ES2878278T3 - Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores - Google Patents

Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores Download PDF

Info

Publication number
ES2878278T3
ES2878278T3 ES17800414T ES17800414T ES2878278T3 ES 2878278 T3 ES2878278 T3 ES 2878278T3 ES 17800414 T ES17800414 T ES 17800414T ES 17800414 T ES17800414 T ES 17800414T ES 2878278 T3 ES2878278 T3 ES 2878278T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
tumor
excision
immune
checkpoint inhibitor
immune cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES17800414T
Other languages
English (en)
Inventor
Bjørn Tore Gjertsen
Karl-Henning Kalland
Anne Margrete Øyan
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Vestlandets Innovasjonsselskap AS
Original Assignee
Vestlandets Innovasjonsselskap AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vestlandets Innovasjonsselskap AS filed Critical Vestlandets Innovasjonsselskap AS
Application granted granted Critical
Publication of ES2878278T3 publication Critical patent/ES2878278T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B18/02—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by cooling, e.g. cryogenic techniques
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4615—Dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4622—Antigen presenting cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
    • C12N5/064—Immunosuppressive dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B18/04—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by heating
    • A61B18/12—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by heating by passing a current through the tissue to be heated, e.g. high-frequency current
    • A61B18/14—Probes or electrodes therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B18/18—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by applying electromagnetic radiation, e.g. microwaves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
    • A61B17/32—Surgical cutting instruments
    • A61B17/320068—Surgical cutting instruments using mechanical vibrations, e.g. ultrasonic
    • A61B2017/320069—Surgical cutting instruments using mechanical vibrations, e.g. ultrasonic for ablating tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B2018/00315—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body for treatment of particular body parts
    • A61B2018/00547—Prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B2018/00571—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body for achieving a particular surgical effect
    • A61B2018/00577—Ablation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B2018/00636—Sensing and controlling the application of energy
    • A61B2018/00773—Sensed parameters
    • A61B2018/00791—Temperature
    • A61B2018/00821—Temperature measured by a thermocouple
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B18/02—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by cooling, e.g. cryogenic techniques
    • A61B2018/0293—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by cooling, e.g. cryogenic techniques using an instrument interstitially inserted into the body, e.g. needle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/58—Prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Un inhibidor del punto de control de células inmunitarias para usar junto con una célula dendrítica inmadura autóloga en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar (i) la célula dendrítica inmadura autóloga y (ii) el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto por crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante, radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas o electroextirpación, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo, en el que dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es un reactivo de macromolécula de afinidad que se une a al menos un ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo y la unión de dicho reactivo a su sitio de unión diana en dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo interfiere con la interacción entre el receptor y el ligando y en el que dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo se selecciona de (a) CTLA4 y CD80 o CD86, (b) PD1 y PDL1 o PDL2, (c) BTLA y HVEM, (d) KIR y MHC de clase I o II, (e) LAG3 y MHC de clase I o II, (f) TIM3 y galectina 9, (g) A2aR y adenosina, (h) B7-H3, (i) B7-H4, y (j) 2B4.

Description

DESCRIPCIÓN
Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores
La presente invención proporciona un nuevo tratamiento inmunoterapéutico para tumores. El tratamiento es inmunoterapéutico en el sentido de que el tratamiento implica la administración de células dendríticas (DC) a un sujeto después de la extirpación de un tumor para inducir y mejorar una respuesta inmune contra las células del tumor y la posterior regulación de esa respuesta inmune con un inhibidor de puntos de control de células inmunitarias. Más específicamente, el tratamiento es un método que comprende la extirpación al menos parcial de un tumor y la posterior administración de DC autólogas inmaduras y un inhibidor del punto de control de células inmunitarias al sitio del tumor extirpado o porción del mismo. La administración del inhibidor del punto de control de las células inmunitarias puede ser directamente al sitio del tumor extirpado o porción del mismo y puede proceder, preceder u ocurrir simultáneamente con la administración de las CD. Los tratamientos de la invención pueden estar asociados con menos efectos secundarios adversos que los tratamientos solo con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias.
Durante más de dos siglos, la vacunación se ha utilizado con éxito para prevenir numerosas enfermedades infecciosas. La vacunación consiste en introducir material antigénico procesado ex vivo que imita a un patógeno real en un sujeto humano, lo que da como resultado la activación del sistema inmunológico del huésped contra ese patógeno específico.
En el caso de enfermedades infecciosas, las vacunas se emplean típicamente como profilaxis contra una enfermedad específica asociada a patógenos. Tras la exposición al material de la vacuna, el sistema inmunológico del huésped expandirá las poblaciones de linfocitos T específicas del (de los) antígenos/epítopos introducidos, que a su vez revertirá a los linfocitos T de memoria que se expandirán al volver a exponerse al patógeno.
Las vacunas contra el cáncer pueden ser profilácticas, por ejemplo, las vacunas aprobadas recientemente contra el virus del papiloma humano (VPH) asociado al cáncer de cuello uterino (GardasilMR, Merck & CervarixMR, Glaxo-Smith-KlineMR), o terapéuticas. En teoría, las vacunas profilácticas contra el cáncer ejercen su efecto a través del mismo mecanismo que las vacunas contra enfermedades infecciosas y deberían funcionar de manera óptima contra los cánceres de origen viral. Las vacunas terapéuticas, por otro lado, deben ser capaces de estimular el sistema inmunológico del huésped para erradicar (o detener) depósitos de cáncer clínicamente significativos. Actualmente se están evaluando varias vacunas terapéuticas contra el cáncer de próstata en ensayos clínicos, incluidas las células dendríticas autólogas pulsadas con fosfatasa de ácido prostático (Sipuleucel-TMR, Dendreon Corp.); líneas celulares alogénicas completas transfectadas para secretar GM-CSF (GVAXMR, Cell GeneSys); y virus vaccinia atenuado recombinante modificado para expresar antígeno específico de la próstata y tres moléculas coestimuladoras inmunes, ICAM-1, B7.1 y antígeno 3 asociado a la función de linfocitos (ProstvacMR Therion Biologics Corp.MR). Varios artículos de revisión recientes discutieron una variedad de enfoques de vacunas terapéuticas para el cáncer de próstata metastásico (Anguille et al., 2014, The Lancet Oncology 15, e257-e267; Laborde et al., 2014, Frontiers in Immunology 5, 147; Marrari et al., 2007, Cancer Immunology, Immunotherapy, CII 56, 429-445; Sonpavde et al., 2007, Urologic Oncology 25, 451-459). En todos los casos, las vacunas terapéuticas están diseñadas para estimular una respuesta inmune adaptativa específica de antígeno contra la proteína asociada al cáncer (antígeno) de manera que se produzca una respuesta mediada por linfocitos citotóxicos contra el tumor establecido.
El antígeno que comprende la diana inmune de la vacuna, y por lo tanto el agente introducido en el sujeto humano, típicamente toma la forma de (i) proteínas o péptidos "desnudos" con o sin adyuvante; (ii) proteína expresada por vectores virales e introducida como partículas virales; (iii) células cancerosas completas, típicamente alogénicas, que expresan una amplia gama de posibles antígenos; o (iv) proteínas recombinantes o autólogas cargadas en células presentadoras de antígeno tales como células dendríticas.
El antígeno ideal para la terapia de vacuna contra el cáncer es una proteína con expresión específica solo en células cancerosas. Sin embargo, no se sabe que existan antígenos exclusivos del cáncer más allá de mutaciones de proteínas fisiológicas tales como p53 o CDK4. De hecho, la mayoría de los antígenos asociados a tumores también se expresan en tejidos sanos, aunque a niveles más bajos, por ejemplo, antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) y antígeno específico de la próstata (PSA) que son expresados por células epiteliales prostáticas así como por células de carcinoma prostático. Por lo tanto, aunque los enfoques de vacunas de antígeno único se implementan ampliamente contra objetivos de enfermedades infecciosas, algunos investigadores han vuelto cada vez más claro que los enfoques multivalentes (múltiples antígenos/múltiples epítopos) pueden ser superiores a los monovalentes en la inmunoterapia contra el cáncer, en términos de la especificidad de la respuesta inmune resultante. Varios estudios recientes detallan "cócteles de péptidos", utilizando una combinación de epítopos antigénicos conocidos, por ejemplo, de PSA, PSMA, PAP, PSCA (antígeno de células madre de próstata), en el caso del cáncer de próstata (Anguille et al., 2014, citado anteriormente). Dadas las respuestas inmunes humorales demostrables y mediadas por células dirigidas contra estos epítopos restringidos por HLA, se puede demostrar de manera convincente que se puede lograr una respuesta inmunológica "más amplia" con enfoques multivalentes que con los monovalentes. Aún queda por investigar si la respuesta específica de antígeno más amplia dará como resultado respuestas clínicas mayores que las observadas en enfoques de antígeno único.
Además de los enfoques de múltiples antígenos recombinantes, algunos investigadores han descrito la extracción de proteínas de tumores autólogos como una fuente de material de vacuna terapéutica de múltiples antígenos, en gran parte para la introducción en células dendríticas (Chang et al., 2002, Clinical Cancer Research: an official journal of the American Association for Cancer Research, 8, 1021-1032; Geiger et al., 2001, Cancer Research 61, 8513-8519). Aunque no se informa en la literatura sobre el cáncer de próstata, la muestra de tumor macroscópico reseccionado se puede usar como fuente de múltiples antígenos, después de la elución ácida, por ejemplo. El antígeno tumoral autólogo soluble así obtenido representa una rica fuente de material de vacuna para cargar, o pulsar, en células dendríticas y otras APC para estrategias de vacuna. Sin embargo, dada la naturaleza de la mayoría de los cánceres primarios y recurrentes en la próstata, en la que la resección selectiva del cáncer rara vez es factible dada su distribución a menudo difusa entre los elementos glandulares normales, este enfoque es difícil en la práctica cuando se trata de cáncer de próstata.
La vacunación de células enteras usando líneas celulares de cáncer de próstata atenuadas LNCaP y PC-3, transfectadas para secretar la citocina GM-CSF (GVAXMR, Cell GeneSysMR), ha sido objeto de un extenso estudio en los Estados Unidos (Small et al., 2007, Clinical Cancer Research: an official journal of the American Association for Cancer Research, 13, 3883-3891). Dado el amplio repertorio antigénico expresado por células de cáncer de próstata completas, se espera una respuesta inmune potencialmente robusta contra dicha vacuna terapéutica. Sin embargo, se desconoce el grado de homología antigénica entre las líneas celulares alogénicas mantenidas en laboratorio y los cánceres metastásicos clínicos y, por lo tanto, el grado de respuesta clínica que se espera puede variar ampliamente.
Por cualquier medio que se lleve a cabo la introducción del antígeno diana, el resultado deseado de la terapia con vacunas terapéuticas es el rechazo del tumor, y el mecanismo efector principal del rechazo del tumor es el brazo del sistema inmunológico mediado por células (células T). El reconocimiento del antígeno tumoral por la célula T es necesario para estimular una respuesta inmunitaria antitumoral. Este reconocimiento de antígeno por parte de las células T requiere la formación de un complejo compuesto por: 1) el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC); 2) el receptor de células T (TCR); y 3) un segmento corto de antígeno procesado intracelularmente encerrado en la molécula del MHC.
El inicio de las respuestas de las células T requiere la participación de células especializadas conocidas como células presentadoras de antígeno (APC). Las células dendríticas (DC) son las células presentadoras de antígeno más eficaces que se conocen. Las DC son células derivadas de la médula ósea que pueden fagocitar y procesar células o proteínas completas, migrar a los ganglios linfáticos y expresar altos niveles del MHC y moléculas coestimuladoras necesarias para la activación de las células T. Las Dc pueden agregar células T en su superficie. Son las únicas células presentadoras de antígeno que se sabe que son capaces de inducir respuestas primarias en células T sin modificación.
Las DC envían una señal en respuesta a la unión del TCR por el péptido antigénico incluido en el MHC, así como generan señales estimulantes que se requieren para completar la secuencia de activación. Estas señales coestimuladoras ocurren principalmente a través de las vías CD80/86:CD28 o CD40:CD40L. La activación de las células T requiere dos señales diferentes: (1) reconocimiento de antígeno/MHC por TCR y (2) señales coestimuladoras. En ausencia de estas señales coestimuladoras, la activación se interrumpe y la célula T se vuelve anérgica. Las DC son el vínculo eficiente y crítico que proporciona tanto señales para una respuesta eficaz entre el antígeno y la célula T como la provocación de la activación de una célula inmunitaria.
Tras la adquisición del antígeno y el desarrollo del fenotipo maduro, en el que las moléculas coestimuladoras se expresan al máximo, las DC desarrollan su capacidad para migrar a los ganglios linfáticos en los que generalmente se produce el contacto y la activación de las células T.
El objetivo final de la terapia con vacunas contra el cáncer es la administración de antígenos asociados a tumores en una población de APC de tal manera que se promueva la inducción eficaz de la respuesta de células T citotóxicas (CTL) contra las células tumorales que portan el o los antígenos diana. Como se mencionó anteriormente, se están realizando varios intentos para diseñar terapias con vacunas basadas en estos principios.
Dos ensayos clínicos que emplean DC como adyuvantes celulares en la terapia de vacunas del cáncer de próstata avanzado (Dendreon's Sipuleucel-T and Northwest Biotherapeutics' DC-VAX-Prostate) se han basado en DC cargadas con antígeno recombinante específico, PAP y PSMA, respectivamente, e indujeron a un fenotipo maduro antes de la administración intravenosa o intradérmica. Los resultados de estos y otros ensayos de inmunoterapia con DC han arrojado datos prometedores en cuanto a las respuestas inmunitarias específicas generadas, las respuestas clínicas observadas y la toxicidad mínima asociada con la terapia del cáncer de próstata metastásico (Higano et al., 2009, Cancer 115, 3670-3679; Quinn et al., 2014, Expert Review of Anticancer Therapy 14, 51-61; Ragde et al., 2004, The Journal of Urology 172, 2532-2538).
Un desarrollo controvertido, aunque cada vez más convincente, en el campo de la inmunología tumoral en los últimos años ha sido el reconocimiento de que el sistema inmunitario adaptativo, si bien es el mediador principal del rechazo tumoral, también puede desempeñar un papel protector en el crecimiento de cánceres humanos.
Las células T reguladoras (TReg) son un subconjunto de células T que tienen la capacidad de mediar en la supresión activa de otras células T. Las células TReg controlan negativamente la activación y función de las células T autorreactivas y mantienen la falta de respuesta o tolerancia a los antígenos propios. La anomalía en el número y la función de estas células puede ser una causa principal de enfermedades autoinmunes y otras enfermedades inflamatorias. Aunque gran parte de la atención inicial se centró en el papel de las células TReg en el control de la autorreactividad, existe una creciente evidencia de que las células TReg tienen un impacto significativo en la respuesta del huésped al cáncer.
En seres humanos sanos, la mayoría de las células TReg de origen natural son células T CD4+ que expresan constitutivamente un alto nivel de la molécula CD25 (cadena a del receptor de IL-2), que representa el 1-2% de la población de células T CD4+ circulantes en sangre. Además, la mayoría de estas células expresan de forma constitutiva otras moléculas tales como FOXP3, CTLA4 y GTIR (receptor del factor de necrosis tumoral inducido por glucocorticoides [TNF]) que están implicadas en los mecanismos de supresión de TReg. Los pacientes con cáncer tienen un número elevado de células TReg en la sangre periférica, los ganglios linfáticos y el microambiente tumoral, y las frecuencias altas de TReg se asocian con una supervivencia reducida. Estas células TReg pueden inhibir la activación de células T alogénicas y específicas de antígeno in vitro e in vivo. También se ha demostrado que las poblaciones de TReg CD4+ CD25+ aumentan más allá de los niveles basales después del agotamiento inicial antes de la terapia de vacunación contra el cáncer en modelos experimentales y en sujetos humanos. En ratones portadores de tumores, las células TReg CD4+ CD25+ suprimen la inmunidad específica de antígeno asociada al tumor. El agotamiento de las células TReg en estos ratones solos o en combinación con otros enfoques inmunoterapéuticos ha dado como resultado una mejor regresión y supervivencia del tumor.
En contraste con el enfoque adoptado por la vacuna Sipuleucel-T y otras vacunas terapéuticas anticancerosas basadas en DC, en las que las DC se exponen a un solo constituyente del cáncer diana, se dejan madurar ex vivo y, posteriormente, se infunden por vía intravenosa en el paciente; la presente invención se basa en parte en el principio de que las células cancerosas, debido a la característica del cáncer de inestabilidad genómica y aumento de la tasa de mutación, generarán neoantígenos tumorales, que se cree que representan una clase más eficaz de dianas antitumorales, y al exponer las DC inmaduras a dichos antígenos in situ (en las que dichos antígenos tendrán una estructura terciaria intacta y modificaciones postraduccionales) se generará una respuesta antitumoral más eficaz que se adaptará al tumor diana y, significativamente, a cualquier metástasis del mismo.
Esta estrategia tiene múltiples ventajas sobre los protocolos anteriores. Explota de forma inherente los neoantígenos tumorales y cualquier otro antígeno asociado al tumor de forma personalizada sin tener que depender de una secuenciación extensa de próxima generación y síntesis de péptidos basada en predicciones de epítopos basadas en ordenador. También se ocupa inherentemente del formidable desafío de la heterogeneidad de las células cancerosas causada por mutaciones y reprogramación transcripcional, ya que la respuesta inmune está dirigida contra cualquier célula tumoral presente, tanto en el tumor primario como en cualquier crecimiento secundario.
Además, el tejido sometido a extirpación muere en gran medida por la necrosis, y se cree que el tejido necrótico es favorable para la maduración eficaz de las DC y la presentación de (neo)antígenos y cebado de células T en comparación con el tejido vivo o las células apoptóticas, en parte debido a las citocinas proinflamatorias que se liberan (por ejemplo, TNFa TGFp, IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 e IL-18).
Los inventores han reconocido además el papel que juegan las células TReg en la amortiguación del desarrollo de la respuesta inmune antitumoral mediada por DC inmaduras expuestas a un tumor al menos parcialmente extirpado y han determinado que dicha respuesta inmune se mejoraría si un inhibidor del punto de control de la célula inmune se administra junto con las DC en el sitio del tumor extirpado. Además, las DC inmaduras pueden madurar en dos direcciones diferentes; una dirección es un papel en la tolerancia inmune a antígenos extraños, la otra dirección es un papel en la promoción de una respuesta inmune contra lo que se siente como "extraño". Se cree que la administración de un inhibidor del punto de control de las células inmunitarias desplaza el cambio de desarrollo de las DC de la tolerancia a una respuesta inmunitaria antitumoral. Sin embargo, no está claro en la técnica si el uso de DC junto con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias, por ejemplo, durante la coadministración local a un tumor al menos extirpado, tendría efectos tóxicos sobre las DC limitando así la eficacia de cualquier respuesta antitumoral. Los inventores han demostrado ahora que las DC no muestran vulnerabilidad a una alta concentración local de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias. Además, tampoco estaba claro en la técnica si la extirpación del tumor y la administración local de DC seguidas de la administración local de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias causarían un daño significativo al tejido circundante y, por lo tanto, darían lugar a efectos secundarios quirúrgicos adversos tales como infección, formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares. Los inventores han demostrado ahora que, sorprendentemente, la extirpación de tumores, por ejemplo, por crioextirpación, seguida por el uso local de DC junto con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias es sorprendentemente bien tolerado por los pacientes, mostrando niveles bajos de daño tisular circundante y, por lo tanto, casos sorprendentemente limitados de infección, formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares.
Más ventajosamente, al administrar localmente el inhibidor del punto de control de células inmunitarias en el sitio del tumor extirpado, se pueden usar dosis más bajas, minimizando así los efectos secundarios sistémicos asociados con la administración generalmente sistémica de estos agentes y reduciendo los costes. Dichos efectos secundarios adversos incluyen eventos adversos autoinmunes, por ejemplo, colitis autoinmune, hepatitis, uveítis, hipófisis y trastornos cutáneos autoinmunes. La administración local de dosis más bajas de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias también puede ayudar a asegurar que el bienestar general y la calidad de vida del sujeto que se somete al tratamiento sea lo más alto posible.
Por lo tanto, la invención es como se define en las reivindicaciones.
La invención proporciona un inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso junto con una célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y
(ii) el inhibidor del punto de control de células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas, o un precursor de las mismas, y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo.
Expresada de forma alternativa, la invención proporciona una célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, para su uso junto con un inhibidor del punto de control de células inmunitarias en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y
(ii) el inhibidor del punto de control de células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas, o un precursor de las mismas, y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo.
Alternativamente, la invención proporciona una célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y un inhibidor del punto de control de células inmunitarias para usar juntos en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y
(ii) el inhibidor del punto de control de células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas, o un precursor de las mismas, y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo.
El uso de una célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y/o un inhibidor del punto de control de células inmunitarias (según corresponda) en la fabricación de un producto médico o terapéutico (por ejemplo, un medicamento) para los usos mencionados anteriormente también es contemplado explícitamente.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un producto que contiene una célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y un inhibidor del punto de control de células inmunitarias como preparación combinada para uso separado, simultáneo o secuencial en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga, o un precursor de la misma, y
(ii) el inhibidor del punto de control de células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas, o un precursor de las mismas, y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo.
Un "punto de control de células inmunitarias", o en términos más generales, un "punto de control inmunitario", es una vía de señalización celular dentro de las células del sistema inmunológico que regula negativamente el sistema inmunológico de alguna manera. Normalmente, dicha señalización implica una interacción receptor-ligando en la superficie de la célula inmunitaria, normalmente una interacción entre un receptor localizado en la superficie celular en una célula y un ligando localizado en la superficie celular en otra célula. La señalización a través de estas vías puede resultar en una supresión general del sistema inmunológico o puede suprimir una respuesta inmunitaria específica. En consecuencia, se verá inmediatamente que los puntos de control de las células inmunitarias son cruciales para mantener la autotolerancia y para modular la duración y amplitud de las respuestas inmunes a los antígenos extraños con el fin de minimizar el daño tisular colateral.
Se considera que las células inmunitarias son leucocitos, por ejemplo, los fagocitos (por ejemplo, monocitos, macrófagos, neutrófilos, DC, mastocitos), los linfocitos (por ejemplo, células asesinas naturales (NK), células T y células B), eosinófilos y basófilos. Las células B pueden ser, por ejemplo, células B plasmáticas o células B de memoria. Las células T pueden ser, por ejemplo, células T reguladoras (TReg), células T efectoras (por ejemplo, células T cooperadoras (Th), células T citotóxicas (Tc, linfocitos T citotóxicos, células T CD8+)), células T de memoria, células T asesinas naturales, células T invariantes asociadas a la mucosa y células T delta gamma.
En determinadas realizaciones, el punto de control de las células inmunitarias que es inhibido por el inhibidor de uso en la invención comprende una vía de transducción de señales de una célula T, preferiblemente una célula Tc o una célula TReg. En tales realizaciones, el inhibidor del punto de control de células inmunitarias puede describirse como un inhibidor de un punto de control inmunológico de células T o un inhibidor de la señalización de células T inmunoinhibidoras (transducción de señales). Preferiblemente, tales vías de transducción de señales de células T inhibidoras son aquellas que se activan tras la unión del receptor localizado en la superficie de la célula T y un ligando localizado en la superficie de una célula presentadora de antígeno, por ejemplo, una DC.
Los pares de ligando y receptor de punto de control de células inmunitarias conocidos incluyen, pero no se limitan a, antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA4 (CD152)) y CD80 (B7.1) o CD86 (B7.2); proteína 1 de muerte celular programada (PD1 (CD279)) y ligando 1 o 2 de PD1 (PDL1 (B7-H1; CD274) o PDL2 (B7-DC; CD273)); atenuador de linfocitos B y T (Bt LA (CD272)) y mediador de entrada del virus del herpes (Hv EM (TNFRSF14)); receptor de tipo inmunoglobulina de células asesinas (KIR) y MHC de clase I o II; gen de activación de linfocitos 3 (LAG3 (CD223)) y complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I o II; proteína 3 de membrana de células T (TIM3 (HAVcr2)) y galectina 9 (GAL9); y receptor de adenosina A2a (A2aR) y adenosina. Otros ligandos de puntos de control de células inmunitarias conocidos incluyen, pero no se limitan a, B7-H3 (CD276) y B7-H4 (B7-S1, B7x y VCTN1). Las identidades de los receptores de estos ligandos no están claras. Otros receptores de puntos de control de células inmunitarias conocidos incluyen, pero no se limitan a, 2B4 (CD244). La identidad del ligando o ligandos para este receptor no está clara.
Un inhibidor de punto de control de células inmunitarias es un agente que inhibe (combate, reduce, anula, previene o elimina) la transducción de señales a través de una o más de las vías anteriores y, por lo tanto, combate (por ejemplo, inhibe, reduce, anula, previene, revierte o elimina) los efectos supresores de uno o más de dichos puntos de control inmunitarios sobre el sistema inmunológico. En realizaciones particulares, el inhibidor del punto de control de células inmunitarias es un agente que combate las actividades de las células TReg o aumenta (potencia, estimula, incrementa) las actividades de las células Tc sobre la respuesta inmunitaria inducida por las células dendríticas inmaduras autólogas que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención.
La actividad de las células TReg y Tc se puede medir mediante cualquier medio conveniente, por ejemplo, los descritos en detalle en Kolstad A. et al, 2015, Blood, 125 (1) 82-89 y Olson Bm y McNeel DG, 2013, Frontiers in Oncology, Vol 3, Artículo 109, a cuyo contenido se hace referencia en este documento. En determinadas realizaciones, la actividad puede determinarse por referencia al número y las tasas de proliferación de dichas células, por ejemplo, en respuesta a la estimulación antigénica. Por lo tanto, los efectos de un inhibidor del punto de control de las células inmunitarias, en determinadas realizaciones, pueden evaluarse determinando la actividad de las células TReg y Tc (por ejemplo, el número de las mismas o la tasa de proliferación de las mismas después de la estimulación antigénica) en presencia y ausencia del inhibidor putativo.
El mecanismo por el cual el inhibidor ejerce tales efectos no está limitado y, por lo tanto, la inhibición puede tener lugar en cualquier punto de dichas vías, por ejemplo, en la superficie celular al nivel del receptor/ligando, al nivel de la transcripción y traducción del gen resultante o al nivel de la cascada de señalización intermedia.
En determinadas realizaciones, el inhibidor interfiere con la interacción entre al menos un ligando de punto de control inmunitario y su receptor, por ejemplo, los descritos anteriormente. Esta interferencia puede ocurrir por cualquier medio, por ejemplo, mediante el bloqueo de la interacción, mediante la interrupción de la interacción o mediante el agotamiento de la reserva de ligando y/o receptor en la superficie celular. Estos efectos se pueden lograr, por ejemplo, con antagonistas de moléculas pequeñas que bloquean los sitios de unión relevantes, de manera competitiva o no competitiva, o macromoléculas interactivas más grandes que se unen al ligando y/o al receptor y dificultan su interacción, por ejemplo, ocupando o enmascarando los sitios de enlace relevantes. Otros mecanismos incluyen aquellos que reducen la cantidad de receptor o ligando en la superficie celular, por ejemplo técnicas de eliminación o inactivación o silenciamiento de genes y técnicas de interferencia de ARN (oligonucleótidos antisentido, miARN, ARNip).
En realizaciones preferidas, el inhibidor es un reactivo de una macromolécula de afinidad, por ejemplo, inmunoafinidad, que se une, preferiblemente de manera específica y con alta afinidad, al menos a un ligando de punto de control inmunitario y/o su receptor y cuya unión a su sitio de unión diana interfiere con (inhibe, reduce, anula, previene, revierte o elimina) la interacción entre el receptor y su ligando.
El reactivo de macromolécula de afinidad (o inmunoafinidad) puede ser una proteína. En determinadas realizaciones, dicha proteína de afinidad puede comprender una porción de la secuencia de aminoácidos de un ligando o receptor de punto de control, por ejemplo, una porción que comprende las regiones de aminoácidos implicadas en la interacción de unión entre dicho ligando o receptor y el miembro opuesto del par de unión correspondiente. En estas realizaciones, la porción puede describirse como una porción aislada porque la proteína de afinidad no comprende la secuencia de aminoácidos de longitud completa, o esencialmente toda, sustancialmente toda o la mayoría, de la secuencia de aminoácidos de longitud completa del ligando o receptor de la cual se deriva dicha porción. En determinadas realizaciones, esta proteína de afinidad (interactiva) puede ser una proteína de fusión que comprende dicha porción de la secuencia de aminoácidos y una o más secuencias de aminoácidos que son heterólogas al ligando o receptor del que se deriva dicha porción. Dichas secuencias de aminoácidos heterólogas pueden ser secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina (anticuerpo), por ejemplo, secuencia de aminoácidos de las inmunoglobulinas enumeradas a continuación. Dichas secuencias de aminoácidos heterólogas serán preferiblemente no inmunogénicas o mínimamente inmunogénicas.
En otras realizaciones, dicha proteína de inmunoafinidad puede ser un anticuerpo (por ejemplo, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, IgY, IgW) o un fragmento de unión a antígeno del mismo (por ejemplo, CDR, regiones Fv, Fab o Fc), un anticuerpo de presentación en fagos o un mimético de anticuerpo (por ejemplo, un aficuerpo, una afilina, un afímero, una afitina, un cuerpo alfa, una anticalina, un avímero, una DARPina, un finómero, un péptido de dominio de Kunitz, un anticuerpo de dominio, un nanocuerpo, un unicuerpo, duocalinas, un versacuerpo o un monocuerpo).
El término "anticuerpo" como se usa en este documento se refiere a un péptido o polipéptido derivado, modelado o sustancialmente codificado por un gen de inmunoglobulina o genes de inmunoglobulina, o fragmentos de los mismos, capaces de unirse específicamente a un antígeno o epítopo. Véase, por ejemplo, Fundamental Immunology, tercera edición, W.E. Paul, editor, Raven Press, Nueva York (1993); Wilson (1994) J. Immunol. Methods 175: 267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25: 85-97. El término anticuerpo incluye porciones que se unen al antígeno, es decir, "sitios de unión al antígeno" (por ejemplo, fragmentos, subsecuencias, regiones determinantes de complementariedad (CDR)) que retienen la capacidad de unirse al antígeno, incluido (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consta de los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consta de los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), que consta de un dominio VH; y (vi) una región determinante de complementariedad (CDR) aislada. Los anticuerpos monocatenarios también se incluyen como referencia en el término "anticuerpo". Los anticuerpos de la invención incluyen, entre otros, anticuerpos policlonales, monoclonales, biespecíficos, humanizados o quiméricos, anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab y fragmentos F(ab')2, fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id) y fragmentos de unión a epítopo de cualquiera de los anteriores. Las moléculas de inmunoglobulina de la invención pueden ser de cualquier clase (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, IgY e IgW) o subclase de molécula de inmunoglobulina.
Los términos "se une específicamente" o "específicamente se une" (o "se une inmunoespecíficamente") no pretenden indicar que un anticuerpo (u otro reactivo de macromolécula de afinidad) se une exclusivamente a su diana pretendida, aunque esto no está excluido y sería preferido. Más bien, un reactivo de macromolécula de afinidad "se une específicamente" si su afinidad por su diana pretendida es típicamente aproximadamente 5 veces mayor en comparación con su afinidad por una molécula no diana. De manera adecuada, no hay una reacción cruzada o unión cruzada significativa con sustancias no deseadas, especialmente proteínas de origen natural de un ser humano o animal sano que no son expresadas por el tumor. Preferiblemente, la afinidad del reactivo de macromoléculas de afinidad será al menos aproximadamente 5 veces, preferiblemente 10 veces, más preferiblemente 25 veces, incluso más preferiblemente 50 veces, y lo más preferiblemente 100 veces o más, mayor para una molécula diana que su afinidad por una molécula no diana. En algunas realizaciones, la unión entre un reactivo de macromolécula de afinidad y su diana (por ejemplo, un anticuerpo y su epítopo en un antígeno) puede tener una afinidad de unión "alta" de al menos 106 M-1, por ejemplo, al menos aproximadamente 107 M-1, y preferiblemente entre aproximadamente 108 M'1 hasta aproximadamente 109 M-1, aproximadamente 109 M_1 hasta aproximadamente 1010 M-1, o aproximadamente 1010 M_1 hasta aproximadamente 1011 M-1.
La afinidad se calcula como Kd = kdisociación/kasociación (kdisociación es la constante de velocidad de disociación, kasociación es la constante de velocidad de asociación y Kd es la constante de equilibrio. La afinidad se puede determinar en el equilibrio midiendo la fracción unida (r) del ligando marcado a varias concentraciones (c). Los datos se grafican utilizando la ecuación de Scatchard: r/c = K(n-r):
en la que
r = moles del ligando unido/mol del receptor en equilibrio;
c = concentración del ligando libre en equilibrio;
K = constante de asociación en equilibrio; y
n = número de sitios de unión de ligandos por molécula receptora.
Mediante análisis gráfico, r/c se representa en el eje Y frente a r en el eje X, lo que produce un gráfico de Scatchard. La afinidad es la pendiente negativa de la línea. kdisociación se puede determinar mediante competición del ligando marcado unido con el ligando en exceso no marcado (véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No.
6.316.409). La medición de la afinidad del anticuerpo mediante análisis de Scatchard es bien conocida en la técnica, véase, por ejemplo, van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991; Nelson y Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988.
En determinadas realizaciones, los anticuerpos de uso en la invención son anticuerpos monoclonales, por ejemplo, IgG, que se une, preferiblemente de manera específica y con alta afinidad, al menos a un ligando de punto de control inmunitario y/o su receptor y cuya unión a su sitio de unión diana (epítopo) interfiere con la interacción entre el receptor y su ligando.
En realizaciones preferidas, al menos un ligando de punto de control inmunitario y/o su receptor al cual se dirigen los reactivos de macromoléculas de afinidad (por ejemplo, anticuerpos) de uso en la invención (es decir, se unen) se seleccionan de CTLA4, CD80, CD86, PD1, PDL1, PDL2, LAG3, B7-H3, B7-H4 o TIM3, preferiblemente CTLA4, PD1, PDL1, LAG3 o B7-H3, más preferiblemente CTLA4 o PD1.
En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control inmunitario se puede seleccionar entre ipilimumab (anti-CTLA4), tremelimumab (anti-CTLA4), MDX-1106 (también conocido como BMS-936558 y nivolumab; anticuerpo anti-PD1), MK3475 (también conocido como pembrolizumab; anticuerpo anti-PD1), CT-011 (anticuerpo anti-PD1), AMP-224 (proteína de fusión anti-PD1, proteína de fusión PDL2-Ig), MDX-1105 (anticuerpo anti-PDL1), RG7446 (anticuerpo anti-PDL1), BMS-936559 (anticuerpo anti-PDL1), MGA271 (anticuerpo anti-B7-H3), atezolizumab (también conocido como MPDL3280A; anticuerpo anti-PDL1), avelumab (también conocido como MSB0010718C; anticuerpo anti-PDL1) y durvalumab (anticuerpo anti-PDL1).
En otras realizaciones, puede ser ventajoso administrar más de un inhibidor de puntos de control y, en particular, una pluralidad de inhibidores de puntos de control que juntos inhiben al menos dos puntos de control, por ejemplo, dos o más de los puntos de control de células inmunitarias enumerados anteriormente, por ejemplo, dos o más de CTLA4, CD80, CD86, PD1, PDL1, PDL2, LAG3, B7-H3, B7-H4 o TIM3, preferiblemente dos o más de CTLA4, PD1, PDL1, LAG3 o B7-H3, más preferiblemente al menos CTLA4 y PD1.
Las dosis adecuadas del inhibidor del punto de control de las células inmunitarias pueden variar entre los sujetos y el experto en la materia puede determinarlas sin una carga indebida en función de las características físicas del sujeto, las características del tumor, las características farmacocinéticas del inhibidor y/o mediante el seguimiento de la actividad de células TReg y/o Tc del sujeto, por ejemplo, como se discutió anteriormente, o indicadores clínicos generales como se discute a continuación.
En el caso particular de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias basados en anticuerpos, por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA o un anticuerpo anti-PD1, por ejemplo, ipilimumab y tremelimumab, las dosis adecuadas para la administración localizada en el sitio si el tumor extirpado o porción del mismo pueden ser de 0,01 a 3 mg/kg, por ejemplo, 0,01 a 2 mg/kg, 0,01 a 1,5 mg/kg, 0,01 a 1,2, mg/kg, 0,01 a 1 mg/kg, 0,01 a 0,9 mg/kg, 0,01 a 0,8 mg/kg, 0,01 a 0,7 mg/kg, 0,01 a 0,6 mg/kg, 0,01 a 0,5 mg/kg, 0,01 a 0,4 mg/kg, 0,01 a 0,3 mg/kg, 0,01 a 0,2 mg/kg, 0,01 a 0,1 mg/kg, 0,01 a 0,05 mg/kg, 0,01 a 0,02 mg/kg, 0,02 a 3 mg/kg, 0,05 a 3 mg/kg, 0,1 a 3 mg/kg, 0,2 a 3 mg/kg, 0,3 a 3 mg/kg, 0,4 a 3 mg/kg, 0,5 a 3 mg/kg, 0,6 a 3 mg/kg, 0,7 a 3 mg/kg, 0,8 a 3 mg/kg, 0,9 a 3 mg/kg, 1 a 3 mg/kg, 1,2 a 3 mg/kg, 1,5 a 3 mg/kg o 2 a 3 mg/kg, 0,1 a 1 mg/kg, 0,2 a 0,9 mg/kg, 0,3 a 0,8 mg/kg, 0,4 a 0,7 mg/kg, 0,5 a 0,6 mg/kg, 0,2 a 0,7 mg/kg, o de 0,3 a 0,6 mg/kg. Las dosis de aproximadamente 0,3 mg/kg, por ejemplo, 0,1 a 0,5 mg/kg, 0,2 a 0,4 mg/kg o 0,25 a 0,35 mg/kg, o aproximadamente 0,6 mg/kg, por ejemplo, 0,4 a 0,8 mg/kg, 0,5 a 0,7 mg/kg o 0,55 a 0,65 mg/kg pueden ser ventajosas. Se contempla explícitamente cualquier intervalo que pueda formarse a partir de los puntos finales de intervalo enumerados anteriormente. Estas dosis se pueden administrar como una dosis única, por ejemplo, al mismo o sustancialmente al mismo tiempo que se administran las DC, o pueden repetirse a lo largo del tiempo, en cuyo caso las dosis anteriores pueden considerarse como dosis diarias totales, dosis semanales totales, dosis totales cada dos semanas o dosis totales cada tres semanas. Si se administra repetidamente, lo anterior se puede administrar como una dosis única una vez cada una, dos o tres semanas.
El inhibidor del punto de control de células inmunitarias se administra localmente en el sitio del tumor extirpado o en una porción del mismo mediante cualquier medio conveniente y de rutina disponible en la técnica y típicamente en forma de una composición que comprende dicho inhibidor, por ejemplo, los descritos en detalle a continuación. Normalmente, esto implicará la administración local (o "administración localizada", términos que se usan indistintamente) del inhibidor del punto de control de células inmunitarias a dicho sitio o su vecindad inmediata, es decir, sin administración o difusión del fármaco más allá de esa vecindad, por ejemplo, como se vería después de la administración sistémica. Expresado de forma alternativa, la administración local significa que las cantidades eficaces del inhibidor del punto de control de las células inmunitarias están restringidas al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o la vecindad inmediata. La "vecindad inmediata" es el volumen de espacio desde el cual el inhibidor del punto de control de células inmunitarias es capaz de ejercer un efecto inmunoterapéutico de acuerdo con la invención después de la administración local. Esto puede expresarse además como el volumen de espacio que rodea inmediatamente el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. Preferiblemente, el inhibidor del punto de control de células inmunitarias se administra (o sus efectos se restringen a) el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. Una realización específica de tal administración puede describirse como administración intratumoral. En estas realizaciones, la administración es preferiblemente directamente al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o su vecindad inmediata, es decir, no a través de un vaso sanguíneo que está conectado o que conduce al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o su vecindad inmediata. En determinadas realizaciones, el sujeto no recibirá un inhibidor del punto de control de las células inmunitarias por administración sistémica o no experimentará una exposición sistémica, o al menos distribuida, a un inhibidor del punto de control de las células inmunitarias junto con las DC durante su administración de acuerdo con la invención, o durante el curso de su tratamiento de acuerdo con la invención. En otras realizaciones, la administración local de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias junto con las DC, como se describió anteriormente, va seguida de una o más administraciones sistémicas de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias, por ejemplo, al menos un mes después de la administración final de las DC.
Una "célula dendrítica" (DC) es una célula presentadora de antígeno (APC) con una morfología característica que incluye lamelipodios que se extienden desde el cuerpo de la célula dendrítica en varias direcciones. Las células dendríticas pueden iniciar respuestas primarias de células T específicas de antígeno tanto in vitro como in vivo, y dirigir una fuerte reacción mixta de leucocitos (MLR) en comparación con leucocitos de sangre periférica, esplenocitos, células B y monocitos. Las DC pueden derivarse de varias células precursoras hematopoyéticas diferentes. Para obtener una descripción general de las células dendríticas, incluida su diferenciación y maduración, véase, por ejemplo, Steinman, Annu Rev Immunol. 9: 271-96 (1991), y Lotze y Thomson, Dendritic Cells, 2a edición, Academic Press, 2001.
Una DC "inmadura" de uso de acuerdo con la invención es una DC que no presenta antígenos, en particular una DC que no ha sido expuesta a material que puede presentar la DC. Por lo tanto, en determinadas realizaciones, las DC inmaduras pueden estar en proceso de maduración pero no han comenzado a presentar los antígenos que ha encontrado. En cada contexto, la DC puede o no haber estado expuesta a factores de maduración de DC, por ejemplo, medios condicionados por monocitos (MCM), LPS del TNF-a, IL1-p y bacilo de Calmette Guerin (BCG), opcionalmente en combinación con otros factores tales como prostaglandina-E2 (PGE2), péptido intestinal vasoactivo, poli-dldC, así como componentes de la pared celular micobacteriana.
Más específicamente, una DC inmadura es una DC en la que esencialmente o sustancialmente no hay expresión de (es decir, niveles bajos de expresión de) cada uno de los siguientes: el marcador de DC maduras CD83, las moléculas coestimuladoras CD40, CD80 y CD86 y/o la molécula presentadora de Ag del MHC de clase I1HLA-DR (Vieira et al., J. Immunol. 184: 4507-4512 (2000)). En otras realizaciones, una DC inmadura es una DC que no expresa, o expresa esencialmente o sustancialmente ninguno de (es decir, niveles bajos de expresión de), uno o más de los anteriores, especialmente CD83. En realizaciones adicionales, una DC inmadura es una DC que tampoco expresa todos los TNFa, TGFp, IL-1, IL-6, IL-10 e IL-18m. En otras realizaciones más, una DC inmadura es una DC que tampoco expresa TNFa, TGFp, IL-1, IL-6, IL-10 e IL-18m. En realizaciones más detalladas, una DC inmadura tampoco expresará CD14, CD3, CD19, CD16+CD56 y CD66b.
Las DC inmaduras autólogas para su uso de acuerdo con la presente invención pueden prepararse mediante cualquier medio conveniente y rutinario disponible en la técnica.
Las DC pueden, por ejemplo, purificarse a partir de sangre completa, plasma o muestras que contienen leucocitos (por ejemplo, células mononucleares) mediante la eliminación de otras poblaciones de células definidas, por ejemplo, eritrocitos, linfocitos T y B, células asesinas naturales y monocitos, mediante el uso de anticuerpos y perlas magnéticas, paneo o un clasificador de células (Banchereau y Steinman, Nature 392: 245 (1998); Freundenthal y Steinman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 7698 (1990); Steinman, Annu. Rev. Immunol. 9: 271 (1991)).
Sin embargo, puede ser más conveniente y proporcionar una mayor certeza de obtener DC inmaduras preparar las DC de uso en la invención a partir de sus células precursoras (o células progenitoras, términos que se usan indistintamente). Por ejemplo, los monocitos se encuentran entre los precursores de DC más abundantes en sangre y pueden diferenciarse en DC in vitro en presencia del factor estimulante de colonias de macrófagos y granulocitos (GM-CSF) y una o más citocinas adicionales seleccionadas de IL-4, IL-7, IL-13 e IFN-a. Los métodos para la diferenciación in vitro de monocitos en DC en un medio que incluye GM-CSF, IL-4 y TNF-a se describen en la patente de los Estados unidos No. 5849589. El uso de IL-7 para inducir la diferenciación de monocitos y la maduración de DC ha sido descrito, por ejemplo, por Fry y Mackall, Blood 99: 3892-3904 (2002); Li et al., Scand. J. Immunol. 51: 361-371 (2000) y Takahashi, et al., Human Immunol. 55: 103-116 (1997). Las combinaciones de GM-CSF con al menos IL-4 o IFN-a pueden ser ventajosas.
Otras células precursoras de DC incluyen, pero no se limitan a, macrófagos y progenitores de DC (MDP), progenitores de DC comunes (CDP), progenitores mieloides comunes (CMP); progenitor de granulocitos y macrófagos (GMP); y células madre hematopoyéticas (HSC), en particular HSC CD34+. Sin embargo, en determinadas realizaciones, el precursor no es una célula madre embrionaria (humana o no humana) ni derivada de un embrión (humano o no humano). En otras realizaciones, el precursor no es una célula madre (humana o no humana).
Los precursores de DC, incluidos los mencionados anteriormente, se pueden aislar mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica, que incluyen siembra en placa, separación en perlas magnéticas, la filtración tangencial en gel o el uso del sistema de separación de células ElutraMR (Gambro BCT, Lakewood, Colo., EE. UU.) e identificados mediante el análisis de patrones de expresión bien establecidos y caracterizados de marcadores de superficie celular. La diferenciación in vitro de tales células en DC inmaduras está bien establecida y se describe en detalle en la técnica y, como tal, es completamente rutinaria.
En determinadas realizaciones, la técnica utilizada para inducir la diferenciación de DC no incluye una etapa de maduración separada en la que las DC o sus precursores, por ejemplo, monocitos, se incuban en presencia de un factor de maduración (por ejemplo, medio acondicionado de monocitos, LPS, TNF-a, IL1-p y bacillus calmette guerrin (BCG)).
Una vez que se ha preparado una población de DC, preferiblemente una población en número suficiente para permitir la administración al sujeto de acuerdo con la invención, la población puede crioconservarse y almacenarse lista para su administración.
En determinadas realizaciones, puede ser ventajoso poner en contacto las DC inmaduras con IFN-y antes de la administración. Se ha demostrado que las DC inmaduras tratadas con IFN-y son más efectivas en la secreción de IL-12 y otras citocinas proinflamatorias, durante interacciones posteriores de cebado de células T que a su vez conduce a una respuesta inmune más robusta al antígeno presentado por las DC. El contacto entre las DC inmaduras y el IFN-Y puede ocurrir en cualquier momento antes de la maduración y la presentación del antígeno, por ejemplo, durante o inmediatamente después de que se administre al sujeto la DC inmadura, inmediatamente antes de la administración, antes de la crioconservación o durante o después de la descongelación o después de la maduración de un precursor.
En una realización particular, la preparación de las DC inmaduras autólogos o monocitos de uso de acuerdo con la invención puede implicar (i) leucaféresis del sujeto para aislar leucocitos o células mononucleares de la sangre del sujeto y/o aislar monocitos de la sangre del sujeto, (ii) opcionalmente, aislamiento de monocitos de los leucocitos aislados o células mononucleares de (i), y (iii) opcionalmente cultivar de dichos monocitos en condiciones que permitan la diferenciación de las DC de los mismos (sin una etapa de maduración separada). En otras realizaciones, el método implica además (iv) el aislamiento de las DC inmaduras del cultivo y, opcionalmente, (v) la crioconservación de dichas DC inmaduras autólogas.
En las realizaciones en las que se usa leucaféresis para aislar monocitos de un sujeto y dichos monocitos se diferencian en DC inmaduras, puede ser ventajoso realizar la leucaféresis aproximadamente de 7 a 28 días, por ejemplo, aproximadamente 7-25 días, 7-21 días, 7-18 días, 7-14 días, 7-10 días, 10-28 días, 10-25 días, 10-21 días, 10-18 días, 10-14 días, 14-28 días, 14-25 días, 14-21 días o 14-18 días, preferiblemente alrededor de 14-21 días antes de que se administren las DC al sujeto.
En realizaciones más específicas, las DC inmaduras están en contacto con IFN-y en una cantidad suficiente y durante el tiempo suficiente para potenciar la secreción de citocinas proinflamatorias durante el tratamiento de cebado de células T. El método de la invención divulgado en este documento puede incluir algunas o todas estas etapas. En los ejemplos siguientes se proporcionan protocolos particulares para realizar estas etapas, sin embargo, se conocen otros protocolos en la técnica y pueden usarse. En estas realizaciones, "aislado" se refiere al hecho de separar la célula diana de esencialmente todos los demás componentes celulares y preferiblemente derivados de células, constituyentes de la muestra a partir de la cual se produce el aislamiento.
Las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas se administran localmente en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo mediante cualquier medio conveniente y/o rutinario disponible en la técnica y típicamente en forma de una composición que comprende dichas células, por ejemplo, los descritos en detalle a continuación. Normalmente, esto implicará la administración local (o "administración localizada", términos que se usan indistintamente) de las DC o precursores de las mismas a dicho sitio o su vecindad inmediata, es decir, sin administración más allá de esa vecindad, por ejemplo, administración sistémica. Expresado de forma alternativa, la administración local significa que cantidades eficaces de las DC o precursores de las mismas están, al menos inicialmente, restringidas al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o su vecindad inmediata. La "vecindad inmediata" es el volumen de espacio desde el cual las DC o sus precursores son capaces de ejercer un efecto inmunoterapéutico de acuerdo con la invención después de la administración local. Esto puede expresarse además como el volumen de espacio que rodea inmediatamente el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. Preferiblemente, las DC o precursores de las mismas se administran (o sus efectos se restringen inicialmente a) el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. Una realización específica de tal administración puede describirse como administración intratumoral. En estas realizaciones, la administración es preferiblemente directamente al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o su vecindad inmediata, es decir, no a través de un vaso sanguíneo que está conectado o que conduce al sitio del tumor extirpado o porción del mismo o su vecindad inmediata.
La cantidad de células administradas puede variar entre sujetos y puede ser determinada por el experto en la materia sin una carga indebida en función de las características físicas del sujeto, las características del tumor, las características de las células que se van a administrar y/o mediante el seguimiento de la respuesta inmune del sujeto contra el tumor, por ejemplo, como se analiza en este documento, o indicadores clínicos generales como se analiza a continuación.
En determinadas realizaciones, se puede encontrar que es eficaz la administración de un total de 106 a 109 células, por ejemplo, 5x106 a 109 células, 107 a 109 células, 5x107 a 109 células, 108 a 109 células, 5x108 a 109 células, 106 a 5x108 células, 106 a 108 células, 106 a 5x107 células, 106 a 107 células o 106 a 5x106 células, localmente en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. En otras realizaciones, se puede encontrar que es eficaz la administración de un total de aproximadamente 7,5 x 107 células, por ejemplo, 107 a 5x108 células, 2,5x107 células a 2,5x108 células, 5x107 a 108 células o 7x107 a 8x107 células, localmente a el sitio del tumor extirpado o porción del mismo. Se contempla explícitamente cualquier intervalo que pueda formarse a partir de los puntos finales del intervalo enumerados anteriormente. Estas dosis se pueden administrar como una dosis única, por ejemplo, al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo que se administra el inhibidor del punto de control de células inmunitarias, o puede repetirse con el tiempo, en cuyo caso las dosis anteriores pueden considerarse como dosis diarias totales, dosis totales semanales, dosis totales de dos semanas o dosis totales de tres semanas. Si se administra repetidamente, lo anterior se puede administrar como una dosis única una vez cada una, dos o tres semanas.
Puede ser ventajoso administrar las DC inmaduras autólogas o sus precursores inmediatamente después de que tenga lugar la extirpación del tumor, por ejemplo, dentro de los 5 minutos de la extirpación, o dentro de los 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos de la extirpación, por ejemplo, debido a la necesidad de minimizar el tiempo de operación, para minimizar los resultados adversos del procedimiento y por razones de mayor eficacia. Normalmente, en el contexto de los procedimientos de extirpación que inducen cambios de temperatura significativos en el tumor y el tejido circundante (por ejemplo, crioextirpación), se permitirá que el área tratada vuelva a la temperatura corporal normal antes de que se administren las DC. En otras realizaciones, puede haber un mayor tiempo entre la extirpación y la administración de las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas.
En estas realizaciones, puede ser posible programar la administración de las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas para que coincida con la mayor biodisponibilidad de los antígenos específicos del cáncer para asegurar la mayor captación y presentación de antígenos específicos del cáncer por las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas.
De acuerdo con la invención, la biodisponibilidad de los antígenos se puede controlar usando cualquier formato de ensayo adecuado para detectar un antígeno particular asociado a un tumor o un grupo de antígenos y los niveles del mismo (por ejemplo, en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo, o en las proximidades de dicho sitio, o en tejido circundante o en fluido corporal tal como sangre y linfa). Los métodos adecuados de detección de antígenos incluyen, sin limitación, inmunoensayos, que pueden estar en formato ELISA, ensayos de quimioluminiscencia basados en anticuerpos y ensayos que miden la bioactividad de un antígeno tumoral diana. Se conocen biomarcadores adecuados para un cáncer diana o se pueden determinar para cada sujeto. No debería ser necesario en todos los casos medir los antígenos precisos que se consideran de mayor relevancia para un tratamiento en particular, ya que la liberación de todos los antígenos después de la extirpación debería ser proporcional y la persona experta solo necesita controlar el aumento en los niveles de antígenos en general para determinar cuándo administrar las DC inmaduras autólogas o sus precursores.
El transcurso de tiempo y el patrón de administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas en relación entre sí, es decir, su "uso junto" o "junto con" entre sí no está restringido. Por lo tanto, el inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención puede administrarse convenientemente antes, simultáneamente con o después de las DC (término que, en aras de la brevedad, incluye una referencia a las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas de uso en la invención). Convenientemente, el inhibidor se aplica sustancialmente al mismo tiempo que las DC o posteriormente. En otras realizaciones, el inhibidor puede aplicarse o administrarse convenientemente antes que las Dc .
Por "usar juntos" o "junto con" se entiende particularmente que una cantidad eficaz del inhibidor del punto de control de las células inmunitarias y una cantidad eficaz de las DC se administran/aplican de una manera que da como resultado poner en contacto el inhibidor y las CD con el sitio del tumor extirpado o porción del mismo al mismo tiempo, o sustancialmente en el mismo momento, o las DC que se ponen en contacto con el lugar del tumor extirpado o porción del mismo antes del inhibidor.
En ciertas realizaciones, el inhibidor puede suministrarse (por ejemplo, administrarse o entregarse) repetidamente en puntos de tiempo apropiados para el agente o agentes usados o las DC pueden suministrarse (por ejemplo, administrarse o entregarse) repetidamente en puntos de tiempo apropiados. En tratamientos a largo plazo, tanto el inhibidor como las DC pueden usarse repetidamente. El inhibidor se puede aplicar con tanta frecuencia como las DC, o con mayor o menor frecuencia. El experto en la materia puede idear un régimen de dosificación adecuado. Puede ser ventajoso en estas realizaciones que la primera o única administración de DC sea antes de la primera administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias.
Por lo tanto, se observará que el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias puede aplicarse o administrarse simultáneamente con las DC o de forma secuencial. Como se indicó anteriormente, en una realización, el inhibidor se administra al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo que las DC, y en otra realización se administra después de las DC. En otras realizaciones, sin embargo, las DC se administran por separado al inhibidor y después. Dentro del alcance de "sustancialmente al mismo tiempo" está la aplicación o administración de las DC inmediatamente o casi inmediatamente antes o después del inhibidor. Se puede leer que el término "casi inmediatamente" incluye la aplicación o administración dentro de una hora de la aplicación o administración anterior, preferiblemente dentro de los 30 minutos. Sin embargo, el inhibidor se puede aplicar o administrar al menos 1 hora, al menos 3 horas o al menos 6 horas o más después de las DC. En estas realizaciones, el inhibidor se puede aplicar o administrar con o sin una aplicación adicional de DC. Las DC también se pueden aplicar o administrar en una pluralidad de aplicaciones antes o con el inhibidor, incluyendo, como se indicó anteriormente, una aplicación o administración inmediatamente con o casi inmediatamente después del inhibidor. En otras realizaciones, el inhibidor puede aplicarse o administrarse convenientemente antes que las DC, por ejemplo, al menos 1 hora, al menos 3 horas, al menos 6 horas antes de las DC. En estas realizaciones, las DC se pueden aplicar o administrar con o sin una aplicación adicional del inhibidor. El inhibidor también se puede aplicar o administrar en una pluralidad de aplicaciones antes o con las DC, incluyendo, como se indicó anteriormente, una aplicación o administración inmediatamente con o casi inmediatamente después de las DC.
En determinadas realizaciones, el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias se administra inmediatamente después de las DC. En otras realizaciones más, el inhibidor del punto de control de células inmunitarias se administra inmediatamente después de las DC, que a su vez se administran inmediatamente después de al menos la extirpación parcial del tumor, en particular una vez que se ha normalizado cualquier desviación de temperatura causada por la técnica de extirpación.
Se verá además que "usar junto/junto con" no implica que los agentes respectivos estén necesariamente presentes en la misma formulación o composición y, por lo tanto, incluso si se usan o administran al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo, las DC y el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias no necesitan, de hecho, lo más probable es que no estén presentes en la misma composición o formulación, pero pueden administrarse por separado. Por lo tanto, el uso/administración "separados" incluye el uso/administración al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo, o en momentos diferentes, por ejemplo, secuencialmente, o en diferentes intervalos de tiempo de acuerdo con la dosis deseada o el régimen de uso.
No obstante, se prevén realizaciones en las que ambos agentes respectivos están presentes en la misma formulación o composición, al menos en el punto de administración, y pueden ser ventajosas en ciertos contextos.
La disposición del producto de combinación descrito anteriormente debe interpretarse de acuerdo con la totalidad de lo anterior.
En estas realizaciones, el método de la invención puede considerarse un método para mejorar o potenciar la efectividad (o eficacia) de una inmunoterapia contra el cáncer de DC, comprendiendo dicho método el uso de uno o más de los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias descritos en este documento junto con las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas descritas en el presente documento, en particular después de al menos la extirpación parcial de un tumor. Dicha mejora o potenciación se mide en relación con la efectividad/eficacia en ausencia de dicho inhibidor.
En estas realizaciones, el método de la invención puede considerarse un método para mejorar o potenciar la efectividad (o eficacia) de la inmunoterapia con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias, comprendiendo dicho método el uso de uno o más de los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias descritos en este documento junto con las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas descritas en este documento, en particular después de al menos la extirpación parcial de un tumor. Dicha mejora o potenciación se mide en relación con la efectividad/eficacia en ausencia de dichas DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas.
Como se explicó anteriormente, no estaba claro en la técnica si el uso de DC junto con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias, por ejemplo, durante la coadministración local a al menos un tumor extirpado, tendría efectos tóxicos sobre las DC limitando así la eficacia de cualquier respuesta antitumoral que implique a los dos agentes. Los inventores han demostrado ahora que las DC no muestran efectos secundarios tóxicos debido a los inhibidores de los puntos de control de las células inmunitarias a concentraciones locales elevadas.
La extirpación del tumor es un proceso mediante el cual un tumor, o una parte o porción del mismo, se destruye (en ocasiones denominado "lisado") por medios físicos y, por lo general, se dejan los restos del tumor resultante de la etapa de extirpación en el lugar. Por lo tanto, la extirpación puede contrastarse con la escisión quirúrgica simple en la que se extrae tejido tumoral con una alteración mínima del material celular y el tejido circundante. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la eliminación de algunos de los remanentes del tumor resultante de la etapa de extirpación puede tener lugar siempre que queden suficientes antígenos tumorales (por ejemplo, neoantígenos) para dar lugar a la captación y presentación por las células dendríticas inmaduras autólogas o precursoras de los mismos, que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención, y una respuesta inmune antitumoral.
Asimismo, el método de extirpación empleado está restringido solo en la medida en que se generen suficientes antígenos tumorales para dar como resultado la captación y presentación de los mismos por las células dendríticas autólogas inmaduras o precursores de las mismas, que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención, y una respuesta inmune antitumoral. Los niveles de antígenos tumorales pueden controlarse y medirse por los medios descritos anteriormente.
Los métodos de extirpación de tumores son crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante (radioterapia de haz externo o braquiterapia), radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas y electroextirpación. Dichos métodos se practican bien en el campo de la terapia del cáncer y, por lo tanto, la persona experta no tendría ningún problema en realizar dichos métodos de acuerdo con las prácticas clínicas aceptadas.
No obstante, los inventores han descubierto que la crioextirpación representa un medio particularmente eficaz para generar antígenos tumorales que son captados y presentados fácilmente por las células dendríticas inmaduras autólogas que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención y que dan como resultado una respuesta inmune antitumoral, preferiblemente robusta.
En los siguientes ejemplos se proporciona un protocolo particular para la crioextirpación de un tumor, específicamente un tumor de próstata. Por lo tanto, en determinadas realizaciones, el tumor que se somete a tratamiento se someterá a temperaturas de crioextirpación inferiores o iguales a aproximadamente -40 °C (por ejemplo, -45 °C a -35 °C, -42 °C a -38 °C, o -41 °C a -39 °c ) seguido de calentamiento a aproximadamente 37 °C (por ejemplo, 34 °C a 39 °C, 35 °C a 38 °C o 36 °C a 37 °C) durante un tiempo suficiente para generar antígenos tumorales que son captados y presentados fácilmente por las células dendríticas autólogas inmaduras que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención y que dan como resultado una fuerte respuesta inmune antitumoral. La congelación y/o el calentamiento se pueden realizar convenientemente mediante el suministro de gas presurizado, por ejemplo, gases de argón, helio, neón, criptón y xenón. El argón puede ser especialmente conveniente para enfriar y el helio puede ser especialmente conveniente para calentar. Preferiblemente, los gases pueden suministrarse a través de la misma criosonda. Se pueden realizar una pluralidad de ciclos de congelación/descongelación, por ejemplo, al menos 2, 3, 4 o 5. Pueden ser ventajosos dos ciclos.
En otras realizaciones, la crioextirpación se puede realizar usando el sistema Endocare Cryocare CSMR disponible comercialmente (Endocare, Inc.). El sistema Cs también utiliza gas argón líquido como criógeno y helio líquido como agente de calentamiento. Mediante retroalimentación con termopar, este sistema permite la congelación controlada del volumen del tejido diana y la descongelación "activa" del mismo volumen, ya sea a discreción del médico o automáticamente mediante el uso de un sistema mediado por ordenador. Además, el sistema Cryocare CSMR emplea ultrasonido integrado, que permite al operador controlar todos los aspectos de la planificación, la colocación de la sonda y el progreso del evento de congelación a través de ultrasonido en una unidad.
En determinadas realizaciones, los métodos y usos de la invención comprenden una etapa antes de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas en las que el tumor se extirpa al menos parcialmente, por ejemplo, extirpación al menos parcialmente con las técnicas de extirpación enumeradas en este documento, preferiblemente crioextirpación. Los inventores han demostrado que tales métodos son sorprendentemente bien tolerados por pacientes sin ningún (o al menos niveles sorprendentemente limitados) de daño tisular circundante e infección asociada, formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares.
Las referencias a un tumor abarcan cualquier colección (masa) de células neoplásicas en contacto íntimo entre sí. Las referencias a una célula neoplásica incluyen cualquiera o todas las células neoplásicas malignas, premalignas y no malignas (benignas). Por lo tanto, el término tumor engloba, entre otros, neoplasias, cánceres, tumores malignos, sarcoma, carcinoma, germinoma, linfoma, leucemia, blastoma, papiloma y adenoma en la medida en que estas neoplasias se caracterizan por una colección (masa) de células. Tales colecciones o masas pueden describirse como "sólidas" incluso aunque las masas puedan ser difusas y/o comprender huecos. En determinadas realizaciones, el tumor es un tumor maligno o premaligno, por ejemplo, un sarcoma, carcinoma, germinoma, blastoma, linfoma o leucemia.
En realizaciones más específicas, el tumor puede ser un tumor colorrectal (también conocido como tumor de colon, tumor rectal o tumor intestinal), tumor de próstata, tumor testicular, tumor de piel (por ejemplo, melanoma y no melanoma (por ejemplo, tumor de células basales, tumor de células escamosas), tumor de mama, tumor de riñón (renal) (por ejemplo, tumor de Wilm), tumor de ovario, tumor de estómago (gástrico), tumor intestinal (por ejemplo, tumor duodenal, tumor ileal, tumor yeyunal, tumor del intestino delgado), tumor de hígado (hepático), tumor pancreático, tumor de pulmón (pulmonar), tumor esofágico, tumor oral, tumor de garganta, tumor cerebral (por ejemplo, glioblastoma, meduloblastoma), tumor suprarrenal (por ejemplo, tumor adrenocortical), tumor de tiroides (por ejemplo, carcinoma anaplásico de tiroides), tumor uterino (por ejemplo, carcinosarcoma uterino), tumor hematológico (también conocido como neoplasias hematológicas) (por ejemplo, neoplasias de tumores hematopoyéticos y linfoides, por ejemplo, leucemia, linfoma y mieloma).
En realizaciones más específicas, el tumor puede ser un cáncer colorrectal (también conocido como cáncer de colon, cáncer de recto o cáncer de intestino), cáncer de próstata, cáncer de testículo, cáncer de piel (por ejemplo, melanoma y no melanoma (por ejemplo, cáncer de células basales, cáncer de células escamosas)), cáncer de mama, cáncer de riñón (renal) (por ejemplo, tumor de Wilm), cáncer de ovario, cáncer de estómago (gástrico), cáncer intestinal (por ejemplo, cáncer de duodeno, cáncer de íleon, cáncer de yeyuno, cáncer de intestino delgado), cáncer de hígado (hepático), cáncer de páncreas, cáncer de pulmón (pulmonar), cáncer de esófago, cáncer oral, cáncer de garganta, cáncer de cerebro (por ejemplo, glioblastoma, meduloblastoma), cáncer suprarrenal (por ejemplo, cáncer adrenocortical), cáncer de tiroides (por ejemplo, carcinoma anaplásico de tiroides), cáncer de útero (por ejemplo, carcinosarcoma uterino), cáncer hematológico (también conocido como neoplasias hematológicas) (por ejemplo, cánceres hematopoyéticos y linfoides, por ejemplo, leucemia, linfoma y mieloma) o un tumor no maligno en estos sitios anatómicos (por ejemplo, pólipos colorrectales, pilomatrixoma, hemangioma, osteoma, condroma, lipoma, fibroma, linfangioma, leiomioma, rabdomioma, astrocitoma, meningioma, ganglioneuroma, papiloma, adenoma).
La presente invención puede encontrar una aplicación particular en cánceres metastásicos (por ejemplo, formas metastásicas de los cánceres enumerados anteriormente) porque las respuestas inmunes antitumorales inducidas por los métodos de la invención se dirigirán no solo al tumor primario extirpado, sino también cualquier metástasis (tumores secundarios) de los mismos que se hayan establecido o puedan establecerse en otra parte del cuerpo del sujeto, por ejemplo, en huesos y tejidos blandos, incluidos el hígado, los ganglios linfáticos, el cerebro y los pulmones. El tratamiento del cáncer de próstata metastásico resistente a la castración (mCRCP) es de particular interés.
En otras realizaciones, los métodos de la invención pueden comprender además una etapa siguiente en la que se evalúan los indicadores clínicos del tumor y/o el tratamiento del sujeto y, preferiblemente, se comparan con una evaluación correspondiente realizada antes o antes de dicho tratamiento con el fin de determinar cualquier cambio en el mismo. La progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento pueden evaluarse mediante radiología in vivo y obtención de imágenes de medicina nuclear del tumor. Las técnicas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, formación de imágenes por resonancia magnética (MRI), tomografía computarizada con contraste mejorado (TC de diagnóstico), tomografía por ordenador de emisión de fotón único (SPECT) y tomografía por emisión de positrones (PET).
La progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento pueden evaluarse de forma alternativa o adicional mediante análisis molecular de la respuesta inmune del sujeto, por ejemplo, controlar y medir los niveles de diversas poblaciones de células inmunitarias y diversas citocinas en la sangre del sujeto u otros tejidos y fluidos corporales. Se pueden emplear muchas técnicas para realizar este análisis, pero un tema común a muchos es el uso de anticuerpos que se unen específicamente a dichas citocinas y marcadores de células inmunitarias indicativos de tipos de células inmunitarias. La unión de estos anticuerpos a su diana puede detectarse y/o cuantificarse mediante técnicas basadas en citometría de flujo o ensayos inmunoquímicos. Los marcadores celulares convenientes incluyen, pero no se limitan a, tinción del tetrámero con CD4, CD8, CD11b, CD14, CD15, CD25, CD33, CD39, CD124, CD127, HLA-DR, FOXP3, MHC. Las citocinas que pueden controlarse incluyen, pero no se limitan a, IFN-y, IL-1 p, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13 y TNFa. Los niveles de anticuerpos específicos de tumores en la sangre de un sujeto u otros tejidos y fluidos corporales también pueden detectarse y cuantificarse con paneles de antígenos comúnmente observados y técnicas inmunoquímicas apropiadas.
La progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento pueden evaluarse de forma alternativa o adicional detectando y, opcionalmente, midiendo los niveles de células tumorales circulantes, ADN tumoral libre circulante y/o ARNm en sangre. Las técnicas adecuadas están disponibles en la técnica, por ejemplo, Yu M. et al., 2011, Journal of Cell Biology, 192 (3), 373-382; Bettegowda, C., et al., 2014, Science Translational Medicine, 6 (224), 224ra24; y Ross, R.W., et al., 2012, The Lancet Oncology, 13 (11), 1114-1124.
La progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento se pueden evaluar de forma alternativa o adicional detectando y, opcionalmente, midiendo los niveles, por ejemplo, niveles circulantes de biomarcadores de cáncer. Por ejemplo, PSA, PSMA, PAP pueden usarse como biomarcadores en el caso de cáncer de próstata; los niveles de antígeno carcinoembrionario (CEA) pueden ser indicativos de cáncer colorrectal, gástrico, pancreático, de pulmón, de mama y de tiroides; y los niveles de CA-125 pueden ser indicativos de cáncer de ovario y útero.
El sujeto puede ser cualquier sujeto humano o animal no humano, pero más particularmente puede ser un vertebrado humano o no humano, por ejemplo, un animal no humano seleccionado entre mamíferos, aves, anfibios, peces y reptiles. El animal no humano puede ser ganado o un animal doméstico o un animal de valor comercial, incluidos los animales de laboratorio o un animal en un zoológico o parque de juegos. Por lo tanto, los animales no humanos representativos incluyen perros, gatos, conejos, ratones, cobayas, hámsteres, caballos, cerdos, ovejas, cabras, vacas, pollos, pavos, gallina de Guinea, patos, gansos, loros, periquitos, palomas, salmones, truchas, tilapia, bagre, besugo, barramunda, mero, salmonete, medregal, corvina, rohu, gobio, bacalao, eglefino, lubina y carpa. Por lo tanto, se cubren los usos veterinarios de la invención. El sujeto puede verse como un paciente. Preferiblemente, el sujeto es un ser humano.
"Tratamiento", cuando se usa en relación con el tratamiento de un tumor en un sujeto de acuerdo con la invención, se usa ampliamente en el presente documento para incluir cualquier efecto terapéutico, es decir, cualquier efecto beneficioso sobre, o en relación con, el tumor. Por lo tanto, no solo se incluye la erradicación o eliminación del tumor, o la curación del sujeto del tumor, sino también una mejora en el estado general y/o bienestar del sujeto o una condición específica asociada con el tumor o una detención en el deterioro en la condición general o bienestar del sujeto o una condición específica asociada con el tumor. Por lo tanto, se incluye, por ejemplo, una mejora en cualquier síntoma o signo del tumor, o en cualquier indicador clínicamente aceptado del tumor (por ejemplo, una disminución en el tamaño del tumor (volumen, área y/o número de células), una disminución en la invasión del tumor, una disminución en el número de células tumorales circulantes, o una reducción en el malestar general o dolor en el tejido circundante y sistémico). Por lo tanto, el tratamiento incluye terapia curativa y paliativa, por ejemplo, de un tumor preexistente o diagnosticado, es decir, un tratamiento reaccionario.
El tratamiento también incluye efectos preventivos sobre el tumor y afecciones asociadas. Por lo tanto, incluye retrasar, limitar, reducir o prevenir una afección asociada con el tumor, o la aparición de una afección asociada con el tumor, o uno o más síntomas o indicaciones del mismo (por ejemplo, un aumento en el tamaño de un tumor o el desarrollo de tumores secundarios o un aumento en el número de células tumorales circulantes), por ejemplo en relación con la afección o síntoma o indicación antes del tratamiento. Por lo tanto, la prevención incluye explícitamente tanto la prevención absoluta de la aparición o el desarrollo de una afección asociada con el tumor, o síntoma o indicación del mismo, como cualquier retraso en la aparición o desarrollo de una afección asociada con el tumor o síntoma o indicación, o reducción o limitación del desarrollo o progresión de la condición asociada con el tumor o síntoma o indicación del mismo.
Por lo tanto, el tratamiento incluye además estabilizar una afección o síntoma asociado con el tumor o estabilizar la afección general o el bienestar del sujeto que se somete al tratamiento (es decir, prevenir o reducir el empeoramiento de una afección o síntoma asociado con el tumor o la afección general) o bienestar del sujeto.
Será evidente que en el contexto del tratamiento de tumores y cáncer (especialmente tumores y cánceres en etapa tardía), un tratamiento puede considerarse eficaz si la esperanza de vida del sujeto se prolonga, incluso ligeramente, en particular si se proporciona una vida tan prolongada al mismo tiempo que se proporciona una calidad de vida significativa. Además, un tratamiento puede considerarse eficaz si mejora la calidad de vida, incluso si no mejora la esperanza de vida.
Como se muestra en los Ejemplos, los tratamientos de la invención se asocian preferiblemente con menos efectos secundarios adversos, por ejemplo, eventos adversos autoinmunes (que incluyen colitis autoinmune, hepatitis, uveítis, hipofisitis y trastornos cutáneos autoinmunes). Estos efectos adversos se observan típicamente con el uso de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias en el tratamiento del cáncer. Como también se muestra en los Ejemplos, los tratamientos de la invención se asocian preferiblemente con niveles bajos de efectos secundarios quirúrgicos, incluidos los causados por daño al tejido circundante, por ejemplo, infección, formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares.
En realizaciones particulares, los tratamientos de la invención al menos estabilizan una condición o síntoma asociado con el tumor o al menos estabilizan la condición general o el bienestar del sujeto sometido a tratamiento (es decir, al menos previenen o reducen el empeoramiento de una condición o síntoma asociado con el tumor o el estado general o bienestar del sujeto) o el aumento de la esperanza de vida del sujeto que se somete al tratamiento sin provocar efectos secundarios adversos graves, por ejemplo, colitis autoinmune, hepatitis, uveítis, hipofisitis y trastornos cutáneos autoinmunes.
En realizaciones particulares, los tratamientos de la invención al menos estabilizan una afección o síntoma asociado con el tumor (es decir, al menos previenen o reducen el empeoramiento de una afección o síntoma asociado con el tumor) o aumentan la esperanza de vida del sujeto sometido a tratamiento sin reducir, en particular mejorando, la calidad de vida.
En los métodos terapéuticos de la invención, las DC o precursores de las mismas y el inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención se administrarán (aplicarán) al sujeto en cantidades "farmacéuticamente eficaces" o "fisiológicamente eficaces". Una cantidad "farmacéutica/fisiológicamente eficaz" del inhibidor del punto de control de células inmunitarias o DC o precursor de las mismas de uso en la invención es esa cantidad de inhibidor y/o DC que proporciona un tratamiento medible del tumor diana como se describe en este documento.
En relación con los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso de acuerdo con la invención, esto también puede expresarse como una reducción terapéuticamente eficaz en las actividades de las células TReg o aumento de la actividad de las células Tc sobre la respuesta inmune inducida por las células dendríticas autólogas inmaduras que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención.
En relación con las DC o sus precursores de uso de acuerdo con la invención, esto también puede expresarse como una inducción o potenciación terapéuticamente eficaz de la respuesta inmune contra el tumor.
Se puede determinar una cantidad "farmacéuticamente eficaz" o "fisiológicamente eficaz" con referencia a las prácticas estándar para decidir las cantidades de dosificación y la persona experta podrá detectar evidencia de un tratamiento exitoso a partir de su experiencia y con la ayuda de las pruebas de rutina disponibles para él que están diseñados para controlar el tumor diana y las condiciones asociadas, y aquellos que están diseñados para controlar los efectos de las DC o precursores de las mismas y los efectos de los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias, por ejemplo, aquellas pruebas descritas en este documento, en particular sobre la respuesta inmune del sujeto contra el tumor y sobre las actividades de las células TReg y Te en el sujeto.
En otras realizaciones, un fármaco adicional útil en el tratamiento de enfermedades neoplásicas, en particular el tratamiento inmunoterapéutico de enfermedades neoplásicas, se administra junto con el inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas. El término "junto con" en estas realizaciones debe interpretarse de acuerdo con el uso anterior del término.
El fármaco adicional (es decir, un agente terapéuticamente activo adicional) puede ser un agente de quimioterapia citotóxico, un agente antihormonal (agentes que actúan para regular o inhibir la acción hormonal sobre los tumores), un inhibidor de la angiogénesis, un anticuerpo monoclonal anticanceroso un compuesto radioinmunoterapéutico, una vacuna para el tratamiento del cáncer, un agente inmunoestimulador o un inmunosupresor.
Los ejemplos representativos de agentes quimioterapéuticos citotóxicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes; por ejemplo, tiotepa y ciclofosfamida; sulfonatos de alquilo, por ejemplo, busulfano, improsulfano y piposulfano; aziridinas, por ejemplo, benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamina; mostazas de nitrógeno, por ejemplo, clorambucilo, clomafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas, por ejemplo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos, por ejemplo, aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, caliqueamicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos, por ejemplo, metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico, por ejemplo, denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina, por ejemplo, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, por ejemplo, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, 5-FU; andrógenos, por ejemplo, calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-suprarrenales, por ejemplo, aminoglutetimida, mitotano, trilostano; vitámero de ácido fólico, por ejemplo, ácido folínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK(R); razoxano; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido; tiotepa; taxanos, por ejemplo, paclitaxel y docetaxel; clorambucilo; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino, por ejemplo, cisplatino y carboplatino; vinblastina; platino; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitomicina C; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; navelbina; novantrona; tenipósido; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilomitina (DMFO); ácido retinoico; esperamicinas; y capecitabina.
Los ejemplos representativos de agentes anti-hormonales adecuados incluyen, pero no se limitan a, anti-estrógenos, por ejemplo, tamoxifeno, raloxifeno, 4(5)-imidazoles que inhiben la aromatasa, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY 117018, onapristona y toremifeno (Farestona); y anti-andrógenos, por ejemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina.
Los ejemplos representativos de inhibidores de la angiogénesis adecuados incluyen, pero no se limitan a, bevacizumab, everolimus, lenalidomida, pazopanib, ramucirumab, sorafenib, sunitinib y talidomida.
Los ejemplos representativos de anticuerpos monoclonales anticancerígenos adecuados incluyen, pero no se limitan a, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ipilimumab, nivolumab, ofatumumab, panitumumab, pembrolizumab, rituximab y trastuzumab.
Los ejemplos representativos de compuestos radioinmunoterapéuticos adecuados incluyen, pero no se limitan a, ibritumomab y tositumomab.
Los ejemplos representativos de vacunas adecuadas para el tratamiento del cáncer incluyen, pero no se limitan a, sipuleucel-T.
Los ejemplos representativos de agentes inmunoestimuladores incluyen, pero no se limitan a, citoquinas, por ejemplo, TNF, IFNa, IL-1, IL-2 e inhibidores de puntos de control inmunitarios inhibidores, por ejemplo, ipilimumab, nivolumab y pembrolizumab y cualquier otro descrito en este documento.
Los ejemplos representativos de inmunosupresores incluyen, pero no se limitan a, ciclosporina, rapamicina, tacrolimus, dactinomicina, mitomicina c, bleomicina, mitramicina, azatioprina, hidrocortisona, cortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisona, acetato de desoxicorticosterona y aldosterona.
El uso de los agentes terapéuticos adicionales anteriores, en particular los agentes de quimioterapia citotóxicos, en un régimen de dosificación metronómica (baja) (exposición a largo plazo a dosis frecuentes y (habitualmente) relativamente bajas sin interrupciones sin fármaco) puede ser ventajoso. Dichos regímenes de dosificación metronómica pueden comenzar antes, durante o después de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas y durar al menos 1 mes, por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 o 12 meses. Si el régimen de dosificación metronómica comienza después de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas, esto puede ser no más tarde de 30 días, por ejemplo, a más tardar 25, 20, 15, 12, 10, 8, 7, 6, 5, 3, 2 o 1 días, después de dicha administración.
Es de particular interés el uso de ciclofosfamida (Cy) junto con el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o sus precursores. Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que la administración de Cy en el momento de la administración de las vacunas antitumorales combatirá el aumento de la población de células TReg observado después de la vacunación contra el cáncer, que puede amortiguar la respuesta inmunitaria a la vacuna (Zhou G, et al., 2006, Blood 107, 628-636). Esto se debe a que se ha demostrado que las poblaciones de TReg son sensibles a Cy, en particular a dosis subclínicas (en el sentido de su acción como agente quimioterapéutico) en el que se ha demostrado que TReg circulante disminuye con muy poco impacto en otras poblaciones de glóbulos blancos (Bass y Mastrangelo, 1998; Cancer immunology, immunotherapy: CII 47, 1-12; y Ghiringhelli et al, 2004, European Journal of Immunology 34: 336-344). A este respecto, Cy se ha utilizado como agente inmunopotenciador en varios ensayos clínicos de inmunoterapia activa específica (por ejemplo, vacuna contra el cáncer) del cáncer avanzado. En estos estudios se administró Cy en dosis baja (típicamente 300 mg/m2) por vía intravenosa 3-4 días antes del régimen de vacuna (Bass y Mastrangelo, 1998). Se observó toxicidad leve o nula en once ensayos en los que participaron 285 sujetos con una dosis de Cy de 300 mg/m2 (Bass y Mastrangelo, 1998).
Por lo tanto, en determinadas realizaciones de los métodos y usos de la invención, Cy (término que incluye profármacos o metabolitos de los mismos (por ejemplo, 4-hidroxiciclofosfamida y ácido N,N-bis(2-cloroetil) fosforodiamídico)) se administra conjuntamente con el inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas. El término "junto con" en estas realizaciones debe interpretarse de acuerdo con el uso anterior del término.
En determinadas realizaciones, Cy se administra repetidamente, por ejemplo, al menos una vez antes de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas, por ejemplo, no más de 10 días antes o no más de 8, 6, 54, 3, 2 o 1 día antes. Preferiblemente, Cy se administra al menos una vez aproximadamente 3 días antes, por ejemplo, 3,5 a 2,5 días antes de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas.
En realizaciones adicionales, Cy se administra al menos una vez después de una administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursoras de las mismas (cuya administración puede ser la primera, la final o cualquier administración intermedia). En estas realizaciones, puede ser ventajoso administrar Cy en un patrón cíclico, es decir, un período de tiempo en el que los niveles terapéuticos de Cy se mantienen en el sujeto y un período de tiempo en el que el sujeto no recibe Cy. Esto puede ser una pluralidad de días (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 días) que reciben Cy seguido de una pluralidad de días sin recibir Cy (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 días). El número de ciclos no está restringido y puede continuarse siempre que se observe un efecto beneficioso sobre la respuesta inmune antitumoral. Por ejemplo, puede ser ventajoso para el sujeto recibir 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 o 20 ciclos de aproximadamente 7 días recibiendo Cy y aproximadamente 7 días sin recibir Cy. En estas realizaciones, alternativamente puede ser ventajoso administrar Cy en un régimen de dosificación metronómica, por ejemplo, los descritos anteriormente. Puede ser ventajoso un régimen de dosificación metronómica que comience aproximadamente 7 días después de la administración del inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas y que dure al menos 6 meses. El experto en la materia puede determinar las dosis adecuadas de Cy sin una carga excesiva basándose en las características físicas del sujeto y las características del tumor y/o controlando los niveles circulantes de células TReg (es decir, células T CD4+ CD25+ Foxp3+ CLTA4+ y GTIR+, o más generalmente células T CD4+ y CD25+) en la sangre del sujeto, como se describe ampliamente en la técnica (por ejemplo, en Ghiringhelli et al., 2007, Cancer Immunology, Immunotherapy 56: 641-648). Por lo tanto, una dosis adecuada de Cy será aquella que reduzca los niveles circulantes de células TReg en la sangre de un sujeto en comparación con los niveles de dichas células antes del tratamiento con Cy. En la práctica, esta puede ser la dosis que mantiene los niveles de dichas células TReg en los niveles observados antes de la administración de las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas o que al menos previene un aumento significativo en los niveles circulantes de dichas células TReg tras la administración de las DC inmaduras autólogas o precursores de las mismas. En realizaciones preferidas, se selecciona una dosis que no reduzca también significativamente los niveles circulantes de leucocitos, y linfocitos en particular, distintos de las células TReg.
Las dosis adecuadas para la administración iv pueden ser de 1 a 500 mg/m2, por ejemplo, 10 a 500 mg/m2, 50 a 500 mg/m2, 100 a 500 mg/m2, 150 a 500 mg/m2, 200 a 500 mg/m2, 250 a 500 mg/m2, 300 a 500 mg/m2, 350 a 500 mg/m2, 400 a 500 mg/m2, 450 a 500 mg/m2, 1 a 450 mg/m2, 1 a 400 mg/m2, 1 a 300 mg/m2, 1 a 250 mg/m2, 1 a 200 mg/m2, 1 a 150 mg/m2, 1 a 100 mg/m2, 1 a 50 mg/m2 o 1 a 10 mg/m2. Pueden ser ventajosos dosis de aproximadamente 300 mg/m2, por ejemplo, 250 a 350 mg/m2, 275 a 325 mg/m2 o 290 a 310 mg/m2. Se contempla explícitamente cualquier intervalo que pueda formarse a partir de los puntos finales de intervalos enumerados anteriormente.
Las dosis diarias adecuadas para la administración oral pueden ser de 1 a 100 mg, por ejemplo, 5 a 100 mg, 10 a 100 mg, 20 a 100 mg, 25 a 100 mg, 30 a 100 mg, 35 a 100 mg, 40 a 100 mg, 45 a 100 mg, 50 a 100 mg, 55 a 100 mg, 60 a 100 mg, 65 a 100 mg, 70 a 100 mg, 75 a 100 mg, 80 a 100 mg, 90 a 100 mg, 1 a 100 mg, 1 a 90 mg, 1 a 80 mg, 1 a 75 mg, 1 a 70 mg, 1 a 65 mg, 1 a 60 mg, 1 a 55 mg, 1 a 50 mg, 1 a 45 mg, 1 a 40 mg, 1 a 35 mg, 1 a 30 mg, 1 a 25 mg, 1 a 20 mg, 1 a 10 mg o 1 a 5 mg. Pueden ser ventajosas dosis orales diarias de aproximadamente 50 mg, por ejemplo, 30 a 70 mg, 40 a 60 mg o 45 a 55 mg. Las dosis orales diarias se pueden administrar en una pluralidad de administraciones, por ejemplo, dos veces al día (bid) o tres veces al día. La cantidad administrada cada vez se ajustará en consecuencia a la frecuencia seleccionada. Se contempla explícitamente cualquier intervalo que pueda formarse a partir de los puntos finales de intervalo enumerados anteriormente.
De acuerdo con la invención, Cy y profármacos o metabolitos de los mismos (por ejemplo, 4-hidroxiciclofosfamida y ácido N,N-bis(2-cloroetil)fosforodiamídico) no es un inhibidor del punto de control de células inmunitarias como se define en el presente documento.
El experto en la materia podrá formular el inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención como se define en este documento en composiciones farmacéuticas que están adaptadas para la administración local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo de acuerdo con cualquiera de los métodos convencionales conocido en la técnica y ampliamente descrito en la literatura. Tales composiciones pueden, en su forma más simple, ser una solución del inhibidor en agua estéril.
Por lo tanto, la presente invención también proporciona una composición farmacéutica para su uso en cualquiera de los métodos o usos mencionados anteriormente que comprende un inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención como se define en este documento, junto con al menos un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, preferiblemente en una cantidad suficiente para combatir las actividades de las células TReg o aumentar la actividad de las células Tc sobre la respuesta inmune inducida por las células dendríticas inmaduras autólogas que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención. La composición puede comprender una pluralidad de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias. La composición también puede comprender otros agentes terapéuticos, por ejemplo, los descritos anteriormente. La composición también puede comprender una DC inmadura autóloga o un precursor de la misma como se describe en el presente documento.
Más específicamente, los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso en la invención como se define en este documento pueden incorporarse, opcionalmente junto con otros agentes activos, con uno o más vehículos, diluyentes y/o excipientes convencionales, para producir preparaciones galénicas convencionales para administración localizada al sitio del tumor extirpado o porción del mismo, por ejemplo, tabletas implantables, píldoras, grageas y cápsulas de gelatina blanda y dura, polvos, suspensiones, emulsiones, soluciones, aerosoles (como un medio sólido o líquido), aerosoles (por ejemplo, aerosoles nasales), composiciones para su uso en nebulizadores, ungüentos, cremas, pomadas, supositorios, pesarios, soluciones inyectables estériles, polvos envasados estériles y similares. Las composiciones inyectables estériles son de particular interés.
Ejemplos de vehículos, excipientes y diluyentes adecuados son lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato de calcio, polímeros de alginato inertes, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, jarabe acuoso, agua, agua/etanol, agua/glicol, agua/polietileno, agua salada hipertónica, glicol, propilenglicol, metilcelulosa, metilhidroxibenzoatos, propilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceite mineral o sustancias grasas, por ejemplo, grasas duras o mezclas adecuadas de las mismas. Los excipientes y diluyentes destacados son el manitol y el agua salada hipertónica (solución salina).
Las composiciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes conservantes, agentes edulcorantes, agentes estabilizantes, por ejemplo, tampones y antioxidantes, agentes saborizantes y similares. Se pueden incluir agentes terapéuticamente activos adicionales en las composiciones farmacéuticas si es necesario.
Formas administrables por vía parenteral, por ejemplo, soluciones adecuadas para la administración localizada en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo por vía intravenosa, intraarterial, intraósea, intramuscular, intracerebral, intratecal, subcutánea, intradérmica, intrapancreática, intratumoral o a través de la vasculatura del tumor, por ejemplo, por inyección, infusión o perfusión, debe ser estéril y estar libre de agentes fisiológicamente inaceptables, y debe tener una osmolaridad baja para minimizar la irradiación u otros efectos adversos tras la administración. Por lo tanto, tales soluciones deberían ser preferiblemente isotónicas o ligeramente hipertónicas, por ejemplo, agua salada hipertónica (solución salina). Los vehículos adecuados incluyen vehículos acuosos utilizados habitualmente para administrar soluciones parenterales, por ejemplo, agua estéril para inyección, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio, inyección de lactato de Ringer y otras soluciones como las que se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed., Easton: Mack Publishing Co., páginas 1405 -1412 y 1461-1487 (1975) y The National Formulary XIV, 14a ed. Washington: American Pharmaceutical Association (1975)), a la que se hace referencia en el presente documento. Las soluciones pueden contener conservantes, agentes antimicrobianos, tampones y antioxidantes usados convencionalmente para soluciones parenterales, excipientes y otros aditivos que son compatibles con los biopolímeros y que no interferirán con la fabricación, almacenamiento o uso de los productos.
Las soluciones estériles simples de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso en la invención como se definen en este documento o las composiciones líquidas estériles simples que comprenden inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso en la invención como se definen en este documento pueden ser especialmente convenientes para su uso durante procedimientos quirúrgicos y para administración a las vías respiratorias, por ejemplo, por nebulizador o dispositivos aerosoles nasales.
Para la administración tópica, los inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso en la invención, como se definen en el presente documento, pueden incorporarse en cremas, ungüentos, geles, pomadas, parches transdérmicos y similares. Otros sistemas tópicos que se prevé que sean adecuados son estructuras 3D implantables, por ejemplo, esponjas y geles, por ejemplo, matrices de gel cristalinas sólidas, semisólidas, amorfas o líquidas. Estos sistemas pueden ser biodegradables. Dichas estructuras pueden diseñarse convenientemente para controlar la liberación del inhibidor de la matriz, por ejemplo, la liberación puede retrasarse y/o mantenerse durante un período de tiempo elegido.
En determinadas realizaciones, tales sistemas de estructura 3D, en particular los sistemas basados en gel, pueden formarse in situ tras el contacto con tejidos o fluidos biológicos, por ejemplo, superficies mucosas. Normalmente, estos geles son bioadhesivos y/o mucoadhesivos. La administración a cualquier sitio del cuerpo que pueda retener o adaptarse para retener la composición de pre-gel puede ser dirigida por una técnica de administración de este tipo, por ejemplo, un tumor o los restos de un tumor y/o tejido circundante después de la extirpación u otra destrucción similar. Tales sistemas se describen en el documento WO 2005/023176, al que se hace referencia en el presente documento.
Las composiciones y productos que contienen un inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención comprenderán típicamente del 1% al 99%, del 2% al 98%, del 5% al 95%, del 10% al 90%, del 15% al 85% 0 25% a 75% p/p o p/v (según sea apropiado) de los inhibidores de punto de control de células inmunitarias de uso en la invención como se define en este documento, teniendo en cuenta otros ingredientes, por ejemplo, otros agentes terapéuticos y excipientes farmacéuticamente aceptables.
El contenido preciso de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias de uso en la invención como se define en este documento en las composiciones y productos de la invención puede variar dependiendo de la dosis requerida y el régimen de dosificación que se sigue, pero será en una cantidad suficiente para combatir las actividades de las células TReg o aumentar la actividad de las células Te sobre la respuesta inmune inducida por las células dendríticas inmaduras autólogas que se administran junto con el inhibidor del punto de control de acuerdo con la invención, teniendo en cuenta variables como el tamaño físico del sujeto a ser tratado, la naturaleza de las dolencias particulares del sujeto y la ubicación e identidad del área de tratamiento objetivo. El experto en la materia sabrá que las cantidades de inhibidor se pueden reducir si se sigue o se aumenta un régimen de dosificación múltiple para minimizar el número de administraciones o aplicaciones.
Una solución acuosa representativa para la administración parenteral, por ejemplo, las rutas mencionadas anteriormente, serán estériles y pueden contener del 1 al 25%, del 1 al 20%, del 1 al 15%, del 1 al 10%, del 1 al 9%, del 1 al 8%, del 1 al 7%, del 1 al 6%, 1 a 5%, 1 a 2%, 2 a 25%, 2 a 20%, 2 a 15%, 2 a 10%, 2 a 9%, 2 a 8%, 2 a 7%, 2 a 6%, 2 a 5%, 5 a 25%, 5 a 20%, 5 a 15%, 5 a 10%, 5 a 9%, 5 a 8%, 5 a 7%, 5 a 6%, 8 a 25%, 8 al 20%, del 8 al 15%, del 8 al 10%, del 9 al 25%, 9 al 20% o 9 al 15% p/v del inhibidor, estando el resto compuesto por agua y excipientes farmacéuticamente aceptables, y otros agentes activos y/o DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas si se utiliza.
Una formulación tópica representativa, por ejemplo, una crema, ungüento o bálsamo, que se puede usar para administrar un inhibidor del punto de control de células inmunitarias de uso en la invención, como se define en el presente documento, a la piel puede contener del 1 al 25%, del 1 al 20%, del 1 al 15%, del 1 al 10%, 1 a 9%, 1 a 8%, 1 a 7%, 1 a 6%, 1 a 5%, 1 a 2%, 2 a 25%, 2 a 20%, 2 a 15%, 2 a 10%, 2 a 9%, 2 a 8%, 2 a 7%, 2 a 6%, 2 a 5%, 5 a 25%, 5 a 20%, 5 a 15%, 5 a 10%, 5 a 9%, 5 a 8%, 5 a 7%, 5 a 6%, 8 a 25%, 8 a 20%, 8 a 15%, 8 a 10%, 9 a 25%, 9 a 20% o 9 a 15 % p/v del inhibidor, estando el resto compuesto por excipientes farmacéuticamente aceptables y otros agentes activos y/o DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas si se usa.
El experto en la materia podrá formular las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en este documento en composiciones farmacéuticas que están adaptadas para la administración local en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo de acuerdo con cualquiera de los métodos convencionales conocidos en la técnica y ampliamente descritos en la literatura. Tales composiciones pueden, en su forma más simple, ser una suspensión de células en agua estéril. En otras realizaciones comunes, tales composiciones pueden ser una suspensión de células en una solución acuosa tamponada, un medio de cultivo celular o un medio de crioconservación.
Por lo tanto, la presente invención también proporciona una composición para su uso en cualquiera de los métodos o usos mencionados anteriormente que comprenden DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en este documento, junto con al menos un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, preferiblemente en una cantidad suficiente para captar y presentar antígenos tumorales derivados del tumor al menos parcialmente extirpado e inducir una respuesta inmune dirigida contra dichos antígenos. La composición también puede comprender otros agentes terapéuticos, por ejemplo, los descritos anteriormente. La composición también puede comprender un inhibidor del punto de control de células inmunitarias como se describe en el presente documento. Las composiciones pueden incluir además agentes estabilizantes, por ejemplo, tampones y antioxidantes, agentes de suspensión, agentes conservantes, por ejemplo, agentes antimicrobianos, agentes de crioconservación y similares.
Los ejemplos de vehículos, excipientes y diluyentes adecuados son lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato de calcio, polímeros de alginato inerte, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, jarabe acuoso, agua, agua/etanol, agua/glicol, agua/polietileno, agua salada hipertónica, glicol, propilenglicol, metilcelulosa, metilhidroxibenzoatos, propilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceite mineral o sustancias grasas, por ejemplo, grasas duras o mezclas adecuadas de las mismas. También se pueden incluir azúcares, sales y aminoácidos esenciales que pueden ser metabolizados por las células.
Formas administrables por vía parenteral, por ejemplo, soluciones adecuadas para la administración localizada en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo por vía intravenosa, intraarterial, intraósea, intramuscular, intracerebral, intratecal, subcutánea, intradérmica, intrapancreática, intratumoral o a través de la vasculatura del tumor, por ejemplo, mediante inyección, infusión o perfusión, debe ser estéril y estar libre de agentes fisiológicamente inaceptables, y debe tener una osmolaridad baja para minimizar la irritación u otros efectos adversos tras la administración. Por lo tanto, tales soluciones deberían ser preferiblemente isotónicas o ligeramente hipertónicas, por ejemplo, agua salada hipertónica (solución salina). Los vehículos adecuados incluyen vehículos acuosos utilizados habitualmente para administrar soluciones parenterales, por ejemplo, agua estéril para inyección, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio, inyección de lactato de Ringer y otras soluciones como las que se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed., Easton: Mack Publishing Co., páginas 1405 -1412 y 1461-1487 (1975) y The National Formulary XIV, 14a ed. Washington: American Pharmaceutical Association (1975)), a la que se hace referencia en el presente documento.
Para la administración tópica, las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en el presente documento se pueden incorporar en cremas, ungüentos, geles, pomadas, parches transdérmicos y similares. Otros sistemas tópicos que se prevé que sean adecuados son estructuras 3D implantables, por ejemplo, esponjas y geles, por ejemplo, matrices de gel sólidas, semisólidas, amorfas o cristalinas líquidas, que transportan las células y las liberan con el tiempo al sitio del tumor extirpado. Estos sistemas pueden ser biodegradables.
En determinadas realizaciones, tales sistemas de estructuras 3D, en particular los sistemas basados en gel, pueden formarse in situ tras el contacto con tejidos o fluidos biológicos, por ejemplo, superficies mucosas. Normalmente, estos geles son bioadhesivos y/o mucoadhesivos. La administración a cualquier sitio del cuerpo que pueda retener o adaptarse para retener la composición de pre-gel puede ser dirigida por una técnica de administración de este tipo, por ejemplo, un tumor o los restos de un tumor y/o tejido circundante después de la extirpación u otra destrucción similar. Tales sistemas se describen en el documento WO 2005/023176, al que se hace referencia en el presente documento.
Las composiciones y productos que contienen las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención comprenderán típicamente del 1% al 99%, del 2% al 98%, del 5% al 95%, del 10% al 90%, del 15% a 85% o 25% a 75% p/p o p/v (según sea apropiado) de las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en este documento, teniendo en cuenta otros ingredientes, por ejemplo, otros agentes terapéuticos y excipientes farmacéuticamente aceptables.
Una solución acuosa representativa para la administración parenteral, por ejemplo, las rutas mencionadas anteriormente, deben ser estériles y pueden contener del 1 al 25%, del 1 al 20%, del 1 al 15%, del 1 al 10%, del 1 al 9%, del 1 al 8%, del 1 al 7%, del 1 al 6%, 1 a 5%, 1 a 2%, 2 a 25%, 2 a 20%, 2 a 15%, 2 a 10%, 2 a 9%, 2 a 8%, 2 a 7%, 2 a 6%, 2 a 5%, 5 a 25%, 5 a 20%, 5 a 15%, 5 a 10%, 5 a 9%, 5 a 8%, 5 a 7%, 5 a 6%, 8 a 25%, 8 a 20%, 8 a 15%, 8 a 10%, 9 a 25%, 9 a 20% o 9 a 15% p/v de las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas, estando el resto compuesto por agua y excipientes farmacéuticamente aceptables y otros agentes activos y/o un inhibidor del punto de control inmunológico si se usa.
Una estructura 3D representativa que puede usarse para administrar las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en este documento para un sitio interno de extirpación tumoral podría contener 1 a 25%, 1 a 20%, 1 a 15%, 1 a 10%, 1 a 9%, 1 a 8%, 1 a 7%, 1 a 6%, 1 a 5%, 1 a 2%, 2 a 25%, 2 a 20%, 2 a 15%, 2 a 10%, 2 a 9%, 2 a 8%, 2 a 7%, 2 a 6%, 2 a 5%, 5 a 25%, 5 a 20%, 5 a 15%, 5 a 10%, 5 a 9%, 5 a 8%, 5 a 7%, 5 a 6%, 8 a 25%, 8 a 20%, 8 a 15%, 8 a 10%, 9 a 25%, 9 a 20%, o 9 a 15% p/v de las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas, estando el resto compuesto por materiales estructurantes, otros excipientes farmacéuticamente aceptables y otros agentes activos y/o un inhibidor del punto de control inmunológico si se usa. Una formulación tópica representativa, por ejemplo, una crema, ungüento o bálsamo que puede usarse para administrar las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas de uso en la invención como se define en este documento para la piel podría contener 1 a 25%, 1 a 20%, 1 a 15%, 1 a 10%, 1 a 9%, 1 a 8%, 1 a 7%, 1 a 6%, 1 a 5%, 1 a 2%, 2 a 25%, 2 a 20%, 2 a 15%, 2 a 10%, 2 a 9%, 2 a 8%, 2 a 7%, 2 a 6%, 2 a 5%, 5 a 25%, 5 a 20%, 5 a 15%, 5 a 10%, 5 a 9%, 5 a 8%, 5 a 7%, 5 a 6%, 8 a 25%, 8 a 20%, 8 a 15%, 8 a 10%, 9 a 25%, 9 a 20% o 9 a 15% p/v de las DC inmaduras autólogas o un precursor de las mismas, estando el resto compuesto por excipientes farmacéuticamente aceptables y otros agentes activos y/o un inhibidor del punto de control inmunológico si se usa. La invención se describirá adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes, en los que La Figura 1 muestra el análisis microscópico (A) y citométrico de flujo (B) de la citotoxicidad de DC en presencia de 0,5 mg/ml de ipilimumab o control DMSO durante 24 horas.
Ejemplos
Ejemplo 1: Producción de células dendríticas
Una vez completada la leucaféresis de la sangre completa del paciente, el producto celular resultante contendrá un estimado de 5 x 1010 leucocitos en un volumen estimado de 400 ml de plasma. El producto de leucaféresis se enriquecerá aún más en cuanto al contenido de monocitos mediante el procesamiento en el sistema de separación de células ELUTRA® siguiendo las rutinas establecidas y certificadas. El procesamiento con ELUTRA® dará como resultado la separación de la fracción de linfocitos de la colección de células mononucleares obtenida por leucaféresis. El producto post-ELUTRA® estará compuesto predominantemente por una población de células monocíticas CD14+, que servirá como precursor de células dendríticas (DC) inmaduras autólogas inducidas.
Las DC se diferenciarán entonces de los monocitos CD14+ de sangre periférica recolectados durante la leucaféresis en un sistema de cultivo cerrado ex vivo de cuatro días en presencia de dos citocinas: factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF a razón de 50 ng/ml e IL4 a razón de 20 ng/ml).
Después de tres días de cultivo, las células se recolectarán, lavarán y crioconservarán en viales a una concentración de 5 x 107 células totales/vial suspendidas en 1,0 ml de medio crioconservante inyectable para humanos (USP). Varios viales se descongelarán y las células se someterán a un panel de regímenes de prueba de liberación que incluyen ensayos de identidad y viabilidad, una prueba de esterilidad USP de 14 días, una prueba de micoplasma y una prueba de endotoxina. A continuación, se utilizará inmunofenotipificación para evaluar el contenido de células dendríticas inmaduras inducidas, incluidos los marcadores CD14, Cd 80, CD83, CD86, CD40, CCR7, HLA-DR, CD3, CD19, CD16+CD56, CD66b. Las células dendríticas inmaduras inducidas se caracterizan por la ausencia de CD14, no más que una baja expresión de CD80, CD83, CD86, baja expresión de CD40, HLA-DR y ninguna expresión de CD3, CD19, CD16+CD56, CD66b.
Una vez cumplidos los criterios de liberación, los crioviales que contienen DC inmaduras autólogas conservadas se almacenarán en la fase gaseosa de un tanque de nitrógeno líquido dedicado en la Unidad de Ensayos Clínicos hasta que el paciente esté listo para la administración intratumoral en combinación con el procedimiento de crioterapia. Esta administración se describe en los Ejemplos 2 y 3.
Ejemplo 2: Crioextirpación del tumor
La crioextirpación de tumores de próstata es actualmente un tratamiento definitivo aceptado para el cáncer de próstata primario (Long et al., 2001, Urology 57: 518-523). A todos los sujetos se les administrará una dosis intravenosa de ciprofloxacina (en D5W (dextrosa al 5% en agua), 400 mg/200 ml) comenzando una hora antes del procedimiento de crioextirpación. Tras el alta, todos los sujetos continuarán la terapia con ciprofloxacina, 500 mg dos veces al día por vía oral por un período de ocho días. Temperaturas de crioextirpación, que histológicamente se ha demostrado que son -60 °C cuando se emplea una sola congelación, y -40 °C cuando se usa una técnica de doble congelación/descongelación (Larson et al., 2000, Urology 55: 547-552).
Los sujetos serán tratados con anestesia espinal o general (de acuerdo con la preferencia del sujeto) y sedación. Dependiendo del volumen de la glándula prostática a tratar, se colocarán entre seis y ocho criosondas puntiagudas aisladas de 2,4 mm x 15 cm (Endocare, Inc., Irvine, CA) en la próstata bajo guía ecográfica transrectal (Bahn et al., 2002, Urology 60: 3-11). La colocación de las sondas por parte del operador será tal que la "bola de hielo" tridimensional formada por la confluencia de las criosondas contribuyentes contendrá el tumor de próstata, pero no se extenderá a la anatomía adyacente. No se tratarán las vesículas seminales.
A continuación, la próstata se someterá a temperaturas de crioextirpación inferiores o iguales a -40 °C seguido de calentamiento a 37 °C. La congelación y el calentamiento se lograrán mediante el suministro de gases de argón y helio presurizados, respectivamente, a través de la misma criosonda. En el momento de la colocación de las criosondas en la próstata bajo guía ecográfica, los termopares serán guiados a las siguientes posiciones: haces neurovasculares derecho e izquierdo lateralmente; esfínter externo inferiormente, ápice; y próstata posterior en la interfaz prostatorectal. La colocación de los termopares, que suministran datos en tiempo real al operador a través de la unidad de control de crioextirpación, permite recopilar datos objetivos relacionados con las temperaturas intraprostáticas reales alcanzadas. Al proporcionar información en tiempo real a la consola operativa durante el proceso de congelación, los termopares también ayudan a evitar que el operador se congele a través de estructuras, como la pared rectal anterior, durante la crioextirpación de la próstata. Un catéter de calentamiento con irrigante circulante mantenido a 40 °C protegerá el revestimiento uretral de temperaturas destructivas. Una vez que se alcanza la temperatura corporal central, como lo demuestra la lectura de la temperatura del termopar, se emprenderá un segundo ciclo de "congelación/descongelación", logrando así un doble criotratamiento de congelación/descongelación de la próstata. La crioextirpación terminará cuando se alcancen los 37 °C en la próstata previamente congelada después del segundo ciclo de congelación/descongelación. En ese momento, la inyección o inyecciones de células dendríticas autólogas se realizarán como se describe en el Ejemplo 3.
Ejemplo 3: Administración de células dendríticas autólogas
Se preparará un plan de tratamiento individualizado para cada sujeto. El plan de tratamiento visualizará la próstata en cuatro cuadrantes desde una perspectiva coronal: superior derecha (RS), inferior derecha (RI), superior izquierda (LS) e inferior izquierda (LI). Usando el sistema de cuadrantes RS/RI/LS/LI y la biopsia prostática obtenida más recientemente, el investigador calificará cada cuadrante en una escala de: - No hay cáncer presente; Bajo volumen de cáncer en el cuadrante (índice de volumen tumoral <50%); + Volumen intermedio de cáncer en el cuadrante (índice de volumen tumoral = 50%); ++ Alto volumen de cáncer en el cuadrante (Índice de localización del tumor).
El número de DC que se administrará a cada uno de los cuadrantes será proporcional al volumen relativo estimado de enfermedad que reside allí. Por ejemplo, en el caso de que el cuadrante RS se califique como (+++), y el cuadrante LS se califique como (++), y los otros dos cuadrantes no exhiban enfermedad, el 60% (3/5) del volumen celular se administrará al cuadrante RS y el 40% (2/5) del volumen celular se administrará al cuadrante LS (por ejemplo, dosis de 2,5 x 107 en 1 ml; 0,6 ml inyectados al RS y 0,4 ml al cuadrante LS, respectivamente). Este enfoque proporcional se mantendrá para todas las dosis de células administradas.
La DC congelada preparada en el Ejemplo 1 se colocará en un baño de agua a 37 °C para descongelar. La descongelación se notará como la desaparición de los cristales de hielo del interior del criovial mientras está en el baño de agua. Una vez descongelado, el contenido del vial se introducirá en una jeringa de tuberculina estéril de 1 ml equipada con una aguja de extracción de calibre 18 y 1,5 pulgadas. Una vez que el contenido del vial se ha introducido en la jeringa, el operador retira la aguja de extracción y conecta a la jeringa una aguja de biopsia Chiba® de calibre 18 y 20 cm (Cook Medical, Inc., Bloomington, Indiana). En referencia al plan de tratamiento, el operador insertará la aguja en la glándula prostática bajo guía ecográfica hasta que la punta de la aguja llegue a la base de la próstata. Usando el sistema de cuadrantes descrito, él/ella comenzará con el cuadrante RS (si corresponde) y se moverá en el sentido de las agujas del reloj a todos los cuadrantes involucrados. Después de la localización de la punta de la aguja en la base de la próstata, confirmada por la imagen de ultrasonido, él/ella presionará el émbolo y retirará lentamente el complejo jeringa/aguja, depositando células a lo largo del cuadrante. En el caso de que se observe una lesión grande en el momento del diagnóstico en una ubicación particular dentro del cuadrante, por ejemplo, cuando se haya observado cáncer en la base, pero no en la glándula media o el ápice, él/ella puede optar por inyectar preferentemente células en esa ubicación. Aproximadamente 0,3 ml de suspensión celular permanecerán en la aguja después de la inyección. Dejando la aguja en su lugar, el médico-operador retirará la jeringa ahora vacía que se usa para la administración de células y la reemplazará con una jeringa que contenga solución salina. Él/ella enjuagará la aguja inyectando 0,3 ml de solución salina en la aguja, asegurando así la administración de la dosis completa de DC. Cada vial de 1,0 ml de células dendríticas debe inyectarse con una jeringa de tuberculina de 1,0 ml. Este proceso se repetirá de acuerdo con el plan de tratamiento, hasta que todos los viales de células se hayan depositado en la próstata descongelada después de la crioextirpación.
Ejemplo 4: Administración local (intratumoral) y sistémica (iv) de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias
El inhibidor del punto de control inmunitario ipilimumab (Yervoy®) es un anticuerpo monoclonal anti-CTLA-4 completamente humano (IgG1K) producido en células de ovario de hámster chino mediante tecnología de ADN recombinante. Cada ml de concentrado contiene 5 mg de ipilimumab. La solución es un líquido transparente a ligeramente opalescente, de incoloro a amarillo pálido que puede contener partículas ligeras (pocas) y tiene un pH de 7,0 y una osmolaridad de 260-300 mOsm/kg. Cada ml de concentrado contiene 0,1 mmol de sodio, que equivale a 2,3 mg de sodio. Un vial de 10 ml contiene 50 mg de ipilimumab. Un vial de 40 ml contiene 200 mg de ipilimumab.
Se preparará un plan de tratamiento individualizado para cada sujeto con el fin de complementar el procedimiento de crioinmunoterapia de los Ejemplos 1 a 3 con el inhibidor del punto de control inmunitario ipilimumab. A varios pacientes se les administrará ipilimumab a razón de 0,3 mg/kg de peso corporal localmente y a varios pacientes se les administrará ipilimumab a razón de 0,6 mg/kg de peso corporal localmente. La dosis máxima administrada se limitará a 50 mg independientemente del peso corporal.
La administración de células dendríticas autólogas se realizará primero como se describe en el Ejemplo 3. Inmediatamente después de completar la administración intratumoral de células dendríticas autólogas, un vial de 10 ml de ipilimumab 5 mg/ml (Yervoy®) se presentará al urólogo por la enfermera auxiliar y el volumen requerido, limitado a un máximo de 50 mg (10 ml), se extraerán en una jeringa Braun Omnifix estéril de 10 ml utilizando una aguja de extracción BD Microlance de calibre 18 y 1,5 pulgadas. Una vez que el contenido del vial se haya introducido en la jeringa, el operador retirará la aguja de extracción y conectará a la jeringa una aguja de biopsia Chiba® de calibre 18 y 20 cm (Cook Medical, Inc., Bloomington, Indiana). Refiriéndose al plan de tratamiento, el operador insertará la aguja en la glándula prostática extirpada bajo guía ecográfica hasta que la punta de la aguja llegue a la base de la próstata. A partir de entonces, el volumen de ipilimumab en la jeringa se distribuirá lentamente (aproximadamente 1 ml por minuto) en el área crioextirpada siguiendo las mismas vías de inyección que se utilizan para la inyección de células dendríticas autólogas. Es aceptable si no se deposita todo el volumen en el área crioextirpada, sino también en el tejido vecino no necrótico.
Varios otros pacientes después de la cicloextirpación recibirán una única administración intravenosa de ipilimumab a una dosis acumulativa de 3 mg/kg de peso corporal. La dosis total se diluirá a 100 ml con NaCl al 0,9% estéril y, posteriormente, se transferirá a una bolsa iv vacía de PVC o no de PVC y se infundirá durante 90 minutos. Se utilizará un equipo intravenoso sin DEHP y sin látex con un filtro en línea de 0,2 micrones.
Ejemplo 5: Terapia concomitante opcional de ciclofosfamida en dosis bajas para el agotamiento selectivo de TReg Se emprenderá el siguiente régimen para la terapia reductora de TReg si es necesario.
A los tres días de la crioextirpación y la administración de DC, se administrarán 300 mg/m2 de ciclofosfamida (Cy) mediante infusión intravenosa (IV) (Berd et al., 1987, Cancer Research 47: 3317-3321). A partir de la semana 2 desde la crioextirpación y la administración de DC, se administrarán 25 mg de Cy, p.o., b.i.d. durante 7 días y luego cesará la administración durante 7 días antes de reiniciar durante 7 días. Seguirán otros 7 días sin la administración de Cy. Este ciclo de 28 días se repetirá 6 veces. Los efectos de Cy se controlarán midiendo los niveles circulantes de células TReg (es decir, células T c D4+ CD25+ Foxp3+) en la sangre del sujeto, como se describe ampliamente en Ghiringhelli et al., 2007, Cancer Immunology, Immunotherapy 56: 641-648).
Ejemplo 6: Obtención de imágenes diagnósticas
La progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento se evaluarán mediante radiología in vivo y obtención de imágenes de medicina nuclear, es decir, obtención de imágenes por resonancia magnética (MRI), tomografía computarizada mejorada con contraste (CT de diagnóstico), tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT) y tomografía por emisión de positrones (PET). Se realizará el siguiente programa de obtención de imágenes en cada paciente:
Inclusión/exclusión
Procedimiento Propósito Secuencia/trazador Tiempo MRI de próstata Estadificación de la enfermedad local T2W, DWI, DCE-MRI 40 min MRI de columna/pelvis Metástasis nodal/ósea T1W/STIR 15 min SPECT Metástasis ósea (Tc-99m-MD) 60 min PET-CT (CT de diagnóstico) Metástasis/tumor primario FACBC/FDG 30 min 22 semanas
MRI de próstata Nueva estadificación de la enfermedad local. T2W, DWI, DCE-MRI 40 min Verificación de la región tratada
MRI de columna/pelvis Metástasis nodal/ósea T1W/STIR 15 min SPECT Metástasis ósea (Tc-99m-MD) 60 min PET-CT (CT de diagnóstico) Metástasis/tumor primario FACBC/FDG 30 min 46 semanas
MRI de próstata recurrencia local/Nueva estadificación T2W, DWI, DCE 40 min MRI de columna/pelvis Metástasis nodal/ósea T1W/STIR 15 min SPECT Metástasis ósea (Tc-99m-MD) 60 min PET-CT (CT de diagnóstico) Metástasis/tumor primario FACBC/FDG 30 min La MRI de próstata y la MRI de columna/pelvis se realizan preferiblemente en la misma sesión de obtención de imágenes, es decir, un tiempo de exploración total de aproximadamente 60 minutos usando un sistema de MRI 1,5 Tesla.
La MRI de próstata se realiza sin el uso de una bobina endorrectal para aumentar la conformidad del paciente y minimizar el tiempo total de exploración.
La SPECT y la PET-CT se realizarán en días separados para obtención de las imágenes. La CT del examen PET-CT se utilizará para las evaluaciones RECIST.
PET: [18F] FACBC se usará como el trazador de PET preferido, pero si FACBC no logra identificar el tumor/metástasis, por ejemplo, en los tumores poco diferenciados, las imágenes con [18F] FDG se aplicarán en un día aparte.
Ninguna sesión de imágenes individual superará los 75 minutos.
Ejemplo 7: Efectos citotóxicos de ipilimumab sobre las células dendríticas
Para la generación de DC derivadas de monocitos (moDC), se recogieron de 20 a 45 ml de sangre heparinizada de cada participante y se manipularon en 2 horas. Se aislaron células mononucleares de sangre periférica mediante centrifugación en gradiente utilizando Lymphoprep (Axis Shield PoC AS, Oslo, Noruega) y se aislaron monocitos por adherencia plástica en medio X-VIVO 20 (Lonza, Verviers, Bélgica). Las células no adherentes se eliminaron después de 1 hora de incubación a 37 °C y dióxido de carbono al 5%. Los monocitos restantes se cultivaron en medio RP10 (RPMI 1640 con Ultraglutamina (Bio Whittaker, Lonza), FCS Gold al 10% (PAA, Pasching, Austria), penicilinaestreptomicina al 1% (Gibco, Invitrogen Corporation, Paisley, Reino Unido) complementado con 100 ng/ml de factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF; ImmunoTools GmbH, Friesoythe, Alemania) y 20 ng/ml de IL-4 (ImmunoTools GmbH). Después de 3 días en cultivo, se indujo la maduración en una parte de la moDC añadiendo 0,1 pg/ml de lipopolisacárido ligando TLR4 (LPS) (InvivoGen, San Diego, CA, EE. UU.) durante 24 horas. Se añadió ipilimumab hasta 0,5 mg/ml o DMSO al mismo tiempo que LPS y al mismo tiempo a las DC no tratadas. Después de la incubación durante 24 horas, las células se recolectaron para análisis del sistema de obtención de imágenes Cytation 5MR y para análisis citométrico de flujo usando el kit de detección de apoptosis FITC Annexin V (BD Biosciences Cat. No 556547) siguiendo el protocolo del fabricante, o para análisis microscópico.
Los resultados se muestran en la Figura 1. El análisis microscópico y la apoptosis por citometría de flujo (Anexina V-FITC) u otro análisis de muerte celular (yoduro de propidio) de las DC maduras inducidas por LPS y las DC inmaduras muestran que el tratamiento con hasta 0,5 mg/ml de ipilimumab durante 24 horas no causa efectos citotóxicos detectables en las DC. La concentración de ipilimumab utilizada en estos estudios es mucho más alta que las dosis clínicas típicas. Estos resultados muestran, por primera vez, que el uso de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias junto con DC, por ejemplo, durante la coadministración local a un tumor al menos extirpado, no induciría toxicidad por las DC y, por lo tanto, limitaría la eficacia de cualquier respuesta antitumoral.
Ejemplo 8: Tratamiento clínico de pacientes con cáncer de próstata en estadio avanzado de acuerdo con la invención Se trataron 14 pacientes con cáncer de próstata en etapa tardía (cáncer de próstata resistente a la castración metastásica (CRPC)) como se describe en los Ejemplos 1 a 4. Los pacientes R01 a R09 recibieron crioextirpación y dosis de DC, pero no ipilimumab. Los pacientes R10 a R13 recibieron la dosis más alta de DC y 0,3 mg/kg de peso corporal de ipilimumab. El paciente R14 recibió la dosis más alta de DC y 0,5 mg/kg de peso corporal de ipilimumab. En puntos de tiempo predeterminados, se enumeraron las células tumorales circulantes (CTC) de acuerdo con el siguiente protocolo.
Se recogieron 7,5 ml de sangre completa periférica en tubos CellSave (Immunicon, Inc., Huntingdon Valley, PA). El análisis semiautomático se realizó como se describe en otra parte. Las muestras de sangre se mantuvieron a temperatura ambiente durante <72 horas antes del análisis usando el ensayo CellSearchMR (kit de células epiteliales CellSearchMR/Analizador CellSpotterMR, Menarini-Silicon Biosystems, San Diego, CA, EE. UU.). El ensayo utiliza un ferrofluido recubierto con anticuerpos contra la molécula de adhesión de células epiteliales (EpCAM) para separar inmunomagnéticamente las células de origen epitelial de la sangre, y tinción fluorescente para diferenciar entre desechos, células hematopoyéticas y células tumorales circulantes derivadas del epitelio. Las CTC cuantificadas y caracterizadas en este estudio fueron células con tinción positiva para queratinas (K) y tinción con DAPI nuclear, pero negativa para el marcador de pan-leucocitos CD45. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1: Recuento de células tumorales circulantes (CTC) de CellSearch en las semanas previas y posteriores a la ri inim n r i r l i n R 1 R14 r m r n r rif ri ml
Figure imgf000025_0001
También se controlaron los efectos secundarios adversos durante el tratamiento y el seguimiento.
El seguimiento de los pacientes R01-R09 tratados previamente con crioextirpación del tumor de próstata seguido de una inyección de DC intratumoral posterior mostró notablemente pocos eventos adversos. Por lo tanto, se puede concluir que tanto la crioextirpación fue segura sin daño quirúrgico local o asociado con la congelación y que no hay eventos adversos autoinmunes graves asociados con la administración de DC.
De acuerdo con la literatura publicada, el tratamiento sistémico con ipilimumab se ha asociado con una alta incidencia de eventos adversos autoinmunes, y los eventos adversos se han correlacionado con la dosis inyectada total por kg de peso corporal. Los eventos adversos graves incluyen colitis autoinmune, hepatitis, uveítis, hipofisitis y trastornos cutáneos difíciles de tratar (Perez-De-Lis M, et al., 2017, Autoimmune diseases induced by biological agents. A review of 12,731 cases (BIOGEa S Registry), Expert Opin Drug Saf.; 16 (11): 1255-71; y Rijnders M, de Wit R, et al., 2017, Systematic Review of Immune Checkpoint Inhibition in Urological Cancers, Eur Urol.; 72 (3): 411-23). En consecuencia, es muy alentador que no se hayan observado efectos adversos autoinmunitarios durante el seguimiento de los pacientes tratados con una inyección intratumoral de ipilimumab además de la crioinmunoterapia mediada por DC. Tampoco se observaron reacciones agudas negativas como consecuencia de las inyecciones intratumorales de ipilimumab y DC.
Los pacientes R10 a R14 también mostraron notablemente pocos efectos secundarios quirúrgicos, no se informaron casos de infección y se observaron niveles bajos de formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares. No estaba claro en la técnica si la crioextirpación tumoral y la administración local de DC seguidas de la administración local de inhibidores de puntos de control de células inmunitarias causarían un daño tisular circundante significativo y, por lo tanto, darían como resultado efectos secundarios quirúrgicos adversos. Los resultados del seguimiento revelan que la extirpación del tumor, por ejemplo, por crioextirpación, seguida del uso local de DC junto con inhibidores de puntos de control de células inmunitarias es sorprendentemente bien tolerado por los pacientes y no se asocia con tasas elevadas de infección, formación de fístulas y deformaciones anatómicas locales similares.
Con base en los resultados de CTC mostrados en la Tabla 1, se puede considerar que los tratamientos de la invención dan como resultado la estabilización de la enfermedad en pacientes con cáncer de próstata en etapa tardía, es decir, no se observa un empeoramiento de la enfermedad durante el período de seguimiento en ningún paciente. Esto puede considerarse un resultado muy positivo en vista de la ausencia de efectos adversos observados en los pacientes tratados en comparación con los esperados en los mismos pacientes tratados sistémicamente solo con ipilimumab.
También debe tenerse en cuenta que los pacientes usados en este estudio son aquellos con cáncer de próstata metastásico resistente a la castración (CRPC), es decir, cáncer en etapa muy tardía. Los pacientes incluidos han tenido su diagnóstico de cáncer de próstata durante períodos prolongados. Los pacientes fueron incluidos solo después de que su tumor progresó con la terapia estándar de privación de andrógenos (ADT). Se incluyeron pacientes tanto antes como después de la quimioterapia. La mediana de supervivencia global de grupos de pacientes comparables de acuerdo con la literatura internacional es de 18 meses incluso con la intervención de quimioterapia con docetaxel (Schalken J, Fitzpatrick JM. Enzalutamide: Targeting the androgen signaling pathway in metastatic castration-resistant prostate cancer. BJU international. 2015). Estos pacientes se seleccionan necesariamente porque el consentimiento ético para tales ensayos solo se otorga a pacientes con enfermedades muy graves. Por lo tanto, es de esperar que los resultados de eficacia observados en este estudio no sean tan evidentes como se esperaría en pacientes con enfermedad en estadio más temprano. De hecho, existe evidencia teórica y clínica que sugiere que el potencial curativo de la inmunoterapia es más fuerte en una etapa más temprana y con una carga tumoral total más baja (Gulley JL, et al., 2011, Impact of tumour volume on the potential efficacy of therapeutic vaccines, Curr Oncol.; 18 (3): e150-7). Por lo tanto, es de esperar que los resultados observados en este ensayo se reproduzcan en mayor medida cuando se repitan en pacientes con enfermedad en estadio más temprano.
Además, la estabilización de la enfermedad en pacientes con dicho cáncer de próstata avanzado sin los efectos secundarios adversos asociados con ipilimumab puede considerarse un éxito particular.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un inhibidor del punto de control de células inmunitarias para usar junto con una célula dendrítica inmadura autóloga en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga y
(ii) el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto por crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante, radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas o electroextirpación, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo, en el que dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es un reactivo de macromolécula de afinidad que se une a al menos un ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo y la unión de dicho reactivo a su sitio de unión diana en dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo interfiere con la interacción entre el receptor y el ligando y en el que dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo se selecciona de
(a) CTLA4 y CD80 o CD86,
(b) PD1 y PDL1 o PDL2,
(c) BTLA y HVEM,
(d) KIR y MHC de clase I o II,
(e) LAG3 y MHC de clase I o II,
(f) TIM3 y galectina 9,
(g) A2aR y adenosina,
(h) B7-H3,
(i) B7-H4, y
(j) 2B4.
2. Una célula dendrítica inmadura autóloga para usar junto con un inhibidor del punto de control de células inmunitarias en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga y
(ii) el inhibidor del punto de control de células inmunitarias a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto mediante crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante, radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas o electroextirpación, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas y dicho inhibidor de punto de control de células inmunitarias es local en el sitio del tumor extirpado o porción del mismo, en el que dicho inhibidor de punto de control de células inmunitarias es un reactivo de macromolécula de afinidad que se une a al menos un ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo y la unión de dicho reactivo a su sitio de unión diana en dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo interfiere con la interacción entre el receptor y el ligando y en el que dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo se selecciona de
(a) CTLA4 y CD80 o CD86,
(b) PD1 y PDL1 o PDL2,
(c) BTLA y HVEM,
(d) KIR y MHC de clase I o II,
(e) LAG3 y MHC de clase I o II,
(f) TIM3 y galectina 9,
(g) A2aR y adenosina,
(h) B7-H3,
(i) B7-H4, y
(j) 2B4.
3. Un producto que contiene una célula dendrítica inmadura autóloga y un inhibidor del punto de control de células inmunitarias como preparación combinada para uso separado, simultáneo o secuencial en un método para el tratamiento de un tumor en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar
(i) la célula dendrítica inmadura autóloga y
(ii) el inhibidor del punto de control de las células inmunitarias
a dicho sujeto después de la extirpación al menos parcial de dicho tumor en dicho sujeto por crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante, radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas o electroextirpación, en el que la administración de dichas células dendríticas inmaduras autólogas y dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es local al sitio del tumor extirpado o porción del mismo, en el que dicho inhibidor del punto de control de células inmunitarias es un reactivo de macromolécula de afinidad que se une a al menos un ligando del punto de control inmunitario y/o receptor del mismo y la unión de dicho reactivo a su sitio de unión diana en dicho ligando del punto de control inmunitario y/o receptor del mismo interfiere con la interacción entre el receptor y el ligando y en el que dicho ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo se selecciona de
(a) CTLA4 y CD80 o CD86,
(b) PD1 y PDL1 o PDL2,
(c) BTLA y HVEM,
(d) KIR y MHC de clase I o II,
(e) LAG3 y MHC de clase I o II,
(f) TIM3 y galectina 9,
(g) A2aR y adenosina,
(h) B7-H3,
(i) B7-H4, y
(j) 2B4.
4. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho inhibidor del punto de control de las células inmunitarias es una proteína.
5. El inhibidor del punto de control de las células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho inhibidor del punto de control de las células inmunitarias comprende una porción de la secuencia de aminoácidos del ligando del punto de control y/o receptor del mismo.
6. El inhibidor del punto de control de las células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho inhibidor del punto de control de las células inmunitarias es un anticuerpo, un anticuerpo de presentación en fagos o un mimético de anticuerpo, preferiblemente, en el que dicho anticuerpo, anticuerpo de presentación en fagos o mimético de anticuerpo se une al menos a un ligando de punto de control inmunitario y/o receptor del mismo seleccionado de CTLA4, CD80, CD86, PD1, PDL1, PDL2, LAG3, B7-H3, B7-H4 o TIM3, preferiblemente CTLA4, PD1, PDL1, LAG3 o B7-H3.
7. El inhibidor del punto de control de las células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho inhibidor del punto de control de las células inmunitarias se selecciona entre ipilimumab, tremelimumab, nivolumab, pembrolizumab, CT-011, AMP-224, MDX-1105, RG7446, BMS-936559, MGA271, atezolizumab, avelumab y durvalumab.
8. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho método comprende además antes de la administración de las CD:
(a) leucaféresis del sujeto para aislar leucocitos o células mononucleares de la sangre del sujeto y/o aislar monocitos de la sangre del sujeto,
(b) opcionalmente, aislamiento de monocitos de los leucocitos aislados o células mononucleares de (a), y
(c) cultivo de dichos monocitos en condiciones que permitan la diferenciación de las DC de los mismos.
9. El inhibidor del punto de control de las células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho método comprende una etapa antes de la administración del inhibidor del punto de control de las células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas de extirpación al menos parcial del tumor por crioextirpación, extirpación hidrotermal, extirpación por radiación ionizante, radioextirpación, extirpación por ultrasonido, extirpación por láser, extirpación por microondas o electroextirpación.
10. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicha crioextirpación comprende una pluralidad de ciclos de congelación/descongelación, preferiblemente un ciclo de congelación/descongelación de congelación a menos de o igual a aproximadamente -40 °C y calentamiento a aproximadamente 37 °C.
11. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, DC inmaduras autólogas o el producto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho tumor es un tumor colorrectal, un tumor de próstata, un tumor testicular, un tumor de piel, un tumor de mama, un tumor de riñón, tumor de ovario, tumor de estómago, tumor intestinal, tumor de hígado, tumor de páncreas, tumor de pulmón, tumor de esófago, tumor oral, tumor de garganta, tumor cerebral, tumor suprarrenal, tumor de tiroides, tumor uterino o tumor hematológico.
12. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, DC inmaduras autólogas para su uso, o el producto para uso de la reivindicación 11, en el que dicho tumor es un cáncer, preferiblemente cáncer de próstata.
13. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, las DC inmaduras autólogas para su uso o el producto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que un fármaco adicional útil en el tratamiento de enfermedades neoplásicas se administra junto con el inhibidor del punto de control de células inmunitarias y las DC inmaduras autólogas.
14. El producto para uso de la reivindicación 13, conteniendo dicho producto además el fármaco adicional útil en el tratamiento de enfermedades neoplásicas como una preparación combinada para uso separado, simultáneo o secuencial en dicho método.
15. El inhibidor del punto de control de células inmunitarias para su uso, DC inmaduras autólogas para uso de la reivindicación 13 o el producto para uso de la reivindicación 14, en el que dicho fármaco adicional útil en el tratamiento de la enfermedad neoplásica se selecciona de un agente de quimioterapia citotóxico, un agente antihormonal, un inhibidor de angiogénesis, un anticuerpo monoclonal contra el cáncer, un compuesto radioinmunoterapéutico, una vacuna para el tratamiento del cáncer, un agente inmunoestimulador o un inmunosupresor preferiblemente ciclofosfamida o un profármaco o metabolito del mismo, preferiblemente 4-hidroxiciclofosfamida y ácido N,N-bis(2-cloroetil)fosforodiamídico.
ES17800414T 2016-10-28 2017-10-27 Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores Active ES2878278T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1618291.7A GB201618291D0 (en) 2016-10-28 2016-10-28 Novel immunotherapeutic treatments for tumours
PCT/EP2017/077698 WO2018078145A1 (en) 2016-10-28 2017-10-27 Novel immunotherapeutic treatments for tumours

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2878278T3 true ES2878278T3 (es) 2021-11-18

Family

ID=57963528

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES17800414T Active ES2878278T3 (es) 2016-10-28 2017-10-27 Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20190269726A1 (es)
EP (1) EP3532076B1 (es)
DK (1) DK3532076T3 (es)
ES (1) ES2878278T3 (es)
GB (1) GB201618291D0 (es)
SI (1) SI3532076T1 (es)
WO (1) WO2018078145A1 (es)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112020003533A2 (pt) 2017-08-25 2020-11-17 Five Prime Therapeutics, Inc. anticorpos b7-h4 e métodos de uso dos mesmos
CA3091801A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
US10610280B1 (en) 2019-02-02 2020-04-07 Ayad K. M. Agha Surgical method and apparatus for destruction and removal of intraperitoneal, visceral, and subcutaneous fat
WO2020227279A1 (en) * 2019-05-06 2020-11-12 Hasumi International Research Foundation Therapy and methods of introducing immature dendritic cells and/or cytotoxic t lymphocyte and anti pd-1 / pd-l1 antibody for treatment of tumors
WO2022049572A1 (en) * 2020-09-01 2022-03-10 The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. Immune system restoration by cell therapy
CN116850276A (zh) * 2023-07-06 2023-10-10 郑州大学第一附属医院 一种多靶点免疫检查点肿瘤抗体负荷免疫细胞的肿瘤疫苗及其应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5849589A (en) 1996-03-11 1998-12-15 Duke University Culturing monocytes with IL-4, TNF-α and GM-CSF TO induce differentiation to dendric cells
GB9608510D0 (en) 1996-04-25 1996-07-03 Medical Res Council Calcium dependent binding ligands
US7494669B2 (en) 2001-02-28 2009-02-24 Carrington Laboratories, Inc. Delivery of physiological agents with in-situ gels comprising anionic polysaccharides
US20050214268A1 (en) * 2004-03-25 2005-09-29 Cavanagh William A Iii Methods for treating tumors and cancerous tissues
US8420078B2 (en) * 2005-03-10 2013-04-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and immunogenic cell preparations for treating antigen-associated diseases
RU2530523C2 (ru) * 2012-03-29 2014-10-10 Олег Борисович Егоров Способ противоопухолевой иммунотерапии
JP2018500332A (ja) * 2014-12-16 2018-01-11 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 中枢神経系新生物における免疫チェックポイント阻害剤の使用
WO2016145578A1 (en) * 2015-03-13 2016-09-22 Syz Cell Therapy Co. Methods of cancer treatment using activated t cells

Also Published As

Publication number Publication date
EP3532076A1 (en) 2019-09-04
SI3532076T1 (sl) 2021-08-31
DK3532076T3 (da) 2021-05-31
US20190269726A1 (en) 2019-09-05
EP3532076B1 (en) 2021-03-17
GB201618291D0 (en) 2016-12-14
WO2018078145A1 (en) 2018-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2878278T3 (es) Tratamientos inmunoterapéuticos para tumores
ES2954311T3 (es) Reemplazo de un preacondicionamiento citotóxico antes de una inmunoterapia celular
US11077141B2 (en) Anti-tumor T cell immunity induced by high dose radiation
ES2384168T3 (es) Procedimientos de tratamiento usando anticuerpos CTLA-4
US20150273033A1 (en) Combinations of checkpoint inhibitors and therapeutics to treat cancer
JP2022003043A (ja) 養子ｔ細胞療法と腫瘍溶解性ウイルス補助療法とを組み合わせる方法
US20220273722A1 (en) Anti-egfr/high affinity nk-cells compositions and methods for chordoma treatment
JP2022092001A (ja) 樹状細胞免疫療法
ES2865378T3 (es) Vacunas contra el cáncer de ovario
CN109937051A (zh) 治疗tim-3升高的方法
EA043393B1 (ru) Замена цитотоксического предварительного кондиционирования перед клеточной иммунотерапией
WO2016073866A1 (en) Polyfunctional lymphocytes as a biomarker of antitumor activity
Masuda et al. Identification of Phosphorylated Ribosomal Protein S6 as a Potential Predictor of Hepatocellular Carcinoma Response to Sorafenib by Pathway-Based Phosphoprotein Profiling