ES2876038T3 - Método, aparato y kit para la detección temprana de cáncer de mama - Google Patents

Método, aparato y kit para la detección temprana de cáncer de mama Download PDF

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Abstract

Un método para la detección precoz del cáncer de mama que comprende: (a) detectar y cuantificar la presencia de marcadores 8-OHDG, NSE, NGAL, CA 15.3 y EGFR en sangre u orina; y (b) establecer la probabilidad de afectación por cáncer de mama de acuerdo con una regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL; y donde el cálculo de la probabilidad de afectación por cáncer de mama comprende: (i) el cálculo de la relación de los valores detectados y cuantificados del marcador 8-OHDG con respecto a los valores detectados y cuantificados en del marcador EGFR; (ii) el producto de la relación (8-OHDG / EGFR) en la etapa (i) por el valor detectado y cuantificado del marcador NGAL; y (iii) el cálculo del producto de los valores detectados y cuantificados de los marcadores NGAL y CA 15.3; y donde la regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula: **(Ver fórmula)**

Description

DESCRIPCIÓN
Método, aparato y kit para la detección temprana de cáncer de mama
La presente invención está referida a un método y un aparato para la detección temprana de cáncer de mama que comprende un análisis de una pluralidad de marcadores sanguíneos.
Estado de la técnica anterior
El cáncer de mama es una proliferación maligna de las células epiteliales que revisten los conductos o lobulillos mamarios. Es una enfermedad clonal donde una célula individual producto de una serie de mutaciones somáticas o de línea germinal adquiere la capacidad de dividirse sin control ni orden, haciendo que se reproduzca hasta formar un tumor. Este tumor, que se inicia como una anomalía leve, invade tejidos vecinos y, finalmente, se propaga a otras partes del cuerpo. Es por ello necesario un diagnóstico eficiente y temprano que evite esta posibilidad.
Existen dos tipos principales de cáncer de mama. El carcinoma ductal infiltrante, que comienza en los conductos que llevan leche desde la mama hasta el pezón es, de largo, el más frecuente -aproximadamente un 80% de los casos-. En segundo lugar, lo ocupa el carcinoma lobulillar infiltrante -aproximadamente, el 10% de los casos que comienza en partes de las mamas llamadas lobulillos, que producen la leche materna. Los restantes tipos de cáncer de mama no superan, en conjunto, el 10% de los casos.
Los principales factores de riesgo de contraer cáncer de mama incluyen una edad avanzada, la primera menstruación a edad muy temprana, edad avanzada en el primer parto o nunca haber dado a luz, y antecedentes familiares. Entre el 5% y el 10% de los casos, el cáncer de mama es causado por mutaciones genéticas heredadas.
Para la detección del cáncer de mama se utilizan diferentes pruebas como la mamografía, ultrasonidos mamarios con transductores de alta resolución -ecografía- una prueba de receptores de estrógeno y progesterona o imágenes por resonancia magnética. El diagnóstico de cáncer de mama sólo puede adoptar el carácter definitivo por medio de una biopsia mamaria.
En el estado de la técnica se describen métodos de diagnóstico de cáncer de mama mediante un análisis de sangre en el que se detectan los anticuerpos compatibles con el desarrollo de un cáncer de mama. Se trata de pruebas no invasivas -análisis de sangre- en el que se separa el suero de la sangre y, una vez separado, se analizan los anticuerpos encontrados, como se describe en los documentos EP2446272, WO9858978 y WO2008032084.
Otro ejemplo que se describe en el estado de la técnica es el documento US2015/0024960 que se refiere a un diagnóstico precoz de cáncer de mama. Más particularmente, está referido a un conjunto de biomarcadores configurados para diagnosticar una aparición de cáncer de mama en sangre que comprende un anticuerpo que lo reconoce específicamente.
No obstante, según los consensos científicos en la materia, no existe ningún marcador eficaz, ni ningún método predictivo que contemple su uso. En el estado de la técnica se contempla -exclusivamente- el uso de marcadores CA 15.3 y CEA para la monitorización del tratamiento de la enfermedad avanzada [Sturgeon C.M, Duffy M.J, Stenmam U-H, et al. National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines for Use of Tumor Markers in Testicular, Prostate, Colorectal, Breast, and Ovarian Cancers. Clinical Chemistry (2008) Dec;54(12)] [Khatcheressian J.L, Hurley P. Bantug E, et al Breast Cancer Follow-Up and Management After PrimaryTreatment: American Society of Clinical Oncology Clinical Practice Guideline Update. J Clin Oncol 30. (2012)] y [ Harris L, Fritsche H, Mennel R, et el. American Society of Clinical Oncology 2007 update of recommendations for the use of tumor markers in breast cancer. J Clin Oncol (2007); 25: 5287-312],
En el documento [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14] se han publicado una serie de marcadores para el diagnóstico precoz del cáncer de mama que se considera como el estado de la técnica más cercano a la presente invención. El objetivo de este documento, y del estudio que describe, es determinar en los pacientes diagnosticados de cáncer, la posible existencia de algún indicador sanguíneo que se mantuviera elevado y, por tanto, ser utilizado como marcador predictivo de un hipotético cáncer de mama.
Por otro lado, en este trabajo se dividieron los marcadores en tres grupos:
i. Un primer grupo de marcadores que, desde un punto de vista clínico y científico están avaladas por una pluralidad de trabajos descritos en el estado de la técnica en relación con el cáncer de mama. En este primer grupo se encuentran los marcadores CEA y CA 15.3
ii. Un segundo grupo de marcadores que, aunque no tengan una relación clara con el cáncer de mama, se usan en la práctica clínica de forma sistemática en el diagnóstico de la enfermedad como, por ejemplo, CA 125, CYFRA 21.1, a-FETOPROTEÍNA, CA 19.9 y NSE (Neuron-Specific Enolase); y iii. un tercer grupo de marcadores experimentales, como NGAL, EGFR y 8-OHDG (respectivamente, NGAL (Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin), EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) y 8-OHDG (8-hydroxy-2'-deoxyguanosine)) que han sido estudiados en algunas series de cáncer de mama, pero no con la finalidad específica del diagnóstico precoz.
En el documento [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cáncer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14] se ha diseñado un estudio epidemiológico observacional analítico con diseño de casos y de controles, donde se incluyen 63 casos y 63 controles. Los casos son pacientes diagnosticados de cáncer de mama localizado (cT1-2 y cN0) pendientes de ser intervenidas. Los criterios de selección de estos pacientes fueron: (a) el haber sido diagnosticadas de cáncer de mama operable; (b) el no haber padecido anteriormente otro tumor; (c) el que la enfermedad no esté en fase avanzada o metastásica; (d) que no hubiera recibido tratamiento oncológico neoadyuvante previo; y (e) que acepte la inclusión en el estudio.
En cuanto al grupo de control se caracteriza por ser mujeres sanas cuyo criterio de selección fue que no tuvieran patologías crónicas ni antecedentes de ningún cáncer. También deben aceptar, lógicamente, la inclusión en el estudio.
Respecto al análisis estadístico tanto para caracteres cuantitativos como descriptivos. Para abordar el objetivo principal se emplearon contrastes de proporciones basados en el test de chi-cuadrado y contraste de medias basados en la prueba t de Student. Posteriormente, se realizó un análisis de regresión logística binaria por el método Wald, para finalizar con la realización de la metodología de la curva ROC.
Las dos series resultaron parecidas. No obstante, la serie de controles tuvo una edad media menor (45 años frente a 57 años) y, por tanto, una menor proporción de menopausia y, además, con mayor ocupación laboral diferente al grupo de amas de casa. La serie casos, sin embargo, tuvo menores niveles de vitamina D y un mayor IMC (índice de masa corporal). El resto de las características están bien balanceadas.
La descripción de los resultados de [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14] podría resumirse, en primer lugar, que el análisis de los marcadores reflejó diferencias significativas en ambos grupos para seis marcadores: cuatro rutinarios (CYFRA, NSE, CEA Y CA 15.3) y dos experimentales (EGFR y 8-OHDG). Sin embargo, cuando se aplican los puntos de corte en los marcadores que poseen rango de normalidad, solo resultó significativo el CA 15.3. La sensibilidad fue muy baja (11%) por lo que se descartó su utilidad en el diagnóstico precoz de forma individual.
El marcador EGFR fue significativamente mayor en los controles, como se indica en publicaciones anteriores del estado de la técnica. Sin embargo, el marcador 8-OHDG fue significativamente mayor en los casos, siendo la primera vez que se estudia este marcador en el diagnóstico precoz del cáncer de mama. Además, mediante el análisis de regresión logística y la construcción de una curva r Oc , se obtuvo una ecuación matemática compuesta por cinco marcadores, i.e. CA 15.3, NSE, NGAL, EGFR y 8-OHDG que alcanza una probabilidad de diagnóstico correcto del cáncer de mama del 91,8%.
Explicación de la invención
Es un objeto de la presente invención un método, un aparato y un kit de diagnóstico temprano del cáncer de mama que, partiendo de los hallazgos científicos de la experimentación realizados en el documento [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14 ] mejoren la eficiencia en el diagnóstico aumentando, además, la sencillez de este.
Es otro objeto de la presente invención incrementar la tasa de acierto de los marcadores clásicos en el diagnóstico del cáncer de mama. Este objeto se alcanza con el método de la reivindicación 1. En reivindicaciones dependientes se describe el empleo de marcadores adicionales que incrementan la eficacia del método de la invención.
El método de la invención, aparato que implementa este método y el kit de diagnóstico permite el apoyo en distintos casos clínicos mediante la inclusión de un algoritmo de cálculo que, a través de una extracción de sangre simple, permite determinar una pluralidad de marcadores tumorales la presencia o no de la enfermedad con una tasa de acierto superior al 90%.
El método, aparato y kit descrito en la presente invención permite el uso en grandes grupos de población de alto riesgo de distintas edades como complemento o sustitutivo de las mamografías, siendo un método no invasivo, no induce radiaciones iatrogénicas y, por tanto, pudiéndose repetir cuando fuese necesario y, además, aplicable a cualquier edad.
Finalmente, cabe indicar que, para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán de la descripción, dibujos y reivindicaciones. Además, la invención cubre todas las posibles combinaciones de realizaciones particulares y preferidas aquí indicadas.
Breve descripción de los dibujos
A continuación, se pasa a describir de manera muy breve una serie de dibujos que ayudan a comprender mejor la invención y que se relacionan expresamente con una realización de dicha invención, que se ilustra como un ejemplo no limitativo de ésta.
FIG.1 muestra1 muestra una curva ROC de un primer ejemplo de realización práctica de la invención.
FIG.2 muestra una segunda curva ROC de un segundo ejemplo de realización práctica de la invención.
FIG.3 muestra una tercera curva ROC de un tercer ejemplo de realización práctica de la invención.
Explicación de un modo detallado de realización de la invención
A partir del trabajo realizado y descrito en [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14] se ha repetido el ensayo descrito y se han analizado todas las correlaciones posibles, habiéndose localizado sorpresivamente que el comportamiento inverso de los marcadores 8-OHDG y EGFR permite evaluar su cociente en el diagnóstico precoz del cáncer de mama. El método de la invención permite determinar la utilidad clínica del cociente 8-OHDG/EFGR junto con otros marcadores tumorales en la fase inicial del cáncer de mama.
Sobre los analíticos obtenidos mediante el ensayo descrito en [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14] se ha realizado un nuevo estudio descriptivo de corte transversal con 62 pacientes con cáncer de mama localizado, pendientes de intervención quirúrgica y 62 mujeres sanas.
Una vez se han determinado los marcadores CA 15.3, CEA, CA125, CA 19.9, NSE, CYFRA 21.1, a-FETOPROTEÍNA y marcadores experimentales en cáncer de mama (NGAL, EGFR y 8-OHDG) definiendo la ratio (8-OHDG)/(EGFR)*100. Para la comparación de los niveles por grupos se utiliza la U de Mann-Whitney y la regresión logística multivariante (hacia delante de Wald) para predecir la probabilidad de cáncer en función de la ratio 8-OHDG/EGFR aislado y con el resto de los marcadores evaluados. La rentabilidad diagnóstica ha sido evaluada mediante el área de la curva ROC (figuras 1 a 3).
Se han detectado niveles más elevados de EGFR en los controles (5,097 versus 5,81 ng/ml con p<0,001) y 8OHDG en los casos (9,85 versus 7,37 ng/ml con p<0,001) diferencias que la hacen más marcadas con la ratio 8OHDg / EFGR (198 versus 122 con p<0,001).
Los marcadores CEA, CYFRA, NSE y NGAL fueron más elevados en los pacientes (p<0,05) aunque su comportamiento aislado mostró escasa sensibilidad diagnóstica. Además, resultaron variables de riesgo para la enfermedad, como la edad, la menopausia, la ocupación laboral, el IMC y los niveles bajos de vitamina D. El análisis de la regresión logística de la ratio evaluado presentó un rendimiento aislado del 82,4% (vid ejemplo 1) que se aumentó al 91,2% (vid ejemplo 2) combinando dicho cociente con otros marcadores, obteniendo una ecuación predictora multivariante que incluye NSE y NGAL, que se puede mejorar hasta un 92,8% debido a la interacción sinérgica de distintos marcadores (vid ejemplo 3).
Ejemplo 1. Interés clínico de la ratio 8-OHDG/EGFR. Análisis bi-variante.
En las siguientes tablas se muestran los resultados del análisis de los resultados del ensayo para el diagnóstico precoz del cáncer de mama. En la figura 1 se muestra la curva ROC del ensayo.
Test Mann-Whitney (para muestras independientes):
Muestra 1 (Casos)
Figure imgf000004_0001
Muestra 2 (Controles)
Tamaño de la muestra 62 62
Valor inferior 0,0465 0,377
Valor superior 9,462 2,920
Figure imgf000004_0002
Mediana 1,976 1,219
95% IC para mediana 1,776 a 2,270 1,068 a 1,393
Rango intercuartil 1,527 a 2,554 0,022 a 1,547
Rango medio de la muestra 1 82,098
Rango medio de la muestra 2 42,226
Figure imgf000004_0003
Mann-Whitney U 665,00
Z estadística (muestra mayor) 6,202
Probabilidad p<0,0001
Área de la regresión logística y curva ROC de la figura 1:
Área de la curva ROC 0,824
Error estándar 0,038
95% del intervalo de confianza
Figure imgf000005_0001
0,750 a 0,898
Z estadística 8,548
Probabilidad
Figure imgf000005_0002
p<0,0001
Por tanto, el análisis de la regresión logística de la ratio evaluado presentó un rendimiento del 82,4% con una p<0,0001 para el empleo aislado de la ratio 8OHDG/EGFR en la detección precoz del cáncer de mama a un coste significativamente inferior al método propuesto en [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug 14].
Ejemplo 2. Interés clínico de la ratio 8-OHDG/EGFR. Análisis multivariante.
En las siguientes tablas se muestran los resultados del análisis de los resultados del ensayo para el diagnóstico precoz del cáncer de mama. En la figura 2 se muestra la curva ROC del ensayo. En este ejemplo se mejora el valor predictivo hasta el 91,2% en un modelo sin iteraciones, con el empleo de la ratio 8OHDG/EGFR y los marcadores NSE y NGAL, en la detección precoz del cáncer de mama a un coste inferior al método propuesto en el documento [Bayo J, Castaño MA, Rivera F, Navarro F. Analysis of blood markers for early breast cancer diagnosis. Clin Transl Oncol. 2017 Aug.
14] ya que se emplea un marcador menos (CA 15.3) que en dicho análisis.
Parámetros estimados mediante regresión logística multivariante:
Iter.1 B E.T. WALD GL SIGMA EXP(B) 8OHDG/EGFR 2,588 0,650 21,378 1 0,000 13,304 NSE -0,096 0,030 10,030 0,002 0,908 CA153
Figure imgf000005_0005
0,061 0,039
Figure imgf000005_0003
2,455
Figure imgf000005_0004
0,117 1,063 CA125 0,039 0,042 0,877 1 0,349 1,040 NGAL -0,303 0,128 5,582 1 0,018 0,739 CYFRA 0,626 0,436 2,066 1 0,151 1,871
CEA 0,188 0,155 1,483 1 0,223 1,207 Constante -4,752 1,332 12,730 1 0,000 0,009
Donde B es el parámetro estimado, ET es el error típico, GL son los grados de libertad y SIGMA es la desviación típica. Se tendrán en cuenta los tres parámetros con una desviación típica inferior (ratio 8OHDG/EGFR, NSE y NGAL).
El resumen del modelo es el siguiente:
Paso -2log de la verosimilitud R2 de Cox y Snell R2 Nagelkerke
1 93,807 0,464 0,619
En este caso hay que tener en cuenta que la estimación ha finalizado en el número de iteración 6 porque las estimaciones de los parámetros han cambiado en menos de 0,001. Por tanto, la fórmula es la siguiente:
8 - OHDG
Logit = -4,752 2,588 - 0,096 * (NSE) 0,303(NGAL)
" ( EGFR ) '
pL o g it
P = 1 eL o g it * 100
Área de la regresión logística y curva ROC de la figura 2:
Área de la curva ROC 0,912
Error estándar 0,027
95% del intervalo de confianza 0,859 a 0,966
Z estadística 15,187
Probabilidad
Figure imgf000005_0006
p<0,0001
Por tanto, el análisis de la regresión logística de la ratio evaluado presentó un rendimiento del 91,2% con una p<0,0001.
Ejemplo 3. Interés clínico de la ratio 8OHDG/EGFR. Análisis multivariante.
En las siguientes tablas se muestran los resultados del análisis de los resultados del ensayo para el diagnóstico precoz del cáncer de mama. En la figura 3 se muestra la curva ROC del ensayo. En este ejemplo se mejora el valor predictivo hasta el 92,8 % en un modelo sin iteraciones, con el empleo de la ratio 8-OHDG/EGFR y los marcadores NSE, NGAL y NGAL*CA15.3, en la detección precoz del cáncer de mama con una mayor precisión diagnóstica.
A continuación, se muestran los parámetros estimados mediante regresión logística multivariante en la iteración 11, que ofrece el mejor resultado del cálculo de la regresión logística:
Iter.11 B E.T. WALD GL SIGMA EXP(B) 8OHDG/EGFR 5,125 1,053 23,697 1 0,000 168,168 NSE -0,282 0,088 10,376 1 0,001 0,754 RATIONGAL -0,471 0,123 14,724 1 0,000 0,624 CYFRANSE 0,140 0,054 6,655 1 0,010 1,151 NGALCA153 0,023 0,008 7,855 1 0,005 1,023 Constante -5,634 1,346 17,527 1 0,000 0,004
Donde B es el parámetro estimado, ET es el error típico, GL son los grados de libertad y SIGMA es la desviación típica. En cuanto a los parámetros son RATIO (i.e. la relación entre 8OHDG/EGFR), NSE (marcador NSE), RATIONGAL (i.e. el producto entre RATIO, que es la relación entre los marcadores 8OHDG/EGFR, y el marcador NGAL), CYFRANSE (i.e. la relación entre los marcadores CYFRA y NSE) y NGALCA153 (i.e. la relación entre los marcadores NGAL y CA 15.3).
Se tendrán en cuenta los tres parámetros con una desviación típica inferior (no teniendo en cuenta CYFRANSE). Por tanto, la fórmula es la siguiente:
8 - OHDG
Logit = -5,634 5,125 * RATIO ( ) - 0,282 * (NSE) - 0.471RATIO * (NGAL) 0,14 * (NGAL) * (C4153)
EGFR
eL o g it
P =
1 eL°3u 100
Área de la regresión logística y curva ROC de la figura 3:
Área de la curva ROC 0,928
Error estándar 0,025
95% del intervalo de confianza 0,879 a 0,976
Z estadística 17,292
Probabilidad
Figure imgf000006_0001
p<0,0001
Por tanto, el análisis de la regresión logística de la ratio evaluado presentó un rendimiento del 92,8% con una p<0,0001.
Nótese que, durante los ensayos, se ha demostrado que existe interacción entre algunos marcadores y se ha ensayado la ecuación con interacción (ejemplo 3) y sin interacción (ejemplo 2) entre ellos, observándose que, teniendo en cuenta las interacciones (relaciones sinérgicas) entre marcadores, los resultados en cuanto a predicción son mejores (un 92,8% frente a un 91,2%) hecho este que no estaba descrito en el estado de la técnica.
El método de la invención puede ser implementado de distintas formas. Así, por ejemplo, puede ser implementado en un aparato que comprenda medios configurados para ejecutar el método de la invención o puede ser distribuido mediante un kit que comprenda los marcadores indicados en cualquiera de las realizaciones (ejemplos 1 a 3) y medios para ejecutar el método descrito que, lógicamente, comprenden medios para la realización de los análisis de sangre u orina, así como medios para el cálculo de la probabilidad de afectación del cáncer de mama de acuerdo con los ejemplos descritos y que pueden ser fácilmente implementados, por ejemplo, en un sistema informático con capacidad de cálculo suficiente.
Este sistema informático, de forma no limitativa, puede ser desde una aplicación ejecutable por un ordenador, tableta o teléfono móvil a un dispositivo electrónico dedicado, siendo la única condición exigible que implemente, mediante instrucciones ejecutables por un procesador, las fórmulas indicadas en cada uno de los ejemplos.

Claims (3)

REIVINDICACIONES
1. Un método para la detección precoz del cáncer de mama que comprende: (a) detectar y cuantificar la presencia de marcadores 8-OHDG, NSE, NGAl , CA 15.3 y EGFR en sangre u orina; y (b) establecer la probabilidad de afectación por cáncer de mama de acuerdo con una regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL; y donde el cálculo de la probabilidad de afectación por cáncer de mama comprende: (i) el cálculo de la relación de los valores detectados y cuantificados del marcador 8-OHDG con respecto a los valores detectados y cuantificados en del marcador EGFR; (ii) el producto de la relación (8-OHDG / EGFR) en la etapa (i) por el valor detectado y cuantificado del marcador NGAL; y (iii) el cálculo del producto de los valores detectados y cuantificados de los marcadores NGAL y CA 15.3; y donde la regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula:
/8 - OHDG\ , N /8 - OHDG\ r
Logit = -5.634 5.125 *R A T IO (^ — —— ) - 0.282 * (NSE) - 0.471 * RATIO ( „ „ „ „ ) * (NGAL) 0.4 V EGFR ) V EGFR )
* (NGAL) * (C4153)
eLogit
P
1 eL°3u 100
2. Un dispositivo para la detección precoz del cáncer de mama que comprende un procesador o procesadores dispuestos para ejecutar una pluralidad de instrucciones para calcular la probabilidad de afectación por cáncer de mama según una regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores. 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL; y donde el cálculo de la probabilidad de afectación por cáncer de mama comprende: (i) el cálculo de la relación de los valores detectados y cuantificados del marcador 8-OHDG con respecto a los valores detectados y cuantificados en del marcador EGFR; (ii) el producto de la relación (8-OHDG / EGFR) en el paso (i) por el valor detectado y cuantificado del marcador NGAL; y (iii) el cálculo del producto de los valores detectados y cuantificados de los marcadores NGAL y CA 15.3; y donde la regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula:
Figure imgf000007_0001
4
3. Un producto de software configurado para ser ejecutado por un procesador o procesadores que comprende una pluralidad de instrucciones para calcular la probabilidad de afectaciones de cáncer de mama según una regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL; y donde el cálculo de la probabilidad de afectación por cáncer de mama comprende: (i) el cálculo de la relación de los valores detectados y cuantificados del marcador 8-OHDG con respecto a los valores detectados y cuantificados en del marcador EGFR; (ii) el producto de la relación (8-OHDG / EGFR) en el paso (i) por el valor detectado y cuantificado del marcador NGAL; y (iii) el cálculo del producto de los valores detectados y cuantificados de los marcadores NGAL y CA 15.3; y donde la regresión logística de los valores detectados y cuantificados en sangre u orina de una combinación de los marcadores 8-OHDG, EGFR, NSE, CA 15.3 y NGAL se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula:
Figure imgf000007_0002
4
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