ES2857682T3 - Creación de un orificio en un huevo de ave para la determinación del sexo del huevo de ave - Google Patents

Creación de un orificio en un huevo de ave para la determinación del sexo del huevo de ave Download PDF

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Abstract

Procedimiento para el posicionamiento de un punto de medición (23) en al menos un vaso sanguíneo (5, 18, 19) de un huevo de ave (1) abierto para la posterior determinación del sexo del huevo de ave (1) con la creación de un orificio (4) en el huevo de ave (1), que presenta al menos un polo romo (2) y un polo puntiagudo (3) y una cáscara de huevo (13) con una membrana de cáscara interior (16) y una membrana de cáscara exterior (15) que está más cerca de la cáscara calcárea (14) del huevo de ave (1), abriéndose el huevo de ave (1) para realizar al menos una medición óptica relativa a la sangre, caracterizado por que la creación del orificio (4) en el polo romo (2) del huevo de ave (1) se realiza mediante una unidad de perforación, afectando el orificio (4) a la cáscara calcárea (14) y a la membrana de cáscara exterior (15) que forma una cámara de aire (17) con una membrana de cáscara interior (16), y permaneciendo la membrana de cáscara interior (16) intacta, registrándose en la zona del orificio (4) en el polo romo (2), por debajo de la membrana de cáscara interior intacta (16), al menos un vaso sanguíneo (5, 19, 18) y excitándose la sangre en el mismo mediante una radiación incidente predeterminada (30), así como midiéndose y detectándose su retrodispersión (26) relacionada con la sangre y guiada a través de la membrana de cáscara interior intacta (16) y evaluándose la misma para una determinación del sexo, caracterizado por que los ejes (33, 36) que se pueden girar/inclinar en un plano xy se giran por medio de un dispositivo de inclinación (11) controlado por motor y conectado a una unidad de control central (9), de modo que, si el embrión (18) se desvía del eje central del huevo (12), el embrión (18) desviado se centra directamente en la zona del eje del huevo (12), consiguiéndose una distancia mínima entre la curvatura (38) de la membrana de cáscara interior (16) y el embrión (18).

Description

DESCRIPCIÓN
Creación de un orificio en un huevo de ave para la determinación del sexo del huevo de ave
La invención se refiere a un procedimiento para el posicionamiento de un punto de medición en al menos un vaso sanguíneo de un huevo de ave abierto para la posterior determinación del sexo del huevo de ave.
En general, según la figura 1, un huevo de gallina 1 presenta en el 3,5° día de incubación una cáscara de huevo 13 formada por una cáscara calcárea 14 con una membrana de cáscara externa 15 y una membrana de cáscara interior 16 adheridas, una cámara de aire 17, un embrión 18 con vasos sanguíneos extraembrionarios 19, una clara de huevo 20 y una yema 21 rodeada por la membrana vitelina 22. La cáscara del huevo 13 proporciona una importante barrera protectora para el huevo 1 durante toda la incubación. La cáscara de cal 14 protege el contenido del huevo de impactos mecánicos durante la incubación. A la cara interior de la cáscara calcárea 14 se ajustan membranas de cáscara formadas por la membrana de cáscara exterior 15 y la membrana de cáscara interior 16. Las membranas de cáscara impiden la penetración de microorganismos y regulan el ambiente dentro del huevo 1, por ejemplo, el equilibrio de los fluidos. Dependiendo del momento y hasta qué punto se rompe la barrera protectora mediante una así llamada "ventana" de la cáscara de huevo 13, se puede influir fuertemente en el desarrollo del embrión 18 y en las tasas de eclosión, entendiéndose por la realización de una ventana la creación de un orificio 8 en la cáscara de huevo 13.
Por lo tanto, la tasa de eclosión de los huevos no incubados disminuye drásticamente después de abrir una ventana a través de toda la cáscara de huevo, mientras que la eliminación de sólo una ventana de la cáscara calcárea, conservando la membrana de la cáscara, no afecta a la tasa de eclosión, como se describe en el artículo de J. Brake, et al: Egg Handling and Storage, 1997, Poultry science 76; págs. 144-151.
Un procedimiento para el sexado de huevos de ave se revela según la publicación intermedia del documento WO 2017/017277 A1, en el que se crea un orificio en el polo romo del huevo dejando intacta la membrana interior dentro de la cámara de aire. A continuación, se registra en la zona del orificio un vaso sanguíneo por debajo de la membrana interior, se analiza la sangre mediante espectroscopia Raman y se evalúa el resultado de la medición para determinar el sexo.
Según R. Galli, et al. Analytical Chemistry 2016, 88, págs. 8657-8663 se revelan un procedimiento y un dispositivo para sexar huevos de ave, en el que se crea un orificio en el polo puntiagudo del huevo, se registra a continuación un vaso sanguíneo en la zona del orificio, se analiza la sangre contenida en él mediante espectroscopia Raman y se evalúa el resultado de la medición para determinar el sexo.
De acuerdo con el estado de la técnica, los procedimientos para la determinación del sexo en una fase muy temprana de la incubación, es decir, en un período comprendido entre el inicio de la incubación y el séptimo día de incubación antes de la aparición de la sensación de dolor, requieren una ventana 8 en la cáscara del huevo 13 para proporcionar acceso a las mediciones ópticas, como se describe en las memorias impresas DE 102014010150 A1: Procedimiento y dispositivo para la determinación del sexo in-ovo por espectroscopia Raman de huevos de gallina fecundados e incubados, DE 10 2016 005 974. 5: Procedimiento y dispositivo para el ajuste del enfoque láser de un láser de excitación en vasos sanguíneos para mediciones ópticas para la determinación del sexo de los huevos de ave, y DE 10 2016004051.3: Procedimiento y un dispositivo para la determinación óptica del sexo in-ovo de los huevos de ave fecundados e incubados.
Una desventaja de los procedimientos mencionados en las memorias impresas indicadas consiste en que, en dependencia del momento del análisis y del tamaño del orificio, la tasa de eclosión puede verse afectada en estos procedimientos por la ventana, siempre que la ventana 8 se cree tanto a través de la cáscara calcárea 14 como a través de las dos membranas de cáscara 15, 16. Este es el caso cuando se utiliza un láser según los parámetros indicados en las memorias impresas antes mencionadas en cualquier punto del huevo de gallina 1.
En principio, la ventana se puede crear en cualquier parte del huevo de ave, pero con preferencia se crea principalmente en el polo puntiagudo.
En una planta de incubación comercial, los huevos según la figura 2 se incuban en posición vertical con el polo puntiagudo 3 orientado exclusivamente hacia abajo. El polo romo 2 se orienta hacia arriba, ya que de lo contrario no se produciría ningún desarrollo embrionario. Cuando se crea un orificio 8 en el polo puntiagudo 3, como se muestra en la figura 2b, los huevos 1 se giran antes de la apertura del huevo y del posterior sexado en 180°. Dado que la membrana de cáscara exterior 15 y la cáscara calcárea 14 están adheridas entre sí, la creación de un orificio 8 en el polo puntiagudo 3 implica normalmente la eliminación tanto de la cáscara calcárea 14 como de toda la membrana de cáscara 15, 16 dentro de la perforación practicada. El escape parcial o completo del aire de la cámara de aire 17 provoca el hundimiento del contenido del huevo según la figura 2c, lo que requiere un seguimiento continuo de los vasos sanguíneos 19 en la dirección vertical z del eje del huevo 12 durante el registro de la retrodispersión. Después del sexado, los huevos se sellan según la figura 2d, dándoles de nuevo la vuelta en 180°. Las figuras 2a, 2b, 2c, 2d muestran la medición óptica convencional en el polo puntiagudo 3 de un huevo de gallina incubado 1 y los giros necesarios 24 y 25. En la figura 2b y figura 2c y figura 2c la membrana interior de la cáscara 16 en la zona del orificio está defectuosa o dañada, perforada y/o se ha eliminado. En la figura 2d se ha dispuesto un cierre 29 que cierra todo el orificio con las membranas de carcasa perforadas 15 y 16.
El inconveniente radica en el alto retraso de tiempo debido a las rotaciones necesarias antes de poder realizar una medición.
Por lo tanto, cuando la perforación láser se coloca en el polo puntiagudo 3 según el estado de la técnica, el embrión 18 se sitúa directamente por debajo de la cáscara de huevo 13 tras la rotación previa del huevo 1, como se muestra en la figura 2b. No se puede descartar una lesión del embrión 18 o de los vasos sanguíneos extraembrionarios 19 debido a un daño térmico durante la colocación de la perforación láser, debido a la variabilidad del grosor de la cáscara calcárea.
Al abrir el huevo por el polo puntiagudo 3, la gravedad que actúa bajo la presión ambiental (debido fundamentalmente a la masa de la yema y de la clara de huevo) sobre la cámara de aire 17 provoca el escape parcial o total del aire. Esto da lugar a un movimiento vertical del vaso sanguíneo 19 (dirección z/eje del huevo 12) en el orden de magnitud de la altura de la burbuja de aire 17 antes o durante el registro de la retrodispersión. Dado que el vaso sanguíneo 19 expuesto a la radiación láser 30 puede salirse del foco del láser durante este proceso, es necesario un seguimiento del vaso.
Por consiguiente, la invención tiene por objeto proporcionar un procedimiento para el posicionamiento de un punto de medición en al menos un vaso sanguíneo de un huevo de ave abierto para la posterior determinación del sexo del huevo de ave diseñado de forma idónea, de manera que se puedan evitar al menos las rotaciones de los huevos incubados y el seguimiento del vaso cuando el huevo de ave está abierto.
La tarea se resuelve con las características de las reivindicaciones independientes, indicando las reivindicaciones formas de realización ventajosas de la invención.
En el procedimiento para el posicionamiento de un punto de medición en al menos un vaso sanguíneo de un huevo de ave abierto para la posterior determinación del sexo del huevo de ave con la creación de un orificio en el huevo de ave, que presenta al menos un polo romo y un polo puntiagudo así como una cáscara de huevo con una membrana de cáscara interior y una membrana de cáscara exterior más cercana a la cáscara calcárea del huevo de ave, el huevo de ave se abre para realizar al menos una medición óptica relativa a la sangre, creándose el orificio en el polo romo del huevo de ave por medio de una unidad de perforación y afectando el orificio a la cáscara calcárea y a la membrana de la cáscara exterior que forma una cámara de aire con la membrana de la cáscara interior, mientras que la membrana de la cáscara interior permanece intacta, registrándose en la zona del orificio, en el polo romo por debajo de la membrana de cáscara interior intacta, al menos un vaso sanguíneo y excitándose la sangre mediante una radiación incidente predeterminada, cuya retrodispersión guiada a través de la membrana intacta de la membrana de cáscara interior intacta se mide, se detecta y se evalúa para una determinación del sexo, girándose ejes giratorios/pivotantes en un plano xy por medio de un dispositivo de inclinación controlado por motor y conectado a una unidad de control central, de modo que, al desviarse el embrión del eje central del huevo, el embrión desviado se coloque de forma centrada en la propia zona del eje del huevo, consiguiéndose así una distancia mínima entre la curvatura de la membrana de cáscara interior y el embrión.
En este proceso se abre la cáscara calcárea con la membrana de cáscara exterior adherida y se analiza espectroscópicamente la sangre de al menos un vaso sanguíneo, manteniéndose intacta la membrana de cáscara interior durante el registro de las señales de medición ópticas espectroscópicas a través de al menos la membrana de cáscara interior de la cáscara del huevo.
En el marco de la invención se entiende por registro de un vaso sanguíneo la localización y la selección de al menos un vaso sanguíneo extraembrionario o embrionario del huevo de ave abierto previsto para la excitación de la sangre y la posterior determinación del sexo, realizándose durante el registro del vaso sanguíneo también el enfoque de la unidad óptica en el vaso sanguíneo registrado (enfoque en el plano x, y, z).
Antes y durante la medición se puede llevar a cabo un acondicionamiento de la temperatura del portahuevos y del entorno de medición del huevo con una unidad de acondicionamiento asignada.
Después de la detección de la retrodispersión seleccionada el orificio en el polo se cierra y se continúa con la incubación del huevo, si el sexo del mismo corresponde a un a hembra.
En el caso de la creación de ventanas en el polo romo del huevo en la zona de la burbuja de aire se obtienen las siguientes ventajas:
- Si se parte del posicionamiento vertical del huevo con el polo romo orientado hacia arriba, que se utiliza en todas las incubadoras comerciales, el huevo no se gira ni se le da la vuelta antes y después del sexado.
- Debido a las diferencias de densidad, el embrión, incluidos los vasos sanguíneos extraembrionarios, se encuentra siempre en el punto más alto del interior del huevo, es decir, en la zona del polo romo, durante los primeros días de incubación. Al realizar una perforación láser en posición de incubación vertical, es decir, según la invención con el polo romo hacia arriba, el embrión se encuentra por debajo de la membrana de cáscara interior. Entre la cáscara calcárea y la membrana de cáscara interior la burbuja de aire se encarga de que el riesgo de lesión del embrión durante la perforación láser se reduzca considerablemente.
- La apertura del huevo o la creación del orificio implica la eliminación de la cáscara calcárea y exclusivamente de la membrana de la cáscara exterior dentro de la perforación, el embrión permanece protegido bajo la membrana de cáscara interior contra influencias ambientales externas y de la posible introducción de gérmenes. Mediante este procedimiento mucho menos invasivo, se consigue según la invención una mejora significativa de la tasa de eclosión.
- La conservación de toda la membrana de cáscara interior también permite preservar al máximo las relaciones de posición entre la yema, la clara y el aire dentro del huevo. Durante la incubación, se produce una ligera presión negativa en el huevo.
- Cuando el huevo se abre por el polo romo, no se produce ningún movimiento vertical de los vasos sanguíneos debido al cambio de presión, dado que no existe aire comprimible por debajo de la yema y de la clara. Como consecuencia del cambio en las fuerzas que actúan sobre la membrana de cáscara interior al cambiar la presión de una ligera presión negativa a la presión ambiente con la creación del orificio del huevo en el polo romo, sólo se produce un cambio mínimo en la curvatura de la membrana de cáscara interior. Este cambio de presión da lugar a que el embrión con los vasos sanguíneos extraembrionarios se fije de forma reversible en la membrana de cáscara interior mientras dure el registro de la retrodispersión, lo que impide un movimiento horizontal de los vasos sanguíneos en dirección x,y. Esto elimina la necesidad de un seguimiento de los vasos sanguíneos o del objetivo (seguimiento de los vasos) tanto en dirección vertical como horizontal. No se produce ningún movimiento de los vasos sanguíneos fuera del foco del láser, que podría ser causado por una reducción del volumen del interior del huevo, puesto que el huevo no está expuesto a ningún descenso fuerte de la temperatura durante el registro de la retrodispersión.
El dispositivo según la invención para el posicionamiento de un punto de medición en al menos un vaso sanguíneo de un huevo de ave abierto dentro de una bandeja de huevos para la posterior determinación del sexo del huevo de ave a la hora de poner en práctica el procedimiento antes mencionado comprende al menos
- una unidad generadora de orificios para la creación de un orificio en el polo romo del huevo de ave,
- un dispositivo de medición óptica para medir la retrodispersión que afecta a la sangre,
- dos ejes giratorios/pivotantes en un plano xy conectados a la bandeja de huevos y accionados por señales de rotación/inclinación,
- un dispositivo de inclinación controlado por motor conectado a los ejes y
- una unidad de control central conectado al dispositivo de inclinación controlado por motor,
en el que los ejes se giran de manera que, cuando el embrión se desvía del eje central del huevo, el embrión que se desvía se centra directamente en la zona del eje del huevo centrado, con lo que se consigue una distancia mínima entre la curvatura de la membrana de cáscara interior y el embrión.
Las conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor y los ejes se forman al menos por medio de las líneas y conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor y la unidad de control central.
Antes de la creación del orificio 4 en el polo romo 2 se pueden centrar el embrión 18 y los vasos sanguíneos 19, 5. Las diferencias de densidad en el huevo 1 durante los primeros días de incubación dan lugar a que el embrión 18, incluidos los vasos sanguíneos extraembrionarios 19, se encuentre siempre en el punto más alto del interior del huevo, es decir, en la zona del polo romo 2. Esto significa que, en caso de incubación en la posición de incubación vertical, como la que se utiliza en las incubadoras comerciales, el embrión 18 y los vasos sanguíneos 19 se encuentran directamente por debajo de la membrana de cáscara interior 16 en el polo romo 2 del huevo 1, en concreto normalmente en el centro del huevo 1, como se muestra en la figura 4c. En algunos casos, el embrión 18 puede adoptar debido a la variabilidad natural de los huevos 1, tal como se muestra en la figura 4a, una posición ligeramente desplazada lateralmente con respecto al eje vertical del huevo 12 y se mantiene en esta posición mediante débiles fuerzas de adhesión a la membrana de cáscara interior 16. En la figura 4c se muestra el caso normal.
Para aumentar el porcentaje de huevos en los que el embrión 18 flota centrado por debajo de la membrana de cáscara interior 16 se emplea, según la invención, una unidad de centrado de embriones 8 con un dispositivo de inclinación 11 conforme a la figura 6. De este modo se consigue que para cada medición de la determinación del sexo se encuentre al menos un vaso sanguíneo 19 con el mayor diámetro posible en el campo de medición 23.
El plexo sanguíneo extraembrionario 19 al cuarto día de incubación describe una superficie aproximadamente circular 23 como punto de medición, como se representa en la figura 4b. En principio, la medición es factible en cualquier vaso sanguíneo 19, 5, 18 de esta superficie circular 23, pero en los vasos sanguíneos 19 de mayor tamaño la intensidad de la señal es mayor y, por tanto, la duración de la medición espectroscópica relativa a la sangre es más corta. Los vasos sanguíneos extraembrionarios 19 en el centro, es decir, en conexión directa con la circulación sanguínea embrionaria, presentan el diámetro mayor. Por el contrario, en las proximidades del seno terminal, el diámetro de los vasos sanguíneos más finamente ramificados 5 se hace más pequeño.
El centrado del embrión 18 se produce preferiblemente antes de la creación de la ventana de la cáscara en el polo romo 2 del huevo 1, ya que el embrión 18 con los vasos sanguíneos extraembrionarios 19 se adhiere después de la apertura 4 débilmente a la membrana de cáscara interior 16, siendo esta adherencia reversible.
En el dispositivo 37 según la invención con la unidad de control de centrado/unidad de control central/unidad de centrado de embriones 9 y el dispositivo de inclinación 11, los huevos 1 se inclinan o giran individualmente o en una bandeja de huevos 10 mediante un movimiento en un ángulo de al menos 10° a 90°, preferiblemente de entre 30° -60°, respectivamente en dirección x e y, entendiéndose por bandeja de huevos 10 los portahuevos 6 de las incubadoras, que con frecuencia contienen varias veintenas hasta cincuentenas de soportes y se utilizan a menudo en incubadoras comerciales. La velocidad de paso de la bandeja 10 y el ángulo de inclinación regulable se ajustan para no interferir en el desarrollo embrionario
La creación de un orificio 4 en la cáscara calcárea 14 del huevo de ave 1 se realiza mediante una unidad de perforación preferiblemente con un láser y, según la invención, en el polo romo 2 con un diámetro de 3 mm a 18 mm, con preferencia de entre 8 mm y 15 mm.
La detección de los vasos puede lograrse utilizando una unidad óptica para el enfoque en un solo vaso sanguíneo (enfoque en el plano x, y, z) a través de la membrana de carcasa interior 16. Sin embargo, la transparencia de la membrana de cáscara interior 16 es más o menos fuerte en los huevos de ave variables, también en dependencia de la raza.
Por lo tanto, se ha podido descubrir que para la determinación del sexo de los huevos de ave es necesario que no se utilice exclusivamente el movimiento de flujo de los eritrocitos como indicador de nitidez para la detección de los vasos sanguíneos, sino que según la invención se usen señales ópticas adicionales, por ejemplo, señales de medición relacionadas con la intensidad o señales de tomografía de coherencia óptica (OCT). Por esta razón, la excitación de la sangre se produce según la invención por medio de radiación incidente 30 y del registro de la retrodispersión (radiación Raman 27 y/o radiación de fluorescencia 28) con una unidad óptica.
El registro de los vasos sanguíneos y la excitación óptica de la sangre se realizan posicionando el foco de la radiación de excitación incidente en un vaso sanguíneo y utilizando una señal generada por un láser. Esta señal se enfoca preferiblemente de forma que la dimensión del punto láser sea comparable a la del diámetro de los vasos sanguíneos o menor. La longitud de onda del láser se elige de manera que la excitación de la radiación incidente genere una señal de la sangre que se desplaza espectralmente respecto a la longitud de onda del láser de excitación.
La intensidad de la retrodispersión se mide en el rango parcial del espectro que contiene información específica de la sangre. La señal obtenida de la sangre que se encuentra en los vasos difiere en intensidad y/o características espectrales de las señales obtenidas de las estructuras del huevo fuera de los vasos sanguíneos.
La posición de enfoque correcta corresponde a las coordenadas en las que la señal de intensidad alcanza un máximo. A este respecto, la intensidad de la fluorescencia o la intensidad y el perfil de una banda Raman o las intensidades y los perfiles de múltiples bandas Raman de un componente sanguíneo pueden formar la señal relacionada con la intensidad específica de la sangre que se utiliza según la invención para encontrar el foco a través de la membrana de cáscara interior. El láser utilizado para el posicionamiento del foco del láser en la sangre también puede ser un láser distinto al que sólo se emplea para la excitación de la señal Raman y/o de fluorescencia específica del sexo. El láser de posicionamiento se elige en este caso de modo que se genere una señal específica para la sangre (pero no necesariamente específica para el sexo) de intensidad muy fuerte y pueda ser registrada con sistemas de detección sencillos, económicos y rápidos. También es posible utilizar un láser de posicionamiento, que es mucho más económico en comparación con las fuentes de láser utilizadas para la excitación de la señal específica del sexo de la sangre.
Además, hay que tener en cuenta que la transparencia limitada de la membrana de la cáscara interior no sólo requiere una adaptación según la invención del procedimiento de posicionamiento del foco láser en el vaso sanguíneo, sino que también influye en la intensidad de la señal específica del sexo adquirida para la determinación del sexo de los huevos.
La membrana de cáscara interior del huevo es un medio no homogéneo que dispersa tanto la radiación láser incidente como la señal específica del sexo generada y emitida por la sangre. Para poder corregir las variaciones en la transparencia de la membrana de cáscara interior entre los huevos, se tiene que utilizar un parámetro que corrija la intensidad de la señal específica del sexo y compense la pérdida de intensidad debida a la menor transparencia de la membrana.
Es posible que se utilicen varios láseres para el registro de los vasos sanguíneos y la excitación de la sangre. Se puede emplear un láser para la excitación de señales Raman y de fluorescencia específicas del sexo en el rango de 790 nm y 1050 nm, mientras que un segundo láser verde o azul se puede utilizar para excitar una fluorescencia intensa de la hemoglobina específica de la sangre entre 550 nm y 750 nm. La intensidad de esta fluorescencia se puede medir con fotodiodos y utilizar para el posicionamiento del foco del láser en el vaso sanguíneo.
Las ventajas del procedimiento según la invención son las siguientes:
- Los huevos de gallina se incuban en las incubadoras comerciales exclusivamente en posición vertical.
Tradicionalmente, el polo puntiagudo se debe posicionar hacia abajo, dado que de lo contrario no se produce el desarrollo embrionario. El sexado espectroscópico en el polo puntiagudo requiere, por lo tanto, girar los huevos dos veces antes y después del sexado espectroscópico (como se muestra en las figuras 2a, 2b, 2c, 2d). Sin embargo, con la determinación del sexo en el polo romo 2 según la invención, se omite este doble giro, lo que resulta positivo para el desarrollo embrionario.
- En la apertura de los huevos por el polo puntiagudo 3 conocida por el estado de la técnica se produce, a causa de las diferencias de presión en el huevo 1, un escape parcial o total del aire de la burbuja de aire, lo que conlleva un movimiento vertical de los vasos sanguíneos. Por el contrario, al mantener la membrana de carcasa interior 16 según la invención, los vasos sanguíneos 5, 18,19 permanecen fijos.
- Entre el embrión 18 y la cáscara del huevo 13, en la zona de la perforación láser, se encuentra la cámara de aire 17. Por consiguiente, según la invención se reduce durante la perforación láser y el levantamiento de la cubierta de la cáscara de la parte restante del huevo 1 el riesgo de lesión del embrión 18 o de los vasos sanguíneos extraembrionarios 19.
Una ventaja importante del procedimiento según la invención es que permite la determinación espectroscópica del sexo en una fase muy temprana de la incubación en condiciones mínimamente invasivas. De este modo se consigue que las tasas de eclosión no se vean afectadas.
En cuanto al dispositivo según la invención, la bandeja de huevos 10 se sostiene por medio de dos ejes de rotación/inclinación 33 y 36 dispuestos perpendicularmente entre sí. A través de las líneas 31 y 32 correspondientes se transmiten señales de giro/inclinación a los ejes de rotación/inclinación 33 y 36. Una unidad de control central o una unidad de centrado de embriones 9 suministra al dispositivo de inclinación controlado por motor 11 señales de rotación/inclinación, que transmite a los ejes 33 y 36.
El dispositivo 37 para el posicionamiento de un punto de medición 23 en al menos un vaso sanguíneo 5, 18, 19 de un huevo de ave 1 abierto dentro de una bandeja de huevos 10 para la posterior determinación del sexo del huevo de ave 1 comprende al menos una unidad de perforación para la creación de un orificio (4) en el polo romo (2) del huevo de ave (1), un dispositivo de medición óptica para la medición de la retrodispersión (26) relativa a la sangre, dos ejes 33, 36 giratorios/pivotantes en un plano xy conectados a la bandeja de huevos 10, siendo los ejes 33, 36 accionados mediante señales de rotación/inclinación, un dispositivo de inclinación controlado por motor 11 conectado a los ejes 33, 36 y una unidad de control central 9 conectada al dispositivo de inclinación controlado por motor 11, girándose los ejes 33, 36 de manera que, cuando el embrión 18 se desvía del eje central del huevo 12, el embrión desviado 18 se centra directamente en la zona del eje del huevo 12, con lo que se consigue una distancia mínima entre la curvatura 38 de la membrana de cáscara interior 16 y el embrión 18.
Las conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor 11 y los ejes 33 y 36 se configuran por medio de las líneas 31,32 y las conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor 11 y la unidad de control central 9 se configuran por medio de las líneas 34, 35.
La unidad de perforación se ajusta a la perforación de la cubierta de la cáscara de manera que durante la perforación y durante el posterior levantamiento de la cubierta de la cáscara para la creación del orificio 8, la membrana de cáscara interior 16 no sufra daños.
La invención se explica por medio de dos ejemplos de realización a la vista de dibujos.
Se muestra en la:
Figura 1 una representación esquemática de la estructura de un huevo de gallina a los 3,5 días de incubación según el estado de la técnica;
Figura 2 representaciones esquemáticas de la secuencia de pasos para llevar a cabo una medición en el polo puntiagudo de un huevo de gallina según el estado de la técnica, ilustrando la
Figura 2a una posición de incubación,
Figura 2b una apertura a través de la cáscara calcárea y así como a través de la membrana de cáscara exterior y la membrana de cáscara interior,
Figura 2c una medición de los vasos sanguíneos embrionarios o extraembrionarios a través de la capa de clara de huevo y
Figura 2d la regeneración de la burbuja de aire a la posición de incubación en el plazo de tres días;
Figura 3a la posición de incubación para la posterior realización de una medición en el polo romo de un huevo de gallina;
Figura 3b un huevo de gallina nuevamente cerrado, determinado como hembra, que permanece en posición de incubación;
Figura 4 una apertura del huevo a través de la cáscara calcárea y de la membrana de cáscara exterior con una medición óptica relativa a la sangre a través de la membrana de cáscara interior intacta, midiéndose la sangre de un vaso sanguíneo situado directamente por debajo de la membrana de cáscara interior;
Figura 4a una representación esquemática de un huevo, mostrando la variabilidad natural de los huevos con una posición ligeramente desplazada lateralmente con respecto al eje vertical del huevo;
Figura 4b un plexo sanguíneo extraembrionario al cuarto día de incubación en forma de una superficie aproximadamente circular;
Figura 4c una representación esquemática de un huevo, mostrando una retención del plexo embrionario en la posición respecto al eje vertical del huevo por débiles fuerzas adhesivas a la membrana de cáscara interior;
Figura 5 dos curvas evaluadas de intensidad (normalizada)/número de onda relativo para, por ejemplo, cinco huevos de gallina determinados como machos (línea continua) y cinco huevos de gallina determinados como hembras (línea discontinua) después de una medición óptica de la retrodispersión de la sangre a través de la membrana de cáscara interior intacta y
Figura 6 una representación esquemática de una bandeja de huevos en conexión con un dispositivo de inclinación para la inclinación alrededor de al menos dos ejes fijos y una unidad de control de centrado.
Ejemplo de realización 1
El embrión 18, que se mueve libremente en el huevo sin abrir, se centra mediante dos inclinaciones del huevo de ave 1 en un ángulo de aproximadamente 40° en dirección x e y por debajo de la membrana de la cáscara interior 16. Se practica un orificio con un diámetro de 15 mm en el polo romo 2 a los 3,5 días de incubación. Se selecciona un vaso sanguíneo extraembrionario 19 bajo iluminación LED verde con un rango espectral de 500 nm - 550 nm y por medio de una cámara a través de la membrana de carcasa interior 16. Un rayo láser CW 30 de la fuente de rayos láser (potencia 200 mW; 1=785 nm) se enfoca en el vaso sanguíneo extraembrionario 19 por medio de una lente y se excita la sangre.
A continuación, se realizan el registro de la retrodispersión 26 inclusive la radiación de fluorescencia 28 y la evaluación en una unidad de evaluación. Como procedimiento realizado para el pretratamiento de los espectros registrados para la determinación del sexo se utiliza la normalización vectorial, en la que se lleva a cabo una normalización de la intensidad con referencia al número de onda relativo (figura 5).
Adicionalmente, se templan el portahuevos 6 y el entorno de medición 7 para evitar que se arrugue la membrana de cáscara interior 16 durante la apertura del huevo y para minimizar así la pérdida de señal debido a la dispersión de la retrodispersión 26 en la membrana de cáscara interior 16. Con el acondicionamiento de la temperatura se evita también un mínimo desenfoque de los vasos sanguíneos 19 como consecuencia de la reducción de volumen causada por el enfriamiento del contenido del huevo durante la medición de la retrodispersión 26 en el polo romo abierto 2 del huevo 1. Para ello, se utiliza una unidad de acondicionamiento de la temperatura (no mostrada) con una unidad de control que regula la temperatura de los huevos 1 a examinar, con la que se ajusta una temperatura constante predeterminada para evitar que se arrugue la membrana de la cáscara interior 16.
Después de la determinación del sexo, el orificio 4 del polo romo 2 se cierra mediante un cierre 29 y se continúa con la incubación del huevo 1 determinado como hembra.
Ejemplo de realización 2
Un embrión 18, que se mueve libremente en el huevo sin abrir, se centra mediante dos inclinaciones del huevo de ave 1 en un ángulo de 40° en dirección x e y por debajo de la membrana de la cáscara interior 16. Se practica un orificio con un diámetro de 10 mm en el polo romo 2 a los 3,5 días de incubación. El orificio 4 en el polo romo 2 del huevo de ave 1 se realiza con una unidad de perforación (no representada), afectando el orificio 4 a la cáscara calcárea 14 y a la membrana de cáscara exterior 15, que forma una cámara de aire 17 con una membrana de cáscara interior 16, mientras que la membrana de cáscara interior 16 permanece intacta.
A continuación, se registra en la zona del orificio 4 del polo romo 2, por debajo de la membrana de cáscara interior intacta 16, al menos un vaso sanguíneo 5 y se excita la sangre contenida en el mismo por medio de una radiación predeterminada incidente 30, se mide la retrodispersión 26 guiada a través de la membrana de cáscara interior intacta 16, se analiza y detecta espectroscópicamente la sangre de al menos del vaso sanguíneo 5 y se evalúa la misma para una determinación del sexo, procediéndose antes y durante la medición a un acondicionamiento de la temperatura del portahuevos 6 y del entorno de medición 7 del huevo 1 con una unidad de acondicionamiento de la temperatura asignada para evitar un enfriamiento distinto y drástico después de la retirada de la cabina de incubación. El registro del vaso sanguíneo y la excitación de la sangre se realizan mediante un láser con una longitud de onda de excitación de 785 nm. La señal de fluorescencia en el rango de 790-1050 nm es generada por la hemoglobina de la sangre y, por tanto, es específica de la sangre. El posicionamiento del foco láser en el vaso sanguíneo se lleva a cabo en base a la maximización de la intensidad de la fluorescencia, que se mide mediante el espectrómetro para la determinación del sexo.
Después del posicionamiento del foco en el vaso sanguíneo se realiza la medición de los parámetros específicos del sexo utilizando un espectrómetro. A continuación, se procesan los datos y se analizan las señales específicas del sexo corregidas por la membrana.
Tras la detección de la retrodispersión seleccionada 26, el orificio 4 del polo 2 se cierra con un cierre 29 y se continúa con la incubación del huevo 1 determinado como hembra, mientras que el huevo determinado como macho se saca de la bandeja incubación 10.
Lista de signos de referencia
1 Huevo de ave
2 Polo romo
3 Polo puntiagudo
4 Orificio en el polo romo
5 Vaso sanguíneo
6 Portahuevos
7 Medición del entorno
8 Orificio en el polo puntiagudo
9 Unidad de centrado de embriones/ unidad de control central/ unidad de control de centrado 10 Bandeja de huevos
11 Dispositivo de inclinación
12 Eje vertical en el huevo
13 Cáscara de huevo
14 Cáscara calcárea
15 Membrana de cáscara exterior
16 Membrana de cáscara interior
17 Cámara de aire/burbuja de aire
18 Embrión
19 Vasos sanguíneos extraembrionarios
20 Clara de huevo
21 Yema de huevo
22 Membrana vitelina
23 Punto de medición/superficie de medición
24 Primera rotación
25 Segunda rotación
26 Retrodispersión
27 Radiación Raman
28 Radiación de fluorescencia
29 Cierre
30 Radiación incidente predeterminada
31 Línea
32 Línea
33 Primer eje de giro/inclinación
34 Línea
35 Línea
36 Segundo eje de giro/inclinación
37 Dispositivo
38 Curvatura

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para el posicionamiento de un punto de medición (23) en al menos un vaso sanguíneo (5, 18, 19) de un huevo de ave (1) abierto para la posterior determinación del sexo del huevo de ave (1) con la creación de un orificio (4) en el huevo de ave (1), que presenta al menos un polo romo (2) y un polo puntiagudo (3) y una cáscara de huevo (13) con una membrana de cáscara interior (16) y una membrana de cáscara exterior (15) que está más cerca de la cáscara calcárea (14) del huevo de ave (1), abriéndose el huevo de ave (1) para realizar al menos una medición óptica relativa a la sangre,
caracterizado por que
la creación del orificio (4) en el polo romo (2) del huevo de ave (1) se realiza mediante una unidad de perforación, afectando el orificio (4) a la cáscara calcárea (14) y a la membrana de cáscara exterior (15) que forma una cámara de aire (17) con una membrana de cáscara interior (16), y permaneciendo la membrana de cáscara interior (16) intacta, registrándose en la zona del orificio (4) en el polo romo (2), por debajo de la membrana de cáscara interior intacta (16), al menos un vaso sanguíneo (5, 19, 18) y excitándose la sangre en el mismo mediante una radiación incidente predeterminada (30), así como midiéndose y detectándose su retrodispersión (26) relacionada con la sangre y guiada a través de la membrana de cáscara interior intacta (16) y evaluándose la misma para una determinación del sexo, caracterizado por que
los ejes (33, 36) que se pueden girar/inclinar en un plano xy se giran por medio de un dispositivo de inclinación (11) controlado por motor y conectado a una unidad de control central (9), de modo que, si el embrión (18) se desvía del eje central del huevo (12), el embrión (18) desviado se centra directamente en la zona del eje del huevo (12), consiguiéndose una distancia mínima entre la curvatura (38) de la membrana de cáscara interior (16) y el embrión (18).
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado por que
durante la apertura del hueco se perfora la cáscara calcárea (14) provista de una membrana de cáscara exterior adherida (15) y se analiza espectroscópicamente la sangre de al menos un vaso sanguíneo (5, 19, 18), mientras que durante la apertura y el posterior registro espectroscópico de la señal de medición óptica a través de al menos la membrana de cáscara interior (16) de la cáscara del huevo (13), la membrana de cáscara interior (16) permanece intacta.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2,
caracterizado por que
antes y durante la medición se lleva a cabo un acondicionamiento de la temperatura del portahuevos (6) y del entorno de medición (7) del huevo (1) con una unidad de acondicionamiento asignada.
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3,
caracterizado por que
tras la detección de la retrodispersión seleccionada (26) el orificio (4) en el polo romo (2) se cierra mediante un cierre (29), continuándose después al menos con la incubación del huevo (1) determinado como hembra.
5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que para el registro de un vaso sanguíneo, para las excitaciones ópticas de la sangre y/o para la medición de la retrodispersión relativa a la sangre se emplean uno o varios láseres.
6. Dispositivo (37) para el posicionamiento de un punto de medición (23) en al menos un vaso sanguíneo (5, 18, 19) de un huevo de ave (1) abierto dentro de una bandeja de huevos (10) para la posterior determinación del sexo del huevo de ave (1) en la realización del procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que el dispositivo (37) comprende al menos
- una unidad de perforación para la creación de un orificio (4) en el polo romo (2) del huevo de ave (1), - un dispositivo de medición óptica para la medición de la retrodispersión (26) relativa a la sangre,
- dos ejes (33, 36) que pueden girarse/inclinarse en un plano xy y que están conectados a la bandeja de huevos (10), siendo los ejes (33, 36) accionados por señales de giro/inclinación
- un dispositivo de inclinación (11) controlado por motor y conectado a los ejes (33, 36), y
- una unidad de control central (9) conectada al dispositivo de inclinación controlado por motor (11), girándose los ejes (33, 36) de manera que, cuando el embrión (18) se desvía del eje central del huevo (12), el embrión desviado (18) se centra directamente en la zona del eje del huevo (12), con lo que se consigue una distancia mínima entre la curvatura (38) de la membrana de cáscara interior (16) y el embrión (18).
7. Dispositivo según la reivindicación 6,
caracterizado por que
las conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor (11) y los ejes (33, 36) se configuran al menos por medio de las líneas (31, 32) y las conexiones entre el dispositivo de inclinación controlado por motor (11) y la unidad de control central (9) se configuran al menos por medio de las líneas (34, 35).
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