ES2896680T3

ES2896680T3 - Glucono delta lactona para el tratamiento de infecciones fúngicas vaginales

Info

Publication number: ES2896680T3
Application number: ES17716516T
Authority: ES
Inventors: Ulf Ellervik; Olov Sterner; Helena Strevens; Sophie Manner
Original assignee: Gedea Biotech AB
Current assignee: Gedea Biotech AB
Priority date: 2016-04-06
Filing date: 2017-04-06
Publication date: 2022-02-25
Anticipated expiration: 2037-04-06
Also published as: EP3439633A1; CA3013809A1; US11696891B2; KR102346658B1; MX2018012210A; US20190110983A1; US20210212937A1; AU2017248050B2; EP3439633B1; ZA201804938B; IL261796A; US10993907B2; DK3439633T3; EA036748B1; KR20180127314A; CL2018002705A1; JP2019510761A; MY198473A; UA123954C2; CA3013809C

Abstract

Glucono δ-lactona (fórmula (III)), **(Ver fórmula)** para su uso con el fin de impedir o tratar la candidosis vulvovaginal.

Description

DESCRIPCIÓN

Glucono delta lactona para el tratamiento de infecciones fúngicas vaginales

Campo técnico

[0001] La presente descripción se refiere a formulaciones farmacéuticas de administración vaginal para su uso en el tratamiento de infecciones fúngicas vaginales. Especialmente, la presente descripción se refiere a formulaciones farmacéuticas de administración vaginal para su uso en el tratamiento de la candidosis vulvovaginal.

Antecedentes

[0002] El microbioma vaginal es un sistema dinámico con una mezcla compleja de varios microorganismos en diferentes proporciones y cantidades, que depende de las bacterias productoras de ácido láctico para mantener un ambiente débilmente ácido (típicamente de un pH 3,5 a 4,5). Cualquier cambio repentino en la microflora vaginal aumentará el pH vaginal y, en consecuencia, creará un entorno más favorable para el establecimiento de patógenos vaginales, que crecen de manera óptima en un pH superior a 5. El desequilibrio en la flora de los microorganismos en la vagina puede conducir a infecciones vaginales, una condición que afecta a un gran porcentaje de mujeres en edad reproductiva cada año.

[0003] La infección vaginal por cándida es un problema común que, a veces, afecta a la mayoría de las mujeres (más del 75 %), pero plantea un problema mayor, extremadamente molesto y recurrente para varias mujeres (8 %). Los síntomas incluyen picazón, dolor o irritación, tejidos vaginales enrojecidos e inflamados, dolor al orinar y en el coito, típicamente una secreción adhesiva blanca y grumosa parecida a la cuajada (como el requesón) o secreción de normal a fina y acuosa. La Candida albicans es el patógeno más común, el cual a menudo está presente en cantidades más pequeñas normalmente en la vagina, la boca, el tracto digestivo y en la piel sin provocar ninguna infección; sin embargo, provoca cambios en la flora normal, por ejemplo, después del tratamiento con antibióticos, momento en que la cándida puede crecer en exceso y provocar una infección. Sin embargo, el conocimiento de la aparición de infecciones vulvovaginales es, en gran medida, incompleto debido al estigma psicosocial asociado con las infecciones genitales.

[0004] La virulencia de C. albicans está mediada por una transformación de células planctónicas en hifas. La forma hifal, es decir, las células filamentosas, tiene la capacidad de invadir el tejido e inducir inflamación, mediada por la candidalisina, una toxina peptídica citotóxica que destruye las células epiteliales de la vagina (Moyes y col., Nature, 2016, 532, 64).

[0005] La cándida prospera con el glucógeno presente en la mucosa vaginal y la infección también se ve facilitada por el efecto sobre la mucosa del aumento de los niveles de estrógeno durante el embarazo, así como también por el debilitamiento del sistema inmunológico durante la gestación. Las píldoras anticonceptivas pueden provocar un efecto similar, al igual que la menstruación y otros factores de estrés. La diabetes es otro facilitador común.

[0006] El diagnóstico se establece tras un examen vaginal con frotis de la vagina, para obtener una muestra de la secreción, sobre la cual se realiza la microscopía del llamado frotis húmedo o montaje húmedo, con una adición de KOH para lisar las células epiteliales y visualizar las hifas de cándida. En mujeres con síntomas recurrentes o persistentes, se deben obtener cultivos vaginales, ya que las especies menos comunes de cándida, como la Candida glabrata o la Candida krusei, requieren diferentes medicamentos. Es posible que el autodiagnóstico no sea aconsejable, solo el 11 % de las mujeres ha obtenido un diagnóstico preciso de su infección en un estudio y las mujeres con una infección previa obtuvieron solo un poco más de precisión (35 %), generando un tratamiento costoso con posibles efectos adversos [D. G. Ferris y col. Obstet. Gynecol. 2002, 99, 419-425].

[0007] Los tratamientos incluyen cremas o comprimidos vaginales tales como econazol, clomitrazol, miconazol, tioconazol o butoconazol durante 1 a 3 días o de 7 a 14 días con una condición persistente, aunque, a menudo, se recomienda el fluconazol para infecciones persistentes o recurrentes. El fluconazol también se puede administrar semanalmente o cada dos semanas durante 3 a 6 meses, a fin de impedir una infección recurrente. Sin embargo, aunque los efectos secundarios del fluconazol son leves y poco frecuentes, pueden incluir malestar estomacal, dolor de cabeza y sarpullido. El fluconazol interactúa con varios medicamentos y no se recomienda durante el embarazo debido al riesgo potencial de daño al feto. Puede desarrollarse una resistencia al fármaco, en cuyo caso se puede utilizar itrakonazol, pero tampoco durante la gestación.

[0008] Aunque la candidiasis vulvovaginal normalmente no pone en peligro la vida, puede ser más o menos crónica y reduce la calidad de vida, afecta la vida sexual, el trabajo y la capacidad de concentración; con el tiempo, puede llevar a una depresión. Una condición crónica puede provocar vestibulitis debilitante, que puede ser extremadamente difícil de tratar. Existe evidencia que respalda el hecho de que la inflamación excesiva a través de la producción de prostaglandinas puede provocar contracciones prematuras y parto prematuro. Posteriormente, el recién nacido prematuro puede enfrentarse a una infección invasiva por cándida, una de las infecciones nosocomiales más graves que provoca una mayor morbilidad y mortalidad que la infección bacteriana, en particular, en las unidades de cuidados intensivos neonatales.

[0009] Existe una preocupación creciente con respecto al aumento de la prevalencia de la resistencia a los antifúngicos incluso con el tratamiento con equincandina por vía intravenosa. El tratamiento de enfermedades específicas de la mujer es un área relativamente subdesarrollada y las infecciones vulvovaginales representan un problema grande y parcialmente oculto sin un tratamiento efectivo. Quienes están particularmente en riesgo son las personas con diabetes y, en especial, las embarazadas diabéticas. Un tratamiento inofensivo para su uso durante el embarazo podría resultar muy valioso para impedir también un parto prematuro.

[0010] Los tratamientos alternativos sugeridos para la candidosis vulvovaginal implican el uso de ácido láctico (véase el documento WO 2008/119518) y bacterias del ácido láctico (véase el documento WO 2008/071783), los cuales se han utilizado durante mucho tiempo en el tratamiento de la vaginosis bacteriana. Sin embargo, el ácido láctico es mucho menos efectivo en términos de cómo afecta la candidosis vulvovaginal.

[0011] El documento CN 1124622 describe una composición anticonceptiva vaginal que comprende glucono 5-lactona.

[0012] El documento US 5.942.250 describe una composición de agua en aceite que comprende glucono 5-lactona.

[0013] El documento US 5.385935 describe composiciones de soluciones dermatológicas que comprenden glucono 5-lactona.

[0014] El documento US 4.234.599 describe una composición de solución acuosa de glucono 5-lactona, así como también una composición en crema que comprende glucono 5-lactona.

[0015] El documento US 6.541.034 describe un material de matriz sólida que comprende glucono 5-lactona.

[0016] El documento WO 99/66904 se refiere a una composición y un procedimiento para la administración sostenida de un agente farmacéutico administrado por vía oral, y describe formulaciones de comprimidos y pastillas que comprenden glucono 5-lactona.

[0017] El documento US 2003/017.207 se refiere a composiciones que comprenden agentes antifúngicos, así como un sistema de tampón, y a procedimientos para tratar la vulvovaginitis y la vaginosis.

[0018] Como se reconoce en la técnica, la candidosis vulvovaginal sigue siendo un problema común en todo el mundo, que afecta a todos los estratos de la sociedad, a pesar de los avances terapéuticos [J. D. Sobel. Lancet, 2007, 369, 1961 1971].

[0019] Por consiguiente, existe una necesidad de nuevas formulaciones farmacéuticas contra la candidosis vulvovaginal. La presente descripción busca proporcionar una solución sencilla, económica y respetuosa del medioambiente para el problema de las infecciones vulvovaginales.

Resumen

[0020] En consecuencia, la presente descripción busca mitigar, aliviar, eliminar o eludir una o más de las deficiencias en la técnica identificadas anteriormente y las desventajas, ya sea de manera individual o en cualquier combinación, proporcionando una formulación farmacéutica para administración vaginal, en la que la formulación comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y glucono 5-lactona (fórmula (III)),

donde la glucono 5-lactona está presente en una cantidad del 5 al 99 % (peso/peso) de la formulación. Se ha demostrado que dicha composición reduce la presencia de biopelículas de diferentes especies de cándida y, además, también tiene un efecto citotóxico sobre varias especies de cándida. La glucono 5-lactona (GDA) es un sólido a temperatura ambiente y a temperatura corporal y, por lo tanto, es adecuada para su uso como ingrediente activo en, por ejemplo, un comprimido, disco o supositorio vaginal o un vagitorio.

[0021] Según una realización de la presente descripción, la glucono 5-lactona está presente en una cantidad del 10 al 70 % en peso de la formulación. La glucono 5-lactona puede estar presente en una cantidad del 20 al 70 % en peso de la formulación. La glucono 5-lactona puede estar presente en una cantidad de más del 50 % en peso, como en más del 60 % en peso, como en más del 70 % en peso, como en más del 75 % en peso, como en más del 80 % en peso. Dicha composición tiene la ventaja de una rápida liberación de una dosis efectiva de glucono 5-lactona.

[0022] Según otra realización de la presente descripción, la composición comprende no más del 10 % en peso de agua, preferiblemente no más del 5 % en peso. Una composición de este tipo tiene la ventaja de una vida útil prolongada y protege a la glucono 5-lactona de la hidrólisis.

[0023] Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende además un agente antifúngico seleccionado del grupo que consiste en miconazol, terconazol, isoconazol, fenticonazol, fluconazol, nistatina, ketoconazol, clotrimazol, butoconazol, econazol, tioconazol, itraconazol, 5 -fluoracilo y metronidazol. Dicha composición tiene la ventaja de que es efectiva en los casos en que la infección es provocada no sólo por una especie que es susceptible a la glucono 5-lactona, sino que debe tratarse utilizando otro agente antifúngico.

[0024] Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende un vehículo, un relleno y/o un agente tamponador o regulador del pH.

[0025] Según otra realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica se formula de manera tal que libere un compuesto según la fórmula (111) durante un período de tiempo prolongado, tal como durante al menos 4 horas, durante al menos 6 horas, durante al menos 8 horas, o más de 24 horas después de la administración, como la inserción intravaginal. Esto tiene la ventaja de que el efecto del tratamiento se prolonga. Además, se pueden prolongar los intervalos de tiempo entre las administraciones de la composición.

[0026] Según incluso otra realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica se formula como un tampón, un vagitorio, un aerosol vaginal, una copa vaginal, un gel vaginal, un inserto vaginal, un parche vaginal, un anillo vaginal, una esponja vaginal, un supositorio vaginal, una crema vaginal, una emulsión vaginal, una espuma vaginal, una loción vaginal, un ungüento vaginal, un polvo vaginal, un champú vaginal, una solución vaginal, un rociador vaginal, una suspensión vaginal, un comprimido vaginal, una varilla vaginal, un disco vaginal, un dispositivo vaginal y cualquier combinación de los mismos, o donde la formulación farmacéutica esté presente en un artículo sanitario, como un tampón, una compresa sanitaria, una compresa o pañal para la incontinencia, o un protector de ropa interior.

[0027] Según otra realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica se formula como un vagitorio, un inserto vaginal, un anillo vaginal, un supositorio vaginal, un comprimido vaginal, una varilla vaginal o un disco vaginal.

[0028] Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica tiene la capacidad de reducir o impedir la formación de biopelículas por parte de especies de cándida. Una biopelícula es un grupo de microorganismos en el que las células están unidas entre sí. A menudo, estas células se adhieren a una superficie, como una superficie mucosa. Las células microbianas que crecen en una biopelícula son fisiológicamente diferentes de las llamadas células planctónicas del mismo organismo, que son células individuales que pueden flotar o nadar en un medio líquido. Las especies de cándida tienen la capacidad de formar biopelículas. Cuando se reduce o se impide la formación de biopelículas, las células individuales de cándida ya no pueden adherirse a la mucosa de, por ejemplo, la vagina. Por tanto, se impide la infección adicional y las células de cándida que ya no forman una biopelícula se descartan, por ejemplo, de la vagina.

[0029] Según un segundo aspecto de la descripción, se proporciona una formulación farmacéutica según lo anterior para su uso en el impedimento o el tratamiento de una infección fúngica urogenital.

[0030] La glucono 5-lactona puede estar presente como ingrediente activo en la formulación farmacéutica.

[0031] Según una realización de la presente descripción, la infección fúngica urogenital es una infección fúngica vulvovaginal.

[0032] Según otra realización de la presente descripción, la infección fúngica urogenital es candidosis vulvovaginal.

[0033] Según incluso otra realización de la presente descripción, la candidosis vulvovaginal es provocada por Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei y/o Candida tropicalis.

[0034] Según un tercer aspecto de la descripción, se proporciona glucono 5-lactona (fórmula (III)),

para su uso a fin de impedir o tratar una infección fúngica.

[0035] Según una realización de la presente descripción, la infección fúngica es una infección fúngica urogenital.

[0036] Según una realización de la presente descripción, la infección fúngica urogenital es candidosis vulvovaginal.

[0037] Según otra realización de la presente descripción, la candidosis vulvovaginal es provocada por Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei y/o Candida tropicalis.

Descripción detallada

[0038] La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas. Cualquier realización que no se encuentre dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas no forma parte de la invención.

[0039] Se estima que aproximadamente el 80 % de las infecciones por patógenos en humanos están relacionadas con la formación de biopelículas, es decir, la formación de una estructura tridimensional compleja del patógeno unido a las paredes celulares, así como a otras células patógenas. Se ha demostrado que la formación de biopelículas es necesaria para las infecciones vulvovaginales por cándida. [M. M. Harriott, E. A. Lilly, T. E. Rodriguez, P. L. Fidel, M. C. Noverr, Microbiology, 2010, 156, 3635-3644]. Además, la formación de biopelículas también reduce la eficiencia de los antifúngicos entre 10 y 100 veces.

[0040] Dada la importancia de la formación de biopelículas en las infecciones vulvovaginales por cándida, se consideró apropiado realizar un ensayo de biopelículas para evaluar el efecto del ácido carboxílico hidroxilado en el tratamiento diana de las infecciones vulvovaginales por cándida. Según los informes de la técnica, se descubrió que el ácido láctico es moderadamente activo para el tratamiento diana de las infecciones vulvovaginales por cándida en un ensayo de biopelículas (véase la parte experimental a continuación). Como la formación de biopelículas depende tanto del pH como de la aparición de fuentes alternativas de carbohidratos, no fue sorprendente saber que el ácido láctico tiene algún efecto sobre la formación de biopelículas. Además, algunos otros ácidos carboxílicos C2-C5 hidroxilados también proporcionaron efectos similares. Se considera que su efecto está relacionado con su efecto acidificante, ya que el ácido más fuerte proporcionó efectos un poco más fuertes.

[0041] Sorprendentemente, se encontró que los ácidos carboxílicos C6 polihidroxilados, por ejemplo, el ácido glucónico, proporcionaron efectos superiores en la disminución de la formación de biopelículas, en comparación con los análogos C3 y C5 estrechamente relacionados (es decir, el ácido glicérico y el ácido xilónico, respectivamente). Lo que resulta aún más sorprendente fue el descubrimiento del ácido carboxílico C6 polihidroxilado, por ejemplo, el ácido glucónico, era superior también en comparación con los ácidos carboxílicos hidroxilados más ácidos, tales como el ácido cítrico.

[0042] Mientras que el efecto de otros ácidos carboxílicos hidroxilados aparentemente solo se debe a su acidez (la reducción del pH dificulta la formación de biopelículas), el efecto de los ácidos carboxílicos C6 polihidroxilados, por ejemplo, el ácido glucónico, sobre la formación de biopelículas ya es pronunciado a un pH < 7. Por consiguiente, parece que el efecto del ácido carboxílico C6 polihidroxilado, por ejemplo, el ácido glucónico, sobre la formación de la biopelícula no solo está relacionado con su acidez, sino que el compuesto en sí, o más precisamente la 5-lactona relacionada con el mismo, también proporciona un efecto.

[0043] En la técnica, se ha demostrado que el ácido D-glucónico producido por la cepa AN5 de Pseudomonas tiene un efecto sobre la enfermedad del trigo provocada por el hongo Gaeumannomyces graminis var. tritici (R. Kaur y col. al., Phytochemistry 67 (2006) 595-604; véase también el documento WO 00/44230 A1). Los autores sugieren que la capacidad del ácido D-glucónico y otros agentes antifúngicos producidos por cepas de Pseudomonas, por ejemplo, ácido fenanzina-1-carboxílico (PCA) y 2,4-diacetilfloroglucinol (DPG), para inhibir el hongo que se lleva todo debe ser, al menos en parte, debido a su capacidad para reducir el pH en la rizosfera del trigo.

[0044] Sin limitación a ninguna teoría, puede ser que la presencia de ácido glucónico favorezca a las células planctónicas sobre la formación de biopelículas de especies de cándida, ya que el ácido carboxílico C6 polihidroxilado, por ejemplo, el ácido glucónico, puede ser utilizado por especies de cándida y otras eucariotas en la ruta de la pentosa fosfato.

[0045] En la solución acuosa, el ácido glucónico (GA, CAS 526-95-4) está en equilibrio con la glucono 5-lactona (GDA, CAS 90-8-2) y la glucono Y-lactona (GGA). El ácido glucónico es difícil de producir como un producto cristalino sólido y generalmente se suministra como una solución de agua al 50 %.

[0046] Si bien dicha solución acuosa se puede utilizar para proporcionar una formulación farmacéutica líquida para su administración vaginal, como una crema vaginal, un gel vaginal, la solución acuosa es menos adecuada para su uso para proporcionar una formulación farmacéutica sólida para su administración vaginal, tal como un comprimido vaginal, un supositorio vaginal o un anillo vaginal.

[0047] Para resolver este problema, los inventores investigaron la posibilidad de utilizar la glucono 5-lactona (GDA) en la preparación de formulaciones farmacéuticas sólidas. De manera sorprendente, los inventores descubrieron que la GDA como tal, es decir, la lactona en sí, tiene un efecto sobre la formación de biopelículas de diferentes especies de cándida. Estudios posteriores revelaron que el efecto de la GDA sobre la formación de biopelículas y la viabilidad de las especies de cándida se compara con el efecto del ácido glucónico, lo que implica que la GDA en sí misma actúa como un compuesto activo.

[0048] Por consiguiente, una realización de la descripción se refiere a una formulación farmacéutica para su administración vaginal que comprende un compuesto según la fórmula (III), que es la glucono 5-lactona (GDA).

[0049] Además, la formulación farmacéutica comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable para proporcionar una formulación. En este contexto, "farmacéuticamente aceptable" significa un excipiente que, en la dosis y concentración empleadas, no provoca ningún efecto no deseado en los sujetos a los que se administra. Dichos excipientes farmacéuticamente aceptables son bien conocidos en la técnica. Pueden seleccionarse de entre el grupo que consiste en vehículos, diluyentes, aglutinantes, agentes desintegrantes, agentes mejoradores del flujo, agentes ajustadores del pH, agentes estabilizantes, agentes ajustadores de la viscosidad, conservantes, agentes gelificantes o inflamatorios, tensioactivos, agentes emulsionantes, agentes suspensores, bases para supositorios, vagitorios o pesarios, bases para cremas, ungüentos, geles, lociones, champús, espumas, rociadores y similares. Tal como lo reconocerá el experto en la materia, la elección específica de excipientes farmacéuticamente aceptables depende de la forma específica o la formulación, por ejemplo, la forma de dosificación. Una persona experta en la técnica puede encontrar orientación en varios libros de texto, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, in providing suitable pharmaceutically acceptable excipients. Dicha formulación farmacéutica es útil para tratar y/o impedir infecciones fúngicas vulvovaginales.

[0050] El excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser un vehículo lipófilo o hidrófilo. Los ejemplos de vehículos lipófilos son ceras, aceites, miristato de isopropilo, triglicéridos sólidos y manteca de cacao. Los ejemplos de vehículos hidrófilos son glicerol, propilenglicol y polioxietilenglicol.

[0051] Además, el excipiente puede ser un relleno. Los ejemplos de cargas incluyen sacáridos, como la lactosa, la maltosa y la trehalosa. Otros disacáridos, tales como, por ejemplo, la sacarosa, la lactulosa, la celobiosa, etc., también pueden ser adecuados para su uso en el presente contexto. En una composición de la descripción, un disacárido normalmente contribuye a una estructura adecuada de la composición. Los sacáridos también pueden servir como coadyuvantes de la liofilización.

[0052] En la solución acuosa, los compuestos según la fórmula (I) están en equilibrio con las lactonas correspondientes, por eemplo, la 5-lactona la -lactona.

[0053] Por consiguiente, el ingrediente activo de la formulación farmacéutica puede comprender una pequeña cantidad del ácido (véase la fórmula (I))y/o la glucono Y-lactona.

[0054] Según una realización de la presente descripción, el compuesto según la fórmula (III) está parcialmente presente en la formulación farmacéutica como un ácido (fórmula (I)) en su forma protonada no cargada, por ejemplo, ácido glucónico, y parcialmente como la sal de adición correspondiente, es decir, una base conjugada, por ejemplo, gluconato. Por consiguiente, el ácido glucónico puede servir para tamponar la formulación farmacéutica. La relación entre el ácido en su forma protonada no cargada y la base conjugada puede elegirse para proporcionar un pH adecuado, tal como de 3.5 a 4,5, tras la administración. Por consiguiente, la formulación farmacéutica puede restaurar el pH fisiológico normal en la vagina tras la administración. Sin embargo, dada la actividad de los compuestos según la fórmula (III) ya a un pH de 6.5 o inferior, el pH no debe restablecerse necesariamente para que la formulación farmacéutica proporcione su efecto. Sin embargo, se prefiere que la formulación farmacéutica proporcione un pH de 6,0 o menos, tal como 5,0 o menos, tras la administración. La formulación farmacéutica preferiblemente no debe proporcionar un pH inferior a 3,0, más preferiblemente no inferior a 3,5, tras su administración.

[0055] Mientras que el compuesto según la fórmula (III) en forma del ácido correspondiente en su forma protonada no cargada y/o la sal de adición correspondiente, es decir, una base conjugada, puede usarse para proporcionar propiedades de modificación del pH a la formulación farmacéutica, la formulación farmacéutica puede comprender agentes tamponadores o reguladores del pH adicionales. Dichos agentes tamponadores o reguladores del pH pueden ser agentes tamponadores farmacéuticamente aceptables adecuados para regular el pH entre alrededor de 3 y alrededor de 5, tal como entre 3,5 y 4,5. Los ejemplos de agentes tamponadores o reguladores del pH incluyen ácido láctico, ácido acético, ácido cítrico, ácido malónico, ácido fosfórico, ácido tartárico, ácido maleico, etc. y sus correspondientes bases conjugadas, es decir, lactato, acetato, citrato, malonato, fosfato, tartrato, y maleato.

[0056] Además, la formulación farmacéutica también puede comprender una o varias sales farmacéuticamente aceptables tales como succinato, lisinato, cipionato, valerato, hemisuccinato, butirato o sal de trometamol, solas o en combinación.

[0057] La formulación farmacéutica debe comprender una cantidad farmacéuticamente activa de un compuesto según la fórmula (III). Según una realización preferida de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende al menos el 5 % en peso, como al menos el 10 % en peso, el 15 % en peso, el 20 % en peso, el 25 % en peso, el 30 % en peso, el 40 % en peso, el 50 % en peso, el 60 % en peso o el 75 % en peso, de un compuesto según la fórmula (III). Además, la formulación farmacéutica puede comprender como máximo el 99 % en peso, tal como un máximo del 95 % en peso, el 90 % en peso, el 80 % en peso, el 75 % en peso, el 70 % en peso, el 60 % en peso o el 50 % en peso, de un compuesto según la fórmula (III). Por consiguiente, la formulación farmacéutica puede comprender del 5 % en peso al 99 % en peso de un compuesto según la fórmula (III). Tal como lo reconocerá el experto en la materia, el intervalo puede reducirse en función de las cantidades superior e inferior especificadas anteriormente, como del 10 al 95 % en peso, del 10 al 80 % en peso, del 15 al 90 % en peso, del 20 al 75 % en peso y del 30 al 70 % en peso. La formulación farmacéutica puede comprender entre el 40 y el 90 % en peso de un compuesto según la fórmula (III). La formulación farmacéutica puede comprender entre el 50 y el 80 % en peso de un compuesto según la fórmula (III). La formulación farmacéutica puede comprender entre el 60 y el 70 % en peso de un compuesto según la fórmula (III).

[0058] Según otra realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende glucono 5-lactona (III) y opcionalmente, pero no de manera necesaria, ácido glucónico (I). En tal realización de la presente descripción, la relación molar de la glucono 5-lactona (III) y el ácido glucónico (I) en la formulación puede ser al menos 9:1 (III:I), preferiblemente al menos 49:1 (III:I), más preferiblemente al menos 99:1 (III:I). Como la glucono 5-lactona (III) se hidrolizará al ácido glucónico (I), puede ser preferible para una alta proporción de glucono 5-lactona (III) en la formulación farmacéutica. La formulación farmacéutica puede, según tal realización de la presente descripción, comprender menos del 1 % en peso del ácido glucónico (I), tal como menos del 0,1 % en peso, el 0,05 % en peso, el 0,01 % en peso, el 0,005 % en peso o el 0,001 % en peso del ácido glucónico (I).

[0059] Tras la inserción vaginal de la formulación farmacéutica, la lactona quedará expuesta a condiciones acuosas que provocan una hidrólisis. Como la hidrólisis no será instantánea, la formulación farmacéutica liberará el compuesto según la fórmula (III) durante un período de tiempo prolongado, prolongando su efecto. Además, el compuesto según la fórmula (I) puede liberarse como ácido libre o como base conjugada del mismo y añadir, por consiguiente, un efecto reductor del pH. El pH de la vagina puede variar entre 3,5 y 4,5, y, en el caso de una infección micótica o bacteriana, puede elevarse por encima de 4,5.

[0060] Además, tal como lo reconoce el experto en la materia, la formulación farmacéutica puede formularse para una liberación prolongada, prolongando aún más el efecto. La formulación farmacéutica se puede formular para liberar un compuesto según la fórmula (III) durante un período de tiempo prolongado, tal como durante al menos 4 horas, durante al menos 6 horas, durante al menos 8 horas o durante al menos 24 horas, después de la inserción intravaginal.

[0061] Además, la glucono 5-lactona (III) puede actuar también como ingrediente activo, actuar como un relleno y/o un vehículo que facilita la formulación de una composición que comprende glucono 5-lactona (III) en una formulación farmacéutica, tal como una formulación farmacéutica semisólida o sólida.

[0062] Aparte del excipiente, la formulación farmacéutica puede comprender un agente antifúngico adicional. El agente antifúngico puede seleccionarse de entre el grupo que consiste en miconazol, terconazol, isoconazol, fenticonazol, fluconazol, nistatina, ketoconazol, clotrimazol, butoconazol, econazol, tioconazol, itraconazol, 5-fluoracilo y metronidazol. La cantidad de agente antifúngico por dosis puede estar en el intervalo de 0,1 mg a 2000 mg. Un compuesto según la fórmula (III) y dicho agente antifúngico adicional pueden actuar de manera sinérgica.

[0063] A veces, pero no siempre, las infecciones fúngicas vulvovaginales también implican infecciones bacterianas. El ácido glucónico proporcionará un efecto similar al efecto del ácido láctico frente a las infecciones bacterianas debido a su acidez. Por consiguiente, además, la glucono 5-lactona (III) también puede tener un efecto sobre las infecciones bacterianas. Sin embargo, puede ser preferible complementar la formulación farmacéutica con uno o más agentes antibacterianos adicionales. Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende, por consiguiente, uno o más agentes antibacterianos. El agente antibacteriano puede seleccionarse de entre el grupo que consiste en clindamicina, tetraciclina, amoxicilina, ampicilina, eritromicina, doxiciclina, lumefloxacina, norfloxacina, afloxam, ciproflaxina, azitromicina y cefltoxina. La cantidad de agente antibacteriano puede estar en el intervalo de 5 mg a 1000 mg por dosis.

[0064] Además, la formulación farmacéutica puede comprender uno o más agentes antiadherentes de patógenos. Como ya se analizó, las infecciones fúngicas vulvovaginales implican la formación de biopelículas y la adhesión de hongos a la mucosa vaginal. Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica comprende, por consiguiente, uno o varios agentes antiadherentes que evitan la mucoadhesión por parte de patógenos, por ejemplo, hongos. Los agentes antiadherentes pueden ser agentes que actúan como una barrera que impide la adhesión o como un agente que hace que los microorganismos ya adheridos se desprendan. Los ejemplos de agentes antiadherentes que provocan falta de adhesión pueden ser manosa, lactosa, xilitol y otros alcoholes de azúcar.

[0065] La formulación farmacéutica se formula preferiblemente para la administración en la vagina, por ejemplo, por vía intravaginal. Según una realización de la presente descripción, la formulación farmacéutica se formula, por consiguiente, como un tampón, un vagitorio, un aerosol vaginal, una copa vaginal, un gel vaginal, un inserto vaginal, un parche vaginal, un anillo vaginal, una esponja vaginal, un supositorio vaginal, una crema vaginal, una emulsión vaginal, una espuma vaginal, una loción vaginal, un ungüento vaginal, un polvo vaginal, un champú vaginal, una solución vaginal, un rociador vaginal, una suspensión vaginal, un comprimido vaginal, una varilla vaginal, un disco vaginal, un dispositivo vaginal y cualquier combinación de los mismos. Preferiblemente, la formulación farmacéutica se formula como un vagitorio, un aerosol vaginal, una copa vaginal, un gel vaginal, un anillo vaginal, una esponja vaginal, un supositorio vaginal, una crema vaginal, una emulsión vaginal, una espuma vaginal, una loción vaginal, una pomada vaginal, un champú vaginal, una solución vaginal, un rociador vaginal, una suspensión vaginal, un comprimido vaginal, una varilla vaginal o un disco vaginal; más preferiblemente como un vagitorio, un inserto vaginal, un anillo vaginal, un supositorio vaginal, un comprimido vaginal, una varilla vaginal o un disco vaginal. La formulación farmacéutica también puede ser una formulación líquida, como un aerosol vaginal, un gel vaginal, una crema vaginal, una emulsión vaginal, una espuma vaginal, una loción vaginal, un ungüento vaginal, un champú vaginal, una solución vaginal, un rociador vaginal, una suspensión vaginal o cualquier combinación de los mismos.

[0066] Según una realización alternativa, pero menos preferida, de la presente descripción, la formulación farmacéutica está presente en un artículo sanitario, tal como un tampón, una compresa sanitaria, una compresa o pañal para la incontinencia, o un protector de ropa interior.

[0067] La formulación farmacéutica puede formularse adicionalmente para una liberación prolongada, es decir, para que libere un compuesto según la fórmula (III) y/o (I) durante un período de tiempo prolongado, tal como en más de al menos 4 horas, en más de al menos 6 horas, en más de al menos 8 horas o más de al menos 24 horas, después de la administración, por ejemplo, por inserción intravaginal. El compuesto según la fórmula (I) puede liberarse como ácido en su forma protonada no cargada y/o como la base conjugada correspondiente. Además, como ya se ha señalado, la formulación puede liberar la glucono 5-lactona en forma no hidrolizada. Al formular la formulación farmacéutica para una liberación prolongada, la formulación farmacéutica ejercerá su efecto durante más tiempo. Esto puede ser beneficioso para restaurar las condiciones normales de la vagina y tratar y/o impedir una infección por hongos vulvovaginales.

[0068] Como ya se elaboró, una formulación farmacéutica para la administración vaginal que comprende un compuesto según la fórmula (III)

tiene la capacidad de reducir o incluso impedir la formación de biopelículas por parte de las especies de cándida. Además, tales formulaciones farmacéuticas pueden tener la capacidad de reducir o incluso disolver las biopelículas formadas por especies de cándida.

[0069] Como ya se elaboró, la glucono 5-lactona (III), puede, por consiguiente, usarse para impedir o tratar una infección fúngica urogenital, tal como una infección fúngica vulvovaginal. Por consiguiente, una realización de la presente descripción se refiere a la formulación farmacéutica, como se describe en esta invención, para su uso a fin de impedir o tratar una infección fúngica urogenital, tal como una infección fúngica vulvovaginal. Típicamente, la infección fúngica urogenital es la candidosis vulvovaginal que implica la infección por especies de cándida, tales como la Candida albicans, la Candida glabrata, la Candida krusei y la Candida tropicalis.

[0070] La candidosis vulvovaginal es el crecimiento excesivo de la cándida en la vagina que provoca síntomas asociados con la inflamación, como picazón, dolor o irritación, tejidos vaginales enrojecidos e inflamados, dolor al orinar y en el coito, típicamente secreción pegajosa blanca y grumosa, parecida a la cuajada, o de normal a fina, y descarga acuosa.

[0071] De manera similar, una realización de la descripción se refiere al uso de glucono 8-lactona para la fabricación de una formulación farmacéutica, como se describe en esta invención, para su uso a fin de tratar y/o impedir una infección fúngica urogenital, como una infección fúngica vulvovaginal. Típicamente, la infección fúngica urogenital es la candidosis vulvovaginal que implica la infección por especies de cándida, tales como la Candida albicans, la Candida glabrata, la Candida krusei y la Candida tropicalis.

[0072] Incluso otra realización de la presente descripción se refiere a un procedimiento para impedir y/o tratar una infección fúngica urogenital, como una infección fúngica vulvovaginal, que comprende la administración a un mamífero, incluyendo al humano, que necesite impedirla y/o tratarla, una cantidad terapéuticamente efectiva de la formulación farmacéutica, como se describe en esta invención. Típicamente, la infección fúngica urogenital es la candidosis vulvovaginal que implica la infección por especies de cándida, tales como la Candida albicans, la Candida glabrata, la Candida krusei y la Candida tropicalis.

[0073] Una composición farmacéutica según las realizaciones de la presente descripción se puede administrar a un paciente en una dosis farmacéuticamente efectiva. Por "dosis farmacéuticamente efectiva" se entiende una dosis que es suficiente para producir los efectos deseados en relación con la condición para la que se administra. La dosis exacta puede depender de la forma de administración, la naturaleza y la gravedad del trastorno y/o enfermedad, así como también de las condiciones generales, como la edad y el peso corporal del paciente.

[0074] Según una realización de la presente descripción, una composición farmacéutica como se describe en esta invención debe administrarse al menos una vez al día durante al menos una semana, aunque también se puede usar otro régimen de dosificación.

[0075] Cuando se usa en esta invención, el término "impedir" no debe interpretarse en el sentido de que una condición y/o una enfermedad podría no volver a ocurrir nunca más después del uso de un compuesto o composición farmacéutica según las realizaciones descritas en esta invención a fin de lograr su impedimento. Además, el término tampoco debe interpretarse en el sentido de que no podría producirse una condición, al menos hasta cierto punto, después de tal uso para impedir dicha condición. En lugar de eso, el término "impedir" pretende dar a entender que la condición que se va a impedir, si ocurre a pesar de tal uso, será menos grave que sin tal uso.

[0076] Según una realización de la presente descripción, el tratamiento también incluye el pretratamiento, es decir, el tratamiento profiláctico.

[0077] Como se usa en esta invención, el término "comprende" no excluye la presencia de otras especies o etapas. Además, aunque las características individuales pueden incluirse en diferentes realizaciones, estas pueden combinarse posiblemente de manera ventajosa, y la inclusión en diferentes realizaciones no implica que una combinación de características no sea viable y/o ventajosa. Además, las referencias singulares no excluyen una pluralidad. Los términos "un", "una", "primero", "segundo", etc. no excluyen una pluralidad. Las frases "al menos uno" o "uno o más" se refieren a 1 o un número mayor que 1, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.

Breve descripción de los dibujos

[0078]

La Figura 1

muestra cambios en la rotación óptica en la hidrólisis de la GDA en agua destilada (círculos sin relleno), un tampón de pH 4 (cuadrados llenos), un tampón de pH 5 (cuadrados sin relleno) y un tampón de pH 7 (círculos rellenos).

La Figura 2

muestra la formación de biopelículas normalizadas de Candida albicans en el medio mínimo a un pH de 2,6 a 6,6 con un tampón fosfato (círculos sin relleno, línea de puntos) o con GDA (cuadrados rellenos, línea continua). La biopelícula se midió a las 24 h y la tinción se realizó con un cristal violeta.

La Figura 3a

muestra la formación de biopelículas normalizadas de Candida albicans tratadas con GDA. Una pastilla de GDA se añadió a una solución de tampón con un pH de 3,71 (10 ml) a 37 °C. Se tomaron muestras (4 ml) después de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 24 horas y se añadió una nueva solución tampón (4 ml). Las muestras se diluyeron 50 veces con un medio de biopelícula y la cantidad de formación de biopelículas se midió después de 24 h.

La Figura 3b

muestra la formación de biopelículas normalizadas de Candida glabrata tratadas con GDA. Una pastilla de GDA se añadió a una solución de tampón con un pH de 3,71 (10 ml) a 37 °C. Se tomaron muestras (4 ml) después de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 24 horas y se añadió una nueva solución tampón (4 ml). Las muestras se diluyeron 50 veces con un medio de biopelícula y la cantidad de formación de biopelículas se midió después de 24 h.

La Figura 4a

muestra la viabilidad de las biopelículas de C. albicans y C. glabrata después del tratamiento con GDA en diferentes concentraciones durante 24 h. La tinción de la biopelícula se realizó con XTT. La densidad óptica se midió en 485 nm. Las líneas diagonales indican los datos para C. albicans. Las columnas rellenas en negro indican los datos para C. glabrata.

La Figura 4b

Muestra la viabilidad de las biopelículas de C. albicans y C. glabrata después del tratamiento con GDA en diferentes concentraciones durante 48 h. La tinción de la biopelícula se realizó con XTT. La densidad óptica se midió en 485 nm. Las líneas diagonales indican los datos para C. albicans. Las columnas rellenas en negro indican los datos para C. glabrata.

La Figura 5

muestra el efecto de la GDA sobre la biopelícula madura de C. albicans y C. glabrata. La biopelícula madura (que creció durante 48 h) se incubó con GDA durante 5 h a 37 °C y, a continuación, las células en dilución en serie se sembraron en una placa de YPD para estimar la supervivencia celular.

La Figura 6a

muestra un estudio de microfluidos del desarrollo de biopelículas de C. albicans sin tratar en un medio mínimo con un pH de 7,0. Las células no tratadas forman principalmente hifas.

La Figura 6b

muestra un estudio de microfluidos del desarrollo de biopelículas de C. albicans tratadas en un medio mínimo con un hidrolizado de GDA en una concentración final x50 con un pH de 3,8. La adición de GDA provocó el crecimiento de la C. albicans predominantemente con forma de levadura, pero no como hifas.

Materiales y Procedimientos

Glucono 5-lactona

[0079] La glucono 5-lactona sólida (GDA, CAS 90-8-2) se obtuvo de manos de proveedores comerciales.

Ensayo de formación de biopelículas

[0080] Las cepas de levadura se cultivaron a 37 °C en un medio completo YPD (0,5 % (peso/volumen) de extracto de levadura, 1 % (peso/volumen) de peptona, 2 % (peso/volumen) de glucosa) o un medio mínimo que consiste en YNB (base de nitrógeno de levadura sin aminoácidos y sulfato de amonio, FORMEDIUM™, CYN0505) suplementado con un 0,5 % (peso/volumen) de sulfato de amonio, 0,2 % (peso/volumen) de glucosa y 100 mM de L-prolina. Se usó un 2 % (peso/volumen) de agar para solidificar los medios en los casos necesarios. El medio mínimo líquido (YNB (base de nitrógeno de levadura sin aminoácidos y sulfato de amonio, FORMEDIUM™, CYN0505) suplementado con sulfato de amonio al 0,5 %, un 0,2 % (peso/volumen) de glucosa y 100 mM de L-prolina) para el ensayo de biopelículas (medio de biopelículas).

[0081] En los experimentos sobre el impacto del pH en la biopelícula (ejemplo 2 a continuación), los valores de pH (de 2,6 a 6,6) se obtuvieron utilizando diferentes tampones de fosfato de potasio a la concentración final de 0,25 M, o mediante la adición de GDA al medio de la biopelícula.

Cepas de levadura

[0082] Las cepas utilizadas en los experimentos de formación de biopelículas se describen en la Tabla 1.

Tabla 1. Cepas de levadura utilizadas en experimentos de biopelículas.

Medición de la biopelícula

[0083] La biopelícula se midió en un cultivo líquido como se describe en [K. Scherz y col., G3 (Bethesda), 2014, 4, 1671 1680. I. Serrano-Fujarte y col. Biomed Res Int. 2015;2015:783639] con algunas modificaciones. Antes del ensayo de biopelículas, los cultivos de levadura se cultivaron en un medio líquido YPD durante 24 horas hasta que las células de la fase estacionaria se sedimentaron mediante centrifugación (1699 * g), se lavaron con agua estéril y las células se inocularon más en el medio de biopelícula de prueba (YNB (base de nitrógeno de levadura sin aminoácidos y sulfato de amonio) suplementado con sulfato de amonio al 0,5 %, glucosa al 0,2 % y 100 mM de L-prolina, con un pH de 7,0) en una concentración final de 0,2 DO⁶⁰⁰/ml y se incubó en placas de microtitulación de poliestireno de fondo plano de 96 pocillos (Sigma Aldrich, placas de cultivo Corning® Costar®, CLS3596-50EA) durante 72 horas y a una temperatura de 37 °C. En puntos de tiempo definidos, se añadió violeta cristal (HT901-8FOZ; Sigma Aldrich) al medio a la concentración final al 0,05 %. Además, se midió la biomasa total. Después de 24 horas de tinción celular, los pocillos de la placa se lavaron cuatro veces con 200 |jl de agua para eliminar las células planctónicas (células que no forman parte de una biopelícula), las biopelículas se secaron y disolvieron en 200 j l de etanol al 96 %. Las mediciones de tinción de biomasa total y biopelícula de violeta cristal se realizaron a OD⁵⁶⁰con el lector de placas FLUOstar OPTIMA, BMG LABTECH. Las mediciones de la biopelícula de violeta cristal se normalizaron a la biomasa total (biopelícula DO560/biomasa total OD⁵⁶⁰).

Ejemplos

[0084] Los ejemplos que no se encuentren dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas no forman parte de la invención.

Ejemplo 1: Hidrólisis de alucono 5-lactona (GDA)

[0085] En la solución acuosa, la glucono 5-lactona (GDA) está en equilibrio con el ácido glucónico (GA, CAS 526-95-4). Se añadió GDA (200 mg) al H²O destilada (20 ml), un tampón de pH 4, pH 5 o 7 a 37 °C. La rotación óptica y el pH se midieron a lo largo del tiempo. Rotación óptica, medida a 37 °C, línea D de sodio, C = 10 mg/ml, longitud de la ruta = 10 cm. La rotación óptica de g Da es de aproximadamente 66°. La rotación óptica del ácido glucónico es de aproximadamente 5° [D. T. Sawyer, J. B. Bagger, J. Am. Chem. Soc., 1959, 81, 5302-5306]. Este experimento muestra que la GDA se hidroliza lentamente a una mezcla de GDA y GA (Fig. 1). El equilibrio depende del pH y las concentraciones relevantes de GDA están presentes en todas las condiciones tamponadas.

Ejemplo 2: formación de biopelículas de Candida albicans a diferentes pH

[0086] Como se puede ver en la Fig. 2, la GDA muestra fuertes efectos sobre la formación de biopelículas de C. albicans, mientras que los efectos del tampón fosfato son mucho menos pronunciados. Además, la GDA muestra un fuerte efecto también con valores de pH de hasta alrededor de al menos 6, mientras que el efecto del tampón ya disminuye a pH 5.

Ejemplo 3: Formación de biopelículas en un modelo de condiciones in vivo usando GDA

[0087] A la solución tampón con un pH de 3,71 (0,5 M de KH2PO4/ácido ortofosfórico, 10 ml) se añadieron pastillas de GDA (2,5 g, muestras duplicadas) a 37 °C. Se tomaron muestras (4 ml) en puntos de tiempo fijos (a las 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 24 h) y se añadió una nueva solución tampón (4 ml). Las muestras se diluyeron 50 veces con un medio de biopelícula (véase lo anterior) y la cantidad de formación de biopelículas se midió después de 24 h como se describió anteriormente. Como se ve en la Fig. 3a, la GDA liberada reduce significativamente la cantidad de formación de biopelícula en la C. albicans. Además, la hidrólisis de la pastilla es aparentemente lo suficientemente lenta como para proporcionar un efecto preventivo durante al menos hasta 24 horas, probablemente mucho más. El efecto es menos pronunciado con la C. glabrata (Fig. 3b).

Tabla 2. Formación de biopelículas de C. albicans y C. glabrata tratadas con GDA en un modelo de condiciones in vivo. Las muestras se tomaron a 1 hora, se diluyeron 50 veces con un medio de ensayo de biopelículas y la cantidad de f rm i n i lí l mi i 24 h.

[0088] Los resultados muestran que la formación de biopelículas de tanto C. albicans como C. glabrata se redujo ante la presencia de la GDA. Además de la disminución de la formación de biopelículas, la GDA puede afectar la viabilidad de la biopelícula madura de C. albicans y C. glabrata.

Ejemplo 4: Viabilidad de biopelículas maduras de C. albicans y C. glabrata tratadas con GDA

[0089] La viabilidad de las biopelículas de C. albicans y C. glabrata después del tratamiento con GDA en diferentes concentraciones y en diferentes períodos de tiempo se evaluó mediante la tinción celular con XTT. El XXT es un ensayo colorimétrico para la cuantificación de la viabilidad celular y la citotoxicidad. El ensayo se basa en la escisión del XTT de la sal de tetrazolio, una conversión que solo ocurre en células viables. La biopelícula madura se expuso a la GDA durante 24 h. A continuación, las células se lavaron 2 veces con PBS, después de lo cual se añadió la mezcla de reacción del XTT. Después de 30 min, la densidad óptica se midió en 485 nm.

[0090] El ensayo de XTT mostró una fuerte reducción en la viabilidad para la C. glabrata tan pronto como después de 24 h de incubación (Fig. 4a). El efecto fue menos pronunciado para la C. albicans, pero se observó claramente después de 48 h (Fig. 4b).

[0091] Además, la biopelícula madura (que creció durante 48 h en YNB, con glucosa al 0,2 % y 100 mM de prolina) de C. albicans y C. glabrata se incubó con GDA en diferentes concentraciones (de 0,05 a 0,5 g/ml) a 37 °C. Para ello, se eliminó el medio de biopelícula (YNB, glucosa al 0,2 %, 100 mM de prolina) y se añadió GDA, que se disolvió en agua en concentraciones de 0,05, 0,1, 0,2 y 0,5 g/ml. Después de la incubación con GDA durante 5 o 73 h, se sembraron 5 |jl de células en una dilución en serie (de 1:10 a 1:1000) en el medio de YPD de agar para estimar la supervivencia celular. Las células en placa se incubaron durante 24 ha 37 °C y se analizaron visualmente. Las células de la biopelícula madura tratadas con agua se utilizaron como control. Se descubrió que la GDA disminuye la viabilidad celular de la C. albicans y la C. glabrata, particularmente en altas concentraciones. En las concentraciones de 0,2 y 0,5 g/ml después de 5 h de incubación, la viabilidad celular disminuyó aproximadamente 100 veces tanto para la C.albicans como la C. glabrata. Después de 73 h de incubación con 0,5 g/ml de GDA, la viabilidad celular de C.albicans se redujo en aproximadamente 1000 veces (datos no mostrados). La C. glabrata demostró ser más sensible a la GDA (Fig. 5).

Ejemplo 5: Estudio de microfluidos del desarrollo de biopelículas

[0092] Para monitorizar la morfología celular de la C. albicans, se estudió el desarrollo de biopelículas usando microscopía y el estudio de microfluidos. Después de inocular las células de levadura, comenzaron a formarse hifas en la primera hora de incubación en el medio de biopelículas (YNB suplementado con 100 mM de prolina y glucosa al 0,2 %, con un pH de 7,0). La Fig. 6a muestra células sin tratar después de 5 h. Una pastilla de GDA (2,5 g) se añadió a la solución tampón con un pH de 3,71 (0,5 M de K-hPO4/ácido ortofosfórico, 10 ml) a 37 °C. Se tomó una muestra después de 1 hora, se diluyó 50 veces con medio de biopelícula y se agregó a C. albicans. Después de 5 h, la mayoría de las células tratadas eran planctónicas (Fig. 6b).

Ejemplo 6: Viabilidad de diferentes especies de cándida en presencia de la GDA

[0093] Otras especies de cándida estudiadas también resultaron sensibles (es decir, en la medida de su viabilidad celular mediante el uso del ensayo XTT, véase el ejemplo 4) a la GDA. Sin embargo, mostraron diferentes niveles de sensibilidad. La Candida albicans SC5314 mostró la menor susceptibilidad y el aislado de silicona A4-1 de Candida krusei mostró la mayor susceptibilidad. La toxicidad de la GDA está mediada por el daño de la pared celular, ya que las células expuestas a la GDA tenían una viabilidad menor en el medio con blanco de calcoflúor en comparación con el suplementado con estabilizador osmótico (0,5 M de sacarosa) y en comparación con las células no tratadas en estos medios. La Tabla 3 resume los efectos cualitativos mostrados por la GDA.

Tabla 3. Sensibilidad de diferentes es ecies de cándida a la GDA

[0094] Para concluir, (i) la GDA puede romper la biopelícula madura formada por la C. albicans y la C. glabrata, (ii) tras la exposición a la GDA, la C. albicans se transforma en una forma de levadura, mientras que la viabilidad de la C. glabrata disminuye, (iii) el efecto es claro incluso sobre otras cepas, es decir, la C. tropicalis y la C. krusei.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Glucono 5-lactona (fórmula (III)),

para su uso con el fin de impedir o tratar la candidosis vulvovaginal.

2. La glucono 5-lactona (fórmula (III)) para su uso según la reivindicación 1, donde la candidosis vulvovaginal es provocada por Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei y/o Candida tropicalis.