ES2853973T3 - Uso de DNQ o DNQ-87 en combinación con un inhibidor de PARP1 para el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

Un fármaco bioactivable NQO1 para su uso en un procedimiento para eliminar o inhibir el crecimiento de células cancerosas en un paciente que tiene células cancerosas, en el que el fármaco bioactivable NQO1 se usa en combinación con un inhibidor de poli(ADP-ribosil) polimerasa I (PARP1), en el que el fármaco bioactivable NQO1 es DNQ o DNQ-87.

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de DNQ o DNQ-87 en combinación con un inhibidor de PARP1 para el tratamiento del cáncer Antecedentes de la invención

Un desafío fundamental en el tratamiento del cáncer es el descubrimiento de compuestos que son tóxicos para las células cancerosas pero no para las células sanas. Una característica destacada del cáncer es la división celular rápida y sin restricciones. La gran mayoría de los agentes quimioterapéuticas tradicionales se dirigen a las células que se dividen rápidamente al interrumpir el ciclo celular, causando la muerte celular. Debido a que algunos tejidos sanos requieren la división celular como parte de su función, las citotoxinas antiproliferativas también pueden destruir células sanas, dando lugar a efectos secundarios graves que limitan la dosis. Por consiguiente, se deben identificar nuevos procedimientos terapéuticos y nuevas dianas celulares que diferencian mejor las células sanas de las cancerosas. Las dianas pueden estar presentes solo en una pequeña fracción de los pacientes con cáncer, permitiendo así una estrategia personalizada para tratar el cáncer.

Las moléculas que contienen quinona son con frecuencia citotóxicas y dañan las células a través de uno de dos mecanismos. Muchas quinonas son aceptores de adición conjugada y alquilan fácilmente especies nucleofílicas tales como restos de ADN y cisteína. Las quinonas también son sustratos de las reductasas de 1 electrón, tales como el citocromo P450, citocromo b5, xantina oxidasa y glutatión reductasa. La reducción de quinonas por estas enzimas genera una semiquinona altamente reactiva que puede dañar biomoléculas directamente, o puede ser oxidada por oxígeno disuelto dando como resultado la formación de un equivalente del radical anión superóxido y la quinona original. Por tanto, la reducción de quinonas con 1 electrón puede crear catalíticamente especies reactivas de oxígeno (ROS) que dañan la célula.

La NAD(P)H quinona oxidorreductasa (NQO1, DT diaforasa) es una reductasa de 2 electrones dependiente de FAD cuya función principal es proteger a la célula de las citotoxinas, especialmente quinonas. Aunque generalmente se identifica como una proteína citosólica, NQO1 se ha identificado en compartimentos subcelulares como la mitocondria y el núcleo. Al reducir las quinonas en un procedimiento de 2 electrones, NQO1 evita la semiquinona tóxica y forma hidroquinonas, que comúnmente no reaccionan al oxígeno. Luego, las hidroquinonas se conjugan con moléculas como el glutatión, glucosa o sulfato, y son excretadas por la célula. Sin embargo, algunas moléculas que contienen hidroquinona son inestables y reaccionan con el oxígeno en dos oxidaciones de 1 electrón de vuelta a la quinona, generando ROS. La estabilidad relativa de las hidroquinonas frente a la oxidación del aire no se puede predecir basándose en la estructura molecular y no se correlaciona con el potencial de reducción.

NQO1 ha atraído mucha atención como una posible diana para el tratamiento del cáncer porque se ha demostrado que se expresa con frecuencia en niveles mucho más altos en tumores en comparación con el tejido sano adyacente, particularmente en el caso del cáncer de pulmón. Además, la actividad de NQO1 parece aumentar durante la progresión del tumor. Además de los tejidos de pulmón, mama y colon, se han documentado relativamente pocos datos sobre los niveles de NQO1 en tejidos normales. Mientras que se documentan niveles bajos de NQO1 en la médula ósea y las células del hígado, dos tejidos frecuentemente dañados por la quimioterapia, se han observado niveles relativamente altos de NQO1 en las células del estómago y del riñón.

La perspectiva de descubrir toxinas que se activan, en lugar de desactivan, por NQO1 ha atraído a investigadores durante muchos años. Tales moléculas convertirían esta enzima normalmente citoprotectora en una carga para la célula. Se han descubierto dos clases generales de moléculas que se ajustan a esta descripción: alquiladores de ADN cuya electrofilia aumenta después de la biorreducción, y moléculas cíclicas redox que generan ROS catalíticamente después de la reducción. Ejemplos de tales alquilantes de ADN incluyen Mitomicina C, EO9 y MeDZQ, y ejemplos de tales generadores de ROS incluyen p-lapachona (p-lap) y estreptonigrina, cuyos mecanismos citotóxicos implican cada uno la biorreducción mediada por NQO1. Estas clases de moléculas están compuestas casi exclusivamente por compuestos que contienen quinonas.

La concentración de p-lap administrada a las células puede inducir diferentes formas de muerte celular, con concentraciones más bajas que inducen apoptosis y concentraciones más altas que inician necroptosis dependiente de calcio. Además de la generación de ROS en los GR, la escasa solubilidad acuosa de p-lap requiere el uso de hidroxipropil-p-ciclodextrina (HPpCD) como ayuda para la solubilidad, altas concentraciones de las cuales causan hemólisis de GR in vitro. Para abordar los problemas de inestabilidad compuesta y daño a los GR, los grupos de Boothman y Gao han diseñado una formulación micelar de p-lap que demuestra propiedades PK y eficacia muy mejoradas en modelos de tumores murinos (Blanco, Boothman, Gao y col., Cancer Res. 2010, 70, 3896).

El documento US 2013/0030237 A1 desvela composiciones farmacéuticas y procedimientos para tratar el cáncer en los que la actividad citotóxica de un agente anticanceroso se potencia mediante la combinación de inhibidores de la ruta de reparación por escisión de bases (BER).

Huang y col. (Cancer Res. 15 de junio de 2012;72(12):3038-3047) documentaron que la desoxiniloquinona elimina un amplio espectro de células cancerosas de una manera dependiente de NQO1 con mayor potencia que la plapachona.

Bair y col. (J Am Chem Soc. 21 de abril de 2010;132(15):5469-5478) describen una ruta sintética para la desoxinaboquinona (DNQ) y utilizaron este material para determinar el mecanismo por el cual DNQ induce la muerte en las células cancerosas. DNQ indujo la muerte de células cancerosas en cultivo, con valores de CI(50) entre 16 y 210 nM y los autores consideraron que el DNQ tiene potencial como agente anticanceroso.

El documento WO 2012/040492 desvela procedimientos para determinar si un individuo con cáncer es adecuado para un tratamiento con un fármaco bioactivable NQO1, que predice la capacidad de respuesta de un individuo con cáncer a un tratamiento con un fármaco bioactivable NQO1 y tratar a un individuo con cáncer con una composición de fármaco bioactivable NQO1.

Si bien las estrategias de medicina personalizada han producido medicamentos contra el cáncer que salvan vidas, afectan solo a un pequeño porcentaje de pacientes con cáncer. Debido a que los niveles de NQO1 están muy elevados en una gran cantidad de tumores sólidos, un tratamiento que aproveche con éxito los niveles de NQO1 podría beneficiar a una fracción significativa de todos los pacientes con cáncer. Por tanto, se necesitan nuevos procedimientos terapéuticos que aprovechen los niveles elevados de NQO1 y que puedan inhibir o destruir selectivamente las células cancerosas para beneficiar a un mayor número de pacientes con cáncer.

Sumario

La invención proporciona compuestos para su uso en procedimientos para tratar el cáncer y las células tumorales cancerosas, por ejemplo, células tumorales que tienen niveles elevados de NQO1. La invención también proporciona una nueva terapia de combinación que incluye la administración de fármacos bioactivables NQO1 en combinación con inhibidores de la reparación del ADN para proporcionar una terapia selectiva de tumores.

Los fármacos bioactivables NQO1 incluyen DNQ y DNQ-87.

Los fármacos bioactivables NQO1 DNQ y DNQ-87 se pueden utilizar de forma selectiva para el tumor en combinación con inhibidores de poli(ADP-ribosil) polimerasa I (PARP1), tales como los inhibidores de PARP1 descritos en el presente documento. Los inhibidores de PARP1 carecen de selectividad tumoral y dichos fármacos bioactivables NQO1 proporcionan esta selectividad. Todos los datos publicados actualmente sobre fármacos bioactivables NQO1 afirman que la hiperactivación de PARP1 es necesaria para la letalidad selectiva del tumor; por tanto, la inhibición de PARP1 no estaría indicada. Este no es el caso de las respuestas de supervivencia a largo plazo, porque la inhibición de PARP1 evita la reparación de SSB y/o DSB. Las células mueren por un mecanismo apoptótico clásico diferente, en comparación con la necrosis programada causada por fármacos bioactivables NQO1 solos.

Todos los inhibidores de PARP1 conocidos probados muestran sinergia con dichos fármacos bioactivables NQO1 en varios cánceres que sobreexpresan NQO1. Las células mueren activando caspasas y no sufren necrosis programada. No obstante, en cada caso se observa una letalidad selectiva del tumor. Los datos obtenidos incluyen que las dosis no tóxicas de inhibidores de PARP1 se sinergizan con dosis no tóxicas de fármacos bioactivables NQO1. Los datos con análogos de p-lap y DNQ apoyan firmemente esta observación. Adicionalmente, el dicumarol previene la sinergia entre los fármacos bioactivables de NQO1 y los inhibidores de PARP1, y la sinergia no se observa en las células deficientes en NQO1, ya que estas células carecen de daño en el ADN causado por la falta de un ciclo redox inútil mediado por NQO1.

Para el procedimiento descrito anteriormente y a continuación en el presente documento, se pueden utilizar dosis mucho más bajas de fármacos bioactivables NQO1 en la terapia de combinación, evitando la toxicidad relacionada con la dosis (es decir, metahemoglobinemia) con análogos de DNQ.

La invención proporciona un fármaco bioactivable NQO1 para su uso como se reivindica en la reivindicación 1. La administración de los compuestos a las células o a un paciente que necesite terapia (incluidos los tumores vulnerables que se sabe que son deficientes en la escisión de la base del ADN, reparación de rotura de hebra simple o doble hebra de ADN), puede ser concurrente o secuencial, con un compuesto de quinona administrado al menos al mismo tiempo o después de un inhibidor de PARP1.

Breve descripción de los dibujos

Los siguientes dibujos forman parte de la memoria descriptiva y se incluyen para demostrar más ciertas realizaciones o varios aspectos de la invención. En algunos casos, las realizaciones de la invención se pueden entender mejor haciendo referencia a los dibujos adjuntos en combinación con la descripción detallada presentada en el presente documento. La descripción y los dibujos adjuntos pueden resaltar cierto ejemplo específico o cierto aspecto de la invención. Sin embargo, un experto en la técnica comprenderá que se pueden usar partes del ejemplo o aspecto en combinación con otros ejemplos o aspectos de la invención.

Figura 1. Expresión de NQO1 y catalasa en tumor pancreático frente a tejido normal asociado. (A, B) Se analizó el tumor correspondiente y el tejido normal asociado de 59 pacientes pancreáticos para niveles de NQO1 (A) y catalasa (B), mostrando una sobreexpresión significativa de catalasa en tejido normal frente a tejido tumoral. (C, F) Niveles de NQO1 de 349 muestras de pacientes y 85 líneas celulares de cáncer de páncreas. (D, G) Niveles de catalasa controlados como en (C, F). (E, H) Las proporciones NQOI/catalasa pueden ser un factor determinante importante en la eficacia de los fármacos bioactivables NQO1. Para (C-H), n = 232 muestras de pacientes.

Figura 2. Las proporciones NQO1:Catalasa en cáncer de páncreas frente a tejido normal son un determinante importante de la eficacia de los fármacos bioactivables NQO1, P-lap y DNQ. (A) Las células de cáncer de páncreas expresan altos niveles de NQO1, pero niveles más bajos de catalasa. El metabolismo de p-lap da como resultado una extensa producción de H²O² que supera fácilmente los niveles bajos de catalasa tumoral. (B) Por el contrario, el tejido pancreático normal expresa niveles bajos de NQO1 y abundantes niveles de catalasa y están, por lo tanto, protegidos de los fármacos bioactivables NQO1. Los ensayos enzimáticos de muestras de pacientes han validado estas proporciones de NQO1:catalasa.

Figura 3. La inhibición funcional de NQO1 por la inactivación génica de ARNsh-NQO1 protege de la muerte celular después de exposiciones de P-lap. (A) Mecanismo de ciclo redox de p-lap; DNQ y sus derivados pueden seguir un mecanismo análogo. (B) Niveles de proteína NQO1 y actividades enzimáticas en Mia Paca-2 original, clones de inactivación génica (17-1, 17-3, y 17-7) y clones sin silenciamiento (NS, Mia Paca-2 shSCR). (C) Ensayos de supervivencia relativa a largo plazo de células Mia Paca-2 originales y con inactivación génica de NQO1 con p-lap o p-lap más dicumoral (DIC) para exposiciones de 2 horas a las dosis indicadas. (D) Supervivencia de clones de inactivación génica de NQO1 crecimiento de células cancerosas in vitro, o células cancerosas en un paciente que tiene células cancerosas o un tumor canceroso. La invención proporciona además el uso de un fármaco bioactivable NQO1 en combinación con un inhibidor de la enzima de reparación por escisión de bases (BER) u otro agente activo descrito en el presente documento para la fabricación de un medicamento para eliminar o inhibir el crecimiento de células cancerosas. in vitro, o células cancerosas en un paciente que tiene células cancerosas o un tumor canceroso, en el que el medicamento comprende una cantidad letal o inhibidora eficaz del fármaco bioactivable NQO1 y el inhibidor de la enzima reparadora por escisión de bases (BER) u otro agente activo descrito en el presente documento. En otras realizaciones, un medicamento puede incluir un fármaco bioactivable NQO1 y un segundo medicamento puede incluir un inhibidor de la enzima de reparación por escisión de bases (BER) u otro agente activo descrito en el presente documento.

Breve descripción de los dibujos

Los siguientes dibujos forman parte de la memoria descriptiva y se incluyen para demostrar más ciertas realizaciones o varios aspectos de la invención. En algunos casos, las realizaciones de la invención se pueden entender mejor haciendo referencia a los dibujos adjuntos en combinación con la descripción detallada presentada en el presente documento. La descripción y los dibujos adjuntos pueden resaltar cierto ejemplo específico o cierto aspecto de la invención. Sin embargo, un experto en la técnica comprenderá que se pueden usar partes del ejemplo o aspecto en combinación con otros ejemplos o aspectos de la invención.

Figura 1. Expresión de NQO1 y catalasa en tumor pancreático frente a tejido normal asociado. (A, B) Se analizó el tumor correspondiente y el tejido normal asociado de 59 pacientes pancreáticos para niveles de NQO1 (A) y catalasa (B), mostrando una sobreexpresión significativa de catalasa en tejido normal frente a tejido tumoral. (C, F) Niveles de NQO1 de 349 muestras de pacientes y 85 líneas celulares de cáncer de páncreas. (D, G) Niveles de catalasa controlados como en (C, F). (E, H) Las proporciones NQO1/catalasa pueden ser un factor determinante importante en la eficacia de los fármacos bioactivables NQO1. Para (C-H), n = 232 muestras de pacientes.

Figura 2. Las proporciones NQO1:Catalasa en cáncer de páncreas frente a tejido normal son un determinante importante de la eficacia de los fármacos bioactivables NQO1, P-lap y DNQ. (A) Las células de cáncer de páncreas expresan altos niveles de NQO1, pero niveles más bajos de catalasa. El metabolismo de p-lap da como resultado una extensa producción de H²O² que supera fácilmente los niveles bajos de catalasa tumoral. (B) Por el contrario, el tejido pancreático normal expresa niveles bajos de NQO1 y abundantes niveles de catalasa y están, por lo tanto, protegidos de los fármacos bioactivables NQO1. Los ensayos enzimáticos de muestras de pacientes han validado estas proporciones de NQO1:catalasa.

Figura 3. La inhibición funcional de NQO1 por la inactivación génica de ARNsh-NQO1 protege de la muerte celular después de exposiciones de P-lap. (A) Mecanismo de ciclo redox de p-lap; DNQ y sus derivados pueden seguir un mecanismo análogo. (B) Niveles de proteína NQO1 y actividades enzimáticas en Mia Paca-2 original, clones de inactivación génica (17-1, 17-3, y 17-7) y clones sin silenciamiento (NS, Mia Paca-2 shSCR). (C) Ensayos de supervivencia relativa a largo plazo de células Mia Paca-2 originales y con inactivación génica de NQO1 con p-lap o p-lap más dicumoral (DIC) para exposiciones de 2 horas a las dosis indicadas. (D) La supervivencia de los clones de inactivación génica de NQO1 (17-1, 17-3, 17-7) expuestos a plap (6 |^jM, 2 h) se rescató significativamente con dosis bajas de DIC (^j M, 2 h) en comparación con las dosis necesarias para rescatar clones de Mia Paca-2 NS (*** p <0,001). (E) Dosificación de p-Lap para DL⁵⁰ de clones con inactivación génica de Mia Paca-2 y diferentes líneas celulares de cáncer de páncreas (BXPC3, Capan1, ASPC1, HS766T, Capan2 y CFPAC1) (R² = 0,9053). (F) Letalidad de p-Lap en varias células de cáncer de páncreas, con o sin tratamientos con dicumarol (DIC, 50 ^j M) o BAPTA-AM (5 ^j M, 1h).

Figura 4. El daño del ADN inducido por P-Lap se reduce significativamente mediante la eliminación del ARNsh de NQO1. (A) Los clones de Mia Paca-2 NS y con inactivación génica de ARNsh-NQO1 (17-1, 17-3, 17-7 y NS) se expusieron a p-lap, DIC 50 ^j M y se evaluó el daño del ADN mediante ensayos de cometa. Las células también se expusieron a 2 mM de H²O² durante 2 horas como controles positivos. (B) Las longitudes de la cola del cometa se midieron utilizando el programa informático Image J (u.a., unidad arbitraria) (***, p< 0,001). (C) El tratamiento con p-Lap causa un daño extenso en la base de 8-oxoguanina (8-OG) en las células de cáncer de páncreas Mia Paca-2. Por tanto, p-lap causa SSB y un daño de base extenso.

Figura 5. Cambios metabólicos después de tratamientos con p-lap o DNQ. Las células Mia Paca-2 se trataron con p-lap (6 ^j M) (A), DNQ o un derivado de DNQ (DNQ87) (C, D) /- DIC (50 ^j M) y se controló la supervivencia. Las células Mia PaCa-2 expuestas a p-lap /-DIC también se evaluaron para detectar cambios en el ATP (B), consumo de glucosa (E) y producción de lactato en los medios (F) en los momentos indicados.

Figura 6. La inactivación génica mediada por ARNip de la glicosilasa Ogg1 hace que las células de cáncer de páncreas tratadas con p-lap sean resistentes a la p-lapachona. Se muestran dos experimentos separados. Las células de cáncer de páncreas Mia-Paca2 se expusieron a ARNip codificado (NS) o ARNip específico para Ogg1 (siOGGI) durante 24 horas, luego las células se trataron con p-lapachona durante 2 horas a las dosis indicadas. La supervivencia, medida mediante ensayos de capacidad de formación de colonias, se realizó y se representó gráficamente con las dosis de p-lapachona utilizadas, tal como se ilustra en (A) y (B).

Figura 7. Los fármacos bioactivables NQO1 causan SSB y lesiones de base de una manera específica del tumor, por tanto, pueden utilizarse para hacer que los inhibidores de la reparación del ADN sean selectivos para los tumores.

Figura 8. Los inhibidores de PARP1 tienen efecto sinérgico con los fármacos bioactivables NQO1. (A-D) Las células Mia Paca-2 se preincubaron con varios inhibidores de PARP1 (10 j M) y luego con desoxiniloquinona (DNQ), tal como se indica, durante 2 horas con inhibidores. (E-H) AG014699 mejora p-lap. Luego se evaluó la supervivencia relativa mediante un ensayo de ADN de 7 días (Huang y col., Cancer Res., 2012, 72(12), 3038­ 3047) (***, p< 0,001).

Figura 9. La metoxiamina (MeOX) mejora la letalidad inducida por NQ01 inducida por p-lap. Las células Mia Paca-2 se trataron con las dosis indicadas de p-lap /- MeOX (12 mM), o p-lap solo durante 2 horas. Criterios de valoración examinados: (A) Los ensayos de formación de colonias muestran sinergia de MeOX p-lap; (B) El tratamiento con MeOX modifica los sitios AP inducidos por p-lap en células Mia Paca-2; (C) MeOX mejora la pérdida de ATP inducida por p-lap; (D) MeOX bloquea la recuperación de ATP después de dosis subletales de plap; (E) El cotratamiento con p-lap MeOX mejora la formación de focos de yH2AX. MeOX una dosis subletal de p-lap (2 ^j M) fue equivalente a una dosis letal de p-lap (6 ^j M); y (F) MeOX (6 mM) p-lap (2 ^j M) indujo una apoptosis significativamente mayor (células TUNEL ) de una manera dependiente de NQO1 que p-lap (4 ^j M) solo. Dicumarol (DIC, 50 ^j M, 2 h) bloqueó la sinergia.

Figura 10. La p-lapachona tiene una eficacia antitumoral significativa contra xenoinjertos tumorales MIA PaCa-2. (A) Cambios en el peso corporal de ratones portadores de tumores ortotópicos MIA PaCa-2. (B) Supervivencia de Kaplan-Meier para los experimentos de eficacia antitumoral pancreática descritos en (A). Se realizaron análisis de rango logarítmico comparando curvas de supervivencia (***p <0,0001) para HPp-CD frente a p-lap-HPp-CD a 20 o 30 mg/kg, iv. Los resultados son datos de supervivencia combinados de tres experimentos similares. (C) Imágenes bioluminiscentes (BLI) de ratones con cáncer de páncreas implantado en el bazo antes y después del tratamiento con HPp-CD o p-lap-HPp-CD (Arq761) a 20 o 30 mg/kg, iv. (D) Cuantificación de la carga tumoral de páncreas. La BLI (fotones por segundo) se determinó antes y 12 días después de la terapia con HPp-CD o p-lap-HPp-CD a 20 o 30 mg/kg, iv. Los resultados son medias, EE (n = 5). Se realizaron pruebas de la t de Student (*** p <0,005) comparando HPp-CD frente p-lap-HPp-CD a 20 o 30 mg/kg, iv. V, Vehículo (HPp-CD).

Figura 11. Fórmulas de ciertos compuestos DNQ. Cuando n = 1-30, n puede ser específicamente cualquier número entero de 1 a 30, preferentemente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.

Figura 12. Ejemplos de compuestos DNQ específicos.

Figura 13. DNQ87 (IB-DNQ) funciona en dosis mucho más bajas que la p-lapachona y en dosis equivalentes al compuesto DNQ original. Es eficaz contra las células del cáncer de mama de una manera dependiente de NQO1, así como células de cáncer de mama triple negativas (A-F, para varios tipos de células).

Figura 14. La eficacia de DNQ87 aumenta de forma dependiente de NQO1 (exposición a IB-DNQ a diversas concentraciones, A-H).

Figura 15. Citotoxicidad de IB-DNQ: "Muerte celular no mediada por caspasa". DNQ87 causa muerte celular que puede ser bloqueada por dicumarol, catalasa y BAPTA-AM (un quelante de calcio) (A), en orden descendente y coherente con la vía propuesta de muerte celular causada por fármacos bioactivables NQO1 (B). (C) Hiperactivación de PARP¹ causada por exposición a DNQ87 medida por formación de PAR-PARP1, resaltado por la escisión de p53 mediada por j-calpaína (C) y la escisión atípica de PARP1 a fragmentos proteolíticos de ~ 60 kDa durante la muerte celular (D).

Figura 16. DNQ87 causa lesiones en el ADN (roturas de la doble hebra del ADN) de manera retardada, controlada por gamma-H2AX, fosforilación de ATM en ser1981 y fosforilación de DNA-PKcs en el sitio Thr1892 (A-F).

Figura 17. Secuencia temporal SSB-PARP1-DSB. Las células de cáncer de mama MCF-7 se expusieron a DNQ87 (IB-DNQ), con o sin dicumarol (DIC, 50 j M) y supervivencia (A) o secuencia temporal de la formación de PAR-PARP1 (^pA^r ), así como fosforilaciones si H2^a X (g-H2AX), los ATM se monitorearon en los sitios específicos indicados y se monitorearon usando niveles de alfa-tubulina para la carga.

Figura 18. La ventana terapéutica de DNQ87 usando dicumarol para imitar niveles bajos de NQO1 en tejido normal en comparación con el uso de dicumarol para imitar tejido normal en células de cáncer de mama humano MCF-7 que sobreexpresan NQO1 (en puntos de tiempo de 30 minutos, 60 minutos, 2 horas, 24 horas, 48 horas y 72 horas).

Figura 19. La exposición a fármacos bioactivables NQO1 provoca niveles elevados de 8-oxoguanina. A) La exposición a la p-lapachona provoca una formación extensa de 8-oxoguanina. B, C) Se muestran dos experimentos separados. Las células de cáncer de páncreas Mia-Paca2 se expusieron a ARNip codificado (NS) o ARNip específico para Ogg1 (siOGGI) durante 24 horas, luego las células se trataron con p-lapachona durante 2 horas a las dosis indicadas. La supervivencia, medida mediante ensayos de capacidad de formación de colonias, se realizó y se representó gráficamente con las dosis de p-lapachona utilizadas.

Figura 20. Determinación de dosis letales frente a subletales de metoxiamina (MeOX o MX, según se indique); A, MeOX con p-lapachona; B, MeOX; C, MeOX.

Figura 21. La inhibición de BER mediada por metoxiamina (MeOX) (A, B) o por eliminación de ARNhc de XRCC1 (C) potencia los efectos letales de p-lap medidos usando ensayos de capacidad de formación de colonias; (D), se muestra la fracción superviviente.

Figura 22. El tratamiento combinado de inhibidores de BER y p-lap aumenta el daño del ADN (A) y la muerte celular monitoreada por ensayos TUNEL (B), compatible con necrosis programada.

Figura 23. La inhibición de la vía BER aumenta la pérdida de ATP inducida por p-lap y reprime su recuperación (A-D).

Figura 24. El MeOX suprime la recuperación de la pérdida de ATP después de tratamientos con p-lap letales (6 ^{| j}M o 4 ^|j M) o subletales (3 jM o 2,5 jM ) ().

Figura 25. El piruvato de metilo (MP) suprime la muerte celular inducida por p-lapachona; (A) nivel relativo de ATP; (B) supervivencia celular relativa.

Figura 26. MeOX atenúa el efecto de piruvato de metilo en la protección de las células; (A) control de p-lap y adición de MP; (B) p-lap y MeOX, y (C) p-lap y MP o p-lap y MeOX.

Figura 27. La metoxiamina (MeOX) acelera la pérdida de NAD+/ATP inducida por hiperactivación de PARP1, acelerando aún más el consumo de O² por un procedimiento dependiente de NQO1 en células pancreáticas Mia PaCa-2 expuestas a p-lapachona. A. La p-Lapachona mejora las tasas de consumo de oxígeno (OCR) en las células Mia PaCa2. Las dosis letales de p-lap provocan picos drásticos de OCR y pérdidas posteriores de toda la capacidad metabólica. Las dosis subletales de p-lap causan niveles elevados de OCR con el tiempo. Ambas respuestas están mediadas por NQO1. B, La adición de MeOX mejora las tasas de OCR en combinación con dosis subletales de p-lap, similar a una dosis letal de p-lapachona (4 jM), presumiblemente debido a la pérdida de NAD+ y ATP derivada de la hiperactivación de PARP1.

Figura 28. El tratamiento con medicamentos bioactivables NQO1 suprime la glucólisis en las células Mia PaCa2. Se suprimen tanto la utilización de glucosa (A) como la producción de lactato (B).

Figura 29. Las células de NSCLC A549 se trataron conjuntamente con metoxiamina (MeOX) 12 mM y DNQ 87 durante 2 h y se midió la supervivencia relativa (como en Huang y col., Cancer Res., 2012).

Figura 30. La inhibición de PARP1 aumenta la letalidad de los fármacos bioactivables nQo 1; (A) AZD2281; (B) AG14361; (C) AG-014699; (D) BSI-201.

Figura 31. Determinación de dosis no letales de inhibidores de PARP1 solos en células de NSCLC A549; (A) AZD-2281; (B) AG14361; (C) AG014699; (D) BSI-201; (E) ABT-888; (F) INO-1001.

Figura 32. Datos del inhibidor de PARP1, AG014699 (rucaparib); (A) AG014699; (B) p-lap y AG014699; (C) AG014699; (D) p-lap y AG014699.

Figura 33. AG014699 mejora la letalidad dependiente de NQO1 de p-lapachona en células de NSCLC A549. A, control para demostrar la letalidad sintética del fármaco solo contra células BRCA1 -/- CAPAN-1, mientras que otras células cancerosas BRAC1 de tipo silvestre (las células A549 y Mia PaCa-2 son completamente resistentes al inhibidor de PARP1). B, Demostración de que AG014699 inhibe la hiperactivación de PARP1 en respuesta a p-lap. C, Letalidad sinérgica de AG014699 en combinación con p-lap, que se previene con el inhibidor NQO1, dicumarol. D, Respuesta a la dosis de AG014699 en combinación con p-lap y reversión por adición de dicumarol. Figura 34. La inactivación génica de PARP1 mejora la letalidad de la p-lapachona en células de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-231 (231); (A) 231 NQOl+/-; (B) ns-ARNsh y PARPI-ARNsh; (C) fracción superviviente de MD-MBA-231; (D) fracción superviviente de MD-MBA-231 NQO1+.

Figura 35. La inactivación génica de PARP1 en las células de cáncer de mama MCF-7 también mejora la letalidad de p-lap; (A) p-lap a 5 jM; (B) supervivencia relativa de células MCF-7.

Figura 36. Las células de NSCLC NQO1+ H596 tratadas con dosis no tóxicas de p-lap dosis no tóxicas de AG014699 muestran evidencia de apoptosis en forma de caspasa-3 escindida.

Figura 37. La inactivación génica estable de ARNsh de PARP¹ mejora la letalidad (A) pero suprime la pérdida de ATP (B) debido a la supresión (pérdida) de la hiperactivación de PARP1.

Figura 38. La pérdida de ATP inducida por p-Lap se previene con la inactivación génica estable de ARNsh de PARP1 o la adición de AG014699; (A) MCF-7; (B) MCF-7-PARP1-ARNsh.

La Figura 39 muestra estudios en Mia Paca-2 y datos de DNQ combinados con inhibidor de PARP1 (A-D). Las Figuras 40-42 muestran estudios en Mia Paca-2 y algunos datos de DNQ combinado con PARP1.

Figura 43. Análisis farmacocinético y valoración objetiva de micelas dC³ in vivo; (A) dC3 y p-lap; (B) dC3 y p-lap; (C) comparación de micelas en blanco frente a dC3; (D) niveles relativos de ATP.

Figura 44. Formación PAR-PARP1 derivado de DNQ in vivo.

Figura 45. Tratamiento de A549 con DNQ-87 y un inhibidor de PARP (AG014699).

Figura 46. Daño del ADN mediante tratamiento combinatorio. (A) Se pretrataron células de NSCLC A549 con o sin Rucaparib (AG014699) y luego se expusieron a una dosis no tóxica de p-lapachona (3 jM ) a las concentraciones indicadas con o sin el mismo inhibidor de PARP1. Las células también se expusieron a una dosis letal de p-lapachona (8 j M). A continuación, las células se analizaron mediante ensayos de cometa neutro y se representaron gráficamente los daños en el ADN en (B). (B) Los datos muestran que el daño al ADN aumenta drásticamente en las células expuestas a dosis subletales de p-lap en presencia de inhibidores de PARP1, equivalente a las lesiones de ADN creadas por una dosis letal de p-lapachona.

Figura 47. Las proporciones de NQOI/catalasa están elevadas en los tumores de cáncer de mama, pero bajas en tejido normal asociado; (A) recuentos de muestras de pacientes A-F y datos de expresión; (B) Expresión de NQO1.

Figura 48. Los niveles de NQO1 también están elevados en los cánceres de pulmón no microcíticos (CPCNP) frente al tejido normal asociado (n=105) (A), mientras que la catalasa está elevada en el tejido normal y los niveles más bajos se encuentran en los tumores de NSCLC (B). (C)-(E) expresión y recuentos de muestras. Figura 49. Proporciones NQOI/Catalasa en tumor frente a tejido normal en muestras de pacientes con NSCLC humano.

Descripción detallada

La selectividad tumoral sigue siendo un desafío para las estrategias quimioterapéuticas eficaces contra el cáncer. Aunque el desarrollo reciente de P-lapachona para explotar específicamente los niveles elevados de NAD(P)H:quinona oxidorreductasa 1 (NQO1) en la mayoría de los tumores sólidos representa un nuevo enfoque quimioterapéutico, se necesitan terapias adicionales que eliminen por diversos mecanismos, tales como la necrosis programada a mayor potencia. La desoxiniloquinona (DNQ) elimina un amplio espectro de tipos de células cancerosas (es decir, mama, pulmón de células no microcíticas, próstata, pancreático) de una manera dependiente de NQO1 con una potencia muy mejorada (de 20 a 100 veces) en comparación con la p-lapachona. La letalidad de DNQ se basa en el ciclo redox inútil dependiente de NQO1, utilizando oxígeno y generando extensas especies reactivas de oxígeno (ROS), particularmente superóxido y peróxido de hidrógeno. Los niveles elevados de ROS provocan extensas lesiones en el ADN e hiperactivación de PARP-1 que, a su vez, da como resultado un agotamiento grave de NAD+/ATP que estimula las respuestas de muerte celular necrótica programadas dependientes del calcio únicas para esta clase de fármacos "bioactivados" con NQO1 (por ejemplo, p-lapachona y DNQ). Sorprendentemente, se descubrió que la combinación de fármacos bioactivables NQOl e inhibidores de la reparación del ADN proporciona una terapia sinérgica y selectiva para el tumor.

El cáncer de páncreas será la segunda causa principal de muertes relacionadas con el cáncer en los EE.UU. para 2020, donde la supervivencia a 5 años es <6 %. Las terapias convencionales actuales de atención ofrecen poca selectividad y alta toxicidad. Por lo tanto, se necesitan desesperadamente enfoques novedosos y selectivos de tumores. Casi el 90% de los cánceres de páncreas tienen niveles elevados (de 10 a 40 veces) de NQO1 y recientemente demostramos que la beta-lapachona (beta-lap) era eficaz contra los cánceres de páncreas de una manera dependiente de NQO1 (Li y col., Clin. Cancer Res., 2011). Beta-Lap se reduce por NQO1 como la mayoría de las quinonas, pero a diferencia de la mayoría, su forma de hidroquinona es inestable y espontáneamente hace ciclos redox de una manera inútil en el que un mol de beta-lap genera ~ 120 moles de superóxido en dos minutos, induciendo predominantemente daños en la base del ADN y en la rotura de una sola hebra (SSB). Esto da como resultado la hiperactivación de PARP1 y necrosis programada, que elimina las células cancerosas NQO1 independientemente de: i, p53; ii, ciclo celular; iii, todos los conductores oncogénicos conocidos; y iv, expresión de genes apoptóticos/antiapoptóticos (por ejemplo, Bax, Bak, Bcl2). Por tanto, los 'medicamentos bioactivables NQO1' son candidatos excelentes y selectivos para los tumores para mejorar la eficacia de las terapias contra el cáncer, incluida la terapia para el cáncer de páncreas y otros cánceres de tumores sólidos.

Para mejorar su eficacia, los efectos sinérgicos de agregar el fármaco modificador del sitio AP y el inhibidor de la reparación de la escisión de bases (BER), metoxiamina (MeOX), con beta-lap contra células de cáncer de páncreas que sobreexpresan NQO1. La sinergia de MeOX beta-lap dio como resultado una mayor letalidad de dosis subletales de beta-lap; un aumento de la formación de lesiones de ADN solo en células tumorales; pérdidas drásticas de los niveles de ATP; y supresión drástica de la glucólisis. Por tanto, MeOX mejora la hiperactivación de PARP1 y la destrucción celular sinérgica mediante beta-lap. Mecánicamente, los datos indican que PARP1 detecta sitios modificados MeOX-AP o SSB, permitiendo la hiperactivación de PARP1 y la muerte celular sinérgica. Debido a que MeOX es un agente no tóxico, la combinación de MeOX y un segundo agente puede proporcionar terapias para el tratamiento de cánceres, particularmente el cáncer de páncreas, así como otros cánceres sólidos que sobreexpresan NQO1.

Quinonas terapéuticas

DNQ es un potente agente quimioterapéutico que presenta una amplia ventana terapéutica que es muy prometedora para la terapia dirigida contra un amplio espectro de cánceres difíciles de tratar, incluido el cáncer de páncreas y de pulmón no microcítico. A pesar de los considerables avances en la quimioterapia contra el cáncer, la falta de selectividad de la mayoría de los agentes quimioterapéuticos contra el cáncer sigue siendo un factor limitante importante. Los altos niveles de NAD(P)H:quinona oxidorreductasa-1 (NQO1, DT-diaforasa, EC 1.6.99.2) encontrados en la mayoría de los tumores sólidos, particularmente en células de cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC), próstata, pancreático y de mama, proporcionan una diana para los tratamientos terapéuticos descritos en el presente documento. NQO1 es una oxidorreductasa de dos electrones desintoxicante inducible de fase II capaz de reducir la mayoría de las quinonas, que forma hidroquinonas estables. En la mayoría de los casos, la glutatión transferasa detoxifica las hidroquinonas, conjugándolas con glutatión para su secreción y evitando eficazmente las semiquinonas más tóxicas.

Para algunos compuestos raros, sin embargo, la biorreducción mediada por NQO1 se puede aprovechar para la actividad antitumoral. En lugar de promover la detoxificación, la actividad de NQO1 puede convertir quinonas específicas en especies altamente citotóxicas. La mayoría de las quinonas antitumorales dependientes de NQO1 son alquilantes de ADN: (a) mitomicina C (MMC); (b) RH1; (c) E09; y (d) AZQ. Sin embargo, estos alquilantes de ADN no solo están sujetos a vías de detoxificación, sino que la resistencia de las vías de reparación del ADN elevadas o inducibles limita su utilidad. Además, muchos de estos fármacos son sustratos eficaces para las oxidorreductasas de un electrón que se expresan de forma ubicua en tejidos normales.

La orfo-naftoquinona, p-lapachona (p-lap, Esquema 1), elimina las células cancerosas cultivadas y los modelos de tumores de ratón o humano xenoinjerto murino y ortotópico in vivo de una manera dependiente de NQO1. En contraste con las quinonas alquilantes, p-lap induce la muerte celular por la formación de especies reactivas de oxígeno (ROS) dependientes de NQO1 y el estrés oxidativo. El metabolismo de NQO1 de p-lap da como resultado una hidroquinona inestable que se oxida espontáneamente por dos equivalentes de dioxígeno, generando superóxido.

Esquema 1. Ejemplos de compuestos de quinona.

Desoxiniboquinona Isobutildesoxiniboquinona p-Lapachona Menadiona (DNQ) (IB-DNQ) P-Lap

Se establece así un ciclo inútil de oxidorreducción y los niveles elevados de superóxido, a su vez, causan lesiones masivas en la base del ADN y rotura de una sola hebra (SSB) que normalmente se reparan fácil y rápidamente. Sin embargo, las lesiones extensas de ADN creadas en células cancerosas que sobreexpresan NQO1 tratadas con plap dan como resultado la hiperactivación de la poli(ADP-ribosa) polimerasa-1 (PARP1), una base esencial y enzima reparadora de SSB. A su vez, la hiperactivación de PARP1 da como resultado una reducción drástica del conjunto de NAD+/ATP debido a la ribosilación de ADP, causando un tremendo agotamiento de la energía y muerte celular. Como resultado, p-lap elimina las células cancerosas NQO1+ mediante un mecanismo de necrosis programado único que es: (a) independiente de la activación de caspasa o del estado de p53; (b) independiente de los niveles de bcl-2; (c) no se ve afectado por deficiencias de BAX/BAK; (d) independiente de EGFR, Ras u otra activación de transducción de señales constitutiva; y/o (e) no depende de la proliferación, ya que NQO1 se expresa en todas las fases del ciclo celular. Por tanto, p-lap es un quimioterapéutico experimental atractivo, y varias formulaciones de plap han estado, o están en, ensayos clínicos de fase I/II.

La desoxiniboquinona (DNQ, Esquema 1) es un agente antineoplásico prometedor. Los datos anteriores indicaron que DNQ elimina las células cancerosas a través del estrés oxidativo y la formación de ROS. La citotoxicidad de DNQ fue parcialmente prevenida por A/-acetilcisteína, un eliminador global de radicales libres y precursor del glutatión. Ahora se ha demostrado que DNQ experimenta un ciclo inútil dependiente de NQO1 similar a p-lap, en el que se consume oxígeno y se forman ROS y el daño extenso del ADN desencadena la hiperactivación de PARPI, con disminuciones drásticas en los grupos de nucleótidos esenciales NAD+/ATP, indicativo de necrosis programada. De manera importante, DNQ es de 20 a 100 veces más potente que p-lap, con una ventana terapéutica significativamente mejorada en células NQO1+ frente a células NQO1-NSCLC. La muerte eficaz dependiente de NQO1 por DNQ también se muestra en modelos in vitro de cáncer de mama, próstata y páncreas. Además, NQO1 in vitro procesa DNQ de manera mucho más eficaz que p-lap, lo que indica que una mayor utilización explica su mayor potencia. Por tanto, DNQ ofrece una promesa significativa como agente quimioterapéutico selectivo para el tratamiento de tumores sólidos con niveles elevados de NQO1, sin embargo, la terapia de combinación descrita en el presente documento puede proporcionar terapias eficaces con una variedad de compuestos de quinona debido a la sinergia de la combinación.

Debido a que NQO1 se sobreexpresa en la mayoría de los tumores sólidos y la citotoxicidad de los diversos compuestos quinónicos depende predominantemente de la expresión elevada de la enzima NQO1, por tanto, los compuestos de quinina y sus derivados pueden ser un medio excelente para abordar los tumores sólidos. La invención proporciona numerosos compuestos citotóxicos nuevos que se pueden utilizar como nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer, como se describe en el presente documento.

Lo anterior y otros objetos y características de la divulgación se harán más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, que procede con referencia a las figuras adjuntas. Otras realizaciones, formas, características, aspectos, beneficios, objetos y ventajas de la presente solicitud resultarán evidentes a partir de la descripción detallada y las figuras que se proporcionan a continuación.

Uso de fármacos bioactivables NQO 1 para uso específico de tumores con inhibidores de la reparación del ADN Los fármacos bioactivables de NQO1 (todos los derivados de p-lapachona y DNQ que son sustratos de NQO1) generan niveles tremendos de especies reactivas de oxígeno de una manera selectiva de tumores dependiente de NQO1, lo que permite el uso de inhibidores de reparación del ADN, incluidos todos los inhibidores de PARP1, inhibidores de la reparación de la rotura de ADN bicatenario, así como inhibidores de la reparación por escisión de bases, para ser usadosde una manera específica del tumor, efectuando una eficacia selectiva del tumor de ambos agentes. Los inhibidores de la reparación del ADN, en general, han fallado debido a la falta de selectividad tumoral. Debido a que estos fármacos bioactivables NQO1 provocan la producción selectiva de lesiones de ADN por parte del tumor, incluido el daño de la base del ADN, roturas de una sola hebra y roturas de doble hebra, se pueden utilizar inhibidores de reparación de ADN para proporcionar actividad antitumoral selectiva de tumores. La actividad y las respuestas selectivas del tumor incluyen una inhibición espectacular de la glucólisis así como otra inhibición del metabolismo selectivo del tumor.

Los fármacos bioactivables NQO1 pueden usarse para hacer que los inhibidores de la reparación del ADN sean selectivos para el tumor de una manera que no sea obvia a menos que se conozcan las lesiones de ADN generadas, y de una manera que provoque cambios metabólicos y respuestas de muerte celular que no son obvias y se alteran dependiendo de los inhibidores de reparación del ADN utilizados. Por ejemplo, los inhibidores de PARP1 administrados con fármacos bioactivables DNQ provocan respuestas apoptóticas estándar sin pérdidas de energía. Por el contrario, la reparación de rotura de doble hebra de ADN, la reparación de rotura de hebra única y los inhibidores de reparación de escisión de base mejoran la hiperactivación de PARP1, con pérdidas posteriores en el metabolismo energético y necrosis programada.

El único uso actual de inhibidores de la reparación del ADN, tales como los inhibidores de PARP-1, es a través del único aprovechamiento de respuestas de letalidad sintéticas específicas de tumores (por ejemplo, el uso de inhibidores de PARP1 en tumores mutantes BRACA1/2). Esto, sin embargo, es un uso muy limitado de inhibidores de la reparación del ADN: aproximadamente solo el 5 % de los cánceres de mama solamente. Por el contrario, el enfoque descrito en el presente documento puede tratar todos los cánceres que tienen niveles elevados de NQO1 y niveles reducidos de catalasa, mientras que el tejido normal tiene catalasa elevada y niveles bajos de NQO1. Los procedimientos descritos en el presente documento proporcionan un nuevo uso de inhibidores de reparación del ADN, permitiendo su uso de manera selectiva para el tumor, al mismo tiempo que potencia los fármacos bioactivables NQO1. Ambos agentes se pueden usar en dosis no tóxicas para generar respuestas de eficacia sinérgicas selectivas para el tumor.

Hasta la fecha, los inhibidores de la reparación del ADN fallan por la falta de respuesta selectiva de tumores y su eficacia. Los procedimientos descritos en el presente documento resuelven estas limitaciones, al tiempo que potencia en gran medida los fármacos bioactivables NQO1. Los procedimientos también permiten el uso de dosis de 2 a > 4 veces más bajas de fármacos bioactivables NQO1, que resuelven los efectos tóxicos de estos fármacos bioactivables NQO1 (por ejemplo, metahemaglobinemia). En los procedimientos terapéuticos, los inhibidores se pueden añadir antes y después de los fármacos bioactivables NQO1, como mínimo antes, y opcionalmente antes, simultáneamente, después, o una combinación de los mismos. Las respuestas de muerte celular dependen del inhibidor utilizado. Las respuestas no son obvias e implicarían biomarcadores específicos a seguir in vivo.

Definiciones

En general, los términos y expresiones utilizados en el presente documento tienen su significado reconocido en la técnica, que se puede encontrar por referencia a textos estándar, referencias de revistas y contextos conocidos por los expertos en la técnica. Dichos significados reconocidos en la materia se pueden obtener por referencia a diccionarios técnicos, tales como Hawley's Condensed Chemical Dictionary 14a Edición, por R.J. Lewis, John Wiley y Sons, Nueva York, N.Y., 2001.

BER, reparación por escisión de base; SSBR, reparación de rotura de una sola hebra; DSBR, reparación de rotura de hebra doble.

Las formas en singular "un", "uno/una", y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por tanto, por ejemplo, una referencia a "un compuesto" incluye una pluralidad de tales compuestos, de modo que un compuesto X incluye una pluralidad de compuestos X. Se indica además que las reivindicaciones se pueden redactar para excluir cualquier elemento opcional. Así pues, la presente declaración está destinada a servir como base antecedente para el uso de terminología exclusiva, tal como "únicamente", "solamente", y similares, en relación con la recitación de elementos de reivindicación o el uso de una limitación "negativa".

El término "y/o" significa cualquiera de los elementos, cualquier combinación de los elementos, o todos los elementos con los que se asocia este término. La expresión "uno o más" es fácilmente comprensible por un experto en la técnica, particularmente cuando se lee en el contexto de su uso. Por ejemplo, uno o más sustituyentes en un anillo de fenilo se refiere a uno a cinco, o uno a cuatro, por ejemplo, si el anillo de fenilo está disustituido.

El término "aproximadamente" se puede referir a una variación de ± 5%, ± 10 %, ± 20% o ± 25% del valor especificado. Por ejemplo, En algunas realizaciones, "aproximadamente el 50" por ciento puede tener una variación del 45 al 55 por ciento. Para intervalos de números enteros, el término "aproximadamente" puede incluir uno o dos números enteros mayores y/o menores que un número entero mencionado en cada extremo del intervalo. A menos que se indique lo contrario en el presente documento, el término "aproximadamente" pretende incluir valores, por ejemplo, porcentajes en peso, próximos al intervalo mencionado que son equivalentes en términos de la funcionalidad del ingrediente individual, la composición, o la realización.

Tal y como comprenderá el experto en la materia, todos los números, incluidos los que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como el peso molecular, condiciones de reacción, etc., son aproximaciones y se entiende que están eventualmente modificadas en todos los casos por el término "aproximadamente". Estos valores pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que buscan obtener los expertos en la técnica utilizando las enseñanzas de las descripciones del presente documento. También se entiende que tales valores contienen inherentemente variabilidad resultante necesariamente de las desviaciones estándar encontradas en sus respectivas mediciones de prueba.

Si bien la presente invención puede adoptar muchas formas diferentes, con el fin de promover la comprensión de los principios de la invención, ahora se hará referencia a las realizaciones ilustradas en los dibujos y se utilizará un lenguaje específico para describir las mismas. No obstante, se entenderá que por ello no se pretende limitar el ámbito de la invención. Se contempla cualquier alteración y modificación adicional de las realizaciones descritas y cualquier aplicación adicional de los principios de la invención tal como se describe en el presente documento, como se le ocurriría normalmente a un experto en la técnica a la que se refiere la invención.

Cuando se desvela un grupo de sustituyentes en el presente documento, se entiende que todos los miembros individuales de ese grupo y todos los subgrupos, incluyendo cualquier isómero, enantiómero y diastereómero de los miembros del grupo, se desvela por separado. Cuando en el presente documento se utiliza un grupo Markush u otra agrupación, se pretende que todos los miembros individuales del grupo y todas las combinaciones y subcombinaciones posibles del grupo se incluyan individualmente en la divulgación. Cuando se describe un compuesto en el presente documento tal como un isómero particular, no se especifica el enantiómero o diastereómero del compuesto, por ejemplo, en una fórmula o en un nombre químico, dicha descripción pretende incluir cada isómero y enantiómero del compuesto descrito individualmente o en cualquier combinación. Adicionalmente, salvo que se indique lo contrario, se pretende que todas las variantes isotópicas de los compuestos desvelados en el presente documento estén abarcadas por la divulgación. Por ejemplo, se entenderá que uno o más hidrógenos en una molécula desvelada se pueden reemplazar con deuterio o tritio. Las variantes isotópicas de una molécula son generalmente útiles como estándares en ensayos para la molécula y en investigaciones químicas y biológicas relacionadas con la molécula o su uso. En la técnica se conocen procedimientos para preparar tales variantes isotópicas. Se pretende que los nombres específicos de compuestos sean ilustrativos, ya que se sabe que un experto en la técnica puede nombrar los mismos compuestos de forma diferente.

Siempre que se proporcione un intervalo en la memoria descriptiva, por ejemplo, un intervalo de temperatura, un intervalo de tiempo, un intervalo de cadena de carbono, o un intervalo de composición o concentración, todos los intervalos y subintervalos intermedios, así como todos los valores individuales incluidos en los intervalos dados están destinados a incluirse individualmente en la divulgación. Se entenderá que cualquier subintervalo o valor individual en un intervalo o subintervalo que se incluye en la descripción se puede excluir opcionalmente de las realizaciones de la invención.

Tal como se usa en el presente documento, "que comprende" es sinónimo de "que incluye", "que contiene", o "caracterizado por", y es inclusivo o abierto y no excluye elementos o etapas de procedimiento adicionales no citadas. Tal como se usa en el presente documento, "consistente en" excluye cualquier elemento, etapa o ingrediente no especificado en el elemento de la reivindicación. Tal como se usa en el presente documento, "que consiste esencialmente en" no excluye materiales o etapas que no afecten materialmente a las características básicas y novedosas de la reivindicación. En cada caso en el presente documento, cualquiera de las expresiones "que comprende", "que consiste esencialmente en" y "que consiste en" puede ser sustituido por cualquiera de las otras dos expresiones. La invención descrita ilustrativamente en el presente documento se puede poner en práctica de manera adecuada en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se desvelan de manera específica en el presente documento.

Un "agente quimioterapéutico" se refiere a cualquier sustancia capaz de reducir o prevenir el crecimiento, la proliferación o la diseminación de una célula cancerosa, una población de células cancerosas, tumor u otro tejido maligno. El término también pretende abarcar cualquier agente antitumoral o anticanceroso.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto con respecto al procedimiento de tratamiento sujeto se refiere a una cantidad del compuesto o compuestos en una preparación que, cuando se administra como parte de un régimen de dosificación deseado (a un mamífero, tal como un ser humano) alivia un síntoma, mejora una afección, o retrasa la aparición de afecciones de enfermedad de acuerdo con estándares clínicamente aceptables para el trastorno o afección a tratar o el fin cosmético, por ejemplo, con una relación beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico.

Los términos "tratando", "tratar" y "tratamiento" incluyen (i) prevenir una enfermedad, que se produzca una afección patológica o médica (por ejemplo, profilaxis); (ii) inhibir la enfermedad, afección patológica o médica o detener su desarrollo; (iii) aliviar la enfermedad, afección patológica o médica; y/o (iv) disminuir los síntomas asociados con la enfermedad, afección patológica o médica. Por tanto, los términos "tratar", "tratamiento" y "tratando" se pueden extender a la profilaxis y pueden incluir prevenir, prevención, previviendo, reducción, detención o revertir la progresión o la gravedad de la afección o los síntomas que se están tratando. Así pues, el término "tratamiento" puede incluir la administración médica, terapéutica y/o profiláctica, según sea apropiado. El término "tratar" o "tratamiento" puede incluir invertir, reducir o detener los síntomas, signos clínicos y patología subyacente de una afección para mejorar o estabilizar la afección de un sujeto.

Los términos "inhibir", "inhibiendo" e "inhibición" se refieren a la ralentización, detención o reversión del crecimiento o la progresión de una enfermedad, infección, afección o grupo de células. La inhibición puede ser superior a aproximadamente el 20 %, el 40 %, el 60 %, el 80 %, el 90 %, el 95 % o el 99 %, por ejemplo, en comparación con el crecimiento o la progresión que se produce en ausencia del tratamiento o contacto.

La expresión "poner en contacto" se refiere al acto de tocar, hacer contacto, o de traer a la proximidad inmediata o cercana, incluso a nivel celular o molecular, por ejemplo, para provocar una reacción fisiológica, una reacción química o un cambio físico, por ejemplo, en una solución, en una mezcla de reacción, in vitro o in vivo.

El término "exponer" pretende abarcar definiciones tal como se entienden ampliamente en la técnica. En una realización, el término significa someter o permitir ser sometido a una acción, influencia o condición. Por ejemplo y solo a modo de ejemplo, una célula puede ser sometida a la acción, influencia o condición de una cantidad terapéuticamente eficaz de una forma farmacéuticamente aceptable de un agente quimioterapéutico.

El término "célula cancerosa" pretende abarcar definiciones tal como se entienden ampliamente en la técnica. En una realización, el término se refiere a una célula regulada de manera anómala que puede contribuir a una afección clínica de cáncer en un ser humano o animal. En una realización, el término se puede referir a una línea celular cultivada o una célula dentro o derivada de un cuerpo humano o animal. Una célula cancerosa puede ser de una amplia variedad de células diferenciadas, tipos de tejidos u órganos tal como se entiende en la técnica.

El término "tumor" se refiere a una neoplasia, típicamente una masa que incluye una pluralidad de células malignas agregadas.

Los siguientes grupos pueden ser grupos R o grupos puente, según sea adecuado, en las fórmulas descritas en el presente documento.

El término "alquilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo saturado monorradical ramificada o no ramificada que tiene preferentemente de 1 a 30 átomos de carbono. Los grupos alquilo cortos son aquellos que tienen de 1 a 12 átomos de carbono, incluidos los grupos metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo, incluyendo todos sus isómeros. Los grupos alquilo largos son los que tienen de 12 a 30 átomos de carbono. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

Los grupos alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo y heterociclo, y versiones cíclicas y/o insaturadas de los mismos, pueden ser grupos R de Fórmula I, y cada grupo puede estar opcionalmente sustituido.

El término "sustituido" indica que uno o más átomos de hidrógeno en el grupo indicado en la expresión que usa "sustituido" se reemplaza por un "sustituyente". El número al que se hace referencia con "uno o más" puede resultar evidente a partir del resto en el que residen los sustituyentes. Por ejemplo, uno o más pueden referirse a, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, o 6; en algunas realizaciones 1, 2 o 3; y en otras realizaciones 1 o 2. El sustituyente puede ser uno de una selección de grupos indicados, o puede ser un grupo adecuado conocido por los expertos en la técnica, con la condición de que la valencia normal del átomo sustituido no se supere, y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Los grupos sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halo, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, arilo, aroílo, (aril)alquilo (por ejemplo, bencilo o feniletilo), heteroarilo, heterociclo, cicloalquilo, alcanoílo, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio, difluorometilo, acilamino, nitro, carboxi, carboxialquilo, ceto, tioxo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, heterociclosulfinilo, heterociclosulfonilo, fosfato, sulfato, hidroxilamina, hidroxil(alquil)amina y ciano. Adicionalmente, los grupos sustituyentes adecuados pueden ser, por ejemplo, -X, -R, -O, -OR, -SR, -S-, -NR², -NR³ , =NR, -CX³ , -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO² , =N², -N³, -NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -S(=O)²O^‘ , -S(=O)²OH, -S(=O)²R, -OS(=O)²OR, -S(=O)²NR, -S(=O)R, -OP(=O)O² RR, -P(=O)O² RR, -P(=O)(O-)² , -P(=O)(OH)² , -C(=O)R, -C(=O)X, -C(S)R, -C(O)OR, -C(O)O-, -C(S)OR, -C(O)SR, -C(S)SR, -C(O)NRR, -C(S)NRR o -C(NR)NRR, en el que cada X es independientemente un halógeno ("halo"): F, Cl, Br o I; y cada R es independientemente -H, alquilo, arilo, (aril)alquilo (por ejemplo, bencilo), heteroarilo, (heteroaril)alquilo, heterociclo, heterociclo(alquilo) o un grupo protector. Como comprenderá fácilmente un experto en la técnica, cuando un sustituyente es ceto (= O) o tioxo (= S), o similar, luego se reemplazan dos átomos de hidrógeno en el átomo sustituido. En algunas realizaciones, uno o más de los sustituyentes anteriores pueden excluirse del grupo de posibles valores para sustituyentes en un grupo sustituido.

El término "heteroalquilo", por sí mismo o junto con otro término, significa, a menos que se señale otra cosa, un radical hidrocarburo estable de cadena lineal o ramificada, o cíclico, o combinaciones de los mismos, a menudo tiene de 2 a 14 carbonos, o de 2 a 10 carbonos en la cadena, incluyendo al menos un átomo de carbono y al menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en O, N, P, Si y S, y en el que los átomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El heteroátomo o heteroátomos O, N, P, S y Si se pueden colocar en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo o en la posición en la que el grupo alquilo está unido al resto de la molécula. El grupo heteroalquilo puede tener, por ejemplo, de uno a aproximadamente 20 átomos de carbono en una cadena. Los ejemplos incluyen, aunque no de forma limitativa, -CH²-CH²-O-CH³ , -CH²-CH²-NH-CH³, -CH²-CH²-N(CH³)-CH³, --CH²-S -C H ²-C H ³, --CH²--CH²--S(O)-CH^a , --CH²--CH²--S(O)²--CH³ , --CH=CH--O-CH³ , --Si(CH³ )³ , -CH²-CH=N-OCH³ , --CH=CH--N(CH³ )--CH³ , O--CH³ , -O-CH²-CH³, y --CN. Ejemplos adicionales de grupos heteroalquilo incluyen éteres de alquilo, alquilaminas secundarias y terciarias, amidas, sulfuros de alquilo y similares. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente. Tal como se usa en el presente documento, la referencia a una cadena cuando se usa en el contexto de un grupo puente se refiere a la cadena directa de átomos que unen las dos posiciones terminales del grupo puente. El término "alcohol" tal como se usa en el presente documento puede definirse como un alcohol que comprende una resto alquilo C^1-12 sustituido en un átomo de hidrógeno con un grupo hidroxilo. Los alcoholes incluyen etanol, npropanol, i-propanol, n-butanol, i-butanol, s-butanol, t-butanol, n-pentanol, i-pentanol, n-hexanol, ciclohexanol, nheptanol, n-octanol, n-nonanol, n-decanol y similares. Los átomos de carbono en los alcoholes pueden ser rectos, ramificados o cíclicos.

"Acilo" se puede definir como un grupo alquil-CO- en el que el grupo alquilo es tal como se describe en el presente documento. Los ejemplos de acilo incluyen acetilo y benzoílo. El grupo alquilo puede ser un grupo alquilo C¹-C⁶. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente (es decir, divalente).

"Alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo en el que alquilo se define en el presente documento. Preferentemente, el alcoxi es un alcoxi C¹-C⁶. Los ejemplos incluyen, aunque no de forma limitativa, metoxi y etoxi. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alquenilo" como grupo o parte de un grupo denota un grupo hidrocarburo alifático que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado, preferentemente con 2-14 átomos de carbono, más preferentemente, de 2-12 átomos de carbono, lo más preferentemente 2-6 átomos de carbono, en la cadena normal. El grupo puede contener una pluralidad de dobles enlaces en la cadena normal y la orientación alrededor de cada uno es independientemente E o Z. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, aunque no de forma limitativa, etenilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, heptenilo, octenilo y nonenilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alquinilo" como grupo o parte de un grupo se puede definir como un grupo hidrocarburo alifático que contiene un triple enlace carbono-carbono, cuya cadena puede ser lineal o ramificada, preferentemente de 2 a 14 átomos de carbono, más preferentemente, de 2-12 átomos de carbono, más preferentemente de 2-6 átomos de carbono en la cadena normal. Las estructuras ilustrativas incluyen, aunque no de forma limitativa, etinilo y propinilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alqueniloxi" se refiere a un grupo —O—alquenilo en el que alquenilo es tal como se define en el presente documento. Los grupos alqueniloxi preferidos son grupos alqueniloxi C¹-C⁶. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alquiniloxi" se refiere a un grupo —O-alquinilo en el que alquinilo es tal como se define en el presente documento. Los grupos alquiniloxi preferidos son grupos alquiniloxi C¹-C⁶. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo -C(O)--O-alquilo en el que alquilo es tal como se define en el presente documento. El grupo alquilo es preferentemente un grupo alquilo C¹-C⁶. Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alquilsulfinilo" se puede definir como un grupo -S(O)-alquilo en el que el alquilo es tal como se definió anteriormente. El grupo alquilo es preferentemente un grupo alquilo C¹-C⁶. Los grupos alquilsulfinilo ilustrativos incluyen, pero sin limitación, metilsulfinilo y etilsulfinilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente. "Alquilsulfonilo" se refiere a un grupo -S(O)²-alquilo en el que el alquilo es tal como se definió anteriormente. El grupo alquilo es preferentemente un grupo alquilo C¹-C⁶. Los ejemplos incluyen, pero sin limitarse a metilsulfonilo y etilsulfonilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Amino" se refiere a -NH² y "alquilamino" se refiere a -NR² , en el que al menos un R es alquilo y el segundo R es alquilo o hidrógeno. El término "acilamino" se refiere a RC(= O)NH-, en el que R es alquilo o arilo. El grupo alquilo puede ser, por ejemplo, un grupo alquilo C¹-C⁶. Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, metilamino y etilamino. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Alquilaminocarbonilo" se refiere a un grupo alquilaminocarbonilo en el que el alquilamino es tal como se definió anteriormente. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Cicloalquilo" se refiere a un carbociclo saturado o parcialmente saturado, monocíclico o condensado o espiropolicíclico de 3 a aproximadamente 30 átomos de carbono, que a menudo contiene de 3 a aproximadamente 9 carbonos por anillo, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclooctilo y similares. Incluye sistemas monocíclicos tales como ciclopropilo y ciclohexilo, sistemas bicíclicos tales como decalina y sistemas policíclicos tales como adamantano. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Cicloalquenilo" se puede definir como un sistema de anillo monocíclico o multicíclico no aromático que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y que preferentemente tiene de 5 a 10 átomos de carbono por anillo. Los anillos de cicloalquenilo monocíclicos ilustrativos incluyen ciclopentenilo, ciclohexenilo o cicloheptenilo. El grupo cicloalquenilo puede estar sustituido con uno o más grupos sustituyentes. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

Los grupos alquilo y cicloalquilo pueden ser sustituyentes en las porciones alquilo de otros grupos, tales como, sin limitación, alcoxi, alquilaminas, alquilcetonas, arilalquilo, heteroarilalquilo, alquilsulfonilo y sustituyentes de ésteres de alquilo y similares. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Cicloalquilalquilo" se puede definir como un grupo cicloalquil-alquilo en el que los restos cicloalquilo y alquilo son tal como se describieron previamente. Los grupos monocicloalquilalquilo ilustrativos incluyen ciclopropilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo y cicloheptilmetilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Heterocicloalquilo" se refiere a un anillo monocíclico, bicíclico o policíclico saturado o parcialmente saturado que contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, azufre, oxígeno, preferentemente de 1 a 3 heteroátomos en al menos un anillo. Cada anillo tiene preferentemente de 3 a 10 miembros, más preferentemente de 4 a 7 miembros. Ejemplos de sustituyentes heterocicloalquilo adecuados incluyen pirrolidilo, tetrahidrofurilo, tetrahidrotiofuranilo, piperidilo, piperazilo, tetrahidropiranilo, morfolino, 1,3-diazapano, 1,4-diazapano, 1,4-oxazepano y 1,4-oxatiapano. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Heterocicloalquenilo" se refiere a un heterocicloalquilo tal como se describió anteriormente pero que contiene al menos un doble enlace. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Heterocicloalquilalquilo" se refiere a un grupo heterocicloalquil-alquilo en el que los restos heterocicloalquilo y alquilo son tal como se describieron previamente. Los grupos heterocicloalquilalquilo ilustrativos incluyen (2-tetrahidrofuril)metilo y (2-tetrahidrotiofuranil)metilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente.

"Halo" se refiere a un sustituyente halógeno tal como flúor, cloro, bromo o yodo.

El término "arilo" se refiere a un grupo hidrocarburo aromático derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un sistema de anillo aromático original. El radical puede estar en un átomo de carbono saturado o insaturado del sistema de anillo original. El grupo arilo puede tener de 6 a 18 átomos de carbono. El grupo arilo puede tener un solo anillo (por ejemplo, fenilo) o múltiples anillos condensados (fusionados), en el que al menos un anillo es aromático (por ejemplo, naftilo, dihidrofenantrenilo, fluorenilo o antrilo). Los grupos arilo típicos incluyen, aunque no de forma limitativa, radicales derivados de benceno, naftaleno, antraceno, bifenilo y similares. El arilo puede estar sin sustituir u opcionalmente sustituido, tal como se describió anteriormente para los grupos alquilo.

El término "heteroarilo" se define en el presente documento como un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico que contiene uno, dos o tres anillos aromáticos y que contiene al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre en un anillo aromático, y que puede estar insustituido o sustituido, por ejemplo, con uno o más, y en particular de uno a tres, sustituyentes, como se describe anteriormente en la definición de "sustituido". Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, aunque no de forma limitativa, 2H-pirrolilo, 3H-indolilo, 4H-quinolizinilo, acridinilo, benzo[b]tienilo, benzotiazolilo, p-carbolinilo, carbazolilo, cromenilo, cinolinilo, dibenzo[b,d]furanilo, furazanilo, furilo, imidazolilo, imidizolilo, indazolilo, indolisinilo, indolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftiridinilo, oxazolilo, perimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenarsazinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxatiinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridilo, pirimidinilo, pirimidinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolilo, quinoxalinilo, tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo, tetrazolilo y xantenilo. En una realización, el término "heteroarilo" denota un anillo aromático monocíclico que contiene cinco o seis átomos de anillo que contienen carbono y 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno sin peróxido, azufre, y N(Z) en el que Z está ausente o es H, O, alquilo, arilo, o alquilarilo(C¹-C⁶). En otra realización, heteroarilo denota un heterociclo bicíclico condensado en orto de aproximadamente ocho a diez átomos de anillo derivado del mismo, particularmente un benzoderivado o un derivado mediante la condensación de un propileno, trimetileno, o un dirradical de tetrametileno del anterior.

El término "heterociclo" se refiere a un sistema de anillo saturado o parcialmente insaturado, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado del grupo oxígeno, nitrógeno y azufre, y opcionalmente sustituido con uno o más grupos tal como se define en el presente documento bajo el término "sustituido". Un heterociclo puede ser un grupo monocíclico, bicíclico o tricíclico que contiene uno o más heteroátomos. Un grupo heterociclo también puede contener un grupo oxo (= O) unido al anillo. Los ejemplos no limitantes de grupos heterociclo incluyen 1,3-dihidrobenzofurano, 1,3-dioxolano, 1,4-dioxano, 1,4-ditiano, 2H-pirano, 2-pirazolina, 4H-pirano, cromanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, indolinilo, isocromanilo, isoindolinilo, morfolina, piperazinilo, piperidina, piperidilo, pirazolidina, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirrolidina, pirrolina, quinuclidina y tiomorfolina.

La abreviatura "DNQ^d" tal como se usa en el presente documento se refiere a un análogo o derivado de DNQ.

Los grupos adicionales que pueden ser grupos puente o grupos terminales de R¹, R² , R³y R⁴ se describen a continuación.

La expresión "éster de carbonato" se puede definir como un grupo funcional que tiene una estructura general R'OC(= O)OR, en el que R' puede ser el núcleo tricíclico de Fórmula I y R puede ser tal como se define en las definiciones de las variables de Fórmula I.

El término "éster" se puede definir como un grupo funcional que tiene una estructura general RC(=O)OR', en la que R' puede ser el núcleo tricíclico de Fórmula I y R puede ser tal como se define en las definiciones de las variables de Fórmula I, o viceversa.

Un grupo "piridilo" puede ser un grupo 2-piridilo, 3-piridilo o 4-piridilo.

El término "sulfhidrilo" se puede definir como un grupo funcional que tiene una estructura general -S-H.

El término "sulfinilo" se puede definir como un grupo funcional que tiene una estructura general R-S(=O)-R', en la que R' puede ser el núcleo tricíclico de Fórmula I y R puede ser tal como se define en las definiciones de las variables de Fórmula I, o viceversa.

El término "sulfonilo" se puede definir como un grupo funcional que tiene una estructura general R-S(=O)²-R', en la que R' puede ser el núcleo tricíclico de Fórmula I y R puede ser tal como se define en las definiciones de las variables de Fórmula I, o viceversa.

El término "hexosa" se puede definir como un monosacárido que tiene seis átomos de carbono que tiene la fórmula química general C⁶H¹²O⁶ y pueden incluir aldohexosas que tienen un grupo funcional aldehído en la posición 1 o cetohexosas que tienen un grupo funcional cetona en la posición 2. Los ejemplos de aldohexosas incluyen, alosa, altrosa, glucosa, manosa, gulosa, idosa, galactosa y talosa, en forma D o L.

Los inhibidores de PARP son un grupo de inhibidores farmacológicos de la enzima poli ADP ribosa polimerasa (PARP). Están desarrollados para múltiples indicaciones, incluido el tratamiento del cáncer. Varias formas de cáncer dependen más de PARP que las células normales, haciendo de PARP una diana atractiva para la terapia del cáncer. Los inhibidores de PARP-1 son particularmente útiles en las terapias de combinación descritas en el presente documento. Los inhibidores de PARP-1 se pueden adquirir de proveedores comerciales tales como Selleck Chemicals. Los ejemplos de inhibidores de PARP-1 incluyen los inhibidores enumerados en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1. Inhibidores de PARP-1.

Compuestos y procedimientos

La invención proporciona un fármaco bioactivable NQO1 para su uso tal como se define en la reivindicación 1.

En determinadas realizaciones, el compuesto es el Compuesto 87 o una sal o solvato del mismo:

Los pacientes con tumores sólidos que tienen niveles elevados de NQO1 se pueden tratar mediante la administración de una cantidad eficaz de una forma farmacéuticamente activa de DNQ y/o DNQ-87

La invención proporciona DNQ y DNQ-87 para su uso en procedimientos de tratamiento de un paciente que tiene células tumorales que tienen niveles elevados de NQO1. Los procedimientos pueden incluir administrar a un paciente que tiene células tumorales con niveles elevados de NQO1 una cantidad terapéuticamente eficaz de DNQ o DNQ-87. La invención proporciona además DNQ y DNQ-87 para su uso en procedimientos de tratamiento de una célula tumoral que tiene un nivel elevado de NQO1 que comprende exponer la célula tumoral a una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición descritos en el presente documento, en el que se trata la célula tumoral, se elimina o se inhibe su crecimiento. El tumor o las células tumorales pueden ser células tumorales malignas. En algunas realizaciones, las células tumorales son células cancerosas, tales como el carcinoma de pulmón no microcítico.

Por lo tanto, los procedimientos se pueden utilizar para el tratamiento o la prevención de diversos trastornos de neoplasia, incluido el melanoma lentiginoso acral, queratosis actínica, adenocarcinoma, carcinoma adenoide quístico, adenomas, adenosarcoma, carcinoma adenoescamoso, tumores astrocíticos, carcinoma de la glándula de Bartolino, carcinoma de células basales, carcinomas de glándulas bronquiales, capilares, carcinoides, carcinoma, carcinosarcoma, cavernoso, colangiocarcinoma, condrosarcoma, papiloma/carcinoma del plexo corioide, carcinoma de células claras, cistadenoma, tumor del seno endodérmico, hiperplasia endometrial, sarcoma endometrial estromal, adenocarcinoma endometrioide, ependimario, epitelioide, sarcoma de Ewing, fibrolaminar, hiperplasia nodular focal, gastrinoma, tumores de células germinales, glioblastoma, glucagonoma, hemangioblastomas, hemangioendotelioma, hemangiomas, adenoma hepático, adenomatosis hepática, carcinoma hepatocelular, insulinoma, neoplasia intaepitelial, neoplasia interhepitelial escamocelular, carcinoma escamocelular invasivo, carcinoma de células grandes, leiomiosarcoma, melanomas lentigo maligno, melanoma maligno, tumores mesoteliales malignos, meduloblastoma, meduloepitelioma, melanoma, meningitis, mesoteliales, carcinoma metastásico, carcinoma mucoepidermoide, neuroblastoma, adenocarcinoma neuroepitelial, melanoma nodular, carcinoma microcítico, oligodendroglial, osteosarcoma, polipéptido pancreático, adenocarcinoma papilar seroso, célula pineal, tumores de la pituitaria, plasmacitoma, pseudosarcoma, blastoma pulmonar, carcinoma de células renales, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, sarcoma, carcinoma seroso, carcinoma microcítico, carcinomas de tejido blando, tumor secretor de somatostatina, carcinoma escamoso, carcinoma escamocelular, submesotelial, melanoma de dispersión superficial, carcinoma indiferenciado, melanoma uveal, carcinoma verrucoso, vipoma, carcinoma bien diferenciado y tumor de Wilm. Por consiguiente, las composiciones y procedimientos descritos en el presente documento se pueden usar para tratar el cáncer de vejiga, el cáncer de cerebro (incluidas neoplasias intracraneales tales como glioma, meninigioma, neurinoma y adenoma), cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón (SCLC o NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.

Procedimientos de preparación de compuestos para su uso en la invención

La divulgación también se refiere a procedimientos para preparar los compuestos para su uso según la invención. Los compuestos y composiciones se pueden preparar mediante cualquiera de las técnicas aplicables de síntesis orgánica. Muchas de dichas técnicas son bien conocidas en la técnica. Sin embargo, muchas de las técnicas conocidas se elaboran en el Compendio de procedimientos sintéticos orgánicos (John Wiley y Sons, Nueva York), Vol. 1, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus y Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; y Vol. 6, Michael B. Smith; así como textos de referencia orgánicos estándar como March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a Ed. por M.B. Smith y J. March (John Wiley y Sons, Nueva York, 2001), Comprehensive Organic Synthesis; Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, en 9 volúmenes, Barry M. Trost, Ed.-in-Chief (Pergamon Press, Nueva York, impresión de 1993)); Advanced Organic Chemistry, Part B: Reactions and Synthesis, Segunda edición, Cary y Sundberg (1983); Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda edición, Greene, T.W. y Wutz, P.G.M., John Wiley y Sons, Nueva York; y Comprehensive Organic Transformations, Larock, R.C., Segunda edición, John Wiley y Sons, Nueva York (1999).

A continuación se proporcionan varios procedimientos ilustrativos para la preparación de las composiciones. Se describen procedimientos adicionales y técnicas útiles en el documento WO 2013/056073 (Hergenrother y col.). En general, las condiciones de reacción tales como la temperatura, el tiempo de reacción, los disolventes, los procedimientos de trabajo y similares, serán los comunes en la técnica para la reacción particular a realizar. El material de referencia citado, junto con el material allí citado, contiene descripciones detalladas de dichas condiciones. Normalmente, las temperaturas serán de -100 °C a 200 °C, los solventes serán apróticos o próticos dependiendo de las condiciones requeridas, y los tiempos de reacción serán de 1 minuto a 10 días. El tratamiento consiste típicamente en inactivar cualquier reactivo que no haya reaccionado seguido de una partición entre un sistema de capa orgánica/agua (extracción) y la separación de la capa que contiene el producto. Las reacciones de oxidación y reducción se llevan a cabo típicamente a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente (aproximadamente 20 °C), aunque para las reducciones de hidruros metálicos con frecuencia la temperatura se reduce de 0 °C a -100 °C. También se puede usar calefacción cuando sea apropiado. Los disolventes suelen ser apróticos para las reducciones y pueden ser próticos o apróticos para las oxidaciones. Los tiempos de reacción se ajustan para lograr las conversiones deseadas.

Las reacciones de condensación se llevan a cabo típicamente a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente, aunque para no equilibrar, las condensaciones cinéticamente controladas a temperaturas reducidas (0 °C a -100 °C) también son comunes. Los disolventes pueden ser próticos (habituales en reacciones de equilibrio) o apróticos (habituales en reacciones controladas cinéticamente). Las técnicas sintéticas estándar tales como la eliminación azeotrópica de los subproductos de la reacción y el uso de condiciones de reacción anhidras (por ejemplo, entornos de gas inerte) son comunes en la técnica y se aplicarán cuando sea aplicable.

Grupos protectores. La expresión "grupo protector", "grupo de bloqueo" o "PG" se refiere a cualquier grupo que, cuando se une a un hidroxi u otro heteroátomo evita que se produzcan reacciones no deseadas en este grupo y que se pueden eliminar mediante etapas químicas o enzimáticas convencionales para restablecer el grupo hidroxilo. El grupo de bloqueo removible particular empleado no siempre es crítico y los grupos de bloqueo hidroxilo removibles preferidos incluyen sustituyentes convencionales tales como, por ejemplo, alilo, bencilo, acetilo, cloroacetilo, tiobencilo, bencilideno, fenacilo, metoximetilo, éteres de sililo (por ejemplo, trimetilsililo (TMS), f-butil-difenilsililo (TBDPS), o f-butildimetilsililo (TBS)) y cualquier otro grupo que se pueda introducir químicamente en una funcionalidad hidroxilo y luego eliminarse selectivamente por procedimientos químicos o enzimáticos en condiciones suaves compatibles con la naturaleza del producto. Los grupos R de Fórmula (I) también pueden ser grupos protectores, como se describe en el presente documento.

Los expertos en la técnica conocen grupos protectores de hidroxilo adecuados y se desvelan con más detalle en T.W. Greene, Protecting Groups In Organic Synthesis; Wiley: Nueva York, 1981 ("Greene") y las referencias allí citadas, y Kocienski, Philip J.; Protecting Groups (Georg Thieme Verlag Stuttgart, Nueva York, 1994).

Hay grupos protectores disponibles, comúnmente conocidos y utilizados, y se utilizan opcionalmente para prevenir reacciones secundarias con el grupo protegido durante procedimientos sintéticos, es decir, rutas o procedimientos para preparar los compuestos. En su mayor parte, la decisión sobre qué grupos proteger, cuándo hacerlo, y la naturaleza del grupo protector químico "PG" dependerá de la química de la reacción contra la que se protegerá (por ejemplo, condiciones ácidas, básicas, oxidativas, reductoras u otras) y la dirección deseada de la síntesis.

Los grupos protectores no necesitan ser, y generalmente no lo son, lo mismo si el compuesto se sustituye con múltiples PG. En general, el PG se utilizará para proteger grupos funcionales como carboxilo, hidroxilo, tio o grupos amino y para prevenir así reacciones secundarias o para facilitar de otro modo la eficacia sintética. El orden de desprotección para producir grupos desprotegidos libres depende de la dirección deseada de la síntesis y de las condiciones de reacción que se van a encontrar, y puede ocurrir en cualquier orden según lo determine el experto. Pueden protegerse varios grupos funcionales de los compuestos. Por ejemplo, los grupos protectores para grupos OH (ya sean hidroxilo, ácido carboxílico u otras funciones) incluyen "grupos formadores de éter o éster". Los grupos formadores de éter o éster son capaces de funcionar como grupos protectores químicos en los esquemas sintéticos expuestos en el presente documento. Sin embargo, algunos grupos protectores de hidroxilo y tio no son grupos formadores de éter ni de éster, tal como entenderán los expertos en la técnica. Para obtener más detalles sobre los grupos protectores de ácido carboxílico y otros grupos protectores para ácidos, véase Greene, anteriormente citado. Dichos grupos incluyen a modo de ejemplo y no de limitación, ésteres, amidas, hidrazidas y similares.

Sales y solvatos

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento incluyen sales de adición de ácido o base que conservan la actividad farmacológica deseada y no son biológicamente indeseables (por ejemplo, la sal no es indebidamente tóxica, alergénica o irritante y es biodisponible). Cuando un compuesto tiene un grupo básico, tal como, por ejemplo, un grupo amino, se pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos (tales como ácido clorhídrico, ácido hidrobórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico), ácidos orgánicos (por ejemplo, alginato, ácido fórmico, ácido acético, ácido benzoico, ácido glucónico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico) o aminoácidos ácidos (tales como ácido aspártico y ácido glutámico). Cuando el compuesto tiene un grupo ácido, tal como, por ejemplo, un grupo de ácido carboxílico, puede formar sales con metales, tales como metales alcalinos y alcalinotérreos (por ejemplo, Na+, Li+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+), amoniaco o aminas orgánicas (por ejemplo, diciclohexilamina, trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina) o aminoácidos básicos (por ejemplo, arginina, lisina y ornitina). Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y purificación de los compuestos o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de base libre o de ácido libre con un ácido o base adecuados, respectivamente, y aislando la sal así formada.

Muchas de las moléculas desveladas en el presente documento contienen uno o más grupos ionizables [grupos de los que se puede eliminar un protón (por ejemplo, -COOH) o añadir (por ejemplo, aminas) o que se pueden cuaternizar (por ejemplo, aminas)]. Se pretende que todas las formas iónicas posibles de tales moléculas y sales de las mismas se incluyan individualmente en la divulgación del presente documento. Con respecto a las sales de los compuestos descritos en el presente documento, un experto en la técnica puede seleccionar entre una amplia variedad de contraiones disponibles aquellos que son apropiados para la preparación de sales para una aplicación dada. En aplicaciones específicas, la selección de un anión o catión dado para la preparación de una sal puede dar como resultado un aumento o disminución de la solubilidad de esa sal.

Ejemplos de sales adecuadas de los compuestos descritos en el presente documento incluyen sus clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo, (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos, incluidas las mezclas racémicas), succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos tales como el ácido glutámico. Estas sales se pueden preparar mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. También se incluyen sales de adición de bases tales como sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, magnesio o una sal similar. Cuando los compuestos contienen funcionalidades relativamente básicas, se pueden obtener sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico, ácido fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos tales como el ácido acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, Itálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen las sales aminoácidos tales como arginato y similares y las sales de ácidos orgánicos como los ácidos glucurónico o galacturónico y similares. Determinados compuestos específicos pueden contener funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten a los compuestos convertirse en sales de adición de base o de ácido.

Ciertos compuestos pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas. Ciertos compuestos pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la invención y se pretende que estén dentro del ámbito de la invención.

El término "solvato" se refiere a un compuesto sólido que tiene una o más moléculas de disolvente asociadas con su estructura sólida. Los solvatos se pueden formar cuando un compuesto se cristaliza en un disolvente. Un solvato se forma cuando una o más moléculas de disolvente se convierten en parte integral de la matriz cristalina sólida tras la solidificación. Los compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento pueden ser solvatos, por ejemplo, solvatos de etanol. Otro tipo de solvato es un hidrato. Un "hidrato" también se refiere a un compuesto sólido que tiene una o más moléculas de agua íntimamente asociadas con su estructura sólida o cristalina a nivel molecular. Los hidratos se pueden formar cuando un compuesto se solidifica o cristaliza en agua, en el que una o más moléculas de agua se convierten en parte integral de la matriz cristalina sólida. Los compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento pueden ser hidratos.

Composiciones farmacéuticas

A continuación se describe información relevante para realizaciones farmacéuticas y farmacológicas y se complementa además con información en la técnica disponible para un experto en la materia. La formulación exacta, la vía de administración y la dosificación pueden ser elegidas por un médico o clínico individual en vista de la afección del paciente (véase, por ejemplo, Fingl y col., en The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975, Cap. 1). Cabe señalar que el médico tratante sabría cómo y cuándo terminar, interrumpir o ajustar la administración debido a toxicidad o disfunciones orgánicas, etc. En cambio, el médico tratante también sabría ajustar el tratamiento a niveles más altos si la respuesta clínica no fuera adecuada (a la luz o excluyendo aspectos de toxicidad). La magnitud de una dosis administrada en el tratamiento del trastorno de interés puede variar con la gravedad de la afección a tratar y con la vía de administración. La gravedad de la afección puede, por ejemplo, ser evaluada, en parte, por procedimientos estándar de evaluación de pronóstico. Además, la dosis y quizás la frecuencia de la dosis, también puede variar según las circunstancias, por ejemplo, la edad, el peso corporal, y la respuesta del paciente individual. Un programa comparable al discutido anteriormente también se puede utilizar en medicina veterinaria.

Dependiendo de las afecciones específicas que se estén tratando y del procedimiento de focalización seleccionado, tales agentes se pueden formular y administrar de forma sistémica o local. Las técnicas de formulación y administración se pueden encontrar en Alfonso y Gennaro (1995) y en otras partes de la materia.

Los compuestos se pueden administrar a un paciente en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos ligandos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del ámbito del buen juicio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.

La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, diluyentes, recubrimientos, tensioactivos, antioxidantes, conservantes (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardantes de la absorción, sales, tampones, conservantes, fármacos, estabilizantes de fármacos, geles, aglutinantes, excipientes, agentes disgregantes, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, colorantes, tales como materiales similares y combinaciones de los mismos, como sabría un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. Mack Printing Company, 1990, págs. 1289-1329). Excepto en la medida en que cualquier vehículo convencional sea incompatible con el principio activo, se contempla su uso en las composiciones quimioterapéuticas o farmacéuticas.

Un compuesto de DNQd o DNQ se puede combinar con diferentes tipos de vehículos dependiendo de si se va a administrar en forma sólida, líquida o en aerosol, y si necesita ser estéril para vías de administración tales como inyección. La presente invención se puede administrar por vía intravenosa, intradérmica, intraarterial, intraperitoneal, intralesional, intracraneal, intraarticular, intraprostática, intrapleural, intratraqueal, intranasal, intravítrea, intravaginal, intrarrectal, tópica, intratumoral, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, subconjuntival, intravesicular, mucosal, intrapericárdica, intraumbilical, intraocular, oral, tópica, local, por inyección, infusión, infusión continua, perfusión localizada que baña las células diana directamente, a través de un catéter, a través de un lavado, en composiciones de lípidos (por ejemplo, liposomas), o por otro procedimiento o cualquier combinación de los anteriores como sería conocido por un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. Mack Printing Company, 1990).

La cantidad de dosificación real de una composición administrada a un paciente se puede determinar por factores físicos y fisiológicos tales como el peso corporal, la gravedad de la condición, el tipo de enfermedad que se está tratando, intervenciones terapéuticas previas o concurrentes, la idiopatía del paciente y la vía de administración. El médico responsable de la administración, en cualquier caso, determinará la concentración de principio(s) activo(s) en una composición y las dosis apropiadas para el sujeto individual.

Cuando se administra a un sujeto, las cantidades eficaces dependerán, por supuesto, del cáncer particular que se está tratando; del genotipo del cáncer específico; de la gravedad del cáncer; de parámetros individuales del paciente, incluida la edad, la condición física, el tamaño y el peso, el tratamiento concurrente, la frecuencia del tratamiento y el modo de administración. Estos factores son bien conocidos por el médico y se pueden abordar con sólo una experimentación de rutina. En algunas realizaciones, se prefiere utilizar la dosis segura más alta de acuerdo con el criterio médico sólido.

En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas pueden comprender, por ejemplo, al menos aproximadamente un 0,1 % de compuesto DNQ-87 o DNQ. En otras realizaciones, el compuesto activo puede comprender entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 75 % del peso de la unidad, o entre aproximadamente el 25 % y aproximadamente el 60 %, por ejemplo, y cualquier intervalo que se pueda obtener de los mismos. En otros ejemplos no limitantes, una dosis también puede comprender de aproximadamente 0,1 mg/kg/peso corporal, 0,5 mg/kg/peso corporal, 1 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 5 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 10 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 20 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 30 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 40 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 50 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 75 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 100 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 200 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 350 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 500 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 750 mg/kg/peso corporal, hasta aproximadamente 1000 mg/kg/peso corporal o más por administración, y cualquier intervalo que proviene de los mismos. En ejemplos no limitantes de un intervalo que se puede obtener de los números enumerados en el presente documento, se puede administrar un intervalo de aproximadamente 10 mg/kg/peso corporal a aproximadamente 100 mg/kg/peso corporal, etc., basándose en los números descritos anteriormente.

En cualquier caso, la composición puede comprender diversos antioxidantes para retardar la oxidación de uno o más componentes. Adicionalmente, la prevención de la acción de los microorganismos se puede lograr mediante conservantes tales como diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, incluyendo, pero sin limitación, parabenos (por ejemplo, metilparabenos, propilparabenos), clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal o combinaciones de los mismos.

Los principios activos descritos en el presente documento tales como los compuestos DNQd o DNQ se pueden formular en una composición en una base libre, forma neutra o sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales formadas con los grupos carboxilo libres que provienen de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o hierro; o bases orgánicas tales como isopropilamina, trietilamina, histidina o procaína.

Se pueden obtener preparaciones farmacéuticas para uso oral combinando los compuestos activos con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, añadiendo después auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, rellenos tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, se pueden añadir agentes disgregantes, tales como la polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato de sodio.

Los núcleos de grageas se proporcionan opcionalmente con revestimientos adecuados. Para ello, se pueden utilizar soluciones concentradas de azúcar, que opcionalmente pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, Procedimiento para preparar los compuestos de la invención

La invención también se refiere a procedimientos para preparar los compuestos y composiciones de la invención. Los compuestos y composiciones se pueden preparar mediante cualquiera de las técnicas aplicables de síntesis orgánica. Muchas de dichas técnicas son bien conocidas en la técnica. Sin embargo, muchas de las técnicas conocidas se elaboran en el Compendio de procedimientos sintéticos orgánicos (John Wiley y Sons, Nueva York), Vol. 1, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus y Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; y Vol. 6, Michael B. Smith; así como textos de referencia orgánicos estándar como March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a Ed. por M.B. Smith y J. March (John Wiley y Sons, Nueva York, 2001), Comprehensive Organic Synthesis; Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, en 9 volúmenes, Barry M. Trost, Ed.-in-Chief (Pergamon Press, Nueva York, impresión de 1993)); Advanced Organic Chemistry, Part B: Reactions and Synthesis, Segunda edición, Cary y Sundberg (1983); Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda edición, Greene, T.W. y Wutz, P.G.M., John Wiley y Sons, Nueva York; y Comprehensive Organic Transformations, Larock, R.C., Segunda edición, John Wiley y Sons, Nueva York (1999).

A continuación se proporcionan varios procedimientos ilustrativos para la preparación de las composiciones de la invención. Estos procedimientos pretenden ilustrar la naturaleza de tales preparaciones, no pretenden limitar el ámbito de los procedimientos aplicables. Se describen procedimientos adicionales y técnicas útiles en el documento WO 2013/056073 (Hergenrother y col.).

En general, las condiciones de reacción tales como la temperatura, el tiempo de reacción, los disolventes, los procedimientos de trabajo y similares, serán los comunes en la técnica para la reacción particular a realizar. El material de referencia citado, junto con el material allí citado, contiene descripciones detalladas de dichas condiciones. Normalmente, las temperaturas serán de -100 °C a 200 °C, los solventes serán apróticos o próticos dependiendo de las condiciones requeridas, y los tiempos de reacción serán de 1 minuto a 10 días. El tratamiento consiste típicamente en inactivar cualquier reactivo que no haya reaccionado seguido de una partición entre un sistema de capa orgánica/agua (extracción) y la separación de la capa que contiene el producto. Las reacciones de oxidación y reducción se llevan a cabo típicamente a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente (aproximadamente 20 °C), aunque para las reducciones de hidruros metálicos con frecuencia la temperatura se reduce de 0 °C a -100 °C. También se puede usar calefacción cuando sea apropiado. Los disolventes suelen ser apróticos para las reducciones y pueden ser próticos o apróticos para las oxidaciones. Los tiempos de reacción se ajustan para lograr las conversiones deseadas.

Las reacciones de condensación se llevan a cabo típicamente a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente, aunque para no equilibrar, las condensaciones cinéticamente controladas a temperaturas reducidas (0 °C a -100 °C) también son comunes. Los disolventes pueden ser próticos (habituales en reacciones de equilibrio) o apróticos (habituales en reacciones controladas cinéticamente). Las técnicas sintéticas estándar tales como la eliminación azeotrópica de los subproductos de la reacción y el uso de condiciones de reacción anhidras (por ejemplo, entornos de gas inerte) son comunes en la técnica y se aplicarán cuando sea aplicable.

Grupos protectores. La expresión "grupo protector", "grupo de bloqueo" o "PG" se refiere a cualquier grupo que, cuando se une a un hidroxi u otro heteroátomo evita que se produzcan reacciones no deseadas en este grupo y que se pueden eliminar mediante etapas químicas o enzimáticas convencionales para restablecer el grupo hidroxilo. El grupo de bloqueo removible particular empleado no siempre es crítico y los grupos de bloqueo hidroxilo removibles preferidos incluyen sustituyentes convencionales tales como, por ejemplo, alilo, bencilo, acetilo, cloroacetilo, tiobencilo, bencilideno, fenacilo, metoximetilo, éteres de sililo (por ejemplo, trimetilsililo (TMS), t-butil-difenilsililo (TBDPS), o t-butildimetilsililo (TBS)) y cualquier otro grupo que se pueda introducir químicamente en una funcionalidad hidroxilo y luego eliminarse selectivamente por procedimientos químicos o enzimáticos en condiciones suaves compatibles con la naturaleza del producto. Los grupos R de Fórmula (I) también pueden ser grupos protectores, como se describe en el presente documento.

Los expertos en la técnica conocen grupos protectores de hidroxilo adecuados y se desvelan con más detalle en T.W. Greene, Protecting Groups In Organic Synthesis; Wiley: Nueva York, 1981 ("Greene") y las referencias allí citadas, y Kocienski, Philip J.; Protecting Groups (Georg Thieme Verlag Stuttgart, Nueva York, 1994).

Hay grupos protectores disponibles, comúnmente conocidos y utilizados, y se utilizan opcionalmente para prevenir reacciones secundarias con el grupo protegido durante procedimientos sintéticos, es decir, vías o procedimientos para preparar los compuestos mediante los procedimientos de la invención. En su mayor parte, la decisión sobre qué grupos proteger, cuándo hacerlo, y la naturaleza del grupo protector químico "PG" dependerá de la química de la reacción contra la que se protegerá (por ejemplo, ácida, básica, oxidación, reducción u otras condiciones) y la dirección prevista de la síntesis.

Los grupos protectores no necesitan ser, y generalmente no lo son, lo mismo si el compuesto se sustituye con múltiples PG. En general, el PG se utilizará para proteger grupos funcionales como carboxilo, hidroxilo, tio o grupos amino y para prevenir así reacciones secundarias o para facilitar de otro modo la eficacia sintética. El orden de desprotección para producir grupos desprotegidos libres depende de la dirección deseada de la síntesis y de las condiciones de reacción que se van a encontrar, y puede ocurrir en cualquier orden según lo determine el experto. Pueden protegerse varios grupos funcionales de los compuestos de la invención. Por ejemplo, grupos protectores para grupos -OH (ya sea hidroxilo, ácido carboxílico u otras funciones) incluyen "grupos formadores de éter o éster". Los grupos formadores de éter o éster son capaces de funcionar como grupos protectores químicos en los esquemas sintéticos expuestos en el presente documento. Sin embargo, algunos grupos protectores de hidroxilo y tio no son grupos formadores de éter ni de éster, tal como entenderán los expertos en la técnica. Para obtener más detalles sobre los grupos protectores de ácido carboxílico y otros grupos protectores para ácidos, véase Greene, anteriormente citado. Dichos grupos incluyen a modo de ejemplo y no de limitación, ésteres, amidas, hidrazidas y similares.

Sales y solvatos

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento están dentro del ámbito de la presente invención e incluyen sales de adición de ácido o base que conservan la actividad farmacológica deseada y no son biológicamente indeseables (por ejemplo, la sal no es indebidamente tóxica, alergénica o irritante y es biodisponible). Cuando un compuesto tiene un grupo básico, tal como, por ejemplo, un grupo amino, se pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos (tales como ácido clorhídrico, ácido hidrobórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico), ácidos orgánicos (por ejemplo, alginato, ácido fórmico, ácido acético, ácido benzoico, ácido glucónico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico) o aminoácidos ácidos (tales como ácido aspártico y ácido glutámico). Cuando el compuesto de la invención tiene un grupo ácido, tal como, por ejemplo, un grupo de ácido carboxílico, puede formar sales con metales, tales como metales alcalinos y alcalinotérreos (por ejemplo, Na+, Li+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+), amoniaco o aminas orgánicas (por ejemplo, diciclohexilamina, trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina) o aminoácidos básicos (por ejemplo, arginina, lisina y ornitina). Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y purificación de los compuestos o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de base libre o de ácido libre con un ácido o base adecuados, respectivamente, y aislando la sal así formada.

Muchas de las moléculas desveladas en el presente documento contienen uno o más grupos ionizables [grupos de los que se puede eliminar un protón (por ejemplo, -COOH) o añadir (por ejemplo, aminas) o que se pueden cuaternizar (por ejemplo, aminas)]. Se pretende que todas las formas iónicas posibles de tales moléculas y sales de las mismas se incluyan individualmente en la divulgación del presente documento. Con respecto a las sales de los compuestos descritos en el presente documento, un experto en la técnica puede seleccionar entre una amplia variedad de contraiones disponibles aquellos que son apropiados para la preparación de sales de la presente invención para una aplicación dada. En aplicaciones específicas, la selección de un anión o catión dado para la preparación de una sal puede dar como resultado un aumento o disminución de la solubilidad de esa sal.

Ejemplos de sales adecuadas de los compuestos descritos en el presente documento incluyen sus clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo, (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos, incluidas las mezclas racémicas), succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos tales como el ácido glutámico. Estas sales se pueden preparar mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. También se incluyen sales de adición de bases tales como sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, magnesio o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, se pueden obtener sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico, ácido fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos tales como el ácido acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, Itálico, bencenosulfónico, ptolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen las sales aminoácidos tales como arginato y similares y las sales de ácidos orgánicos como los ácidos glucurónico o galacturónico y similares. Determinados compuestos específicos de la invención pueden contener funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten a los compuestos convertirse en sales de adición de base o de ácido.

Ciertos compuestos de la invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y están incluidas dentro del ámbito de la invención. Ciertos compuestos de la invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la invención y se pretende que estén dentro del ámbito de la invención.

El término "solvato" se refiere a un compuesto sólido que tiene una o más moléculas de disolvente asociadas con su estructura sólida. Los solvatos se pueden formar cuando un compuesto se cristaliza en un disolvente. Un solvato se forma cuando una o más moléculas de disolvente se convierten en parte integral de la matriz cristalina sólida tras la solidificación. Los compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento pueden ser solvatos, por ejemplo, solvatos de etanol. Otro tipo de solvato es un hidrato. Un "hidrato" también se refiere a un compuesto sólido que tiene una o más moléculas de agua íntimamente asociadas con su estructura sólida o cristalina a nivel molecular. Los hidratos se pueden formar cuando un compuesto se solidifica o cristaliza en agua, en el que una o más moléculas de agua se convierten en parte integral de la matriz cristalina sólida. Los compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento pueden ser hidratos.

Composiciones farmacéuticas

A continuación se describe información relevante para realizaciones farmacéuticas y farmacológicas y se complementa además con información en la técnica disponible para un experto en la materia. La formulación exacta, la vía de administración y la dosificación pueden ser elegidas por un médico o clínico individual en vista de la afección del paciente (véase, por ejemplo, Fingl y col., en The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975, Cap. 1). Cabe señalar que el médico tratante sabría cómo y cuándo terminar, interrumpir o ajustar la administración debido a toxicidad o disfunciones orgánicas, etc. En cambio, el médico tratante también sabría ajustar el tratamiento a niveles más altos si la respuesta clínica no fuera adecuada (a la luz o excluyendo aspectos de toxicidad). La magnitud de una dosis administrada en el tratamiento del trastorno de interés puede variar con la gravedad de la afección a tratar y con la vía de administración. La gravedad de la afección puede, por ejemplo, ser evaluada, en parte, por procedimientos estándar de evaluación de pronóstico. Además, la dosis y quizás la frecuencia de la dosis, también puede variar según las circunstancias, por ejemplo, la edad, el peso corporal, y la respuesta del paciente individual. Un programa comparable al discutido anteriormente también se puede utilizar en medicina veterinaria.

Dependiendo de las afecciones específicas que se estén tratando y del procedimiento de focalización seleccionado, tales agentes se pueden formular y administrar de forma sistémica o local. Las técnicas de formulación y administración se pueden encontrar en Alfonso y Gennaro (1995) y en otras partes de la materia.

Los compuestos se pueden administrar a un paciente en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos ligandos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del ámbito del buen juicio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.

La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, diluyentes, recubrimientos, tensioactivos, antioxidantes, conservantes (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardantes de la absorción, sales, tampones, conservantes, fármacos, estabilizantes de fármacos, geles, aglutinantes, excipientes, agentes disgregantes, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, colorantes, tales como materiales similares y combinaciones de los mismos, como sabría un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. Mack Printing Company, 1990, págs.: 1289-1329). Excepto en la medida en que cualquier vehículo convencional sea incompatible con el principio activo, se contempla su uso en las composiciones quimioterapéuticas o farmacéuticas.

Un compuesto de DNQ^d o DNQ se puede combinar con diferentes tipos de vehículos dependiendo de si se va a administrar en forma sólida, líquida o en aerosol, y si necesita ser estéril para vías de administración tales como inyección. La presente invención se puede administrar por vía intravenosa, intradérmica, intraarterial, intraperitoneal, intralesional, intracraneal, intraarticular, intraprostática, intrapleural, intratraqueal, intranasal, intravítrea, intravaginal, intrarrectal, tópica, intratumoral, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, subconjuntival, intravesicular, mucosal, intrapericárdica, intraumbilical, intraocular, oral, tópica, local, por inyección, infusión, infusión continua, perfusión localizada que baña las células diana directamente, a través de un catéter, a través de un lavado, en composiciones de lípidos (por ejemplo, liposomas), o por otro procedimiento o cualquier combinación de los anteriores como sería conocido por un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. Mack Printing Company, 1990).

La cantidad de dosificación real de una composición de la presente invención administrada a un paciente se puede determinar por factores físicos y fisiológicos tales como el peso corporal, la gravedad de la condición, el tipo de enfermedad que se está tratando, intervenciones terapéuticas previas o concurrentes, la idiopatía del paciente y la vía de administración. El médico responsable de la administración, en cualquier caso, determinará la concentración de principio(s) activo(s) en una composición y las dosis apropiadas para el sujeto individual.

Cuando se administra a un sujeto, las cantidades eficaces dependerán, por supuesto, del cáncer particular que se está tratando; del genotipo del cáncer específico; de la gravedad del cáncer; de parámetros individuales del paciente, incluida la edad, la condición física, el tamaño y el peso, el tratamiento concurrente, la frecuencia del tratamiento y el modo de administración. Estos factores son bien conocidos por el médico y se pueden abordar con sólo una experimentación de rutina. En algunas realizaciones, se prefiere utilizar la dosis segura más alta de acuerdo con el criterio médico sólido.

En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas pueden comprender, por ejemplo, al menos alrededor del 0,1 % de un compuesto de DNQ^d o DNQ. En otras realizaciones, el compuesto activo puede comprender entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 75 % del peso de la unidad, o entre aproximadamente el 25 % y aproximadamente el 60 %, por ejemplo, y cualquier intervalo que se pueda obtener de los mismos. En otros ejemplos no limitantes, una dosis también puede comprender de aproximadamente 0,1 mg/kg/peso corporal, 0,5 mg/kg/peso corporal, 1 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 5 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 10 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 20 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 30 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 40 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 50 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 75 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 100 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 200 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 350 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 500 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 750 mg/kg/peso corporal, hasta aproximadamente 1000 mg/kg/peso corporal o más por administración, y cualquier intervalo que proviene de los mismos. En ejemplos no limitantes de un intervalo que se puede obtener de los números enumerados en el presente documento, se puede administrar un intervalo de aproximadamente 10 mg/kg/peso corporal a aproximadamente 100 mg/kg/peso corporal, etc., basándose en los números descritos anteriormente.

En cualquier caso, la composición puede comprender diversos antioxidantes para retardar la oxidación de uno o más componentes. Adicionalmente, la prevención de la acción de los microorganismos se puede lograr mediante conservantes tales como diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, incluyendo, pero sin limitación, parabenos (por ejemplo, metilparabenos, propilparabenos), clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal o combinaciones de los mismos.

Los principios activos descritos en el presente documento tales como los compuestos DNQ^d o DNQ se pueden formular en una composición en una base libre, forma neutra o sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales formadas con los grupos carboxilo libres que provienen de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o hierro; o bases orgánicas tales como isopropilamina, trietilamina, histidina o procaína.

Se pueden obtener preparaciones farmacéuticas para uso oral combinando los compuestos activos con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, añadiendo después auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, rellenos tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, se pueden añadir agentes disgregantes, tales como la polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato de sodio.

Los núcleos de grageas se proporcionan opcionalmente con revestimientos adecuados. Para ello, se pueden utilizar soluciones concentradas de azúcar, que opcionalmente pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Se pueden añadir colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de grageas para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.

En realizaciones en las que la composición está en forma líquida, un vehículo puede ser un disolvente o un medio de dispersión que comprende, pero sin limitación, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, etc.), lípidos (por ejemplo, triglicéridos, aceites vegetales, liposomas) y combinaciones de los mismos. La fluidez adecuada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina; por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido por dispersión en vehículos tales como, por ejemplo poliol líquido o lípidos; mediante el uso de tensioactivos tales como, por ejemplo hidroxipropilcelulosa (HPC); o combinaciones de los mismos tales procedimientos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, tal como, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio o combinaciones de los mismos.

Las soluciones inyectables estériles se preparan incorporando los compuestos activos en la cantidad necesaria en el disolvente adecuado junto al resto de diversos ingredientes enumerados anteriormente, según sea necesario, seguido de esterilización por filtración. En general, las dispersiones se preparan incorporando los diversos principios activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio de dispersión básico y/o los otros ingredientes. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, suspensiones o emulsiones, los procedimientos de preparación preferidos son técnicas de secado al vacío o de secado por congelación que producen un polvo del principio activo más cualquier ingrediente adicional deseado de un medio líquido previamente esterilizado filtrado del mismo. El medio líquido se debe tamponar adecuadamente si es necesario y el diluyente líquido se debe hacer isotónico antes de la inyección con suficiente solución salina o glucosa.

La composición debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y se debe preservar contra la acción contaminante de los microorganismos, tales como bacterias y hongos. Por tanto, las composiciones preferidas tienen un pH superior a aproximadamente 5, preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, más preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 7. Se apreciará que la contaminación por endotoxinas se debe mantener mínimamente a un nivel seguro, por ejemplo, menos de 0,5 ng/mg de proteína. En realizaciones particulares, se puede lograr la absorción prolongada de una composición inyectable mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasen la absorción, tal como, por ejemplo, monoestearato de aluminio, gelatina o combinaciones de las mismas.

Formulación de compuestos DNQ para administración in vivo

La solubilidad acuosa de DNQ a pH 7,4 en solución salina tamponada con fosfato (PBS) se midió mediante LC-MS. Se sometió a ultrasonidos DNQ durante 30 minutos en PBS, luego se eliminó el sólido no disuelto mediante filtración a través de un filtro de jeringa de 0,45 pm y se analizó el filtrado mediante LC-MS (A = 275 nm, ESI-TOF en modo negativo). El tiempo óptimo de ultrasonidos se determinó sometiendo a ultrasonidos DNQ durante 1, 5, 10 y 30 minutos. Mientras que la concentración de DNQ en solución aumentó sustancialmente entre 1, 5 y 10 minutos, sólo hubo una pequeña diferencia entre 10 y 30 minutos. Durante los ultrasonidos de 30 minutos, el baño de agua se calentó a 45 °C (las muestras se enfriaron a temperatura ambiente antes de la filtración). Se generó una curva de calibración de 1-100 pM disolviendo DNQ en metanol a una concentración de 500 pM y haciendo diluciones de esta solución en agua:metanol a 80:20. La curva de calibración (medida por absorbancia UV) fue lineal en este intervalo; 1 pM fue aproximadamente el límite de detección. Se midió que la solubilidad de DNQ en PBS era 115 pM. La solución era de color amarillo muy pálido.

Debido a la escasa solubilidad acuosa del DNQ, los presentes inventores investigaron el uso de 2-hidroxipropilbetaciclodextrina (HPpCD), un excipiente común, para mejorar la solubilidad de DNQ. En ausencia de HPpCD, la solubilidad del DNQ aumenta significativamente en soluciones fuertemente básicas y el DNQ precipita cuando el pH vuelve a ser neutro. Sin embargo, en presencia de una cantidad suficiente de HPpCD, el DNQ no precipita cuando el pH vuelve a ser neutro. Esta misma solución neutra de DNQ en HPpCD no se puede preparar directamente (es decir, sin ajuste de pH). Esto indica que los compuestos de DNQ se desprotonan en la base y esta molécula desprotonada forma un complejo estrecho con HPpCD que es lo suficientemente estable como para evitar la protonación a medida que disminuye el pH. El único protón del DNQ que podría desprotonarse razonablemente en una base acuosa es el NH. Aunque no se ha medido la acidez del enlace NH de DNQ, se ha medido para un derivado de DNQ y se ha descubierto que tiene un pKa de 8,0.

El protocolo para formular compuestos DNQ en HPpCD es el siguiente: el compuesto de DNQ se suspende en una solución al 20 % de HPpCD en PBS a pH 7,4 y luego se aumenta el pH mediante la adición de NaOH 10 M para inducir la disolución del compuesto de DNQ. El pH se devuelve a pH 7,5-8,0 mediante la adición cuidadosa de HCl 1 M. Mediante este procedimiento se puede preparar una solución 3,3 mM del compuesto DNQ que sea estable al menos 24 horas. Esto representa un aumento de 30 veces en la solubilidad de DNQ sobre PBS solo. Inicialmente, los presentes inventores eligieron una solución de HPpCD al 20 %. Sin embargo, los presentes inventores han descubierto que p-lap se formuló como una solución al 40 % de HPpCD para ensayos clínicos en humanos y la experiencia de los presentes inventores con DNQ indica que la concentración de DNQ aumenta linealmente con la de HPpCD; por tanto, una solución de HPpCD al 40 % permitiría la creación de una solución 6,6 mM de DNQ y otros compuestos de DNQ.

Terapia de combinación

Los principios activos descritos en el presente documento (por ejemplo, compuestos de fórmula (I)) también se pueden usar en combinación con otros principios activos. Dichas combinaciones se seleccionan en función de la afección a tratar, de las reactividades cruzadas de los ingredientes y de las propiedades farmacológicas de la combinación. Por ejemplo, al tratar el cáncer, las composiciones se pueden combinar con otros compuestos anticancerígenos (tales como paclitaxel o rapamicina).

También es posible combinar un compuesto con uno o más de otros principios activos en una forma de dosificación unitaria para la administración simultánea o secuencial a un paciente. La terapia de combinación se puede administrar como un régimen simultáneo o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación se puede administrar en dos o más administraciones.

La terapia de combinación puede proporcionar "sinergia" y "sinérgico", es decir, el efecto logrado cuando los principios activos usados juntos es mayor que la suma de los efectos que resultan de usar los compuestos por separado. Se puede lograr un efecto sinérgico cuando los principios activos son: (1) coformulados y administrados o suministrados de manera simultánea en una formulación combinada; (2) suministrados por alternancia o en paralelo como formulaciones separadas; o (3) por algún otro régimen. Cuando se administra en terapia de alternancia, se puede lograr un efecto sinérgico cuando los compuestos se administran o suministran de manera secuencial, por ejemplo, en comprimidos, píldoras o cápsulas separadas, o mediante diferentes inyecciones en jeringas separadas. En general, durante la terapia de alternancia, se administra de manera secuencial una dosis eficaz de cada principio activo, es decir, en serie, mientras que en terapia combinada, se administran juntas dosis eficaces de dos o más principios activos. Un efecto sinérgico contra el cáncer denota un efecto contra el cáncer que es mayor que los efectos puramente aditivos previstos de los compuestos individuales de la combinación.

La terapia combinada se describe con más detalle en la patente de EE.UU. N.° 6.833.373 (McKearn y col.), que incluye agentes activos adicionales que se pueden combinar con los compuestos descritos en el presente documento, y tipos adicionales de cáncer y otras afecciones que se pueden tratar con un compuesto descrito en el presente documento.

Por consiguiente, es un aspecto de la presente invención que DNQ o DNQ-87 se pueden usar en combinación con otro agente o procedimiento de terapia, preferentemente otro tratamiento contra el cáncer. Un DNQ-87 o DNQ puede preceder o seguir al tratamiento con otro agente en intervalos que varían de minutos a semanas. En realizaciones en las que el otro agente y la construcción de expresión se aplican independientemente a la célula, se debería garantizar de manera general que no transcurriera un período de tiempo significativo entre el momento de cada administración, de tal manera que el agente y la construcción de expresión aún podrían ejercer un efecto combinado ventajoso en la célula. Por ejemplo, en dichos casos, se contempla que se pueda poner en contacto la célula, el tejido u organismo con dos, tres, cuatro o más modalidades sustancialmente de forma simultánea (es decir, en menos de aproximadamente un minuto) con el agente o agentes activos. En otros aspectos, se pueden administrar uno o más agentes en aproximadamente 1 minuto, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 45 minutos, aproximadamente 60 minutos, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 9 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 15 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 21 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 28 horas, aproximadamente 31 horas, aproximadamente 35 horas, aproximadamente 38 horas, aproximadamente 42 horas, aproximadamente 45 horas, hasta aproximadamente 48 horas o más antes y/o después de administrar el agente o agentes activos. En otras realizaciones determinadas, se puede administrar un agente en aproximadamente 1 día, aproximadamente 2 días, aproximadamente 3 días, aproximadamente 4 días, aproximadamente 5 días, aproximadamente 6 días, aproximadamente 8 días, aproximadamente 9 días, aproximadamente 12 días, aproximadamente 15 días, aproximadamente 16 días, aproximadamente 18 días, aproximadamente 20 días, hasta aproximadamente 21 días antes y/o después de administrar el agente o agentes activos. En algunas situaciones, puede ser deseable prolongar el período de tiempo del tratamiento de forma significativa, sin embargo, cuando varias semanas (por ejemplo, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 6, o aproximadamente 8 semanas o más) transcurren entre las administraciones respectivas.

La administración de las composiciones quimioterapéuticas a un paciente seguirá los protocolos generales para la administración de agentes quimioterapéuticos, teniendo en cuenta la toxicidad, si la hay. Se espera que los ciclos de tratamiento se repitan según sea necesario. También se contempla que diversas terapias estándar o terapias complementarias contra el cáncer, así como la intervención quirúrgica, se pueden aplicar en combinación con el(los) agente(s) activo(s) descrito(s). Estas terapias incluyen, pero sin limitación, quimioterapia, radioterapia, inmunoterapia, terapia génica y cirugía.

Quimioterapia

Las terapias contra el cáncer también pueden incluir una variedad de terapias combinadas con tratamientos químicos y basados en radiación. Las quimioterapias combinadas incluyen el uso de agentes quimioterapéuticas tales como, cisplatino, etopósido, irinotecán, camptostar, topotecán, paclitaxel, docetaxel, epotilonas, taxotere, tamoxifeno, 5-fluorouracilo, metoxtrexato, temozolomida, ciclofosfamida, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, IRESSA ™ (gefitinib), TARCEVA ™ (clorhidrato de erlotinib), anticuerpos contra EGFR, GLEEVEC ™ (imatinib), intrón, ara-C, adriamicina, cytoxan, gemcitabina, mostaza de uracilo, clormetina, ifosfamida, melfalán, clorambucilo, pipobromano, trietilenmelamina, trietilentiofosforamina, busulfano, carmustina, lomustina, estreptozocina, dacarbazina, floxuridina, citarabina, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, fosfato de fludarabina, pentostatina, vinblastina, vincristina, vindesina, bleomicina, doxorrubicina, dactinomicina, daunorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitramicina, desoxicoformicina, mitomicina-C, L-asparaginasa, tenipósido, 17aetinilestradiol, dietilestilbestrol, testosterona, prednisona, fluoximesterona, propionato de dromostanolona, testolactona, megestrolacetato, metilprednisolona, metiltestosterona, prednisolona, triamcinolona, clorotrianiseno, hidroxiprogesterona, aminoglutetimida, estramustina, acetato de medroxiprogesterona, leuprolida, flutamida, toremifeno, goserelina, carboplatino, didroxiurea, amsacrina, procarbazina, mitotano, mitoxantrona, levamisol, navelbeno, anastrazol, letrazol, capecitabina, reloxafina, droloxafina, hexametilmelamina, avastina, herceptina, bexxar, velcade, zevalin, trisenox, xeloda, vinorelbina, porfimer, Erbitux™ (cetuximab), Liposomal, Thiotepa, Altretamina, Melfalán, Trastuzumab, Lerozol, Fulvestrant, Exemestano, Fulvestrant, Ifosfomida, rituximab, C225, Campath, carboplatino, procarbazina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalán, clorambucilo, busulfano, nitrosurea, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etopósido (VP 16), tamoxifeno, raloxifeno, agentes aglutinantes del receptor de estrógeno, paclitaxel, gemcitabina, navelbina, inhibidores de la farnesil-proteína transferasa, trasplatino, 5-fluorouracilo, vincristina, vinblastina y metotrexato, o cualquier análogo o variante que provenga de los anteriores.

Radioterapia. Otros factores que causan daño al ADN y que se han utilizado ampliamente incluyen lo que se conoce comúnmente como rayos gamma, rayos X y/o, la administración directa de radioisótopos a las células tumorales. También se contemplan otras formas de factores que producen daños en el ADN, tales como las microondas y la irradiación UV. Es muy probable que todos estos factores afecten a una amplia gama de daños en el ADN, sobre los precursores del ADN, sobre la replicación y reparación del ADN, y sobre el ensamblaje y mantenimiento de los cromosomas. Los intervalos de dosificación para los rayos X están comprendidos en dosis diarias de 50 a 200 roentgen para periodos de tiempo prolongados (por ejemplo, de 3 a 4 semanas), a dosis únicas de 2000 a 6000 roentgen. Los intervalos de dosis para radioisótopos varían ampliamente y dependen de la vida media del isótopo, la fuerza y el tipo de radiación emitida y de la captación por las células neoplásicas. Los términos "contactado" y "expuesto", cuando se aplica a una célula, se utilizan en el presente documento para describir el procedimiento mediante el cual una construcción terapéutica y un agente quimioterapéutico o radioterapéutico se administran a una célula diana o se colocan en yuxtaposición directa con la célula diana. Para lograr la muerte celular o estasis, ambos agentes se administran a una célula en una cantidad combinada eficaz para eliminar la célula o evitar que se divida. Inmunoterapia. Los agentes inmunoterapéuticos, en general, dependen del uso de células efectoras inmunes y moléculas para atacar y destruir las células cancerosas. El efector inmunológico puede ser, por ejemplo, un anticuerpo específico para algún marcador en la superficie de una célula tumoral. El anticuerpo solo puede servir como un efector de la terapia o puede reclutar otras células para afectar realmente a la muerte celular. El anticuerpo también se puede conjugar con un fármaco o toxina (agente quimioterapéutico, radionucleótido, cadena A de ricina, toxina del cólera, toxina pertussis, etc.) y sirven simplemente como un agente de direccionamiento. Como alternativa, el efector puede ser un linfocito que lleva una molécula de superficie que interactúa, ya sea directa o indirectamente, con una diana de células tumorales. Diversas células efectoras incluyen linfocitos T citotóxicas y linfocitos citolíticos naturales.

La inmunoterapia, por tanto, se podría usar como parte de una terapia combinada, junto con la terapia génica. El enfoque general para la terapia combinada se analiza a continuación. En general, la célula tumoral debe llevar algún marcador que sea susceptible de ser dirigido, es decir, que no está presente en la mayoría de las otras células. Existen muchos marcadores tumorales y cualquiera de estos puede ser adecuado para el direccionamiento en el contexto de la presente invención. Los marcadores tumorales comunes incluyen antígeno carcinoembrionario, antígeno específico de la próstata, antígeno asociado a tumores urinarios, antígeno fetal, tirosinasa (p97), gp68, TAG-72, HMFG, antígeno de sialil Lewis, MucA, MucB, PLAP, receptor de estrógenos, receptor de laminina, erb B y p155.

Terapia génica. En otra realización más, el tratamiento secundario es una terapia génica secundaria en la que se administra un polinucleótido terapéutico antes, después, o al mismo tiempo de un primer agente quimioterapéutico. La administración del agente quimioterapéutico junto con un vector que codifica un producto génico tendrá un efecto antihiperproliferativo combinado sobre los tejidos diana.

Cirugía. Aproximadamente el 60 % de las personas con cáncer se someterán a cirugía de algún tipo, que incluye cirugía preventiva, diagnóstica o de estadificación, curativa y paliativa. La cirugía curativa es un tratamiento contra el cáncer que se puede utilizar junto con otras terapias, tales como el tratamiento de la presente invención, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia génica, inmunoterapia y/o terapias alternativas. La cirugía curativa incluye la extirpación en la que se extrae físicamente todo o parte del tejido canceroso, se extirpa y/o se destruye. La extirpación del tumor se refiere a la extracción física de al menos parte de un tumor. Además de la extirpación del tumor, el tratamiento mediante cirugía incluye cirugía con láser, criocirugía, electrocirugía y cirugía controlada microscópicamente (cirugía de Mohs). Además, se contempla que la presente invención se pueda usar junto con la eliminación de cánceres superficiales, precánceres o cantidades incidentales de tejido normal.

La invención puede entenderse mejor mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

Las abreviaturas utilizadas en los esquemas y ejemplos pueden incluir lo siguiente:

A549 = células epiteliales basales alveolares humanas adenocarcinómicas

ATP = adenosin trifosfato

p-lap = p-lapachona

DHE = dihidroetidio

DNQ = desoxiniloquinona

DNQ^d = Cualquier análogo o derivado de desoxinilboquinona

ELISA = ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas

h = hora(s)

H596 = [NCI-H596] línea celular de carcinoma adenoescamoso de pulmón humano

HT1080 = línea celular de fibrosarcoma de primates

DL⁵⁰ = dosis letal con un 50 % de probabilidad de causar la muerte

DL⁹⁰ = dosis letal con un 90 % de probabilidad de causar la muerte

DL¹⁰⁰ = dosis letal con un 100 % de probabilidad de causar la muerte

MCF-7 = línea celular de adenocarcinoma de mama humano

MDA-MB-231 = línea celular de cáncer de mama humano

MIA-PaCa2 = línea celular de cáncer de páncreas

min = minuto(s)

NADH = nicotinamida adenina dinucleótido

NQO1 = NAD(P)H:quinona oxidorreductasa 1

NSCLC = células de cáncer de pulmón no microcítico

OCR = tasas de consumo de oxígeno

p53 = una proteína supresora de tumores

PC-3 = línea celular de cáncer de próstata humano

ROS = especies reactivas de oxígeno

± EE = error estándar

ARNip = ácido ribonucleico de interferencia pequeño

ARNsh = ácido ribonucleico de horquilla pequeña

|jM = micromolar

nM = nanomolar

jmol = micromol

Ejemplos

Ejemplo 1. La inhibición de la reparación por escisión de base mejora sinérgicamente la muerte celular mediada por P-Iapachona para la terapia selectiva de tumores del cáncer de páncreas

El bloqueo de la escisión de base de ADN (BER) o los procedimientos de reparación SSB con inhibidores de PARP1 puede aumentar drásticamente la eficacia y reducir significativamente las dosis requeridas, de fármacos bioactivables NQO1 contra cánceres que sobreexpresan NQO1+, tales como los cánceres de páncreas. Para demostrar estos procedimientos, se realizaron experimentos para demostrar mecánicamente que la inhibición de la reparación BER o SSB tiene efecto sinérgico con fármacos bioactivables NQO1 contra células cancerosas de páncreas NQO1 /s, NQO1- o con inactivación de ARNsh in vitro. Adicionalmente, se realizaron experimentos para optimizar los inhibidores de MeOX o PARP1 para mejorar la eficacia del fármaco bioactivable NQO1 in vivo. Por tanto, la terapia de combinación se puede usar como un enfoque específico de tumor usando inhibidores de reparación de ADN (por ejemplo, inhibidores de BER y PARP1).

Este ejemplo demuestra la eficacia tumoral específica de los fármacos bioactivables NQO1 contra el cáncer de páncreas, así como otros cánceres que sobreexpresan NQO1; y demuestra "especificidad tumoral" para los inhibidores de PARP1 fuera de los enfoques actuales, limitados y "letales sintéticos" para la terapia del cáncer. Se examinaron los efectos sinérgicos de la adición de metoxiamina (MeOX) con p-lap contra las células de cáncer de páncreas que sobreexpresan NQO1. La sinergia MeOX p-lap dio como resultado: a, mayor letalidad de dosis subletales de p-lap, reduciendo el saliente (Dq), aumentando la tasa de letalidad (Do) e induciendo apoptosis (TUNEL ) en células pancreáticas MIA PaCa-2 NQO1 , pero no en NQO1-; b, un aumento de la formación de lesiones de ADN solo en células tumorales; c, pérdidas drásticas en los niveles de ATP, con poca recuperación; y d, supresión drástica de la glucólisis. Por tanto, MeOX mejora la hiperactivación de PARP1 y la destrucción celular sinérgica por p-lap. Se observaron resultados similares en las células con inactivación génica de ARNsh-XRCCI. Sin embargo, Las células con inactivación génica de Ogg1 se volvieron resistentes a p-lap. Mecánicamente, los datos indican que PARP1 detecta sitios modificados MeOX-AP o SSB, permitiendo la hiperactivación de PARP1 y la muerte celular sinérgica. Debido a que MeOX es un agente no tóxico, la combinación de agentes puede proporcionar terapias para el tratamiento de cáncer de páncreas, así como otros cánceres sólidos que sobreexpresan NQO1. La Figura 1 muestra la expresión de NQO1 y Catalasa en tumor pancreático frente a tejido normal asociado. Por tanto, la catalasa tiene una sobreexpresión significativa en tejido normal frente a tejido tumoral. Las proporciones de NQO1:catalasa en el cáncer de páncreas frente al tejido normal son un determinante importante de la eficacia de los fármacos bioactivables de NQOl, tales como p-lap y DNQ (Figura 2). Particularmente en presencia de una alta proporción NQO1:Catalasa, Los fármacos bioactivables NQO1 eliminan por daño al ADN específico del tumor, induciendo hiperactivación de PARP1 y muerte celular necrótica programada única. La letalidad específica del tumor es independiente del estado de p52, pérdida de bax/bak, estado de activación del oncogén, estado del ciclo celular e hipoxia.

NQO1 es un determinante principal de la citotoxicidad de p-lap, y la inhibición funcional de NQO1 por la inactivación de ARNsh-NQO1 protege de la muerte celular después de exposiciones de p-lap (Figura 3). El daño del ADN inducido por p-Lap es dependiente de NQO1, específico del tumor, y se reduce significativamente por la inactivación del ARNsh de NQoi (Figura 4). Asimismo, los fármacos bioactivables NQO1 causan una supresión drástica de la glucólisis y pérdida de ATP que puede inhibir la reparación del ADN (Figura 5).

La alteración de la reparación BER o SSB puede mejorar la eficacia del fármaco bioactivable NQO1 de una manera selectiva para el tumor. La inactivación mediada por de la glicosilasa Ogg1 mediada por ARNip hace que las células de cáncer de páncreas tratadas con p-lap sean resistentes a la p-lapachona (Figura 6), sin embargo, los fármacos bioactivables NQO1 causan SSB y lesiones de base de una manera específica del tumor, por lo tanto, se pueden usar para hacer que los inhibidores de la reparación del ADN sean selectivos para los tumores (Figura 7). Los inhibidores de PARP1 tienen efecto sinérgico con los fármacos bioactivables NQOl para mejorar la eficacia en las células cancerosas NQO1 , tales como las células de cáncer de páncreas (Figura 8). Asimismo, la letalidad bioactivable de NQO1 es mejorada por MeOX, con efectos metabólicos acompañantes (Figura 9). Además, la plapachona tiene una eficacia antitumoral significativa contra xenoinjertos tumorales MIA PaCa-2, tal como ilustran los datos del estudio preclínico que se muestran en la Figura 10.

Por consiguiente, Estos ejemplos y sus datos de apoyo muestran que los fármacos bioactivables NQO1 inducen daño de la base del ADN y roturas del ADN de una sola hebra, y que la inhibición de la reparación por escisión de base (BER) mejora la letalidad selectiva del cáncer de páncreas mediada por la p-lap. Adicionalmente, la inhibición de la actividad de PARP1 mejora la eficacia de p-lap contra los cánceres de páncreas NQO1+. Finalmente, el uso de fármacos bioactivables NQO1, tales como compuestos de las fórmulas de la Figura 11 y los compuestos específicos de la Figura 12, prevén el uso selectivo de tumores de inhibidores de la reparación del ^a Dⁿ , y los fármacos bioactivables NQO1 provocan efectos drásticos, tales como la supresión del metabolismo de la glucosa.

Ejemplo 2. Datos y terapia del compuesto DNQ y p-lapachona

IB-DNQ (DNQ-87; Figura 12) funciona a dosis mucho más bajas que la p-lapachona y a dosis equivalentes al compuesto DNQ originario. Tal como se muestra en la Figura 13, es eficaz contra las células del cáncer de mama de una manera dependiente de NQO1, así como células de cáncer de mama triple negativas. A diferencia de la plapachona (p-lap), la eficacia de DNQ87 aumenta de manera dependiente de NQO1 y la ventana terapéutica es mayor (Figura 14). Tal como se muestra en la Figura 15, DNQ87 causa muerte celular que puede ser bloqueada por dicumarol, catalasa y BAPTA-AM (un quelante de calcio) (A), en orden descendente y coherente con la vía propuesta de muerte celular causada por fármacos bioactivables NQO1 (B). (C) Hiperactivación de PARP1 causada por exposición a DNQ87 medida por formación de PAR-PARP1, resaltado por la escisión de p53 mediada por pcalpaína (C) y la escisión atípica de PARP1 a fragmentos proteolíticos de ~ 60 kDa durante la muerte celular (D). DNQ87 también causa lesiones en el ADN (roturas de la doble hebra del ADN) de manera retardada, controlada por gamma-H2AX, fosforilación de ATM en serl981 y fosforilación de DNA-PKcs en el sitio Thr1892 (Figura 16). Estos datos también indican que los inhibidores de reparación de DSB también podrían usarse para mejorar la letalidad de DNQ87. Es importante destacar que la elución alcalina muestra extensas lesiones en la base del ADN y roturas de una sola hebra del ADN, mientras que las mismas células evaluadas mediante ensayos de cometa neutro no muestran lesiones en el ADN.

La formación de DSB, controlada por P-ATM y P-H2AX se retrasa en las células de cáncer de mama humano que sobreexpresan NQO1, y solo ocurren después de la hiperactivación de PARP1. IB-DNQ (DNQ-87; Figura 12) causa la formación masiva de H²O² que conduce a rupturas de la base del ADN y de una sola hebra que son rápidamente reconocidas por PARP1, que protege el ADN y estimula la escisión de bases y la reparación de roturas de una sola hebra del ADN. Solo cuando se agota PARP1 debido a su hiperactivación, se notan roturas de doble cadena de ADN (véase la Figura 17). La Figura 18 muestra la ventana terapéutica de DNQ87 usando dicumarol para imitar tejido normal en células de cáncer de mama humano MCF-7 que sobreexpresan NQO1. Tal como se ilustra en la Figura 19, la exposición a fármacos bioactivables NQO1 provoca niveles elevados de 8-oxoguanina, niveles equivalentes a exposiciones a 500 pM de H²O². La inactivación génica de la glicosilasa, Ogg1, que detecta preferentemente 8-oxoguanina (8-OG), da como resultado una resistencia drástica a los fármacos bioactivables NQO1, tales como plapachona. A) La exposición a la p-lapachona provoca una formación extensa de 8-oxoguanina. B, C) Se muestran dos experimentos separados. Las células de cáncer de páncreas Mia-Paca2 se expusieron a ARNip codificado o ARNip específico para Ogg1 durante 24 horas, luego las células se trataron con p-lapachona durante 2 horas a las dosis indicadas. La supervivencia, medida mediante ensayos de capacidad de formación de colonias, se realizó y se representó gráficamente con las dosis de p-lapachona utilizadas.

Las células que expresan NQO1 crean altos niveles de H²O² que no son eliminados por la catalasa, debido a sus niveles más bajos en las células cancerosas. Por el contrario, los tejidos normales tienen niveles bajos de NQO1 y si H²O² se crea por exposición al fármaco, los niveles elevados de catalasa eliminan las ROS obligadas para este agente. Por lo tanto, los tejidos normales están protegidos (véase la Figura 2). El conocimiento del daño del ADN creado por DNQ, p-lapachona o sus respectivos análogos permite estrategias nuevas y no obvias para aumentar la letalidad. En cambio, Los inhibidores de la reparación del ADN fallan comúnmente porque carecen de selectividad tumoral. Las lesiones de ADN dependientes de NQO1 creadas exclusivamente en tumores sólidos específicos, da como resultado un daño específico de la base del ADN (por ejemplo, 8-oxiguanina), que a través de procedimientos de reparación del ADN fútiles da como resultado una hiperactivación de PARP1. El conocimiento de este daño da como resultado dos estrategias separadas para mejorar las letalidades específicas del tumor de los fármacos bioactivables NQO1: (A) usando agentes modificadores de ADN apurínico/apirimidínico (sitio AP), tales como metoxiamina (MeOX), que se encuentra actualmente en ensayos clínicos; y (B) uso de inhibidores de PARP1, que previene su hiperactivación, pero también previene la reparación del ADN de una sola hebra y luego las roturas de la doble hebra del ADN causadas por la reparación fútil de BER y la replicación del ADN en las células cancerosas. Dado que, previamente, los presentes inventores han obtenido datos que muestran que la hiperactivación de PARP1 es necesaria para la letalidad por fármacos bioactivables NQO1, la inhibición de la actividad de PARP1 para lograr sinergia es un resultado sorprendente. Las células mueren por hiperactivación mejorada de PARP1 y muerte celular programada por el mecanismo en (A) usando MeOX, mientras que las células mueren por apoptosis normal en la estrategia descrita en B usando inhibidores de PARP1 (véase la Figura 7).

Tal como se muestra en la Figura 20, la metoxiamina aumenta la letalidad inducida por la p-lapachona. A, La adición de dosis no letales de metoxiamina (MX o MeOX) a las células expuestas a p-lapachona produce una letalidad sinérgica de las células de cáncer de páncreas Mia Paca2. B y C, La metoxiamina (MeOX) es una sustancia química modificadora del sitio AP que no es tóxica hasta> 100 mM, medida por la supervivencia relativa y la pérdida de ATP. Las concentraciones óptimas en combinación con fármacos bioactivables NQO1 están entre 6-12 mM. La Figura 21 ilustra estudios de Prueba de Principio. A. La metoxiamina (MeOX) aumenta la letalidad inducida por la p-lapachona (p-lap) en las células de cáncer de páncreas MiaPaca2. B. La adición de MeOX modifica los sitios AP y por lo tanto disminuye la señal de formación del sitio AP en las células expuestas a p-lap MeOX. La dosis de MeOX fue de 12 mM, la dosis de p-lap fue de 6 pM. C,D. XRCC1 es una proteína de andamiaje que permite la reparación por escisión de base (BER). La eliminación de XRCC1 causa sitios de AP elevados y roturas de una sola hebra de ADN, en los que PARP1 se puede unir y activarse/hiperactivarse. La eliminación de XRCC1 (C) aumenta la letalidad del tratamiento con p-lapachona.

Tal como se muestra en la Figura 22, la adición de dosis no tóxicas de metoxiamina (MeOX) aumenta en gran medida el daño del ADN en las células Mia PaCa-2 expuestas a dosis subletales de p-lapachona (2 pM). A) roturas de doble hebra de ADN (DSB), controladas por gamma-HAX, se mejoran en gran medida mediante la adición de dosis no tóxicas de metoxiamina (MeOX). MeOX, 12 mM; Dicumarol, inhibidor de NQO1, 50 pM; dosis de plapachona, indicada o 2 pM. Para las células Mia Paca2, 2-2,5 pM es subletal, 6 pM es letal. La dosis de H²O² fue de 500 pM, 2 h. Todos los tratamientos tuvieron una duración de 2 h. Las células se trataron 2X con MeOX, como un pretratamiento de 2 horas y luego durante 2 horas en combinación con p-lap cuando corresponda.

Los pretratamientos y cotratamientos con metoxiamina previenen las respuestas de recuperación de ATP en las células de cáncer de páncreas Mia PaCa-2 expuestas a fármacos bioactivables NQO1, tales como p-lapachona (plap) (Figura 23). A, Las respuestas de recuperación de ATP se evitan mediante la inactivación génica de MeOX y XRCC1, presumiblemente por hiperactivación mejorada de PARP1. B, La adición de MeOX a las células Mia PaCa2 tratadas con p-lap previene la recuperación de ATP. C, BAPTA-AM, un quelante de calcio, previene la pérdida de ATP sinérgica MeOX. Se usó BApTa -AM a 6 pM. D, La adición de MeOX mejora la pérdida de NAD+, consistente con una hiperactivación mejorada de PARP1.

La adición de metoxiamina (MeOX) previene las respuestas de recuperación de ATP en células Mia PaCa-2 tratadas con p-lap a dosis letales y subletales (Figura 24). Las dosis letales de p-lapachona fueron 6 y 4 pM, mientras que 3,0 y 2,5 pM son dosis subletales de p-lapachona (p-lap).

El piruvato de metilo (MP) suprime la muerte celular inducida por p-lapachona (Figura 25). Si bien los efectos podrían deberse a la recuperación del ciclo de TCA, MP es también un excelente eliminador de radicales libres de oxígeno (especies reactivas de oxígeno, ROS).

La adición de metoxiamina atenúa los efectos de MP, presumiblemente porque son necesarias menos ROS iniciales (H²O²) para crear sitios de AP irreparables (y modificados por MeOX) (Figura 26). Se usaron las dosis de p-Lap indicadas, MP a 1 o 5 mM y MeOX a 12 mM.

La metoxiamina (MeOX) acelera la pérdida de NAD+/ATP inducida por hiperactivación de PARP1, acelerando aún más la reparación en células Mia PaCa-2 expuestas a p-lapachona (Figura 27). A. La p-Lapachona mejora las tasas de consumo de oxígeno (OCR) en las células Mia PaCa2. Las dosis letales de p-lap provocan picos drásticos de OCR y pérdidas posteriores de toda la capacidad metabólica. Las dosis subletales de p-lap causan niveles elevados de OCR con el tiempo. Ambas respuestas están mediadas por NQO1. B, La adición de MeOX mejora las tasas de OCR en combinación con dosis subletales de p-lap, similar a una dosis letal de p-lapachona (4 ^j M), presumiblemente debido a la pérdida de NAD+ y ATP derivada de la hiperactivación de PARP1.

El tratamiento con fármacos bioactivables NQO1 suprime la glucólisis en las células Mia PaCa2 (Figura 28). Se suprimen tanto la utilización de glucosa (A) como la producción de lactato (B). Las células de NSCLC A549 se trataron conjuntamente con metoxiamina (MeOX) 12 mM y DNQ 87 durante 2 h (Figura 29) y se midió la supervivencia relativa (como en Huang y col., Cancer Res., 2012).

La inhibición de PARP1 aumenta la letalidad selectiva de tumores de los fármacos bioactivables NQO1. Los inhibidores de PARP1 aumentan la letalidad de los fármacos bioactivables NQO1 (Figura 30). Las células Mia PaCa-2 se trataron durante 2 horas con los inhibidores indicados en la Figura 30 y luego con DNQ los inhibidores (todos a 15 ^j M) durante 2 horas. A continuación, las células se lavaron y se dejaron crecer durante 7 días y se evaluó la supervivencia relativa como en Huang y col., Cancer Res., 2012, 72(12), 3038-3047, que también proporciona procedimientos y técnicas útiles adicionales que se pueden incorporar en el procedimiento descrito en el presente documento. Todos los inhibidores, salvo BSI-201, inhibieron la formación de PAR. Otros análisis mostraron que BSI-201 no era un inhibidor eficaz de PARP1, pero causó daño en el ADN, que es el mecanismo por el cual este inhibidor tuvo efecto sinérgico con fármacos bioactivables NQO1 (DNQ (mostrado) o p-lap). La Figura 31 muestra datos para la determinación de dosis no letales de inhibidores de PARP1 solos en células de NSCLC A549. La Figura 32 muestra los datos obtenidos para el inhibidor de PARP1, AG014699.

AG014699 mejora la letalidad dependiente de NQO1 de p-lapachona en células de NSCLC A549 (Figura 33). A, control para demostrar la letalidad sintética del fármaco solo contra células BRCA1 -/- CAPAN-1, mientras que otras células cancerosas BRAC1 de tipo silvestre (las células A549 y Mia PaCa-2 son completamente resistentes al inhibidor de PARP1). B, Demostración de que AG014699 inhibe la hiperactivación de PARP1 en respuesta a p-lap. C, Letalidad sinérgica de AG014699 en combinación con p-lap, que se previene con el inhibidor NQO1, dicumarol. D, Respuesta a la dosis de AG014699 en combinación con p-lap y reversión por adición de dicumarol.

La inactivación génica de PARP1 mejora la letalidad de la p-lapachona en células de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-231 (231) (Figura 34). A. Células de inactivación génica de ARNsh de PARP1 estables desarrolladas por los presentes inventores (Bentle y col., JBC 2006). Los análisis por transferencia de Western demuestran una inactivación génica estable en células que expresan o carecen de ⁿ QO1. B. Demuestra la formación de PAR-PARP1 drásticamente reducida en células con inactivación génica de PARP1. Téngase en cuenta que las roturas de la doble hebra de ADN ocurren mucho antes que en las células de tipo silvestre PARP1. C. La inactivación génica de PARP1 sensibiliza a las células al p-lap en ensayos de supervivencia a largo plazo. Aunque la inactivación génica de PARP1 suprime la necrosis programada inducida por p-lap (Bentle y col., ^j B^c 2006), las consecuencias a largo plazo son que sin PARP1 las células no pueden reparar las lesiones del ADN creadas por los fármacos bioactivables NQO1, como p-lap, y esas lesiones se convierten en DSB que eventualmente hacen que las células mueran a través de vías regulares mediadas por caspasa. D. La adición de AG014699 a las células 231 con inactivación génica de PARP1 no mejora significativamente su letalidad inducida por p-lap. Todos los inhibidores de PARP1 han mostrado respuestas similares, a excepción de BSI-201.

La inactivación génica de PARP1 en las células de cáncer de mama MCF-7 también mejora la letalidad de p-lap (Figura 35). A, B, La inactivación génica de PARP1 en las células MCF-7 que sobreexpresan NQO1 mejora en gran medida la letalidad de la p-lap. Téngase en cuenta que la inhibición de NQO1 por dicumarol (DIC) evita la sinergia al bloquear la bioactivación de NQO1.

Las células de NSCLC NQO1 H596 tratadas con dosis no tóxicas de p-lap dosis no tóxicas de AG014699 muestran evidencia de apoptosis en forma de caspasa-3 escindida (Figura 36). STS, la estaurosporina (1 jm , 1 h) sirve como control positivo. La forma activa de la caspasa 3 es la banda inferior de la mancha.

La inactivación génica estable de ARNsh de PARP1 mejora la letalidad (A) pero suprime la pérdida de ATP (B) debido a la supresión (pérdida) de la hiperactivación de PARP1 (Figura 37).

Tal como se muestra en la Figura 38, la pérdida de ATP inducida por p-Lap se previene con la inactivación génica estable de ARNsh de PARP1 o la adición de AG014699, aunque se produce una letalidad sinérgica entre la pérdida o inhibición de p-lap y PARP1. Las Figuras 39-42 muestran estudios en Mia Paca-2 y algunos datos del inhibidor de PARP1 combinados de DNQ.

La Figura 43 muestra el análisis farmacocinético y la valoración objetiva de micelas dC³ in vivo. a, concentraciones en sangre de dC3 y p-lap (convertido de dC3). Los parámetros farmacocinéticos (por ejemplo, T¹/²) se calcularon utilizando un modelo farmacocinético bicompartimentalizado. b, Concentraciones tumorales de dC3 y p-lap (convertido de dC3). La Figura 44 muestra la formación de PAR-PARP1 derivado de DNQ in vivo. Los datos del estudio piloto MDT se muestran a continuación en la Tabla 2-1.

Tabla 2-1. Estudio piloto de derivados DNQ de dosis máxima tolerada (DMT).

Las células de NSCLC A459 se pretrataron con AG014699 15 pM durante 2 horas, luego se expusieron a la misma concentración de AG014699 varias concentraciones de DNQ87 durante 2 horas tal como se indica (Figura 45). Luego, las células se lavaron para eliminar el fármaco y se realizó la supervivencia relativa como se describió anteriormente (Huang y col., Cancer Res., 2012). Las células tratadas de esta manera con dosis no tóxicas de p-lap muestran una mayor formación de lesiones de ADN, equivalente a las lesiones de ADN formadas por una dosis letal de p-lap (8 pM, 2 horas) (Figura 46).

Cálculos de la proporción de catalasa. La Figura 1 muestra niveles de NQOI/catalasa en coincidencia (n = 59) (A,B), así como tumor pancreático humano en lotes frente a tejidos normales asociados. De manera importante, se requiere NQO1 para 'bioactivar' DNQ y p-lapachona y sus análogos que son sustratos para la enzima, mientras que la catalasa es la enzima depuradora de radicales libres de resistencia conocida que puede proteger contra estos fármacos. Téngase en cuenta que las proporciones de NQO1 son muy altas en el tejido tumoral, aún bajas en tejido normal asociado (E,H). La Figura 47 muestra que las proporciones NQO1/catalasa están elevadas en los tumores de cáncer de mama, pero bajas en tejido normal asociado (C, F). Las células de cáncer de mama humano triple negativas (ER-, PR- y HR-) también están elevadas en los niveles de NQO1 en comparación con el tejido normal asociado. La Figura 48 muestra que los niveles de NQO1 también están elevados en los cánceres de pulmón no microcítico (CPCNP) frente al tejido normal asociado (n = 105) (A), mientras que la catalasa está elevada en el tejido normal y los niveles más bajos se encuentran en los tumores de NSCLC (B). Similar al cáncer de páncreas y de mama frente al tejido normal, las proporciones de NQOI/catalasa están elevadas en el tumor y se encuentran niveles más bajos en el tejido normal. Téngase en cuenta que los niveles de NQO1 también están elevados en los cánceres de próstata (Dong y col., Cancer Res., 2010), aunque los niveles de catalasa no se evaluaron en ese estudio en particular. Los datos de la Figura 49 proporcionan validación en muestras de pacientes con NSCLC humano de las proporciones de NQO1/Catalasa en tejido tumoral frente a tejido normal.

Ejemplo 3. Formas de dosificación farmacéutica

Las siguientes formulaciones ilustran formas de dosificación farmacéuticas representativas que se pueden usar para la administración terapéutica o profiláctica de un compuesto de una fórmula descrita en el presente documento (es decir, DNQ o DNQ-87), un compuesto desvelado específicamente en el presente documento, una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o una combinación de los compuestos descritos en el presente documento (en lo sucesivo, "Compuesto X"):

(i) Comprimido 1 mg/comprimido

'Compuesto X' 10,0

Lactosa 77.5

Povidona 15.0

Croscarmelosa sódica 12.0

Celulosa microcristalina 92.5

Estearato de magnesio 3,0

210,0

(ii) Comprimido 2 mg/comprimido

'Compuesto X' 20,0

Celulosa microcristalina 410.0

Almidón 50.0

Glicolato de almidón sodio 15.0

Estearato de magnesio 5,0

500.0

(iii) Cápsula mg/cápsula

'Compuesto X' 10,0

Dióxido de silicio coloidal 1,5

Lactosa 465,5

Almidón pregelatinizado 120,0

Estearato de magnesio 3,0

600,0

(iv) Inyección 1 (1 mg/ml) mg/ml 'Compuesto X' (forma de ácido libre) 1,0 Fosfato de sodio dibásico 12,0 Fosfato de sodio monobásico 0,7 Cloruro sódico 4,5 Solución de hidróxido de sodio 1,0 N (ajuste de pH a 7,0-7,5) q.s.

Agua para inyección q.s. a 1 ml

(v) Inyección 2 (10 mg/ml) mg/ml 'Compuesto X' (forma de ácido libre) 10,0 Fosfato de sodio monobásico 0,3 Fosfato de sodio dibásico 1,1 Polietilenglicol 400 200,0 Solución de hidróxido de sodio 0,1 N (ajuste de pH a 7,0-7,5) q.s.

Agua para inyección q.s. a 1 ml

(vi) Aerosol mg/lata

'Compuesto X' 20

Ácido oleico 10 Tricloromonofluorometano 5.000 Diclorodifluorometano 10.000 Diclorotetrafluoroetano 5.000

(vii) Gel tópico 1 % en peso

'Compuesto X' 5 %

Carbómero 934 1,25 %

Trietanolamina (ajuste de pH a 5-7) q.s.

Metilparabeno 0,2 %

Agua purificada q.s. hasta 100 g

(viii) Gel tópico 2 Gel 2 % en peso

'Compuesto X' 5 %

Metilcelulosa 2%

Metilparabeno 0,2 %

Propilparabeno 0,02 %

Agua purificada q.s. hasta 100 g

(ix) Pomada tópica % en peso

'Compuesto X' 5 %

Propilenglicol 1%

Base de pomada anhidra 40 %

Polisorbato 80 2%

Metilparabeno 0,2 %

Agua purificada q.s. hasta 100 g

(x) Crema tópica 1 % en peso

'Compuesto X' 5 %

Cera de abejas blanca 10 %

Parafina líquida 30 %

Alcohol bencílico 5 %

Agua purificada q.s. hasta 100 g

(xi) Crema tópica 2 % en peso

'Compuesto X' 5 %

Ácido esteárico 10 %

Monoestearato de glicerilo 3%

Éter estearílico de polioxietileno 3%

Sorbitol 5 %

Palmitato de isopropilo 2%

Metilparabeno 0,2 %

Agua purificada q.s. hasta 100 g

Estas formulaciones se pueden preparar mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica. Se apreciará que las composiciones farmacéuticas anteriores se pueden variar de acuerdo con técnicas farmacéuticas bien conocidas para adaptarse a diferentes cantidades y tipos de principio activo "Compuesto X". La formulación en aerosol (vi) puede usarse junto con un dispensador de aerosol de dosis medida estándar. Los compuestos descritos en el presente documento también se pueden administrar en combinación con sistemas de administración tales como nanopartículas, micelas o liposomas. Adicionalmente, los ingredientes y proporciones específicos son para fines ilustrativos. Los ingredientes pueden intercambiarse por equivalentes adecuados y las proporciones pueden variar, según las propiedades deseadas de la forma de dosificación de interés.

Los términos y expresiones que se han empleado en el presente documento se utilizan como términos de descripción y no de limitación, y no hay intención en el uso de dichos términos y expresiones de excluir cualquier equivalente de las características mostradas y descritas o partes de las mismas, pero se reconoce que son posibles diversas modificaciones dentro del ámbito de la invención reivindicada, reconocido por un experto en la materia,

Los procedimientos y dispositivos útiles para los presentes procedimientos pueden incluir un gran número de elementos y etapas de composición y procesamiento opcionales.

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. Un fármaco bioactivable NQO1 para su uso en un procedimiento para eliminar o inhibir el crecimiento de células cancerosas en un paciente que tiene células cancerosas, en el que el fármaco bioactivable NQO1 se usa en combinación con un inhibidor de poli(ADP-ribosil) polimerasa I (PARP1), en el que el fármaco bioactivable NQO1 es DNQ o DNQ-87.

2. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de la reivindicación 1, en el que las células cancerosas tienen defectos o vulnerabilidades de reparación por escisión de bases (BER) debido a procedimientos de reparación de ADN defectuosos.

3. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de la reivindicación 2, en el que el defecto o vulnerabilidad de BER comprende niveles defectuosos del gen/proteína/enzima de complemento cruzado de rayos X 1 o XRCC1.

4. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende además la administración de un agente que daña el ADN.

5. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, comprendiendo además el procedimiento el uso de un agente quimioterapéutico adiciona o de radioterapia l.

6. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que las células cancerosas tienen niveles elevados de NQO1.

7. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de la reivindicación 6, en el que las células cancerosas están en forma de un tumor sólido.

8. El fármaco bioactivable NQO1 para el uso de la reivindicación 7, en el que las células cancerosas son células de cáncer microcítico de pulmón no, células de cáncer de próstata, células de cáncer de páncreas, células de cáncer de mama, células de cáncer de cabeza y cuello o células de cáncer de colon.