ES2830849T3 - Ensayo y método para tratar sujetos con enfermedades inmunomediadas - Google Patents
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Abstract
Un ensayo que comprende: (i) someter a ensayo una muestra biológica obtenida a partir de un sujeto que se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada caracterizada por niveles de IgG elevados para determinar el alelo en la posición 131 de la proteína FcγR2a; y (ii) seleccionar al sujeto para una terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcγR2a, en el que la terapia comprende un anticuerpo que bloquea el receptor de Fc neonatal (FcRn).
Description
DESCRIPCIÓN
Ensayo y método para tratar sujetos con enfermedades inmunomediadas
Referencia cruzada a solicitud relacionada
Esta solicitud reivindica el beneficio bajo 35 U.S.C. § 119(e) de la solicitud provisional estadounidense n.° 61/984.652 presentada el 25 de abril de 2014.
Derechos gubernamentales
La invención se realizó con el apoyo del gobierno bajo la subvención n.° DK53056 otorgada por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene determinados derechos sobre la invención.
Campo de la invención
En el presente documento se describen ensayos, métodos y sistemas para seleccionar pacientes con enfermedades inmunomediadas caracterizadas por niveles de IgG elevados que son adecuados para la terapia anti-FcRn y para tratar a los sujetos seleccionados con terapia anti-FcRn. También se describen en el presente documento métodos para evaluar la eficacia del tratamiento anti-FcRn en un sujeto monitorizando los niveles de IgG.
Antecedentes de la invención
La siguiente descripción incluye información que puede ser útil para comprender la presente invención. No se admite que la información proporcionada en el presente documento sea de la técnica anterior o que sea relevante para la invención actualmente reivindicada, o que cualquier publicación a la que se haga referencia específica o implícitamente sea de la técnica anterior.
Muchas enfermedades inmunomediadas se caracterizan por niveles aumentados de inmunoglobulina G (IgG). Existe una amplia variedad de enfermedades que poseen esta propiedad. Estas incluyen, por ejemplo, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, pénfigo vulgar y enfermedad intestinal inflamatoria (EII), entre otras. La EII es un prototipo de tales enfermedades, ya que comúnmente se observan altos niveles de IgG y, por tanto, es deseable disminuir los niveles de IgG en el tratamiento de la enfermedad. La EII implica una inflamación crónica de todo o parte del tracto digestivo. La EII incluye principalmente colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn. La EII es a menudo dolorosa y debilitante, y en ocasiones conduce a complicaciones potencialmente mortales. Las terapias existentes no son universalmente eficaces para tratar la EII y la mayoría de las terapias implican efectos secundarios adversos. El bajo rendimiento de la terapia existente para la EII se revela por la tasa de recaída acumulada de 1 año de aproximadamente el 50 % tanto para la colitis ulcerosa como para la enfermedad de Crohn [Moum B et al. Clinical course during the 1st year after diagnosis in ulcerative colitis and Crohn's disease. Results of a large, prospective population-based study in southeastern Norway 1990-93. Scand J Gastroenterol. 1997;32:1005-1012]. Con la excepción de la colectomía para la colitis ulcerosa, un procedimiento en sí mismo con morbilidad a largo plazo en muchos pacientes, ninguna terapia ofrece una cura. [Carty, E y Rampton, DS., Evaluation of new therapies for inflammatory bowel disease. Br J Clin Pharmacol. Octubre de 2003; 56(4): 351-361]. En vista de las limitaciones de los tratamientos existentes y dado que no todas las terapias para la EII son universalmente eficaces en el tratamiento de la EII, existe una necesidad en la técnica de ensayos y sistemas para seleccionar sujetos con EII en quienes es probable que las terapias tengan éxito y administrar las terapias a los sujetos seleccionados para tratar la EII. El documento US 2010/291549 A1 describe métodos y materiales para determinar la capacidad de respuesta de un sujeto a una terapia anti-CD20 basada en un polimorfismo de FcyR2a.
Sumario de la invención
Las siguientes realizaciones y aspectos de las mismas se describen e ilustran junto con sistemas, composiciones y métodos que pretenden ser a modo de ejemplo e ilustrativos, sin limitar su alcance.
Tal como se demuestra en el presente documento, en parte a través de la coinmunoprecipitación de FcgR y FcRn en presencia de una IgG competente e incompetente para FcRn, cuanta más señalización se produzca a través de los receptores FcgR y FcRn, más interacciones bioquímicas (y por tanto dependencias) existirán entre estas dos moléculas. Por consiguiente, tal como se demuestra en el presente documento, las variantes de FcgR2aHis son más sensibles al bloqueo de FcRn.
En un aspecto de la invención, se proporciona un ensayo que comprende (i) someter a ensayo una muestra biológica obtenida a partir de un sujeto que se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada caracterizada por niveles de IgG elevados para determinar el alelo en la posición 131 de la proteína FcyR2a; y (ii) seleccionar al sujeto para una terapia si el sujeto expresa el alelo His131 (también conocido como alelo His167 según NM_001136219.1) de FcyR2a, en el que la terapia comprende un anticuerpo que bloquea el receptor de Fc neonatal (FcRn). En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano.
En otro aspecto de la invención, se proporciona una composición que comprende una terapia anti-FcRn que
comprende un anticuerpo que bloquea el receptor de Fc neonatal (FcRn) para su uso en el tratamiento, la inhibición y/o la reducción de la gravedad de una enfermedad inmunomediada caracterizada por niveles de IgG elevados en un sujeto, en la que el sujeto se ha identificado como que tiene el alelo His131 de FcyR2a mediante el ensayo de la invención.
En diversas realizaciones, la enfermedad inmunomediada incluye, pero no se limita a, una cualquiera o más de gammapatía monoclonal de significado indeterminado (GMSI), enfermedad intestinal inflamatoria, pénfigo o penfigoide, miastenia grave, anemia hemolítica autoinmunitaria, enfermedad de Kawasaki, mieloma múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), cirrosis del hígado, hepatitis crónica, infección crónica, esclerosis múltiple (EM), macroglobulinemia, hepatitis viral, mononucleosis, daño renal (síndrome nefrótico), enfermedad celíaca, reacciones alérgicas, asma, dermatitis atópica, cáncer, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), trombocitopenia autoinmunitaria, neutropenia inmunitaria, síndrome antifosfolipídico, enfermedad asociada a ANCA, polimiositis, miastenia grave, diabetes, tiroiditis autoinmunitaria, neuritis óptica, oftalmopatía de Graves, síndrome de Guillian-Barre, polineuropatía crónica, leucemia mieloide aguda o una combinación de las mismas, entre otras. En algunas realizaciones, la enfermedad inmunomediada es una enfermedad intestinal inflamatoria colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, colitis isquémica, colitis por desviación, enfermedad de Behget, colitis indeterminada o una combinación de las mismas u otro tipo de enfermedad inmunomediada que se caracteriza por niveles elevados de IgG tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, pénfigo vulgar, púrpura trombocitopénica inmunitaria o anemia hemolítica autoinmunitaria.
En algunas realizaciones, el sujeto se ha sometido o está sometiéndose a tratamiento para una enfermedad inmunomediada, por ejemplo, enfermedad intestinal inflamatoria. En algunos aspectos, el sujeto no se ha sometido a tratamiento para enfermedad intestinal inflamatoria.
En algunos aspectos, someter a ensayo la muestra comprende secuenciar el gen que codifica para el receptor FcyR2a a partir de la muestra del sujeto y comparar la secuencia de la muestra del sujeto con la secuencia de FcyR2a en una muestra de control.
El sujeto puede ser heterocigótico para el alelo His131 de FcyR2a u homocigótico para el alelo His131 de FcyR2a. En diversas realizaciones, el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado y anticuerpo de cadena sencilla.
Breve descripción de los dibujos
Las realizaciones a modo de ejemplo se ilustran en las figuras a las que se hace referencia. Se pretende que las realizaciones y figuras dadas a conocer en el presente documento se consideren ilustrativas en lugar de restrictivas. La figura 1 representa que FcyR2a131His se une a inmunocomplejos humanos de manera más eficaz que FcyR2a131Arg.
La figura 2 representa que FcyR2a131His media en la expresión de citocinas aumentada al estimularse con inmunocomplejos en comparación con FcyR2a131Arg.
Las figuras 3A-3B representan que FcyR2a131His presenta señalización aguas abajo aumentada al estimularse con inmunocomplejos en comparación con FcyR2a131Arg.
Las figuras 4A-4B representan que FcyR2a131His induce la presentación de CMH II y la presentación cruzada de CMH I del antígeno inmunocomplejado de manera más eficaz que FcyR2a131Arg.
La figura 5 representa que FcyR2a131His internaliza inmunocomplejos de manera más eficaz que FcyR2a131Arg y los transfiere a un compartimento que contiene FcRn. Las células HEK293 que expresan FcRn humano marcadas con GFP se transfectaron de manera estable con FcyR2a131Arg, FcyR2a131His o vector de control y se estimularon con inmunocomplejos que contienen IgG2 humana para las concentraciones indicadas. Azul: inmunocomplejo de IgG2 humana, verde: FcRn humano marcado con GFP, rojo: LAMP-1.
La figura 6 representa que FcRn es un mediador crítico para la presentación del antígeno de CMH II y la presentación cruzada de CMH I del antígeno inmunocomplejado.
La figura 7 representa que la presentación de antígeno iniciada por FcgR2a potenciada se anula por la pérdida de la unión a FcRn.
La figura 8 representa que el bloqueo farmacológico con el anticuerpo monoclonal DVN24 de FcRn disminuye la presentación del antígeno de CMH II.
Las figuras 9A-9D representan que el bloqueo farmacológico con el anticuerpo monoclonal DVN24 de hFcRn en
células hematopoyéticas protege frente al desarrollo de colitis mediada por IgG.
La figura 10 representa que el bloqueo farmacológico con el anticuerpo monoclonal DVN24 de FcRn disminuye el número de células T CD8+ y la expresión de citocinas proinflamatorias en el intestino.
La figura 11 representa que la inhibición farmacológica de FcRn disminuye la activación de células T CD4+ específicas de (antígeno) comensal en colitis dependiente de IgG.
La figura 12 representa que el FcRn humano se une funcionalmente a inmunocomplejos que contienen IgG de ratón. La figura 13 representa que el FcRn humano y el FcyR humano se asociaron conjuntamente en células presentadoras de antígenos.
La figura 14 representa que hFcyR2a131HIS presenta una unión más fuerte que hFcyR2a131ARG en numerosos isotipos de IgG.
Las figuras 15A-15C representan que la inhibición de FcRn durante ensayos de presentación cruzada in vitro conduce a una mayor inhibición de células T CD8+ en la lámina propia de ratones con hFcgRIIa131HIS. Existen numerosos polimorfismos del gen hFcgRIIa. Se usaron ratones transgénicos que expresaban dos de estas variantes alélicas (hFcgrIIa131HIS y hFcgrIIa131ARG) sobre un fondo deficiente en FcgR murino como fuente de DC para experimentos in vitro. Figura 15A. El bloqueo de FcRn anula la presentación cruzada por DC de ratones con hFcgRIIa131. Se incubaron DC de ratones transgénicos con hFcgRIIa131 con IgG IC o un complejo que contenía una variante de IgG de unión a FcRn potenciada (MST/HN-IgG IC) en combinación con diferentes dosis de un anticuerpo bloqueante de FcRn (DVN24) o control de isotipo. Posteriormente, se lavaron las DC y se incubaron durante 24 h con células T CD8+. Se recogió el sobrenadante y se cuantificó IFNg mediante ELISA. (Figuras 15B y 15C) La inhibición de FcRn condujo a una mayor inhibición de la activación de células T por DC tomadas de ratones con hFcgRIIa131HIS en comparación con hFcgRIIa^ARG. Los datos de la figura 15A volvieron a representarse gráficamente como el % de inhibición (en comparación con el control de isotipo correspondiente). * P < 0,05.
Las figuras 16A-16B representan que la inhibición de FcRn durante la colitis conduce a mayores cambios en las células T CD8+ en la lámina propia de ratones con hFcgRIIa131HIS. Figura 16A. Régimen de tratamiento usado para la inducción de colitis dependiente de IgG. Los ratones se inmunizaron con 10 ug de flagelina de S. typhimurium en adyuvante incompleto de Freund los días -28 y -14. En el día 0, se añadió DSS al 2 % al agua y se evaluó el contenido en la lámina propia de células T después de 3 días de tratamiento con DSS. Figura 16B. Se evaluaron las células T CD8+, que se sabe que están disminuidas en la lámina propia de ratones Fcgrt-1-, mediante citometría de flujo, seleccionando la población CD3+CD8+ de células vivas en la lámina propia del intestino grueso.
Las figuras 17A-17B representan que la inhibición de FcRn durante la colitis induce una mayor reducción en la producción de citocinas proinflamatorias en el tejido intestinal y DC de MLN en ratones con hFcgRIIa131HIS. Figura 17A. % de inhibición de los niveles de transcripción de tejido completo para las citocinas indicadas en ratones tratados con anticuerpo bloqueante de FcRn en comparación con ratones tratados con control de isotipo. Los ratones se trataron como en la figura 16A y se evaluaron los transcritos de tejido después de la recogida de tejido intestinal. Figura 17B. % de inhibición de los niveles de transcripción de DC aisladas a partir del ganglio linfático mesentérico (MLN) para las citocinas indicadas en ratones tratados con anticuerpo bloqueante de FcRn en comparación con ratones tratados con control de isotipo. * P < 0,05.
Las figuras 18A-18B representan que la inhibición de FcRn durante la artritis inducida por la transferencia de suero de ratones K/BxN induce una mayor reducción en el grosor del tobillo en ratones con hFcgRIIa131HIS. Figura 18A. Regimiento de tratamiento para la inducción de artritis. Los ratones se trataron con 200 ug de anticuerpo bloqueante de FcRn o control de isotipo diariamente desde el día -1 hasta el día 5. En los días 0 y 2, se administraron a los ratones 100 ul de suero de ratones K/BxN. El grosor y la inflamación del tobillo se midieron desde el día 0 hasta el día 15. Figura 18B. Grosor del tobillo en ratones con hFcgRIIa131HIS y hFcgRIIa^ARG tratados como en la figura 15A. * P < 0,05.
La figura 19 representa que la inhibición de FcRn durante la artritis inducida por la transferencia de suero de ratones K/BxN induce una mayor reducción de la inflamación en ratones con hFcgRIIa131HIS. La inflamación se puntuó basándose en los siguientes criterios en ratones tratados como en la figura 18A: 1 = hinchazón leve del tobillo insuficiente para invertir la forma de V normal del pie (es decir, el pie en la base de los dedos permanece más ancho que el tobillo y el retropié); 2 = hinchazón suficiente para hacer que el tobillo y el mesopié tengan aproximadamente el mismo grosor que el antepié; 3 = inversión de la forma de V normal del pie. * P < 0,05.
La figura 20 representa que la inhibición de FcRn conduce a la conservación de la movilidad en ratones quiméricos para hFcgRIIa131HIS pero no para hFcgRIIa^ARG. Se evaluó la movilidad en ratones quiméricos de médula ósea (descritos en la figura 20A) colocando al animal en un vaso de precipitados transparente y evaluando cuántas veces levantó el ratón sus patas delanteras y tocó el lateral del vaso de precipitados en un lapso de tiempo de 1 minuto. * P < 0,05.
La figura 21 representa que se requiere FcRn para la inducción de artritis por células hematopoyéticas que expresan
hFcgRIIa131. Se irradiaron ratones WT con 2 x 600 rad y luego se reconstituyeron con médula ósea extraída de donantes con hFcgRIIa^HIS, hiFcgRIIa^HIS-mFcgil^ (HISKO), hFcgRIIa131ARG y hiFcgRIIa^ARG-mFcgil^ (ARGKO). 8 semanas después de la quimerización, los ratones se trataron con suero K/BxN como en la figura 18A. *P < 0,05, ** P < 0.01. Obsérvese la inflamación significativamente disminuida en los ratones HISKO en comparación con los ratones ARGKO en relación con sus controles de la camada.
Descripción detallada de la invención
A menos que se defina lo contrario, los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Allen et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy 22a ed., Pharmaceutical Press (15 de septiembre de 2012); Hornyak et al., Introduction to Nanoscience and Nanotechnology, CRC Press (2008); Singleton y Sainsbury, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3a ed., ed. revisada, J. Wiley & Sons (Nueva York, NY 2006); Smith, March's Advanced Organic Chemistry Reactions, 7a ed., J. Wiley & Sons (Nueva York, NY 2013); Singleton, Dictionary of DNA and Genome Technology 3a ed., Wiley-Blackwell (28 de noviembre de 2012); y Green y Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2012) proporcionan al experto en la técnica una guía general de muchos de los términos usados en la presente solicitud. Para obtener referencias sobre cómo preparar anticuerpos, véase Greenfield, Antibodies A Laboratory Manual 2a ed., Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor NY, 2013); Kohler y Milstein, Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion, Eur. J. Immunol. Julio de 1976, 6(7):511-9; Queen y Selick, Humanized immunoglobulins, patente estadounidense n.° 5.585.089 (diciembre de 1996); y Riechmann et al., Reshaping human antibodies for therapy, Nature 24 de marzo de 1988, 332(6162):323-7.
Un experto en la técnica reconocerá muchos métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, que podrían usarse en la práctica de la presente divulgación. De hecho, la presente divulgación no se limita de ninguna manera a los métodos y materiales descritos. A continuación se definen los siguientes términos para los fines de la presente divulgación.
Tal como se usa en el presente documento, una “muestra” o “muestra biológica” puede referirse a una muestra sólida, semisólida o líquida, que incluye, pero no se limita a, una muestra de tejido, una muestra celular, un extracto celular, plasma, suero, sangre, sangre de cordón umbilical, orina, secreciones corporales de la nariz, orofaringe, tracto gastrointestinal, tracto biliar o genitourinario, biopsias tisulares de cualquier órgano, un líquido tisular tal como líquido cefalorraquídeo, ocular o sinovial, o cualquier combinación de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, una “enfermedad inmunomediada” se refiere a cualquier enfermedad o trastorno en el que uno o más componentes del sistema inmunitario, por ejemplo, células B, células T, macrófagos, anticuerpos, están implicados en el inicio o la patogénesis de la enfermedad o el trastorno, y/o existen niveles elevados de uno o más componentes del sistema inmunitario, e incluye, pero no se limita a, una o más de gammapatía monoclonal de significado indeterminado (GMSI), enfermedad intestinal inflamatoria, pénfigo o penfigoide, miastenia grave, anemia hemolítica autoinmunitaria, enfermedad de Kawasaki, mieloma múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), cirrosis del hígado, hepatitis crónica, infección crónica, esclerosis múltiple (EM), macroglobulinemia, hepatitis viral, mononucleosis, daño renal (síndrome nefrótico), enfermedad celíaca, reacciones alérgicas, asma, dermatitis atópica, cáncer, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), trombocitopenia autoinmunitaria, neutropenia inmunitaria, síndrome antifosfolipídico, enfermedad asociada a ANCA, polimiositis, miastenia grave, diabetes, tiroiditis autoinmunitaria, neuritis óptica, oftalmopatía de Graves, síndrome de Guillian-Barre, polineuropatía crónica, leucemia mieloide aguda o una combinación de las mismas.
Tal como se usa en el presente documento, el término “enfermedad intestinal inflamatoria” incluye, por ejemplo, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, colitis isquémica, colitis por desviación, enfermedad de Behget, colitis indeterminada o una combinación de las mismas.
Tal como se usa en el presente documento, con respecto a una muestra biológica, el término “someter a ensayo” se refiere a cualquier método o procedimiento de investigación o analítico que puede usarse para evaluar cualitativamente o medir cuantitativamente la presencia o cantidad de una cualquiera de IgG total, una subclase de IgG y/o IgG específica de antígeno en una muestra biológica. Para los aspectos descritos en el presente documento, “someter a ensayo” abarca cualquier número de técnicas y métodos e incluye, pero no se limita a, métodos de secuenciación de ADN, que incluyen, entre otros, secuenciación de Maxam-Gilbert, métodos de terminación de cadena (secuenciación de Sanger), secuenciación indiscriminada (Shotgun), PCR en puente, secuenciación masiva de firmas paralelas (MPSS), secuenciación Polony, pirosecuenciación 454, secuenciación Illumina (Solexa), secuenciación SOLiD, secuenciación por semicondutores Ion Torrent, secuenciación de nanobolas de ADN, secuenciación de molécula única de Heliscope, secuenciación de molécula única en tiempo real (SMRT), secuenciación de ADN de Nanopore, secuenciación de DN de corrientes de túnel, secuenciación por hibridación, secuenciación con espectrometría de masas, secuenciación microfluídica de Sanger, secuenciación RNAP o cualquier combinación de los mismos; técnicas que pueden evaluar la cantidad de ácido nucleico que codifica para IgG presente en una muestra, tales como los métodos tradicionales de “sonda directa” tales como las transferencias de tipo Southern o hibridación in situ, por ejemplo, FISH y FISH más SKY), métodos de “sonda comparativa” tales como la hibridación genómica comparativa (CGH), (por ejemplo, CGH basada en ADNc o basada en
oligonucleótidos); métodos de amplificación “cuantitativa” y “semicuantitativa”, incluyendo PCR cuantitativa fluorogénica, reacción en cadena de la ligasa (LCR), amplificación de la transcripción, replicación de secuencia autosostenida, PCR puntual y PCR con adaptador de ligador, etc.; técnicas de inmunoensayo, incluyendo inmunoensayos ligados a enzimas (ELISA) en sándwich, ensayos de inmunoabsorción, ensayos de inmunoprecipitación, ensayos de inmunotransferencia, radioinmunoensayos (RIA), ensayos de unión competitiva, ensayos homogéneos, ensayos heterogéneos, etc.
Tal como se usa en el presente documento, una “primera terapia” se refiere a uno o más de agentes antiinflamatorios tales como sulfasalazina, inmunosupresores, tales como corticosteroides, inmunomoduladores, tales como mercaptopurina, metotrexato o ciclosporina, terapias biológicas, inhibidores de molécula pequeña de rutas biológicas, tales como inhibidores de cinasas; antibióticos, agentes antidiarreicos, laxantes, analgésicos, suplementos de hierro, modificaciones dietéticas, suplementos de vitamina B-12, suplementos de calcio, suplementos de vitamina D o cualquier combinación de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, una “segunda terapia” se refiere a terapia anti-FcRn, tal como se describe el término en el presente documento.
El término “terapia anti-FcRn” se refiere a la administración de un agente que bloquea FcRn o un agente que reduce o inhibe la expresión de y/o la señalización mediada por FcRn incluyendo, pero limitado a, uno cualquiera o más de un péptido, una proteína (por ejemplo, porción de Fc recombinante de IgG o una porción biológicamente activa de la misma o un proteomimético de la misma), una molécula pequeña, un ácido nucleico (por ejemplo, ARN antisentido o ARNip específico para FcRn), un aptómero, un oligonucleótido, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado y anticuerpo de cadena sencilla), un agente biespecífico (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico) o una combinación de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, el término “anticuerpo” se refiere a una inmunoglobulina intacta o a un fragmento de unión a antígeno monoclonal o policlonal con la región Fc (fragmento cristalizable) o el fragmento de unión a FcRn de la región Fc, denominado en el presente documento “fragmento Fc” o “dominio Fc”. Los fragmentos de unión a antígeno pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática o química de anticuerpos intactos. Los fragmentos de unión a antígeno incluyen, entre otros, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb y fragmentos de la región determinante de complementariedad (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos de dominio único, anticuerpos quiméricos, diacuerpos, tetracuerpos y otros restos scFv multimerizados y polipéptidos que contienen al menos una porción de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir la unión del antígeno específico al polipéptido. El dominio Fc incluye porciones de dos cadenas pesadas que contribuyen a dos o tres clases del anticuerpo. El dominio Fc puede producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática (por ejemplo, papaína) o mediante escisión química de anticuerpos intactos.
El término “fragmento de anticuerpo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un fragmento de proteína que comprende sólo una parte de un anticuerpo intacto, que generalmente incluye un sitio de unión a antígeno del anticuerpo intacto y, por tanto, conserva la capacidad de unirse al antígeno. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo abarcados por la presente definición incluyen: (i) el fragmento Fab, que tiene dominios VL, CL, VH y CH1; (ii) el fragmento Fab', que es un fragmento Fab que tiene uno o más residuos de cisteína en el extremo C-terminal del dominio CH1; (iii) el fragmento Fd que tiene dominios VH y CH1; (iv) el fragmento Fd' que tiene dominios VH y CH1 y uno o más residuos de cisteína en el extremo C-terminal del dominio CH1; (v) el fragmento Fv que tiene los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; (vi) el fragmento dAb (Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)) que consiste en un dominio VH; (vii) regiones CDR aisladas; (viii) fragmentos F(ab')2, un fragmento bivalente que incluye dos fragmentos Fab' unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (ix) moléculas de anticuerpo de cadena sencilla (por ejemplo, Fvde cadena sencilla; scFv) (Bird et al., Science 242: 423 426 (1988); y Huston et al., PNAS (USA) 85: 5879-5883 (1988)); (x) “diacuerpos” con dos sitios de unión a antígeno, que comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena polipeptídica (véanse, por ejemplo, los documentos EP 404.097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)); (xi) “anticuerpos lineales” que comprenden un par de segmentos Fd en tándem (VH-CH1-VH-CH1) que, junto con polipéptidos de cadena ligera complementarios, forman un par de regiones de unión a antígeno (Zapata et al. Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)); y la patente estadounidense n.° 5.641.870).
Tal como se describe en el presente documento, un “antígeno” es una molécula que está unida por un sitio de unión en un agente polipeptídico, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo. Normalmente, los antígenos están unidos por ligandos de anticuerpos y son capaces de producir una respuesta de anticuerpos in vivo. Un antígeno puede ser un polipéptido, una proteína, un ácido nucleico, un lípido u otra molécula. En el caso de anticuerpos convencionales y fragmentos de los mismos, el sitio de unión del anticuerpo definido por los bucles variables (L1, L2, L3 y H1, h2, H3) es capaz de unirse al antígeno. El término “determinante antigénico” se refiere a un epítopo en el antígeno reconocido por una molécula de unión a antígeno, y más particularmente, por el sitio de unión a antígeno de dicha molécula.
Un fragmento “Fv” es un fragmento de anticuerpo que contiene un sitio de unión y de reconocimiento de antígeno
completo. Esta región consiste en un dímero de un dominio variable de cadena pesada y uno de cadena ligera en asociación estrecha, que puede ser de naturaleza covalente, por ejemplo en scFv. Es en esta configuración en la que las tres CDR de cada dominio variable interaccionan para definir un sitio de unión a antígeno en la superficie del dímero VH-VL. En conjunto, las seis CDR o un subconjunto de las mismas confieren especificidad de unión a antígeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un único dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende sólo tres CDR específicas para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer y unirse al antígeno, aunque normalmente con una afinidad menor que el sitio de unión completo.
Tal como se usa en el presente documento, un “epítopo” puede formarse tanto a partir de aminoácidos contiguos como de aminoácidos no contiguos yuxtapuestos por plegamiento terciario de una proteína. Los epítopos formados a partir de aminoácidos contiguos se retienen normalmente tras la exposición a disolventes desnaturalizantes, mientras que los epítopos formados por plegamiento terciario se pierden normalmente en el tratamiento con disolventes desnaturalizantes. Un epítopo incluye normalmente al menos 3, y más habitualmente, al menos 5, aproximadamente 9 o aproximadamente 8-10 aminoácidos en una conformación espacial única. Un “epítopo” incluye la unidad de estructura unida convencionalmente por un par Vh/Vl de inmunoglobulina. Los epítopos definen el sitio de unión mínimo para un anticuerpo y, por tanto, representan el objetivo de especificidad de un anticuerpo. En el caso de un anticuerpo de dominio único, un epítopo representa la unidad de estructura unida por un dominio variable de forma aislada. Los términos “determinante antigénico” y “epítopo” también pueden usarse de manera intercambiable en el presente documento. En diversas realizaciones, un epítopo puede ser una proteína, un péptido, un ácido nucleico, un lípido, otras moléculas o combinaciones de los mismos.
El término “anticuerpo monoclonal”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo que es parte de una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular única. Una población de anticuerpos monoclonales tiene una especificidad de unión única y afinidad por un epítopo particular, y los anticuerpos son idénticos excepto por posibles mutaciones que se producen de manera natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Por consiguiente, el término “anticuerpo monoclonal” se refiere a un anticuerpo que se deriva de un solo clon, incluyendo cualquier clon eucariota, procariota o fago, y no al método mediante el cual se produce. Los anticuerpos monoclonales pueden prepararse usando una amplia variedad de técnicas conocidas en la técnica incluyendo el uso de tecnologías de presentación de hibridomas, recombinantes y de fagos, o una combinación de las mismas. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales pueden producirse usando técnicas de hibridomas, incluyendo las conocidas en la técnica y enseñadas, por ejemplo, en Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, 2a ed., (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1988); Hammerling et al. eds., en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas” en Research Monographs in Immunology, vol. 3 (J. L. Turk, editor general) (Elsevier, N.Y., 1981), Kohler et al., Nature 256:495 (1975); pueden prepararse mediante métodos de ADN recombinante (véase, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 4.816.567); o también pueden aislarse a partir de bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas en Clackson et al., Nature 352: 624-628(1991) o Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), por ejemplo. El modificador “monoclonal” no debe interpretarse como que requiera la producción del anticuerpo mediante ningún método particular.
Tal como se usa en el presente documento, “se une selectivamente” o “se une específicamente” se refiere a la capacidad de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo descrito en el presente documento para unirse a una diana, tal como una molécula presente en la superficie celular, con una KD de 10'5 M (10000 nM) o menos, por ejemplo, 10'6 M, 10'7 M, 10'8 M, 10'9 M, 10'1° M, 10'11 M, 10'12 M, o menos, pero no a otra molécula con afinidad similar. La unión específica puede estar influenciada, por ejemplo, por la afinidad y la avidez del agente polipeptídico y la concentración del agente polipeptídico. El experto en la técnica puede determinar las condiciones apropiadas en las que los agentes polipeptídicos descritos en el presente documento se unen selectivamente a las dianas usando cualquier método adecuado, tal como valoración de un agente polipeptídico en un ensayo de unión celular adecuado.
“Sujeto” o “individuo” o “animal” o “paciente” o “mamífero” se refiere a cualquier sujeto, en particular un sujeto mamífero, para el que se desea diagnóstico, pronóstico o terapia. En algunas realizaciones, el sujeto tiene una enfermedad intestinal inflamatoria. En algunas realizaciones, el sujeto tuvo una enfermedad intestinal inflamatoria en algún momento de la vida del sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto tiene una enfermedad autoinmunitaria.
“Mamífero”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier miembro de la clase Mammalia, incluyendo, sin limitación, seres humanos, animales domésticos, animales de granja, animales de zoológico, animales deportivos, mascotas tales como perros, gatos, cobayas, conejos, ratas, ratones, caballos, ganado, vacas; primates tales como simios, monos, orangutanes y chimpancés; cánidos tales como perros y lobos; félidos tales como gatos, leones y tigres; équidos tales como caballos, burros y cebras; animales para alimento tales como vacas, cerdos y ovejas; ungulados tales como ciervos y jirafas; roedores tales como ratones, ratas, hámsteres y cobayas; etc. En determinadas realizaciones, el mamífero es un sujeto humano. El término no denota una edad o un sexo en particular.
Tal como se usa en el presente documento, el término “diana” se refiere a una molécula biológica (por ejemplo, péptido, polipéptido, proteína, lípido, hidrato de carbono) a la que puede unirse selectivamente un dominio polipeptídico que tiene un sitio de unión. La diana puede ser, por ejemplo, una diana intracelular (por ejemplo, una diana proteica intracelular) o una diana de la superficie celular (por ejemplo, una proteína de membrana, una
proteína receptora). Preferiblemente, una diana es una diana de la superficie celular, tal como una proteína de la superficie celular.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “tratar”, “tratamiento”, “que trata” o “mejora” se refieren a tratamientos terapéuticos, en los que el objeto es revertir, aliviar, mejorar, inhibir, ralentizar o detener la progresión o gravedad de un estado asociado con una enfermedad o un trastorno. El término “que trata” incluye reducir o aliviar al menos un efecto o síntoma adverso de un estado, una enfermedad o un trastorno, tal como una enfermedad autoinmunitaria, una infección crónica o un cáncer. El tratamiento es generalmente “eficaz” si se reducen uno o más síntomas o marcadores clínicos. Alternativamente, el tratamiento es “eficaz” si se reduce o detiene la progresión de una enfermedad. Es decir, “tratamiento” incluye no sólo la mejora de los síntomas o marcadores, sino también el cese o al menos la desaceleración del progreso o el empeoramiento de los síntomas que se esperaría en ausencia de tratamiento. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio de uno o más síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, sin empeoramiento) de la enfermedad, retraso o desaceleración de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado patológico y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. El término “tratamiento” de una enfermedad también incluye proporcionar alivio de los síntomas o efectos secundarios de la enfermedad (incluyendo tratamiento paliativo).
Tal como se usa en el presente documento, los términos “administrar” e “introducir” se usan de manera intercambiable y se refieren a la colocación de un agente, tal como un agente que bloquea o inhibe FcRn, en un sujeto mediante un método o una ruta que da como resultado al menos la localización parcial de tales agentes en un sitio deseado, tal como un sitio de inflamación, de modo que se produzca(n) un(os) efecto(s) deseado(s), e incluye, pero no se limita a, inyección, infusión, instilación y administración por inhalación.
El término “cantidad eficaz” tal como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de un agente para bloquear o inhibir FcRn necesaria para aliviar al menos uno o más síntomas de la enfermedad o del trastorno, y se refiere a una cantidad suficiente de composición farmacológica para proporcionar el efecto deseado, por ejemplo, tratar una EII. Por tanto, el término “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad de un agente para bloquear FcRn usando los métodos descritos en el presente documento, que es suficiente para producir un efecto particular cuando se administra a un sujeto típico. Una cantidad eficaz tal como se usa en el presente documento también incluiría una cantidad suficiente para retrasar el desarrollo de un síntoma de la enfermedad, alterar el curso de un síntoma de la enfermedad (por ejemplo, pero sin limitarse a, retrasar la progresión de un síntoma de la enfermedad) o revertir un síntoma de enfermedad. Por tanto, no es posible especificar la “cantidad eficaz” exacta. Sin embargo, para cualquier caso dado, una “cantidad eficaz” apropiada puede determinarla un experto en la técnica usando sólo experimentación de rutina.
FcRn es un receptor de Fc neonatal. Es similar en cuanto a estructura al complejo mayor de histocompatibilidad I (CMH I). El FcRn humano es muy estricto con respecto a su especificidad y se une al Fc humano, pero no al Fc de ratón, de rata, bovino o de oveja. El FcRn puede unirse a dos sitios de la IgG (Sánchez et al. Biochemistry 1999; 38(29):9471-6; Schuck et al., Mol Immunol. 199936(15-16):1117-25; West A.P. y Bjorkman, 2000 Biochemistry 2000 39(32):9698-708). Aunque las IgG de ratón no se unen eficazmente al FcRn humano y, por tanto, tienen una semivida corta en seres humanos (Frodin et al., 1990), la IgG de ratón como inmunocomplejo es capaz de unirse al FcRn humano e inducir la señalización (véase, por ejemplo, la figura 12). Por el contrario, el FcRn de ratón se une a IgG de todas las especies analizadas (Ober et al., Int Immunol. 2001 13(12):1551-9).
La mayoría de las proteínas séricas tienen una semivida en suero corta (aproximadamente 1-2 días). Sin embargo, dos tipos de proteínas séricas, concretamente la albúmina y los anticuerpos de la clase IgG, tienen semividas en suero muy prolongadas. Por ejemplo, la mayoría de las subclases de IgG tienen una semivida de aproximadamente 10-20 días en seres humanos. La región Fc de IgG es necesaria para esta extensión de la semivida. Por tanto, los polipéptidos de IgG truncados que portan sólo la región Fc, y potencialmente también proteínas que portan una secuencia peptídica de unión a FcRn corta (FcBP) (Sockolosky et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2012, 109, 16095 100), también muestran una semivida en suero tan prolongada. Además, cuando la región Fc se fusiona con una pareja de fusión (por ejemplo, una proteína biológicamente activa), esta proteína de fusión con Fc muestra una semivida en suero prolongada debido a su interacción con FcRn.
FcgammaR2a (FcyR2a) es un receptor de Fc clásico para IgG que previamente se ha demostrado que presenta una baja afinidad por IgG por sí solo y, por tanto, se asocia principalmente con interacciones con inmunocomplejos de IgG, es decir, IgG unida a un antígeno. FcyR2a presenta alelismo en el residuo de aminoácido 131, de modo que los seres humanos expresan un residuo His (también conocido como His167 según NM_001136219.1) o Arg (también conocido como Arg167 según NM_001136219.1). La frecuencia alélica difiere entre caucásicos (25 % R/R, 50 % R/H, 25 % H/H) y no caucásicos, tales como asiáticos (5 % R/R, 35 % R/H, 60 % H/H), mostrando la variante His una mayor afinidad por la IgG2 humana, incluso cuando es un monómero.
La variante His131 (HIS131) de FcyR2a es un alelo de riesgo genético para varias enfermedades inmunomediadas, tales como la enfermedad de Kawasaki y la enfermedad intestinal inflamatoria tanto en caucásicos como en no caucásicos, de modo que los individuos con este alelo presentan un mayor riesgo de padecer estas enfermedades. Los inventores han descubierto que además de presentar una mayor afinidad por IgG2, la variante His de FcyR2a
presenta una señalización más fuerte cuando se une a inmunocomplejos de IgG2 e IgG1, y que esto está asociado con una mayor producción de citocinas inflamatorias y una mejora de la presentación tanto de CMH de clase I como de CMH de clase II de antígenos unidos a inmunocomplejos. Entre las citocinas que aumentan por el alelo His131 de FcyR2a (también conocido como His167 según NM_001136219.1) se encuentra la IL-12.
La señalización y presentación de antígeno aumentadas y, por tanto, la activación de células T que se asocia con la unión y señalización excesivas de inmunocomplejos por el alelo His descrito en el presente documento se anula mediante el bloqueo o la eliminación de la expresión de FcRn por las células presentadoras de antígenos, tal como se demuestra en el presente documento. Esto indica que cualquier individuo con el alelo FcyR2a-His131 (también conocido como His167 según NM_001136219.1) presentará una inflamación impulsada por IgG mucho mayor, y que el bloqueo de la inflamación con terapias dirigidas a FcRn puede eliminar esta inflamación. Por tanto, los pacientes con una enfermedad inmunomediada que se caracteriza por niveles de IgG elevados pueden seleccionarse para respuestas potenciadas a la terapia anti-FcRn basándose en su uso del alelo de FcyR2a. En algunas realizaciones, se predeciría que los sujetos con niveles elevados de IgG antibacteriana y que tienen el alelo FcyR2a-His131 (también conocido como His167 según NM_001136219.1) responderían a terapias dirigidas a FcRn, tal como se describe en el presente documento.
Por consiguiente, en el presente documento se describen, en algunos aspectos, ensayos para usar los niveles de IgG elevados para seleccionar pacientes para la terapia. En el presente documento, en un aspecto, se proporciona un ensayo que comprende proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene una enfermedad o un trastorno inmunomediado que se caracteriza por niveles aumentados de IgG (por ejemplo, enfermedad intestinal inflamatoria) y seleccionar al sujeto para una primera terapia. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano. En algunas realizaciones, al sujeto se le administra una composición que comprende la primera terapia. Al sujeto al que se le administra la composición que comprende la primera terapia puede administrársele opcionalmente una composición que comprende una segunda terapia, o bien de manera simultánea o bien secuencial.
También se describen en el presente documento, en algunos aspectos, ensayos para usar los niveles de IgG elevados y el uso del alelo de FcyR2a para seleccionar pacientes para terapias anti-FcRn. En el presente documento se proporciona un ensayo que comprende proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene una enfermedad inmunomediada que se caracteriza por niveles aumentados de IgG total, isotipos de IgG específicos o IgG específica de antígeno (por ejemplo, anti-desmogleína, anti-insulina, anti-flagelina), someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a expresado por el sujeto y seleccionar al sujeto para una primera terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 (también conocido como Arg167 según NM_001136219.1) de FcyR2a, y seleccionar al sujeto para una segunda terapia si el sujeto expresa un alelo His131 (también conocido como alelo His167 según NM_001136219.1) de FcyR2a. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano. En algunas realizaciones, al sujeto se le administra una composición que comprende la primera terapia. Al sujeto al que se le administra la composición que comprende la primera terapia también puede administrársele una composición que comprende la segunda terapia, o bien de manera simultánea o bien secuencial.
En el presente documento se describe además un ensayo para seleccionar una terapia para un sujeto que se sospecha que tiene o que tiene una enfermedad inmunomediada y, opcionalmente, administrar la terapia. El ensayo incluye proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene o que se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada, someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a y seleccionar al sujeto para una primera terapia si el sujeto expresa un alelo Arg131 de FcyR2a, y seleccionar una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a. En algunas realizaciones, al sujeto al que se le prescribe la primera terapia también puede prescribírsele la segunda terapia.
En diversas realizaciones de los ensayos descritos en el presente documento, los ensayos comprenden además prescribir una primera terapia o una combinación de una primera y una segunda terapia al sujeto, si el sujeto expresa el alelo Arg131 de FcyR2a y niveles de IgG aumentados, o prescribir una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a (y niveles de IgG opcionalmente aumentados). En algunas realizaciones, el sujeto tiene o se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada.
También se describe en el presente documento un ensayo para seleccionar una terapia para un sujeto que tiene un estado patológico y, opcionalmente, administrar la terapia. El ensayo comprende proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene el estado patológico, someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a expresado por el sujeto y seleccionar al sujeto para una primera terapia y opcionalmente una segunda terapia, si el sujeto expresa un alelo Arg131 de FcyR2a y seleccionar una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a. En diversas realizaciones, el estado patológico es cualquier estado patológico que esté asociado con la expresión del alelo His131 de FcyR2a. En algunas realizaciones, el estado patológico es una cualquiera o más enfermedades de las gónadas, enfermedades del sistema nervioso central, enfermedades del ojo y enfermedades del cerebro, o una combinación de las mismas.
También se proporcionan en el presente documento, en algunos aspectos, métodos para tratar enfermedades inmunomediadas, inhibir enfermedades inmunomediadas y/o reducir la gravedad de las enfermedades inmunomediadas en un sujeto que lo necesita. Los métodos comprenden proporcionar una muestra biológica a partir
de un sujeto que tiene una enfermedad o un trastorno inmunomediado que se caracteriza por niveles aumentados de IgG total, isotipo o IgG específica de antígeno, someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a expresado por el sujeto, seleccionar al sujeto para la primera terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 (también conocido como Arg167 según NM_001136219.1) de FcyR2a y seleccionar al sujeto para una segunda terapia si el sujeto expresa un alelo His131 (también conocido como alelo His167 según NM_001136219.1) de FcyR2a, y administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende una primera terapia y opcionalmente una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 de FcyR2a o administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 de FcyR2a para tratar, inhibir o reducir la gravedad de la enfermedad inmunomediada en el sujeto.
Además, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar enfermedades inmunomediadas, inhibir enfermedades inmunomediadas y/o reducir la gravedad de las enfermedades inmunomediadas en un sujeto que lo necesita. Los métodos comprenden proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene o que se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada, someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a y seleccionar al sujeto para la primera terapia si el sujeto expresa un alelo Arg131 de FcyR2a y seleccionar una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a, y administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende una primera terapia y opcionalmente una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 de FcyR2a o administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende una segunda terapia si el sujeto expresa el alelo Arg131 de FcyR2a para tratar, inhibir o reducir la gravedad de la enfermedad inmunomediada en el sujeto. El alelo His131 también se conoce como alelo His167 según NM_001136219.1. El alelo Arg131 también se conoce como alelo Arg167 según NM_001136219.1.
También se proporciona en el presente documento un ensayo para evaluar la capacidad de respuesta a la segunda terapia de un sujeto que tiene una enfermedad inmunomediada que está sometiéndose a la segunda terapia. En diversas realizaciones, la segunda terapia es la terapia anti-FcRn, tal como se describe en el presente documento. El ensayo comprende proporcionar una muestra biológica a partir de un sujeto que tiene una enfermedad inmunomediada que está sometiéndose a terapia anti-FcRn y someter a ensayo la muestra para determinar los niveles de IgG en la muestra en relación con un valor de referencia. En algunas realizaciones, en sujetos que se someten a la terapia anti-FcRn, una disminución en los niveles de IgG total, isotipo y/o específica de antígeno en relación con el valor de referencia puede ser indicativa de que un sujeto responde a la terapia anti-FcRn. Alternativamente, la ausencia de cambio en los niveles de IgG o un aumento en los niveles de IgG en el sujeto que se somete a la terapia anti-FcRn puede ser indicativo de que el sujeto no responde a la terapia anti-FcRn.
En algunas realizaciones, la enfermedad inmunomediada incluye, pero no se limita a, una cualquiera o más de gammapatía monoclonal de significado indeterminado (GMSI), enfermedad intestinal inflamatoria, pénfigo o penfigoide, miastenia grave, anemia hemolítica autoinmunitaria, enfermedad de Kawasaki, mieloma múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), cirrosis del hígado, hepatitis crónica, infección crónica, esclerosis múltiple (EM), macroglobulinemia, hepatitis viral, mononucleosis, daño renal (síndrome nefrótico), enfermedad celíaca, reacciones alérgicas, asma, dermatitis atópica, cáncer, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), trombocitopenia autoinmunitaria, neutropenia inmunitaria, síndrome antifosfolipídico, enfermedad asociada a ANCA, polimiositis, miastenia grave, diabetes, tiroiditis autoinmunitaria, neuritis óptica, oftalmopatía de Graves, síndrome de Guillian-Barre, polineuropatía crónica, leucemia mieloide aguda o una combinación de las mismas.
En algunas realizaciones, el sujeto se ha sometido o está sometiéndose a tratamiento para la enfermedad intestinal inflamatoria. En algunos aspectos, el sujeto no se ha sometido o no está sometiéndose actualmente a tratamiento para la enfermedad intestinal inflamatoria. En diversas realizaciones, la EII es colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, colitis isquémica, colitis por desviación, enfermedad de Behget, colitis indeterminada o una combinación de las mismas.
En una realización, el sujeto seleccionado para la segunda terapia expresa un alelo His131 de FcyR2a. El sujeto puede ser heterocigótico para el alelo His131 de FcyR2a u homocigótico para el alelo His131 de FcyR2a. El alelo His131 también se conoce como alelo His167 según Nm_001136219.1.
En diversas realizaciones, la primera terapia es uno cualquiera o más de agentes antiinflamatorios tales como sulfasalazina, inmunosupresores, tales como corticosteroides, inmunomoduladores, tales como mercaptopurina, metotrexato o ciclosporina, terapias biológicas o inhibidores de molécula pequeña de rutas biológicas, tales como inhibidores de cinasas.
En algunos aspectos, la primera terapia en sujetos con EII es uno o más de los agentes antiinflamatorios, agentes inmunosupresores, antibióticos, agentes antidiarreicos, laxantes, analgésicos, suplementos de hierro, modificaciones dietéticas, suplementos de vitamina B-12, suplementos de calcio, suplementos de vitamina D o una combinación de los mismos.
En diversas realizaciones, la segunda terapia comprende la terapia anti-FcRn tal como se describe en el presente documento. La terapia anti-FcRn puede comprender un agente que bloquea FcRn o un agente que reduce o inhibe la expresión de FcRn. En algunas realizaciones, los agentes que bloquean FcRn pueden ser uno cualquiera o más de un péptido, una proteína, una molécula pequeña, un ácido nucleico, un aptómero, un oligonucleótido, un
anticuerpo o una combinación de los mismos. El ácido nucleico puede ser un ARNip específico de FcRn.
En diversas realizaciones, el anticuerpo para uso en la terapia anti-FcRn reconoce y se une específicamente a FcRn y se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado y anticuerpo de cadena sencilla. En diversas realizaciones, el anticuerpo específico para FcRn inhibe la señalización medicada por FcRn.
En algunas realizaciones, el agente que bloquea FcRn es un agente biespecífico (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico) que comprende sitios de unión para receptores de Fcy y FcRn. En algunas realizaciones, un agente se dirige a FcRn y un segundo agente diferente se dirige a los receptores de Fcy, y los dos agentes pueden administrarse simultánea o secuencialmente.
En algunas realizaciones, el agente que bloquea FcRn es un agente biespecífico (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico) que comprende sitios de unión para IgG y receptores de Fcy.
En algunas realizaciones, el agente que bloquea FcRn es un agente biespecífico (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico) que comprende sitios de unión para IgG y FcRn.
En algunas realizaciones, el agente que bloquea FcRn es una porción de Fc recombinante de IgG o una porción biológicamente activa de la misma o un proteomimético de la misma. La porción de Fc de IgG o una porción biológicamente activa de la misma puede ser de mamífero. La porción de Fc de IgG o una porción biológicamente activa de la misma puede ser humana.
En algunas realizaciones, el agente que bloquea FcRn es un inhibidor de SYK. Tal como se usa en el presente documento, un “inhibidor de SYK” inhibe o reduce la señalización mediada por SYK.
También se proporciona en el presente documento un sistema para determinar la capacidad de respuesta de un sujeto a la terapia anti-FcRn en el que se obtiene una muestra a partir de un sujeto diagnosticado con una enfermedad inmunomediada. El sistema comprende un analizador de muestras configurado para producir una señal para el ARNm que codifica para los isotipos de IgG presentes en la muestra obtenida a partir del sujeto y un subsistema informático programado para calcular, basándose en los isotipos de ARNm de IgG, si la señal es mayor o no mayor que un valor de referencia.
En el presente documento se proporciona además un sistema para determinar la capacidad de respuesta de un sujeto a la terapia anti-FcRn en el que se obtiene una muestra a partir de un sujeto diagnosticado con una enfermedad inmunomediada. El sistema incluye un analizador de muestras configurado para producir una señal para los isotipos de IgG presentes en la muestra obtenida a partir del sujeto y un subsistema informático programado para calcular, basándose en los isotipos de IgG, si la señal es mayor o no mayor que un valor de referencia.
En diversas realizaciones, el subsistema informático se programa para comparar el ARNm o la proteína para determinar la probabilidad de la capacidad de respuesta del sujeto a la terapia anti-FcRn basándose en un algoritmo que clasifica al sujeto como que responde si el nivel de IgG disminuye y como que no responde a la terapia anti-FcRn si los niveles de isotipos de IgG no disminuyen. En algunas realizaciones, el valor de referencia es la media o la mediana de los niveles de expresión de isotipos de IgG de una población de sujetos que no tienen enfermedad inmunomediada. En algunas realizaciones, el valor de referencia es la media o la mediana de los niveles de expresión de isotipos de IgG de una población de sujetos que tienen una enfermedad inmunomediada y responden a la terapia anti-FcRn.
También se proporciona en el presente documento un kit de diagnósti
sujeto que expresa el alelo His131 de FcyR2a (por ejemplo, un sujeto con enfermedad inmunomediada) responda a la terapia anti-FcRn. El kit incluye, por ejemplo, aproximadamente 10 sondas que comprenden una combinación de sondas o cebadores marcados detectables para todos los isotipos de IgG o IgG específicos y un producto de programa informático descrito en el presente documento. El kit puede incluir más de 10 sondas o menos de 10 sondas.
También se proporciona en el presente documento un kit de diagnósti
sujeto que expresa el alelo His131 de FcyR2a (por ejemplo, un sujeto con enfermedad inmunomediada) responda a la terapia anti-FcRn. El kit incluye, por ejemplo, aproximadamente 10 sondas que comprenden una combinación de anticuerpos o ARNip marcados detectables que se unen a la IgG total o a los isotipos de IgG específicos y un producto de programa informático descrito. El kit puede incluir más de 10 sondas o menos de 10 sondas.
En algunas realizaciones, la muestra biológica es sólida, semisólida o líquida. En una realización, la muestra es tejido (Baker K, et al., Immunity 2013 39(6):1095-107). En diversas realizaciones, la muestra es suero o sangre, secreciones corporales de la nariz, orofaringe, tracto gastrointestinal, tracto biliar o genitourinario, biopsias tisulares de cualquier órgano, un líquido tisular tal como líquido cefalorraquídeo, ocular o sinovial, o una combinación de los mismos.
Análisis del alelo de FcyR2a y expresión de IgG
En diversas realizaciones, los ensayos, métodos y sistemas descritos en el presente documento comprenden analizar el alelo de FcyR2a en una muestra biológica y/o el nivel de expresión de IgG total, los niveles de isotipos específicos de IgG y/o los niveles de IgG específica de antígeno en una muestra biológica.
En diversas realizaciones de los ensayos y métodos descritos en el presente documento, analizar la muestra incluye detectar el alelo de FcyR2a con un anticuerpo específico del alelo de FcyR2a (por ejemplo, un anticuerpo que es específico para un epítopo que comprende el alelo His131 de FcyR2a o un anticuerpo que es específico para un epítopo que comprende el alelo Arg131 de FcyR2a (por ejemplo MAb41H16) (Gosselin, EJ, Brown, MF, Anderson, CL, Zipf, TF, Guyre, PM. The monoclonal antibody 41H16 detects the Leu 4 responder form of human FcgRII. J Immunol 1990. 144:1817-1822). En algunas realizaciones de los ensayos y métodos descritos en el presente documento, analizar la muestra incluye detectar el nivel de IgG total, los isotipos de IgG o los niveles de IgG específica de antígeno. En diversas realizaciones, los anticuerpos son uno cualquiera o más de un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos y un anticuerpo de cadena sencilla. En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
Tal como resultará evidente para un experto en la técnica, pueden usarse métodos de secuenciación de ADN para analizar el alelo de FcyR2a en la muestra. Los métodos de secuenciación de ADN incluyen, pero no se limitan a, secuenciación de Maxam-Gilbert, métodos de terminación de cadena (secuenciación de Sanger), secuenciación indiscriminada (Shotgun), PCR en puente, secuenciación masiva de firmas paralelas (MPSS), secuenciación Polony, pirosecuenciación 454, secuenciación Illumina (Solexa), secuenciación SOLiD, secuenciación por semicondutores Ion Torrent, secuenciación de nanobolas de ADN, secuenciación de molécula única de Heliscope, secuenciación de molécula única en tiempo real (SMRT), secuenciación de ADN de Nanopore, secuenciación de DN de corrientes de túnel, secuenciación por hibridación, secuenciación con espectrometría de masas, secuenciación de Sanger microfluídica, secuenciación RNAP o cualquier combinación de los mismos. Además, a medida que se desarrollan nuevos métodos de secuenciación, estos pueden aplicarse al análisis del alelo de FcyR2a en una muestra biológica, tal como lo entenderá un experto en la técnica.
En algunas realizaciones de los ensayos y métodos descritos en el presente documento, analizar la muestra incluye detectar el ARNm que codifica para un alelo específico de FcyR2a con un polinucleótido capaz de hibridarse con ARNm específico para el alelo de FcyR2a en condiciones de hibridación rigurosas. En una realización, el polinucleótido se hibrida con el alelo His131 de FcyR2a pero no con el alelo Arg131 de FcyR2a. En otra realización, el polinucleótido se hibrida con el alelo Arg131 de FcyR2a pero no con el alelo His131 de FcyR2a.
En algunas realizaciones de los ensayos y métodos descritos en el presente documento, analizar la muestra incluye medir los niveles de ARNm que codifica para los isotipos de IgG presentes en la muestra con un polinucleótido capaz de hibridarse con ARNm específico para cada isotipo de IgG en condiciones de hibridación rigurosas.
Las técnicas que pueden usarse para evaluar la cantidad de ácido nucleico que codifica para IgG, presente en la muestra incluyen, pero no se limitan, hibridación in situ (por ejemplo, Angerer (1987) Meth. Enzymol 152: 649). Los ensayos basados en hibridación preferidos incluyen, pero no se limitan a, métodos tradicionales de “sonda directa” tales como transferencias de tipo Southern o hibridación in situ (por ejemplo, FISH y FISH más SKY) y métodos de “sonda comparativa” tales como la hibridación genómica comparativa (c Gh ), por ejemplo, CGH basada en ADNc o basada en oligonucleótidos. Los métodos pueden usarse en una amplia variedad de formatos que incluyen, pero no se limitan a, métodos ligados al sustrato (por ejemplo, membrana o vidrio) o enfoques basados en matrices. Las sondas que pueden usarse para el análisis de ácidos nucleicos se marcan normalmente, por ejemplo, con radioisótopos o indicadores fluorescentes. Las sondas preferidas son lo suficientemente largas como para hibridarse específicamente con el/los ácido(s) nucleico(s) diana en condiciones rigurosas. El intervalo de tamaño preferido es de desde aproximadamente 200 bases hasta aproximadamente 1000 bases. Se describen protocolos de hibridación adecuados para su uso con los métodos de la presente divulgación, por ejemplo, en Albertson (1984) EMBO J. 3: 1227-1234; Pinkel (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 9138-9142; n.° de pub. EPO 430.402; Methods in Molecular Biology, vol. 33: In situ Hybridization Protocols, Choo, ed., Humana Press, Totowa, N.J. (1994), Pinkel et al. (1998) Nature Genetics 20: 207-211 y/o Kallioniemi (1992) Proc. Natl Acad Sci USA 89:5321-5325 (1992).
Los métodos de amplificación “cuantitativa” se conocen bien por los expertos en la técnica. Por ejemplo, la PCR cuantitativa implica coamplificar simultáneamente una cantidad conocida de una secuencia de control usando los mismos cebadores. Esto proporciona un patrón interno que puede usarse para calibrar la reacción de PCR. Los protocolos detallados para la PCR cuantitativa se proporcionan en Innis et al. (1990) PCR Protocols, A Guide to Methods and Applications, Academic Press, Inc. N.Y.). La medición del número de copias de ADN en los loci de microsatélites usando análisis por PCR cuantitativa se describe en Ginzonger et al. (2000) Cancer Research 60:5405-5409. La secuencia de ácido nucleico conocida para los genes es suficiente para permitir que un experto en la técnica seleccione de manera rutinaria cebadores para amplificar cualquier porción del gen. La PCR cuantitativa fluorogénica también puede usarse en los métodos de la presente descripción. En la PCR cuantitativa fluorogénica, la cuantificación se basa en la cantidad de señales de fluorescencia, por ejemplo, TaqMan y sybr green.
Otros métodos de amplificación adecuados incluyen, pero no se limitan a, reacción en cadena de la ligasa (LCR) (véanse Wu y Wallace (1989) Genomics 4: 560, Landegren et al. (1988) Science 241:1077y Barringer et al. (1990) Gene 89: 117), amplificación de la transcripción (Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 1173), replicación de secuencia autosostenida (Guatelli et al. (1990) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 87: 1874), PCR puntual y Pc R con adaptador de ligador, etc.
Puede usarse una prueba de la t de Student bilateral con variación desigual para medir las diferencias entre la expresión del paciente de IgG total, isotipos de IgG y/o niveles de IgG específica de antígeno y una muestra normal, o la propia muestra del paciente (control emparejado), o una referencia generada por un algoritmo informático que agrupa muchas muestras de control. Puede lograrse una diferencia significativa cuando el valor de p sea igual o menor de 0,05. La expresión de ARNm de IgG también puede usarse para determinar el pronóstico y la respuesta del paciente a la terapia anti-FcRn, donde la expresión de ARNm de IgG se separa en dos grupos: aquellos con expresión de IgG alta y aquellos con expresión de IgG baja o no detectable. Los grupos pueden separarse por la mediana de la expresión de IgG y representarse gráficamente en función del tiempo con una curva de Kaplan-Meier.
Los métodos adecuados para someter a ensayo el nivel de expresión de IgG total o isotipos de IgG incluyen, pero no se limitan a, el uso de secuenciación de ADN, hibridación genómica comparativa (CGH), CGH de matriz (aCGH), análisis de SNP, ensayo de expresión de ARNm, RT-PCR, PCR en tiempo real o una combinación de los mismos. En diversas realizaciones, el ensayo para detectar el ácido nucleico que codifica para, o los niveles de proteína de, IgG total o isotipos de IgG, es uno cualquiera o más de análisis de transferencia de tipo Northern, análisis de transferencia de tipo Southern, reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR), reacción en cadena de la polimerasa (PCR), ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), radioinmunoensayo (RIA), electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE), análisis de inmunotransferencia de tipo Western o una combinación de los mismos.
Un experto en la técnica puede producir anticuerpos, tanto policlonales como monoclonales, o bien por sí mismos usando métodos bien conocidos o bien pueden fabricarlos proveedores de servicios que se especializan en la producción de anticuerpos basados en secuencias de proteínas conocidas. En la presente divulgación, se conocen las secuencias de proteínas y, por tanto, la producción de anticuerpos contra ellas es una cuestión de experimentación rutinaria.
Por ejemplo, la producción de anticuerpos monoclonales puede realizarse usando el método de hibridoma tradicional inmunizando en primer lugar ratones con un antígeno que puede ser una proteína aislada de elección o un fragmento de la misma (por ejemplo, un fragmento que comprende el alelo His131 de FcyR2a o un fragmento que comprende el alelo Arg131 de FcyR2a, o una IgG o un fragmento de la misma o una variante de la misma) y elaborando líneas celulares de hibridoma que produzcan cada una un anticuerpo monoclonal específico. Los anticuerpos secretados por los diferentes clones se analizan luego para determinar su capacidad para unirse al antígeno usando, por ejemplo, ELISA o ensayo de microalineamiento de antígeno, o técnicas de inmunotransferencia puntual. Los anticuerpos que son más específicos para la detección de la proteína de interés pueden seleccionarse usando métodos de rutina y usando el antígeno usado para la inmunización y otros antígenos como controles. El anticuerpo que detecta más específicamente el antígeno y la proteína deseados, y ningún otro antígeno o proteína, se selecciona para los ensayos y métodos descritos en el presente documento.
Los mejores clones pueden hacerse crecer entonces indefinidamente en un medio de cultivo celular adecuado. También pueden inyectarse en ratones (en la cavidad peritoneal, que rodea el intestino) donde producen un líquido ascítico rico en anticuerpos a partir del cual pueden aislarse y purificarse los anticuerpos. Los anticuerpos pueden purificarse usando técnicas que son bien conocidas por los expertos en la técnica.
En los métodos y ensayos de la presente divulgación, la presencia de un alelo específico de FcyR2a o la presencia y/o el nivel de IgG se determina usando anticuerpos específicos para el alelo de FcyR2a o para IgG y detectando la unión inmunoespecífica de cada anticuerpo a su respectivo marcador relacionado.
Puede utilizarse cualquier método de inmunoensayo adecuado, incluyendo los que están disponibles comercialmente. En este caso no se requiere una descripción extensa de las técnicas de inmunoensayo conocidas, ya que son conocidas por los expertos en la técnica. Las técnicas de inmunoensayo adecuadas típicas incluyen inmunoensayos ligados a enzimas (ELISA), radioinmunoensayos (RIA), ensayos de unión competitiva, ensayos homogéneos, ensayos heterogéneos, etc. Se revisan diversos métodos de inmunoensayo conocidos, por ejemplo, en Methods in Enzymology, 70, págs. 30-70 y 166-198 (1980).
En los ensayos de la presente divulgación, pueden usarse formatos de ensayo de “tipo sándwich”. Algunos ejemplos de tales ensayos de tipo sándwich se describen en la patente estadounidense n.° 4.168.146 de Grubb et al. y la patente estadounidense n.° 4.366.241 de Tom et al. Una técnica alternativa es el ensayo de “tipo competitivo”. En un ensayo competitivo, la sonda marcada generalmente se conjuga con una molécula que es idéntica o análoga al analito. Por tanto, la sonda marcada compite con el analito de interés por el material receptivo disponible. Los ensayos competitivos se usan normalmente para la detección de analitos tales como haptenos, siendo cada hapteno monovalente y capaz de unirse sólo a una molécula de anticuerpo. Se describen ejemplos de dispositivos de inmunoensayo competitivo en la patente estadounidense n.° 4.235.601 de Deutsch et al., la patente estadounidense
n.° 4.442.204 de Liotta y la patente estadounidense n.° 5.208.535 de Buechler et al.
Los anticuerpos pueden marcarse. En algunas realizaciones, el anticuerpo de detección se marca mediante unión covalente a una enzima, se marca con un metal o compuesto fluorescente, se marca con un compuesto quimioluminiscente. Por ejemplo, el anticuerpo de detección puede marcarse con catalasa y la conversión usa una composición de sustrato colorimétrico que comprende yoduro de potasio, peróxido de hidrógeno y tiosulfato de sodio; la enzima puede ser alcohol deshidrogenasa y la conversión usa una composición de sustrato colorimétrico que comprende un alcohol, un indicador de pH y un regulador de pH, en el que el indicador de pH es rojo neutro y el regulador de pH es glicina-hidróxido de sodio; la enzima también puede ser hipoxantina oxidasa y la conversión usa una composición de sustrato colorimétrico que comprende xantina, una sal de tetrazolio y ácido 4,5-dihidroxi-1,3-bencenodisulfónico. En una realización, el anticuerpo de detección se marca mediante unión covalente a una enzima, se marca con un metal o compuesto fluorescente o se marca con un compuesto quimioluminiscente.
Pueden usarse marcadores directos e indirectos en los inmunoensayos. Un marcador directo puede definirse como una entidad que, en su estado natural, es visible a simple vista o con la ayuda de un filtro óptico y/o estimulación aplicada, por ejemplo, luz ultravioleta, para promover la fluorescencia. Los ejemplos de marcadores coloreados que pueden usarse incluyen partículas de sol metálico, partículas de sol de oro, partículas de sol de colorante, partículas de látex teñidas o colorantes encapsulados en liposomas. Otros marcadores directos incluyen radionúclidos y restos fluorescentes o luminiscentes. También pueden usarse marcadores indirectos tales como enzimas según la presente divulgación. Se conocen diversas enzimas para su uso como marcadores tales como, por ejemplo, fosfatasa alcalina, peroxidasa del rábano, lisozima, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa y ureasa. Para una descripción detallada de enzimas en inmunoensayos, véase Engvall, Enzyme Immunoassay ELISA and EMIT, Methods of Enzymology, 70, 419-439 (1980).
El anticuerpo puede adherirse a una superficie. Los ejemplos de superficies útiles sobre las que puede unirse el anticuerpo con el fin de detectar el antígeno deseado incluyen nitrocelulosa, PVDF, poliestireno y nailon. La superficie o el soporte también puede ser un soporte poroso (véase, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 7.939.342). Los ensayos pueden realizarse en diversos formatos de dispositivos de ensayo, incluyendo los descritos en las patentes estadounidenses n.os 4.906.439; 5.051.237 y 5.147.609 de PB Diagnostic Systems, Inc. Valores de referencia
En diversas realizaciones de los ensayos y métodos descritos en el presente documento, el valor de referencia se basa en el nivel de expresión de, por ejemplo, IgG total, subtipos de IgG o niveles de IgG específica de antígeno. En una realización, el nivel de expresión es el nivel en una muestra obtenida a partir de un sujeto que tiene una enfermedad inmunomediada. En otra realización, el nivel de expresión es el nivel en una muestra a partir de un sujeto que no tiene una enfermedad inmunomediada. En algunas realizaciones, el valor de referencia es la media o mediana del nivel de expresión de IgG total o subtipos de IgG en una población de sujetos que no tienen enfermedad inmunomediada.
En otras realizaciones, el valor de referencia es la media o mediana del nivel de expresión de IgG total, subtipos de IgG o niveles de IgG específica de antígeno en una población de sujetos que tienen enfermedades inmunomediadas pero no se seleccionan para terapia anti-FcRn (por ejemplo, sujetos con EII que no expresan el alelo His131 de FcyR2a). En otras realizaciones, el valor de referencia es la media o mediana del nivel de expresión de IgG total, subtipos de IgG o niveles de IgG específica de antígeno en una población de sujetos que tienen EII y responden a la terapia anti-FcRn. En algunas realizaciones, el valor de referencia que comprende la población de sujetos que tienen enfermedad inmunomediada y responden a la terapia anti-FcRn muestra una expresión indetectable de IgG total (o subtipos de IgG) o muestra una expresión reducida de IgG total (o subtipos de IgG e IgG específica de antígeno). En realizaciones adicionales, el valor de referencia es el nivel de expresión de IgG en una muestra obtenida a partir del sujeto de un punto temporal diferente (por ejemplo, anterior), tal como durante el diagnóstico, antes del tratamiento, después del tratamiento o una combinación de los mismos.
En diversas realizaciones, el nivel de expresión de IgG en el sujeto diagnosticado con enfermedad inmunomediada en la que el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a en comparación con el valor de referencia aumenta en al menos o aproximadamente el 10 %, el 20 %, el 30 %, el 40 %, el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 %, el 90 % o el 100 %. En diversas realizaciones, el nivel de expresión de IgG en el sujeto diagnosticado con una enfermedad inmunomediada en comparación con el valor de referencia aumenta en al menos o aproximadamente 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 25 veces, 30 veces, 35 veces, 40 veces, 45 veces, 50 veces, 55 veces, 60 veces, 65 veces, 70 veces, 75 veces, 80 veces, 85 veces, 90 veces, 95 veces, 100 veces o más.
En diversas realizaciones, se considera que un sujeto responde a la terapia anti-FcRn si el nivel de expresión de IgG en una muestra obtenida a partir de un sujeto sometido a terapia anti-FcRn se reduce en comparación con el valor de referencia en al menos o aproximadamente el 10 %, el 20 %, el 30 %, el 40 %, el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 %, el 90 % o el 100 %. En diversas realizaciones, el nivel de expresión de IgG en el sujeto diagnosticado con una enfermedad inmunomediada en comparación con el valor de referencia aumenta en al menos o aproximadamente 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 25 veces, 30 veces, 35 veces, 40 veces,
45 veces, 50 veces, 55 veces, 60 veces, 65 veces, 70 veces, 75 veces, 80 veces, 85 veces, 90 veces, 95 veces, 100 veces o más.
Terapias
Tal como se describe en el presente documento, en algunas realizaciones, a los pacientes con enfermedades inmunomediadas que expresan el alelo His131 de FcyR2a se les pueden administrar cantidades eficaces de composiciones que comprenden agentes anti-FcRn para tratar la enfermedad inmunomediada, inhibir la enfermedad inmunomediada o reducir la gravedad de la enfermedad inmunomediada en los pacientes. En diversas realizaciones, los agentes anti-FcRn pueden comprender un agente que bloquea FcRn o un agente que reduce o inhibe la expresión de FcRn, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, los agentes que bloquean FcRn pueden ser uno cualquiera o más de un péptido, una proteína, una molécula pequeña, un ácido nucleico, un aptómero, un oligonucleótido, un anticuerpo o una combinación de los mismos. El ácido nucleico puede ser un ARNip específico de FcRn.
En algunos aspectos, el agente anti-FcRn en la composición incluye, pero no se limita a, uno cualquiera o más anticuerpos (“anticuerpos” incluye porciones de unión a antígeno de anticuerpos, tales como péptidos de unión a antígeno o epítopo, parátopos, CDR funcionales; anticuerpos recombinantes; anticuerpos quiméricos; tricuerpos; midicuerpos; o derivados, análogos, variantes, porciones de unión a antígeno o fragmentos de unión a antígeno de los mismos), agentes de unión a proteínas, moléculas pequeñas, proteínas recombinantes, péptidos, aptómeros, avímeros y derivados de unión a proteínas, porciones o fragmentos de los mismos, o combinaciones de los mismos. Los oligonucleótidos antisentido representan otra clase de agentes que son útiles en las composiciones y los métodos descritos en el presente documento, particularmente como antagonistas de FcRn. Esta clase de agentes y los métodos para prepararlos y usarlos se conocen bien en la técnica, al igual que las moléculas de ribozima y miARN. Véase, por ejemplo, el documento PCT US2007/024067 para una descripción detallada. Alternativamente, en algunas realizaciones de las composiciones y métodos descritos en el presente documento, el agente anti-FcRn incluye Fc recombinante o conjugados, o proteína o anticuerpo, ARN de interferencia pequeño específico para o dirigido al ARNm de FcRn, y ARN antisentido que se hibrida con el ARNm de FcRn, por ejemplo.
Otros agentes para su uso en las composiciones y los métodos descritos en el presente documento que bloquean FcRn incluyen, por ejemplo, anticuerpos contra FcRn, específicamente reactivos o que se unen específicamente a FcRn. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo bloqueante y puede ser cualquiera de un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo de cadena sencilla.
En algunas realizaciones, el agente es un agente biespecífico que comprende sitios de unión para receptores de Fcy y FcRn. En algunas realizaciones, un agente se dirige a FcRn y un segundo agente diferente se dirige a los receptores de Fcy, y los dos agentes pueden administrarse simultánea o secuencialmente.
En algunas realizaciones, el agente es un agente biespecífico y comprende sitios de unión para IgG y receptores de Fcy. En algunas realizaciones, el agente es un agente biespecífico y comprende sitios de unión para IgG y FcRn. En diversas realizaciones, pueden dirigirse distintos agentes a IgG, receptores de Fcy y FcRn, y cada uno de estos agentes puede administrarse secuencial o simultáneamente.
En algunas realizaciones, el agente es una porción de Fc recombinante de IgG o una porción biológicamente activa de la misma o un proteomimético de la misma que se une a FcRn. La porción de Fc o una porción biológicamente activa de la misma puede ser de mamífero. La porción de Fc o una porción biológicamente activa de la misma puede ser humana.
Tal como se usa en el presente documento, un anticuerpo “bloqueante” o un anticuerpo “antagonista” es uno que inhibe o reduce la actividad biológica del/de los antígeno(s) al/a los que se une. Por ejemplo, un anticuerpo antagonista o bloqueante de FcRn se une a FcRn e inhibe o reduce la función y/o las interacciones de FcRn. En una realización, el anticuerpo monoclonal que se une específicamente a FcRn es DVN24 (Christianson et al., Landes Bioscience 2012 vol 4:2 págs. 208-216). En una realización, el DVN24 es humanizado y está madurado por afinidad. Pueden usarse ensayos de unión sencillos para seleccionar o detectar agentes que se unen a FcRn. Además, los agentes que bloquean o inhiben FcRn para su uso en las composiciones y los métodos descritos en el presente documento, incluyendo peptidomiméticos de FcRn recombinantes, pueden identificarse, por ejemplo, transfectando células con vectores de expresión que expresan FcRn o porciones de los mismos; poniendo en contacto las células con un agente; lisando las células; y caracterizando las interacciones de FcRn en comparación con las células que no se han puesto en contacto con el agente. Las células pueden caracterizarse usando, por ejemplo, coinmunoprecipitación.
Otra variación de los ensayos para determinar la unión de una proteína bloqueante de FcRn es mediante el uso de métodos de biosensores de afinidad. Tales métodos pueden basarse en el efecto piezoeléctrico, electroquímica o métodos ópticos, tales como elipsometría, guía de ondas ópticas y resonancia de plasmón superficial (SPR). Por ejemplo, la eficacia de un ARNip sobre la expresión de FcRn puede monitorizarse usando métodos conocidos en la
técnica tales como RT-PCR cuantitativa con cebadores oligonucleotídicos específicos para cada gen respectivamente, o ELISA para FcRn a partir de una muestra de sangre. Alternativamente, la población de células sanguíneas puede determinarse mediante análisis de citometría de flujo usando los marcadores característicos de poblaciones y subpoblaciones particulares conocidas en la técnica o descritas en el presente documento.
El término “cantidad eficaz” tal como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de un agente para bloquear o inhibir FcRn necesaria para aliviar al menos uno o más síntomas de la enfermedad o el trastorno, y se refiere a una cantidad suficiente de composición farmacológica para proporcionar el efecto deseado, por ejemplo, tratar una EII. Por tanto, el término “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad de un agente para bloquear FcRn usando los métodos descritos en el presente documento, que es suficiente para producir un efecto particular cuando se administra a un sujeto típico. Una cantidad eficaz tal como se usa en el presente documento también incluiría una cantidad suficiente para retrasar el desarrollo de un síntoma de la enfermedad, alterar el curso de un síntoma de la enfermedad (por ejemplo, pero sin limitarse a, retrasar la progresión de un síntoma de la enfermedad), o revertir un síntoma de enfermedad. Por tanto, no es posible especificar la “cantidad eficaz” exacta. Sin embargo, para cualquier caso dado, una “cantidad eficaz” apropiada puede determinarla un experto en la técnica usando sólo experimentación de rutina.
Las cantidades eficaces, la toxicidad y la eficacia terapéutica pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos convencionales en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, para determinar la DL50 (la dosis letal para el 50 % de la población) y la DE50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50 % de la población). La dosificación puede variar dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La razón de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la razón DL50/DE50. Se prefieren las composiciones y los métodos que presentan grandes índices terapéuticos. Una dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Además, puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración en plasma circulante que incluya la CI50 (es decir, la concentración del agente para bloquear FcRn que logra una inhibición semimáxima de los síntomas) tal como se determina en cultivo celular, o en un modelo animal apropiado. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución. Los efectos de cualquier dosificación particular pueden monitorizarse mediante un bioensayo adecuado. La dosificación puede determinarla un médico y ajustarse, según sea necesario, para adaptarse a los efectos observados del tratamiento. Los agentes útiles según las composiciones y los métodos descritos en el presente documento, incluyendo anticuerpos y otros polipéptidos, son agentes aislados, lo que significa que los agentes son sustancialmente puros y están esencialmente libres de otras sustancias con las que pueden encontrarse en la naturaleza o sistemas in vivo hasta un grado práctico y apropiado para su uso previsto. En particular, los agentes son suficientemente puros y están lo suficientemente libres de otros constituyentes biológicos de sus células huésped para ser útiles, por ejemplo, en la producción de preparaciones farmacéuticas. Debido a que un agente aislado puede mezclarse con un portador farmacéuticamente aceptable en una preparación farmacéutica, los agentes pueden comprender sólo un pequeño porcentaje en peso de la preparación.
Los agentes descritos en el presente documento para la terapia anti-FcRn pueden administrarse a un sujeto que lo necesita mediante cualquier vía apropiada que dé como resultado un tratamiento eficaz en el sujeto. Tal como se usa en el presente documento, los términos “administrar” e “introducir” se usan de manera intercambiable y se refieren a la colocación de un agente en un sujeto mediante un método o una vía que da como resultado la localización al menos parcial de tales agentes en un sitio deseado, tal como un sitio de inflamación, de modo que se produzcan los efectos deseados.
En algunas realizaciones, los agentes descritos en el presente documento para su uso en terapia anti-FcRn se administran a un sujeto mediante cualquier modo de administración que administre el agente de manera sistémica o en una superficie o diana deseada, y pueden incluir, pero no se limitan a, administración por inyección, infusión, instilación e inhalación. En la medida en que los agentes polipeptídicos puedan protegerse frente a la inactivación en el intestino, también se contemplan formas de administración oral. “Inyección” incluye, sin limitación, infusión e inyección intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intraventricular, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, intracefalorraquídea e intraesternal. En algunas realizaciones, los agentes para su uso en terapia anti-FcRn para su uso en los métodos descritos en el presente documento se administran mediante infusión o inyección intravenosa.
Las expresiones “administración parenteral” y “administrado por vía parenteral”, tal como se usan en el presente documento, se refieren a modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, normalmente mediante inyección. Las expresiones “administración sistémica”, “administrado de manera sistémica”, “administración periférica” y “administrado periféricamente” tal como se usan en el presente documento se refieren a la administración de un agente anti-FcRn distinta de directamente en un sitio, tejido u órgano diana, de modo que entra en el aparato circulatorio del sujeto y, por tanto, está sujeto al metabolismo y otros procesos similares.
Para el uso clínico de los métodos descritos en el presente documento, la administración de un agente anti-FcRn puede incluir la formulación en composiciones farmacéuticas o formulaciones farmacéuticas para administración
parenteral, por ejemplo, administración intravenosa; mucosa, por ejemplo, intranasal; ocular u otro modo de administración. En algunas realizaciones, puede administrarse un agente anti-FcRn junto con cualquier compuesto portador, material o composición farmacéuticamente aceptable que dé como resultado un tratamiento eficaz en el sujeto. Por tanto, una formulación farmacéutica para su uso en los métodos descritos en el presente documento puede contener un agente anti-FcRn en combinación con uno o más componentes farmacéuticamente aceptables.
La expresión “farmacéuticamente aceptable” se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una razón beneficio/riesgo razonable. La expresión “portador farmacéuticamente aceptable” tal como se usa en el presente documento significa un material, una composición o un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga líquida o sólida, un diluyente, excipiente, disolvente, medio, material encapsulante, adyuvante de fabricación (por ejemplo, lubricante, magnesio de talco, estearato de calcio o zinc o ácido estérico) o material de encapsulación de disolvente, involucrado en el mantenimiento de la estabilidad, solubilidad o actividad de un agente para modular interacciones entre FcRn e IgG o un fragmento de la misma o una variante de la misma. Cada portador debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los demás componentes de la formulación y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, etilcelulosa, celulosa microcristalina y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (8) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; (9) glicoles, tales como propilenglicol; (10) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol (PEG); (11) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (12) agar; (13) agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (14) ácido algínico; (15) agua libre de pirógenos; (16) solución salina isotónica; (17) disolución de Ringer; (18) disoluciones reguladoras del pH; (19) poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; (20) agentes de carga, tales como polipéptidos y aminoácidos; (21) componentes del suero, tales como albúmina sérica, HDL y LDL; (22) alcoholes C2-C12, tales como etanol; y (23) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas. También pueden estar presentes en la formulación agentes de liberación, agentes de recubrimiento, conservantes y antioxidantes. Los términos tales como “excipiente”, “portador”, “portador farmacéuticamente aceptable” o similares se usan de manera intercambiable en el presente documento.
Los agentes anti-FcRn descritos en el presente documento pueden formularse especialmente para la administración del compuesto a un sujeto en forma sólida, líquida o de gel, incluyendo los adaptados para lo siguiente: (1) administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural como, por ejemplo, una disolución o suspensión estéril, o una formulación de liberación sostenida; (2) aplicación tópica, por ejemplo, como una crema, una pomada o un parche o aerosol de liberación controlada aplicado a la piel; (3) por vía intravaginal o intrarrectal, por ejemplo, como un óvulo vaginal, una crema o espuma; (4) por vía ocular; (5) por vía transdérmica; (6) por vía transmucosa; o (7) por vía nasal. Además, el agente anti-FcRn puede implantarse en un paciente o inyectarse usando un sistema de administración de fármacos. Véanse, por ejemplo, Urquhart et al., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 24: 199-236 (1984); Lewis, ed. “Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals” (Plenum Press, Nueva York, 1981); la patente estadounidense n.° 3.773.919; y la patente estadounidense n.° 35 3.270.960.
A continuación se ilustran realizaciones adicionales de las formulaciones y los modos de administración de un agente anti-FcRn que puede usarse en los métodos descritos en el presente documento.
Formas de dosificación parenteral. Las formas de dosificación parenteral de un agente anti-FcRn también pueden administrarse a un sujeto por diversas vías, que incluyen, pero sin limitarse a, subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección en bolo), intramuscular e intraarterial. Dado que la administración de formas de dosificación parenteral elude normalmente las defensas naturales del paciente frente a los contaminantes, las formas de dosificación parenteral son preferiblemente estériles o pueden esterilizarse antes de la administración a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen, pero no se limitan a, disoluciones listas para inyección, productos secos listos para disolverse o suspenderse en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones listas para inyección, formas de dosificación parenteral de liberación controlada y emulsiones.
Los vehículos adecuados que pueden usarse para proporcionar las formas de dosificación parenteral de la divulgación se conocen bien por los expertos en la técnica. Los ejemplos incluyen, sin limitación: agua estéril; agua para inyección USP; solución salina; disolución de glucosa; vehículos acuosos tales como, pero sin limitarse a, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio e inyección de lactato de Ringer; vehículos miscibles en agua tales como, pero sin limitarse a, alcohol etílico, polietilenglicol y propilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, pero sin limitarse a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.
Formulaciones en aerosol. Puede envasarse un agente anti-FcRn en un recipiente de aerosol presurizado junto con
propelentes adecuados, por ejemplo, propelentes de hidrocarburos como propano, butano o isobutano con adyuvantes convencionales. También puede administrarse un agente anti-FcRn en forma no presurizada, tal como en un nebulizador o atomizador. También puede administrarse un agente anti-FcRn directamente a las vías respiratorias en forma de polvo seco, por ejemplo, mediante el uso de un inhalador.
Las composiciones en polvo adecuadas incluyen, a modo de ilustración, preparaciones en polvo de un agente anti-FcRn completamente mezclado con lactosa u otros polvos inertes aceptables para administración intrabronquial. Las composiciones en polvo pueden administrarse mediante un dispensador de aerosol o encerrarse en una cápsula rompible que puede insertarla el sujeto en un dispositivo que perfora la cápsula y expulsa el polvo en una corriente constante adecuada para inhalación. Las composiciones pueden incluir propelentes, tensioactivos y codisolventes y pueden introducirse en recipientes de aerosol convencionales que se cierran mediante una válvula dosificadora adecuada.
Los aerosoles para la administración al aparato respiratorio se conocen en la técnica. Véanse, por ejemplo, Adjei, A. y Garren, J. Pharm. Res., 1: 565-569 (1990); Zanen, P. y Lamm, J.-W. J. Int. J. Pharm., 114: 111-115 (1995); Gonda, I. “Aerosols for delivery of therapeutic and diagnostic agents to the respiratory tract”, en Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 6: 273-313 (1990); Anderson et al., Am. Rev. Respir. Dis., 140: 1317-1324 (1989)), y también tienen potencial para la administración sistémica de péptidos y proteínas (Patton y Platz, Advanced Drug Delivery Reviews, 8: 179-196 (1992)); Timsina et al., Int. J. Pharm., 101: 1-13 (1995); y Tansey, I. P., Spray Technol. Market, 4:26-29 (1994); French, D. L., Edwards, D. A. y Niven, R. W., Aerosol Sci., 27: 769-783 (1996); Visser, J., Powder Technology 58: 1-10 (1989)); Rudt, S. y R. H. Muller, J. Controlled Release, 22: 263-272 (1992); Tabata, Y e Y. Ikada, Biomed. Mater. Res. 22: 837-858 (1988); Wall, D. A., Drug Delivery, 2: 101-201995); Patton, J. y Platz, R., Adv. Drug Del. Rev., 8: 179-196 (1992); Bryon, P., Adv. Drug. Rev. Del., 5: 107-132 (1990); Patton, J. S., et al., Controlled Release, 28: 1579-85 (1994); Damms, B. y Bains, W., Nature Biotechnology (1996); Niven, R. W. et al., Pharm. Res., 12(9); 1343-1349 (1995); y Kobayashi, S. et al., Pharm. Res., 13(1): 80-83 (1996).
Las formulaciones de los agentes anti-FcRn descritas en el presente documento abarcan además composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosificación que comprenden los compuestos descritos como principios activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo, el 5 %) se acepta ampliamente en las técnicas farmacéuticas como medio para simular el almacenamiento a largo plazo con el fin de determinar características tales como la vida útil o la estabilidad de las formulaciones a lo largo del tiempo. Véase, por ejemplo, Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles & Practice, 379-80 (2a ed., Marcel Dekker, NY, N.Y.: 1995). Las composiciones farmacéuticas anhidras y las formas de dosificación de la divulgación pueden prepararse usando componentes anhidros o que contienen poca humedad y condiciones de poca humedad o de baja humedad. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden lactosa y al menos un principio activo que comprende una amina primaria o secundaria son preferiblemente anhidras si se espera un contacto sustancial con humedad y/o humedad durante la fabricación, el envasado y/o el almacenamiento. Las composiciones anhidras se envasan preferiblemente usando materiales que se sabe que evitan la exposición al agua, de modo que pueden incluirse en kits de formulario adecuados. Los ejemplos de envases adecuados incluyen, pero no se limitan a, láminas herméticamente selladas, plásticos, envases de dosis unitaria (por ejemplo, viales) con o sin desecantes, envases alveolados y envases de tiras.
Formas de dosificación de liberación controlada y retardada. En algunas realizaciones de los métodos descritos en el presente documento puede administrarse un agente anti-FcRn a un sujeto mediante medios de liberación controlada o retardada. Idealmente, el uso de una preparación de liberación controlada diseñada de manera óptima en el tratamiento médico se caracteriza porque se emplea un mínimo de sustancia farmacológica para curar o controlar el estado en una cantidad mínima de tiempo. Las ventajas de las formulaciones de liberación controlada incluyen: 1) actividad prolongada del fármaco; 2) frecuencia de dosificación reducida; 3) mayor cumplimiento del paciente; 4) uso de menos fármaco total; 5) reducción de los efectos secundarios locales o sistémicos; 6) minimización de la acumulación de fármacos; 7) reducción de las fluctuaciones del nivel sanguíneo; 8) mejora de la eficacia del tratamiento; 9) reducción de la potenciación o pérdida de la actividad del fármaco; y 10) mejora en la velocidad de control de enfermedades o estados. (Kim, Cherng-ju, Controlled Release Dosage Form Design, 2 (Technomic Publishing, Lancaster, Pa.: 2000)). Pueden usarse formulaciones de liberación controlada para controlar el inicio de la acción de un compuesto, la duración de la acción, los niveles plasmáticos dentro de la ventana terapéutica y los niveles máximos en sangre. En particular, pueden usarse formulaciones o formas de dosificación de liberación prolongada o controlada para garantizar que se logre la máxima efectividad de un compuesto de fórmula (I) a la vez que se minimizan los posibles efectos adversos y preocupaciones de seguridad, que pueden producirse tanto por una dosis insuficiente de un fármaco (es decir, por debajo de los niveles terapéuticos mínimos), así como por superar el nivel de toxicidad del fármaco.
Pueden adaptarse una variedad de formas de dosificación, formulaciones y dispositivos conocidos de liberación controlada o prolongada para su uso con los agentes anti-FcRn descritos en el presente documento. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, los descritos en las patentes estadounidenses n.os: 3.845.770; 3.916.899; 3.536.809; 3.598.123; 4.008.719; 5674.533; 5.059.595; 5.591.767; 5.120.548; 5.073.543; 5.639.476; 5.354.556; 5.733.566; y 6.365.185 B1. Estas formas de dosificación pueden usarse para proporcionar una liberación lenta o controlada de uno o más principios activos usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos (tales como OROS® (Alza Corporation, Mountain View, Calif.
EE.UU.)), recubrimientos multicapa, micropartículas, liposomas o microesferas o una combinación de los mismos para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Además, pueden usarse materiales de intercambio iónico para preparar formas de sal adsorbidas e inmovilizadas de los compuestos descritos y, por tanto, efectuar la administración controlada del fármaco. Los ejemplos de intercambiadores aniónicos específicos incluyen, pero no se limitan a, Duolite® A568 y Duolite® AP143 (Rohm & Haas, Spring House, Pa., EE.UU.).
En algunas realizaciones, se administra un agente anti-FcRn para su uso en los métodos descritos en el presente documento a un sujeto mediante liberación sostenida o en pulsos. La terapia de pulsos no es una forma de administración discontinua de la misma cantidad de una composición a lo largo del tiempo, sino que comprende la administración de la misma dosis de la composición a una frecuencia reducida o la administración de dosis reducidas. Se prefieren particularmente las administraciones de liberación sostenida o en pulsos cuando el trastorno se produce de forma continua en el sujeto, por ejemplo, cuando el sujeto tiene síntomas continuos o crónicos de una infección viral. Puede reducirse cada dosis de pulso y minimizarse la cantidad total del agente anti-FcRn administrado durante el curso del tratamiento al paciente.
El intervalo entre pulsos, cuando sea necesario, puede determinarlo un experto en la técnica. A menudo, el intervalo entre pulsos puede calcularse administrando otra dosis de la composición cuando la composición o el componente activo de la composición ya no es detectable en el sujeto antes de administrar el siguiente pulso. Los intervalos también pueden calcularse a partir de la semivida in vivo de la composición. Los intervalos pueden calcularse como mayores que la semivida in vivo, o 2, 3, 4, 5 e incluso 10 veces mayores que la semivida de la composición. Se describen diversos métodos y aparatos para composiciones que se administran por pulsos por infusión u otras formas de administración al paciente en las patentes estadounidenses n.os 4.747.825; 4.723.958; 4.948.592; 4.965.251 y 5.403.590.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar mejor la invención reivindicada y no deben interpretarse como limitativos del alcance de la invención. En la medida en que se mencionen materiales específicos, es meramente con fines ilustrativos y no se pretende limitar la invención. Un experto en la técnica puede desarrollar medios o reactivos equivalentes sin el ejercicio de la capacidad inventiva y sin apartarse del alcance de la invención, que es tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.
Tal como se describe en el presente documento, la variante H131 de FcyR2a es un alelo de riesgo genético para varias enfermedades inmunomediadas tanto en caucásicos como en no caucásicos, de modo que los individuos con este alelo presentan un mayor riesgo de una enfermedad inmunomediada específica. Además de presentar una mayor afinidad por IgG2, la variante His de FcyR2a presenta una señalización mucho más fuerte cuando se une a inmunocomplejos de IgG2 e IgG1, y esto se asocia con una mayor producción de citocinas inflamatorias y una potenciación de la presentación de tanto CMH de clase I como CMH de clase II de antígenos unidos a inmunocomplejos. Entre las citocinas que aumentan por el alelo His131 de FcyR2a (también conocido como His167 según NM_001136219.1) se encuentra la IL-12.
La señalización y presentación de antígenos aumentadas y, por tanto, la activación de las células T que se asocia con la unión y señalización excesivas de inmunocomplejos por el alelo His se anula mediante el bloqueo o la eliminación de la expresión de FcRn por las células presentadoras de antígenos. Esto predice, y tal como se describe en el presente documento, que cualquier individuo con el alelo FcyR2a-His131 (también conocido como His167 según NM_001136219.1) presentará una inflamación impulsada por IgG mucho mayor y ese bloqueo de la inflamación con terapias dirigidas a FcRn eliminará esta inflamación.
Se analizó la unión de FcyR2a131His a inmunocomplejos. Se transfectaron células de riñón canino Madin-Darby (MDCK) con vectores que expresan el alelo FcyR2a131Arg, el alelo FcyR2a131His o el vector de control. Se evaluó la unión de inmunocomplejos humanos que consistían en fragmentos F(ab)2 complejados con IgG de diferentes subclases a la concentración indicada mediante Flow. Tal como se muestra en la figura 1, el alelo FcyR2a131His se une a inmunocomplejos humanos de manera más eficaz que FcyR2a131Arg.
Se evaluó el efecto de FcyR2a131His sobre la expresión de citocinas. Se transfectaron de manera estable células de macrófagos de monocitos leucémicos de ratón (RAW 264.7) con vectores que expresan el alelo FcyR2a131Arg, el alelo FcyR2a131His o el vector de control. Se estimularon las células transfectadas con inmunocomplejos de OVA conjugados con IgG1-NIP (IgG1) o inmunocomplejos poliméricos NIP-OVA (PC). Se generaron los inmunocomplejos con un anticuerpo quimérico que contenía una región Fab que es específica para NIP (SM Claypool, Mol Biol Cell 2004 15:1746-59). Se evaluó la producción de citocinas mediante qPCR. Se evaluó la unión de inmunocomplejos humanos que consistían en fragmentos F(ab)2 complejados con IgG de diferentes subclases a la concentración indicada mediante Flow. Tal como se muestra en la figura 2, FcyR2a131His media en la expresión de citocinas aumentada tras la estimulación con inmunocomplejos en comparación con FcyR2a131Arg.
Se sometió a ensayo el efecto de FcyR2a131His sobre la señalización aguas abajo. Se transfectaron de manera estable macrófagos RAW 264.7 con FcyR2a131Arg, FcyR2a131His o vector de control y se estimularon con
inmunocomplejos IgG1-NIP OVA durante los puntos de tiempo indicados. Se precipitó en primer lugar la molécula adaptadora temprana SYK fosforilada (pSYK) y posteriormente se detectó la hCD32 unida mediante inmunotransferencia de tipo Western (figura 3a). Se precipitó en primer lugar la SYK celular total y posteriormente se detectó la SYK fosforilada (pSYK) mediante inmunotransferencia de tipo Western (figura 3b). Tal como se muestra en la figura 3, FcyR2a131His presenta una señalización aguas abajo aumentada tras la estimulación con inmunocomplejos en comparación con FcyR2a131Arg.
La variante His de FcyR2a presenta una señalización mucho más fuerte cuando se une a inmunocomplejos de IgG2 e IgG1, y esto se asocia con una mayor producción de citocinas inflamatorias y una potenciación de la presentación de tanto CMH de clase I como CMH de clase II de antígenos unidos a inmunocomplejos. Para la presentación de antígeno de CMH II en la figura 4A, se transfectaron de manera estable macrófagos RAW 264.7 con FcyR2a131Arg, FcyR2a131His o vector de control y se estimularon con inmunocomplejos IgG1-NIP OVA a las concentraciones indicadas. Después de 3 horas, se añadieron células T CD4+ específicas de OVA y se incubaron durante 24 horas, y se midió la liberación de IL-2 a partir de las células T CD4+ mediante ELISA. Para la presentación cruzada de CMH I en la figura 4B, se transfectaron de manera estable macrófagos de células HEK293T que expresan H2-kb con FcyR2a131Arg, FcyR2a131His o vector de control y se estimularon con inmunocomplejos IgG1-NIP OVA a las concentraciones indicadas. Después de 3 horas, se añadieron células T CD8+ específicas de OVA y se incubaron durante 24 horas, y se midió la liberación de IL-2 a partir de las células T CD4+ mediante ELISA. Tal como se muestra en la figura 4, FcyR2a131His induce la presentación de CMH II y la presentación cruzada de CMH I del antígeno inmunocomplejado de manera más eficaz que FcyR2a131Arg.
Se transfectaron de manera estable células HEK293 que expresan FcRn humano marcado con GFP con vectores que expresan el alelo FcyR2a131Arg, el alelo FcyR2a131His o el vector de control. Se estimularon las células transfectadas con inmunocomplejos que contienen IgG2 humana. Tal como se muestra en la figura 5, FcyR2a131His internaliza inmunocomplejos de manera más eficaz que FcyR2a131Arg y los transfiere a un compartimento intracelular que contiene FcRn.
Se evaluó el papel de la presentación de CMH II mediada por FcRn y la presentación cruzada de CMH I en función de la liberación de IL-2. Se transdujeron lentiviralmente de manera estable células dendríticas JAWS II con un virus de control o expresión de FcRn de silenciamiento de ARNhc. Se estimularon las células con IgG1 que contenía inmunocomplejos NIP-OVA durante 3 horas y células T CD4+ específicas de antígeno (panel izquierdo) o células T CD8+ específicas de antígeno (se añadieron al panel derecho). Se midió la liberación de IL-2 mediante ELISA. Tal como se muestra en la figura 6, FcRn es un mediador crítico para la presentación de antígeno de CMH II y la presentación cruzada de CMH I si se proporciona un antígeno inmunocomplejado.
Se estimularon macrófagos RAW que expresan de manera estable FcyR2a131ARG o FcyR2a131His con inmunocomplejos IgG1NIP-OVA de tipo natural (WT), inmunocomplejos IgG1NIP-OVA que no se unen a FcRn (IHH) o inmunocomplejos que no se unen a FcyR (N297a) durante 3 horas. Posteriormente, se añadieron células T CD4+ específicas de antígeno y se midió la liberación de IL-2 a partir de las células T CD4+ mediante ELISA. Tal como se muestra en la figura 7, la presentación de antígeno iniciada por FcyR2a potenciada se anula por la pérdida de la unión de FnRn o FcyR.
Se preincubaron células dendríticas derivadas de médula ósea con DVN24, un anticuerpo que bloquea la interacción entre IgG y FcRn. Se preincubaron células dendríticas derivadas de médula ósea con DVN24, un anticuerpo que bloquea la interacción entre IgG y FcRn. Tal como se muestra en la figura 8, en un amplio intervalo de concentraciones, DVN24 reduce significativamente la presentación de CMH II de antígeno derivado de inmunocomplejos en comparación con el control de isotipo tal como se indica mediante la liberación de IL-2 a partir de células T CD4+ específicas de antígeno.
Se generaron ratones quimeras de médula ósea (figura 9a) y se inmunizaron con flagelina bacteriana para inducir títulos elevados de IgG antibacteriana. Durante la posterior colitis por dextrano sulfato de sodio, los ratones que recibieron una dosis diaria de 100 ug de DVN24 por vía i.p. estuvieron relativamente protegidos frente al desarrollo de colitis en comparación con los ratones tratados con el control de isotipo, tal como se evalúa por el cambio de peso corporal (figura 9b) y la puntuación de colitis histológica (figuras 9c y d). Tal como se muestra en la figura 9, el bloqueo farmacológico de hFcRn con DVN24 en células hematopoyéticas protegió frente al desarrollo de colitis mediada por IgG.
Se evaluó el efecto del bloqueo de FcRn en células T CD8+ y las citocinas inflamatorias. Se inmunizaron los ratones que expresaban FcRn humano en el compartimento de la médula ósea, o los ratones quiméricos de médula ósea sin expresión de FcRn en la médula ósea, con flagelina para inducir títulos elevados de IgG antibacteriana. Durante la posterior colitis por dextrano sulfato de sodio, los ratones quiméricos con FcRn humano que recibieron una dosis diaria de 100 ug de DVN24 por vía i.p. mostraron números de células T CD8+ más bajos en la lámina propia en comparación con los ratones quiméricos con FcRn humano que se trataron con un control de isotipo o en comparación con ratones sin expresión de FcRn en el compartimento hematopoyético (figura 10, paneles superiores). Además, los ratones quiméricos con FcRn humano tratados con DVN24 por vía i.p. durante la colitis tenían una expresión significativamente menor de citocinas proinflamatorias en el colon total (figura 10, paneles
inferiores izquierdos) y a partir de la fracción de linfocitos de la lámina propia (figura 10, panel inferior derecho) en comparación con ratones tratados con control de isotipo. Estos datos muestran que el bloqueo farmacológico de FcRn con el anticuerpo monoclonal DVN24 disminuye el número de células T CD8+ y la expresión de citocinas proinflamatorias en el intestino.
Se evaluó el efecto del bloqueo de FnRn en células T CD4+. Proliferación de células T CD4+ específicas de flagelina CBir marcadas con CFSE aisladas a partir de la lámina propia de quimeras de BM hFCGRT/hp2M/mFcgrt-1- tratadas con DVN24 o un control de isotipo durante la colitis por DSS y quimeras de BM mFcgrt-1- tratadas con PBS durante la colitis por DSS. Producción de IL-2 a partir de células T c D4+ específicas de flagelina CBir en un ensayo de presentación de antígeno ex vivo con DC CD11c+ aisladas a partir de la lámina propia (LP) o los ganglios linfáticos mesentéricos (MLN) de quimeras de BM hFCGRT/hp2M/mFcgrt-1- tratadas con DVN24 o un control de isotipo durante la colitis por DSS y quimeras de BM mFcgrt-l tratadas con PBS durante la colitis por DSS como células presentadoras de antígenos. Tal como se muestra en la figura 11, la inhibición farmacológica de FcRn con el anticuerpo monoclonal DVN24 disminuye la activación de las células T CD4+ específicas del comensal en la colitis dependiente de IgG.
Se evaluó la unión funcional de FcRn humano a inmunocomplejos que contienen IgG de ratón. Se incubaron DC derivadas de monocitos humanos con IgG IC o IHH-IgG sin unión a FcRn durante los tiempos indicados. Se lisaron las células y se precipitaron con anticuerpo anti-CD16/CD32 (anticuerpo anti-FcYRIII/FcgRII). Se resolvieron las proteínas precipitadas mediante gel SDS-PAGE y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa para inmunotransferencia de tipo Western. Se sondeó la membrana con anticuerpo anti-hFCGRT. Tal como se muestra en la figura 12, la unión de FcRn por inmunocomplejos de IgG multiméricos conduce a una interacción prolongada con FcyR.
Los inventores analizaron la asociación conjunta de FcRn humano y FcyR humano en células presentadoras de antígenos. Se usaron DC CD11c+ derivadas de médula ósea asiladas de WT, Fcgrt-1- y FCGRT/hB2M/mFcgrt-1- como células presentadoras de antígenos. Se expusieron las DC a NIP-OVA complejado con IgG policlonal de ratón, se lavaron y se cultivaron conjuntamente con células T CD4+ específicas de OVA. Tal como se muestra en la figura 13, el FcRn humano media en la presentación de antígenos a células T CD4+ tan eficazmente como FcRn WT en respuesta a inmunocomplejos de IgG murina.
Se evaluó la unión de hFcyR2a131His y hFcyR2a131Arg a los isotipos de IgG humana. Unión de inmunocomplejos de IgG humana marcados con fluorescencia de diversos isotipos hacia variantes de hFcyRIIa expresadas en la superficie celular de células MDCK a pH neutro. Tal como se muestra en la figura 14, hFcyR2a131His presenta una unión más fuerte que hFcyR2a131Arg en numerosos isotipos de IgG.
Los diversos métodos y técnicas descritos anteriormente proporcionan varias formas de llevar a cabo la solicitud. Por supuesto, debe entenderse que no necesariamente todos los objetivos o ventajas descritos pueden lograrse según cualquier realización particular descrita en el presente documento. Así, por ejemplo, los expertos en la técnica reconocerán que los métodos pueden realizarse de una manera que logre u optimice una ventaja o un grupo de ventajas tal como se enseña en el presente documento sin lograr necesariamente otros objetivos o ventajas tal como se enseña o sugiere en el presente documento. En el presente documento se mencionan una variedad de alternativas. Debe entenderse que algunas realizaciones preferidas incluyen específicamente una, otra o varias características, mientras que otras excluyen específicamente una, otra o varias características, mientras que otras mitigan una característica particular mediante la inclusión de una, otra o varias características ventajosas.
Además, un experto en la técnica reconocerá la aplicabilidad de diversas características a partir de diferentes realizaciones. De manera similar, los diversos elementos, características y etapas comentados anteriormente, así como otros equivalentes conocidos para cada elemento, característica o etapa, pueden emplearse en diversas combinaciones por un experto en esta técnica para realizar métodos según los principios descritos en el presente documento. Entre los diversos elementos, características y etapas, algunos se incluirán específicamente y otros se excluirán específicamente en diversas realizaciones.
Aunque la solicitud se ha dado a conocer en el contexto de determinadas realizaciones y ejemplos, los expertos en la técnica entenderán que las realizaciones de la solicitud se extienden más allá de las realizaciones dadas a conocer específicamente hasta otras realizaciones alternativas y/o usos y modificaciones y equivalentes de las mismas.
En algunas realizaciones, los términos “un” y “una” y “el/la” y referencias similares usadas en el contexto de la descripción de una realización particular de la solicitud (especialmente en el contexto de algunas de las siguientes reivindicaciones) pueden interpretarse como que cubren tanto el singular como el plural. La enumeración de los intervalos de valores en el presente documento está destinada simplemente a servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentre dentro del intervalo. A menos que se indique lo contrario en el presente documento, cada valor individual se incorpora en la memoria descriptiva como si se enumerara individualmente en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o el lenguaje a modo de ejemplo
(por ejemplo, “tal como”) proporcionado con respecto a determinadas realizaciones en el presente documento está destinado simplemente a ilustrar mejor la solicitud y no supone una limitación del alcance de la solicitud reivindicada. Ningún lenguaje en la memoria descriptiva debe interpretarse como que indica algún elemento no reivindicado esencial para la práctica de la solicitud.
Las realizaciones preferidas de esta solicitud se describen en el presente documento, incluyendo el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la solicitud. Las variaciones de esas realizaciones preferidas resultarán evidentes para los expertos en la técnica al leer la descripción anterior. Se contempla que los expertos en la técnica puedan emplear tales variaciones según sea apropiado, y la solicitud puede ponerse en práctica de otra manera que la descrita específicamente en el presente documento. Por consiguiente, muchas realizaciones de esta solicitud incluyen todas las modificaciones y equivalentes del objeto mencionado en las reivindicaciones adjuntas a la misma según lo permita la ley aplicable. Además, cualquier combinación de los elementos descritos anteriormente en todas las posibles variaciones de los mismos está incluida en la solicitud, a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente.
Debe entenderse que las realizaciones de la solicitud descritas en el presente documento son ilustrativas de los principios de las realizaciones de la solicitud. Otras modificaciones que pueden emplearse pueden estar dentro del alcance de la solicitud. Por tanto, a modo de ejemplo, pero no de limitación, pueden usarse configuraciones alternativas de las realizaciones de la solicitud según las enseñanzas en el presente documento. Por consiguiente, las realizaciones de la presente solicitud no se limitan a eso precisamente tal como se muestra y describe.
Claims (12)
1. Un ensayo que comprende:
(i) someter a ensayo una muestra biológica obtenida a partir de un sujeto que se sospecha que tiene una enfermedad inmunomediada caracterizada por niveles de IgG elevados para determinar el alelo en la posición 131 de la proteína FcyR2a; y
(ii) seleccionar al sujeto para una terapia si el sujeto expresa el alelo His131 de FcyR2a, en el que la terapia comprende un anticuerpo que bloquea el receptor de Fc neonatal (FcRn).
2. El ensayo según la reivindicación 1, en el que someter a ensayo la muestra para determinar el alelo de FcyR2a comprende:
(i) secuenciar el gen que codifica para el receptor FcyR2a a partir de la muestra del sujeto; y
(ii) comparar la secuencia a partir de la muestra del sujeto con la secuencia de FcyR2a en una muestra de control.
3. Una composición que comprende una terapia anti-FcRn que comprende un anticuerpo que bloquea el receptor de Fc neonatal (FcRn) para su uso en el tratamiento, la inhibición y/o la reducción de la gravedad de una enfermedad inmunomediada caracterizada por niveles de IgG elevados en un sujeto, en la que el sujeto se ha identificado como que tiene el alelo His131 de FcyR2a mediante el ensayo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2.
4. El ensayo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o composición para su uso según la reivindicación 3, en los que el sujeto es un ser humano.
5. El ensayo según la reivindicación 1, o la composición para su uso según la reivindicación 3, en los que la enfermedad inmunomediada es una cualquiera o más de gammapatía monoclonal de significado indeterminado (GMSI), enfermedad intestinal inflamatoria, pénfigo o penfigoide, miastenia grave, anemia hemolítica autoinmunitaria, enfermedad de Kawasaki, mieloma múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), cirrosis del hígado, hepatitis crónica, infección crónica, esclerosis múltiple (EM), macroglobulinemia, hepatitis viral, mononucleosis, daño renal (síndrome nefrótico), enfermedad celíaca, reacciones alérgicas, asma, dermatitis atópica, cáncer, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), trombocitopenia autoinmunitaria, neutropenia inmunitaria, síndrome antifosfolipídico, enfermedad asociada a ANCA, polimiositis, miastenia grave, diabetes, tiroiditis autoinmunitaria, neuritis óptica, oftalmopatía de Graves, síndrome de Guillian-Barre, polineuropatía crónica, leucemia mieloide aguda o una combinación de las mismas.
6. El ensayo según, o la composición para su uso según la reivindicación 5, en los que la enfermedad inmunomediada es una cualquiera o más de enfermedad intestinal inflamatoria, pénfigo o penfigoide, miastenia grave, anemia hemolítica autoinmunitaria, enfermedad de Kawasaki, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), hepatitis crónica, esclerosis múltiple (EM), púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), síndrome antifosfolipídico, enfermedad asociada a ANCA, polimiositis, miastenia grave, neuritis óptica, síndrome de Guillian-Barre, polineuropatía crónica o una combinación de las mismas.
7. El ensayo según, o composición para su uso según la reivindicación 5, en los que la enfermedad inmunomediada es enfermedad intestinal inflamatoria (EII).
8. El ensayo según, o composición para su uso según la reivindicación 7, en los que el sujeto
(i) se ha sometido o está sometiéndose a tratamiento para enfermedad intestinal inflamatoria, o
(ii) no se ha sometido a tratamiento para enfermedad intestinal inflamatoria.
9. El ensayo según, o composición para su uso como en la reivindicación 7, en los que EII es colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, colitis microsópica, colitis isquémica, colitis por desviación, enfermedad de Behcet, colitis indeterminada o una combinación de las mismas.
10. El ensayo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o composición para su uso según la reivindicación 3, en los que el sujeto es
(a) heterocigótico para el alelo His131 de FcyR2a, u
(b) homocigótico para el alelo His131 de FcyR2a.
11. El ensayo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o composición para su uso según la reivindicación 3, en los que el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo monoclonal
o un fragmento del mismo, un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado y anticuerpo de cadena sencilla.
12. El ensayo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o composición para su uso según la reivindicación 3, en los que la muestra es tejido o líquido, preferiblemente, en los que la muestra es suero o sangre, secreciones corporales de la nariz, orofaringe, tracto gastrointestinal, tracto biliar o genitourinario, biopsias tisulares de cualquier órgano, un líquido tisular tal como líquido cefalorraquídeo, ocular o sinovial, o una combinación de los mismos.
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