte de membrana 3 y una caja 18a para acomodar el soporte de membrana 3. El soporte de membrana 3 tiene, en su superficie, una zona de colocación 3x en la que se suministra una gota de una muestra líquida y una zona de detección 3y para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida. La zona de colocación 3x está expuesta en una primera abertura 18b de la caja 18a. La zona de detección 3y está expuesta en la segunda abertura 18c de la caja 18a.The liquid sample test kit according to the embodiment (hereinafter also simply referred to as "test kit") detects a target substance in a liquid sample. Figure 1 is a schematic top view of a test kit. For example, as shown in Figure 1, a test kit 18 comprises a membrane holder 3 and a box 18a to accommodate the membrane holder 3. The membrane holder 3 has, on its surface, a landing zone 3x wherein a drop of a liquid sample and a detection zone 3y for detecting a target substance in a liquid sample are supplied. The placement zone 3x is exposed in a first opening 18b of the box 18a. The detection zone 3y is exposed in the second opening 18c of the case 18a.
La Figura 2 es una vista superior esquemática del soporte de membrana 3. Como se muestra en la Figura 2, el soporte de membrana 3 tiene por lo menos una trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida y un marcador (no mostrado, los detalles se describirán más adelante) provisto en el soporte de membrana para reaccionar con éxito con una sustancia objetivo. El marcador está constituido por la partícula y un anticuerpo o un antígeno unido a la partícula. El anticuerpo y el antígeno pueden ser un anticuerpo y un antígeno, cada uno de los cuales reacciona específicamente con una sustancia objetivo en una muestra líquida. El marcador puede proporcionarse en por lo menos una parte en la trayectoria de flujo 2 del soporte de membrana 3. En la parte inferior de la trayectoria de flujo 2, se proporciona una microestructura (no mostrada, los detalles se describirán más adelante). La microestructura está presente por lo menos entre la zona de colocación 3x y la zona de detección 3y. La microestructura puede proporcionarse sobre toda la superficie del soporte de membrana 3. Toda la superficie del soporte de membrana 3 puede servir como trayectoria de flujo 2 para una muestra líquida. Debido a la microestructura, se produce acción capilar. Una muestra líquida es transportada desde la zona de colocación 3x a la zona de detección 3y (a lo largo de la dirección de transporte d) a través de la microestructura con la ayuda de la acción capilar producida por la microestructura. Durante el proceso de transporte, una sustancia objetivo en una muestra líquida se une a un marcador. Cuando la sustancia objetivo a la que se une el marcador se detecta en la zona de detección 3y, el color de la zona de detección 3y cambia.Figure 2 is a schematic top view of the membrane support 3. As shown in Figure 2, the membrane support 3 has at least one flow path 2 for transporting a liquid sample and a marker (not shown, details will be described later) provided on the membrane support to successfully react with a target substance. The label consists of the particle and an antibody or antigen bound to the particle. The antibody and the antigen may be an antibody and an antigen, each of which react specifically with a target substance in a liquid sample. The marker may be provided in at least a part in the flow path 2 of the membrane support 3. In the lower part of the flow path 2, a microstructure (not shown, details will be described later) is provided. The microstructure is present at least between the placement zone 3x and the detection zone 3y. The microstructure can be provided over the entire surface of the membrane support 3. The entire surface of the membrane support 3 can serve as a flow path 2 for a liquid sample. Due to the microstructure, capillary action occurs. A liquid sample is transported from the 3x placement zone to the 3y detection zone (along the transport direction d) through the microstructure with the help of capillary action produced by the microstructure. During the transport process, a target substance in a liquid sample binds to a marker. When the target substance to which the label binds is detected in detection zone 3y, the color of detection zone 3y changes.
La forma completa del soporte de membrana 3 no está particularmente limitada; sin embargo, la forma puede ser, por ejemplo, un polígono como un rectángulo, un círculo o un elipsoide. Si el soporte de membrana 3 es un rectángulo, la longitud (longitud del lado más corto) L1 del soporte de membrana 3 puede ser, por ejemplo, de 2 mm o más y de 100 mm o menos y la anchura (longitud del lado más largo) L2 del soporte de membrana 3 puede ser, por ejemplo, de 2 mm o más y de 100 mm o menos. El espesor del soporte de la membrana, excluyendo las alturas de la microestructura, puede ser, por ejemplo, de 0,1 mm o más y de 10 mm o menos.The whole shape of the membrane support 3 is not particularly limited; however, the shape can be, for example, a polygon such as a rectangle, circle, or ellipsoid. If the membrane support 3 is a rectangle, the length (length of the shortest side) L1 of the membrane support 3 may be, for example, 2 mm or more and 100 mm or less, and the width (length of the shortest side long) L2 of the membrane support 3 may be, for example, 2 mm or more and 100 mm or less. The thickness of the membrane support, excluding the heights of the microstructure, may be, for example, 0.1 mm or more and 10 mm or less.
Cada una de las Figuras 3 a 6 y 8 muestran una microestructura provista en la parte inferior de la trayectoria de flujo de acuerdo con la realización y un ejemplo de partes convexas que constituyen la microestructura. En cada una de las Figuras 3 a 6, (a) es una vista en planta (vista superior) de la microestructura; y (b) es una vista en perspectiva de una de las partes convexas que constituyen la microestructura. Como se muestra en las Figuras 3 a 6 y 8, una microestructura 7 es un montaje de partes convexas 8. Más específicamente, el soporte de membrana 3 tiene una parte plana 9 correspondiente a la parte inferior de la trayectoria de flujo 2 de una muestra líquida y una pluralidad de partes convexas 8 correspondientes a la parte plana 9 El espacio entre las partes convexas 8 sirve como trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del soporte de membrana 3 con la ayuda de la acción capilar. En otras palabras, el espacio en la microestructura 7 sirve como trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del soporte de membrana 3 por acción capilar. Las partes convexas 8 pueden estar dispuestas en la superficie del soporte de membrana 3 de manera regular o simétrica en traslación.Figs. 3 to 6 and 8 each show a microstructure provided at the bottom of the flow path according to the embodiment and an example of convex portions constituting the microstructure. In each of Figures 3 to 6, (a) is a plan view (top view) of the microstructure; and (b) is a perspective view of one of the convex parts that constitute the microstructure. As shown in Figures 3 to 6 and 8, a microstructure 7 is an assembly of convex parts 8. More specifically, the membrane support 3 has a flat part 9 corresponding to the lower part of the flow path 2 of a sample. liquid and a plurality of convex parts 8 corresponding to the flat part 9 The space between the convex parts 8 serves as a flow path 2 for transporting a liquid sample along the surface of the membrane support 3 with the help of capillary action . In other words, the space in the microstructure 7 serves as a flow path 2 to transport a liquid sample along the surface of the membrane support 3 by capillary action. The convex portions 8 can be arranged on the surface of the membrane support 3 in a regular or translationally symmetric manner.
La forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 puede seleccionarse libremente. Los ejemplos de la forma de las partes convexas 8 incluyen un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, un cilindro, una columna poligonal, un hemisferio y un semielipsoide. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8a puede ser un cono como se muestra en la Figura 3. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8b puede ser una pirámide cuadrada como se muestra en la Figura 4. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8c puede ser una pirámide hexagonal como se muestra en la Figura 5. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8d puede ser un prisma triangular horizontalmente largo (prisma triangular colocado de tal manera que una superficie lateral del prisma triangular (una superficie rectangular) esté en contacto con la parte plana 9) como se muestra en la Figura 6. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8e puede ser un cilindro, como se muestra en la Figura 8. Debido a que cuando la microestructura 7 se mira hacia abajo (vista desde arriba), puede verse toda la superficie del soporte de membrana 3 y un cambio de color cuando se detecta una sustancia objetivo puede verificarse fácilmente por un medio óptico, una estructura de cono como un cono y una pirámide poligonal es adecuada como forma de las partes convexas 8, entre las formas mencionadas anteriormente.The shape of the convex parts 8 constituting the microstructure 7 can be freely selected. Examples of the shape of the convex portions 8 include a cone, a polygonal pyramid, a truncated cone, a truncated polygonal pyramid, a cylinder, a polygonal column, a hemisphere, and a semiellipsoid. For example, the shape of the convex portions 8a may be a cone as shown in Fig. 3. For example, the shape of the convex portions 8b may be a square pyramid as shown in Fig. 4. For example, the shape of the convex portions 8c may be a hexagonal pyramid as shown in Fig. 5. For example, the shape of the convex portions 8d may be a horizontally long triangular prism (triangular prism placed in such a way that one side surface of the triangular prism ( a rectangular surface) is in contact with the flat part 9) as shown in Figure 6. For example, the shape of the convex parts 8e can be a cylinder, as shown in Figure 8. Because when the microstructure 7 is looking down (view from above), the entire surface of the membrane support 3 can be seen, and a color change when a target substance is detected can be easily verified by optical means, a cone structure like a cone and a polygonal pyramid is suitable as the shape of the convex portions 8, among the shapes mentioned above.
No es necesario que la forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 sea una forma geométricamente precisa y puede ser una forma que tenga una esquina redondeada y una forma que tenga microconvexocóncavos en la superficie.The shape of the convex portions 8 constituting the microstructure 7 need not be a geometrically precise shape, and may be a shape having a rounded corner and a shape having microconvex-concaves on the surface.
El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 puede ser de 10 pm o más y de 1000 pm o menos y más preferiblemente de 15 pm o más y de 1000 pm o menos. El diámetro 4 de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8 puede variar (ser diferente uno de otro) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del intervalo anterior. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 10 pm o más, el coste de microfabricación de un molde para formar la microestructura 7 disminuye y puede formarse fácil y uniformemente un número infinito de microestructuras 7 en la superficie. del soporte de membrana 3 de área grande. Por consiguiente, es más práctica una microestructura constituida por partes convexas 8 que tengan la superficie inferior 10 de 10 pm o más en el diámetro 4. Si el diámetro de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 10 pm o más, la fuerza capilar requerida para mover una muestra líquida tiende a aumentar. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 1000 pm o menos, puede reducirse el volumen de metal desechado de un miembro de metal en el momento de formar un molde, con el resultado de que los costes de fabricación para el molde y el soporte de membrana 3 pueden suprimirse. Si el diámetro de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 1000 pm o menos, puede reducirse el área de la trayectoria de flujo 2 en el soporte de membrana 3, con el resultado de que puede miniaturizarse un kit de prueba de muestras líquidas 18. Esto es ventajoso para enviar el propio kit de prueba de muestras líquidas 18.The diameter 4 of each of the lower surfaces 10 of the convex portions 8 constituting the microstructure 7 may be 10 pm or more and 1000 pm or less, and more preferably 15 pm or more and 1000 pm or less. The diameter 4 of the lower surface 10 of the convex part 8 may vary (be different from each other) among a plurality of convex parts 8 within the above range. If the diameter 4 of each of the bottom surfaces 10 of the convex portions 8 is 10 pm or more, the microfabrication cost of a mold for forming the microstructure 7 decreases and an infinite number of microstructures 7 can be easily and uniformly formed in the surface. of the large area membrane support 3. Therefore, a microstructure consisting of convex portions 8 having the bottom surface 10 of 10 pm or more in diameter 4 is more practical. If the diameter of each of the bottom surfaces 10 of the convex portions 8 is 10 pm or Furthermore, the capillary force required to move a liquid sample tends to increase. If the diameter 4 of each of the lower surfaces 10 of the convex portions 8 is 1000 pm or less, the volume of metal discarded from a metal member at the time of forming a mold can be reduced, with the result that the manufacturing costs for the mold and the membrane support 3 can be eliminated. If the diameter of each of the bottom surfaces 10 of the convex portions 8 is 1000 pm or less, the area of the flow path 2 in the membrane support 3 can be reduced, with the result that a kit of liquid sample test 18. This is advantageous to send own liquid sample test kit 18.
El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 se define como la longitud representativa de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8. La longitud representativa que define la superficie inferior 10 es un diámetro si la forma de la superficie inferior 10 es un círculo; la longitud del lado más corto si la forma es un triángulo o un rectángulo; la longitud de la línea diagonal más larga si la forma es un polígono de un pentágono o más; y una longitud máxima de la superficie inferior 10 en el caso de formas distintas de las mencionadas anteriormente.The diameter 4 of each of the lower surfaces 10 of the convex portions 8 is defined as the representative length of the lower surface 10 of the convex portion 8. The representative length defining the lower surface 10 is a diameter if the shape of the lower surface 10 is a circle; the length of the shorter side if the shape is a triangle or a rectangle; the length of the longest diagonal line if the shape is a polygon of a pentagon or more; and a maximum length of the bottom surface 10 in the case of shapes other than those mentioned above.
La Figura 7 es una vista en sección alineada del soporte de membrana que tiene una microestructura 7a tomada a lo largo de la línea VII-VII mostrada en la Figura 3. Como se muestra en la Figura 3 y la Figura 7, si la forma de la parte convexa 8a es un cono, el diámetro 4a de la superficie inferior 10a de la parte convexa 8a corresponde al diámetro del fondo (círculo) del cono. Como se muestra en la Figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada regular, el diámetro 4b de la superficie inferior 10b de la parte convexa 8b es la longitud de los lados de la superficie inferior (cuadrado regular) 10b. Como se muestra en la Figura 5, si la forma de la parte convexa 8c es una pirámide hexagonal regular, el diámetro 4c de la superficie inferior 10c de la parte convexa 8c es la longitud de una línea diagonal (longitud de la línea diagonal más larga) que pasa por el centro de la parte inferior superficie (hexágono regular) 10c. Como se muestra en la Figura 6, si la forma de la parte convexa 8d es un prisma triangular horizontalmente largo, el diámetro 4d de la superficie inferior 10d de la parte convexa 8d es la longitud del lado más corto de la superficie inferior (rectángulo) 10d (en la Figura 6, la longitud del lado perpendicular a la dirección de transporte d de una muestra líquida). La Figura 8(b) es una vista en sección alineada del soporte de membrana que tiene una microestructura 7e tomada a lo largo de la línea A-A mostrada en la Figura 8(a). Como se muestra en la Figura 8, si la forma de las partes convexas 8e es un cilindro, el diámetro 4e del fondo de la parte convexa 8e es el diámetro del fondo circular del cilindro.Figure 7 is an aligned sectional view of the membrane support having a microstructure 7a taken along the line VII-VII shown in Figure 3. As shown in Figure 3 and Figure 7, if the shape of the convex part 8a is a cone, the diameter 4a of the lower surface 10a of the convex part 8a corresponds to the diameter of the bottom (circle) of the cone. As shown in Figure 4, if the shape of the convex part 8b is a regular square pyramid, the diameter 4b of the bottom surface 10b of the convex part 8b is the length of the sides of the bottom surface (regular square) 10b. . As shown in Fig. 5, if the shape of the convex part 8c is a regular hexagonal pyramid, the diameter 4c of the bottom surface 10c of the convex part 8c is the length of a diagonal line (length of the longest diagonal line ) passing through the center of the bottom surface (regular hexagon) 10c. As shown in Figure 6, if the shape of the convex part 8d is a horizontally long triangular prism, the diameter 4d of the bottom surface 10d of the convex part 8d is the length of the shortest side of the bottom surface (rectangle) 10d (in Figure 6, the length of the side perpendicular to the transport direction d of a liquid sample). Figure 8(b) is an aligned sectional view of the membrane support having a microstructure 7e taken along line A-A shown in Figure 8(a). As shown in Fig. 8, if the shape of the convex portions 8e is a cylinder, the diameter 4e of the bottom of the convex portion 8e is the diameter of the circular bottom of the cylinder.
La altura 6 de cada una de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 10 pm o más y de 500 pm o menos y más preferiblemente de 15 pm o más y de 500 pm. La altura 6 de las partes convexas 8 puede variar (ser diferentes unas de otras) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del intervalo anterior. Si la altura 6 de las partes convexas 8 es de 10 pm o más, el volumen de la trayectoria de flujo 2 aumenta, con el resultado de que puede desarrollarse una muestra líquida en un tiempo más corto. Si la altura 6 de cada una de las partes convexas 8 es de 500 pm o menos, el tiempo y el coste para formar la microestructura 7 pueden reducirse, con el resultado de que resulta fácil preparar la microestructura 7.The height 6 of each of the convex portions 8 constituting the microstructure 7 is preferably 10 pm or more and 500 pm or less, and more preferably 15 pm or more and 500 pm. The height 6 of the convex portions 8 may vary (be different from each other) among a plurality of convex portions 8 within the above range. If the height 6 of the convex portions 8 is 10 pm or more, the volume of the flow path 2 increases, with the result that a liquid sample can be developed in a shorter time. If the height 6 of each of the convex portions 8 is 500 pm or less, the time and cost for forming the microstructure 7 can be reduced, with the result that it is easy to prepare the microstructure 7.
La altura 6 de la parte convexa 8 se define como una longitud máxima de la parte convexa 8 en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 3 y la Figura 7, si la forma de la parte convexa 8a es un cono, la altura 6a de la parte convexa 8a es una longitud máxima de la parte convexa 8a en la dirección perpendicular a la parte plana 9 (la altura del cono). Como se muestra en la Figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada, la altura 6b de la parte convexa 8b es una longitud máxima de la parte convexa 8b en la dirección perpendicular a la parte plana 9 (la altura de la pirámide cuadrada). Como se muestra en la Figura 5, si la forma de la parte convexa 8c es una pirámide hexagonal, la altura 6c de la parte convexa 8c es una longitud máxima de la parte convexa 8c en la dirección perpendicular a la parte plana 9 (la altura de la pirámide hexagonal). Como se muestra en la Figura 6, si la forma de la parte convexa 8d es un prisma triangular horizontalmente largo, la altura 6d de la parte convexa 8d es una longitud máxima de la parte convexa 8d en la dirección perpendicular a la parte plana 9 (la altura del prisma triangular horizontalmente largo). Como se muestra en la Figura 8, si la parte convexa 8e es un cilindro, la altura 6e de la parte convexa 8e es la longitud máxima de la parte convexa 8e en la dirección perpendicular a la parte plana 9 (la altura del cilindro).The height 6 of the convex part 8 is defined as a maximum length of the convex part 8 in the direction perpendicular to the flat part 9. As shown in Figure 3 and Figure 7, if the shape of the convex part 8a is a cone, the height 6a of the convex part 8a is a maximum length of the convex part 8a in the direction perpendicular to the flat part 9 (the height of the cone). As shown in Fig. 4, if the shape of the convex part 8b is a square pyramid, the height 6b of the convex part 8b is a maximum length of the convex part 8b in the direction perpendicular to the flat part 9 (the height of the square pyramid). As shown in Figure 5, if the shape of the convex part 8c is a hexagonal pyramid, the height 6c of the convex part 8c is a maximum length of the convex part 8c in the direction perpendicular to the flat part 9 (the height of the hexagonal pyramid). As shown in Figure 6, if the shape of the convex part 8d is a horizontally long triangular prism, the height 6d of the convex part 8d is a maximum length of the convex part 8d in the direction perpendicular to the flat part 9 ( the height of the horizontally long triangular prism). As shown in Fig. 8, if the convex part 8e is a cylinder, the height 6e of the convex part 8e is the maximum length of the convex part 8e in the direction perpendicular to the flat part 9 (the height of the cylinder).
La distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes, en el caso de que la distancia horizontal entre microestructuras adyacentes (por ejemplo, entre partes convexas 8) varíe dependiendo de la altura de las partes convexas 8, como un cono, un hemisferio y un semielipsoide, se especifica como un valor medio de la distancia horizontal más lejana 5A entre microestructuras adyacentes (distancia de centro a centro más cercana) y la distancia horizontal más cercana 5B entre las microestructuras adyacentes, es decir, (5A+5B)/2, como se muestra en la Figuras 3 a 7.The average horizontal distance between adjacent microstructures, in the case where the horizontal distance between adjacent microstructures (for example, between convex parts 8) varies depending on the height of the convex parts 8, such as a cone, a hemisphere and a semi-ellipsoid, is specified as a mean value of the farthest horizontal distance 5A between adjacent microstructures (nearest center-to-center distance) and the nearest horizontal distance 5B between adjacent microstructures, i.e. (5A+5B)/2, as shown in Figures 3 to 7.
La distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes, en el caso en el que la distancia horizontal entre microestructuras adyacentes no varíe dependiendo de la altura de la microestructura, como una columna, se especifica como la distancia del espacio 5C entre microestructuras (partes convexas 8) como se muestra en la distancia 5C del espacio entre microestructuras adyacentes en la Figura 8 (las partes convexas 8 son cilindros).The mean horizontal distance between adjacent microstructures, in the case where the horizontal distance between adjacent microstructures does not vary depending on the height of the microstructure, such as a column, is specified as the distance of the 5C space between microstructures (convex parts 8) as it is shown at the distance 5C of the space between adjacent microstructures in Figure 8 (the convex portions 8 are cylinders).
La distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes puede ser por lo menos 3 veces o por lo menos 4 veces y como máximo 600 veces o como máximo 500 veces el diámetro de la partícula. Si la distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes es por lo menos 3 veces el diámetro de la partícula, se suprime más el riesgo de que el flujo de la muestra líquida se vea interrumpido por la resistencia de la partícula, con el resultado de que el soporte de membrana no pueda usarse como un kit. The average horizontal distance between adjacent microstructures can be at least 3 times or at least 4 times and at most 600 times or at most 500 times the diameter of the particle. If the mean horizontal distance between adjacent microstructures is at least 3 times the particle diameter, the risk that the flow of the liquid sample is interrupted by the resistance of the particle is further suppressed, with the result that the support membrane cannot be used as a kit.
La distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes puede ser de 1,5 pm o más, 2,0 pm o más o 2,5 pm o más y puede ser de 300 pm o menos, 250 pm o menos o 200 pm o menos. Si la distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes es de 300 pm o menos, se suprime el riesgo de que el área en la que una muestra líquida esté en contacto con la trayectoria de flujo y se suprima una reducción de la fuerza capilar, con el resultado de que la muestra líquida no pueda moverse.The average horizontal distance between adjacent microstructures may be 1.5 pm or more, 2.0 pm or more, or 2.5 pm or more, and may be 300 pm or less, 250 pm or less, or 200 pm or less. If the mean horizontal distance between adjacent microstructures is 300 pm or less, the risk of the area in which a liquid sample is in contact with the flow path is suppressed and a reduction in capillary force is suppressed, with the result that the liquid sample cannot move.
La distancia horizontal media entre microestructuras adyacentes es preferiblemente por lo menos 3 veces el diámetro de la partícula y de 300 pm o menos, y más preferiblemente, por lo menos 4 veces el diámetro de la partícula y de 300 pm o menos.The average horizontal distance between adjacent microstructures is preferably at least 3 times the particle diameter and 300 pm or less, and more preferably at least 4 times the particle diameter and 300 pm or less.
La microestructura 7 y el soporte de membrana 3 del kit de prueba de muestras líquidas 18 de la realización pueden estar hechos de un termoplástico. En otras palabras, el soporte de membrana 3 que tiene la microestructura 7 puede producirse procesando un material base similar a una película hecho de un termoplástico. Los ejemplos del método de procesamiento incluyen impresión térmica, impresión UV, moldeo por inyección, grabado, fotolitografía, corte a máquina y procesamiento con láser. De ellos, la impresión térmica a un termoplástico es adecuada como método para aplicar un procesamiento preciso a bajo coste. Los ejemplos del termoplástico incluyen una resina de poliéster, una resina de poliolefina, una resina de poliestireno, una resina de policarbonato, una fluororresina y una resina acrílica. Más específicamente, pueden usarse varios tipos de resinas, incluyendo el tereftalato de polietileno (PET), un polímero de cicloolefina (COP), polipropileno (PP), poliestireno (PS), policarbonato (PC), fluoruro de polivinilideno (PVDF) y polimetilmetacrilato (PMMA).The microstructure 7 and the membrane support 3 of the liquid sample test kit 18 of the embodiment may be made of a thermoplastic. In other words, the membrane support 3 having the microstructure 7 can be produced by processing a film-like base material made of a thermoplastic. Examples of the processing method include thermal printing, UV printing, injection molding, etching, photolithography, machine cutting, and laser processing. Of these, thermal printing to a thermoplastic is suitable as a method for applying precise processing at low cost. Examples of the thermoplastic include polyester resin, polyolefin resin, polystyrene resin, polycarbonate resin, fluororesin and acrylic resin. More specifically, various types of resins can be used, including polyethylene terephthalate (PET), a cycloolefin polymer (COP), polypropylene (PP), polystyrene (PS), polycarbonate (PC), polyvinylidene fluoride (PVDF), and polymethyl methacrylate. (PMMA).
En el caso del procesamiento usando un molde, como el moldeo por impresión o por inyección, como la parte superior de un cono es estrecha en comparación con la parte inferior, el volumen de metal desechado al formar el molde es más pequeño que un molde columnar que tiene la misma área inferior, y por tanto, el molde puede prepararse a bajo coste con un cono. En este caso, puede detectarse una sustancia objetivo en una muestra líquida a bajo coste.In the case of processing using a mold, such as impression molding or injection molding, since the top of a cone is narrow compared to the bottom, the volume of metal scrapped in forming the mold is smaller than a columnar mold which has the same bottom area, and therefore the mold can be made cheaply with a cone. In this case, a target substance can be detected in a liquid sample at low cost.
El marcador está constituido por la partícula y un anticuerpo o un antígeno unido a la partícula. El marcador puede unirse a una sustancia objetivo a través del anticuerpo o antígeno.The label consists of the particle and an antibody or antigen bound to the particle. The label can bind to a target substance through the antibody or antigen.
La marcador puede proporcionarse a por lo menos una parte de la trayectoria del flujo en el lado en sentido ascendente de la zona de detección 3y (entre la zona de colocación 3x y la zona de detección 3y (incluyendo la zona de colocación 3x)). El marcador puede proporcionarse a por lo menos a una parte de la zona de colocación 3x o sobre toda la zona de colocación 3x. Alternativamente, el marcador puede proporcionarse junto con un miembro para ser usado en el kit de prueba 18 a la trayectoria de flujo 2. El marcador que reaccionó con (se unió a) una sustancia objetivo es retenido por una sustancia de detección (a través de la reacción (unión) de la sustancia de detección con la sustancia objetivo) en la zona de detección 3y. De esta manera, se produce un cambio de color (color producido por un marcador) en la zona de detección 3y.The marker may be provided to at least a portion of the flow path on the upstream side of detection zone 3y (between drop zone 3x and detection zone 3y (including drop zone 3x)). The marker may be provided to at least a portion of the 3x landing zone or over the entire 3x landing zone. Alternatively, the label may be provided together with a member for use in the test kit 18 to flow path 2. The label that reacted with (bound to) a target substance is retained by a detection substance (via the reaction (binding) of the detection substance with the target substance) in the detection zone 3y. In this way, a color change (color produced by a marker) is produced in the detection zone 3y.
El anticuerpo o antígeno puede ser un fragmento de unión. El fragmento de unión se refiere a un fragmento que puede unirse específicamente a una sustancia objetivo; por ejemplo, se hace referencia a un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo o a un fragmento de unión a anticuerpo de un antígeno.The antibody or antigen may be a binding fragment. The binding moiety refers to a moiety that can specifically bind to a target substance; for example, reference is made to an antigen-binding fragment of an antibody or an antibody-binding fragment of an antigen.
Los ejemplos de la partícula incluyen partículas coloidales y partículas de látex. Las partículas pueden tener propiedades magnéticas o fluorogenicidad. Los ejemplos de partículas coloidales incluyen partículas coloidales metálicas como partículas coloidales de oro y partículas coloidales de platino. Las partículas son preferiblemente partículas de látex en vista del control del tamaño de las partículas, la estabilidad de la dispersión y la capacidad de unión. El material para partículas de látex no está particularmente limitado; sin embargo, se prefiere el poliestireno.Examples of the particle include colloidal particles and latex particles. The particles may have magnetic properties or fluorogenicity. Examples of colloidal particles include metallic colloidal particles such as colloidal gold particles and colloidal platinum particles. The particles are preferably latex particles in view of particle size control, dispersion stability and binding ability. The material for latex particles is not particularly limited; however, polystyrene is preferred.
En vista de la visibilidad, las partículas son preferiblemente partículas coloreadas o partículas fluorescentes y más preferiblemente partículas coloreadas. Las partículas coloreadas son satisfactorias si el color de las mismas es detectable a simple vista. Las partículas fluorescentes son satisfactorias si contienen una sustancia fluorescente. Las partículas pueden ser partículas de látex coloreadas o partículas de látex fluorescentes. Si las partículas son partículas de látex coloreadas, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta adecuadamente visualmente. Si las partículas son partículas de látex fluorescentes, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta adecuadamente mediante la medición de la intensidad de la fluorescencia.In view of visibility, the particles are preferably colored particles or fluorescent particles, and more preferably colored particles. Colored particles are satisfactory if the color thereof is detectable with the naked eye. Fluorescent particles are satisfactory if they contain a fluorescent substance. The particles can be colored latex particles or fluorescent latex particles. If the particles are colored latex particles, the aforementioned color change is adequately detected visually. If the particles are fluorescent latex particles, the color change mentioned above is suitably detected by measuring the intensity of fluorescence.
El diámetro de la partícula es de 500 nm o más y de 100 pm o menos. El diámetro de la partícula puede ser de 600 nm o más, 800 nm o más, 1 pm o más, 1,2 pm o más, 1,5 pm o más, 2 pm o más o 2,5 pm o más y 80 pm o menos, 60 pm o menos, 50 pm o menos, 20 pm o menos, 10 pm o menos o 5 pm o menos. El diámetro de la partícula es preferentemente de 600 nm o más y de 80 pm o menos, 800 nm o más y 60 pm o menos, 1 pm o más y 50 pm o menos, 1,2 pm o más y 20 pm o menos o 2 pm o más y 10 pm o menos. Si es menor de 500 nm, el cambio de color producido cuando se inmoviliza la partícula (de acuerdo con la reivindicación 1) en la zona de detección 3y es pequeño y puede reducirse la sensibilidad de detección. Si el diámetro es mayor de 100 pm, el flujo de muestra líquida se ve interrumpido por la resistencia de las partículas, con el resultado de que el soporte de membrana no puede usarse como un kit.The particle diameter is 500 nm or more and 100 pm or less. The particle diameter may be 600nm or more, 800nm or more, 1pm or more, 1.2pm or more, 1.5pm or more, 2pm or more, or 2.5pm or more and 80 pm or less, 60 pm or less, 50 pm or less, 20 pm or less, 10 pm or less, or 5 pm or less. The particle diameter is preferably 600 nm or more and 80 pm or less, 800 nm or more and 60 pm or less, 1 pm or more and 50 pm or less, 1.2 pm or more and 20 pm or less or 2 pm or more and 10 pm or less. If it is less than 500 nm, the color change produced when the particle (according to claim 1) is immobilized in the detection zone 3y is small and the detection sensitivity may be reduced. If the diameter is greater than 100 pm, the flow of liquid sample is interrupted by the resistance of the particles, with the result that the membrane support does not can be used as a kit.
El diámetro de partícula se refiere al diámetro de una partícula medido por dispersión de luz dinámica. La dispersión dinámica de la luz se describe, por ejemplo, en la Patente Japonesa N° 5147011 y la página de inicio de Beckman Coulter, Inc. ("measurement principle of dynamic light scattering", <URL: https://beckman.jp/column/particle/m_principle/>).Particle diameter refers to the diameter of a particle measured by dynamic light scattering. Dynamic light scattering is described, for example, in Japanese Patent No. 5147011 and Beckman Coulter, Inc. home page ("measurement principle of dynamic light scattering", <URL: https://beckman.jp /column/particle/m_principle/>).
Para realizar una prueba altamente sensible, es preferible usar partículas de diferentes diámetros en combinación. De acuerdo con los presentes inventores, la razón es presumiblemente la siguiente. Como el área de contacto entre una sustancia de detección y una microestructura varía dependiendo del diámetro de la partícula, el tiempo requerido para una reacción antígeno-anticuerpo varía. El tiempo de reacción se ve afectado por el caudal de una muestra líquida, y el caudal cambia dependiendo de la altura en la trayectoria de flujo desde el fondo. Como el caudal al que transcurre fácilmente una reacción con una sustancia de detección varía dependiendo del diámetro de la partícula, varía la altura a la que puede realizarse fácilmente la adhesión a una microestructura. Como resultado, si una pluralidad de tipos de partículas se desarrollan en una microestructura, las partículas se separan en las que se adhieren fácilmente a la parte superior de la estructura y las que se adhieren fácilmente a la parte inferior de la estructura. Debido a esto, el área de adhesión total aumenta en comparación con el caso en el que se desarrolla un solo tipo de partícula. Como resultado, puede detectarse fácilmente una sustancia objetivo y se mejora la sensibilidad.To perform a highly sensitive test, it is preferable to use particles of different diameters in combination. According to the present inventors, the reason is presumably as follows. Since the contact area between a detection substance and a microstructure varies depending on the particle diameter, the time required for an antigen-antibody reaction varies. The reaction time is affected by the flow rate of a liquid sample, and the flow rate changes depending on the height in the flow path from the bottom. Since the rate at which a reaction with a detection substance easily proceeds varies depending on the diameter of the particle, the height at which adhesion to a microstructure can be easily performed varies. As a result, if a plurality of types of particles are developed in a microstructure, the particles are separated into those that are easily adhered to the upper part of the structure and those that are easily adhered to the lower part of the structure. Due to this, the total adhesion area is increased compared to the case where only one type of particle is developed. As a result, a target substance can be easily detected and the sensitivity is improved.
Es preferible que se usen una pluralidad de tipos de partículas de diferente diámetro; y más preferible que se usen dos tipos de partículas diferentes en diámetro de partícula. En el caso de que se usen dos tipos de partículas con diámetros de partícula diferentes, siempre que las partículas que tengan un diámetro más pequeño estén representadas por PI y las partículas que tengan un diámetro mayor estén representadas por P2, la relación de masa (P1/P2) es preferiblemente de 10/ 90 a 90/10, más preferiblemente de 30/70 a 70/30 y aún más preferiblemente 50/50.It is preferable that a plurality of types of particles of different diameter are used; and more preferable that two types of particles different in particle diameter are used. In the case that two types of particles with different particle diameters are used, as long as the particles having a smaller diameter are represented by PI and the particles having a larger diameter are represented by P2, the mass ratio (P1 /P2) is preferably from 10/90 to 90/10, more preferably from 30/70 to 70/30 and even more preferably 50/50.
Como se ha descrito anteriormente, el soporte de membrana 3 tiene microestructuras 7 formadas sobre una de las superficies del soporte de membrana 3, la trayectoria de flujo 2 formada por las microestructuras 7 y usada para transportar una muestra líquida y un marcador provistos en el soporte de membrana 3 para reaccionar con éxito con una sustancia objetivo y tener la partícula y un anticuerpo o antígeno unidos a la partícula. El diámetro de la partícula es de 500 nm o más y de 100 gm o menos. El soporte de membrana 3 puede ser un soporte de membrana 3 para el kit de prueba de muestras líquidas 18 para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida.As described above, the membrane support 3 has microstructures 7 formed on one of the surfaces of the membrane support 3, the flow path 2 formed by the microstructures 7 and used to transport a liquid sample and marker provided on the support membrane 3 to successfully react with a target substance and have the particle and an antibody or antigen bound to the particle. The particle diameter is 500 nm or more and 100 gm or less. The membrane support 3 may be a membrane support 3 for the liquid sample test kit 18 for detecting a target substance in a liquid sample.
En el kit de prueba de muestras líquidas 18 de acuerdo con la realización, la zona de detección 3y del soporte de membrana 3 produce un cambio de color cuando se detecta una sustancia objetivo. El cambio de color puede ser un cambio de color que puede observarse por medios ópticos.In the liquid sample test kit 18 according to the embodiment, the detection zone 3y of the membrane support 3 produces a color change when a target substance is detected. The color change may be a color change that can be observed by optical means.
Como medios ópticos, se mencionan principalmente dos métodos: un medio de determinación visual y un medio para medir la intensidad de la fluorescencia. En el caso de la determinación visual, es preferible producir un cambio de color expresado por una diferencia de color (AE descrito en JIS Z8781-4:2013) de 0,5 o más entre dos estímulos de color antes y después de la detección cuando el color se mide por el sistema de color de CIE1976L*a*b*espacio de color. Si la diferencia de color es de 0,5 o más, la determinación visual de la diferencia de color puede realizarse fácilmente. En el caso de una determinación basada en la medición de la intensidad de la fluorescencia, es preferible producir una diferencia de color que satisfaga una relación entre la intensidad de la fluorescencia (Fl1) en la zona de detección 3y y la intensidad de la fluorescencia (Fl2) en la región en sentido ascendente y la región en sentido descendente adyacente a la zona de detección 3y, (Fl1/Fl2) = 10/1 o más. Si la relación es de 10/1 o más, la señal y el ruido pueden separarse fácilmente.As optical means, two methods are mainly mentioned: a visual determination means and a fluorescence intensity measurement means. In the case of visual determination, it is preferable to produce a color change expressed by a color difference (AE described in JIS Z8781-4:2013) of 0.5 or more between two color stimuli before and after detection when color is measured by the CIE1976L*a*b*color space color system. If the color difference is 0.5 or more, the visual determination of the color difference can be done easily. In the case of a determination based on fluorescence intensity measurement, it is preferable to produce a color difference that satisfies a relationship between the fluorescence intensity (Fl1) in the detection zone 3y and the fluorescence intensity ( Fl2) in the upstream region and the downstream region adjacent to detection zone 3y, (Fl1/Fl2) = 10/1 or more. If the ratio is 10/1 or more, the signal and noise can be easily separated.
Para preparar la zona de detección 3y en el soporte de membrana 3 del kit de prueba de muestras líquidas 18 de la realización, se inmoviliza una sustancia de detección en por lo menos parte de la trayectoria de flujo 2, en una realización. Más específicamente, se inmoviliza en la zona de detección 3y una sustancia de detección que detecta una sustancia objetivo. Se produce un cambio de color en la zona de detección 3y manteniendo una sustancia objetivo por la sustancia de detección (mediante la reacción con la sustancia de detección) en la zona de detección 3y.To prepare the detection zone 3y on the membrane support 3 of the liquid sample test kit 18 of the embodiment, a detection substance is immobilized in at least part of the flow path 2, in one embodiment. More specifically, a detection substance that detects a target substance is immobilized in the detection zone 3y. A color change occurs in the detection zone 3y by keeping a target substance by the detection substance (by reacting with the detection substance) in the detection zone 3y.
En otras palabras, un método para producir un soporte de membrana 3 para un kit de prueba de muestras líquidas 18 comprende un paso de inmovilizar, en la zona de detección 3y, una sustancia de detección que produce un cambio de color manteniendo la sustancia objetivo en la zona de detección 3y. Debido a que una sustancia de detección (reactivo) de acuerdo con la reivindicación 1 se inmoviliza eficientemente en la zona de detección 3y, el tratamiento superficial puede aplicarse previamente al sitio del soporte de membrana 3, en el que se debe proporcionar la zona de detección 3y.In other words, a method for producing a membrane support 3 for a liquid sample test kit 18 comprises a step of immobilizing, in the detection zone 3y, a detection substance that produces a color change by keeping the target substance in the detection zone 3y. Since a detection substance (reagent) according to claim 1 is efficiently immobilized in the detection zone 3y, the surface treatment can be previously applied to the site of the membrane support 3, where the detection zone is to be provided. 3y.
El método de tratamiento de la superficie no está limitado y, por ejemplo, pueden usarse varios métodos como irradiación UV, un tratamiento con UV/ozono, varios tratamientos con plasma y modificación de la superficie con, por ejemplo, 3-aminopropiltrietoxisilano o glutaraldehído.The surface treatment method is not limited, and for example, various methods such as UV irradiation, UV/ozone treatment, various plasma treatments and surface modification can be used. with, for example, 3-aminopropyltriethoxysilane or glutaraldehyde.
En la realización, como sustancia de detección (reactivo), por ejemplo, se menciona un anticuerpo. El anticuerpo es un anticuerpo que se une a una sustancia objetivo a través de una reacción antígeno-anticuerpo, y puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal.In the embodiment, as the detection substance (reagent), for example, an antibody is mentioned. The antibody is an antibody that binds to a target substance through an antigen-antibody reaction, and may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
El cambio de color en la zona de detección 3y puede ser producido por un marcador que tiene una partícula y un anticuerpo o un antígeno unido a la partícula. El cambio de color se produce, por ejemplo, manteniendo un marcador por una sustancia de detección (a través de una reacción con (uniéndose a) la sustancia de detección) en la zona de detección 3y y produciendo un color.The color change in the detection zone 3y can be caused by a marker having a particle and an antibody or an antigen bound to the particle. The color change occurs, for example, by keeping a label by a detection substance (through a reaction with (binding to) the detection substance) in the detection zone 3y and producing a color.
Un método para probar una muestra líquida de acuerdo con un aspecto de la realización es un método de prueba que usa el kit de prueba 18.One method of testing a liquid sample according to one aspect of the embodiment is a test method using test kit 18.
El método para probar una muestra líquida usando el kit de prueba 18 puede comprender un paso de preparación de una muestra líquida mezclada mezclando la muestra líquida y un marcador que se une específicamente a una sustancia objetivo en la muestra líquida para unir mutuamente la sustancia objetivo y el marcador; un paso de suministrar una gota de la muestra líquida mezclada a la zona de colocación 3x provista en el soporte de membrana 3; un paso de transporte de la muestra líquida mezclada desde la zona de colocación 3x a la zona de detección 3y a través de la microestructura 7; y un paso de detectar un cambio de color (color del marcador) en la zona de detección 3y.The method for testing a liquid sample using the test kit 18 may comprise a step of preparing a mixed liquid sample by mixing the liquid sample and a label that specifically binds to a target substance in the liquid sample to mutually bind the target substance and marker; a step of supplying a drop of the mixed liquid sample to the placement zone 3x provided on the membrane support 3; a step of transporting the mixed liquid sample from the placement zone 3x to the detection zone 3y through the microstructure 7; and a step of detecting a color change (marker color) in the detection zone 3y.
Alternativamente, el método de prueba anterior puede comprender un paso de suministrar una gota de una muestra líquida a la zona de colocación 3x en la superficie del soporte de membrana 3; un paso de transportar la muestra líquida desde la zona de colocación 3x a la zona de detección 3y a través de la microestructura 7 con la ayuda de la acción capilar ejercida por la microestructura 7 (partes convexas 8) formada sobre la superficie del soporte de membrana 3; y un paso de unir una sustancia objetivo en una muestra líquida al marcador a través del anticuerpo o el antígeno, además, unir la sustancia objetivo a un reactivo inmovilizado en la zona de detección 3y y detectar un cambio de color en la zona de detección 3y (determinando ópticamente la presencia o ausencia de cambio de color).Alternatively, the above test method may comprise a step of supplying a drop of a liquid sample to the 3x placement zone on the surface of the membrane support 3; a step of transporting the liquid sample from the placement zone 3x to the detection zone 3y through the microstructure 7 with the help of capillary action exerted by the microstructure 7 (convex portions 8) formed on the surface of the membrane support 3; and a step of binding a target substance in a liquid sample to the label via the antibody or the antigen, further binding the target substance to an immobilized reagent in the detection zone 3y and detecting a color change in the detection zone 3y (optically determining the presence or absence of color change).
En el paso de unión mutua de una sustancia objetivo y un marcador en el método de prueba anterior, un método para mezclar una muestra líquida y el marcador no está particularmente limitado. Por ejemplo, puede emplearse un método para añadir una muestra líquida en un recipiente que contiene el marcador o un método para mezclar un líquido que contiene, por ejemplo, un marcador y una muestra líquida. Alternativamente, se inserta un filtro en una abertura de goteo de un recipiente que contiene, por ejemplo, una muestra líquida, y puede inmovilizarse una marcador en el filtro.In the mutual binding step of a target substance and a marker in the above test method, a method of mixing a liquid sample and the marker is not particularly limited. For example, a method of adding a liquid sample into a container containing the tracer or a method of mixing a liquid containing, for example, a tracer and a liquid sample may be employed. Alternatively, a filter is inserted into a drip opening of a container containing, for example, a liquid sample, and a label may be immobilized on the filter.
Ejemplosexamples
Se describirán las realizaciones; sin embargo, las realizaciones no están limitadas por estos ejemplos experimentales.Embodiments will be described; however, the embodiments are not limited by these experimental examples.
[Ejemplo experimental 1][Experiment example 1]
<Preparación del molde><Preparation of the mold>
El molde se preparó mediante procesamiento con láser y corte a máquina. El molde está hecho de aleación de aluminio A5052. En el centro del molde, se proporcionan partes cónicas cóncavas que tienen un diámetro de 25 pm y una profundidad de 30 pm a la distancia más cercana de centro a centro (la distancia horizontal más lejana) de 30 pm, la distancia horizontal más cercana (la distancia horizontal más cercana) entre microestructuras adyacentes de 5 pm y una distancia media de 17,5 pm, en una disposición escalonada, dentro del intervalo de 3 cm x 3 cm, como se muestra en la Figura 3.The mold was prepared by laser processing and machine cutting. The mold is made of A5052 aluminum alloy. In the center of the mold, concave conical parts having a diameter of 25 pm and a depth of 30 pm are provided to the nearest center-to-center distance (the farthest horizontal distance) of 30 pm, the nearest horizontal distance ( the nearest horizontal distance) between adjacent microstructures of 5 pm and a mean distance of 17.5 pm, in a staggered arrangement, within the interval of 3 cm x 3 cm, as shown in Figure 3.
Para poder separar fácilmente el molde y un termoplástico sin fallos en el momento de la impresión por transferencia, se aplicó un tratamiento de liberación a la superficie convexa-cóncava del molde. El tratamiento de liberación se llevó a cabo empapando el molde en Optool HD-2100TH fabricado por Daikin Industries Ltd., durante aproximadamente un minuto, secándolo y luego dejando que el molde reposara durante la noche.In order to easily separate the mold and a thermoplastic without failure at the time of transfer printing, a release treatment was applied to the convex-concave surface of the mold. The release treatment was carried out by soaking the mold in Optool HD-2100TH manufactured by Daikin Industries Ltd. for about one minute, drying it, and then allowing the mold to stand overnight.
<Impresión por transferencia de microestructura><Microstructure transfer printing>
Usando el molde obtenido como se ha mencionado anteriormente, la microestructura se imprimió por transferencia a un termoplástico. Como termoplástico, se usó poliestireno (lámina de estireno Denka fabricada por Denka Company Limited, espesor de película de 300 pm). Como método de procesamiento se usó impresión térmica. Como aparato, se usó el X-300 fabricado por SCIVAX. La impresión por transferencia se llevó a cabo a una temperatura de moldeo de 120° C y una presión aplicada de 5,5 MPa durante 10 minutos. Después de la impresión por transferencia, el termoplástico y el molde se enfriaron hasta 80° C mientras se aplicaba la presión, y luego se eliminó la presión para preparar un soporte de membrana.Using the mold obtained as mentioned above, the microstructure was transfer printed onto a thermoplastic. As the thermoplastic, polystyrene (Denka styrene sheet manufactured by Denka Company Limited, film thickness 300 pm) was used. Thermal printing was used as processing method. As the apparatus, the X-300 manufactured by SCIVAX was used. Transfer printing was carried out at a molding temperature of 120°C and an applied pressure of 5.5 MPa for 10 minutes. After transfer printing, the thermoplastic and mold were cooled to 80°C while pressure was applied, and then the pressure was removed to prepare a membrane support.
En el soporte de membrana fabricado, la distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más próxima, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla 1. Las partes convexas son conos. El espesor del soporte de membrana excepto la altura de la microestructura (partes convexas) es de 0,2 mm.In the fabricated membrane support, the farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in Table 1. The convex parts are cones. The thickness of the membrane support except the height of the microstructure (convex parts) is 0.2 mm.
<Preparación de la zona de detección><Preparation of detection area>
En las posiciones del soporte de membrana fabricado anteriormente a una distancia de 0,6 cm y 1,0 cm del borde inferior, se aplicaron una solución de suspensión de anticuerpos contra NP de gripe tipo A y una solución de suspensión de anticuerpos contra NP de gripe tipo B en una anchura de 3 cm (las cantidades de recubrimiento eran cada una de 3 pl) y suficientemente secadas con aire caliente para inmovilizar las sustancias de detección.On the positions of the previously manufactured membrane support at a distance of 0.6 cm and 1.0 cm from the lower edge, a suspension solution of antibodies against NPs of influenza type A and a suspension solution of antibodies against NPs of type A were applied. influenza type B in a width of 3 cm (coating amounts were each 3 pl) and sufficiently dried with hot air to immobilize the detection substances.
<Preparación del marcador><Marker Preparation>
Se usaron anticuerpos NP del anti-virus de la gripe tipo A purificados (otro anticuerpo como se usó anteriormente) y anticuerpos NP del anti-virus de la gripe tipo B purificados (otro anticuerpo como se usó anteriormente). El anticuerpo NP anti-virus de la gripe tipo A se marcó covalentemente con partículas de látex rojas (partículas de látex de poliestireno SC-042-R, partículas de látex coloreadas, fabricadas por JSR Life Sciences Corporation) con un diámetro de partícula de 0,2 pm, suspendidas en una solución de tampón Tris que contenía un azúcar, un surfactante y una proteína de tal manera que la concentración de las partículas de látex llegó a ser del 0,025% en masa/v, y se trató ultrasónicamente para preparar una marcador anti-tipo A suficientemente dispersa y suspendida. El marcador anti-tipo B se preparó de manera similar marcando un anticuerpo NP anti-virus de la gripe tipo B con partículas de látex azul.Purified anti-influenza A virus NP antibodies (other antibody as used above) and purified anti-influenza B virus NP antibodies (other antibody as used above) were used. Anti-influenza A virus NP antibody was covalently labeled with red latex particles (SC-042-R polystyrene latex particles, colored latex particles, manufactured by JSR Life Sciences Corporation) with a particle diameter of 0 0.2 pm, suspended in a Tris buffer solution containing a sugar, a surfactant and a protein in such a way that the concentration of the latex particles became 0.025% by mass/v, and ultrasonically treated to prepare a sufficiently dispersed and suspended anti-type A marker. The anti-type B marker was prepared in a similar manner by labeling an anti-influenza type B NP antibody with blue latex particles.
La marcador anti-tipo A y la marcador anti-tipo B se mezclaron y aplicaron a la fibra de vidrio que tenía un tamaño de 3 cm x 1 cm (33GLASS N° 10539766, fabricado por Schleicher & Schuell) en una cantidad de 50 pl por centímetro cuadrado y se secó bien con aire caliente para producir una almohadilla de marcadores. Posteriormente, la almohadilla de marcadores se superpuso con la parte de borde (solo 2 mm) del soporte de membrana preparado y se cortó en tiras que tenían una anchura de 5 mm con un cortador para preparar kits de prueba de muestras líquidas integradas.The anti-type A marker and the anti-type B marker were mixed and applied to glass fiber having a size of 3 cm x 1 cm (33GLASS No. 10539766, manufactured by Schleicher & Schuell) in an amount of 50 pl per square centimeter and dried well with hot air to produce a marker pad. Subsequently, the marker pad was overlaid with the edge part (only 2 mm) of the prepared membrane support and cut into strips having a width of 5 mm with a cutter to prepare integrated liquid sample test kits.
<Evaluación de detección><Detection evaluation>
En el borde del kit de prueba de muestras líquidas preparado como se ha mencionado anteriormente, se dejó caer la muestra líquida (100 pl). La muestra líquida se diluyó con una solución de suspensión de espécimen unida a Quick navi-Flu fabricado por Denka Seiken Co., Ltd., como una solución de dilución. Se obtuvo una tasa de dilución máxima (tasa de dilución máxima permisible de determinación visible del tipo A), a la que no se puede observar visualmente la presencia o ausencia de una línea de color 10 minutos después del inicio de la prueba, aumentando la tasa de dilución de la prueba de virus de la gripe tipo A/Beijing/32/92 (H3N2) de 2 x 104. Se llevó a cabo una prueba a una tasa de dilución de 1/2 tan baja como la tasa de dilución máxima para obtener el tiempo hasta que se estabiliza la concentración de la línea coloreada (tiempo hasta que se estabiliza la concentración de tipo A) desde el inicio de la prueba, como tiempo de detección. Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2.On the edge of the liquid sample test kit prepared as mentioned above, the liquid sample (100 pl) was dropped. The liquid sample was diluted with a specimen suspension solution attached to Quick navi-Flu manufactured by Denka Seiken Co., Ltd., as a dilution solution. A maximum dilution rate (maximum permissible dilution rate of visible determination of type A) was obtained, at which the presence or absence of a colored line cannot be visually observed 10 minutes after the start of the test, increasing the rate Influenza A/Beijing/32/92 (H3N2) virus test dilution ratio of 2 x 104. A test was performed at a dilution rate of 1/2 as low as the maximum dilution rate for obtain the time until the concentration of the colored line stabilizes (time until the concentration of type A stabilizes) from the start of the test, as the detection time. The results are shown in Tables 1 and 2.
A un borde del kit de prueba de muestras líquidas fabricado como se ha descrito anteriormente, se le añadió gota a gota una muestra líquida (100 pl). La muestra líquida se diluyó con una solución de suspensión de espécimen unida a Quick navi-Flu fabricado por Denka Seiken Co., Ltd., como una solución de dilución. Se obtuvo una tasa de dilución máxima (tasa de dilución máxima permisible de determinación visible del tipo B), a la que no puede observarse visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada 10 minutos después del inicio de la prueba, aumentando la tasa de dilución del virus B de la gripe tipo B/Shangdong/7/97 de 2 x 103. Se llevó a cabo una prueba a una tasa de dilución de 1/2 tan baja como la tasa de dilución máxima para obtener el tiempo hasta que se estabiliza la concentración de la línea coloreada (tiempo hasta que se estabiliza la concentración de tipo B) desde el inicio de la prueba, como tiempo de detección. Los resultados se muestran en la Tabla 1.To one edge of the liquid sample test kit made as described above, a liquid sample (100 pl) was added dropwise. The liquid sample was diluted with a specimen suspension solution attached to Quick navi-Flu manufactured by Denka Seiken Co., Ltd., as a dilution solution. A maximum dilution rate (maximum permissible dilution rate of visible determination of type B) was obtained, at which the presence or absence of a colored line cannot be visually observed 10 minutes after the start of the test, increasing the dilution rate of influenza B virus type B/Shangdong/7/97 of 2 x 103. A test was carried out at a dilution rate of 1/2 as low as the maximum dilution rate to obtain the time until it stabilizes. the concentration of the colored line (time until the concentration of type B stabilizes) from the start of the test, as the detection time. The results are shown in Table 1.
El tiempo de detección en la Tabla 1 se refiere a un valor medio del tiempo hasta que se estabiliza la concentración de tipo A y el tiempo hasta que se estabiliza la concentración de tipo B.The detection time in Table 1 refers to a mean value of the time until the concentration of type A stabilizes and the time until the concentration of type B stabilizes.
Las evaluaciones generales se llevaron a cabo en base a las tasas de dilución permisibles de determinación visible de acuerdo con los siguientes criterios y los resultados se muestran en la Tabla 1.General evaluations were carried out based on the permissible dilution rates of visible determination according to the following criteria and the results are shown in Table 1.
R: La tasa de dilución permisible de determinación visible es de 7 x 103 o más y el tiempo de detección es de 7 minutos o menos. A: The visible determination allowable dilution rate is 7 x 103 or more, and the detection time is 7 minutes or less.
B: No se aplica nada de A, C y DB: None of A, C and D apply
C: La tasa de dilución permisible de determinación visible es de más de 3 x 103 y de 4 x 103 o menos, o el tiempo de detección es de 10 minutos o más.C: The visible determination allowable dilution rate is more than 3 x 103 and 4 x 103 or less, or the detection time is 10 minutes or more.
D: La tasa de dilución permisible de determinación visible es de 3 x 103 o menos.D: The allowable dilution rate of visible determination is 3 x 103 or less.
[Ejemplo experimental 2][Experiment example 2]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que el diámetro de partícula de látex usada en la microestructura del Ejemplo Experimental 1 se especificó como 200 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that the particle diameter of the latex used in the microstructure of Experimental Example 1 was specified as 200 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo experimental 3][Experiment example 3]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que el diámetro de partícula de látex usada en la microestructura del Ejemplo Experimental 1 se especificó como 0,5 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that the particle diameter of the latex used in the microstructure of Experimental Example 1 was specified as 0.5 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 4][Experimental Example 4]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que el diámetro de partícula de látex usada en la microestructura del Ejemplo Experimental 1 se especificó como 1 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that the particle diameter of the latex used in the microstructure of Experimental Example 1 was specified as 1 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 5][Experimental Example 5]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que el diámetro de partícula de látex usada en la microestructura del Ejemplo Experimental 1 se especificó como 5 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that the particle diameter of the latex used in the microstructure of Experimental Example 1 was specified as 5 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 6][Experimental Example 6]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 80 pm, una distancia horizontal más lejana de 100 pm, una distancia horizontal más cercana de 20 pm, una distancia media de 60 pm y una profundidad de 100 pm, y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 1 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 80 pm, a farthest horizontal distance of 100 pm, a farthest horizontal distance close distance of 20 pm, a mean distance of 60 pm, and a depth of 100 pm, and that the diameter of the latex particles was specified as 1 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo experimental 7][Experiment example 7]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 80 pm, una distancia horizontal más lejana de 100 pm, una distancia horizontal más cercana de 20 pm, una distancia media de 60 pm y una profundidad de 100 pm y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 5 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 80 pm, a farthest horizontal distance of 100 pm, a farthest horizontal distance close distance of 20 pm, a mean distance of 60 pm and a depth of 100 pm and that the diameter of the latex particles was specified as 5 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo experimental 8][Experiment example 8]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 80 pm, una distancia horizontal más lejana de 100 pm, una distancia horizontal más cercana de 20 pm, una distancia media de 60 pm y una profundidad de 100 pm, y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 20 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 80 pm, a farthest horizontal distance of 100 pm, a farthest horizontal distance close distance of 20 pm, a mean distance of 60 pm and a depth of 100 pm, and that the diameter of the latex particles was specified as 20 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are show in the table.
[Ejemplo experimental 9][Experiment example 9]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 300 pm, una distancia horizontal más lejana de 450 pm, una distancia horizontal más cercana de 150 pm, una distancia media de 300 pm y una profundidad de 450 pm, y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 5 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 300 pm, a farthest horizontal distance of 450 pm, a furthest horizontal distance close distance of 150 pm, a mean distance of 300 pm and a depth of 450 pm, and that the diameter of the latex particles was specified as 5 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 10][Experimental Example 10]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 300 pm, una distancia horizontal más lejana de 450 pm, una distancia horizontal más cercana de 150 pm, una distancia media de 300 pm y una profundidad de 450 pm, y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 20 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 300 pm, a farthest horizontal distance of 450 pm, a furthest horizontal distance close distance of 150 pm, a mean distance of 300 pm and a depth of 450 pm, and that the diameter of the latex particles was specified as 20 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo experimental 11][Experiment example 11]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras del Ejemplo Experimental 1 se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 300 pm, una distancia horizontal más lejana de 450 pm, una distancia horizontal más cercana de 150 pm, una distancia media de 300 pm y una profundidad de 450 pm, y que el diámetro de las partículas de látex se especificó como 100 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1, except that the microstructures of Experimental Example 1 were specified as concave-conical with a diameter of 300 pm, a farthest horizontal distance of 450 pm, a furthest horizontal distance close distance of 150 pm, a mean distance of 300 pm and a depth of 450 pm, and that the diameter of the latex particles was specified as 100 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 12][Experimental Example 12]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo experimental 1 excepto que, en el Ejemplo experimental 1, se mezclaron una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex con un diámetro de 0,5 pm y una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex que tenían un diámetro de 1 pm en volúmenes iguales y se preparó una almohadilla de marcadores usando la solución. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that, in Experimental Example 1, a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles with a diameter of 0.5 pm and a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles having a diameter of 1 pm in equal volumes, and a marker pad was prepared using the solution. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo experimental 13][Experiment example 13]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo experimental 1 excepto que, en el Ejemplo experimental 1, se mezclaron una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex con un diámetro de 1 pm y una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex que tenían un diámetro de 5 pm en volúmenes iguales y se preparó una almohadilla de marcadores usando la solución; y que las microestructuras se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 80 pm, una distancia horizontal más lejana de 100 pm, una distancia horizontal más cercana de 20 pm, una distancia media de 60 pm y una profundidad de 100 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that, in Experimental Example 1, a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles with a diameter of 1 µm and a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles having a diameter of 5 pm in equal volumes and a marker pad was prepared using the solution; and that the microstructures were specified as conical-concave with a diameter of 80 pm, a farthest horizontal distance of 100 pm, a nearest horizontal distance of 20 pm, a mean distance of 60 pm, and a depth of 100 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 14][Experimental Example 14]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo experimental 1 excepto que, en el Ejemplo experimental 1, se mezclaron una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex con un diámetro de 5 pm y una solución de suspensión al 0,025 % p/v que contenía partículas de látex que tenían un diámetro de 20 pm en volúmenes iguales y se preparó una almohadilla de marcadores usando la solución; y que las microestructuras se especificaron como cóncavas cónicas con un diámetro de 300 pm, una distancia horizontal más lejana de 450 pm, una distancia horizontal más cercana de 150 pm, una distancia media de 300 pm y una profundidad de 450 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla. The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that, in Experimental Example 1, a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles with a diameter of 5 µm and a 0.025% w/v suspension solution containing latex particles having a diameter of 20 pm in equal volumes and a marker pad was prepared using the solution; and that the microstructures were specified as conical-concave with a diameter of 300 pm, a farthest horizontal distance of 450 pm, a nearest horizontal distance of 150 pm, a mean distance of 300 pm, and a depth of 450 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplo Experimental 15][Experimental Example 15]
El experimento se llevó a cabo en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que el diámetro de las partículas de látex usadas en la microestructura del Ejemplo Experimental 1 se especificó como 0,4 pm. En el soporte de membrana fabricado, las partes convexas tenían forma de cono. La distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla.The experiment was carried out under the same conditions as in Experimental Example 1 except that the diameter of the latex particles used in the microstructure of Experimental Example 1 was specified as 0.4 pm. In the fabricated membrane support, the convex portions were cone-shaped. The farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the middle distance, and the diameter and height of the convex parts are shown in the Table.
[Ejemplos Experimentales 16 a 27][Experimental Examples 16 to 27]
Los experimentos se llevaron a cabo en las mismas condiciones que en los Ejemplos Experimentales 3 a 14 excepto que las partículas que se usaron se cambiaron de partículas de látex coloreadas a partículas de látex fluorescentes (partículas de látex fluorescentes micromer-F, material: poliestireno fabricado por Corefront Corporation); y que se obtuvo la tasa de dilución (tasa de dilución máxima permisible para la determinación de fluorescencia) a la que un lector de inmunocromato (C11787 fabricado por Hamamatsu Photonics KK) no puede leer la presencia o ausencia de una línea coloreada 10 minutos después del inicio de la prueba. Excepto por esto, fue de la misma manera que en los Ejemplos Experimentales 3 a 14. En los soportes de membrana fabricados, la distancia horizontal más lejana, la distancia horizontal más cercana, la distancia media, el diámetro de las partículas de látex fluorescentes (diámetro de la partícula de látex fluorescente), y el diámetro y la altura de las partes convexas se muestran en la Tabla 2.The experiments were carried out under the same conditions as in Experimental Examples 3 to 14 except that the particles used were changed from colored latex particles to fluorescent latex particles (micromer-F fluorescent latex particles, material: polystyrene manufactured by Corefront Corporation); and that the dilution rate (maximum permissible dilution rate for fluorescence determination) at which an immunochromate reader (C11787 manufactured by Hamamatsu Photonics KK) cannot read the presence or absence of a colored line 10 minutes after the test start. Except for this, it was the same way as in Experimental Examples 3 to 14. In the fabricated membrane supports, the farthest horizontal distance, the nearest horizontal distance, the mean distance, the diameter of the fluorescent latex particles ( diameter of the fluorescent latex particle), and the diameter and height of the convex parts are shown in Table 2.
Las evaluaciones generales se llevaron a cabo en base a las tasas de dilución permisibles para la determinación fluorescente de acuerdo con los siguientes criterios y los resultados se muestran en la Tabla 2.General evaluations were carried out based on the permissible dilution rates for fluorescent determination according to the following criteria and the results are shown in Table 2.
A: la tasa de dilución permisible para la determinación de fluorescencia es de 5 x 104 o más.A: The allowable dilution rate for fluorescence determination is 5 x 104 or more.
B: No se aplica la evaluación global de A ni C.B: The global evaluation of A and C does not apply.
C: la tasa de dilución permisible para la determinación de fluorescencia es de 1 x 104 o más y de 2 x 104 o menos. C: The allowable dilution rate for fluorescence determination is 1 x 104 or more and 2 x 104 or less.
_ _
A partir de los resultados que se muestran en las Tablas 1 a 2, se demostró que el kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización permite una detección altamente sensible especificando el tamaño de las microestructuras en la trayectoria de flujo y desarrollando una marcador de acuerdo con el tamaño. Si el diámetro de la partícula es pequeño, el límite de dilución se vuelve bajo y la sensibilidad es baja (Ejemplo Experimental 1, Ejemplo Experimental 15). Si el diámetro de la partícula es grande, no puede desarrollarse un marcador y no puede realizarse la detección (Ejemplo Experimental 2).From the results shown in Tables 1 to 2, it was shown that the liquid sample test kit according to the embodiment enables highly sensitive detection by specifying the size of microstructures in the flow path and developing a marker. according to the size. If the particle diameter is small, the dilution limit becomes low and the sensitivity is low (Experimental Example 1, Experimental Example 15). If the particle diameter is large, a label cannot be developed and detection cannot be performed (Experimental Example 2).
Aplicabilidad IndustrialIndustrial Applicability
En la realización, en una inmunocromatografía, que permite la confirmación óptica de que se detectó una sustancia objetivo, se proporciona un kit de prueba que permite una determinación altamente sensible. El kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización permite la implementación de una prueba altamente sensible a bajo coste y, por lo tanto, es útil como reactivo POCT desechable. Lista de signos de referenciaIn the embodiment, in an immunochromatography, which allows optical confirmation that a target substance was detected, a test kit is provided that allows a highly sensitive determination. The liquid sample test kit according to the embodiment enables the implementation of a highly sensitive test at low cost and is therefore useful as a disposable POCT reagent. List of reference signs
2: Trayectoria de flujo, 3: Soporte de membrana que tiene microestructuras provistas en el mismo, 3x: Zona de colocación, 3y: Zona de detección, 4,4a,4b,4c,4d,4e: Longitud representativa de la superficie inferior de una parte convexa (diámetro de la parte inferior de la parte convexa), 5A: Distancia horizontal más lejana entre microestructuras adyacentes (distancia de centro a centro más cercana), 5B: Distancia horizontal más cercana entre microestructuras adyacentes (distancia entre las microestructuras más próximas), 5C: Distancia del espacio entre microestructuras adyacentes, 6,6a,6b,6c,6d: Altura de las partes convexas, 7,7a,7b,7c,7d,7e: Microestructura, 8,8a,8b,8c,8d,8e: Parte convexa, 9: Parte plana, 10,10a,10b,10c,10d: superficie inferior de las partes convexas, 18: Kit de prueba para muestra líquida, 18a: Caja, 18b: Primera abertura, 18c: Segunda abertura, d: Dirección del flujo de la muestra líquida (dirección de transporte) 2: Flow path, 3: Membrane support having microstructures provided therein, 3x: Placement zone, 3y: Detection zone, 4,4a,4b,4c,4d,4e: Representative length of bottom surface of a convex part (diameter of the bottom of the convex part), 5A: Farthest horizontal distance between adjacent microstructures (closest center-to-center distance), 5B: Closest horizontal distance between adjacent microstructures (distance between closest microstructures ), 5C: Distance of the space between adjacent microstructures, 6,6a,6b,6c,6d: Height of the convex parts, 7,7a,7b,7c,7d,7e: Microstructure, 8,8a,8b,8c,8d ,8e: Convex part, 9: Flat part, 10,10a,10b,10c,10d: Bottom surface of convex parts, 18: Test kit for liquid sample, 18a: Box, 18b: First opening, 18c: Second opening , d: Flow direction of the liquid sample (transport direction)
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