ES2827239T3 - Guía implantable para la regeneración tisular - Google Patents

Abstract

Guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria o la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada.

Description

DESCRIPCIÓN

Guía implantable para la regeneración tisular

La presente invención se refiere a las guías implantables, más particularmente, a los dispositivos médicos de origen biológico. La presente invención está especialmente destinada a la regeneración tisular de tejidos seccionados tales como los nervios, los ligamentos o los tendones mediante la realización de un puente entre las dos extremidades del tejido seleccionadas.

Durante un traumatismo de ciertos tejidos biológicos, se puede producir un desgarro o sección, provocando de este modo un alejamiento espacial entre las dos extremidades del tejido lesionado. Esto sucede especialmente cuando un nervio del sistema nervioso periférico, un tendón, o un ligamento, es seccionado o desgarrado.

Este tipo de heridas se tratan, generalmente, por técnicas de suturas que consisten en acercar las dos extremidades (denominados extremidad proximal y extremidad distal) del tejido lesionado antes de suturarlos punto a punto. Sin embargo, estas técnicas solamente pueden utilizarse cuando la distancia entre las extremidades distal y proximal no es demasiado importante, para permitir la sutura directa proximal-distal. Cuando esta distancia es demasiado grande para permitir esta sutura directa, se puede utilizar un procedimiento de autoinjerto. Esta técnica presenta como inconveniente la necesidad de proceder A una operación quirúrgica invasiva en el paciente, para extraer un injerto de las dimensiones adecuadas destinado a realizar el puente entre las extremidades proximal y distal del tejido lesionado.

Otro inconveniente es que la sutura directa o la sutura por puente de autoinjerto muestra a veces unas complicaciones que no permiten la regeneración de los tejidos, o incluso, una regeneración indeseable. Puede suceder, por ejemplo, que el tejido cicatrizal procedente del sitio de intervención quirúrgica interfiera con una regeneración tisular satisfactoria entre los extremidades proximal y distal. Esto supone un problema aún más importante en el caso de la regeneración de un nervio. En efecto, es posible que el recrecimiento de los axones sea interrumpido debido a este fenómeno, siendo la consecuencia que las funciones sensoriales y/o motrices no son restauradas.

De esta manera, se han desarrollado estrategias destinadas a proteger el sitio biológico de la lesión de cualquier forma de infiltración por unos tejidos fibrosos. Por ejemplo, mediante la utilización de vendajes o tubos biocompatibles para envolver las suturas. En el campo de la regeneración de los nervios, se han desarrollado soluciones de guías implantables destinadas tanto a proteger como a guiar el recrecimiento del nervio seccionado.

En "Stratégies for régénération of components of nervous System: scaffolds, cells and biomolecules", Tian et al. trazan la evolución de estos biomateriales de origen sintético. La silicona fue inicialmente el material empleado para el desarrollo de estas guías de regeneración, puesto que es inerte, fácilmente disponible y, en cierta medida, elástica. Sin embargo, en condiciones clínicas, numerosos pacientes se quejaban de irritaciones en el sitio de intervención, necesitando una nueva operación para retirar el dispositivo. El politetrafluoroetileno (PTFE) fue introducido como polímero que permitía realizar puentes con intervalos de hasta 40 mm entre las extremidades proximales y distales Desgraciadamente, se ha señalado que el PTFE comprimía el nervio, lo que produce una alteración en la regeneración del mismo, produciendo al mismo tiempo irritaciones en el paciente. Por último, el colágeno, una proteína estructural abundante en numerosos tejidos de animales, especialmente prevalente en las matrices extracelulares, se convirtió en un polímero de elección para fabricar guías de regeneración de los nervios. Este polímero no presentaba los defectos de sus predecesores.

Por ejemplo, se puede citar la patente US 5.019.087 que divulga un dispositivo tubular implantable cuya pared está constituida por una matriz de colágeno de Tipo I y de laminina. La luz de esta guía es ilustrativa de una matriz cualquiera en el seno de la luz del canal.

La patente US 6.716.225 divulga un dispositivo tubular implantable de materiales biocompatibles y biorresorbibles tales como los colágenos, los polisacáridos, u otras proteínas tal como la fibrina o la elastina. La luz del canal puede incluir unos microtubos, unos filamentos, o una matriz porosa que define un microsistema de guiado que permite mejorar la adherencia celular y orientar la migración celular en el seno de la guía.

También se han desarrollado unos dispositivos fabricados con polímeros sintéticos. Se puede citar como ejemplo la patente EP 0327022 que divulga un dispositivo tubular implantable, constituido, por ejemplo, por ácido poliglicólico) o por un copolímero de glicólido y de carbonato de trimetileno.

Todos estos dispositivos constituidos por materiales sintéticos tienen como inconveniente principal la posibilidad de presentar problemas de compatibilidad biológica.

También existen guías para la regeneración de nervios creadas a partir de estructuras biológicas tisulares. Se puede citar la patente US 6.241.981 que divulga un dispositivo tubular implantable obtenido a partir del tejido de una submucosa procedente de un vertebrado de sangre caliente. De manera preferente, la submucosa es la submucosa del intestino. Se trata de una matriz natural de colágeno que comprende moléculas de interés tales como las glucoproteínas, los proteoglicanos o los glucosaminoglicanos en sus configuraciones y concentraciones naturales. El dispositivo puede ser combinado con factores de crecimiento de tipo VEGF, NGF o FGF. Una vez que la submucosa se ha conformado en forma de tubo, la estructura puede igualmente ser rellenada con un extracto de tejido de la submucosa fluidizado. Esta guía para la regeneración de nervios puede ser deshidratada por liofilización, y rehidratarse antes del implante.

En "Inverted human umbilical arteries with tunable wall thicknesses for nerve régénération", Journal of Biomédical Materials Research Parte A, p.818-828, Crouzier et al. divulgan una guía nerviosa tubular derivada de una arteria del cordón umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta. Se describe que este volteo presenta las ventajas de evitar que la guía se derrumbe sobre sí misma, así como permite la exposición de la neurona en crecimiento dentro de la guía a una sustancia rica en colágeno, la cual es la gelatina de Wharton.

Otro dispositivo implantable, obtenido a partir de un vaso procedente de cordón umbilical de mamífero también se describe en la patente US 7.294.144. Dicho vaso es separado de la gelatina de Wharton y es liofilizado. El destino del canal obtenido según este procedimiento es el injerto vascular. El injerto necesita una rehidratación del tejido antes del implante.

Las guías de regeneración tisular, procedentes de tejidos biológicos, presentan el riesgo de transmisión una infección desde el donante al receptor, o un riesgo de contaminación durante la recogida del tejido durante el parto, durante los tratamientos preparatorios del tejido, o durante el transporte de dicho tejido. De hecho, un procedimiento eficaz tanto de desinfección como de conservación de estos tejidos es vital para la seguridad de los pacientes.

Todos estos dispositivos presentan algunos inconvenientes y, especialmente, problemas de compatibilidad biológica, de acondicionamiento, de conservación y de puesta a disposición de los especialistas, de rigidez durante la implementación en la intervención y, potencialmente, de viroinactivación. Bien sea que el tratamiento no es suficientemente eficaz, bien sea que es demasiado largo y/o destructor con respecto al material natural.

La falta de rigidez de los dispositivos implantables, obtenidos a partir de vasos sanguíneos, es conocido por tener como consecuencia un riesgo de colapso de la guía para la regeneración tisular (Konofaos et al. "Nerve repair by means of tubulization: past, présent, future". J reconstr Microsurg 2013; 29(03): 149­ 164; y Mohammadi et al. "Comparison of repair of peripheral nerve transection in predegenerated muscle with and without a vein graft' Bm C Neurol. 2016; 16: 237).

El mantenimiento de la forma de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular es por tanto importante para prevenir este riesgo de colapso. En efecto, un colapso de la guía implica una disminución de la capacidad del tejido de interés para colonizar la luz de dicha guía implantable no colapsable durante su proceso biológico de regeneración.

Un objetivo de la presente invención es, por tanto proponer una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, y su procedimiento de preparación, que permita resolver los problemas presentados por los dispositivos anteriormente descritos.

La presente invención consiste en una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria o de la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada, implantable sin rehidratación previa, y permite resolver el conjunto de estos problemas.

La presente invención se refiere también a un procedimiento de preparación de dicha guía implantable no colapsable para la regeneración tisular.

También se refiere a un procedimiento de implante que comprende la implementación de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular sin etapa previa de hidratación.

Definiciones utilizadas en la presente solicitud.

Algunas expresiones o palabras se pueden utilizar en la presente solicitud para indicar los elementos técnicos, hechos, propiedades o características. Su significado se proporciona a continuación:

- por "vaso procedente del cordón umbilical", se entiende un vaso sanguíneo, que puede ser la vena o una de las dos arterias, siendo los tres vasos presentes en el cordón umbilical de mamífero de utilidad de acuerdo con la invención,

- por "vaso volteado" o "pared volteada", se entiende que el tejido inicial, que es un vaso sanguíneo, se le da la vuelta sobre sí mismo de tal modo que la pared constitutiva de la luz del vaso antes del volteo se convierte en la pared externa del vaso, y que la pared que era la pared externa del vaso antes del volteo se convierte en la nueva pared de la nueva luz del vaso.

- por "segmento", se entiende una fracción del tejido de origen, el cual es un vaso sanguíneo, y el cual ha sido seccionado en dos extremidades de tal manera que la fracción tiene la forma de un cilindro. De este modo, este cilindro se caracteriza por una pared que es la pared del vaso sanguíneo, y dos extremidades circulares abiertas que permiten el acceso a la luz de dicho cilindro.

- por "regeneración", se entiende la capacidad de los tejidos vivos para reconstituirse después de la destrucción. Por ejemplo, después de una herida de tipo seccionamiento, aplastamiento o desgarro. En la presente invención, los tejidos en cuestión son los nervios del sistema nervioso periférico, los ligamentos y los tendones.

- por "viroinactivación", se entiende una técnica que permite reducir en gran medida, o total y definitivamente, la capacidad de acción de los virus. Estos, definidos como inactivados, pierden sus capacidades patógenas y de replicación debido a una disminución en su población de 4 unidades logarítmicas en las titulaciones residuales después de una o dos etapas químicas independientes, ya sean tanto unos virus encapsulados como no encapsulados, ADN o ARN.

- por "liofilización", se entiende una técnica destinada a desecar un producto previamente congelado por sublimación. Más precisamente, el líquido a retirar del producto es transformado, en un primer momento, en hielo por congelación; después, mediante desecación primaria, al vacío, el hielo es sublimado; finalmente, mediante desecación secundaria, las moléculas de agua en la superficie del producto se extraen por desorción.

- por "no dañar la integridad estructural, funcional y biológica del tejido", se entiende que la guía para la regeneración tisular obtenida según el procedimiento presenta una conservación suficiente de las moléculas biológicas que garantizan la estructura mecánica del tejido, tales como el colágeno de diversos tipos, los proteoglucanos y la elastina, así como las moléculas biológicamente activas, tales como por ejemplo, las hormonas, enzimas, factores de crecimiento, para garantizar una utilización ulterior del producto. De esta manera, según estos parámetros, el producto obtenido según el procedimiento presenta unas propiedades biológicas similares o casisimilares a las del tejido inicial antes del tratamiento. En la presente invención, estas moléculas son, por ejemplo, el colágeno IV y la elastina; así como los factores de crecimiento de tipo NGF (factor de crecimiento de los nervios), FGF (factor de crecimiento de los fibroblastos), TGF (factor de crecimiento transformante),

- por "condicionamiento", se entiende cualquier tipo de acción destinada a poner la guía para la regeneración tisular en una condición de envasado que permita su conservación al aire libre y a temperatura ambiente durante al menos cinco años.

- por "alcoholes", se entiende cualquier compuesto orgánico en el que uno de los átomos de carbono esté unido a un grupo hidroxilo (-OH).

- por "peróxidos", se entiende cualquier compuesto químico que contiene un grupo funcional de fórmula general R-O-O-R' (dos átomos de oxígeno consecutivos unidos entre sí) donde R y R' son átomos de hidrógeno o radicales alquílicos cualesquiera.

- por "no colapsable", se entiende que la guía para la regeneración tisular de acuerdo con la invención, se caracteriza por una deformabilidad limitada en respuesta a la aplicación de una fuerza mecánica y que especialmente no presenta colapso. En otras palabras, el área de la sección transversal es sustancialmente constante independientemente de las presiones ejercidas. Más precisamente, la guía implantable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención, que tiene una forma tubular, no se aplasta cuando se sujeta, por ejemplo, por medio de una pinza, conserva su forma. En efecto, la guía implantable tomada por una de sus extremidades, por ejemplo, por medio de una pinza, y sostenida horizontalmente, conserva su aspecto tubular rectilíneo y no se derrumba verticalmente por la fuerza de la gravedad ejercida. Por el contrario, una vena o arteria utilizada en un medio húmedo, por ejemplo, después de una retirada como autoinjerto, no se puede considerar como no colapsable: sujeta, por ejemplo, por una de sus extremidades o por su centro, se deforma por efecto de la gravedad y su forma tubular rectilínea no es conservada. La guía para la regeneración tisular de acuerdo con la invención presenta sin embargo una ligereza suficiente para adaptarse a los gestos técnicos quirúrgicos del cirujano. La guía de acuerdo con la invención puede tomar especialmente una forma curva cuando es deslizada, por ejemplo, sobre una aguja curvada o sobre un nervio durante una técnica quirúrgica de enfundado.

Esta flexibilidad de la guía implantable es suficiente para acompañar, especialmente, los movimientos de un paciente que, por ejemplo, ha recibido como injerto una guía implantable de acuerdo con la invención para el enfundado de un nervio a regenerar. Por ejemplo, la guía implantable de acuerdo con la invención utilizada en la reparación de un nervio colateral de la palma de la mano permitirá al paciente mover sus dedos sin resistencia manifiesta. En efecto, la guía implantable de acuerdo con la invención es no colapsable, sino que presenta una flexibilidad suficiente para adaptarse a las deformaciones mecánicas inducidas por el gesto del cirujano o el movimiento del paciente después del implante sin provocar una tensión mecánica en el sitio del implante.

Efectivamente, es sabido que los neurotubos, especialmente los sintéticos o de colágeno, presentan como inconveniente que su estructura tubular es muy poco deformable, lo que conlleva especialmente un riesgo de extrusión del material por la cicatriz durante un movimiento del paciente injertado.

La guía para la regeneración tisular de acuerdo con la invención tiene por tanto, como característica, la de ser "no colapsable", puesto que no es ni blanda ni demasiado flexible, como puede ser el caso, por ejemplo, de una vena o un arteria húmeda, ni tampoco no deformable o poco deformable, como puede ser el caso, por ejemplo, de un neurotubo sintético o de colágeno.

- por "revestimiento" o "envoltura", se entiende una técnica quirúrgica destinada a envolver un tejido lesionado con un material de injerto utilizado para envolver un tejido lesionado de forma longitudinal. De esta manera, una vez instalado en el sitio del implante, el material de injerto presenta una forma tubular que rodea el tejido lesionado longitudinal. Por ejemplo, un nervio lesionado quedará revestido o envuelto por la guía para la regeneración tisular de acuerdo con la invención tras la apertura longitudinal de la guía. La guía abierta envuelve o reviste longitudinalmente el nervio lesionado y le protege, especialmente, para evitar las adherencias con los tejidos circundantes proporcionándole, al mismo tiempo, un medio adecuado para garantizar su regeneración.

- por "enfundado", se entiende una técnica quirúrgica destinada a recubrir un tejido lesionado con un material de aloinjerto de forma tubular denominado "manguito". Por ejemplo, cuando un nervio es seccionado, el manguito se "pone como un calcetín" sobre una de las extremidades del nervio. A continuación, el nervio es suturado por puntos epiperineurales, a continuación el manguito es deslizado por encima de la sutura del nervio y es colocado a ambos lados de la misma a una distancia equidistante de la línea de sutura.

El enfundado se puede definir igualmente como una sutura entre las dos extremidades del manguito y, de este modo, el enfundado solamente cubre las dos extremidades del tejido lesionado.

La guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención se describe a continuación.

La guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, está constituida por un segmento de arteria o de vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque se puede implantar sin rehidratación previa. En efecto, la guía implantable no colapsable es especialmente liofilizable con una luz abierta, característica que permite que el producto se conserve fácilmente, pero también le transmite una rigidez estructural. Esta rigidez de la guía implantable no colapsable permite especialmente su manipulación sencilla por el usuario durante una intervención quirúrgica.

La guía implantable no colapsable para la regeneración tisular también se caracteriza porque dicha rigidez de la guía permite cierta flexibilidad para poder deslizarse a lo largo del nervio seccionado y plegarse durante su implante, así como durante los movimientos motores del paciente que ha recibido el implante, pero es a la vez lo suficientemente rígida para reducir el riesgo de colapso in vivo. La guía implantable no colapsable está caracterizada porque comprende, en su luz, gelatina de Wharton.

La solicitante ha puesto de manifiesto, mediante la observación de los cortes histológicos, que una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención, constituida por un segmento de la arteria o de la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, que comprende en su luz gelatina de Wharton, está caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada, presentando una estructura porosa adjunta a la superficie interna de la guía particularmente apreciada en la regeneración tisular.

En efecto, la solicitante ha resaltado que la gelatina de Wharton, comprendida en la luz de la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención, se caracteriza por una estructura histológica diferente de la que presenta un producto que no se ha viroinactivado y liofilizado.

La gelatina de Wharton, comprendida en la luz de la guía implantable no colapsable es una estructura fibrosa y longitudinal. Estas características estructurales, después de la viro-inactivación y la liofilización, inducen una red porosa longitudinal a lo largo de la superficie interna de la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención. Esta estructura longitudinal porosa es particularmente apreciada en la regeneración tisular guiada porque el tejido que se regenera apenas encuentra resistencia durante su desarrollo biológico, y porque su regeneración está orientada en un eje favorable dentro de esta red porosa longitudinal.

Esta rigidez de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención permite, por tanto, disminuir los riesgos de colapso, proporcionando al mismo tiempo al tejido que se va a regenerar dentro de dicha guía una red porosa longitudinal que favorece su desarrollo biológico.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el espesor de la gelatina de Wharton está comprendido entre 0,3 y 2 milímetros.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el espesor de la gelatina de Wharton está comprendida entre 0,3 y 1 milímetro cuando está constituida por un segmento de la arteria umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el espesor de la gelatina de Wharton está comprendida entre 1 y 2 milímetros, cuando está constituida por un segmento de la vena umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el diámetro de la luz del segmento está comprendido entre 1 y 7 milímetros.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el diámetro de la luz del segmento está comprendido entre 1 y 2 milímetros cuando está constituida por un segmento de la arteria umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque el diámetro de la luz del segmento está comprendido entre 2 y 7 milímetros cuando está constituida por un segmento de la vena umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque la longitud del segmento está comprendida entre 1 y 12 milímetros.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque la longitud del segmento está comprendida entre 1 y 6 centímetros cuando está constituida por un segmento de la arteria umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque la longitud del segmento está comprendida entre 2 y 12 centímetros cuando está constituida por un segmento de la vena umbilical.

La guía implantable no colapsable se caracteriza porque está destinada a ser usada como material de aloinjerto seleccionado entre el grupo constituido por el injerto de la guía de regeneración del nervio, el injerto de la guía de regeneración del tendón, el injerto de la guía de regeneración del ligamento.

La guía implantable no colapsable puede ser utilizada como aloinjerto seleccionado entre el grupo que consiste en la reparación de un nervio del sistema nervioso periférico, la reparación del tendón, la reparación del ligamento.

La presente invención se refiere también a un procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria o de la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada.

La guía implantable no colapsable obtenida de acuerdo con el procedimiento se caracteriza porque puede ser implantada sin rehidratación previa.

El tejido biológico destinado a ser tratado según el procedimiento descrito en la presente invención, y destinado a formar una guía para la regeneración tisular es un vaso procedente de un cordón umbilical. Este cordón umbilical es obtenido después del parto de una donante adecuadamente informada, y que otorga su consentimiento según las exigencias de las directivas europeas y de la Ley de Bioética. Debido a la exigencia sanitaria relativa a las donaciones de tejidos y de células de origen humano, se realiza sistemáticamente una cualificación socioclínica de la donante y biológica previa de la donante. Esta cualificación implica una investigación del virus VIH, de las hepatitis B, C, HTLV y de la bacteria del tripanosoma responsable de la sífilis. El cordón umbilical es introducido ventajosamente en una caja estéril, que comprende una solución de NaCI a 4 °C, y es transportado a la misma temperatura. Si los datos clínicos de la donante son conformes a las exigencias relativas a la donación tisular, y el análisis sanguíneo de investigación de bacterias y virus resulta negativo, el tejido candidato puede someterse al procedimiento de preparación.

Los vasos sanguíneos del cordón umbilical son identificados y son separados entre sí mediante disección.

Los vasos son cortados en segmentos. La longitud de los segmentos está comprendida entre 1 y 12 centímetros.

De manera preferente, la longitud de un segmento está comprendida entre 1 y 6 centímetros cuando está constituída por un segmento de arteria umbilical.

De manera preferente, la longitud del segmento está comprendida entre 3 y 12 centímetros cuando está constituida por un segmento de la vena umbilical.

Los segmentos de los vasos son hidratados en unos baños de agua purificada, sucesivos, bajo agitación suave, durante aproximadamente 4 horas.

Al finalizar dicha hidratación, la gelatina de Wharton presenta una flexibilidad que facilita su corte.

Un mandril, o guía o soporte rígido, de diámetro adaptado, es introducido en la luz del vaso destinado a formar la guía para la regeneración tisular. Como mandril, o guía o soporte sólido, es utilizado ventajosamente, una aguja de punta redonda, con un ojo en un extremo. Un diámetro adaptado para el mandril, o guía o soporte rígido, tiene aproximadamente 1,5 milímetros para una arteria y aproximadamente 3 milímetros para una vena.

El exceso de gelatina de Wharton que rodea el vaso montado en el mandril puede ser retirado con un escalpelo, de modo que queda un espesor de 0,3 a 1 milímetro de gelatina de Wharton alrededor de la pared en el caso de una arteria, y de aproximadamente 1 a 1,5 milímetros para una vena.

El objeto obtenido es definido como un segmento de vena o arteria umbilical, hidratado con agua purificada.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque comprende al menos las etapas siguientes:

a) se dispone de un segmento de vena o arteria umbilical, hidratado con agua purificada;

b) se procede al volteo de la pared del segmento conservando la gelatina de Wharton para obtener un segmento volteado;

c) se introduce un soporte rígido en la luz del segmento volteado;

d) se procede a una congelación en seco del segmento volteado con el soporte rígido

e) se procede a una descongelación del segmento volteado y a la retirada del soporte rígido;

f) se realiza un tratamiento de viroinactivación del segmento volteado para obtener un segmento viroinactivado;

g) se introduce un soporte rígido en la luz del segmento viroinactivado;

h) se realiza una liofilización del segmento viroinactivado con el soporte rígido para obtener un segmento viroinactivado liofilizado;

i) se retira el soporte rígido del segmento viro-inactivado y liofilizado para obtener la guía implantable no colapsable.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza preferentemente, porque las etapas a), b), c), e), f), g) e i) se efectuan a temperatura ambiente.

Durante la etapa b), se da la vuelta al vaso después de haber suturado una extremidad del mismo al mandril, o soporte rígido. Para suturar la extremidad, se utiliza ventajosamente el ojo de una aguja de punta redonda.

Según un modo de realización preferido, una aguja de punta afilada, y con un hilo de sutura montado, es introducido a través del ojo de la aguja de punta redonda, atravesando la parte inferior del segmento de la vena. La vena puede así ser suturada a la altura del ojo de la aguja.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza preferentemente, porque el segmento volteado comprende en su luz la gelatina de Wharton.

Según un modo de realización preferido, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) está hecho de PETG (poli(tereftalato de etileno) glicosado), o de PET (poli(tereftalato de etileno) o de PLGA (poli(ácido láctico-co-ácido glicólico) o de poli(a-hidroxiésteres), especialmente de poli(ácido láctico) (PLA) y de poli(ácido glicólico) (PGA), o de diferentes polietilenos.

Según un modo de realización preferido, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) se caracteriza por un diámetro de 1 a 3 milímetros para una arteria.

Según un modo realización preferido, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) se caracteriza por un diámetro de 2 milímetros para una arteria.

Según un modo de realización preferido, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) se caracteriza por un diámetro de 3 ó 7 milímetros para una vena, dependiendo del diámetro de la vena.

Según un modo de realización preferido, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) se caracteriza por un diámetro de 3 milímetros para una vena.

Según una realización preferida, el soporte rígido utilizado durante la etapa c) se caracteriza por un diámetro de 7 milímetros para una vena.

Las etapas d) y e) garantizan una lisis de las células presentes en el segmento volteado por efecto de la presión osmótica.

El soporte rígido utilizado durante la etapa c) es retirado entre las etapas e) y f).

Con el fin de garantizar la inocuidad del producto terminado como material implantable en un paciente, se realiza una primera fase de tratamiento químico f). En efecto, el producto terminado debe estar exento de agentes microbiológicos tales como bacterias, virus, parásitos.

Una de las ventajas técnicas de dar la vuelta a la pared del segmento es permitir una optimización del tratamiento de viroinactivación y eliminar más fácilmente los residuos de sangre potencial. En efecto, el volteo de la pared del segmento tiene como consecuencia que la pared que originalmente estaba en contacto con la sangre circulante se encuentra en este momento en el exterior del segmento. Esta posición permite un mejor contacto con las soluciones químicas con agitación ligera de la etapa f). El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque el tratamiento de viroinactivación comprende al menos dos etapas de tratamiento sucesivas mediante un agente de viroinactivación química.

Por comodidad, de manera no limitativa, se citarán las etapas x e y para designar estas dos etapas de tratamiento sucesivas mediante un agente de viroinactivación química.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque el agente de viroinactivación química es seleccionado de entre el grupo constituido por los alcoholes y/o los peróxidos.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque la primera etapa de tratamiento x es realizada mediante un agente de viroinactivación seleccionado entre el grupo constituido por los alcoholes.

Según un modo de realización preferido, el primer agente de viroinactivación es el etanol con un contenido de alcohol comprendido entre 50 % y 80 % v/v.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque el agente de viroinactivación seleccionado entre el grupo constituido por los alcoholes es el etanol con un 70 % v/v.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque la primera etapa de tratamiento x es realizada durante un plazo de 60 minutos.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza preferentemente, porque el segundo agente de viroinactivación es el peróxido de hidrógeno.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque el peróxido de hidrógeno está en una forma seleccionada entre una solución acuosa y un gas. El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque el peróxido de hidrógeno está en forma acuosa en una concentración comprendida entre 3 % y 30 % p/v.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza preferentemente, porque la segunda etapa de viroinactivación química comprende dos subetapas de tratamiento, q y r, mediante peróxido de hidrógeno:

- una primera subetapa de tratamiento q que se realiza con una solución de peróxido de hidrógeno al 30 % p/v durante 15 minutos;

- una segunda subetapa de tratamiento r que se realiza con una solución de peróxido de hidrógeno al 3 % p/v durante 60 minutos.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza preferentemente, porque comprende, ademas al menos una etapa durante la cual el segmento volteado es lavado con agua purificada entre las etapas x e y de viroinactivación química.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque comprende, ademas al menos una etapa de ajuste del pH de la solución en la cual se encuentra el segmento viroinactivado entre las etapas f) y g).

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque comprende, ademas al menos una etapa de ajuste del pH a 8,5 de la solución en la cual se encuentra el segmento viroinactivado entre las etapas f) y g).

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque comprende, ademas al menos una etapa de ajuste del pH de la solución en la cual se encuentra el segmento viroinactivado, seguida al menos de una tapa de introducción en tampón del segmento viroinactivado entre las etapas f) et g).

Según un modo de realización preferido, está al menos una etapa de introducción en tampón que está definida mediante dos baños sucesivos de solución tampón de PBS (solución salina tamponada con fosfato).

Según un modo de realización preferido, esta etapa de introducción en solución tampón va seguida de dos etapas de lavado en baños de agua purificada.

Después de esta primera etapa f) de tratamientos químicos, el segmento puede ser considerado viroinactivado.

Según una realización preferida, el soporte rígido utilizado durante la etapa g) es colocado en la luz del segmento viroinactivado.

Según una realización preferida, el soporte rígido utilizado durante la etapa g) tiene las mismas características que el soporte rígido utilizado durante la etapa c).

El segmento viroinactivado es sometido a una etapa h) que es una liofilización. Esta etapa permite, al mismo tiempo, garantizar la calidad de la conservación al vacío obtenido según el procedimiento, y garantizar una etapa suplementaria de desinfección y de descelularización del segmento viroinactivado, para obtener un segmento liofilizado.

La etapa h) se caracteriza por la presencia del soporte rígido introducido durante la etapa g) en la luz antes de la liofilización para conservar la abertura, siendo este soporte rígido retirado después de la etapa h) de liofilización.

Esta etapa h) de liofilización, en combinación con la etapa f) de viroinactivación, transmite también al producto obtenido según el procedimiento su estructura de red porosa longitudinal de su superficie interna.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque la etapa h) de liofilización es realizada según las etapas m y n siguientes:

m) una congelación en dos etapas, m' y m":

- la primera etapa de congelación, m', realizándose a una temperatura de aclimatación seleccionada para no dañar la integridad estructural, funcional y biológica del segmento viroinactivado;

- la segunda etapa de congelación, m", realizándose a la temperatura final de congelación que es inferior a la temperatura de aclimatación;

n) una liofilización en dos etapas principales, denominadas primaria, n', y secundaria, n":

- realizándose la etapa de liofilización primaria n' mediante la aplicación de un vacío a aproximadamente 200 microbares y un perfil de temperatura ascendente;

- realizándose la etapa de liofilización secundaria n" mediante la aplicación de un vacío a aproximadamente 50 microbares y un perfil de temperatura descendente.

El perfil de temperatura ascendente es, ventajosamente, un perfil según el cual la temperatura de liofilización es regulada a una temperatura inicial baja, y después es aumentada hacia una temperatura final de liofilización primaria, en una o varias etapas de temperaturas ascendentes intermedias. El perfil de temperatura descendente es, ventajosamente, un perfil según el cual la temperatura de liofilización es ajustada inicialmente a una temperatura superior a la temperatura final de la etapa de liofilización primaria, que a continuación se hace descender hacia una temperatura final de liofilización secundaria superior a la temperatura inicial de la etapa de liofilización primaria.

Estas condiciones de liofilización permiten obtener un producto, que es un segmento viroinactivado y liofilizado, que se caracteriza especialmente porque muestra un contenido en agua residual a temperatura ambiente inferior del 5 %.

Según un modo de realización preferido, la guía rígida utilizada durante la etapa g) es retirado para obtener la guía implantable no colapsable.

Según un modo de realización preferido, la guía implantable no colapsable es acondicionada en condiciones estériles.

Según un modo de realización preferido, la guía implantable no colapsable es acondicionado en condiciones estériles, en bolsas de doble pared.

Según un modo de realización preferido, la guía implantable no colapsable, la cual está envasada, es sometida a una última etapa de esterilización la cual es una irradiación gamma.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza, preferentemente, porque comprende, ademas una etapa de esterilización de la guía implantable no colapsable viroinactivada y liofilizada, por exposición de este último a unos rayos gamma de 25-32 kGy después de la etapa i).

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 70 y 80 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 60 y 70 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 50 y 60 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 40 y 50 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 30 y 40 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 20 y 30 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 10 y 20 %.

El procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable se caracteriza porque la tasa de los factores de crecimiento presentes en la gelatina de Wharton (NGF, TGF, FGF) es preservada preferentemente entre 5 y 10 %.

El producto obtenido según el procedimiento puede ser definido como una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria o de la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada por que está viroinactivada y liofilizada.

El producto obtenido según el procedimiento puede ser definido como una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, también caracterizada porque se puede implantar sin rehidratación previa.

El procedimiento anteriormente descrito permite obtener un material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado.

El material de aloinjerto es presentado en una forma utilizable como injerto seleccionado entre el grupo constituido por el injerto de la guía de regeneración nerviosa, el injerto de la guía de regeneración del tendón, el injerto de la guía de regeneración del ligamento.

El material de aloinjerto inactivado y liofilizado puede ser utilizado como injerto seleccionado entre el grupo que consiste en la reparación de un nervio del sistema nervioso periférico, la reparación del tendón, la reparación del ligamento.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado puede ser utilizado en cirugía, especialmente, durante el uso de una técnica de envoltura o una técnica de enfundado de un tejido biológico lesionado.

Cuando el material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado es utilizado en cirugía durante la utilización de una técnica de envoltura, el material del aloinjerto es cortado longitudinalmente, por ejemplo, con unas tijeras quirúrgicas, antes del implante.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado puede ser utilizado en cirugía, cortándolo opcionalmente en seco, de manera que la longitud del material sea al menos aproximadamente 1 centímetro superior la longitud del intervalo sobre el que realizar un puente entre las extremidades proximal y distal del tejido a reparar, el cual puede ser un nervio del sistema nervioso periférico, un tendón o un ligamento. El tejido a reparar está preparado de manera que la sección esté limpia.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado es manipulado en seco. Un extremo (proximal o distal) del tejido a reparar es insertado en el interior del material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado, y éste es deslizado sobre la extremidad del tejido.

Las dos extremidades del nervio, el extremo proximal y el extremo distal, son suturadas.

En caso de pérdida de sustancia grave, el tejido a reparar es introducida en el aloinjerto en cada extremidad y es estabilizada mediante sutura, donde el aloinjerto actúa como guía.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado es deslizado más allá de la sutura, colocándolo a ambos lados de la misma, con los rebordes equidistantes de la línea de sutura.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado es rehidratado de forma natural desde los tejidos orgánicos circundantes, y se flexibiliza.

Como se ha indicado anteriormente, la guía implantable no colapsable está especialmente liofilizada, por tanto, puede manipularse en seco. Esta característica transmite especialmente al material de aloinjerto una rigidez estructural que permite una manipulación sencilla por el profesional que realiza el acto quirúrgico de implante de dicho material.

En efecto, es sabido que el gesto técnico quirúrgico descrito en el presente documento requiere una rigidez estructural del material de aloinjerto, tal como se define en la presente solicitud, para facilitar la inserción de una aguja de sutura curvada o recta en el interior de la estructura, para permitir los movimientos de vaivén de dicha aguja, y el deslizamiento del material de aloinjerto a lo largo del hilo de la sutura y después a lo largo del nervio, ajustándose a su forma sin una deformación ni desnaturalización significativa de la estructura tubular.

Estas ventajas técnicas transmitidas por un material de aloinjerto liofilizado y manipulable en seco son muy difíciles de obtener a partir de un producto húmedo y flexible cuya estructura tubular se pueda colapsar, es decir, que tenga una tendencia natural a perder su forma tubular durante la manipulación realizada en el acto quirúrgico del implante. En efecto, cuando por ejemplo una vena, que es un producto húmedo y flexible, es utilizado en una técnica de enfundado, es necesario atravesar la luz de la vena con una pinza para coger la aguja destinada a realizar la sutura. Este gesto es particularmente difícil con una vena que tendrá tendencia natural a deformarse durante su manipulación, lo que implica un riesgo de deterioro del producto durante el paso de la pinza y/o de la aguja. La dificultad de este gesto, así como los riesgos asociados, aumentan cuando crece la longitud de la vena utilizada.

Estas ventajas técnicas transmitidas por un material de aloinjerto liofilizado y manipulable en seco son muy difíciles de obtener a partir de un producto no deformable o poco deformable tales como, por ejemplo, los neurotubos sintéticos o de colágeno, ya que la estructura tubular será demasiado sólida para permitir el paso de una aguja de sutura curva a través de la luz de dicho neurotubo.

El material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado igualmente puede ser utilizado durante la utilización de una técnica de envoltura, por ejemplo, cuando el nervio está lesionado pero no seccionado, o cuando el acceso al lugar del implante es difícil.

Cuando el material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado es utilizado durante una técnica de envoltura, previamente se corta longitudinalmente para envolver el tejido lesionado o de difícil acceso, después, opcionalmente, es suturado.

De esta manera, durante el uso del material de aloinjerto viroinactivado y liofilizado, el cirujano puede decidir en cualquier momento, después de preparar el sitio receptor, cuál es la mejor técnica a emplear para el uso del producto de acuerdo con la invención, enfundado o revestido, dependiendo de sus necesidades técnicas.

Ejemplo 1: Ejemplos de un modo de realización de la invención según la cual un segmento de arteria umbilical es tratado de acuerdo con el procedimiento para obtener una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular.

Un donante adecuadamente informado y que otorga su consentimiento según las exigencias de la Declaración de Helsinki ofrece como donación el cordón umbilical procedente de un parto. Debido a la exigencia sanitaria relativa a las donaciones de tejidos y células de origen humano, se realiza sistemáticamente una cualificación previa del donante. Esta cualificación implica una investigación del virus VIH, de la hepatitis B, C, HTLV y de la bacteria del tripanosoma responsable de la sífilis.

El cordón umbilical es recuperado lo antes posible en la sala de parto. Es introducido ventajosamente en una caja estéril, que comprende una solución de NaCI a 4 °C.

En el laboratorio, en una sala estéril, se aplica el siguiente procedimiento:

Los vasos sanguíneos del cordón umbilical son identificados y son separados entre sí mediante disección.

Una arteria es cortada en un segmento con una longitud de 3 centímetros.

El segmento es enjuagado y es hidratado en baños de agua purificada sucesivos, con agitación suave, durante 4 horas.

Una aguja rígida de punta redonda, con un diámetro de 1,5 milímetros, que tiene un ojo en un extremo, se insertará en la luz del segmento de la arteria.

El exceso de gelatina de Wharton que rodea la arteria montada en la aguja es retirado con el escalpelo, de manera que queda un espesor de aproximadamente 0,3 milímetros de gelatina de Wharton alrededor de la pared.

Una aguja de punta afilada, y con un hilo de sutura montado, es introducida a través del ojo de la aguja de punta redonda, atravesando la parte inferior del segmento de la arteria. De esta forma, la arteria es suturada a la altura del ojo de la aguja.

El segmento fijado es volteado sobre sí mismo, de tal manera que la pared del segmento donde está la gelatina de Wharton se encuentra ahora dentro de la luz del segmento obtenido. El hilo que sujeta el segmento a la aguja es retirado.

Un soporte rígido de PETG de 1,75 milímetros de diámetro, dependiendo del diámetro de la vena, es colocado en la luz del segmento volteado.

El segmento volteado y montado sobre el soporte rígido es congelado en seco a una temperatura de -80 °C.

Durante el tratamiento químico, el segmento volteado y montado sobre la guía rígida es descongelado al aire libre, a temperatura ambiente, durante un período de 5 minutos. El soporte rígido de PETG es retirado. Esta etapa de congelación, seguida de una de descongelación, garantiza una descelurización importante del tejido biológico.

El segmento volteado es sometido a una sucesión de baños que garantiza un tratamiento químico del mismo. El objetivo de este tratamiento es desinfectar la arteria y la gelatina de Wharton, y especialmente su viroinactivación. Se aplica una agitación lineal suave del medio líquido durante cada baño para garantizar una penetración homogénea de los disolventes en los tejidos.

En un primer momento, el segmento volteado es depositado en un baño de agua purificada a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 horas. Esta etapa garantiza tanto el fin de la descongelación del tejido fisiológico, como una etapa de lisis celular por presión osmótica.

Después, el segmento volteado es transferido a un baño de descontaminación compuesto de etanol al 70 % v/v a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora.

Se realiza un lavado en el agua purificada durante aproximadamente 15 minutos a temperatura ambiente para retirar el etanol.

Para garantizar la segunda etapa de tratamiento descontaminante, el segmento volteado es transferido a un baño compuesto de peróxido de hidrógeno al 30 % p/v a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos.

Después, el segmento volteado es transferido a un baño de descontaminación compuesto de peróxido de hidrógeno al 3 % p/v a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. El segmento obtenido está viroinactivado.

La acción química aplicada al segmento viroinactivado es neutralizado a continuación, en al menos un baño que contiene hidróxido de sodio diluido a aproximadamente un pH de 8,5. El tratamiento de al menos un baño de neutralización es realizado a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos.

Para asegurar un reequilibrio del pH y para eliminar lo mejor posible los residuos orgánicos que se desprendan del tejido de interés, el segmento viroinactivado es transferido a al menos un baño de tampón fisiológico (PBS), para garantizar su reequilibrio fisiológico. El al menos un baño es efectuado a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos.

Por último, el segmento viroinactivado es transferido a dos baños sucesivos de agua purificada, a temperatura ambiente, durante al menos 15 minutos y hasta aproximadamente 1 hora.

En esta etapa del procedimiento, puede considerarse que el segmento obtenido mediante este tratamiento químico es un segmento desinfectado en gran medida, especialmente viroinactivado y descelularizado.

Después de esta parte relativa a los tratamientos químicos, el segmento viroinactivado es sometido a una liofilización.

Un soporte rígido de PETG estéril es insertado en la luz del segmento viroinactivado. Este último es colocado sobre una bandeja de acero inoxidable.

El conjunto es transferido a un liofilizador, donde se realiza una etapa de congelación seguida de una etapa de liofilización, de acuerdo con las modalidades siguientes:

• Congelación:

- La primera etapa de congelación es realizada a una temperatura de aclimatación seleccionada para no dañar la integridad estructural, funcional y biológica del segmento viroinactivado;

- la segunda etapa de congelación es realizada a la temperatura final de congelación la cual es inferior a la temperatura de aclimatación;

• Liofilización:

- Es realizada una etapa de liofilización primaria mediante la aplicación de un vacío a aproximadamente 200 microbares y mediante la aplicación de un perfil de temperatura ascendente; - Es realizada una etapa de liofilización secundaria mediante la aplicación de un vacío a aproximadamente 50 microbares y mediante la aplicación de un perfil de temperatura descendente. Después de esta etapa de liofilización, el segmento volteado es un segmento desinfectado, especialmente viroinactivado, descelularizado y liofilizado.

El soporte rígido de PETG es retirado para obtener la guía implantable no colapsable.

La guía implantable no colapsable es acondicionada en condiciones estériles, por ejemplo, en bolsitas de doble pared.

Una última etapa de esterilización de la guía implantable no colapsable es realizada por exposición de la misma a rayos gamma de 25-32 kGrays.

El producto así obtenido es utilizado como material de aloinjerto, por ejemplo, el injerto de la guía de regeneración nerviosa, el injerto de la guía de regeneración del tendón, el injerto de la guía de regeneración del ligamento.

Algunos posibles usos del producto obtenido de acuerdo con el procedimiento son, por tanto, la reparación de un nervio del sistema nervioso periférico, la reparación del tendón, la reparación del ligamento.

Ejemplo 2: Ejemplo de un modo de utilización de una guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención.

Se utiliza como modelo experimental una rata de la línea Sprague Dawley, de 13 semanas de edad. Se efectúa una anestesia general del animal, y el procedimiento analgésico es aplicado de 30 minutos a 1 hora antes de la cirugía.

Tras la disección del septo intermuscular entre el músculo glúteo máximo y el bíceps femoral, para exponer y disociar el nervio ciático, se procede a una transección de este nervio en el animal.

Esta transección es realizada de tal manera que un segmento de 1 cm del nervio ciático expuesto es retirada con un aumento de 4x usando unas microtijeras.

Un guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención es cortada para obtener una longitud de 2 centímetros.

La guía implantable no colapsable es manipulada en seco, es insertado el muñón de la extremidad proximal del nervio en la luz de la guía.

El nervio es suturado con dos puntos epiperineurales, después, la guía es deslizada más allá de la sutura nerviosa, colocándola a ambos lados de la misma, con un desbordamiento equidistantes de la línea de sutura.

Después del procedimiento quirúrgico, el nervio ciático se volvió a colocar entre los dos músculos, y la herida cutánea es suturada mediante grapas quirúrgicas.

Ejemplo 3: Demostración de la eficacia de la viroinactivación de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención.

Se realizaron mediciones de la carga vírica en segmentos de arterias umbilicales cuyas paredes se han volteado conservando la gelatina de Wharton en la luz del segmento, por inyección de virus en la gelatina de Wharton para comprobar la viroinactivación de los tejidos de acuerdo con el procedimiento.

Puesto que las arterias umbilicales se caracterizan por una pared más gruesa que la de las venas umbilicales, la demostración es más concluyente con tejido biológico de origen arterial.

Los virus han sido inoculados en la gelatina de Wharton mediante una incisión en el pinzamiento de las paredes vasculares de los segmentos de los vasos umbilicales volteados en tres puntos.

Se toman alícuotas de los segmentos de los vasos umbilicales volteados así tratados para ponerlos en solución y centrifugarlos. La fracción soluble sirve para sembrar las células en el medio de cultivo celular. Cada tipo de virus estudiado es sembrado sobre el tipo adecuado de células para permitir la expresión de su virulencia.

Los virus objeto de la medición son el virus Parvovirus porcino (denominado a partir de ahora PPV) y el virus Pseudorrabia (denominado a partir de ahora PRV) implicado en la enfermedad de Aujeszky. El PPV es un virus desnudo, de pequeña dimensión, considerado como fuertemente resistente. El PRV es un virus encapsulado que se considera que tiene una resistencia fisicoquímica intermedia.

Las mediciones de carga vírica se realizaron mediante la detección de la producción vírica en unas células infectadas y, más particularmente, por observación de un efecto citopático específico. Los virus inyectados en la gelatina de Wharton, en la luz de los segmentos de los vasos umbilicales volteados, se sometieron bien a la fase de tratamiento químico con etanol al 70 % v/v de acuerdo con el procedimiento, bien a la etapa de tratamiento químico con peróxido de hidrógeno al 30 % p/v después al 3 % de acuerdo con el procedimiento.

La resistencia del virus PRV ha sido evaluada según la etapa de tratamiento químico con etanol, así como según la etapa de tratamiento químico con peróxido de hidrógeno. La resistencia del virus PPV ha sido evaluada según la etapa de tratamiento químico con peróxido de hidrógeno.

Cada medición de la carga vírica se realizó dos veces para cada ensayo, estas se anotaron en la tabla siguiente bajo las indicaciones Análisis A y Análisis B.

Los resultados de la tabla siguiente representan la disminución de la carga vírica medida, expresada en log. Esta disminución se midió por comparación de la carga vírica de las alícuotas de los segmentos de los vasos umbilicales volteados antes, y después del tratamiento indicado.

La eficacia de los tratamientos químicos de acuerdo con el procedimiento, aplicados a los segmentos de los vasos umbilicales volteados, y destinados a la viroinactivación puede ser constatada.

El tratamiento químico con peróxido de hidrógeno es eficaz contra el PPV y el PRV.

El tratamiento químico con etanol es eficaz contra el PPV y el PRV.

Como se demuestra, la combinación de dos tratamientos químicos permite asegurar una viroinactivación de los segmentos de los vasos umbilicales volteados, tanto de virus encapsulados como de virus no encapsulados. Esta viroinactivación está definida por una disminución de la población vírica de al menos 4 log.

Ejemplo 4: Demostración de la preservación de las características estructurales de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención después de la rehidratación. Los ensayos se realizaron a partir de dos guías implantables para la regeneración tisular de acuerdo con la invención, de la que una se obtiene a partir de un segmento de vena umbilical (identificada como "Vena") y la otra a partir de un segmento de arteria de cordón umbilical (identificada como "Arteria").

Las etapas de obtención de las dos guías implantables para la regeneración tisular de acuerdo con la invención son similares a las descritas en el ejemplo 1 pero a partir de estos dos tipos de segmentos.

El objetivo de los ensayos de rehidratación es observar la evolución estructural de las guías implantables de acuerdo con la invención con el tiempo durante sus rehidrataciones.

Cada muestra se pesó y se midió (diámetro interno y diámetro externo, longitud) antes de la rehidratación.

Cada muestra se sumergió en un recipiente que comprendía aproximadamente 50 ml de agua. Después de 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora y 24 horas de rehidratación, las guías se pesaron y se midieron. Si la guía aparecía demasiado empapada con agua antes de la medición y la pesada, el agua en exceso se retiró con un papel absorbente por capilaridad.

Los resultados se presentan en la tabla siguiente.

Debido a las pequeñas dimensiones del producto, medir los diámetros internos y externos es difícil. Del producto inicial liofilizado hasta el producto rehidratado a los 15 minutos, los valores son estables con un pequeño aumento del diámetro interno y una pequeña disminución del diámetro externo. Estas variaciones en las medidas se deben posiblemente a la incertidumbre asociada a la medición de pequeñas dimensiones en tejidos flexibles, más que debido a una evolución cualquiera de las dimensiones. De hecho, estos parámetros de diámetros internos y diámetros externos no se midieron a 30 minutos y 1 hora. Las medidas finales después de las 24 horas de rehidratación confirman la estabilidad de estos parámetros.

En lo que respecta al parámetro de las longitudes, se realizó la misma observación, las longitudes no varían con el tiempo de rehidratación salvo en un máximo de 1 mm. Esta variación de las longitudes no es probablemente un crecimiento, sino que de nuevo, probablemente se deba a una incertidumbre de las mediciones efectuadas sobre un tejido flexible.

El peso es un parámetro más fluctuante ya que el producto inicial está liofilizado. Después de 5 minutos de rehidratación, las guías implantables de acuerdo con la invención (vena y arteria) alcanzaron el 80 % de su peso máximo. Después de 24 horas de rehidratación, los resultados permanecieron estables (84 % del peso máximo para la arteria y del 90 % para la vena).

Se realizó un estudio cualitativo en paralelo para observar el comportamiento estructural del producto durante la rehidratación.

Después de 5 minutos de rehidratación, el producto obtenido a partir de la arteria apareció translúcido. La guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención es flexible pero la luz sigue abierta. La realizaron las mismas observaciones en cada etapa de medición hasta la medición realizada a 1 hora de rehidratación inclusive. Después de 24 horas de rehidratación, la luz está sensiblemente menos abierta, y se observa un inicio de aplastamiento de la guía implantable no colapsable y una alteración en la forma tubular.

Después de 5 minutos de rehidratación, el producto obtenido a partir de la vena aparece translúcido. La guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención es flexible pero la luz sigue abierta. La realizaron las mismas observaciones en cada etapa de medición hasta la medición realizada a 24 horas de rehidratación inclusive. A 24 horas, al final el ensayo, la luz sigue abierta y la forma tubular de la guía implantable no colapsable se mantiene.

Las guías implantables de acuerdo con la invención, obtenidas a partir de una vena o de una arteria del cordón umbilical, se rehidrataron después de solo 5 minutos de inmersión en agua (más del 80 % del peso máximo alcanzado). Las dimensiones (longitud, diámetro externo y diámetro interno) de las guías no se vieron alteradas por la rehidratación.

Después de 1 hora de rehidratación, las guías implantables de acuerdo con la invención, obtenidas a partir de una vena o de una arteria del cordón umbilical, conservan sus estructuras tubulares con una luz abierta. Se observaron las mismas características después de 24 horas para la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención obtenida a partir de una vena del cordón umbilical. Para la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención obtenida a partir de una arteria del cordón umbilical, a las 24 horas se observó un inicio de aplastamiento, así como una ligera obstrucción de la luz.

La guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria 0 la vena umbilical cuya pared se ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada y por tanto se puede implantar con o sin rehidratación previa, se observó una estabilidad estructural durante al menos 24 horas durante la rehidratación del producto.

Ejemplo 5: Demostración de la preservación de la forma tubular de la guía implantable no colapsable para la regeneración tisular de acuerdo con la invención después de la rehidratación

Los ensayos se realizaron a partir de tres guías implantables para la regeneración tisular de acuerdo con la invención, de la que una se obtuvo a partir de un segmento de vena umbilical (identificada como "Vena") y las otras dos a partir de un segmento de arteria de cordón umbilical (identificados como "Arteria 1" y "Arteria 2"). La muestra Vena tiene una longitud de 3 cm, la muestra Arteria 1 tiene una longitud de 1 cm y la muestra Arteria 2 tiene una longitud de 2,8 cm.

Las etapas de obtención de las tres guías implantables para la regeneración tisular de acuerdo con la invención son similares a las descritas en el ejemplo 1 pero a partir de estos dos tipos de segmentos.

El objetivo de los ensayos de rehidratación es determinar si las guías implantables de acuerdo con la invención preservan sus formas tubulares o si se reinvierten cuando se cortan longitudinalmente y se rehidratan sobre un mandril.

En efecto, la pared del tejido biológico destinado a su tratamiento de acuerdo con la invención, la cual es un segmento de vena o de arteria, es volteado durante el procedimiento de producción de las guías implantables de acuerdo con la invención, de manera que la pared de la luz del segmento así obtenido sea la pared externa del vaso antes del volteo.

De esta manera, se podría prejuzgar que una sección longitudinal de las guías implantables de acuerdo con la invención induce un retorno a la forma original del producto anterior a su obtención de acuerdo con el procedimiento y, por tanto, una inversión de la forma tubular de la pared.

Se utilizó el siguiente protocolo para cada muestra: la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención se cortó longitudinalmente con unas tijeras y después se colocó alrededor de un mandril de PETG de tal forma que simulara la envoltura (wrapping, en inglés) alrededor de un tejido, por ejemplo, un nervio lesionado. El conjunto se depositó en un recipiente. Mediante una pipeta, la guía implantable no colapsable de acuerdo con la invención se rehidrató hasta la inmersión total. Se anotaron el aspecto de la guía implantable no colapsable rehidratada y la cantidad de agua. La rehidratación se realizó por alícuotas de 50 pl de adiciones de agua y se respetaron 5 minutos de intervalo entre cada aporte de agua. Cuando la guía implantable no colapsable estuvo totalmente rehidratada, se sumergió en agua y se anotó la duración de la inmersión.

Se obtuvieron los resultados siguientes para las muestras Arteria 1 y Arteria 2:

Después de la inmersión total, no se observó ninguna inversión, las guías implantables de acuerdo con la invención conservaron su forma tubular, incluso después de la sección longitudinal y la rehidratación completa. Después de 18 horas de inmersión total, las guías implantables de acuerdo con la invención conservan su forma tubular y permanecen sobre el mandril. La rehidratación no altera la forma.

En consecuencia, las guías implantables de acuerdo con la invención obtenidas a partir de tejidos biológicos que son las arterias umbilicales están adaptadas para usarse como envolturas (wraps en lengua inglesa) y suturarse en medio húmedo.

Se obtuvieron los resultados siguientes para la muestra Vena:

Después de 1 hora de inmersión total, la muestra Vena no se invirtió y conserva su forma tubular.

En consecuencia, las guías implantables de acuerdo con la invención obtenidas a partir de tejidos biológicos que son venas umbilicales están igualmente adaptadas para ser usadas como envolturas (wraps en lengua inglesa) y suturarse en un medio húmedo.

En conclusión, las guías implantables de acuerdo con la invención pueden ser utilizadas en las técnicas de envoltura (wrapping en lengua inglesa) para rodear los tejidos a reparar, por ejemplo, los nervios lesionados. Una vez cortados longitudinalmente y colocados alrededor del tejido cuya regeneración es buscada, las guías implantables de acuerdo con la invención preservan su forma tubular en un entorno húmero durante al menos 18 horas, concediendo el tiempo necesario para realizar la sutura.

De lo contrario a lo que se podría prejuzgar, el corte longitudinal no induce la inversión del producto de tal manera que éste recupere su forma original antes de la inversión realizada en el procedimiento.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Guía implantable no colapsable para la regeneración tisular, constituida por un segmento de la arteria o la vena umbilical cuya pared se le ha dado la vuelta, caracterizada porque está viroinactivada y liofilizada.

2. Guía implantable no colapsable de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende en su luz la gelatina de Wharton.

3. Guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el diámetro de la luz del segmento está comprendido entre 1 y 7 milímetros.

4. Guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la longitud del segmento está comprendida entre 1 y 12 centímetros.

5. Guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque está destinada a ser usada como material de aloinjerto seleccionado entre el grupo constituido por el injerto de la guía de regeneración del nervio, el injerto de la guía de regeneración del tendón, el injerto de la guía de regeneración del ligamento.

6. Procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque comprende al menos las etapas siguientes: a) se dispone de un segmento de vena o arteria umbilical, hidratado con agua purificada;

b) se procede al volteo de la pared del segmento conservando la gelatina de Wharton para obtener un segmento volteado;

c) se introduce un soporte rígido en la luz del segmento volteado;

d) se procede a una congelación en seco del segmento volteado con el soporte rígido;

e) se procede a una descongelación del segmento volteado y a la retirada del soporte rígido; f) se realiza un tratamiento de viroinactivación del segmento volteado para obtener un segmento viroinactivado;

g) se introduce un soporte rígido en la luz del segmento viroinactivado;

h) se realiza una liofilización del segmento viroinactivado con el soporte rígido para obtener un segmento viroinactivado y liofilizado;

i) se retira el soporte rígido del segmento viro-inactivado y liofilizado para obtener la guía implantable no colapsable.

7. Procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada porque el segmento volteado comprende en su luz la gelatina de Wharton.

8. Procedimiento de preparación de una guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 y 7, caracterizada porque el tratamiento de viroinactivación comprende al menos dos etapas de tratamiento sucesivas mediante un agente de viroinactivación química.

9. Guía implantable no colapsable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o susceptible de ser obtenida con el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8 anteriores, presentada en una forma utilizable como injerto seleccionado entre el grupo constituido por el injerto de la guía de regeneración del nervio, el injerto de la guía de regeneración del tendón, el injerto de la guía de regeneración del ligamento.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Este listado de referencias citadas por el solicitante tiene como único fin la conveniencia del lector. No forma parte del documento de la Patente Europea. Aunque se ha puesto gran cuidado en la compilación de las referencias, no pueden excluirse errores u omisiones y la EPO rechaza cualquier responsabilidad en este sentido.

Documentos de patentes citados en la descripción

* US 50190&7 A [0007] US 6241981 B [0011]

* US 67162256 (0006) US 7294144 B [0013}

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Bibliografía no especificada en la descripción de la patente

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