ES2836208T3 - Ciclopirox, ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox para usar en el tratamiento del cáncer de vejiga - Google Patents

Ciclopirox, ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox para usar en el tratamiento del cáncer de vejiga Download PDF

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ES2836208T3 ES15859268T ES15859268T ES2836208T3 ES 2836208 T3 ES2836208 T3 ES 2836208T3 ES 15859268 T ES15859268 T ES 15859268T ES 15859268 T ES15859268 T ES 15859268T ES 2836208 T3 ES2836208 T3 ES 2836208T3
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Abstract

Una composición farmacéutica que tiene ciclopirox o ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox-POM que tiene una estructura de Fórmula 1 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en el tratamiento del cáncer de vejiga, en donde **(Ver fórmula)** y en donde: R1-R12 incluyen cada uno, independientemente, uno o más de hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, hetero aromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos, sustituidos o insustituidos, o combinaciones de los mismos; R13-R14 incluyen cada uno, independientemente, uno o más de un ion positivo, un ion de sodio, hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, hetero-aromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos, sustituidos o insustituidos, o combinaciones de los mismos; n es 0-20 sustituido o insustituido; y m es 0, 1 o 2.

Description

DESCRIPCIÓN
Ciclopirox, ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox para usar en el tratamiento del cáncer de vejiga
Antecedentes
La molécula de 6-ciclohexil-1-hidroxi-4-metilpiridin-2(1H)-ona, también conocida como ciclopirox, es un antifúngico tópico disponible comercialmente. El ciclopirox se ha usado para tratar micosis superficiales y la Tinea versicolor. Los productos de fármacos tópicos disponibles comercialmente contienen la sal de olamina de ciclopirox. Tras su administración oral a seres humanos, la ciclopirox olamina es absorbida completamente, seguido por una eliminación rápida y completa del fármaco. No se ha documentado la biodisponibilidad oral de la ciclopirox olamina en seres humanos. En animales, sin embargo, la biodisponibilidad absoluta de la ciclopirox olamina oral es baja. La administración oral reiterada de la sal de olamina de ciclopirox ha sido asociada con toxicidad gastrointestinal tanto en animales como en seres humanos. Por último, la sal de olamina de ciclopirox no posee la hidrosolubilidad requerida para su formulación como producto farmacológico inyectable. Por ello, sería beneficioso configurar el ciclopirox para una hidrosolubilidad mejorada para administrar el fármaco mediante inyección.
El cáncer de vejiga es el quinto diagnóstico más común de cáncer en EE. UU. Dado que los pacientes tienen un alto riesgo de recurrencia y progresión, el cáncer de vejiga es el cáncer más costoso de tratar por paciente de por vida. A pesar de su incidencia y su prevalencia, la investigación sobre el cáncer de vejiga cuenta, deplorablemente, con insuficiencia de fondos, dando como resultado pocos avances en la mejora del tratamiento del cáncer de vejiga. El cáncer de vejiga es un espectro de dos enfermedades: el cáncer de vejiga sin invasión muscular (NMIBC, por sus siglas en inglés), históricamente denominado “cáncer superficial de vejiga”, y el cáncer de vejiga con invasión muscular (MIBC, por sus siglas en inglés). El NMIBC es tratable con resección endoscópica y vacuna tópica y tratamiento farmacológico administrado mediante instilación vesical (administración intravesical). El MIBC requiere una intervención más agresiva, habitualmente en forma de cistectomía radical y/o quimioterapia sistémica. Hay tres tipos de lesiones por NMIBC: carcinoma papilar no invasivo (Ta), invasión tumoral de la lámina propia (T1) y carcinoma in situ (Tis). Los tumores Ta y T1 se subdividen en tumores de grado bajo y de grado alto. Los tumores Ta y T1 de grado alto, así como los tumores Tis tienen tasas de recurrencia más elevadas, con un riesgo de regresión entre moderado y alto de progresión a MIBC. El 50% de los NMIBC reaparecerá en menos de 12 meses tras la resección endoscópica y las terapias intravesicales. La tasa de recurrencia o nueva incidencia en cinco años para el NMIBC varía entre el 31 y el 78%, dependiendo del tipo y el grado del tumor, a pesar de las intervenciones quirúrgica, inmunoterapéuticas y quimioterapéuticas. En consecuencia, sería ventajoso contar con tratamientos mejorados del NMIBC, para prevenir su recurrencia y su progresión a MIBC.
Compendio
La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. En una realización, se proporciona un método para tratar el cáncer de vejiga. El método para tratar el cáncer de vejiga puede incluir: proporcionar una composición farmacéutica que tenga ciclopirox o ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox-POM que tenga una estructura de una de las fórmulas proporcionadas en la presente memoria o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y administrar la composición farmacéutica a un sujeto que tiene cáncer de vejiga. El ciclopirox o la ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox-POM se puede administrar en una cantidad terapéuticamente eficaz. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el sistema de señalización NOTCH, el complejo Y-secretasa y las proteínas diana Notch aguas abajo ciclina D1 y c-Myc. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el sistema de señalización del TGFp. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el sistema de señalización de STAT3. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el crecimiento de células del cáncer de vejiga. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir la reparación del ADN. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir la ribonucleótido reductasa. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el crecimiento de células madre del cáncer de vejiga. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir el crecimiento de células de cáncer de vejiga en la fase S. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir la formación de esferoides del cáncer de vejiga. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir la proliferación de células del cáncer de vejiga.
En una realización, se proporciona un método para tratar la enfermedad del cáncer de vejiga en el tracto urinario superior administrando ciclopirox por vía sistémica. El método puede incluir: proporcionar una composición farmacéutica que tenga ciclopirox, ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox representado por una estructura de cualquiera de las fórmulas proporcionadas en la presente memoria o derivada de la misma o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y administrar la composición farmacéutica a un sujeto que padece cáncer de vejiga en el tracto urinario superior.
Breve descripción de las figuras
La información anterior y siguiente, así como otras características de esta divulgación, serán más plenamente evidentes a partir de la siguiente descripción y de las reivindicaciones adjuntas, tomadas junto con los dibujos adjuntos.
Entendiéndose que estos dibujos representan únicamente varias realizaciones según la divulgación y que no ha de considerarse, por lo tanto, que limiten su alcance, la divulgación se describirá con especificidad y detalle adicionales a través del uso de los dibujos adjuntos, en los que:
La Figura 1 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de 6-ciclohexil-1 -hidroxi-4-metilpiridin-2(1 H)-ona, a la que se denomina ciclopirox en la presente memoria (Esquema 1).
La Figura 2 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de di-terc-butil(clorometil)fosfato (Esquema 2).
La Figura 3 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de un profármaco de 6-ciclohexil-1-hidroxi-4-metilpiridin-2(1H)-ona (Esquema 3).
La Figura 3A ilustra una representación esquemática de un subproceso de reacción identificado como Esquema 3A, que puede ser un subproceso del Esquema 3 de la Figura 3.
La Figura 3B ilustra un cromatograma de espectrometría de masas que muestra los productos de reacción del Esquema 3A de la Figura 3A.
La Figura 3C ilustra un cromatograma de espectrometría de masas que muestra la presencia de la forma de ácido libre de fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico.
La Figura 3D ilustra una forma de tipo dimérico del profármaco de ciclopirox-POM.
La Figura 3E ilustra un cromatograma de espectrometría de masas de la forma de tipo dimérico del profármaco de ciclopirox-POM de la Figura 3D.
La Figura 4 ilustra una representación esquemática de la precipitación salina de fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico para obtener sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico (Esquema 4); sin embargo, la síntesis puede dar lugar a cualquier otra sal farmacéuticamente aceptable del compuesto.
La Figura 4A ilustra un cromatograma de espectrometría de masas que muestra la presencia de la sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico de la Figura 4.
La Figura 5 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de dibencil(clorometil)fosfato (Esquema 5).
La Figura 6 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de dibencil(((6-ciclohexil-4-methyl-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metil)fosfato (Esquema 6).
La Figura 7 ilustra una representación esquemática de un método de preparación de sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico (Esquema 7).
La Figura 8 ilustra una representación esquemática de un método de preparación del reactivo POM dibencil(clorometil)fosfato (Esquema 8).
La Figura 9 incluye un gráfico que muestra que el ciclopirox (CPX) inhibe la proliferación de células de cáncer de vejiga NMIBC (T24) en un intervalo de concentración pequeño.
La Figura 10 incluye imágenes que muestra que el CPX inhibe la formación de esferoides del cáncer de vejiga. La Figura 11 incluye gráficos que muestran que el ciclopirox (CPX) inhibe la proliferación de células de cáncer de vejiga NMIBC (T24) y MIBC (253JBV) en un intervalo de concentración mayor.
La Figura 12A muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O) IV (por vía intravenosa), de 10 mg/kg de CPX-POM IV, de 30 mg/kg de CPX-O PO (por vía oral) y de 30 mg/kg de CPX-POM PO a seis ratones por instante por grupo de tratamiento.
La Figura 12B muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP (por vía intraperitoneal) de CPX-POM a tres ratones por instante por grupo de tratamiento.
La Figura 13A muestra los perfiles logarítmicos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg IV de CPX-POM y de CPX-O a seis ratas por grupo de tratamiento. La Figura 13B muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 20 mg/kg IV de CPX-POM, de 30 mg/kg SQ (por vía subcutánea) de CPX-POM, y de 30 mg/kg de CPX-O a seis ratas por grupo de tratamiento.
La Figura 14 muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 3 mg/kg IV de CPX-POM y CPX-O a cuatro perros beagle macho.
La Figura 15 muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 3 mg/kg por vía intravenosa (IV) de CPX-POM, 9 mg/kg por vía subcutánea (SQ) de CPX-POM, y 9 mg/kg por vía oral (PO) CPX-O a cuatro perros beagle macho.
La Figura 16 incluye inmunoelectrotransferencias que muestran la apoptosis de células T24 de cáncer de vejiga por CPX.
La Figura 17 incluye inmunoelectrotransferencias que muestran la apoptosis de células T24 de cáncer de vejiga por CPX.
La Figura 18 incluye un gráfico que muestra la formación de CPX a partir de CPX-POM con respecto al tiempo de incubación.
La Figura 19 incluye imágenes que muestran la diferencia de crecimiento celular de células T24 en presencia de CPX en comparación con los controles.
La Figura 20 incluye imágenes que muestran la diferencia de crecimiento celular de células 253JBV en presencia de CPX en comparación con los controles.
La Figura 21 incluye gráficos que muestran que el CPX inhibe la formación de esferoides tanto en la línea celular 253JBV como en la T24.
La Figura 22 incluye imágenes que muestran que el CPX induce la muerte celular en líneas celulares T24 de cáncer de vejiga.
Las Figuras 23A-23C incluyen gráficos que muestran que el CPX inhibe los sistemas de señalización intracelular Notch, Wnt y Hedgehog en células T24 de cáncer de vejiga.
La Figura 24 incluye gráficos y una imagen que muestran el efecto del CPX en la proliferación celular en células T24 FN (de la forma natural) y que sobreexpresan NCID, así como los niveles de Notch 1 y actina.
Las Figuras 25A-25D incluyen gráficos que muestran el efecto del CPX sobre las células de cáncer de vejiga.
La Figura 26A incluye un gráfico que muestra el peso en vejiga por tratamiento con CPX-POM.
La Figura 26B incluye un gráfico que muestra el estadio tumoral por tratamiento con dosificación de CPX-POM.
La Figura 27A incluye imágenes que muestran que el CPX-POM inhibe la señalización Notch1 y las proteínas del complejo Y-secretasa in vivo.
La Figura 27B incluye imágenes que muestran que el CPX-POM inhibe las proteínas diana Notch aguas abajo ciclina D1 y c-Myc en un modelo de tumor de vejiga inducido por BBN (borabiciclo nonano).
La Figura 28 muestra que el CPX-POM inhibe el antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA, por sus siglas en inglés) tanto in vitro como in vivo.
Descripción detallada
En la siguiente descripción detallada, se hace referencia a los dibujos adjuntos, que forman parte de la misma. En los dibujos, normalmente, números similares identifican componentes similares, a no ser que el contexto dicte algo distinto. No se pretende que las realizaciones ilustrativas descritas en la descripción detallada, en los dibujos y en las reivindicaciones sean limitantes. Pueden utilizarse otras realizaciones, y efectuarse otros cambios, sin apartarse del espíritu o el alcance del contenido presentado en la presente memoria. Se entenderá de inmediato que aspectos de la presente divulgación, descritos en general en la presente memoria, e ilustrados en las figuras, pueden ser dispuestos, sustituidos, combinados, separados y diseñados en una amplia variedad de configuraciones diferentes, todas las cuales se contemplan explícitamente en la presente memoria.
En general, la presente invención versa sobre 6-ciclohexil-1-hidroxi-4-metilpiridin-2(1H)-ona, también denominada ciclopirox, y sobre profármacos de la misma. El ciclopirox y los profármacos de ciclopirox descritos en la presente memoria pueden ser usados en el tratamiento del cáncer de vejiga, según apoyan los datos de este documento. Los profármacos de ciclopirox pueden incluir un resto fosforiloximetílico (POM) para suministrar el resto activo, ciclopirox, a los sitios de acción diana por la hidrosolubilidad potenciada y la capacidad de administrar el fármaco por inyección. El profármaco de ciclopirox-POM de la presente invención también puede incluir derivados de ciclopirox que incluyen el resto de profármaco de POM, profármacos derivados que pueden denominarse en la presente memoria, en general, con el término ciclopirox-POM o puede se les puede hacer referencia específicamente como derivados de ciclopirox-POM. Los profármacos de ciclopirox-POM de la presente invención pueden ser preparados con técnicas químicas tradicionales, tales como las descritas en la presente memoria. El ciclopirox puede ser usado como ciclopirox olamina en el tratamiento del cáncer de vejiga.
Se ha demostrado que el profármaco de ciclopirox-POM mejora la hidrosolubilidad del ciclopirox y, por ello, brinda una oportunidad de suministrar concentraciones significativas de ciclopirox a todo el tracto urinario por inyección de ciclopirox-POM. Al suministrar el ciclopirox biológicamente activo a todo el tracto urinario, la administración del profármaco de ciclopirox-POM por inyección supera las limitación de la administración tópica mediante instilación vesical, porque el fármaco es suministrado al tracto urinario superior, que incluye los uréteres, el sistema colector y los riñones. En consecuencia, el profármaco de ciclopirox-POM supera las limitaciones con la formulación y/o la vía de administración del ciclopirox u otras formas de ciclopirox, tales como una sal de ciclopirox, como la ciclopirox olamina. La solubilidad mejorada del profármaco de ciclopirox-POM puede ahora permitir composiciones farmacéuticas mejoradas para administrar cantidades eficaces de ciclopirox por inyección. Las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para que sean adecuadas para las vías de administración inyectables, tales como la intravenosa, la subcutánea y la intramuscular.
El profármaco de ciclopirox-POM está configurado para que el resto POM se escinda por enzimas fosfatasa para producir el fármaco madre original ciclopirox que es biológicamente activo. La conversión metabólica de ciclopirox-POM que da lugar al ciclopirox biológicamente activo es rápida y completa. Por ello, el ciclopirox-POM puede administrarse a un sujeto vivo, y luego ser procesado enzimáticamente formando ciclopirox bioactivo dentro del cuerpo del sujeto. Aunque habitualmente el sujeto será humano, puede descubrirse que los profármacos de ciclopirox-POM son adecuados para una amplia variedad de animales, tales como mamíferos, aves, reptiles o similares.
Si bien el ciclopirox ha sido usado tradicionalmente como agente antifúngico tópico, las diferentes formulaciones disponibles para los profármacos de ciclopirox-POM de la presente invención pueden proporcionar cantidades terapéuticamente eficaces de ciclopirox para otras enfermedades que se ha demostrado que son adecuadas para el tratamiento con ciclopirox o que pueden desarrollarse para que lo sean (ZHOU HONGYU et al., “The antitumor activity of the fungicide ciclopirox”, Int. J. Cancer, vol. 127, n° 10, 2010, páginas 2467-2477; documento WO2004/007676 A2). En consecuencia, los profármacos de ciclopirox-POM pueden ser usados en terapias para: inhibición, tratamiento y/o prevención de un hongo; tratamiento, prevención y/o control del cáncer (por ejemplo, cáncer de vejiga u otros); inhibición, tratamiento y/o prevención de la dermatitis; inhibición, tratamiento y/o prevención de micosis superficiales; para la inhibición, el tratamiento y/o la prevención de la inflamación (por ejemplo, como antiinflamatorio o antiinflamatorio no esteroideo (AINE)); inhibición, tratamiento y/o prevención de una o más de Tinea pedis, Tinea cruris y Tinea corporis, Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum y Microsporum canis, candidiasis (moniliasis), Candida albicans, Tinea (pityriasis) versicolor o Malassezia furfur, y para la inhibición, el tratamiento y/o la prevención de un infección viral, incluyendo el VIH. Se ha descubierto ahora que el ciclopirox, tal como la ciclopirox olamina o el profármaco de ciclopirox, puede ser usado en los tratamientos de cáncer de vejiga. Es decir, el agente puede ser usado sin un resto de profármaco o con un resto de profármaco como un profármaco. Tal uso del ciclopirox puede ser administrado como se describe en la presente memoria. El ciclopirox también puede ser incluido en un sistema de administración tópica para ser administrado directamente al cáncer de vejiga a través de la instilación vesical. También se ha descubierto que el CPX, el cual puede ser administrado como ciclopirox, profármaco de ciclopirox-POM o ciclopirox olamina, elimina selectivamente la infección viral por VIH-1.
El profármaco de ciclopirox-POM mejora la solubilidad del profármaco, de modo que se logre una mayor exposición sistémica y del tracto urinario al ciclopirox. Es decir, puede haber más ciclopirox disponible en todo un sujeto, así como dentro de las células individuales de un sujeto. La mayor cantidad de ciclopirox disponible mejora la bioactividad y el potencial terapéutico, y mejora también la capacidad de modular procesos celulares. En consecuencia, el profármaco de ciclopirox-POM puede ser usado para interrumpir la reparación del ADN, la división celular o el transporte intranuclear en una célula. Además, el ciclopirox-POM puede ser usado para inhibir la señalización Notch, afectando con ello a la troncalidad celular y a la promoción de la invasión y la metástasis del cáncer de vejiga. Las células pueden estar in vivo, ex vivo o in vitro. En consecuencia, el ciclopirox-POM puede usarse contra un amplio espectro de líneas cancerosas al interrumpir la reparación del ADN, la división celular o el transporte intranuclear en una célula, al inhibir la señalización Notch e inhibir cualquier otro sistema biológico descrito en la presente memoria.
Aunque se han descrito profármacos de ciclopirox, tales profármacos han estado limitados a ésteres convencionales formados con grupos hidroxilo y/o amino disponibles, tales como mediante acilación de ácidos activados en presencia de una base. Los ésteres descritos pueden incluir profármacos que tienen ésteres fenílicos, ésteres alifáticos (C8-C24), ésteres aciloximetílicos, carbamatos y ésteres de aminoácidos (véase el documento WO 2010/048712).
Además, se han creado profármacos con mayor solubilidad para compuestos que incluyen fármacos que contienen aminas secundarias y terciarias. Ejemplos de tales profármacos incluyen profármacos N-fosforiloximetílicos (POM) en los que el grupo metilo del resto POM está acoplado a una amina secundaria o terciaria (véase el documento US 5.985.856).
Se ha descubierto ahora que técnicas químicas alternativas pueden acoplar una entidad de profármaco POM al ciclopirox para formar los profármacos de ciclopirox-POM de la presente invención (documentos US2012/142637 A1). Los protocolos de síntesis química pueden conjugar el ciclopirox, mostrado a continuación, a través de su grupo hidroxilo, en vez de a través de una amina secundaria o terciaria. Si bien el ciclopirox sí incluye un nitrógeno cíclico, se ha descubierto que es poco deseable que tal nitrógeno esté unido a un POM, debido a que el grupo hidroxilo o el nitrógeno unido al nitrógeno posiblemente sea importante para la actividad biológica del ciclopirox. Por ello, la presente invención proporciona técnicas químicas para conjugar un resto POM con el grupo hidroxilo que está unido al nitrógeno del anillo de ciclopirox.
Figure imgf000006_0001
En una realización, la presente invención incluye un profármaco de ciclopirox o de sus derivados. El profármaco puede incluir una estructura de Fórmula 1 o un derivado de la mima o un estereoisómero de la misma, así como una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000006_0002
En las fórmulas, cada R1-R14 puede incluir, independientemente, un hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, hetero-aromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos, derivados de los mismos, sustituidos o insustituidos, o combinaciones de los mismos, así como otros sustituyentes químicos muy conocidos. R13 y/o R14 pueden ser un ion positivo, tal como un ion de sodio, de modo que el compuesto forme una sal. R13 y/o R14 también pueden incluir, independientemente, un ion positivo para formar una sal con el profármaco, o uno o más de hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, hetero-aromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos o combinaciones de los mismos. El conector metílico puede expandirse a un grupo alifático mayor que este sustituido o insustituido si se desea, de modo que n pueda ser aproximadamente 0-20, más preferiblemente 1-10, siendo lo más preferible que sea 1-4. El conector también puede tener uno o más átomos de oxígeno, de modo que m puede ser 0, 1 o 2. Para todas las fórmulas mostradas en la presente memoria, n puede ser 1-4 y m es 1, o n y m pueden ambas ser 1.
En una realización, R13 y/o R14 pueden ser, independientemente, uno cualquiera de diversos iones positivos. En un ejemplo, R13 y/o R14 pueden incluir, independientemente, iones con carga positiva de 1. Los R13 y/o R14 pueden ser un metal alcalino. Los R13 y/o R14 también pueden ser, independientemente, un ion del grupo 1, tal como un ion de sodio. En consecuencia, el enlace entre el oxígeno y R13 y/o R14 puede ser covalente o iónico.
En una realización, los R13 y/o R14 pueden ser, independientemente, un grupo protector. Ejemplos de grupos protectores pueden incluir terc-butilo y bencilo; sin embargo, pueden usarse otros grupos protectores de tipo orgánico. Estos grupos protectores se pueden dejar en el profármaco para su administración, o pueden ser eliminados antes de la administración.
En una realización, R1 es un alifático corto, tal como un metilo u otro alquilo.
En una realización, los R2-R12 son todos hidrógeno.
En una realización, los R13 y/o R14 son cada uno, independientemente, hidrógeno.
En una realización, los R13 y/o R14 son cada uno, independientemente, bencilo o terc-butilo.
En una realización, el R13 o el R14 incluye un ciclopirox-POM y el otro es hidrógeno, lo que se muestra posteriormente en la Fórmula 10.
En una realización, la presente invención puede incluir compuestos con la estructura de Fórmula 2 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. Los n, m, R1, y R13 y/o R14 pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000007_0001
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 3 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. Los n, m, R1, y R13 y/o R14 pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000007_0002
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 4 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000007_0003
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 5 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000008_0001
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 6 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000008_0002
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 7 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000008_0003
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 8 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000008_0004
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 9 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. La n y la m pueden ser iguales a lo enumerado anteriormente para la Fórmula 1.
Figure imgf000009_0001
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 10 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma.
Figure imgf000009_0002
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 11 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. Aquí, el compuesto tiene dos átomos de oxígeno con una carga negativa, que pueden estar iónicamente asociados con un catión para formar una sal, tal como cualquier sal farmacéuticamente aceptable.
Figure imgf000009_0003
En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 12 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. Aquí, el compuesto tiene dos átomos de oxígeno asociados con un catión para formar una sal, tal como cualquier sal farmacéuticamente aceptable.
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En una realización, los compuestos pueden incluir la estructura de Fórmula 13 o un derivado de la misma o un estereoisómero de la misma. Aquí, el compuesto tiene dos átomos de oxígeno que pueden perder el hidrógeno y asociarse entonces con un catión para formar una sal, tal como cualquier sal farmacéuticamente aceptable.
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Cualquiera de los compuestos puede prepararse como sales farmacéuticamente aceptables, si es posible. Puede usarse cualquier ion de sal habitual farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de tales sales pueden incluir sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como litio, sodio, potasio, magnesio, calcio, estroncio e hidratos de los mismos; más preferiblemente, sodio, magnesio, calcio e hidratos de los mismos; y aún más preferiblemente magnesio, calcio e hidratos de los mismos. Las sales también pueden incluir las correspondientes sales de diversos ácidos orgánicos, tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacético, ácido tartárico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido oxálico, etc., y de diversos ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, etcétera. Puede ser adecuada cualquier otra sal.
Además, cualquiera de los compuestos descritos en la presente memoria y representado por las fórmulas químicas puede tener cualquiera de los grupos R (R1-R14) independientemente seleccionado de sustituyentes del grupo de hidrógeno, alquilo C1-C24, alquenilo C2-C24, alquinilo C2-C24, arilo C5-C20, alcarilo C6-C24, aralquilo C6-C24, halo, hidroxilo, sulfhidrilo, alcoxi C1-C24, alqueniloxi C2-C24, alquiniloxi C2-C24, ariloxi C5-C20, acilo (incluyendo alquilcarbonilo C2-C24 (-CO-alquilo) y arilcarbonilo C6-C20 (-CO-arilo)), aciloxi (-O-acilo), alcoxicarbonilo C2-C24 (-(CO)-O-alquilo), ariloxicarbonilo C6-C20 (-(CO)-O-arilo), halocarbonilo (-CO)-X, en donde X es halo), alquilcarbonato C2-C24 (-O-(CO)-O-alquilo), arilcarbonato C6-C20 (-O-(CO)-O-arilo), carboxi (-COOH), carboxilato (-c Oo -), carbamoílo (-(CO)-NH2), carbamoílo mono-(alquilo C1-C24) sustituido (-(CO)-NH(alquilo C1-C24)), carbamoílo di-(alquilo C1-C24) sustituido (-(CO)-N(alquilo C1-C24^), arilcarbamoílo monosustituido (-(CO)-NH-arilo), tiocarbamoílo (-(CS)-NH2), carbamido (-NH-(c o )-NH2), ciano(-CEN), isociano (-N+e C-), cianato (-O-Ce N), isocianato (-O-N+e C-), isotiocianato (-S-Ce N), azido (-N=N+ =N-), formilo (-(CO)-H), tioformilo (-(CS)-H), amino (-NH2), amino mono y di-(C1-C24 alquilo) sustituido, amino mono y di-(arilo C5-C20) sustituido, alquilamido C2-C24 (-NH-(CO)-alquilo), arilamido C6-C20 (-NH-(CO)-arilo), imino (-CR=NH, en donde R es hidrógeno, alquilo C1-C24, arilo C5-C20, alcarilo C6-C24, aralquilo C6-C24, etc.), alquilimino (-CR=N(alquilo), en donde R=hidrógeno, alquilo, arilo, alcarilo, aralquilo, etc.), arilimino (-CR=N(arilo), en donde R=hidrógeno, alquilo, arilo, alcarilo, etc.), nitro (-NO2), nitroso (-NO), sulfo (-SO2-OH), sulfonato (-S2-O-)' alquilsulfanilo C1-C24 (-S-alquilo; también denominado “alquiltio”), arilsulfanilo (-S-arilo; también denominado “ariltio”), alquilsulfinilo C1-C24 (-(SO)-alquilo), arilsulfinilo C5-C20 (-(So)-arilo), alquilsulfonilo C1-C24 (-SO2-alquilo), arilsulfonilo C5-C20 (-SO2-arilo), fosfono (-P(0)(o H)2), fosfonato (-P(O)(O-)2), fosfinato (-P(O)(O-)), fosfo (-PO2), fosfino (-PH2), derivados de los mismos y combinaciones de los mismos.
Composiciones farmacéuticas
En una realización, el profármaco de ciclopirox-POM puede estar incluido en una composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para que sean adecuadas para vías de administración inyectables, tales como la intravenosa, la subcutánea y la intramuscular. La administración puede ser al riñón, o a la vejiga, o a la uretra, o aguas arriba en cualquier vaso sanguíneo que lleve a los mismos.
En una realización, el ciclopirox o la ciclopirox olamina puede estar incluido en una composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para que sean adecuadas para vías de administración inyectables, tales como la intravenosa, la subcutánea y la intramuscular. En un ejemplo, el ciclopirox o la ciclopirox olamina o el CPX-POM puede estar incluido en un sistema de administración local, tal como un vehículo polimérico que puede administrarse como un depósito al cáncer de vejiga o adyacente al mismo. El vehículo polimérico puede ser de nanopartículas, micropartículas, hidrogeles o de otra naturaleza que pueda ser administrado a un sitio local y permitir que el ciclopirox o la ciclopirox olamina o el CPX-POM sea suministrado tópicamente a las células del cáncer de vejiga mediante instilación vesical. El sistema de administración puede ser un sistema de administración biodegradable o permitir la difusión de los agentes desde el mismo.
En una realización, una composición farmacéutica puede incluir el profármaco de ciclopirox-POM descrito en la presente memoria. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede incluir un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dado que el profármaco de ciclopirox-POM es ahora altamente hidrosoluble, el vehículo farmacéuticamente aceptable puede incluir agua. Sin embargo, el vehículo puede bastar para administrar el profármaco de ciclopirox-POM para que alcance el entorno acuoso de un sujeto al que se administra, tal como un ser humano o las células del mismo.
En una realización, la composición farmacéutica puede incluir el ciclopirox o la ciclopirox olamina o el profármaco de ciclopirox-POM que esté presente en una cantidad superior a aproximadamente el 0,77%, más preferiblemente superior a aproximadamente el 1%, siendo lo más preferible que sea superior a aproximadamente el 2%.
En una realización, la composición farmacéutica puede incluir agua como vehículo.
En una realización, el ciclopirox o la olamina del mismo o el profármaco de ciclopirox-POM puede ser administrado según la administración conocida de ciclopirox o de la olamina del mismo. Sin embargo, la administración local directamente a las células de cáncer de vejiga puede ser ventajosa. También pueden ser adecuadas vías de administración inyectables, tales como la intravenosa, la subcutánea y la intramuscular.
Las composiciones descritas en la presente memoria pueden prepararse mediante métodos conocidos para la preparación de composiciones farmacéuticamente aceptables que pueden ser administradas a sujetos, de modo que se combine una cantidad eficaz de la sustancia activa en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los vehículos adecuados están descritos, por ejemplo, en Remington’s Pharmaceutical Sciences. En función de esto, las composiciones incluyen, aunque no exclusivamente, soluciones de las sustancias en asociación con uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, y están contenidas en soluciones tamponadas con un pH adecuado y son isoosmóticas con los fluidos fisiológicos.
En una realización, la cantidad efectiva de ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM está en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal de un sujeto. En un aspecto, la cantidad efectiva de ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM está en el intervalo de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal. El ciclopirox, la ciclopirox olamina o el profármaco de ciclopirox-POM puede prepararse creando una forma posológica inyectable que contiene entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 1000 mg de ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM. En un aspecto, la composición puede incluir entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 200 mg de ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM por kg de peso corporal del sujeto, y puede formularse creando una forma posológica líquida o una dosificación inyectable. Sin embargo, pueden usarse otras cantidades. Por ejemplo, el fármaco se puede administrar en un amplio intervalo de dosis, tales como 0,5 mg/m2 a 300 mg/m2, 1 mg/m2 a 200 mg/m2, 5 mg/m2 a 150 mg/m2, 10 mg/m2 a 75 mg/m2, o cualquier cantidad adecuada.
Las composiciones farmacéuticas incluyen, sin limitación, polvos liofilizados o soluciones o suspensiones inyectables estériles acuosas o no acuosas, que, además, pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que las composiciones sean sustancialmente compatibles con los tejidos o la sangre de un receptor previsto. Otros componentes que pueden estar presentes en tales composiciones incluyen agua, tensioactivos (por ejemplo, Tween®), alcoholes, polioles, glicerina y aceites vegetales, por ejemplo. Pueden prepararse soluciones y suspensiones para inyección extemporánea a partir de polvos, gránulos, comprimidos o soluciones o suspensiones concentradas estériles. La composición puede suministrarse, por ejemplo, pero no a modo de limitación, como un polvo liofilizado que se reconstituye con agua estéril o solución salina antes de su administración al paciente.
Vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen esencialmente composiciones químicamente inertes y no tóxicas que no interfieren en la eficacia de la actividad biológica de la composición farmacéutica. Ejemplos de vehículos farmacéuticamente adecuados incluyen, sin limitación, agua, soluciones salinas, soluciones de glicerol, etanol, cloruro de N-(1(2,3-dioleiloxi)propil)N,N,N-trimetilamonio (DOt Ma ), dioleil-fosfotidil-etanolamina (DOPE) y liposomas. Tales composiciones deberían contener una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto, junto con una cantidad adecuada de vehículo para proporcionar la forma para su administración directa al paciente.
Las composiciones de ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM descritas en la presente memoria pueden ser administradas, por ejemplo, por vía parenteral, intravenosa, subcutánea, intramuscular, intracraneal, intraorbital, oftálmica, intraventricular, intracapsular, intraespinal, intracisternal, intraperitoneal, intranasal, transdérmica o mediante aerosol o por administración oral. Pueden usarse vehículos o excipientes comunes para preparar composiciones farmacéuticas diseñadas para tales vías de administración.
Otro aspecto proporciona un envase comercial que comprende una composición descrita en la presente memoria y, asociadas con la misma, instrucciones para el uso de la misma en el tratamiento del cáncer de vejiga con ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM. Otra realización proporciona un envase comercial que comprende una composición descrita en la presente memoria y, asociadas con la misma, instrucciones para inducir la muerte y/o inhibir la actividad o el nivel de supervivencia de las células en el tratamiento del cáncer de vejiga con ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM.
En una realización, la composición carece de olamina. De hecho, el profármaco puede carecer de olamina. En consecuencia, la composición puede carecer de ciclopirox olamina o de un derivado de la misma. En una realización, la composición puede estar desprovista de ciclopirox que carezca de un resto de profármaco.
En una realización, el ciclopirox, la ciclopirox olamina o el profármaco de ciclopirox-POM puede estar presente en una cantidad terapéuticamente eficaz para su uso en el tratamiento del cáncer de vejiga.
Síntesis
En general, puede obtenerse ciclopirox y luego hacerlo reaccionar mediante los protocolos de reacción descritos en la presente memoria para producir el profármaco de ciclopirox-POM. También puede obtenerse un derivado de ciclopirox y hacerlo reaccionar siguiendo los protocolos de síntesis descritos en la presente memoria, con los que un reactivo de derivado de ciclopirox dará lugar a un correspondiente profármaco de derivado de ciclopirox-POM. En algunos casos, el ciclopirox o el derivado del mismo puede obtenerse en una sal, tal como una sal de olamina. En consecuencia, el esquema de reacción puede incluir la desalación del ciclopirox antes de su conjugación con el resto de profármaco de POM.
En las figuras y las siguientes descripciones asociadas de reacciones químicas y de los correspondientes reactivos se usan abreviaturas para describir compuestos químicos, abreviaturas que se definen como sigue: EDAC es clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida; DIAD es azodicarboxilato diisopropílico; BBDI es 1-tercbutoxi-2-terc-butoxicarbonil-1,2-dihidroisoquinolina; DICD es carbodiimida diisopropílica; y DBP es fosfato dibencílico.
En una realización, la presente invención proporciona un método de preparación de 6-ciclohexil-1 -hidroxi-4-metilpiridin-2(1H)-ona, método que puede incluir el Esquema 1 de reacción mostrado en la Figura 1. La reacción del Esquema 1 prepara ciclopirox a partir de una sal de olamina del mismo. Sucintamente, puede disolverse ciclopirox olamina (5 g, 18,6 mmol) en HCl 2 N, extraerse con EtOAc, y precipitar con hexano para obtener ciclopirox (un rendimiento de aproximadamente el 84%).
En una realización, la presente invención proporciona un método de preparación de un reactivo para su uso en la preparación de un profármaco de 6-ciclohexil-1 -hidroxi-4-metilpiridin-2(1 H)-ona, método que puede incluir el Esquema 2 de reacción mostrado en la Figura 2. El Esquema 2 de reacción proporciona un reactivo para la preparación de un reactivo del resto de profármaco de POM, que es di-terc-butil(clorometil)fosfato. Sucintamente, se disuelve di-terc fosfato de potasio (5 g, 20 mmol) en una cantidad mínima de agua fría y se añade gota a gota HCl 6 N para formar un precipitado, y luego el precipitado se lava con agua fría, el cual es filtrado a continuación y secado al vacío para formar di-terc fosfato. El di-terc-fosfato (4 g, 19 mmol) es entonces disuelto en aproximadamente 100 ml de acetona con hidróxido de tetrametilamonio añadido gota a gota hasta alcanzar un pH de aproximadamente 7, y, a continuación, se retira el disolvente y se seca al vacío para producir fosfato di-terc-butílico de tetra-metil amonio. A continuación se hace que el fosfato di-terc-butílico de tetra-metil amonio (5,11 g, 18 mmol) reaccione con iodocloro metano (CH2CN) (25 g, 142 mmol, 7,88 equivalentes) en aproximadamente 150 ml de DME y se lo somete a reflujo durante aproximadamente 2 horas antes de filtrarlo para retirar el precipitado, eliminación del disolvente, y luego se lo disuelve en EA/H, y, a continuación, se filtra a través de un lecho de sílice, y el disolvente se elimina y el producto se seca para obtener di-terc-butil(clorometil)fosfato. Se muestra una cromatografía en capa fina (CCF) para confirmar el producto.
En una realización, la presente invención proporciona un método de preparación de un profármaco de 6-ciclohexil-1-hidroxi-4-metilpiridin-2(1H)-ona (es decir, sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico), método que puede incluir el Esquema 3 de reacción mostrado en la Figura 3. El Esquema 3 de reacción hace reaccionar ciclopirox con di-terc-butil(clorometil)fosfato para formar un ciclopirox-POM que incluye una sal disódica. Sucintamente, se disuelven ciclopirox (0,257 g, 1,25 mmol) y di-terc-butil(clorometil)fosfato (0,450 g, 1,74 mmol) en 5 ml y se hacen reaccionar con NaH al 60% (0,62g, 154. mmol) a 0°C durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 2 horas antes de apagar con agua, y luego se retira el disolvente y se procesa a través de una columna de separación con EA/H (1:1), produciendo fosfato di-terc-butílico de (((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metilo), lo que se confirmó mediante CCF. El fosfato di-terc-butílico de (((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metilo) fue disuelto a continuación en 10 ml de THF/CH2CL (3:1), e incubado a temperatura ambiente durante 2 horas antes de que se eliminara y purificara mediante RPHPLC, y luego se añadió de forma equimolar Na2CO3 en agua/ACN y se liofilizó para obtener fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico (14 mg, 0,044 mmol) y sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico (15,89 mg), a la que se hace referencia en la presente memoria como profármaco primario de ciclopirox-POM.
La Figura 3A muestra un subproceso de reacción identificado como Esquema 3A, que puede ser un subproceso del Esquema 3. El Esquema 3A muestra el fosfato di-terc-butílico de (((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metilo) convirtiéndose en fosfato ácido terc-butílico de (((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metilo), que se convierte en fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico. La Figura 3B muestra un cromatograma de espectrometría de masas que muestra la presencia de estas entidades químicas.
La forma de ácido libre del profármaco de ciclopirox-POM (es decir, fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico) también fue purificada mediante RPHPLC, según se muestra en la Figura 3C. Resultó que el producto purificado tenía el cromatograma de espectrometría de masas mostrado en la Figura 3C.
Además, se creó, como se muestra en la Figura 3D otra forma de tipo dimérico de profármaco de ciclopirox-POM, a la que se denomina profármaco dimérico de ciclopirox-POM. El profármaco dimérico de ciclopirox-POM se confirma con el cromatograma de espectrometría de masas mostrado en la Figura 3E.
La Figura 4 ilustra el Esquema 4, que es el proceso de precipitación salina del fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico con iones de sodio para obtener sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico, la cual se confirma con el cromatograma de espectrometría de masas mostrado en la Figura 4A.
En una realización, la presente invención puede incluir un método de preparación del reactivo POM dibencil(clorometil)fosfato, como se muestra en el Esquema 5 de reacción de la Figura 5. Sucintamente, se hace reaccionar CH2CN (5 ml; 68,6 mmol) con dibencil fosfato de plata (2 g, 52 mmol) en aproximadamente 25 ml de tolueno y se lo somete a reflujo durante aproximadamente 1 hora antes de retirar el disolvente y de su proceso a través de una columna de separación con 1/1EA/H para producir dibencil(clorometil)fosfato, según se confirma mediante CCF.
En una realización, la presente invención proporciona un método de preparación de un profármaco de fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metilo), que se muestra en el Esquema 6 de la Figura 6. Sucintamente, se disuelve ciclopirox (0,431 g, 2,08 mmol) en 10 ml de DMF con dibencil(clorometil)fosfato (0,920 g, 2,81 mmol) junto con NaH al 60% (0,096 g, 2,38 mmol) y se incuba a 0°C durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 1 hora antes de apagar con agua. A continuación, se retira el disolvente y se procesa mediante una columna de separación con EA/H 1:1 para producir fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metilo), lo que se confirma mediante CCF, según se muestra.
En una realización, el fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metilo) se convierte en la sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico, según se muestra en el Esquema 7 de la Figura 7. Sucintamente, se disuelve fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metilo) en 25 ml de THF en presencia de 100 mg de Pd/C, y bajo hidrógeno (H2) a temperatura ambiente durante 3 horas antes de retirar el disolvente y de que se disuelva el producto en ACN. A continuación, se añade Na2CO3 en agua y se liofiliza. Se determina que el producto es una cantidad menor de fosfato diácido ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1(2H)-il)oxi)metílico (aproximadamente 0,273 g, 0,86 mmol), siendo el producto en su mayor parte sal disódica de fosfato ((6-ciclohexil-4-metilpiridin-1 (2H)-il)oxi)metílico (0,310 g), lo que se confirmó mediante CCF, según se muestra.
En una realización, se usa otro método de preparación del reactivo POM dibencil(clorometil)fosfato, mostrado en el Esquema 8 de reacción de la Figura 8. Sucintamente, se disuelven durante la noche dibencilfosfato (10,6 g; 38,08 mmol) y sulfoclorhidrato clorometílico (7,52 g, 456,6 mmol/120 ml de CH2Cl2) en 320 ml de agua y 200 ml de CH2Cl2 con NaHCO3 (12,80 g, 152,32 mmol) y n-Bu4NHSO4 (12,94 g, 38,08 mmol) a entre 0°C y la temperatura ambiente, y luego se procesa a través de una columna de separación con 1/2 EA/H, EA. Esta reacción produce aproximadamente un 48% de dibencil(clorometil)fosfato (6 g), lo que se confirma mediante CCF, según se muestra.
En una realización, la presente invención proporciona otro método de preparación de un profármaco de fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1(2H)-il)oxi)metilo), que se muestra en el Esquema 6 de la Figura 6. Sucintamente, se disuelve ciclopirox (1 g, 4,82 mmol) en 20 ml de DMF con dibencil(clorometil)fosfato (2 g, 6,12 mmol) junto con NaH al 60% (0,375 g) y se incuba a 0°C durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 1 hora antes de apagar con agua. A continuación, se retira el disolvente, y el producto se disuelve en EtOAc, se lo lava con agua, se retira el disolvente y se procesa a través de una columna de separación con EA/H 1:2, y RPHPLC, para producir un 67% de fosfato dibencílico (((6-ciclohexil-4-metil-2-oxopiridin-1 (2H)-il)oxi)metilo) (1,616 g).
Experimental
Los datos de las figuras y las tablas indican que el profármaco de ciclopirox-POM descrito en la presente memoria puede ser una mejora para su administración a sujetos. Se descubrió que el ciclopirox era fácilmente biodisponible cuando se administraba IV como profármaco, en comparación con la administración IV de la ciclopirox olamina a ratones, ratas y perros, y que, por ello, el ciclopirox-POM es una mejora en la formulación química. Sin embargo, tras su administración oral a ratones, la biodisponibilidad es baja, el 21%, tras la administración de la sal de olamina, y del 12% tras la administración oral de profármaco de ciclopirox-POM. En consecuencia, el ciclopirox es fácilmente biodisponible cuando se administra IV como profármaco. Dada la incapacidad de detectar el profármaco en el plasma y la orina tras la administración IV, oral, subcutánea e intraperitoneal, parece que el profármaco se metaboliza rápida y completamente cuando alcanza la circulación sistémica. Así, el profármaco de ciclopirox-POM tiene ventajas sobre la ciclopirox olamina, desde el punto de vista de las propiedades fisicoquímicas, y puede ser formulado creando un proyecto inyectable adecuado. En función de los datos, es razonable creer que el profármaco de ciclopirox-POM se convierte rápidamente en ciclopirox.
Ahora se ha descubierto que los compuestos de la presente invención son útiles para tratar el cáncer de vejiga. El cáncer de vejiga puede incluir el NMIBC (cáncer de vejiga sin invasión muscular) y el MIBC (cáncer de vejiga con invasión muscular), así como otros cánceres de vejiga. Véanse las Figuras 9-28. Se ha demostrado que los compuestos (Fórmula 10) tienen actividad contra el cáncer de vejiga. La administración del profármaco mediante inyección sistémica (por ejemplo, intravenosa, intramuscular, subcutánea, etc.) da lugar a concentraciones activas, clínicamente relevantes (por ejemplo, concentraciones significativas) del agente activo ciclopirox que son suministradas selectivamente a todo el tracto urinario. Esto puede tratar el cáncer de vejiga superficial o sin invasión muscular.
El profármaco se convierte en el compuesto de ciclopirox activo que suprime de forma efectiva las células madre en el cáncer de vejiga y ataca específicamente el sistema de señalización Notch-1. Se ha demostrado que, en presencia del compuesto, la señalización es suprimida significativamente y que el compuesto afecta al cáncer de vejiga a través de este mecanismo. La supresión de Notch es una actividad significativa para que el compuesto inhiba el cáncer de vejiga y otros cánceres en los que la señalización Notch está activa (por ejemplo, cáncer de colon, osteosarcoma).
El NMIBC comienza por un cáncer del revestimiento exterior (urotelio) del tracto urinario (por ejemplo, el revestimiento que está en contacto con la orina), y las células cancerosas que están en el revestimiento exterior empiezan una invasión hacia el interior, el músculo de la vejiga, y luego el cáncer se extiende por todo el cuerpo. Sin embargo, la actividad del ciclopirox y su administración como profármaco permite que el fármaco inhiba un sistema que está asociado con la invasividad de este cáncer particular.
El profármaco de ciclopirox-POM, basado en la actividad del ciclopirox, también se puede usar para inducir la autofagia, inhibir la mTOR, regular a la baja las ciclinas A, B1, D1 y E, así como CDK2 y CDK4, y otras actividades.
Los métodos de tratamiento del cáncer de vejiga con el profármaco pueden incluir la administración del profármaco de ciclopirox-POM (por ejemplo, profármaco) sistémica para el tratamiento del cáncer de vejiga, que proporciona resultados sorprendentes e inesperados, tal como se describe en la presente memoria.
Se ha descubierto que la administración sistémica del profármaco de ciclopirox-POM da lugar al suministro selectivo de concentraciones clínicamente significativas del agente anticanceroso activo ciclopirox (ácido libre) a todo el tracto urinario.
El tratamiento actual del cáncer de vejiga sin invasión muscular (NMIBC, denominado previamente cáncer superficial de vejiga) es a través de instilación vesical. No hay en la actualidad ninguna terapia farmacológica para el NMIBC administrada por ninguna vía que no sea la instilación vesical. La instilación vesical de agentes anticancerosos solamente expone el cáncer de vejiga a agentes anticancerosos durante el periodo de tiempo que los pacientes son capaces de retener líquido en su vejiga (por ejemplo, dos horas). En segundo lugar, la instilación vesical no suministra el fármaco a todo el tracto urinario —es decir, a los uréteres, al sistema colector y a los riñones— que, anatómicamente, está asentado sobre la vejiga. Hasta el 10% de los pacientes con NMIBC tienen enfermedad del tracto urinario superior. Al contrario de esto, la presente invención incluye una administración sistémica (por ejemplo, inyección) que proporciona el fármaco activo a todo el tracto urinario. Sin embargo, la terapia también puede ser administrada mediante instilación de la vejiga.
El cáncer de vejiga se presenta como dos enfermedades: el NMIBC y el cáncer de vejiga con invasión muscular (MIBC). Aproximadamente las tres cuartas partes de los pacientes recién diagnosticados con cáncer de vejiga presentan NMIBC. El NMIBC se convierte en MIBC cuando invade el músculo de la vejiga. El MIBC a menudo hace metástasis, lo que requiere administrar sistémicamente agentes quimioterapéuticos. Ahora se ha demostrado con sorpresa e inesperadamente que el ciclopirox posee actividad anticancerosa en cánceres de vejiga NMIBC y MIBC, y la administración sistémica del profármaco de ciclopirox-POM proporciona el ciclopirox a estas células de cáncer de vejiga. El ciclopirox procedente de la administración de profármaco de ciclopirox-POM inhibe la proliferación celular, la formación de colonias y la formación de esferoides en líneas celulares bien caracterizadas de NMIBC y MIBC. Aunque esa actividad fungicida del ciclopirox está mediada por su capacidad de quelar hierro e interrumpir procesos intracelulares dependientes del hierro, la actividad anticancerosa del ciclopirox in vitro es independiente de los quelantes de hierro disponibles comercialmente. Se ha demostrado por vez primera que el ciclopirox inhibe el sistema de señalización Notch-1, que es un sistema que recientemente se ha identificado que está sobreexpresado en el cáncer de vejiga invasivo, y un sistema que se sobreexpresa en células madre cancerosas en varios cánceres. En consecuencia, el profármaco de ciclopirox-POM se puede usar en el tratamiento de todas las formas de cáncer de vejiga, y en células madre cancerosas de muchos cánceres diferentes en los que está activo el sistema de señalización Notch.
El profármaco de ciclopirox-POM suministra selectivamente concentraciones clínicas significativas de ciclopirox a todo el tracto urinario
Los inventores han realizado una serie de estudios farmacocinéticos en ratones, ratas y perros, demostrando que el siguiente profármaco de ciclopirox-POM desaparece rápida y completamente del plasma tras su administración sistémica. La biodisponibilidad del ciclopirox tras la administración sistémica del profármaco de ciclopirox-POM es excelente, variando del 77-137% en ratones, ratas y perros. Tras la administración sistémica del profármaco de ciclopirox-POM, la dosis se elimina del cuerpo mediante la eliminación renal del ciclopirox y del metabolito glucurónido de ciclopirox (CPX-G). La eliminación del fármaco es coherente con lo documentado para la ciclopirox olamina (CPX-O). A dosis de profármaco de ciclopirox-POM muy por debajo de la dosis máxima tolerada, se observan concentraciones de ciclopirox en la orina que superan los valores de CI50 in vitro determinados en líneas celulares NMIBC y MIBC.
Se han realizado estudios farmacocinéticos en ratones, ratas y perros que demuestran que el profármaco de ciclopirox-POM es metabolizado rápida y completamente para formar ciclopirox. El rápido metabolismo del profármaco de ciclopirox-POM se produce in vivo para formar ciclopirox. No se detecta el profármaco de ciclopirox-POM en el plasma ni en la orina tras la administración IV en ratones, ratas y perros. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma son máximas inmediatamente después de la administración por inyección IV (en menos de cinco minutos) y decaen posteriormente en ratones, ratas y perros. Es sabido que el resto POM es metabolizado por las fosfatasas que circulan en la sangre. El metabolismo completo del profármaco de ciclopirox-POM forma ciclopirox. Tras la administración del profármaco de ciclopirox-POM por vía intravenosa a ratones, el ciclopirox está completamente biodisponible, en comparación con la administración por inyección IV de ciclopirox olamina
Farmacocinética del profármaco de ciclopirox-POM en ratones
Estudio 208-02. Biodisponibilidad del ciclopirox tras la administración oral e intravenosa del profármaco de ciclopirox-POM en ratones
La prueba farmacocinética conceptual para el profármaco de ciclopirox-POM se determinó en el ratón tras la administración de profármaco de ciclopirox-POM y ciclopirox olamina dados de forma oral e intravenosa en dosis de 30 mg/kg y 10 mg/kg, respectivamente, a seis ratones por instante por grupo de tratamiento. Los objetivos de este estudio eran caracterizar la velocidad y el grado del metabolismo del CPX-POM y evaluar la viabilidad del profármaco de ciclopirox-POM administrado oralmente en apoyo de futuros estudios de pruebas conceptuales contra el cáncer.
Tras la administración oral e IV del profármaco de ciclopirox-POM, el profármaco no fue detectado en el plasma. Además, el área bajo la curva (AUC, por sus siglas en inglés) de ciclopirox tras la administración IV del profármaco de ciclopirox-POM fue del 137%, en comparación con la administración IV de ciclopirox olamina, demostrando el metabolismo no solo rápido, sino completo del profármaco, en su conversión a ciclopirox, presumiblemente por las fosfatasas del plasma. La biodisponibilidad oral del ciclopirox tras la administración de ciclopirox olamina (21%) y del profármaco de ciclopirox-POM (12%) fue baja, sugiriendo un efecto significativo de primer paso asociado con esta vía de administración.
La Figura 12A muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O) IV (por vía intravenosa), de 10 mg/kg de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM) IV, de 30 mg/kg de CPX-O PO (por vía oral) y de 30 mg/kg de CPX-POM PO. La Tabla 1A resume los datos farmacocinéticos resultantes.
Tabla 1A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma en ratones C57/B16 machos tras dosis únicas de CPX-O y CPX-POM por vía IV y oral
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a N=6 ratones por instante por tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la CPX-O se formuló en 25mM de tampón fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol® con una concentración de 2,0 mg/ml de CPX; la sal disódica de CPX-POM se formuló en 25mM de tampón fosfato con pH 7 con una concentración de 2,69 mg/ml
c C0 corresponde al valor de intersección con el eje y tras la administración de la inyección IV derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
d La biodisponibilidad absoluta se determina usando CPX-O IV como tratamiento de referencia
Estudio 11177. Biodisponibilidad absoluta del profármaco de ciclopirox-POM tras la administración IP en ratones
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en el plasma y la orina se caracterizó en el ratón tras la administración de 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM). El objetivo de este estudio era caracterizar la biodisponibilidad absoluta de profármaco de ciclopirox-POM tras la administración IP para soportar la dosificación IP en estudios preclínicos de prueba conceptual en modelos validados de cáncer de vejiga. Además, los inventores caracterizaron la excreción urinaria de CPX y glucurónido de ciclopirox (CPX-G) para describir la exposición del tracto urinario al CPX tras la administración IP de CPX-POM. Dos grupos de tratamiento de 30 ratones C57BL/6 se trataron cada uno con CPX-POM. Antes de las seis horas posteriores a la dosis, y durante las mismas, se sacrificaron tres animales en cada instante seleccionado de muestreo de plasma. Se recogió sangre (plasma) por punción cardiaca para su bioanálisis. Se acumuló plasma en cada punto temporal. Además, a dos grupos de seis ratones se les administraron 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP de CPX-POM para caracterizar la farmacocinética de la orina. Se puso a los ratones en jaulas metabólicas con recogida de orina durante 24 horas tras la dosis (intervalos de recogida de orina de 0-8 horas y 8-24 horas). Como con el plasma, se combinaron muestras de orina recogidas de seis animales para su bioanálisis.
Las dosis únicas de 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP de CPX-POM se toleraron bien. La biodisponibilidad absoluta de CPX-POM IP fue del 65%. De forma coherente con el anterior estudio farmacocinético de prueba conceptual, el CPX-POM no fue detectable en un límite por debajo de lo cuantificable (BQL, por sus siglas en inglés) de 25 ng/ml en plasma tras cualquiera de los dos tratamientos. Como se ilustra en la Figura 12B, se logra una extensa exposición sistémica al CPX tras la administración IV e IP de CPX-POM. Tras la administración de una inyección IV de 10 mg/kg de CPX-POM, se observó un valor pico de concentración de CPX en plasma de 8.098 ng/ml (39 pM), que superaba en varias veces los valores in vitro de CI50. Tras la administración IP de 50 mg/kg de CPX-POM, se observó un valor Cmax de 4.127 ng/ml (10,0 pM) 0,25 horas tras la dosis. Dado el valor de CI50 in vitro de 2 pM (414 ng/ml) en líneas celulares de cáncer de vejiga sin invasión muscular y con invasión muscular, 50 mg/kg IP de CPX-POM logran valores Cmax de CPX que son cinco veces mayores que la CI50.
Los datos farmacocinéticos en plasma resultantes se resumen en la Tabla 2A. De forma coherente con el estudio anterior 208-02, la velocidad de eliminación aparente de CPX es rápida tras la administración IP, con una vida media terminal promedio en plasma inferior a 1 hora (0,88 horas). La eliminación sistémica del CPX tras la administración IV de CPX-POM en este estudio fue de 7.605 ml/h/kg en el ratón. El volumen de distribución para el CPX tras la administración IV de CPX-POM fue moderado en el ratón, de aproximadamente 9,0 l/kg, mayor, de nuevo, que el estudio previo en ratones. La Figura 12B muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP de CPX-POM a tres ratones por instante por grupo de tratamiento.
Tabla 2A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma en ratones C57/B16 tras dosis únicas IV e IP de CPX-POM
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a N=3 ratones por instante por tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la sal disódica de CPX-POM se formuló en 25mM de tampón fosfato con pH 7 con una concentración de 2,69 mg/ml
c C0 corresponde al valor de intersección con el eje y tras la administración de la inyección IV derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
La Tabla 3A resume, a continuación, parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina obtenidos en ratones tras 10 mg/kg IV y 50 mg/kg IP de CPX-POM. Tras dosis únicas IV e IP de CPX-POM, se excreta menos del 1% de la dosis como CPX. Sin embargo, las concentraciones de CPX en la orina superaron en varias veces el valor CI50 in vitro de 2 pM. A diferencia de la vía de administración IV, se observaron concentraciones urinarias significativas de CPX en todo el periodo de 24 horas tras la dosis después de la administración IP. Se excretó del 23 al 26% de la dosis de CPX-POM como metabolito glucurónido inactivo de ciclopirox.
Tabla 3A. Parámetros farmacocinéticos de CPXc y CPX-Gc en la orina en ratones C57/B16 machos tras dosis únicas IV e IP de CPX-POM
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a N=6 ratones por tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c Ciclopirox (CPX); glucurónido de ciclopirox (CPX-G)
Estudio 11206. Farmacocinética de la orina del profármaco de ciclopirox-POM tras la administración IP única y reiterada en ratones
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en la orina se caracterizó en ratones tras una administración de una dosis única (día 1) y reiterada (día 10) (una vez al día diez días consecutivos) de 50, 100 y 200 mg/kg de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM) a tres grupos separados de seis ratones cada uno, se resume a continuación en la Tabla 3B. Este estudio se realizó para soportar estudios preclínicos in vivo de pruebas conceptuales en modelos validados de cáncer de vejiga documentando la exposición del ciclopirox en la orina tras la administración del profármaco de CPX-POM tras un intervalo de dosis IP una vez al día. Tras la administración IP de una dosis única y reiterada de 50, 100 y 200 mg/kg de CPX-POM, se excretó menos de un 1% de la dosis como CPX durante 24 horas. Sin embargo, pese a la baja recuperación porcentual de la dosis, las concentraciones de CPX en la orina superaron el valor CI50 in vitro de 2 pM en varias veces en todo el intervalo de dosis. No se detectó CPX-POM en ninguna muestra de orina recogida en este estudio, lo que sugiere un metabolismo completo del profármaco. Una porción significativa de la dosis administrada se eliminó como metabolito glucurónido de ciclopirox inactivo en todo el intervalo de dosis. En función de estos datos, se seleccionaron posologías IP subcrónicas de 100 mg/kg y 200 mg/kg de profármaco de ciclopirox-POM para estudios subsiguientes de pruebas conceptuales en modelos validados de cáncer de vejiga.
Tabla 3B. Parámetros farmacocinéticos de CPXc y CPX-Gc en la orina en ratones C57/B16 machos tras dosis IP única y reiterada una vez al día de CPX-POM
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a N=6 ratones por grupo de tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 20 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol® administrada una vez al día IP durante diez días consecutivos
c Ciclopirox (CPX); glucurónido de ciclopirox (CPX-G)
d La fracción de la dosis excretada como CPX-G se corrigió para el peso molecular
Farmacocinética del profármaco de ciclopirox-POM en ratas
Estudio 10954. Biodisponibilidad del ciclopirox tras la administración intravenosa del profármaco de ciclopirox-POM en ratas
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en el plasma y la orina se caracterizó en la rata tras la administración IV de 10 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O) y profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM). Se usó ciclopirox olamina intravenosa como referencia en la caracterización de la biodisponibilidad de ciclopirox tras la administración IV de profármaco de ciclopirox-POM en esta especie. Dada la baja biodisponibilidad oral de CPX observada en el ratón tras la administración de CPX-O y CPX-POM, en este estudio no se investigó esta vía de administración.
En la Figura 13A se ilustran los perfiles resultantes de concentración media de ciclopirox en el plasma con respecto al tiempo tras la administración IV de CPX-POM y CPX-O. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma decayeron rápidamente tras la administración IV de ambos tratamientos con una vida media de eliminación aparente inferior a una hora. En la Tabla 4A se resumen los parámetros farmacocinéticos resultantes del ciclopirox en el plasma.
Tras la administración IV de CPX-POM, la disponibilidad sistémica de CPX era del 77%, en comparación con la administración intravenosa de ciclopirox olamina. Se observaron concentraciones del profármaco en el plasma en algunas muestras de sangre recogidas pocos minutos después de la administración de la inyección IV; sin embargo, los inventores no lograron detectar CPX-POM en la mayoría de las muestras recogidas. No se detectó CPX-POM en ninguna de las muestras de orina recogidas. Se logra una extensa exposición sistémica al CPX tras la administración IV de 10 mg/kg de CPX-POM, con un valor medio inicial de concentración de ciclopirox en el plasma de 9.310 ng/ml inmediatamente después de la administración de la inyección IV. Dado el valor de CI50 in vitro de 2 pM (414 ng/ml) en líneas celulares de cáncer de vejiga sin invasión muscular y con invasión muscular, 10 mg/kg IV de CPX-POM logran valores Cmax de CPX aproximadamente veinticinco veces mayores que la CI50 (Cmax = 45 pM). La Figura 13A muestra los perfiles logarítmicos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 10 mg/kg IV de CPX-POM y CPX-O a seis ratas por grupo de tratamiento.
Tabla 4A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma in ratas macho Sprague-Dawley tras dosis IV únicas de CPX-POM y CPX-O
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a N=6 ratas por tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c Co corresponde al valor de intersección con el eje y derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
En la Tabla 5A a continuación se resumen los parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina obtenidos en ratas tras la administración de 10 mg/kg IV de CPX-O y CPX-POM. Tras una única dosis IV de CPX-POM y CPX-O, se excreta menos del 1 % de la dosis como CPX. Sin embargo, las concentraciones de CPX en la orina superaron el valor CI50 in vitro de 2 pM.
Tabla 5A. Parámetros farmacocinéticos de CPXc y CPX-Gc en la orina en ratas macho Sprague-Dawley tras dosis únicas IV de CPX-POM y CPX-O
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a N=4 ratas que recibieron los tres tratamientos en forma completa, no aleatorizada y cruzada
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c Ciclopirox (CPX); glucurónido de ciclopirox (CPX-G)
Estudio 11428. Biodisponibilidad del ciclopirox tras la administración subcutánea de profármaco de ciclopirox-POM y ciclopirox olamina oral en ratas
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en el plasma y la orina se caracterizó en la rata tras la administración IV de 20 mg/kg de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM), la administración subcutánea (SQ) de 30 mg/kg de CPX-POM, y de la administración oral de 30 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O). Se usó CPX-POM intravenoso como referencia en la caracterización de la biodisponibilidad de ciclopirox tras la administración SQ del profármaco de ciclopirox-POM en esta especie. Se determinó la biodisponibilidad oral de CPX tras la administración de la sal de olamina para establecer un “puente” farmacocinético entre el CPX-POM inyectable y los datos preclínicos de seguridad generados por Hoechst AG mediante estudios para el registro realizados en apoyo del producto antifúngico tópico de olamina.
En la Figura 13B se ilustran los perfiles resultantes de concentración plasmática media de ciclopirox con respecto al tiempo tras la administración IV y SQ de CPX-POM, así como de ciclopirox olamina administrada oralmente. De forma coherente con el Estudio 10954, las concentraciones de ciclopirox en el plasma decayeron rápidamente tras la administración IV de CPX-POM con una vida media de eliminación aparente inferior a una hora. El perfil de concentración plasmática de ciclopirox con respecto al tiempo resultante de la administración SQ de CPX-POM fue drásticamente diferente del del CPX-POM IV. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras la administración oral de la sal de olamina de ciclopirox fueron bastante bajas comparativamente. En la Tabla 6A se resumen los parámetros farmacocinéticos resultantes del ciclopirox en el plasma.
El CPX-POM SQ demostró una excelente biodisponibilidad en comparación con el CPX-POM IV el 80%. El CPX-POM administrado por vía IV y SQ dio lugar a concentraciones de ciclopirox en el plasma que superaban en varias veces el valor CI50 in vitro de 2 pM. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras la administración oral de la sal de olamina fueron bastante bajas. La biodisponibilidad absoluta de esta forma salina administrada oralmente fue del 4,6% en comparación con el CPX-POM IV. No se detectó CPX-POM en ninguna muestra de sangre u orina recogida en este estudio. La Figura 13B muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 20 mg/kg de CPX-POM IV, 30 mg/kg de CPX-POM SQ y 30 mg/kg de CPX-O a seis ratas por grupo de tratamiento.
Tabla 6A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma en ratas macho Sprague-Dawley tras dosis únicas de CPX-POM IV, CPX-POM SQ, y CPX-O oral
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a N=6 ratas por tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c C0 corresponde al valor de intersección con el eje y derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
En la Tabla 7A a continuación se resumen los parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina obtenidos tras la administración de 20 mg/kg de CPX-POM IV, 30 mg/kg de CPX-POM SQ y 30 mg/kg de CPX-O oral. La administración IV y SQ de CPX-POM dio lugar a concentraciones mayores de ciclopirox en la orina en comparación con el CPX-O administrado oralmente. Las dosis IV y SQ de CPX-POM fueron bien toleradas en estos animales, y dieron lugar a concentraciones de ciclopirox en la orina que superaban en varias veces el valor CI50 in vitro. El CPX-POM SQ da lugar a una exposición significativa sistémica y del tracto urinario al ciclopirox.
Tabla 7A. Parámetros farmacocinéticos de CPXc y CPX-Gc en la orina en ratas macho Sprague-Dawley tras dosis únicas de CPX-POM IV, CPX-POM SQ y CPX-O oral
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a N=4 ratas que recibieron los tres tratamientos en forma completa, no aleatorizada y cruzada
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c Ciclopirox (CPX); glucurónido de ciclopirox (CPX-G)
Farmacocinética del profármaco de ciclopirox-POM en perros
Estudio 10953. Biodisponibilidad del ciclopirox tras la administración intravenosa de profármaco de ciclopirox-POM en perros
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en el plasma y la orina se caracterizó en la rata tras la administración IV de 10 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O) y profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM). Se usó ciclopirox olamina intravenosa como referencia en la caracterización de la biodisponibilidad de ciclopirox tras la administración IV del profármaco de ciclopirox-POM en esta especie. Dada la baja biodisponibilidad oral del CPX observada en el ratón tras la administración de CPX-O y CPX-POM, en este estudio no se investigó esta vía de administración.
La Figura 14 ilustra los perfiles de concentración plasmática media de CPX con respecto al tiempo tras la administración IV de 3 mg/kg de CPX-POM y CPX-O a cuatro perros beagle macho.
Tras la administración IV de CPX-POM, la disponibilidad sistémica de CPX fue del 85%. Se detectaron concentraciones de CPX-POM en plasma en muy pocas muestras de sangre recogidas pocos minutos después de la administración de la inyección IV; sin embargo, no se detectó el profármaco en la mayoría de las muestras de plasma objeto de ensayo. No se detectó CPX-POM en ninguna muestra de orina. La biodisponibilidad absoluta del agente activo ciclopirox tras la administración IV de CPX-POM, fue excelente, con un valor del 85% con CPX-O IV como referencia. La dosis IV de 3 mg/kg del profármaco logró una concentración inicial media de ciclopirox en el plasma de 2.907 ng/ml, que es equivalente a 14 pM. Dado el valor de CI50 in vitro de 2 pM (414 ng/ml) en líneas celulares de cáncer de vejiga sin invasión muscular y con invasión muscular, el valor Cmax medio observado es aproximadamente siete veces mayor que la CI50. La Figura 14 muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 3 mg/kg IV de CPX-POM y CPX-O a cuatro perros beagle macho.
Tabla 8A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma en perros beagle macho tras dosis únicas IV de CPX-POM y CPX-O
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a N=4 perros que recibieron ambos tratamientos en un diseño de estudio completo cruzado. Los animales fueron pesados antes de cada tratamiento para determinar el volumen de la dosis de administración; de ahí las ligeras diferencias en pesos corporales para cada tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c C0 corresponde al valor de intersección con el eje y derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
En la Tabla 9A a continuación se resumen los parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina obtenidos en perros tras la administración IV de 3 mg/kg de CPX-O y CPX-POM. Tras una única dosis IV de CPX-POM y CPX-O, se excreta menos del 1 % de la dosis como CPX. Sin embargo, las concentraciones de CPX en la orina superaron el valor CI50 in vitro de 2 pM a dosis IV de 3 mg/kg tanto de CPX-POM como de CPX-O. El metabolito glucurónido de ciclopirox inactivo representó la especie principal excretada en la orina.
Tabla 9A. Parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina en perros beagle macho tras dosis únicas IV de CPX-POM y CPX-O
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a N=4 perros que recibieron ambos tratamientos en un diseño de estudio completo cruzado. Los animales fueron pesados antes de cada tratamiento para determinar el volumen de la dosis de administración; de ahí las ligeras diferencias en pesos corporales para cada tratamiento
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
Estudio 11429. Biodisponibilidad de ciclopirox tras la administración subcutánea de profármaco de ciclopirox-POM y de ciclopirox olamina oral en perros
La farmacocinética del ciclopirox (CPX) en el plasma y la orina se caracterizó en el perro tras la administración IV de 3 mg/kg de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM), la administración subcutánea (SQ) de 9 mg/kg de CPX-POM, y la administración oral de 9 mg/kg de ciclopirox olamina (CPX-O). Se usó CPX-POM intravenoso como referencia en la caracterización de la biodisponibilidad de ciclopirox tras la administración SQ del profármaco de ciclopirox-POM en esta especie. Se determinó la biodisponibilidad oral de CPX tras la administración de la sal de olamina para establecer un “puente” farmacocinético entre el CPX-POM inyectable y los datos preclínicos de seguridad generados por Hoechst AG mediante estudios para el registro realizados en apoyo del producto antifúngico tópico de olamina.
En la Figura 15 se ilustran los perfiles resultantes de concentración plasmática media de ciclopirox con respecto al tiempo tras la administración IV y SQ de CPX-POM, así como de ciclopirox olamina administrada oralmente a perros. De forma coherente con el Estudio 10953, las concentraciones de ciclopirox en el plasma decayeron rápidamente tras la administración IV de CPX-POM con una vida media de eliminación aparente inferior a una hora. El perfil de concentración plasmática de ciclopirox con respecto al tiempo resultante de la administración SQ de CPX-POM fue drásticamente diferente del del CPX-POM IV. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras la administración oral de la sal de olamina de ciclopirox fueron bastante bajas comparativamente. En la Tabla 10A se resumen los parámetros farmacocinéticos resultantes del ciclopirox en el plasma.
El CPX-POM SQ demostró una excelente biodisponibilidad en comparación con el CPX-POM IV el 106%. El CPX-POM administrado por vía IV y SQ dio lugar a concentraciones de ciclopirox en el plasma que superaban en varias veces el valor CI50 in vitro de 2 pM. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras la administración oral de la sal de olamina fueron bastante bajas. La biodisponibilidad absoluta de esta forma salina administrada oralmente fue del 17,4% en comparación con el CPX-POM IV. No se detectó CPX-POM en ninguna muestra de sangre u orina recogida en este estudio. La Figura 15 muestra los perfiles rectilíneos de concentración plasmática media de ciclopirox (CPX) con respecto al tiempo tras la administración de 3 mg/kg de CPX-POM IV, 9 mg/kg de CPX-POM SQ y 9 mg/kg de CPX-O oral a cuatro perros beagle macho.
Tab I a 10A. Parámetros farmacocinéticos de CPX en plasma en perros beagle macho tras dosis únicas de CPX-POM IV, CPX-POM SQ y CPX-O oral
Figure imgf000026_0001
a N=4 perros que recibieron los tres tratamientos de forma no aleatorizada completa cruzada
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c C0 corresponde al valor de intersección con el eje y derivado del análisis de datos farmacocinéticos no paramétricos
d La biodisponibilidad absoluta, determinada usando el AUC0 In dada de 28%, 39% y 29% de AUC0 I“ , comprendía el AUC extrapolada
En la Tabla 11A a continuación se resumen los parámetros farmacocinéticos del CPX en la orina obtenidos en perros tras la administración de 3 mg/kg de CPX-pOm IV, 9 mg/kg de CPX-POM SQ y 9 mg/kg de CPX-O oral. La administración IV y SQ de CPX-POM dio lugar a concentraciones comparativamente mayores de ciclopirox en la orina (dosis ajustada) en comparación con el CPX-O administrado oralmente. Las dosis IV y SQ de CPX-POM fueron bien toleradas en estos animales, y dieron lugar a concentraciones de ciclopirox en la orina que superaban en varias veces el valor CI50 in vitro . El CpX-POM SQ da lugar a una significativa exposición sistémica y del tracto urinario al ciclopirox.
Tabla 11A. Parámetros farmacocinéticos de CPXd y CPX-Gd en la orina en perros beagle macho tras dosis únicas de CPX-POM IV, CPX-POM SQ, y CPX-O oral
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a N=4 perros que recibieron los tres tratamientos de forma no aleatorizada completa cruzada
b Dosis de ácido libre de ciclopirox administrada; la formulación inyectable disódica de CPX-POM contenía 5 mg/ml de CPX en 25mM de fosfato con pH 7 con 50mM de Captisol®
c N=3
d Ciclopirox (CPX); glucurónido de ciclopirox (CPX-G)
Estabilidad in vitro del glucurónido de ciclopirox en la orina de pacientes con cáncer de vejiga
El glucurónido de ciclopirox (CPX-G) es el metabolito urinario principal observado en ratones, ratas, perros y seres humanos tras la administración de CPX-POM, así como la sal de olamina de ciclopirox. El CPX-G no es activo como agente contra el cáncer de vejiga. El CPX-G es metabolizado por la p-glucuronidasa para formar ciclopirox activo, reactivando, de hecho, el agente activo contra el cáncer de vejiga. Basándose en los datos de excreción humana [Kellner et al, Arzneimittel-Forschung. 31 (8A):1337-1353], así como en la evidencia de que los pacientes con cáncer de vejiga tienen una mayor actividad de glucuronidasa en la orina [Paigen, K., Peterson, J., Paigen B. (1984) Role of urinary p-glucuronidase activity in human bladder cancer. Cancer Res 44:3620-3623], los inventores realizaron estudios in vitro de metabolismo para caracterizar la estabilidad del glucurónido de ciclopirox en la orina (a una concentración de 150 gM) obtenida de pacientes con cáncer de vejiga en comparación con orina de control recogida de voluntarios sanos.
En el transcurso de una incubación de seis horas de CPX-G en orina combinada de pacientes obtenida de seis pacientes con NMIBC, la hidrólisis de 150 gM de CPX-G en la orina de pacientes con cáncer de vejiga dio lugar a la formación de 7,9 gM de ciclopirox, una tasa de formación del 5%. El grado de formación de ciclopirox fue aproximadamente 11,6 veces mayor en la orina de pacientes con cáncer de vejiga que las incubaciones de orina con muestras obtenidas de voluntarios sanos. La tasa de hidrólisis de glucurónido de ciclopirox mediada por la pglucuronidasa varió de 5,6 a 11,5 veces mayor en la orina combinada de pacientes con cáncer de vejiga que en la orina de control. Las actividades de la p-glucuronidasa en la orina fueron de 69,5 U/ml y 1,39 U/ml en la orina obtenida de pacientes con NMIBC y voluntarios sanos, respectivamente (actividad enzimática 118 veces mayor en la orina de pacientes con cáncer de vejiga). La hidrólisis selectiva del CPX-G en la orina de pacientes con cáncer de vejiga da lugar a la reactivación del agente activo anticanceroso ciclopirox.
Predicción de las concentraciones de ciclopirox en la orina humana tras la administración IV de profármaco de ciclopirox-POM
La ciclopirox olamina (CPX-O), administrada oralmente a seres humanos, es eliminada rápida y completamente por la orina, con un 87% de la dosis excretada en menos de 6 horas, y aproximadamente el 95% de la dosis excretada en menos de 12 horas de la administración del fármaco [Kellner et al, Arzneimittel-Forschung. 31 (8A):1337-1353]. Del 95% de la dosis recuperada en la orina, el 83% se identificó como ciclopirox (4%) y glucurónido de ciclopirox (79%). El glucurónido de CPX no posee actividad in vitro.
Los inventores simularon los datos de concentración de ciclopirox (CPX) en la orina con respecto al tiempo en función de las siguientes premisas: una dosis intravenosa de 32 mg/m2 de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM) será bien tolerada (obsérvese que 80 mg/m2 de CPX-O oral se toleraron bien cuando se administraron una vez por día); el 4% de una dosis intravenosa de 32 mg/m2 CPX-POM se excretará como ciclopirox, de forma similar al porcentaje de CPX excretado en la orina tras la administración de una única dosis oral de 10 mg de C14 CPX-O; el 5% del CPX-G se hidrolizará convirtiéndose en CPX en la orina de pacientes con cáncer de vejiga; y las tasas de producción de orina de pacientes a los que se ha diagnosticado por vez primera cáncer de vejiga será de 1 ml/h/kg. La Figura 18 muestra la formación de ciclopirox a partir del profármaco en la orina del paciente y en la orina de control. Véanse también las Figuras 19-20.
La administración sistémica de profármaco de ciclopirox-POM suministra selectivamente CPX a todo el tracto urinario
En función de estas premisas, los inventores predicen que la administración IV y SQ de profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM) dará lugar a concentraciones de CPX en la orina que superan en varias veces los valores de CI50 in vitro en las líneas celulares de cáncer de vejiga sin invasión muscular.
Se prefieren las vías inyectables de administración para el CPX-POM a la administración oral para evitar la toxicidad gastrointestinal, así como la deficiente biodisponibilidad oral. Se ha descubierto que la ciclopirox olamina (CPX-O) oral administrada cuatro veces al día da lugar a una toxicidad gastrointestinal limitante de la dosis (Minden et al, Am J Hematol 89(4):363-368, 2014).
Se ha realizado estudios in vitro para entender el papel del ciclopirox como agente terapéutico válido y novedoso para el tratamiento del NMIBC y del MIBC. Se estudiaron las líneas celulares humanas 253JBV y T24 plenamente caracterizadas de NMIBC y MIBC, respectivamente. Dado que los caldos de cultivo celular carecen de las enzimas (fosfatasas) necesarias para metabolizar el CPX-POM formando ciclopirox (CPX), se realizaron estudios de mecanismos de acción exponiendo las líneas celulares de cáncer de vejiga a CPX añadiendo CPX-O a caldos de cultivo celular.
Para determinar el efecto del CPX sobre la proliferación celular del cáncer de vejiga en células T24 (MIBC) y 253-JBV (NMIBC), se sembraron 5.000 células por pocillo en placas de 96 pocillos y se las dejó crecer durante la noche. Las células se trataron entonces con dosis crecientes de CPX en caldo RPMI que contenía un 10% de suero fetal bovino (FBS, por sus siglas en inglés). El análisis de la proliferación celular después del periodo de tratamiento se estimó mediante el ensayo de hexosaminidasa. Sucintamente, se retiró el caldo y se añadió una solución sustrato de hexosaminidasa en tampón citrato con pH 5 (7,5 mM), p-nitrofenol-N-acetil-beta-D-glucosaminidasa (Sigma Aldrich) a razón de 75 gl por pocillo. La placa fue incubada a 37°C con una humedad del 100% durante 30 minutos. La reacción se detuvo con 112,5 gl de glicina 50 mM que contenía 5 mM de EDTA (pH 10,4). La absorbancia se midió a 405 nm. Se realizaron experimentos a n = 6, y luego se repitieron al menos tres veces. Los datos se analizaron como porcentaje de control, tratándose los pocillos de control con cantidades equivalentes de DMSO solo. Para los cálculos de CI50, se generó un gráfico relacionando la concentración del fármaco y la actividad de la hexosaminidasa y los datos se ajustaron ya fuera lineal o exponencialmente. Se usó el mejor ajuste para un procesamiento ulterior de los datos. Se obtuvo la CI50 determinando la concentración de compuestos que daba lugar al 50% de muerte celular después de 48 horas de tratamiento.
El ciclopirox demuestra actividad anticancerosa en NMIBC y MIBC:
Se descubrió que el ciclopirox (CPX) inhibe la proliferación celular del cáncer de vejiga. Las Figuras 9, 10 y 11 muestran que el CPX inhibe la proliferación de líneas celulares de cáncer de vejiga. Las células se incubaron con la dosis indicada del compuesto hasta 72 horas. El tratamiento con CPX dio lugar a una disminución significativa dependiente de la dosis y el tiempo en la proliferación celular en células tanto T24 como 253JBV. Los resultados de este experimento, según se ilustra en las Figuras 9 y 11, demuestran que el CPX suprimió significativamente la proliferación de ambas líneas celulares en un modo dependiente de la dosis y el tiempo. Este efecto fue observado antes de las 24 horas, lo que se mantuvo durante las 48 horas siguientes. Se determinó que los valores de CI50 para el compuesto eran 2 y 4 gM a las 48 horas para las células 253JBV y T24, respectivamente.
El ciclopirox inhibe el crecimiento del cáncer de vejiga en sistemas modélicas bidimensionales y tridimensionales:
A continuación, los inventores determinaron el efecto a largo plazo del ciclopirox (CPX) sobre las células de cáncer de vejiga usando el ensayo de clonogenicidad. Para este ensayo, se sembraron placas de 6 pocillos con 500 células viables y se las dejó crecer durante la noche. A continuación, las células fueron incubadas en presencia o ausencia de diversas concentraciones (1 y 5 gM) de CPX durante 48 horas. A continuación, se retiró el caldo que contenía CPX, y las células se lavaron en tampón fosfato salino (PBS, por sus siglas en inglés) y se incubaron durante 10 días adicionales en caldo completo. Cada tratamiento se realizó por triplicado. Las colonias se lavaron con PBS y se fijaron en formol al 10% durante 10 minutos a temperatura ambiente y luego se lavaron con PBS, seguido por tinción con violeta de genciana. Las colonias se compararon con las células no tratadas.
Según se ilustra en las Figuras 19-20, el CPX inhibió el número y el tamaño de las colonias en comparación con el control, sugiriendo que la incubación a corto plazo de las células con el compuesto tenía efectos inhibitorios a largo plazo sobre la viabilidad de las células. Las Figuras 19-20 muestran que el CPX inhibe el crecimiento de las células del cáncer de vejiga. Se pusieron células T24 y 253-JBV de cáncer de vejiga en placas y se las trató con concentraciones CI50 de CPX (dosis indicada) durante 48 horas. Se reemplazó el caldo nuevo y se dejó que crecieran durante 10 días. Las colonias se tincionaron con violeta de genciana y se compararon con las células no tratadas.
El ciclopirox inhibe los esferoides del cáncer de vejiga:
Estudios recientes han demostrado la heterogeneidad dentro de un tumor, y que dentro del tumor se presenta una pequeña población de células madre con la capacidad de autorrenovarse y tienen la capacidad de generar descendientes diferenciados. El ensayo de esferoides, que a veces se denomina también ensayo tridimensional, fue desarrollado como un método para propagar células madre epiteliales in vitro, y es ahora un indicador sustituto estándar para la actividad de células madre. El ensayo (denominado en este caso ensayo de esferoides de vejiga) se basa en la hipótesis de que las células individuales no diferenciadas presentes en los cánceres de vejiga sobrevivirán en el cultivo en suspensión, mientras que las otras células morirán por anoikis. Por lo tanto, los inventores caracterizaron el efecto del ciclopirox (CPX) en el ensayo de esferoides de vejiga. Aquí, se colocan células de cáncer en placas de adherencia ultrabaja y se cree que los esferoides resultantes representan desarrollos a partir de las células madre.
Para la formación de esferoides, se cultivaron células en RPMI 1640 (Mediatech) complementado con 20 ng/ml de bFGF (Invitrogen), 10 ml por 500 ml de suplemento 50X B27 (Invitrogen), EGF 20 ng/ml (Invitrogen) y solución antibiótica y antimicótica. Se sembraron células a densidades bajas (5000 células/ml) en placas de baja adherencia de 6 pocillos. Las células se trataron con concentraciones crecientes de CPX (0,5x, 1x y 2x de CI50 calculada a partir del ensayo de proliferación celular: 2 pM para 253JBV y 4 pM para T24). Después de 7 días se fotografiaron los esferoides (generación I). Se recogieron esferoides de control y esferoides tratados con CPX (CI501 x), se tripsinizaron y se volvieron a colocar en placas para el desarrollo de esferoides secundarios (generación II), seguido por el desarrollo de esferoides terciarios (generación III).
La Figura 21 muestra que el CPX inhibe los esferoides del cáncer de vejiga. Se sembraron células en placas de adherencia ultrabaja y fueron tratadas con CPX e incubadas con la dosis indicada del compuesto. El tratamiento con CPX dio lugar a un aumento significativo en el tamaño y el número de esferoides formados por las células de cáncer de vejiga tanto T24 como 253-JBV (generación I). El tratamiento con CPX también redujo significativamente el desarrollo de esferoides secundarios y terciarios. Los resultados de este experimento, mostrados en la Figura 21, demuestran que hubo una reducción significativa en el tamaño y el número de esferoides de las células T24 y 253JBV de cáncer de vejiga cuando las células se trataron con CPX. Los desarrollos de esferoides secundarios y terciarios fueron inhibidos significativamente por el tratamiento con CPX. Estos datos sugieren que el compuesto afecta a las células madre cancerosas dentro del cáncer de vejiga. Véase también la Figura 10.
El ciclopirox detiene las células en la fase S del ciclo celular:
Se realizaron estudios analíticos del ciclo celular basados en la citometría de flujo para determinar el efecto del ciclopirox (CPX) en la progresión del ciclo celular en células T24 (datos no mostrados). Los estudios demostraron que el CPX induce la detención del ciclo celular en la fase S (datos no mostrados). A concentraciones CI50 1 x y CI502x, el CPX detiene las células en la fase G0/G1. Las células se trataron con CPX y se llevó a cabo un análisis basado en un citómetro de flujo. El tratamiento con CPX aumentó significativamente el porcentaje de las células que eran detenidas en la fase S y la fase G0/G1.
Se determinó que el CPX induce apoptosis. A continuación, los inventores determinaron si los compuestos podían inducir la muerte celular a través del sistema apoptótico. Para esto trataron células T24 de cáncer de vejiga con CPX (4 pM) y marcaron las células con anexina V conjugada a isotiocianato de fluoresceína (FITC, por sus siglas en inglés) para detectar células apoptóticas. Los resultados se ilustran en la Figura 22, sugiriendo que el tratamiento con CPX tenía niveles elevados de células FITC+, lo que implicaba que el CPX inducía la muerte celular. La Figura 22 muestra que el CPX induce la muerte celular en líneas celulares de cáncer de vejiga. Se incubaron células con la dosis indicada de compuesto hasta 48 horas. El tratamiento con CPX dio lugar a un aumento significativo en la muerte celular en células T24, como resulta evidente por el aumento de células marcadas con anexina V-FITC.
El ciclopirox afecta a los sistemas de señalización de las células madre cancerosas:
Los inventores llevaron a cabo análisis matriciales de RT-PCR como estudio preliminar para identificar los sistemas afectados por el ciclopirox (CPX). Se llevó a cabo un análisis de expresión usando matrices de PCR RT2 Profiler™ (SA Biosciences, Frederick, Maryland, EE. UU.) según las instrucciones del fabricante. Se usó la matriz (n° de cat. PAHS-014ZA) de reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) del buscador del sistema humano de transducción de señales. El ARN total aislado de células T24 usando reactivo TRIZOL fue transcrito de forma inversa con transcriptasa inversa Superscript II en presencia de cebadores hexanucleótidos aleatorios (todos de Invitrogen, Carlsbad, California). Se mezcló ADN complementario (2 gg) con 1.275 gl de RT2 SYBR Green qPCR Master Mix (PA-010; SA Biosciences) para formar un volumen total de 2.550 gL. Cada pocillo recibió 25 gL de esta mezcla. Se llevó a cabo una PCR cuantitativa (qPCR, por sus siglas en inglés) en una máquina Bio-Rad CFX siguiendo los protocolos de detección recomendados por SA Biosciences. Los cambios en la expresión del ARNm se expresaron como un factor multiplicativo de cambio con respecto al control.
Las Figuras 23A-23C muestran que el CPX inhibe los sistemas de señalización de las células madre cancerosas (CSC, por sus siglas en inglés). El tratamiento con CPX redujo significativamente la expresión ARNm de Notch y sus proteínas de señalización aguas abajo. Además, el CPX inhibió la expresión de los genes implicados en los sistemas de señalización Wnt y Hedgehog en células T24. El tratamiento con CPX redujo significativamente la expresión de los genes (en el ámbito del ARNm) implicados en los sistemas de señalización de las CSC, tales como Notch, Wnt y Hedgehog, según se muestra en las Figuras 23A-23C.
El ciclopirox afecta al sistema de señalización Notch:
Los inventores llevaron a cabo análisis matriciales de RT-PCR para identificar los sistemas afectados por el ciclopirox (CPX). Sus estudios preliminares identificaron que el tratamiento con CPX afectaba el sistema de señalización Notch. La señalización Notch se inicia cuando un ligando interactúa con un receptor transmembranal notch en células adyacentes. Esto inicia la liberación proteolítica del dominio intracelular Notch (NICD, por sus siglas en inglés) mediada por la Y-secretasa, el cual, a su vez, se transloca al núcleo de las células, interactúa con su cofactor transcripcional CBF1/RBPJ y transactiva genes diana, llevando a una proliferación y una metástasis mayores. Se ha demostrado que la señalización Notch desempeña un papel fundamental en la autorrenovación de las células madre cancerosas, y los estudios anteriores han sugerido que la inhibición del sistema notch podría ser un buen mecanismo para la terapia basada en células madre.
Estudios anteriores han demostrado que los niveles elevados de actividad Notch1 están asociados con la progresión tumoral del cáncer de vejiga, y que el Notch1 puede ser una diana terapéutica potencial para el tratamiento del cáncer de vejiga. Se realizaron estudios por inmunoelectrotransferencia para detectar el efecto del CPX en la expresión de las proteínas implicadas en el sistema de señalización Notch. Se sometió a lisados celulares a electroforesis en gel de poliacrilamida y fueron transferidos a membranas de difluoruro de polivinilideno Immobilon (Millipore, Bedford, Massachusetts, EE. UU.). Se adquirieron anticuerpos en Cell Signaling Technology (Beverly, Massachusetts, EE. UU.), Abcam Inc. (Cambridge, Massachusetts, EE. UU.) y Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, California, EE. UU.) y se detectaron proteínas específicas mediante el sistema mejorado de quimioluminiscencia (GE Healthcare, Piscataway, Nueva Jersey, EE. UU.). El tratamiento con CPX en líneas celulares de cáncer de vejiga inhibió significativamente la expresión de proteínas del complejo Y-secretasa tales como Presenilina1, Nicastrina, APH-1 y PEN-2, dando lugar con ello a un menor dominio intracelular Notch activado escindido (NICD1). El CPX también redujo el Jagged1, ligando del receptor Notch. Además, también se inhibieron significativamente los niveles de dianas aguas abajo del sistema, incluyendo Hes1 y Ciclina-D1, tras el tratamiento con CPX. Estos datos sugieren que el CPX inhibe significativamente las proteínas del sistema de señalización intracelular Notch, inhibiendo con ello el crecimiento de las CSC. Véanse las Figuras 16-17.
Las Figuras 16-17 muestran que el CPX inhibe la señalización Notch1 y las proteínas del complejo Y-secretasa. El tratamiento con CPX redujo significativamente la activación de Notch1 y su ligando Jagged1. También reduce las proteínas diana Hes-1 y ciclina D1 aguas abajo. Además, el CPX inhibió la expresión de las proteínas Presenilina1, Nicastrina, APH-1 y PEN-2 del complejo Y-secretasa en células T24. A la derecha se muestra el sistema de señalización Notch.
El ciclopirox inhibe el crecimiento celular a través de la inactivación del complejo Y-secretasa:
Los inventores determinaron si la expresión ectópica del NICD invertía la inhibición de la proliferación celular mediada por ciclopirox (CPX). Para este estudio, se transfectaron células T24 con el plásmido EF.hICN1.CMV.GFP que codifica el dominio intracelular Notch-1 (NICD) o el vector vacío EF.v-CMV.GFP (Addgene Inc.) y subsiguientemente se trataron con CPX (4 gM). La proliferación celular se detectó usando el ensayo de hexoaminidasa. Los análisis de inmunoelectrotransferencia demostraron una mayor expresión de Notch-1 tras la expresión ectópica del NICD en líneas celulares T24. La expresión ectópica del NICD invirtió la inhibición de la proliferación celular mediada por CPX. Estos datos sugieren que el CPX inhibe el complejo Y-secretasa, afectando con ello a la señalización Notch.
La expresión de Notch-1 está asociada con la progresión tumoral, y está implicada en la carcinogénesis y la progresión del carcinoma invasivo de vejiga de células transicionales (J Clin Oncol 30, 2012 (supl. 5; res. 299)). Se ha sugerido que el Notch-1 representa una diana terapéutica para el tratamiento del cáncer de vejiga (Oncogene (2008) 27, 5132­ 5137). La señalización Notch-1 también puede representar un marcador diagnóstico potencial del paso de NMIBC a MIBC (J Clin Oncol 30, 2012 (supl. 5; res. 299)). Los datos generados en el laboratorio de los inventores sugieren que el CPX inhibe el crecimiento del cáncer de vejiga in vitro suprimiendo el sistema de señalización Notch-1.
La Figura 24 muestra que el CPX inhibe el crecimiento celular a través de la inactivación de las proteínas del complejo Y-secretasa. Se trató con CPX a células que expresaban el NICD y posteriormente se midió su proliferación. La expresión ectópica del NICD rescató la inhibición de la proliferación celular mediada por CPX.
El profármaco de ciclopirox-POM (CPX-POM) o el glucurónido de ciclopirox (CPX-G) muestra una actividad cancerosa mucho menor in vitro:
Los inventores determinaron y compararon el efecto del CPX con CPX-POM y glucurónido de CPX in vitro realizando un ensayo de proliferación. Para determinar el efecto del CPX, del CPX-POM y del glucurónido de CPX sobre la proliferación celular del cáncer de vejiga en las células T24 (MIBC) y 253-JBV (NMIBC), se sembraron 5.000 células por pocillo en placas de 96 pocillos y se las dejó crecer durante la noche. A continuación, las células se trataron con dosis crecientes de CPX, CPX-POM y glucurónido de CPX en caldo RPMI que contenía un 10% FBS. El análisis de la proliferación celular después del periodo de tratamiento se estimó mediante el ensayo de hexosaminidasa. Sucintamente, se retiró el caldo y se añadió una solución sustrato de hexosaminidasa en tampón citrato con pH 5 (7,5 mM), p-nitrofenol-N-acetil-beta-D-glucosaminidasa (Sigma Aldrich) a razón de 75 gl por pocillo. La placa fue incubada a 37°C con una humedad del 100% durante 30 minutos. La reacción se detuvo con 112,5 gl de glicina 50 mM que contenía 5 mM de EDTA (pH 10,4). La absorbancia se midió a 405 nm.
Se realizaron experimentos a n = 6, y luego se repitieron al menos tres veces. Los datos se analizaron como porcentaje de control, tratándose los pocillos de control con cantidades equivalentes de DMSO solo. Para los cálculos de CI50, se generó un gráfico relacionando la concentración del fármaco y la actividad de la hexosaminidasa y los datos se ajustaron ya fuera lineal o exponencialmente. Se obtuvo la CI50 determinando la concentración de compuestos que daba lugar al 50% de muerte celular después de 48 horas de tratamiento.
Los resultados de este experimento demuestran que el CPX suprimió significativamente la proliferación de ambas líneas celulares (T24 y 253JBV) en un modo dependiente de la dosis y el tiempo (CI50=>4 gM y 3 gM, respectivamente, en células T24 y 253JBV), mientras que el CPX-POM muestra un efecto mucho menor sobre la proliferación (CI50=>45 gM y 48 gM, respectivamente, en células T24 y 253JBV) y el glucurónido de CPX no mostró en absoluto ningún efecto significativo hasta las 72 horas de tratamiento en ambos tipos de células. En el momento de la redacción de este compendio, siguen en curso experimentos que evalúan la estabilidad química del CPX-POM en caldos de cultivo celular para evaluar si el CPX-POm forma CPX in vitro.
La concentración prevista de CPX en la orina humana muestra suficiente actividad anticancerosa:
Los inventores determinaron si la concentración prevista de CPX en la orina humana es suficiente para dar como resultado una actividad anticancerosa. Los inventores trataron las células con CPX en presencia de orina normal (obtenida del repositorio de muestras biológicas del Centro Médico de la Universidad de Kansas (KUMC, por sus siglas en inglés)) para simular el entorno de la vejiga. Entretanto, se creó una curva de dosis porcentual para determinar el porcentaje de orina que puede ser usado para estudios ulteriores que no sea tóxico para las células (Figura 25A). La Figura 25A muestra el efecto de la orina normal sobre las células. Se incubaron células 253JBV con el porcentaje indicado de orina normal hasta 72 horas. Se ha descubierto que una concentración de orina inferior al 20% no es tóxica para las células.
Las células 253JBV se incubaron con diversos porcentajes de orina en caldo RPMI completo hasta 12 horas. Después de 12 horas, el caldo se sustituyó con caldo RPMI al 100% completo. Se dejó que las células se desarrollaran hasta 72 horas. Se llevó a cabo un ensayo de hexosaminidasa para determinar el efecto de la orina en diferentes instantes (24 horas, 48 horas y 72 horas). Se ha determinado que puede usarse un 20% de orina normal para estudios ulteriores, ya que se ha descubierto que no es tóxico para las células para el periodo de tiempo dado (12 horas).
Para determinar si la concentración prevista de CPX en la orina humana es suficiente para dar como resultado una actividad anticancerosa, se incubaron células NMIBC con CPX en orina normal (20% de orina normal en caldo RPMI completo), en la que las células están expuestas a CPX 50 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 25 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 12,5 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 6,25 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 3,125 uM durante dos horas, y, por último, seguidas por la exposición a CPX 1,5625 uM durante dos horas. El efecto del CPX se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa más allá de las 12 horas de concentración variable de CPX (24 horas, 48 horas y 72 horas). El efecto del CPX en la orina normal se compara con el efecto del CPX en caldo completo.
Los resultados de este experimento, según se muestra en la Figura 25B, demuestran que la concentración prevista de CPX en la orina humana es suficiente para inhibir la proliferación de las células. Se ha descubierto que el CPX presenta su efecto antiproliferativo más allá de las 12 horas y que el efecto continúa hasta 72 horas.
Los inventores determinaron a continuación el efecto del CPX en orina normal sobre células T24 y 253JBV en un tratamiento diario hasta 72 horas (tratamiento de 3 días). La idea detrás de este experimento es ver el efecto de la concentración prevista del CPX en la orina humana sobre las células de cáncer de vejiga, dado que la vejiga del paciente estará expuesta todos los días a la concentración prevista de CPX. Se usaron tres conjuntos de placas, de una placa cada uno para el tratamiento de un día, para el tratamiento de dos días y para el tratamiento de tres días de CPX (50-1,5625 uM). Se incubaron células T24 y 253JBV con CPX en orina normal (20% de orina normal en caldo RPMI completo). En el tratamiento de un día, las células están expuestas a CPX 50 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 25 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 12,5 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 6,25 uM durante dos horas, seguidas por la exposición a CPX 3,125 uM durante dos horas, y, por último, seguidas por la exposición a CPX 1,5625 uM durante dos horas. El efecto del CPX se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa más allá de las 12 horas de concentración variable de CPX (24 horas, 48 horas y 72 horas). En el tratamiento de dos días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante dos días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en los instantes de 48 horas y 72 horas. En el tratamiento de tres días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante tres días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en el instante de 72 horas.
La Figura 25C muestra que el tratamiento diario de células T24 con la concentración prevista de CPX en la orina humana presenta una actividad anticancerosa significativa. Las células T24 se incubaron con CPX en orina normal (20% de orina normal en caldo RPMI completo). En el tratamiento de un día, las células están expuestas a una concentración variable de CPX (50 uM-1,5625 uM) durante 12 horas. El efecto del CPX se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa más allá de las 12 horas de concentración variable de CPX (24 horas, 48 horas y 72 horas). En el tratamiento de dos días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante dos días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en los instantes de 48 horas y 72 horas. En el tratamiento de tres días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante tres días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en el instante de 72 horas. Las células T24 incubadas con CPX mostraron una reducción dependiente del tiempo en la proliferación, presentando las células tratadas durante 3 días la máxima inhibición de la proliferación (20%).
La Figura 25D muestra que el tratamiento diario de células 253JBV con la concentración prevista de CPX en la orina humana presenta una actividad anticancerosa significativa. Las células 253JBV se incubaron con CPX en orina normal (20% de orina normal en caldo RPMI completo). En el tratamiento de un día, las células están expuestas a una concentración variable de CPX (50 uM-1,5625 uM) durante 12 horas. El efecto del CPX se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa más allá de las 12 horas de concentración variable de CPX (24 horas, 48 horas y 72 horas). En el tratamiento de dos días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante dos días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en los instantes de 48 horas y 72 horas. En el tratamiento de tres días, las células están expuestas a 50 uM-1,5625 uM durante tres días y el efecto se determinó mediante el ensayo de hexosaminidasa en el instante de 72 horas. Las células 253JBV incubadas con CPX mostraron una reducción dependiente del tiempo en la proliferación, presentando las células tratadas durante 3 días la máxima inhibición de la proliferación (35%).
Los resultados de este experimento, según se muestra en las Figuras 25C-25D, demuestran que la concentración prevista de CPX en la orina humana presenta una disminución en la proliferación de las células dependiente del tiempo. Tanto en la línea celular T24 como en la 253JBV, el tratamiento con CPX durante 3 días muestra la inhibición máxima de la proliferación del 20% y el 35%, respectivamente.
Las Figuras 26A-26B incluyen ambas un gráfico que muestra que el CPX-POM reduce su peso en vejiga de tumores de vejiga inducidos por BBN. Tras cuatro semanas de dosis IP de CPX-POM una vez al día de 100 mg/kg y 200 mg/kg, los pesos en vejiga (como medida del volumen del tumor) fueron significativamente menores (p=0,013) en animales tratados con CPX-POM en comparación con los controles. No hubo ninguna diferencia significativa en los pesos en vejiga entre los dos grupos de tratamiento con CPX-POM. A los animales a los que se les dio BBN solo mostraron un aumento en el peso en vejiga, debido a la inducción y el crecimiento del tumor, en comparación con la vejiga sana de control. El tratamiento con CPX-POM redujo significativamente el peso en vejiga en ambas dosis de tratamiento, a 100 y 200 mg/kg.
Hay una fuerte correlación entre el tratamiento con CPX-POM y el estadio tumoral. Los tejidos de vejiga obtenidos de animales de control (BBN solo) contenían predominantemente tumores de grado alto (T3), mientras que los animales tratados con CPX-POM demostraron una clara migración a tumores de estadio menor. Las secciones tisulares de vejiga tincionadas con hematoxilina y eosina de animales del grupo de BBN solo muestran una frecuencia muy alta de tumores de estadio T3. Las secciones tisulares de vejigas tratadas con CPX-POM muestran una reducción significativa en la frecuencia del estadio T3, indicando que el CPX-POM detiene el tumor en su estadio temprano.
Los estudios anteriores han demostrado que los altos niveles de la actividad Notch1 están asociados con la progresión tumoral del cáncer de vejiga, y que Notch1 puede ser una diana terapéutica potencial para el tratamiento del cáncer de vejiga. Las secciones tisulares procedentes de tejidos de vejiga tratados con CPX-POM inhibieron significativamente la expresión de proteínas del complejo Y-secretasa, tales como la Presenilina1, dando lugar con ello a un menor dominio intracelular Notch activado escindido (NICD1). Además, también se inhibieron significativamente los niveles de dianas aguas abajo del sistema, incluyendo Hey1, tras el tratamiento con CPX-POM. Estos datos sugieren que el CPX-POM inhibe significativamente las proteínas del sistema de señalización intracelular Notch, inhibiendo con ello el crecimiento de las células madre cancerosas (CSC) in vivo.
La Figura 27A incluye imágenes que muestran que el CPX-POM inhibe la señalización Notch1 y las proteínas del complejo Y-secretasa in vivo. El tratamiento con CPX-POM redujo significativamente la activación Notch1 y la proteína Presenilina1 del complejo Y-secretasa, y reduce las proteínas diana aguas abajo, tales como la Hey-1. Se observó la inhibición del sistema de señalización Notch en ambos grupos de tratamiento con CPX-POM.
La Figura 27B incluye imágenes que muestran que el CPX-POM inhibe las proteínas diana ciclina D1 y c-Myc aguas abajo de Notch en un modelo de tumor de vejiga inducido por BBN. El CPX-POM redujo significativamente, aguas abajo de Notch, proteínas diana como ciclina D1 y c-Myc, que desempeñan un papel importante en el desarrollo celular. Por ello, el tratamiento con CPX-POM también da lugar a la inhibición, aguas abajo de Notch, de las proteínas diana ciclina D1 y c-Myc en el modelo de tumor de vejiga inducido por BBN. Estas proteínas diana aguas abajo desempeñan un papel fundamental en la progresión de las células en el ciclo celular. En conclusión, los inventores establecieron una prueba conceptual preclínica in vivo en un modelo murino validado de cáncer de vejiga. Demostraron que se logran concentraciones suficientes de ciclopirox en el sitio de acción diana (es decir, el tracto urinario), durante un tiempo suficiente (es decir, durante 24 horas) en estado estacionario, tras la administración de CPX-POM inyectable. En segundo lugar, los inventores han establecido que el ciclopirox interactúa con las dianas propuestas (por ejemplo, el sistema de señalización Notch), en el sitio de acción. En tercer lugar, han establecido que la interacción entre ciclopirox y diana en el sitio de acción da lugar a una actividad farmacológica coherente con el mecanismo de acción propuesto (reducción del tamaño del tumor, migración del estadio tumoral).
El CPX-POM inhibe el antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) tanto in vitro como in vivo. Los inventores examinaron el contenido del PCNA en las líneas celulares de cáncer de vejiga sin invasión muscular y en los tejidos tumorales de cáncer tratados con CPX-POM los estudios por inmunoelectrotransferencia muestran una disminución dependiente del tiempo en el nivel de PCNA en células T24 tratadas con CPX-POM. El CPX-POM redujo el nivel de PCNA in vivo. Los estudios también muestran una correlación positiva entre el sistema intracelular notch y el PCNA. Los datos generados en el laboratorio de los inventores sugieren que el CPX-POM inhibe el desarrollo del cáncer de vejiga in vivo al suprimir el sistema de señalización Notch-1, las proteínas diana aguas abajo de Notch y el antígeno nuclear de células en proliferación.
La Figura 28 muestra que el CPX-POM inhibe el antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) tanto in vitro como in vivo. El gráfico simplificado explica el papel del PCNA en el mantenimiento de la ADN polimerasa junto al ADN, que desempeña un papel esencial en la duplicación del ADN. Los estudios por inmunoelectrotransferencia muestra una disminución dependiente del tiempo en el nivel de PCNA en las células T24 tratadas con CPX. El CPX-POM también redujo el nivel de PCNA in vivo.
Además, los datos de la solicitud provisional (incorporada a presente memoria) muestran que: el CPX suprime los sistemas Notch, Wnt y Hedgehog en las líneas celulares T24; el CPX suprime los genes relacionados con el sistema NOTCH en las líneas celulares T24; el CPX suprime los genes relacionados con el sistema de señalización Wnt en las líneas celulares T24; y el CPX suprime los genes relacionados con el sistema Hedgehog en las líneas celulares T24.
Los datos proporcionados en la presente memoria proporcionan la información siguiente. Se entiende bien que el resto POM es metabolizado por las fosfatasas que circulan en la sangre. Se produce un metabolismo completo del CPX-POM para formar ciclopirox. Tras la administración IV de CPX-POM a ratones, el ciclopirox está completamente biodisponible, en comparación con la administración de ciclopirox olamina mediante inyección IV. Tras la administración IV de CPX-POM a ratas, la biodisponibilidad de ciclopirox es del 77% en comparación con la administración de ciclopirox olamina mediante inyección IV. Tras la administración IV de CPX-POM a perros, la biodisponibilidad de ciclopirox es del 85% en comparación con la administración de ciclopirox olamina mediante inyección IV. Rara vez se ha detectado CPX-POM en el plasma y la orina de ratones, ratas y perros que participan en estudios farmacocinéticos tras la administración IV, SQ y oral del profármaco. La administración de CPX-POM por vías inyectables de administración a dosis bien toleradas da lugar a concentraciones de ciclopirox en el plasma y la orina que superan los valores CI50 in vitro documentados. El ciclopirox está biodisponible tras la administración de CPX-POM a través de la vía de administración subcutánea en ratas y perros. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras dosis IV bien toleradas de CPX-POM superan los valores CI50 in vitro documentados. Las concentraciones de ciclopirox en el plasma tras dosis IV y SQ bien toleradas de CPX-POM superan los valores CI50 in vitro documentados. Las concentraciones de ciclopirox en la orina tras la administración IV, SQ y oral de CPX-POM superan los valores CI50 in vitro documentados para el cáncer de vejiga sin invasión muscular y con invasión muscular en ratones, ratas y perros. Las dosis IP de CPX-POM de 50, 100 y 200 mg/kg a ratones dan lugar a concentraciones de ciclopirox en la orina que superan en varias veces los valores CI50 in vitro. Las dosis de CPX-POM IV de 10 mg/kg e IP de 50 mg/kg dan lugar a concentraciones de ciclopirox en la orina en dosis única que superan en varias veces los valores CI50 in vitro. Tras dosis IV y SQ de CPX-POM a ratas, las concentraciones de ciclopirox en la orina superan los valores CI50 in vitro que varían entre 2 y 4 pM a dosis bien toleradas. Tras dosis IV y SQ de CPX-POM a perros, las concentraciones de ciclopirox en la orina superan los valores CI50 in vitro que varían entre 2 y 4 pM a dosis bien toleradas.
La concentración prevista de CPX en la orina humana es suficiente para dar como resultado una actividad anticancerosa (por ejemplo, contra el cáncer de vejiga u otro cáncer descrito en la presente memoria). El procedimiento de tratamiento diario con la concentración prevista de CPX en la orina humana muestra una inhibición máxima de las células. Además, los compuestos de la presente invención son útiles para tratar enfermedades del tracto urinario superior.
Los datos proporcionados en la presente memoria muestran claramente que el ciclopirox, la ciclopirox olamina o el profármaco de ciclopirox-POM puede usarse para los tratamientos descritos en la presente memoria. En particular, cualquiera de los tratamientos del cáncer de vejiga se puede llevar a cabo con ciclopirox, ciclopirox olamina o profármaco de ciclopirox-POM.
En resumen, el CPX-POM se convierte rápida y completamente in vivo en el agente activo ciclopirox después de su administración. El estudio 208-02 en ratones demostró que el grado de exposición al ciclopirox es esencialmente el mismo (137%) ya sea que se administre CPX-POM IV o la sal de olamina de ciclopirox. El estudio 10954 en ratas demostró que el grado de exposición al ciclopirox es esencialmente el mismo (77%) ya sea que se administre CPX-POM IV o la sal de olamina de ciclopirox. El estudio 10953 en perros demostró que el grado de exposición al ciclopirox es esencialmente el mismo (85%) ya sea que se administre CPX-POM IV o la sal de olamina de ciclopirox. Además, como se ha descrito en todos los estudios, no puede detectarse el CPX-POM en el plasma ni en la orina realmente en ningún estudio. Estos estudios demostraron que la vía de administración IV para el CPX-POM es una ruta viable.
La vía de administración subcutánea para el CPX-POM está biodisponible. El estudio 11428 en ratas demostró que la biodisponibilidad absoluta del ciclopirox tras la administración SQ de CPX-POM es del 80%, y que las concentraciones de ciclopirox en la orina tras la administración SQ de CPX-POM superaron los valores CI50 in vitro. El estudio 11429 en perros demostró que la biodisponibilidad absoluta del ciclopirox tras la administración SQ de CPX-POM es del 106%, y que las concentraciones de ciclopirox en la orina tras la administración SQ de CPX-POM superaron los valores CI50 in vitro. Estos estudios, junto con el estudio 208-02 en ratones, también demostraron que la biodisponibilidad oral de la ciclopirox olamina es bastante baja. Esta vía de administración también está asociada con concentraciones menores del fármaco en la orina, estableciendo con ello que la vía de administración subcutánea es beneficiosa, especialmente en caso de que sea preciso administrar CPX-POM de forma reiterada (como se administraría insulina un diabético de tipo I).
Los datos establecieron que se puede usar CPX-POM para tratar el cáncer de vejiga, según se muestra en un modelo murino validado de cáncer de vejiga. El estudio 11177 en ratones estableció que la vía de administración intraperitoneal (IP) (para ser usada en el estudio del cáncer de vejiga en ratones) está biodisponible. El estudio 11206 en ratones estableció que la exposición a ciclopirox (por ejemplo, concentraciones en orina) en el sitio de acción (es decir, el tracto urinario) usando posologías seleccionadas para el estudio del cáncer de vejiga en ratones superó en varias veces los valores CI50 in vitro.
Los estudios establecieron se logran concentraciones suficientes del fármaco activo (ciclopirox) en el o los sitios de acción (es decir, la sangre, la orina) tas la administración inyectable de CPX-POM. El estudio de BBN en ratones estableció que dosis diarias de 100 mg/kg y 200 mg/kg de CPX-POM dieron lugar a reducciones significativas en el peso en vejiga (una medida del tamaño y el volumen del tumor), así como una migración hacia tumores de estadio inferior. Los estudios también establecieron que, en tejidos de vejiga obtenidos de animales tratados con CPX-POM, la señalización Notch se inhibió, y disminuyeron las proteínas diana aguas abajo de Notch. El análisis de tejidos de cáncer de vejiga en animales tratados con CPX-POM estableció que el ciclopirox interactúa con la diana (por ejemplo, el sistema de señalización Notch) en el sitio de acción (el tejido de la vejiga). Los efectos vistos en los tejidos del cáncer de vejiga son coherentes con los datos generados in vitro en líneas celulares humanas NMIBC y MIBC. Los estudios también establecieron que la administración inyectable diaria de CPX-POM produjo un efecto farmacológico (por ejemplo, un tamaño y un volumen tumorales menores, un estadio tumoral inferior) coherente con la hipótesis de que el ciclopirox es un agente anticanceroso y que la administración inyectable de CPX-POM suministra suficiente fármaco activo al sitio de acción para producir la respuesta anticancerosa.
El término “alquilo” o “alifático” usado en la presente memoria se refiere a un grupo hidrocarbonado saturado ramificado o no ramificado que normal aunque no necesariamente contiene de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, octilo, decilo y similares, así como grupos cicloalquilo tales como ciclopentilo, ciclohexilo y similares. General, aunque de nuevo no necesariamente, los grupos alquilo en la presente memoria contienen de 1 a aproximadamente 18 átomos de carbono, o de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono. La expresión “alquilo inferior” se refiere a un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono. Los sustituyentes identificados como “alquilo C1-C6” o “alquilo inferior” contienen de 1 a 3 átomos de carbono, y hay sustituyentes tales que contienen 1 o 2 átomos de carbono (es decir, metilo y etilo). “Alquilo sustituido” se refiere a alquilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y las expresiones “alquilo que contiene heteroátomos” y “heteroalquilo” se refieren a un alquilo en el cual al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo, según se describe con mayor detalle infra. Si no se indica algo distinto, las expresiones “alquilo” y “alquilo inferior” incluyen alquilo lineal, ramificado, cíclico, insustituido, sustituido y/o contenedor de heteroátomos o alquilo inferior, respectivamente.
El término “alquenilo” usado en la presente memoria se refiere a un grupo hidrocarbonado lineal, ramificado o cíclico de 2 a aproximadamente 24 átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace, tal como etenilo, n-propenilo, isopropenilo, n-butenilo, isobutenilo, octenilo, decenilo, tetradecenilo, hexadecenilo, eicosenilo, tetracosenilo y similares. General, aunque de nuevo no necesariamente, los grupos alquenilo en la presente memoria contienen de 2 a aproximadamente 18 átomos de carbono, o de 2 a 12 átomos de carbono. La expresión “alquenilo inferior” se refiere a un grupo alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, y el término específico “cicloalquenilo” se refiere a un grupo alquenilo cíclico, o que tiene de 5 a 8 átomos de carbono. La expresión “alquenilo sustituido” se refiere a alquenilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y las expresiones “alquenilo que contiene heteroátomos” y “heteroalquenilo” se refieren a un alquenilo en el cual al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo. Si no se indica algo distinto, las expresiones “alquenilo” y “alquenilo inferior” incluyen alquenilo lineal, ramificado, cíclico, insustituido, sustituido y/o contenedor de heteroátomos y alquenilo inferior, respectivamente.
El término “alquinilo” usado en la presente memoria se refiere a un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado de 2 a 24 átomos de carbono que contiene al menos un triple enlace, tal como etinilo, n-propinilo y similares. General, aunque de nuevo no necesariamente, los grupos alquinilo en la presente memoria contienen de 2 a aproximadamente 18 átomos de carbono, o de 2 a 12 átomos de carbono. La expresión “alquinilo inferior” se refiere a un grupo alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono. La expresión “alquinilo sustituido” se refiere a alquinilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y las expresiones “alquinilo que contiene heteroátomos” y “heteroalquinilo” se refieren a un alquinilo en el cual al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo. Si no se indica algo distinto, las expresiones “alquinilo” y “alquinilo inferior” incluyen alquinilo lineal, ramificado, insustituido, sustituido y/o contenedor de heteroátomos y alquinilo inferior, respectivamente.
El término “alcoxi” usado en la presente memoria se refiere a un grupo alquilo unido a través de un enlace éter terminal único; es decir, un grupo “alcoxi” puede representarse como -O-alquilo, siendo el alquilo como se ha definido anteriormente. Un grupo “alcoxi inferior” se refiere a un grupo alcoxi que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, e incluye, por ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, t-butiloxi, etc. Los sustituyentes identificados como “alcoxi C1-C6” o “alcoxi inferior” en la presente memoria contienen de 1 a 3 átomos de carbono, y hay sustituyentes tales que contienen 1 o 2 átomos de carbono (es decir, metoxi y etoxi).
El término “arilo” usado en la presente memoria y, a no ser que se especifique algo distinto, se refiere a un sustituyente aromático que contiene un único anillo aromático o múltiples anillos aromáticos que están fusionados entre sí, enlazados directamente o enlazados indirectamente (de modo que los diferentes anillos aromáticos estén unidos a un grupo común, tal como un resto de metileno o etileno). Los ejemplos de grupos arilo contienen de 5 a 20 átomos de carbono, y hay grupos arilo que contienen de 5 a 14 átomos de carbono. Los grupos arilo ejemplares contienen uno anillo aromático o dos anillos aromáticos fusionados o enlazados; por ejemplo, fenilo, naftilo, bifenilo, difeniléter, difenilamina, benzofenona y similares. “Arilo sustituido” se refiere a un resto arilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y las expresiones “arilo que contiene heteroátomos” y “heteroarilo” se refieren a sustituyente arilo, en el cual al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo, según se describirá con mayor detalle infra. Si no se indica algo distinto, el término “arilo” incluye sustituyentes aromáticos insustituidos, sustituidos y/o que contienen heteroátomos.
El término “ariloxi” usado en la presente memoria se refiere a un grupo arilo unido a través de un único enlace éter terminal, siendo el “arilo” según se ha definido anteriormente. Un grupo “ariloxi” puede representarse como -O-arilo, siendo el arilo según se ha definido anteriormente. Los ejemplos de grupos ariloxi contienen de 5 a 20 átomos de carbono, y hay grupos ariloxi que contienen de 5 a 14 átomos de carbono. Ejemplos de grupos ariloxi incluyen, sin limitación, fenoxi, o-halo-fenoxi, m-halo-fenoxi, p-halo-fenoxi, o-metoxi-fenoxi, m-metoxi-fenoxi, p-metoxi-fenoxi, 2,4-dimetoxi-fenoxi, 3,4,5-trimetoxi-fenoxi y similares.
El término “alcarilo” se refiere a un grupo arilo con un sustituyente alquilo, y el término “aralquilo” se refiere a un grupo alquilo con un sustituyente arilo, siendo “arilo” y “alquilo” según se ha definido anteriormente. Los ejemplos de grupos aralquilo contienen de 6 a 24 átomos de carbono, y hay grupos aralquilo que contienen de 6 a 16 átomos de carbono. Ejemplos de grupos aralquilo incluyen, sin limitación, bencilo, 2-fenil-etilo, 3-fenil-propilo, 4-fenil-butilo, 5-fenil-pentilo, 4-fenilciclohexilo, 4-bencilciclohexilo, 4-fenilciclohexilmetilo, 4-bencilciclohexilmetilo y similares. Los grupos alcarilo incluyen, por ejemplo, p-metilfenilo, 2,4-dimetilfenilo, p-ciclohexilfenilo, 2,7-dimetilnaftilo, 7-ciclooctilnaftilo, 3-etilciclopenta-1,4-dieno y similares.
El término “cíclico” se refiere a sustituyentes alicíclicos o aromáticos que pueden estar o no sustituidos y/o contener heteroátomos, y que pueden ser monocíclicos, bicíclicos o policíclicos.
Los términos “halo” y “halógeno” se usan en el sentido convencional para referirse a un sustituyente cloro, bromo y fluoro o yodo.
La expresión “que contiene heteroátomos”, como en un “grupo alquilo que contiene heteroátomos” (también denominado grupo “heteroalquilo”) o en un “grupo arilo que contiene heteroátomos” (también denominado grupo “heteroarilo”) se refiere a una molécula, un enlace o un sustituyente en el que uno o más átomos de carbono están sustituidos con un átomo distinto del carbono; por ejemplo, nitrógeno, oxígeno, azufre, fósforo o silicio, normalmente nitrógeno, oxígeno o azufre. De forma similar, el término “heteroalquilo” se refiere a un sustituyente alquilo que sea contenedor de heteroátomos; el término “heterocíclico” se refiere a un sustituyente cíclico que sea contenedor de heteroátomos; los términos “heteroarilo” y “heteroaromático” se refieren, respectivamente, a sustituyentes “arilo” y “aromáticos” que sean contenedores de heteroátomos y similares. Ejemplos de grupos heteroalquilo incluyen alcoxiarilo, alquilo sustituido con alquilsulfanilo, amino alquilo N-alquilado y similares. Ejemplos de sustituyentes heteroarilo incluyen pirrolilo, pirrolidinilo, piridinilo, quinolinilo, indolilo, pirimidinilo, imidazolilo, 1,2,4-triazolilo, tetrazolilo, etc., y ejemplos de grupos alicíclicos que contienen heteroátomos son pirrolidino, morfolino, piperazino, piperidino, etc.
El término “hidrocarbilo” se refiere a radicales hidrocarbilo univalentes que contienen de 1 a aproximadamente 30 átomos de carbono, o de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, o de 1 a aproximadamente 18 átomos de carbono, o aproximadamente de 1 a 12 átomos de carbono, incluyendo las especies lineales, ramificadas, cíclicas, saturadas e insaturadas, tal como los grupos alquilo, grupos alquenilo, grupos arilo y similares. “Hidrocarbilo sustituido” se refiere al hidrocarbilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y la expresión “hidrocarbilo que contiene heteroátomos” se refiere a un hidrocarbilo en el cual al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo. A no ser que se indique algo distinto, ha de interpretarse que el término “hidrocarbilo” incluye restos hidrocarbilo sustituidos y/o que contienen heteroátomos.
Con “sustituido”, como en “alquilo sustituido”, “arilo sustituido” y similares, objeto de alusión en algunas de las definiciones mencionadas anteriormente, se quiere decir que en el alquilo, arilo u otro resto, al menos un átomo de hidrógeno a un átomo de carbono (u otro) está reemplazado con uno o más sustituyentes distintos del hidrógeno.
Además, los grupos funcionales mencionados anteriormente, si un grupo particular lo permite, pueden ser sustituidos ulteriormente con uno o más grupos funcionales adicionales o con uno o más restos hidrocarbilo, tales como los enumerados específicamente más arriba. De forma análoga, los restos hidrocarbilo mencionados anteriormente pueden ser sustituidos ulteriormente con uno o más grupos funcionales o con restos hidrocarbilo adicionales, tales como los enumerados específicamente.
Cuando el término “sustituidos” aparece después de una lista de posibles grupos sustituidos, se entiende que el término se aplica a cada miembro de ese grupo. Por ejemplo, la frase “alquilo, alquenilo y arilo sustituidos” ha de interpretarse como “alquilo sustituido, alquenilo sustituido y arilo sustituido”. De forma análoga, cuando la expresión “que contienen heteroátomos” aparece después de una lista de posibles grupos que contienen heteroátomos, se entiende que la expresión se aplica a cada miembro de ese grupo. Por ejemplo, la frase “alquilo, alquenilo y arilo que contienen heteroátomos” ha de interpretarse como “alquilo que contiene heteroátomos, alquenilo que contiene heteroátomos y arilo que contiene heteroátomos”.
Los expertos en la técnica entenderán que, en general, se pretende que los términos usados en la presente memoria, y especialmente en las reivindicaciones adjuntas (por ejemplo, los cuerpos de las reivindicaciones adjuntas) sean términos “abiertos” (por ejemplo, la expresión “que incluye” debería interpretarse como “que incluye, sin limitación”, la expresión “que tiene” debería interpretarse como “que tiene al menos”, el término “incluye” debería interpretarse como “incluye, sin limitación”, etc.). Los expertos en la técnica entenderán, además, que si se tiene la intención de aludir a un número específico de una mención de reivindicación introducida, tal alusión será mencionada explícitamente en la reivindicación, y en ausencia de tal mención, no hay presente ninguna intención de ese tipo. Por ejemplo, como ayuda a la interpretación, las siguientes reivindicaciones adjuntas pueden contener el uso de las frases introductorias “al menos uno” y “uno o más” para introducir menciones de reivindicaciones. Sin embargo, no debería interpretarse que el uso de tales frases implique que la introducción de una mención de reivindicación por los artículos indefinidos “un” o “una” limite ninguna reivindicación particular que contenga tal mención de reivindicación introducida a realizaciones que contengan únicamente una mención tal, ni siquiera cuando la misma reivindicación incluya las frases introductorias “uno o más” o “al menos uno” y artículos indefinidos tales como “un” o “una” (por ejemplo, debería interpretarse que “un” y/o “una” significan “al menos uno/una” o “uno/una o más”); vale lo mismo para el uso de artículos definidos usados para introducir menciones de reivindicaciones. Además, aunque se mencione explícitamente un número específico de una mención de reivindicación introducida, los expertos en la técnica reconocerán que debería interpretarse que tal mención significa al menos el número mencionado (por ejemplo, la simple mención de “dos menciones”, sin otros modificadores, significa al menos dos menciones, o dos o más menciones). Además, en aquellos casos en los que se usa una convención análoga a “al menos una de A, B y C, etc.”, en general tal construcción se entiende en el sentido que entendería la convención una persona que fuera experta en la técnica (por ejemplo, “un sistema que tiene al menos una de A, B y C” incluiría, sin limitación, sistemas que tienen A sola, B sola, C sola, A y B juntas, A y C juntas, B y C juntas, y/o A, B y C juntas, etc.). En aquellos casos en lo que se usa una convención análoga a “al menos una de A, B o C, etc.”, en general tal construcción se entiende en el sentido que entendería la convención una persona que fuera experta en la técnica (por ejemplo, “un sistema que tiene al menos una de A, B o C” incluiría, sin limitación, sistemas que tienen A sola, B sola, C sola, A y B juntas, A y C juntas, B y C juntas, y/o A, B y C juntas, etc.). Los expertos en la técnica deberían entender, además, que casi cualquier palabra y/o frase disyuntiva que presente dos o más términos alternativos, ya sea en la descripción, las reivindicaciones o los dibujos, contempla las posibilidades de incluir uno de los términos, cualquiera de los términos, o ambos términos. Por ejemplo, se entenderá que la frase “A o B” incluye las posibilidades de “A” o “B” o “A y B”.
Además, cuando se describen características o aspectos de la divulgación en términos de grupos de Markush, los expertos en la técnica reconocerán que la divulgación también está descrita, por ello, en términos de cualquier miembro individual o subgrupo de miembros del grupo de Markush.
Como comprenderá un experto en la técnica, para todos y cada uno de los fines, tales como en términos de proporcionar una descripción escrita, todos los intervalos descritos en la presente memoria también abarcan todos y cada uno de los posibles subintervalos y combinaciones de subintervalos de los mismos. Se puede reconocer fácilmente que cualquier intervalo mencionado describe suficientemente y permite que el mismo intervalo se divida en al menos mitades, tercios, cuartos, quintos, décimos, etc. Como ejemplo no limitante, cada intervalo presentado en la presente memoria se puede desglosar fácilmente en un tercio inferior, un tercio central y un tercio superior, etc. Como también entenderá un experto en la técnica, todas las fórmulas del tipo de “hasta”, “al menos” y similares incluyen el número mencionado y se refieren a intervalos que pueden ser posteriormente divididos en subintervalos, como se ha expuesto anteriormente. Por último, como entenderá un experto en la técnica, un intervalo incluye cada miembro individual. Así, por ejemplo, un grupo que tiene 1 -3 células se refiere a grupos que tienen 1, 2 o 3 células. De manera similar, un grupo que tiene de 1 a 5 células se refiere a grupos que tienen 1,2, 3, 4 o 5 células, etcétera.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Una composición farmacéutica que tiene ciclopirox o ciclopirox olamina o un profármaco de ciclopirox-POM que tiene una estructura de Fórmula 1 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en el tratamiento del cáncer de vejiga, en donde
Figure imgf000038_0001
y en donde:
R1-R12 incluyen cada uno, independientemente, uno o más de hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, heteroaromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos, sustituidos o insustituidos, o combinaciones de los mismos;
R13-R14 incluyen cada uno, independientemente, uno o más de un ion positivo, un ion de sodio, hidrógeno, halógenos, hidroxilos, alcoxis, alifáticos lineales, alifáticos ramificados, alifáticos cíclicos, alifáticos sustituidos, alifáticos insustituidos, alifáticos saturados, alifáticos insaturados, aromáticos, poliaromáticos, aromáticos sustituidos, hetero-aromáticos, aminas, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias, aminas alifáticas, carbonilos, carboxilos, amidas, ésteres, aminoácidos, péptidos, polipéptidos, sustituidos o insustituidos, o combinaciones de los mismos;
n es 0-20 sustituido o insustituido; y
m es 0, 1 o 2.
2. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 2 o Fórmula 3, o un estereoisómero de Fórmula 2 o Fórmula 3, o una sal farmacéuticamente aceptable de Fórmula 2 o Fórmula 3.
Figure imgf000038_0002
Figure imgf000039_0001
3. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 4 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000039_0002
4. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 5 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000039_0003
5. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 6 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000039_0004
6. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 7 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000040_0001
7. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 8 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000040_0002
8. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 9 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000040_0003
9. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, estando representado el compuesto por una estructura de Fórmula 10, 11, 12 o 13 o un estereoisómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Figure imgf000041_0001
10. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, comprendiendo la composición el compuesto en una cantidad farmacéuticamente eficaz y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
11. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, siendo administrada la composición en una cantidad eficaz para proporcionar una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-ciclohexil-1 -hidroxi-4-metilpiridin-2(1 H)-ona.
12. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 10, dependiente de la reivindicación 1, en donde la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir: el sistema NOTCH, el sistema TGF-Beta, el sistema STAT3, el crecimiento de células de cáncer de vejiga, la reparación del ADN, ribonucleótido reductasa, crecimiento de células madre de cáncer de vejiga, crecimiento de células de cáncer de vejiga en la fase S, formación de esferoides de cáncer de vejiga o proliferación de células de cáncer de vejiga.
13. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en donde el cáncer de vejiga es NMIBC (cáncer de vejiga sin invasión muscular, por sus siglas en inglés).
14. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en donde el cáncer de vejiga es MIBC (cáncer de vejiga con invasión muscular, por sus siglas en inglés).
15. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en donde el cáncer de vejiga está en un tracto urinario superior.
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