ES2823124T3 - Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular - Google Patents

Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular Download PDF

Info

Publication number
ES2823124T3
ES2823124T3 ES17733406T ES17733406T ES2823124T3 ES 2823124 T3 ES2823124 T3 ES 2823124T3 ES 17733406 T ES17733406 T ES 17733406T ES 17733406 T ES17733406 T ES 17733406T ES 2823124 T3 ES2823124 T3 ES 2823124T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
ang
amount
biomarker
subject
angiopoietin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES17733406T
Other languages
English (en)
Inventor
Herbert Andres
Dirk Block
Johann Karl
Peter Kastner
Ursula-Henrike Wienhues-Thelen
Roberto Latini
Serge Masson
André Ziegler
Edelgard Kaiser
Stefan Palme
Markus Thomas
Simona Barlera
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2823124T3 publication Critical patent/ES2823124T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/475—Assays involving growth factors
    • G01N2333/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/326—Arrhythmias, e.g. ventricular fibrillation, tachycardia, atrioventricular block, torsade de pointes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/54—Determining the risk of relapse
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Un procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la determinación de la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1(Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma del sujeto.

Description

DESCRIPCIÓN
Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular
La fibrilación auricular (FA) es el tipo más común de arritmia cardíaca y una de las afecciones más extendidas entre la población anciana. La fibrilación auricular se caracteriza por latidos cardíacos irregulares y a menudo comienza con breves períodos de latidos anómalos que se pueden incrementar con el tiempo y se puede convertir en una afección permanente. Se estima que 2,7-6,1 millones de personas en los Estados Unidos tienen fibrilación auricular y aproximadamente 33 millones de personas en todo el mundo (Chugh SS. et al., Circulation 2014;129:837-47). Los pacientes con FA tienen una mayor tasa de apoplejía y tienen mayor riesgo de desarrollar insuficiencia cardíaca congestiva en comparación con pacientes con ritmo sinusal.
Las angiopoyetinas son glucoproteínas que están implicadas en la angiogénesis. Debido a que también se expresan en tejido sano, se supone que estabilizan los vasos existentes y modulan la interacción entre células endoteliales y las células del músculo liso vasculares circundantes (Wong a L, et al. Circ Res. 1997; 81:567-74). Son conocidas cuatro angiopoyetinas, de angiopoyetina-1 (Ang-1) a angiopoyetina-4 (Ang-4). La angiopoyetina-2 (Ang-2) humana se describe, por ejemplo, en Maisonpierre PC et al. (Science 277 (1997) 55-60 y Cheung, A. H., et al., Genomics 48 (1998) 389-91) y es uno de los cuatro miembros de la familia de angiopoyetinas. Ang-2 se descubrió como ligando para las Tie, una familia de tirosina cinasas que se expresa selectivamente dentro del endotelio vascular (Yancopoulos, G. D., et al., Nature 407 (2000) 242-48).
Aunque Ang-1 es un agonista de la tirosina cinasa receptora Tie2 específica de células endoteliales y tiene propiedades proangiogénicas, se descubrió que Ang-2 interrumpe la formación de vasos sanguíneos y tiene una acción de señalización antagonista a través del receptor Tie-2 (Maisonpierre PC et al., Science 1997;277:55-60).
La angiopoyetina-2 (Ang-2) es conocida por dañar la integridad endotelial y se ha demostrado que es elevada en insuficiencia cardíaca (véase, por ejemplo, Poss et al. Angiopoietin-2 and outcome in patients with acute decompensated heart failure. Clin Res Cardiol. Mayo 2015;104(5):380-387, o Lukasz et al. Angiopoietin-2 in adults with congenital heart disease and heart failure. PLoS One. 2013;8(6):e66861).
Se ha descubierto que la Ang-2 es elevada en pacientes con fibrilación auricular crónica (permanente) (Freestone et al., Angiogenic factors in Atrial Fibrillation: a possible role in thrombogenesis? Ann Med 2005; 37: 365-72 o Choudhury et al, Relationship of Soluble CD40 Ligand to Vascular Endothelial Growth Factor, Angiopoietins, and Tissue Factor in Atrial Fibrillation, CHEST 2007; 132:1913-1919, y Freestone et al., European Heart Journal, volumen 25, n.° supl_1, septiembre 2004, páginas 488-489), mientras que no se ha descubierto que la Ang-1 esté influenciada por fibrilación auricular en estos 2 estudios. La tasa de progresión y los factores de riesgo para la progresión de fibrilación auricular paroxística y persistente a permanente son clínicamente poco conocidos (Kerr CR et al., Am Heart J. 2005;149:489-496).
Latini (J Intern Med. 2011 Feb;269(2):160-71) divulga un procedimiento para predecir la recidiva de fibrilación auricular en base a la detección de NTproANP, hsTnT o NTproBNP en pacientes con antecedentes de FA.
Masson (Cardiovasc Drugs Ther 2015; 29:551) divulga el uso beneficioso de biomarcadores cardíacos para la predicción de fibrilación auricular recurrente frente a una variedad de biomarcadores vasoactivos o inflamatorios analizados en muestras del subestudio de biomarcadores GISSI-FA. Se concluye que predecir el riesgo de recidiva de FA en un paciente en ritmo sinusal a través de ecocardiografía y ensayos de biomarcadores circulantes es una tarea completamente diferente y mucho más complicada que mostrar alteraciones esperadas de las mismas variables cuando la FA está en curso.
Masson (Heart 2010; 96: 1909-1914) divulga la predicción de recidiva de fibrilación auricular en base a la determinación de marcadores inflamatorios tales como IL-6. Los marcadores inflamatorios se incrementarían, pero serían factores pronóstico débiles para la primera recidiva de FA.
El documento WO 2014/072500 divulga medios y procedimientos para diagnosticar una fibrilación auricular paroxística reciente en un sujeto, que comprende determinar la cantidad de al menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en, por ejemplo, una troponina cardíaca, un péptido de tipo BNP, e IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) e interleucina-6 (IL-6) en una muestra del sujeto.
Hasta ahora, solo se observó angiopoyetina-2 en asociación con fibrilación auricular permanente. Sin embargo, predecir el riesgo de recidiva de FA en un paciente actualmente en ritmo sinusal a través de electrocardiograma y/o ensayos de biomarcadores circulantes es una tarea completamente diferente y mucho más complicada que mostrar alteraciones esperadas de las mismas variables cuando la FA está en curso (Masson et al. Cardiovasc Drugs Ther (2015) 29:551). La angiopoyetina-2 aún no se usó para predecir la recidiva de fibrilación auricular en pacientes que ya habían tenido fibrilación auricular y principalmente FA paroxística. No obstante, la predicción de recidiva de fibrilación auricular, selección apropiada de medicación preventiva y predicción del éxito del tratamiento son necesidades clínicas no cubiertas importantes. De forma ventajosa, se ha demostrado en los estudios subyacentes a la presente invención que la angiopoyetina-2 sola o bien en combinación con al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscularcerebral), e IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca permite una predicción fiable de recidiva de fibrilación auricular (véanse los ejemplos). Gracias a los hallazgos de la presente invención, un paciente se puede identificar y tratar de acuerdo con el riesgo.
En consecuencia, la presente invención se refiere a un procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en un sujeto que comprende la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto.
En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, el procedimiento comprende además la etapa de comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) del/de los biomarcador(es) con una cantidad de referencia (o con cantidades de referencia).
En consecuencia, la presente invención se refiere en particular a un procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de
(a) determinar la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, y
(b) comparar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) como se determina en la etapa (a) con una cantidad de referencia (o con cantidades de referencia).
Preferentemente, la predicción de recidiva de fibrilación auricular se basa en los resultados de la etapa de comparación (b). Por tanto, el procedimiento de la presente invención puede comprender la otra etapa (c) de predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en el sujeto en base a los resultados de la etapa (b).
El procedimiento como se hace referencia de acuerdo con la presente invención incluye un procedimiento que consiste esencialmente en las etapas mencionadas anteriormente o un procedimiento que incluye otras etapas. Además, el procedimiento de la presente invención, preferentemente, es un procedimiento ex vivo o in vitro. Además, puede comprender etapas además de las mencionadas de forma explícita anteriormente.
Por ejemplo, otras etapas se pueden referir a la determinación de otros marcadores y/o a pretratamientos de muestra o evaluación de los resultados obtenidos por el procedimiento. El procedimiento de la presente invención también se puede usar para el seguimiento, confirmación y subclasificación del sujeto. El procedimiento se puede llevar a cabo manualmente o asistido por automatización. Preferentemente, la etapa (a), (b) y/o (c) puede estar asistida total o parcialmente por automatización, por ejemplo, por un equipo robótico y sensitivo adecuado para la determinación en la etapa (a) o un cálculo implementado por ordenador en la etapa (b).
El término "fibrilación auricular" es bien conocido en la técnica. Como se usa en el presente documento, el término se refiere preferentemente a una taquiarritmia supraventricular caracterizada por activación auricular no coordinada con el consiguiente deterioro de la función mecánica auricular. En particular, el término se refiere a un ritmo cardíaco anómalo caracterizado por latidos rápidos e irregulares. Implica las dos cavidades superiores del corazón. En un ritmo cardíaco normal, el impulso generado por el nódulo sinoauricular se propaga a través del corazón y provoca la contracción del miocardio y el bombeo de sangre. En la fibrilación auricular, los impulsos eléctricos regulares del nódulo sinoauricular se reemplazan por impulsos eléctricos rápidos desorganizados que dan como resultado latidos cardíacos irregulares. Los síntomas de fibrilación auricular son palpitaciones del corazón, desmayo, disnea o dolor torácico. Sin embargo, la mayoría de los episodios no tienen síntomas. En el electrocardiograma, la fibrilación auricular se caracteriza por el reemplazo de ondas P constantes por oscilaciones rápidas u ondas fibrilatorias que varían en amplitud, conformación y sincronización, asociadas con una respuesta ventricular irregular, con frecuencia rápida, cuando la conducción auriculoventricular está intacta.
El American College of Cardiology (ACC), American Heart Association (AHA) y la European Society of Cardiology (ESC) proponen el siguiente sistema de clasificación (véase Fuster (2006) Circulation 114 (7): e257-354, véase, por ejemplo, la figura 3 en el documento): FA de reciente comienzo, FA paroxística, FA persistente y FA permanente.
Todas las personas con FA están inicialmente en la categoría llamada FA de reciente comienzo. Sin embargo, el sujeto puede o no haber tenido episodios previos no detectados. Un sujeto padece FA permanente, si la FA ha persistido durante más de un año. En particular, no se produce conversión de nuevo al ritmo sinusal (o solo con intervención médica). Un sujeto padece FA persistente, si la FA dura más de 7 días. El sujeto puede requerir intervención farmacológica o bien eléctrica para finalizar la fibrilación auricular. Por tanto, la FA persistente se produce en episodios, pero la arritmia típicamente no se convierte de nuevo al ritmo sinusal espontáneamente (es decir, sin invención médica). La fibrilación auricular paroxística, preferentemente, se refiere a un episodio intermitente de fibrilación auricular que no dura más de 7 días y finaliza espontáneamente (es decir, sin intervención médica). En la mayoría de los casos de FA paroxística, los episodios duran menos de 24 horas. Por tanto, mientras que la fibrilación auricular paroxística finaliza espontáneamente, la fibrilación auricular persistente no termina espontáneamente y requiere cardioversión eléctrica o farmacológica para su finalización u otros procedimientos, tales como procedimientos de ablación (Fuster (2006) Circulation 114 (7): e257-354).
En un modo de realización preferente de la presente invención, el término "fibrilación auricular paroxística" se define como episodios de FA que finalizan espontáneamente en menos de 48 horas, más preferentemente en menos de 24 horas y, lo más preferentemente en menos de 12 horas. Tanto la FA persistente como paroxística pueden ser recurrentes.
De acuerdo con el procedimiento, se podrá predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Por tanto, se debe entender que el sujeto que se va a someter a prueba es un sujeto que ha padecido fibrilación auricular antes de llevar a cabo el procedimiento de la presente invención. Por tanto, el sujeto habrá experimentado episodios de fibrilación auricular previamente. En consecuencia, el sujeto preferentemente padece fibrilación auricular, en particular, fibrilación auricular persistente o paroxística. Preferentemente, el sujeto que padece fibrilación auricular tuvo uno o más episodios de fibrilación auricular dentro de los 6 meses, más preferentemente, dentro de un mes, incluso más preferentemente dentro de los 14 días, y lo más preferentemente dentro de los siete días antes de obtener la muestra de prueba. Sin embargo, el sujeto preferentemente no tiene un episodio de fibrilación auricular en el momento en que se obtiene la muestra que se va a someter a prueba. Por tanto, el sujeto preferentemente tiene un ritmo sinusal normal en este momento. Preferentemente, el sujeto no experimentó un episodio de fibrilación auricular dentro de las 48 horas antes de obtener la muestra de prueba del sujeto. En consecuencia, se prevé que el último episodio de fibrilación auricular finalizó al menos 48 horas antes de obtener la muestra de prueba (con o bien sin intervención médica).
Preferentemente, el sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con los procedimientos de la presente invención no padece fibrilación auricular permanente.
En modos de realización preferentes, se habrán detectado al menos algunos de los episodios previos de fibrilación auricular. En consecuencia, se prevé que el sujeto que se va a someter a prueba tiene antecedentes conocidos de fibrilación auricular.
En un modo de realización preferente, el sujeto tiene fibrilación auricular paroxística. Preferentemente, dicho sujeto que tiene fibrilación auricular paroxística tuvo uno o más episodios de fibrilación auricular dentro de los 6 meses, más preferentemente, dentro de un mes, incluso más preferentemente dentro de los 14 días, y lo más preferentemente dentro de los siete días antes de que se obtenga la muestra que se va a someter a prueba. Dichos uno o más episodios de fibrilación auricular, preferentemente finalizaron espontáneamente, es decir, sin intervención médica. Preferentemente, el último episodio finalizó espontáneamente al menos 48 horas antes de que se obtenga la muestra que se va a someter a prueba.
En otro modo de realización preferente, el sujeto tiene fibrilación auricular persistente. Preferentemente, uno o más de los episodios anteriores de fibrilación auricular no terminaron espontáneamente. Por tanto, se prevé que el sujeto se ha sometido a cardioversión, es decir, cardioversión exitosa. En particular, se prevé que el sujeto se ha sometido a cardioversión dentro de los 14 días antes de que se haya obtenido la muestra que se va a someter a prueba (por ejemplo, dentro de los 7 días antes de que se haya obtenido la muestra). Se habrá llevado a cabo dicha cardioversión para finalizar el último episodio diagnosticado de fibrilación auricular. La cardioversión es un procedimiento médico por el que la arritmia cardíaca se convierte en un ritmo normal. Esto se puede lograr por cardioversión eléctrica o cardioversión con un agente antiarrítmico. Preferentemente, dicha cardioversión se ha llevado a cabo al menos 48 horas antes de obtener la muestra de prueba.
De acuerdo con la presente invención, se contempla que el sujeto no experimenta episodios de fibrilación auricular cuando se obtiene la muestra. Por tanto, el sujeto tendrá un ritmo sinusal normal cuando se obtiene la muestra.
El "sujeto" como se hace referencia en el presente documento es, preferentemente, un mamífero. Los mamíferos incluyen, pero no se limitan a, animales domésticos (por ejemplo, vacas, ovejas, gatos, perros y caballos), primates (por ejemplo, seres humanos y primates no humanos, tales como monos), conejos y roedores (por ejemplo, ratones y ratas). Preferentemente, el sujeto es un sujeto humano.
De acuerdo con el procedimiento de la presente invención, se predecirá el riesgo de recidiva de fibrilación auricular y, por tanto, el riesgo de que un sujeto padezca fibrilación auricular recurrente. Preferentemente, el riesgo de recidiva de FA dentro de aproximadamente tres meses, dentro de aproximadamente seis meses o dentro de aproximadamente un año después de llevar a cabo el procedimiento de la presente invención (o para ser más precisos después de que se haya obtenido la muestra). En un modo de realización preferente, se predice el riesgo de recidiva de fibrilación auricular dentro de aproximadamente un año.
Preferentemente, el término "aproximadamente" como se usa en el presente documento engloba un intervalo de y - 20 % con relación al valor específico, cantidad, concentración, nivel, etc., por ejemplo, la indicación de un valor de "aproximadamente 100" pretende englobar un valor de un intervalo numérico de 100 /- 20 %, es decir, un intervalo de valores de 80 a 120. Preferentemente, el término engloba un intervalo de y -10 % con respecto al valor específico, cantidad, concentración, nivel, etc. y, más preferentemente, un intervalo de y -5 % con relación al valor específico, cantidad, concentración, nivel, etc. Lo más preferentemente, el término "aproximadamente" se refiere al valor, cantidad, concentración, nivel, etc., exacto.
Preferentemente, el término "predecir el riesgo" como se usa en el presente documento se refiere a evaluar la probabilidad de acuerdo con la que el sujeto padecerá recidiva de fibrilación auricular. Típicamente, se predice si un sujeto está en riesgo (y por tanto en riesgo elevado) o no está en riesgo (y por tanto en riesgo reducido) de recidiva de fibrilación auricular. En consecuencia, el procedimiento de la presente invención permite diferenciar entre un sujeto en riesgo y un sujeto no en riesgo de fibrilación auricular. Preferentemente, el término "predecir el riesgo" también engloba ayudar en la predicción del riesgo tal como ayudar a un médico en la predicción del riesgo.
Como se expone anteriormente, se predecirá el riesgo/probabilidad de recidiva de fibrilación auricular dentro de un determinado margen de tiempo. En un modo de realización preferente de la presente invención, el margen predictivo es un intervalo de aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses o aproximadamente un año. Preferentemente, dicho margen predictivo se calcula a partir de la finalización del procedimiento de la presente invención. Más preferentemente, dicho margen predictivo se calcula a partir del punto temporal en el que se ha obtenido la muestra que se va a someter a prueba. Como se entenderá por los expertos en la técnica, la predicción de un riesgo normalmente no pretende ser correcta para un 100 % de los sujetos. Sin embargo, el término puede requerir que se pueda hacer una predicción para una parte estadísticamente significativa de sujetos de manera apropiada y correcta. Se puede determinar si una parte es estadísticamente significativa sin más por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nueva York, 1983. Los intervalos de confianza preferentes son de al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 %. Los valores de p son, preferentemente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001.
En un modo de realización preferente, la expresión "predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular" quiere decir que el sujeto que se va a analizar por el procedimiento de la presente invención se asigna al grupo de sujetos que están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular o bien al grupo de sujetos que no están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Por tanto, se predice si el sujeto está en riesgo o no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Como se usa en el presente documento, "un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular", preferentemente tiene un riesgo elevado de recidiva de fibrilación auricular (preferentemente dentro del margen predictivo). Preferentemente, dicho riesgo es elevado en comparación con el riesgo promedio en una cohorte de sujetos. Como se usa en el presente documento, "un sujeto que no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular", preferentemente, tiene un riesgo reducido de recidiva de fibrilación auricular (preferentemente dentro del margen predictivo). Preferentemente, dicho riesgo se reduce en comparación con el riesgo promedio en una cohorte de sujetos. Un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular preferentemente tiene un riesgo o recidiva de al menos un 20 % o más preferentemente de al menos un 30 %, preferentemente, dentro de un margen predictivo de aproximadamente un año. Lo más preferentemente, el sujeto tiene un cociente de riesgo instantáneo >1,1 para un incremento de 1 DE de la concentración de referencia de biomarcadores, preferentemente, dentro de un margen predictivo de aproximadamente un año. Un sujeto que no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular tiene preferentemente un riesgo de menos de un 12 %, más preferentemente de menos de un 10 % de recidiva de FA, preferentemente dentro de un margen predictivo de un año. En un modo de realización alternativo, dicho sujeto tiene un cociente de riesgo instantáneo de <1 para un incremento de 1 DE de la concentración de referencia de biomarcadores, preferentemente, dentro de un margen predictivo de aproximadamente un año.
El término "muestra" se refiere a una muestra de sangre, suero o plasma. La muestra puede estar congelada, recién obtenida, fijada (por ejemplo, fijada en formol), centrifugada y/o incluida (por ejemplo incluida en parafina), etc. La muestra celular se puede someter, por supuesto, a una variedad de técnicas preparativas posobtención y de almacenamiento bien conocidas (por ejemplo, extracción, fijación, almacenamiento, congelación, ultrafiltración, concentración, evaporación, centrifugación, etc., de ácido nucleico y/o proteína) antes de evaluar la cantidad del/de los biomarcador(es) en la muestra.
La muestra es una muestra de sangre (es decir, sangre completa), suero o plasma. El suero es la fracción líquida de la sangre completa que se obtiene después de que deja coagular la sangre. Para obtener el suero, se retira el coágulo por centrifugación y se recoge el sobrenadante. El plasma es la parte líquida acelular de la sangre. Para obtener una muestra de plasma, se obtiene sangre completa en tubos tratados con anticoagulante (por ejemplo, tubos tratados con citrato o tratados con EDTA). Se retiran las células de la muestra por centrifugación y se obtiene el sobrenadante (es decir, la muestra de plasma).
El biomarcador angiopoyetina-2 (abreviado "Ang-2", también denominado con frecuencia ANGPT2) es bien conocido en la técnica. Es un antagonista natural tanto para Ang-1 () como para TIE2 (véase, por ejemplo, Maisonpierre et al., Science 277 (1997) 55-60). La proteína puede inducir la fosforilación de tirosina de TEK/TIE2 en ausencia de ANG-1.
En ausencia de inductores angiogénicos, tales como VEGF, el debilitamiento mediado por ANG2 de los contactos célula-matriz puede inducir la apoptosis de células endoteliales con la consecuente regresión vascular. Conjuntamente con VEGF, puede facilitar la migración y proliferación de células endoteliales, sirviendo así como señal angiogénica permisiva. La secuencia de angiopoyetina humana es bien conocida en la técnica. Uniprot enumera tres isoformas de angiopoyetina-2: isoforma 1 (identificador Uniprot: O15123-1), isoforma 2 (identificador: O15123-2) e isoforma 3 (O15123-3). En un modo de realización preferente, se determina la cantidad total de angiopoyetina-2. La cantidad total es preferentemente la suma de las cantidades de angiopoyetina-2 complejada y libre.
En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, el procedimiento comprende además la determinación de la(s) cantidad(es) de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra (en particular en la muestra) del sujeto.
Los otros biomarcadores a los que hace referencia el párrafo anterior son bien conocidos en la técnica.
El biomarcador angiopoyetina 1 (Ang-1) es una angiopoyetina que se codifica por el gen ANGPT1. La secuencia de Ang-1 humana es bien conocida en la técnica y, por ejemplo, se puede evaluar por medio de UniProt (la entrada de la base de datos Q15389).
El péptido de tipo péptido natriurético cerebral (en el presente documento también denominado "péptido de tipo BNP") se selecciona preferentemente del grupo que consiste en pre-proBNP, proBNP, NT-proBNP y BNP. El prepropéptido (134 aminoácidos en el caso del preproBNP) comprende un péptido señalizador corto, que se escinde enzimáticamente para liberar el propéptido (108 aminoácidos en el caso del proBNP). El propéptido se escinde además en un propéptido N terminal (NT-propéptido, 76 aminoácidos en el caso de NT-proBNP) y la hormona activa (32 aminoácidos en el caso de BNP). Preferentemente, el péptido de tipo BNP de acuerdo con la presente invención es BNP o, en particular, NT-proBNP. El BNP es la hormona activa y tiene una semivida más corta que su respectiva homóloga inactiva NT-proBNP.
IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) es una glucoproteína modular de 30 kDa conocida por secretarse por células endoteliales, células del músculo liso vasculares, fibroblastos y células epiteliales (Ono, Y., etal., Biochem Biophys Res Comm 202 (1994) 1490-1496). Preferentemente, el término "IGFBP-7" se refiere a IGFBP-7 humana. La secuencia de la proteína es bien conocida en la técnica y es accesible, por ejemplo, por medio de UniProt (Q16270, IBP7_HUMAN) o GenBank (NP_001240764.1). Una definición detallada del biomarcador IGFBP-7 se proporciona, por ejemplo, en el documento WO 2008/089994. Existen dos isoformas de IGFBP-7, isoforma 1 y 2 que se producen por empalme alternativo. En un modo de realización de la presente invención, se mide la cantidad total de ambas isoformas (para la secuencia, véase la entrada de la base de datos UniProt (Q16270-1 y Q16270-2).
El biomarcador "CK-MB" (creatina cinasa tipo muscular-cerebral, también conocida como "creatina cinasa-MB" o "CPK-MB") es bien conocido en la técnica. Es una de las tres isoenzimas de la creatina cinasa (CK), que es una enzima expresada por diversos tejidos y tipos de células (EC 2.7.3.2). La enzima cataliza la conversión de creatina y usa trifosfato de adenosina para generar fosfocreatina y difosfato de adenosina. Las creatina cinasas comprenden dos subunidades que pueden ser subunidades de tipo cerebro (B) o músculo (M). La isoenzima CK-MB comprende una subunidad de tipo cerebro y una de tipo músculo. La fuente principal de CK-MB es el miocardio. Sin embargo, también se encuentra en el músculo esquelético.
El término "troponina cardíaca" se refiere a todas las isoformas de troponina expresadas en las células del corazón y, preferentemente, las células subendocárdicas. Estas isoformas están bien caracterizadas en la técnica como se describe, por ejemplo, en Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, n.° 4: 681-686 y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493. Preferentemente, la troponina cardíaca se refiere a troponina T o troponina I, y, más preferentemente, a troponina T. El término no engloba troponina C. Las secuencias de aminoácidos para troponina T humana y troponina I humana se describen en Anderson, Circ Res. Abril 1995; 76(4):681 -6 y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493.
La presente invención también contempla determinar la cantidad de Ang-2 en combinación con al menos un biomarcador adicional. En un modo de realización, el biomarcador adicional es Ang-1. En otro modo de realización, el al menos un biomarcador adicional es un biomarcador cardíaco tal como un péptido de tipo BNP y/o una troponina cardíaca. La determinación adicional de un biomarcador cardíaco permite incrementar la especificidad de la predicción o diagnóstico de la presente invención. Además, la determinación adicional de Ang-1 ayuda a incrementar la sensibilidad. La sensibilidad se incrementa formando una proporción de biomarcadores expresados y de acción opuesta (por ejemplo, Ang-1/Ang-2).
Las combinaciones preferentes de biomarcadores que se pueden determinar de acuerdo con los procedimientos y usos de la presente invención son las siguientes:
• Ang-2 y un péptido de tipo BNP, en particular NT-proBNP,
• Ang-2 y una troponina cardíaca, en particular cTnT-hs (troponina T altamente sensible),
• Ang-2 y Ang-1, o
• Ang-2, una troponina cardíaca tal como cTnT, un péptido de tipo BNP, en particular NT-proBNP.
Otra combinación preferente es Ang-2, Ang-1 y un péptido de tipo BNP tal como NT-proBNP. Por tanto, se determinan las cantidades mencionadas anteriormente. Además, se prevé calcular una proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 y comparar la proporción calculada con una proporción de referencia. La cantidad del péptido de tipo BNP se compara con una cantidad de referencia.
En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, el otro biomarcador que se va a determinar es Ang-1. Por tanto, se prevé la determinación combinada de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y la cantidad del biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1). En otra etapa, las cantidades determinadas de Ang-2 y Ang-1 se comparan con las cantidades de referencia. De forma alternativa, se prevé calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1. En una etapa posterior, dicha proporción se compara con una proporción de referencia.
En consecuencia, la presente invención también se refiere a un procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de
(a) determinar la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y la cantidad del biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1) en una muestra de un sujeto, y
(b) calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1, y
(c) comparar la proporción calculada con una proporción de referencia.
La predicción de recidiva de fibrilación auricular se basará en los resultados de la etapa de comparación (c). Por tanto, el procedimiento puede comprender la otra etapa (d) de predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en el sujeto en base a los resultados de la etapa (c).
El término "calcular una proporción" como se hace referencia en el presente documento se refiere a calcular una proporción de la cantidad de Ang-2 y la cantidad de Ang-1 dividiendo dichas cantidades o llevando a cabo cualquier otro cálculo matemático comparable que exprese relación de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1. En un modo de realización preferente, la cantidad de Ang-2 se divide entre la cantidad de Ang-1 para calcular la proporción (por tanto, se calcula la proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1). En otro modo de realización preferente, la cantidad de Ang-1 se divide entre la cantidad de Ang-2 para calcular la proporción (por tanto, se calcula la proporción de la cantidad de Ang-1 con respecto a la cantidad de Ang-2).
El término "determinar" la cantidad de un biomarcador como se hace referencia en el presente documento se refiere a la cuantificación del biomarcador, por ejemplo, para medir el nivel del biomarcador en la muestra, empleando procedimientos apropiados de detección descritos en otra parte en el presente documento. Los términos "medir" y "determinar" se usan en el presente documento de manera intercambiable.
En un modo de realización, la cantidad de un biomarcador se mide poniendo en contacto la muestra con un agente que se une específicamente al biomarcador, formando de este modo un complejo entre el agente y dicho biomarcador, detectando la cantidad de complejo formado, y midiendo de este modo la cantidad de dicho biomarcador.
Los biomarcadores como se hace referencia en el presente documento se pueden detectar usando procedimientos en general conocidos en la técnica. Los procedimientos de detección en general engloban procedimientos para cuantificar la cantidad de un biomarcador en la muestra (procedimiento cuantitativo). En general, es conocido para el experto en la técnica cuáles de los siguientes procedimientos son adecuados para la detección cualitativa y/o cuantitativa de un biomarcador. Las muestras se pueden someter a ensayo convenientemente para determinar, por ejemplo, proteínas usando inmunoelectrotransferencias e inmunoanálisis, como ELISA, RIA, inmunoanálisis basados en fluorescencia y luminiscencia, que están disponibles comercialmente. Otros procedimientos adecuados para detectar biomarcadores incluyen medir una propiedad física o química específica para el péptido o polipéptido tal como su masa molecular o espectro de RMN preciso. Dichos procedimientos comprenden, por ejemplo, biosensores, dispositivos ópticos acoplados a inmunoanálisis, biochips, dispositivos analíticos tales como espectrómetros de masas, analizadores de RMN o dispositivos de cromatografía. Además, los procedimientos incluyen procedimientos basados en ELISA con microplacas, inmunoanálisis totalmente automatizados o robóticos (disponibles, por ejemplo, en analizadores Elecsys™), CBA (un ensayo enzimático de unión a cobalto, disponible, por ejemplo, en analizadores Roche-Hitachi™) y ensayos de aglutinación de látex (disponibles, por ejemplo, en analizadores Roche-Hitachi™).
Para la detección de proteínas biomarcadoras como se hace referencia en el presente documento, está disponible una amplia gama de técnicas de inmunoanálisis que usan un formato de ensayo de este tipo, véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. n.os 4.016.043, 4.424.279 y 4.018.653. Estas incluyen ensayos tanto de un solo sitio y dos sitios como de tipo "sándwich" de los tipos no competitivos, así como en los ensayos de unión competitiva tradicionales. Estos ensayos también incluyen la unión directa de un anticuerpo marcado a un biomarcador diana.
Los ensayos de tipo sándwich están entre los inmunoanálisis más útiles.
Los procedimientos que emplean marcadores electroquimioluminiscentes son bien conocidos. Dichos procedimientos hacen uso de la capacidad de complejos metálicos especiales para lograr, por medio de oxidación, un estado excitado desde el que se descomponen al estado fundamental, emitiendo electroquimioluminiscencia. Para su revisión, véase Richter, M.M., Chem. Rev. 104 (2004) 3003-3036.
En un modo de realización, el anticuerpo de detección (o un fragmento de unión a antígeno del mismo) que se va a usar para medir la cantidad de un biomarcador se rutinila o se iridinila. En consecuencia, el anticuerpo (o un fragmento de unión a antígeno del mismo) comprenderá un marcador de rutenio. En un modo de realización, dicho marcador de rutenio es un complejo de bipiridina-rutenio (II). O el anticuerpo (o un fragmento de unión a antígeno del mismo) comprenderá un marcador de iridio. En un modo de realización, dicho marcador de iridio es un complejo como se divulga en el documento WO 2012/107419.
Medir la cantidad de un polipéptido (tal como Ang-2) puede comprender, preferentemente, las etapas de (a) poner en contacto el polipéptido con un agente que se une específicamente a dicho polipéptido, (b) (opcionalmente) retirar el agente no unido, (c) medir la cantidad de agente de unión unido, es decir, el complejo del agente formado en la etapa (a). De acuerdo con un modo de realización preferente, dichas etapas de poner contacto, retirar y medir se puede realizar por una unidad analizadora. De acuerdo con algunos modos de realización, dichas etapas se pueden realizar por una única unidad analizadora de dicho sistema o por más de una unidad analizadora en comunicación funcional entre sí. Por ejemplo, de acuerdo con un modo de realización específico, dicho sistema divulgado en el presente documento puede incluir una primera unidad analizadora para realizar dichas etapas de poner en contacto y retirar y una segunda unidad analizadora, conectada operativamente a dicha primera unidad analizadora por una unidad de transporte (por ejemplo, un brazo robótico), que realiza dicha etapa de medir.
El agente que se une específicamente al biomarcador (en el presente documento también denominado "agente de unión") se puede acoplar de forma covalente o no covalente a un marcador que permite la detección y medición del agente unido. El marcaje se puede realizar por procedimientos directos o indirectos. El marcaje directo implica el acoplamiento del marcador directamente de forma (covalente o no covalente) al agente de unión. El marcaje indirecto implica la unión (de forma covalente o no covalente) de un agente de unión secundario al primer agente de unión. El agente de unión secundario se debe unir específicamente al primer agente de unión. Dicho agente de unión secundario se puede acoplar a un marcador adecuado y/o ser la diana (receptor) de un agente de unión terciario que se une al agente de unión secundario. Los agentes de unión secundarios y de mayor orden adecuados pueden incluir anticuerpos, anticuerpos secundarios y el sistema estreptavidina-biotina bien conocido (Vector Laboratories, Inc.). El agente de unión o sustrato también se puede marcar con una o más marcas como es conocido en la técnica. A continuación, dichas marcas pueden ser dianas para agentes de unión de mayor orden. Las marcas adecuadas incluyen biotina, digoxigenina, marca His, glutatión-S-transferasa, FLAG, GFP, marca myc, hemaglutinina (HA) del virus de la gripe A, proteína de unión a maltosa y similares. En el caso de un péptido o polipéptido, la marca está preferentemente en el extremo N terminal y/o extremo C terminal. Los marcadores adecuados son cualquier marcador detectable por un procedimiento de detección apropiado. Los marcadores típicos incluyen partículas de oro, microesferas de látex, éster de acridano, luminol, complejos de rutenio, complejos de iridio, marcadores enzimáticamente activos, marcadores radiactivos, marcadores magnéticos ("por ejemplo, microesferas magnéticas", incluyendo marcadores paramagnéticos y superparamagnéticos) y marcadores fluorescentes. Los marcadores enzimáticamente activos incluyen, por ejemplo, peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, luciferasa y derivados de los mismos. Los sustratos adecuados para la detección incluyen di-amino-bencidina (DAB), 3,3',-5,5'-tetrametilbencidina, NBT-BCIP (cloruro de 4-nitroazul de tetrazolio y 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato, disponible como solución madre preparada de Roche Diagnostics), CDP-Star™ (Amersham Biosciences), ECF™ (Amersham Biosciences). Una combinación enzima-sustrato adecuada puede dar como resultado un producto de reacción coloreado, fluorescencia o quimioluminiscencia, que se puede medir de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica (por ejemplo, usando una película sensible a la luz o un sistema de cámara adecuado). En cuanto a medir la reacción enzimática, los criterios dados anteriormente se aplican de forma análoga. Los marcadores fluorescentes típicos incluyen proteínas fluorescentes (tales como GFP y sus derivados), Cy3, Cy5, Texas Red, fluoresceína y los tintes Alexa (por ejemplo, Alexa 568). Otros marcadores fluorescentes están disponibles, por ejemplo, en Molecular Probes (Oregón). También se contempla el uso de puntos cuánticos como marcadores fluorescentes. Un marcador radiactivo se puede detectar por cualquier procedimiento conocido y apropiado, por ejemplo, una película sensible a la luz o un aparato de diagnóstico con fósforo.
La cantidad de un polipéptido se puede medir, también preferentemente, como sigue: (a) poner en contacto un soporte sólido que comprende un agente de unión para el polipéptido como se describe en otra parte en el presente documento con una muestra que comprende el péptido o polipéptido y (b) medir la cantidad de péptido o polipéptido que se une al soporte. Los materiales para fabricar soportes son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros, materiales de columna disponibles comercialmente, microesferas de poliestireno, microesferas de látex, microesferas magnéticas, partículas metálicas coloidales, superficies y chips de vidrio y/o silicio, tiras de nitrocelulosa, membranas, láminas, Duracyte, pocillos y paredes de bandejas de reacción, tubos de plástico, etc.
Aún en un aspecto, la muestra se retira del complejo formado entre el agente de unión y el al menos un marcador antes de la medición de la cantidad de complejo formado. En consecuencia, en un aspecto, el agente de unión se puede inmovilizar sobre un soporte sólido. Aún en un aspecto, la muestra se puede retirar del complejo formado sobre el soporte sólido aplicando una solución de lavado.
Los "ensayos de tipo sándwich" están entre los ensayos más útiles y usados comúnmente que engloban una serie de variaciones de la técnica de ensayo tipo sándwich. En resumen, en un ensayo típico, un agente de unión no marcado (captura) se inmoviliza o se puede inmovilizar sobre un sustrato sólido, y la muestra que se va a someter a prueba se pone en contacto con el agente de unión de captura. Después de un período adecuado de incubación, durante un período de tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo de agente de unión-biomarcador, un segundo agente de unión (detección) marcado con una molécula indicadora que puede producir una señal detectable se añade a continuación y se incuba, permitiendo tiempo suficiente para la formación de otro complejo de agente de uniónbiomarcador-agente de unión marcado. Cualquier material sin reaccionar se puede separar por lavado, y la presencia del biomarcador se determina por observación de una señal producida por la molécula indicadora unida al agente de unión de detección. Los resultados pueden ser cualitativos, por simple observación de una señal visible, o se pueden cuantificar en comparación con una muestra de control que contiene cantidades conocidas de biomarcador.
Las etapas de incubación de un ensayo de tipo sándwich típico se pueden variar según se requiera y sea apropiado. Dichas variaciones incluyen, por ejemplo, incubaciones simultáneas, en las que dos o más de agente de unión y biomarcador se coincuban. Por ejemplo, tanto la muestra que se va a analizar como un agente de unión marcado se añaden simultáneamente a un agente de unión de captura inmovilizado. También es posible incubar en primer lugar la muestra que se va a analizar y un agente de unión marcado y después de esto añadir un anticuerpo unido a una fase sólida o que se puede unir a una fase sólida.
El complejo formado entre un agente de unión específico y el biomarcador será proporcional a la cantidad de biomarcador presente en la muestra. Se entenderá que la especificidad y/o sensibilidad del agente de unión que se va a aplicar define el grado de proporción de al menos un marcador comprendido en la muestra que se puede unir específicamente. Otros detalles sobre cómo se puede llevar a cabo la medición también se encuentran en otra parte en el presente documento. La cantidad de complejo formado se transformará en una cantidad del biomarcador que refleja la cantidad efectivamente presente en la muestra.
Los términos "agente de unión", "agente de unión específica", "agente de unión específica de analito", "agente de detección" y "agente que se une específicamente a un biomarcador" se usan de manera intercambiable en el presente documento. Preferentemente se refiere a un agente que comprende un resto de unión que se une específicamente al correspondiente biomarcador. Los ejemplos de "agentes de unión" o "agentes" son una sonda de ácido nucleico, cebador de ácido nucleico, molécula de ADN, molécula de ARN, aptámero, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, péptido, ácido peptidonucleico (PNA) o compuesto químico. Un agente preferente es un anticuerpo que se une específicamente al biomarcador que se va a medir. El término "anticuerpo" en el presente documento se usa en el sentido más amplio y engloba diversas estructuras de anticuerpos, incluyendo pero sin limitarse a anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos siempre que presenten la actividad de unión a antígeno deseada (es decir, fragmentos de unión a antígeno de la misma). Preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo policlonal. Más preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
El término "unión específica" o "se une específicamente" se refiere a una reacción de unión en la que las moléculas del par de unión presentan una unión entre sí en condiciones donde no se unen significativamente a otras moléculas. El término "unión específica" o "se une específicamente", cuando se refiere a una proteína o péptido como biomarcador, se refiere a una reacción de unión en la que un agente de unión se une al correspondiente biomarcador con una afinidad de al menos 10'7 M. El término "unión específica" o "se une específicamente" se refiere preferentemente a una afinidad de al menos 10'8 M o incluso más preferente de al menos 10'9 M por su molécula diana. El término "específico" o "específicamente" se usa para indicar que otras moléculas presentes en la muestra no se unen significativamente al agente de unión específico para la molécula diana.
El término "cantidad" como se usa en el presente documento engloba la cantidad absoluta de un biomarcador como se hace referencia en el presente documento, la cantidad o concentración relativa del dicho biomarcador así como cualquier valor o parámetro que se correlacione con el mismo o se pueda derivar del mismo. Dichos valores o parámetros comprenden valores de señal de intensidad de todas las propiedades físicas o químicas específicas obtenidas a partir de dichos péptidos por mediciones directas, por ejemplo, valores de intensidad en espectros de masas o espectros de RMN. Además, se engloban todos los valores o parámetros que se obtienen por mediciones indirectas especificadas en otra parte en esta descripción, por ejemplo, cantidades de respuesta medidas a partir de sistemas de lectura biológica en respuesta a los péptidos o señales de intensidad obtenidas a partir de ligandos unidos de forma específica. Se debe entender que los valores que se correlacionan con las cantidades o parámetros mencionados anteriormente también se pueden obtener por todas las operaciones matemáticas estándar.
El término "comparar" como se usa en el presente documento se refiere a comparar la cantidad del biomarcador en la muestra del sujeto con la cantidad de referencia del biomarcador especificado en otra parte en esta descripción. Se debe entender que comparar como se usa en el presente documento se refiere normalmente a una comparación de los correspondientes parámetros o valores, por ejemplo, una cantidad absoluta se compara con una cantidad de referencia absoluta mientras que una concentración se compara con una concentración de referencia o una señal de intensidad obtenida del biomarcador en una muestra se compara con el mismo tipo de señal de intensidad obtenida de una muestra de referencia. La comparación se puede llevar a cabo de forma manual o asistida por ordenador. Por tanto, la comparación se puede llevar a cabo por un dispositivo informático. El valor de la cantidad medida o detectada del biomarcador en la muestra del sujeto y la cantidad de referencia se pueden comparar, por ejemplo, entre sí y dicha comparación se puede llevar a cabo automáticamente por un programa informático que ejecuta un algoritmo para la comparación. El programa informático que lleva a cabo dicha evaluación proporcionará la evaluación deseada en un formato de salida adecuado. Para una comparación asistida por ordenador, el valor de la cantidad medida se puede comparar con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos por un programa informático. El programa informático puede evaluar además el resultado de la comparación, es decir, proporcionar automáticamente la evaluación deseada en un formato de salida adecuado. Para una comparación asistida por ordenador, el valor de la cantidad medida se puede comparar con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos por un programa informático. El programa informático puede evaluar además el resultado de la comparación, es decir, proporciona automáticamente la evaluación deseada en un formato de salida adecuado.
De acuerdo con la presente invención, la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) que se determina(n) se comparará(n) con una referencia (o con referencias). La(s) referencia(s) es/son preferentemente una cantidad de referencia (cantidades de referencia). El término "cantidad de referencia" como se usa en el presente documento preferentemente se refiere a una cantidad que permite la asignación de un sujeto a (i) el grupo de sujetos que están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular o bien (ii) el grupo de sujetos que no están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Se puede determinar una cantidad de referencia adecuada a partir de una muestra de referencia que se va a analizar conjuntamente, es decir, simultánea o posteriormente, con la muestra de prueba.
Las cantidades de referencia se pueden calcular, en principio, para una cohorte de sujetos como se especifica anteriormente en base a los valores promedio o medios para un biomarcador dado aplicando procedimientos estándar de estadística. En particular, la exactitud de una prueba tal como un procedimiento destinado a diagnosticar un acontecimiento, o no, se describe mejor por sus características de eficacia diagnóstica (ROC) (véase en especial Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577). El gráfico ROC es una curva de todos los pares de sensibilidad frente a especificidad resultantes de variar continuamente el valor umbral de decisión en todo el intervalo de datos observados. El rendimiento clínico de un procedimiento de diagnóstico depende de su exactitud, es decir, su capacidad para asignar correctamente los sujetos a un determinado pronóstico o diagnóstico. La curva ROC indica la superposición entre las dos distribuciones representando la sensibilidad frente a la 1-especificidad para el intervalo completo de valores umbrales adecuados para realizar una distinción. En el eje y está la sensibilidad, o la fracción de positivos verdaderos, que se define como la proporción del número de resultados de prueba positivos verdaderos con respecto al producto del número de resultados de prueba positivos verdaderos y el número de negativos falsos. Se calcula únicamente a partir del subgrupo afectado. En el eje x esta la fracción de positivos falsos, o 1-especificidad, que se define como la proporción del número de resultados positivos falsos con respecto al producto del número de resultados negativos verdaderos y el número positivos falsos. Es un índice de especificidad y se calcula totalmente a partir del subgrupo no afectado. Debido a que las fracciones de positivos verdaderos y falsos se calculan totalmente por separado, usando los resultados de prueba de dos subgrupos diferentes, la curva ROC es independiente de la prevalencia del acontecimiento en la cohorte. Cada punto en la curva ROC representa un par de sensibilidad/1-especificidad correspondiente a un valor umbral de decisión particular. Una prueba con discriminación perfecta (sin solapamiento en las dos distribuciones de resultados) tiene una curva ROC que pasa a través de la esquina izquierda superior, donde la fracción de positivos verdaderos es de 1,0, o de un 100 % (sensibilidad perfecta), y la fracción de positivos falsos es de 0 (especificidad perfecta). La curva teórica para una prueba sin discriminación (distribuciones idénticas de resultados para los dos grupos) es una línea diagonal de 45° desde la esquina izquierda inferior hasta la esquina derecha superior. La mayoría de las curvas están entre estos dos extremos. Si la curva ROC entra completamente por debajo de la diagonal de 45°, esto se remedia fácilmente invirtiendo el criterio de "positividad" de "mayor que" a "menor que" o viceversa. Cualitativamente, cuanto más cerca esté la curva de la esquina izquierda superior, mayor será la exactitud global de la prueba. Dependiendo de un intervalo de confianza deseado, se puede derivar un valor umbral de la curva ROC que permita el diagnóstico de un acontecimiento dado con un equilibrio apropiado de sensibilidad y especificidad, respectivamente. En consecuencia, se puede generar la referencia que se va a usar para el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención, es decir, un valor umbral que permite diferenciar entre sujetos que están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular o los que no están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, preferentemente, estableciendo una ROC para dicha cohorte como se describe anteriormente y derivando una cantidad umbral de la misma. Dependiendo de una sensibilidad y especificidad deseadas para un procedimiento de diagnóstico, la curva ROC permite derivar un valor umbral adecuado. Se entenderá que se desea una sensibilidad óptima para excluir a un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular (es decir, un descarte), mientras que se prevé una especificidad óptima para que un sujeto se evalúe como en riesgo de recidiva de fibrilación auricular (es decir, una admisión). En un modo de realización, el procedimiento de la presente invención permite la predicción de que un sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Preferentemente, el sujeto está en riesgo, si la cantidad de Ang-2 (opcionalmente, la(s) cantidad(es) del al menos otro(s) biomarcador(es) está(n) por encima de la(s) cantidad(es) de referencia. En un modo de realización alternativo, el procedimiento de la presente invención permite la predicción de que un sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Preferentemente, el sujeto no está en riesgo, si la cantidad de Ang-2 (opcionalmente, la(s) cantidad(es) del al menos otro(s) biomarcador(es)) está(n) por debajo de la(s) cantidad(es) de referencia).
En un modo de realización preferente, el término "cantidad de referencia" en el presente documento se refiere a un valor predeterminado. Dicho valor predeterminado permitirá diferenciar entre un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular y un sujeto que no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Preferentemente, una cantidad de Ang-2 en la muestra del sujeto de prueba por encima de la cantidad de referencia indica que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. También preferentemente, una cantidad de Ang-2 en la muestra por debajo de la cantidad de referencia indica que el sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Una cantidad de Ang-2 en la muestra del sujeto de prueba en la cantidad de referencia (es decir, esencialmente idéntica o igual a la cantidad de referencia), preferentemente también indica que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
En un modo de realización preferente, la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. En un modo de realización preferente, la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que no están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Si i) la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que no están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, una cantidad del biomarcador Ang-2 en la muestra del sujeto que disminuye en comparación con la referencia cantidad, es indicativa de un sujeto que no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Si ii) la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o un grupo de sujetos que se sabe que están en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, una cantidad del biomarcador Ang-2 en la muestra del sujeto que es igual a la cantidad de referencia o que se incrementa en comparación con la cantidad de referencia, es indicativa de un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Si se determina la cantidad de más de un biomarcador (tal como la cantidad de Ang-2 y la cantidad de un péptido de tipo BNP), se prevé que las cantidades individuales se comparen con cantidades de referencia individuales (tales como la cantidad de Ang-2 con respecto a una cantidad de referencia para Ang-2 y la cantidad de un péptido de tipo BNP con respecto a una cantidad de referencia para el péptido de tipo BNP).
Dependiendo de si el sujeto que se va a someter a prueba padece fibrilación auricular paroxística o persistente, se pueden aplicar diferentes cantidades o proporciones de referencia para predecir la recidiva de fibrilación auricular. Como se entenderá por el experto en la técnica, la cantidad de referencia o proporción de referencia para la predicción en un sujeto de prueba que padece fibrilación auricular persistente será mayor que la cantidad de referencia o proporción de referencia para la predicción en un sujeto de prueba que padece fibrilación auricular paroxística.
Preferentemente, las cantidades de los biomarcadores en la muestra del sujeto de prueba anterior (o en) las cantidades de referencia indican que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. También preferentemente, las cantidades de los biomarcadores en la muestra por debajo de las cantidades de referencia indican que el sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Esto se aplica preferentemente a los biomarcadores angiopoyetina-2 (Ang-2), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca. Por tanto, si se determinan, por ejemplo, las cantidades de Ang-2 y un péptido de tipo BNP, las cantidades de ambos biomarcadores que se incrementan en comparación con las cantidades de referencia (o que están en o por encima de las cantidades de referencia) indican que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, mientras que las cantidades de ambos biomarcadores que disminuyen en comparación con las cantidades de referencia indican que el sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
En contraste con los biomarcadores como se hace referencia anteriormente, una disminución en la cantidad de Ang-1 en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, mientras que una cantidad esencialmente idéntica o un incremento en la cantidad de Ang-1 en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Por tanto, un incremento en la cantidad de Ang-2 (en comparación con la cantidad de referencia para Ang-2) en combinación con una disminución en la cantidad de Ang-1 (en comparación con la cantidad de referencia para Ang-1) indica que el sujeto está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular, mientras que una disminución en la cantidad de Ang-2 (en comparación con la cantidad de referencia para Ang-2) en combinación con una cantidad esencialmente idéntica o un incremento en la cantidad de Ang-1 (en comparación con la cantidad de referencia para Ang-1) indica que el sujeto no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular
Como se expone anteriormente, la presente invención también puede englobar el cálculo de la proporción de la cantidad de Ang-2 y la cantidad de Ang-1 (es decir, la cantidad de Ang-2 y la cantidad de Ang-1). Dicha proporción se comparará con una proporción de referencia. Preferentemente, la proporción de referencia permitirá diferenciar entre sujetos que están en riesgo de recidiva de FA y sujetos que no están en riesgo de recidiva de FA.
En un modo de realización, se calcula la proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1. Por tanto, la proporción de referencia será una proporción de referencia de Ang-2 con respecto a Ang-1. Preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por encima de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que está en riesgo de recidiva de FA. También preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por debajo de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que no está en riesgo de recidiva de FA.
En un modo de realización del procedimiento de la invención, dicho procedimiento comprende además una etapa de recomendar y/o iniciar un tratamiento adecuado en base a los resultados de la predicción. Preferentemente, un tratamiento adecuado se recomienda o se inicia si se predice que el sujeto está en riesgo de recidiva de FA. El tratamiento adecuado puede ser cualquier tratamiento que tenga como objetivo reducir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular. Preferentemente, dicho tratamiento se selecciona del grupo que consiste en la administración de al menos un anticoagulante, control del ritmo y ablación. Dichos tratamientos son bien conocidos en la técnica y se revisan, por ejemplo, en Fuster V et al. Circulation 2011;123:e269-e367.
En un modo de realización, el tratamiento es la administración de al menos un anticoagulante. La administración de al menos un anticoagulante tendrá como objetivo reducir o prevenir la coagulación de la sangre y la apoplejía relacionada. En un modo de realización, al menos un anticoagulante se selecciona del grupo que consiste en heparina, un derivado de cumarina, tal como warfarina o dicumarol, inhibidor de la vía del factor tisular (TFPI), antitrombina III, inhibidores del factor IXa, inhibidores del factor Xa, inhibidores de los factores Va y VIIIa e inhibidores de trombina.
Las definiciones dadas anteriormente en el presente documento se aplican mutatis mutandis a los siguientes modos de realización de la presente invención.
La presente invención se refiere además a un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y de la cantidad de angiopoyetina-1 (Ang-1) en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, en el que se calcula una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1 y en el que dicha proporción calculada se compara con una proporción de referencia.
Los términos "muestra", "sujeto", "comparación", "cantidad", etc., se han definido anteriormente. Las definiciones se aplican en consecuencia.
El sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente será un sujeto sospechoso de padecer fibrilación auricular. Preferentemente, dicho sujeto es mayor de 70 años. Preferentemente, un sujeto que se sospecha que padece FA, habrá mostrado síntomas de FA antes de llevar a cabo el procedimiento para diagnosticar FA. Dichos síntomas normalmente son transitorios y pueden surgir en unos pocos segundos y pueden desaparecer con la misma rapidez. Los síntomas de fibrilación auricular incluyen mareos, desmayos, disnea y, en particular, palpitaciones del corazón. Como se expone en otra parte en el presente documento, se contempla que el sujeto no experimenta episodios de fibrilación auricular cuando se obtiene la muestra. Por tanto, el sujeto tendrá un ritmo sinusal normal cuando se obtiene la muestra. Por tanto, el sujeto estará en ritmo sinusal.
Preferentemente, el término "diagnóstico" como se usa en el presente documento quiere decir evaluar si un sujeto al que se hace referencia de acuerdo con el procedimiento de la presente invención padece fibrilación auricular (FA), o no. En un modo de realización, se diagnostica que un sujeto padece FA. En un modo de realización alternativo, se diagnostica que un sujeto no padece FA.
En un modo de realización del procedimiento de la presente invención, la fibrilación auricular que se va a diagnosticar es fibrilación auricular paroxística. Si la fibrilación auricular que se va a diagnosticar es fibrilación auricular paroxística, se prevé que el sujeto que se va a someter a prueba no padece FA persistente. Además, se prevé que el sujeto que se va a someter a prueba no padece FA permanente. En particular, se sabrá que el sujeto no padece FA persistente y permanente.
En otro modo de realización del procedimiento de la presente invención, la fibrilación auricular que se va a diagnosticar es fibrilación auricular persistente.
Como se entenderá por los expertos en la técnica, el diagnóstico descrito en el presente documento normalmente no pretende ser correcto para todos (es decir, un 100 %) de los sujetos que se van a diagnosticar. Sin embargo, el término requiere que una parte estadísticamente significativa de sujetos se pueda diagnosticar correctamente (por ejemplo, una cohorte en un estudio de cohorte). Por tanto, el diagnóstico real de si un sujeto padece FA o no puede comprender otras etapas tales como la confirmación de un diagnóstico. Por tanto, el diagnóstico en el contexto de la presente invención ayudará al médico a evaluar si un sujeto padece fibrilación auricular o no. En consecuencia, el término "diagnóstico" en el contexto de la presente invención engloba preferentemente ayudar al médico a evaluar si un sujeto padece fibrilación auricular o no.
Se puede determinar si una parte es estadísticamente significativa sin más por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nueva York, 1983. Los intervalos de confianza preferentes son de al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 %. Los valores de p son, preferentemente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001. Más preferentemente, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 % o al menos el 90 % de los sujetos de una población se pueden diagnosticar apropiadamente por el procedimiento de la presente invención.
De acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente, el/los biomarcador(es) que se determina(n) se comparará(n) con una referencia (o con referencias). La(s) referencia(s) es/son preferentemente una cantidad de referencia (cantidades de referencia). El término "cantidad de referencia" como se usa en relación con el procedimiento mencionado anteriormente se refiere preferentemente a una cantidad que permite la asignación de un sujeto a (i) el grupo de sujetos que padecen fibrilación auricular o bien (ii) el grupo de pacientes que no padecen fibrilación auricular. Se puede determinar una cantidad de referencia adecuada a partir de una muestra de referencia que se va a analizar conjuntamente, es decir, simultánea o posteriormente, con la muestra de prueba.
Las cantidades de referencia se pueden determinar como se describe anteriormente. En consecuencia, la referencia que se va a usar para el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención, es decir, un valor umbral que ayuda a diferenciar entre sujetos que padecen fibrilación auricular o los que no padecen FA se puede generar, preferentemente, estableciendo una curva ROC. Dependiendo de una sensibilidad y especificidad deseadas para un procedimiento de diagnóstico, la curva ROC permite derivar un valor umbral adecuado. Se entenderá que se desea una sensibilidad óptima para excluir a un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular (es decir, un descarte), mientras que se prevé una especificidad óptima para que un sujeto que se va a evaluar como que padece fibrilación auricular (es decir, una admisión). En un modo de realización, el procedimiento de la presente invención permite el diagnóstico como que no padece fibrilación auricular. Preferentemente, el sujeto padece FA, si la cantidad de Ang-2 (opcionalmente la(s) cantidad(es) del al menos otro(s) biomarcador(es)) está(n) por encima de la(s) cantidad(es) de referencia. En un modo de realización alternativo, el procedimiento de la presente invención permite el diagnóstico de que un sujeto no padece fibrilación auricular. Preferentemente, el sujeto no padece FA, si la cantidad de Ang-2 (opcionalmente la(s) cantidad(es) de al menos otro(s) biomarcador(es) está(n) por debajo de la(s) cantidad(es) de referencia.
En un modo de realización preferente, el término "cantidad de referencia" en el presente documento se refiere a un valor predeterminado. Dicho valor predeterminado permitirá diferenciar entre un sujeto que padece fibrilación auricular y un sujeto que no padece fibrilación auricular.
El siguiente algoritmo de diagnóstico se aplica si el al menos otro biomarcador es Ang-1. Este marcador disminuye en sujetos que padecen FA. En consecuencia, el sujeto preferentemente padece de FA, si la cantidad de Ang-2 está por encima de la cantidad de referencia para este marcador (es decir, Ang-2) y si la cantidad de Ang-1 está por debajo de la cantidad de referencia para este marcador. En consecuencia, el sujeto preferentemente no padece FA, si la cantidad de Ang-2 es igual o está por debajo de la cantidad de referencia para este marcador (es decir, Ang-2) y si la cantidad de Ang-1 es igual o está por encima de la cantidad de referencia para este marcador (es decir, Ang-1).
En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, el otro biomarcador que se va a determinar es Ang-1. Por tanto, se prevé la determinación combinada de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y la cantidad del biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1). En otra etapa, las cantidades determinadas de Ang-2 y Ang-1 se comparan con las cantidades de referencia. De forma alternativa, se prevé calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1. En una etapa posterior, dicha proporción se compara con una proporción de referencia. En base a esta etapa de comparación, se diagnostica si el sujeto padece FA o no. Preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por encima de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que padece FA. También preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por debajo de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que no padece FA.
La presente invención se refiere además a un procedimiento para realizar un seguimiento de un tratamiento que tiene como objetivo reducir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular, comprendiendo dicho procedimiento:
(a) determinar la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una primera muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto,
(b) determinar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) como se determina en la etapa (a) en una segunda muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, y
(c) comparar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) determinado (s) en la primera muestra con la(s) cantidad(es) de dicho(s) biomarcador(es) en dicha segunda muestra.
Los términos "muestra", "sujeto", "comparación", "cantidad", etc., se han definido anteriormente en relación con el procedimiento de predicción del riesgo de recidiva de FA. Las definiciones se aplican en consecuencia.
El término "realizar un seguimiento" como se usa en el presente documento, preferentemente, se refiere a evaluar los efectos de un tratamiento como se hace referencia en el presente documento. Por tanto, el procedimiento mencionado anteriormente puede comprender la otra etapa de realizar el seguimiento del tratamiento en base a los resultados de la etapa de comparación llevada a cabo en la etapa c). Como se entenderá por los expertos en la técnica, la predicción de un riesgo normalmente no pretende ser correcta para un 100 % de los sujetos. Sin embargo, el término requiere que se pueda realizar una predicción para una parte estadísticamente significativa de los sujetos de manera apropiada y correcta. Por tanto, el seguimiento real, puede comprender otras etapas tales como la confirmación.
Se puede determinar si una parte es estadísticamente significativa sin más por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nueva York, 1983. Los intervalos de confianza preferentes son de al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 %. Los valores de p son, preferentemente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001.
El procedimiento como se hace referencia anteriormente incluye un procedimiento que consiste esencialmente en las etapas mencionadas anteriormente o un procedimiento que incluye otras etapas. Además, el procedimiento de la presente invención, preferentemente, es un procedimiento ex vivo o in vitro. Además, puede comprender etapas además de las mencionadas de forma explícita anteriormente. Por ejemplo, otras etapas se pueden referir a la determinación de otros marcadores o a pretratamientos de muestra o evaluación de los resultados obtenidos por el procedimiento.
Preferentemente, llevando a cabo el procedimiento de la presente invención se puede evaluar si el sujeto responde a dicho tratamiento o no. Un sujeto responde a un tratamiento si la afección del sujeto mejoró entre la obtención de la primera y la segunda muestra. Preferentemente, un sujeto no responde al tratamiento si la afección empeoró entre la obtención de la primera y la segunda muestra.
Preferentemente, la primera muestra se obtiene antes del inicio de dicho tratamiento. Más preferentemente, la muestra se obtiene dentro de una semana en particular dentro de las dos semanas anteriores al inicio de dicho tratamiento.
Puesto que el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención comprende la evaluación de cambios de las cantidades de biomarcadores que se provocan por el tratamiento como se hace referencia en el presente documento, la primera muestra también se puede obtener después del inicio de dicho tratamiento (pero antes de que se obtenga la segunda muestra).
Por tanto, la segunda muestra se obtendrá después de la primera muestra. Se debe entender que la segunda muestra se obtendrá después del inicio de dicho tratamiento.
Además, se contempla en particular que la segunda muestra se obtenga después de un período razonable de tiempo después de obtener la primera muestra. Se debe entender que las cantidades de biomarcadores a los que se hace referencia en el presente documento no cambian instantáneamente (por ejemplo, dentro de 1 minuto o 1 hora). Por lo tanto, "razonable" en este contexto se refiere a intervalos entre la obtención de la primera y la segunda muestra, intervalos que permiten ajustar el/los biomarcador(es). Por lo tanto, la segunda muestra, preferentemente, se obtiene al menos un mes después de dicha primera muestra, al menos tres meses, o, en particular, al menos seis meses después de dicha primera muestra.
Lo siguiente se aplica preferentemente a los biomarcadores angiopoyetina-2 (Ang-2), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico).
Preferentemente, un incremento y, más preferentemente, un incremento significativo y, lo más preferentemente, un incremento estadísticamente significativo de la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la segunda muestra en comparación con la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la primera muestra es indicativo de un sujeto que no responde al tratamiento. Además, una cantidad(es) sin cambios del/de los biomarcador(es) en la segunda muestra en comparación con la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la primera muestra preferentemente es indicativa de un sujeto que no responde al tratamiento. También preferentemente, una disminución, más preferentemente, una disminución significativa, lo más preferentemente, una disminución estadísticamente significativa de la(s) cantidad(es) del/de los biomarcadores en la segunda muestra en comparación con la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la primera muestra es indicativa de un sujeto que responde al tratamiento.
Lo siguiente se aplica preferentemente al biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1):
Preferentemente, una cantidad sin cambios (igual) o un incremento en la cantidad del biomarcador Ang-1 en la segunda muestra en comparación con la cantidad del biomarcador en la primera muestra es indicativo de un sujeto que responde al tratamiento. También preferentemente, una disminución, más preferentemente, una disminución significativa, lo más preferentemente, una disminución estadísticamente significativa de la cantidad del biomarcador en la segunda muestra en comparación con la cantidad del biomarcador en la primera muestra es indicativa de un sujeto que no responder al tratamiento.
Por tanto, si se determinan Ang-1 y Ang-2, por ejemplo, una cantidad sin cambios o un incremento en la cantidad del biomarcador Ang-2 en la segunda muestra en comparación con la cantidad del biomarcador en la primera muestra en combinación con una disminución de la cantidad de Ang-1 en la segunda muestra en comparación con la cantidad del biomarcador en la primera muestra es indicativo de un sujeto que no responde al tratamiento (y viceversa).
Se considera que un sujeto responde al tratamiento, si el tratamiento reduce el riesgo del sujeto de recidiva de fibrilación auricular. Se considera que un sujeto no responde al tratamiento, si el tratamiento no tiene riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Los términos "significativo" y "estadísticamente significativo" son conocidos por el experto en la técnica. Por tanto, se puede determinar si un incremento o disminución es significativo o estadísticamente significativo sin más por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas. Por ejemplo, un incremento o disminución significativo es un incremento o disminución de al menos un 10 %, en particular de al menos un 20 %.
Las combinaciones de biomarcadores preferentes se divulgan en otra parte en el presente documento.
En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, el otro biomarcador que se va a determinar en la primera y la segunda muestra es Ang-1. Por tanto, la determinación combinada de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y la cantidad del biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1) se prevé en una primera y segunda muestra. En un modo de realización preferente, se prevé i) calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 en la primera muestra y la cantidad de angiopoyetina-1 en la primera muestra (calculando de este modo una primera proporción), y ii) calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 en la segunda muestra y la cantidad de angiopoyetina-1 en la segunda muestra (calculando de este modo una segunda proporción). En una etapa posterior, dicha primera proporción (es decir, la proporción en la primera muestra) se compara con la segunda proporción (es decir, la proporción en la segunda muestra). En base a esta etapa de comparación, se realiza el seguimiento del tratamiento. Preferentemente, una proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 en la segunda muestra que se incrementa, en particular se incrementa significativamente, en comparación con la proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 en la primera muestra es indicativa de un sujeto que responde al tratamiento. También preferentemente, una proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 en la segunda muestra que disminuye, en particular disminuye significativamente, en comparación con la proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 en la primera muestra es indicativa de un sujeto que no responde al tratamiento.
Las definiciones dadas en el presente documento anteriormente en relación con la predicción de recidiva de FA y el diagnóstico de FA se aplican preferentemente a los siguientes modos de realización de la presente invención.
Se divulga además un procedimiento para clasificar la fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto.
En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, el procedimiento comprende además la etapa de comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) del/de los biomarcador(es) con una cantidad de referencia (o con cantidades de referencia).
En consecuencia, la divulgación se refiere a un procedimiento para clasificar la fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de
(a) determinar la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto, y
(b) comparar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) como se determina en la etapa (a) con una cantidad de referencia (o con cantidades de referencia).
Preferentemente, la clasificación de la fibrilación auricular se basa en los resultados de la etapa de comparación (b). Por tanto, el procedimiento de la presente invención puede comprender la otra etapa (c) clasificar la fibrilación auricular en el sujeto en base a los resultados de la etapa (b).
El sujeto que se va a someter a prueba de acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente preferentemente padece de fibrilación auricular. En particular, preferentemente se ha diagnosticado que el sujeto padece fibrilación auricular (antes de llevar a cabo el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención). En consecuencia, el procedimiento mencionado anteriormente permitirá otra clasificación del sujeto.
Preferentemente, el sujeto que se va a someter a prueba por el procedimiento para clasificar la FA no padece FA permanente.
En un modo de realización, el sujeto que se va a someter a prueba no experimenta un episodio de fibrilación auricular cuando se obtiene la muestra. Por tanto, el sujeto tendrá un ritmo sinusal normal cuando se obtiene la muestra (y por tanto está en ritmo sinusal).
En otro modo de realización, el sujeto experimenta un episodio de fibrilación auricular cuando se obtiene la muestra. En este modo de realización, el sujeto no está en ritmo sinusal.
Preferentemente, el término "clasificar la fibrilación auricular" como se usa en el presente documento quiere decir evaluar la gravedad de fibrilación auricular en un sujeto. En particular, el término quiere decir evaluar si un sujeto al que se hace referencia de acuerdo con este procedimiento padece una forma leve de fibrilación auricular o una forma grave de fibrilación auricular. Por tanto, llevando a cabo el procedimiento reivindicado, se puede diferenciar entre una forma leve y una forma grave de FA. Una forma leve de FA es preferentemente FA paroxística. Una forma grave de FA es preferentemente FA persistente.
Como se entenderá por los expertos en la técnica, la clasificación descrita en el presente documento normalmente no pretende ser correcta para todos (es decir, un 100 %) los sujetos que se van a clasificar. Por tanto, la clasificación real puede comprender otras etapas tales como la confirmación de una clasificación. En consecuencia, el término "clasificación" en el contexto de la presente invención engloba preferentemente ayudar al médico a evaluar si un sujeto padece una forma leve o grave de fibrilación auricular.
De acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente, el/los biomarcador(es) que se determina(n) se comparará(n) con una referencia (o con referencias). La(s) referencia(s) es/son preferentemente una cantidad de referencia (cantidades de referencia). El término "cantidad de referencia" tal como se usa en relación con el procedimiento mencionado anteriormente se refiere preferentemente a una cantidad que permite la asignación de un sujeto a (i) el grupo de sujetos que padecen fibrilación auricular de forma leve o bien (ii) el grupo de sujetos que padecen una forma grave de FA. Se debe entender que la referencia que se va a aplicar en el procedimiento mencionado anteriormente puede diferir de la cantidad de referencia que se va a aplicar en el procedimiento para diagnosticar FA o para predecir la recidiva de FA. Esto se tiene en cuenta por el experto.
Las cantidades de referencia se pueden determinar como se describe anteriormente. En consecuencia, la referencia que se va a usar para el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención, es decir, un valor umbral que ayuda a diferenciar entre sujetos que padecen una forma leve de fibrilación auricular o los que padecen una forma grave de FA se puede generar, preferentemente, estableciendo una curva ROC.
En un modo de realización preferente, el término "cantidad de referencia" en el presente documento se refiere a un valor predeterminado. Dicho valor predeterminado permitirá diferenciar entre un sujeto que padece una forma leve de fibrilación auricular y un sujeto que padece una forma grave de fibrilación auricular.
Se ha demostrado en los estudios de la presente invención que la cantidad de Ang-2 se incrementa en sujetos que padecen una forma grave de FA (FA persistente) en comparación con la cantidad de Ang-2 en sujetos que padecen una forma leve de FA (FA paroxística, véase la figura 2). Por lo tanto, el algoritmo de diagnóstico es como sigue:
Preferentemente, una cantidad de Ang-2 (y opcionalmente de los otros biomarcadores como se expone anteriormente, en particular un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca) en la muestra del sujeto de prueba en o por encima de la cantidad de referencia indica que el sujeto padece una forma grave de FA. También preferentemente, una cantidad de Ang-2 (y opcionalmente de los otros marcadores como se expone anteriormente, en particular un péptido de tipo BNP, CK-Mb (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca) en la muestra por debajo de la cantidad de referencia indica que el sujeto padece una forma leve de FA.
El siguiente algoritmo de diagnóstico se aplica si el al menos otro biomarcador que se determina además de Ang-2 es Ang-1. Ang-1 disminuye en sujetos que padecen una forma grave de FA (en comparación con sujetos con una forma leve de FA, véase, por ejemplo, la figura 2). En consecuencia, el sujeto padece preferentemente una forma grave de FA, si la cantidad de Ang-2 está por encima de la cantidad de referencia para este marcador (es decir, Ang-2) y si la cantidad de Ang-1 está por debajo de la cantidad de referencia para este marcador. En consecuencia, el sujeto preferentemente padece una forma leve de FA, si la cantidad de Ang-2 es igual o está por debajo de la cantidad de referencia para este marcador (es decir, Ang-2) y si la cantidad de Ang-1 es igual o está por encima de la cantidad de referencia para este marcador (Ang-1).
Las combinaciones de marcadores preferentes se divulgan en el presente documento anteriormente en relación con el procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de FA.
En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, el otro biomarcador que se va a determinar es Ang-1. Por tanto, se prevé la determinación combinada de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y la cantidad del biomarcador angiopoyetina-1 (Ang-1). En otra etapa, las cantidades determinadas de Ang-2 y Ang-1 se comparan con las cantidades de referencia. De forma alternativa, se prevé calcular una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1. En una etapa posterior, dicha proporción se compara con una proporción de referencia. En base a esta etapa de comparación, se clasifica la FA. En particular, se diferencia si el sujeto padece una forma leve de FA o una forma grave de FA. Preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por encima de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que padece una forma grave de FA. También preferentemente, una proporción de Ang-2 con respecto a Ang-1 por debajo de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que padece una forma leve de fA.
Además, la presente invención se refiere a i) el uso de angiopoyetina-2 (Ang-2) como biomarcador y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
La divulgación se refiere además a i) el uso del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto para diagnosticar fibrilación auricular.
Además, la presente invención se refiere a i) el uso de angiopoyetina-2 (Ang-2) como biomarcador y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una primera y segunda muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto para realizar el seguimiento de un tratamiento que tiene como objetivo reducir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Se divulga además i) el uso del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente de al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de un sujeto para clasificar la fibrilación auricular.
Las definiciones y explicaciones dadas en relación con los procedimientos de la presente invención también se aplican a los usos de la presente invención (por ejemplo, véanse las definiciones para el término "muestra", "sujeto", "agente", etc., como se proporciona en otra parte en el presente documento).
Las figuras muestran:
La figura 1 muestra: modelos multivariables de Cox para la primera recidiva de FA en GISSI-FA ajustados para arteriopatía periférica, FA aislada, tabaquismo, frecuencia cardíaca, >2 episodios de FA en los 6 meses previos con/sin cardioversión. Datos mostrados como cociente de riesgo instantáneo (CRI) para un incremento de 1 DE de la concentración de referencia de biomarcadores.
La figura 2 muestra: diagnóstico de FA con la proporción Ang-2 (regulada por incremento)/Ang-1 (regulada por disminución) en 28 muestras de pacientes que padecen FA frente a 28 pacientes que no padecen FA
EJEMPLOS
La invención se ilustrará simplemente por los siguientes ejemplos. Dichos ejemplos de ningún modo se interpretarán de una manera que limite el alcance de la invención.
Ejemplo 1: ensayo GISSI-FA:
El ensayo GISSI-FA fue un ensayo multicéntrico, controlado con placebo, aleatorizado, con enmascaramiento doble, que había incluido a 1442 pacientes en ritmo sinusal con antecedentes conocidos de fibrilación auricular, principalmente FA paroxística, documentada por al menos dos o más episodios de fibrilación auricular documentada con ECG sintomática en los 6 meses previos o cardioversión eléctrica o farmacológica exitosa entre 14 días y 48 h antes de la aleatorización, y se siguieron durante 12 meses (Masson et al. 2015 Cardiovasc Drugs Ther 29:551).
La justificación, diseño y resultados del ensayo ya se han publicado en detalle anteriormente (ref: Disertori M, et al., J Cardiovasc Med. 2006;7:29-38; ref Staszewsky L et al., Cardiovasc Drugs Ther 2015;29:551-561) y en Clinical Trials.gov (con identificador NCT00376272).
Todos los pacientes tenían > 40 años de edad y habían tenido un tratamiento estable para fibrilación auricular y cualquier trastorno cardiovascular subyacente durante al menos 1 mes antes de su inclusión. Se permitió que se siguieran tomando los inhibidores de la ECA, betabloqueantes y amiodarona previamente recetados para las comorbilidades cardiovasculares. Se aleatorizaron los pacientes para recibir valsartán o placebo.
Los criterios de valoración primarios en el ensayo principal fueron evaluar el efecto del bloqueante de los receptores de tipo 1 de la angiotensina II, valsartán, en (a) el tiempo hasta la primera recidiva de fibrilación auricular y (b) la proporción de pacientes con más de un episodio de fibrilación auricular en el período de observación de 1 año.
El subestudio de biomarcadores (N = 382) comprendió 203 sujetos con y 179 controles sin fibrilación auricular recurrente durante el período de seguimiento de 12 meses (Masson S et al., Heart. 2010;96:1909-14; Latini R et al, J Intern Med. 2011;269:160-71). Se extrajeron muestras de sangre de forma aleatoria y después de 6 y 12 meses de seguimiento.
Ejemplo 2: mediciones de biomarcadores
Se midieron concentraciones plasmáticas de los biomarcadores CK-MB, NT-proBNP, troponina T y vitamina D con los reactivos Elecsys® comercializados de Roche Diagnostics (Mannheim, Alemania). Se midieron los biomarcadores IGFBP7 y Ang-2 con los reactivos Elecsys® prototipo de Roche Diagnostics (Mannheim, Alemania).
Ensayo de Ang-2 usando MAB<Ang2>Bi biotinilado y MAB<Ang2>F(ab')2-Ru rutenilado:
Se desarrolló un inmunoanálisis de electroquimioluminiscencia (ECLIA) para la medición específica de Ang2 en particular en muestras de suero o plasma humano usando el analizador Elebasys® cobas e601. El inmunoanálisis de Ang2 Elecsys es un inmunoanálisis de electroquimioluminiscencia (ECLIA) que funciona por medio del principio sándwich. Existen dos anticuerpos incluidos en el ensayo, a saber, un anticuerpo monoclonal biotinilado MAB<Ang2> (MAB<Ang2>Bi; anticuerpo de captura) y un fragmento F(ab')2 rutenilado de anticuerpo anti-Ang2 monoclonal MAB<Ang2>(MAB<Ang2>F(ab')2-Ru; anticuerpo de detección), que forman complejos de inmunoanálisis de tipo sándwich con Ang2 en la muestra. A continuación los complejos se unen a micropartículas recubiertas con estreptavidina en fase sólida. Estos se capturan magnéticamente sobre la superficie del electrodo, dando lugar a emisión de quimioluminiscencia tras la aplicación de voltaje al electrodo, lo que se mide por un fotomultiplicador. Los resultados se determinan por medio de una curva de calibración específica del instrumento determinada por series de 6 calibradores con diferentes concentraciones de Ang2 en todo el intervalo de medición. Las muestras se miden aplicando el protocolo de ensayo 2 con volúmenes de pipeteo de 20 pl de la muestra, 75 pl de reactivo 1 (R1), 75 pl de reactivo 2 (R2) y 30 pl de microesferas magnéticas. R1 contiene 1,75 pg/ml de MAB<Ang2>Bi en el tampón de reacción de fosfato y el reactivo 2 (R2) contiene 1 pg/ml de MAB<Ang2>F(ab')2-Ru en el mismo tampón de reacción.
Tabla 1. Características de prueba
Figure imgf000019_0001
Los primeros resultados del subestudio de biomarcadores se publicaron previamente (Masson S et al., Heart.
2010;96:1909-14; Latini R et al, J Intern Med. 2011;269:160-71) donde se descubrió que los biomarcadores cardíacos NT-proBNP o cTnT-hs son elevados durante los episodios de FA y se asociaron independientemente con la primera recidiva de FA. Otros marcadores, marcadores cardíacos (MR-proANP), péptidos vasoactivos (MR-proADM, CT-proET1, copeptina) y biomarcadores inflamatorios CRP-hs no fueron predictivos de la recidiva de fibrilación auricular (Latini R et al, J Intern Med. 2011;269:160-71).
La tabla 2 muestra los resultados de IGFBP-7, Ang-2, CK-MB y Vit B para un seguimiento de 6 meses del estudio GISSI-FA que proporciona información, de si el biomarcador sanguíneo es elevado en pacientes con FA recurrente. Los pacientes estaban en ritmo sinusal (RS) al inicio del estudio.
Tabla 2. biomarcadores (mediana, [Q1-Q3]) de acuerdo con el ritmo cardíaco en un seguimiento de 6 meses
Figure imgf000019_0002
La tabla 3 muestra los resultados para IGFBP-7, Ang-2, CK-MB y Vit B para un seguimiento de 12 meses.
Tabla 3. biomarcadores (mediana, [Q1-Q3]) de acuerdo con el ritmo cardíaco en un seguimiento de 12 meses
Figure imgf000019_0003
Por tanto, los marcadores son factores pronóstico fiables del riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
Ejemplo 3: diagnóstico de FA con la proporción Ang-2:Ang-1
Se han determinado los niveles de NTproBNP, Ang-2 y Ang-1 en muestras de plasma de n=56 pacientes con sangre muestreada y biomarcadores sometidos a ensayo antes de la cirugía torácica abierta debido a CABG o cirugía valvular. Se generaron pruebas de diferentes tipos de FA, FA paroxística y FA persistente o RS (controles) durante la cirugía con cartografía de activación de alta densidad endoepicárdica simultánea. Los pacientes con FA, FA paroxística o FA persistente y controles se emparejaron con respecto al sexo, edad y comorbilidades.
La cartografía de alta densidad epicárdica es un medio diferente para la discriminación entre subgrupos de ritmo sinusal, FA paroxística y persistente de acuerdo con diferentes patrones de conducción de ondas de fibrilación resultantes de activaciones eléctricas (véase Eckstein et al, Transmural Conduction Is the Predominant Mechanism of Breakthrough During Atrial Fibrillation Evidence From Simultaneous Endo-Epicardia1High-Density Activation Mapping. Circ Arrhythm Electrophysiol. (2013) 6, pp. 334-341; van Marion et al., Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future JAFIB: Journal of Atrial Fibrillation; Ag/Sep2015, Vol. 8 n.° 2, p5).
La cartografía de alta densidad epicárdica, por ejemplo, permite el diagnóstico de fibrilación auricular paroxística incluso en ausencia de un episodio de fibrilación auricular. Por tanto, permite una diferenciación fiable entre sujetos que no padecen FA, sujetos que padecen FA paroxística y sujetos que padecen FA persistente.
En el momento del muestreo de sangre
• pacientes que padecen FA paroxística, opcional en ritmo sinusal; n = 13 pacientes
• pacientes con FA persistente que no estaban en ritmo sinusal; n = 15 pacientes
• pacientes de control que estaban en ritmo sinusal; n = 28 pacientes.
La evaluación de datos mostró que se sospecha que los pacientes con niveles de Ang-2 por encima de un valor de referencia y niveles de Ang-1 por debajo de un valor de referencia tienen fibrilación auricular y se pueden beneficiar de la anticoagulación. El ABC observada de Ang-2 para la detección de FA paroxística fue de 0,54 y para FA persistente de 0,78. El ABC observada de Ang-1 para la detección de FA paroxística fue de 0,60 y para FA persistente de 0,63. Por tanto, en los pacientes analizados en el presente documento, el biomarcador Ang-1 permite una mejora en el diagnóstico de FA paroxística.
Como se muestra en la figura 2b, se pudo detectar un incremento progresivo de los niveles de Ang-2 circulantes de pacientes en ritmo sinusal a pacientes con FA paroxística a pacientes con FA persistente. Por el contrario y como se muestra en la figura 2a, se pudo detectar un descenso progresivo de los niveles de Ang-1 circulantes de pacientes en ritmo sinusal a pacientes con FA paroxística a pacientes con FA persistente. Por tanto, en los pacientes analizados en el presente documento, la proporción Ang-2 (regulada por incremento)/Ang-1 (regulada por disminución) permite una mejora en el diagnóstico de FA independiente de otros biomarcadores.
Tabla 4. Proporción Ang-2:Ang-1
Figure imgf000020_0001
La tabla 4 resume el rendimiento de los biomarcadores Ang-1 y Ang-2 solos y la proporción Ang-2/Ang-1 en los 56 pacientes descritos en el ejemplo 3.
Como se muestra en la tabla 4, el ABC observada de la proporción Ang-2/Ang-1 fue de 0,680, con una sensibilidad de un 67,9 % con una especificidad de un 60 % para la detección de todos los sujetos con fibrilación auricular (n=28) y un valor de p de 0,02. El ABC observada respectiva para Ang-1 fue de 0,629 con una sensibilidad de un 60,7 % con una especificidad de un 60 % para la detección de fibrilación auricular en los 28 sujetos frente a 28 controles con un valor de p de 0,1.
El ABC observada respectiva para Ang-2 fue de 0,654 con una sensibilidad de un 57,1 % con una especificidad de un 60 % para la detección de fibrilación auricular en los 28 sujetos frente a 28 controles con un valor de p respectivo de 0,048. Por tanto, en conclusión, se observó que tanto Ang-1 y/o Ang-2 son adecuadas para la detección de FA paroxística y/o persistente. El algoritmo propuesto de la proporción Ang-2:Ang-1 mostró el mejor rendimiento frente a Ang-1 o Ang-2 en la detección de FA paroxística y/o persistente en la cohorte analizada en el presente documento. Las sensibilidades observadas para la detección de FA paroxística y/o persistente con una especificidad de un 60 % fueron de un 67,9 %, 60,7 % y 57,1 % para la proporción Ang-2:Ang-1, Ang-1 y Ang-2, respectivamente.
El ABC observada de la proporción Ang-2:Ang-1 para la detección de FA paroxística fue de 0,459 con una sensibilidad de un 30,8 % con una especificidad de un 60 %. Se detectó Ang-1 en sujetos con fibrilación auricular paroxística con una sensibilidad de un 61,5 % con una especificidad de un 60 % y un ABC de 0,596. Se detectó Ang-2 en los pacientes con FA paroxística analizados en el presente documento con una sensibilidad de un 46 % con una especificidad de un 60 % y un ABC de 0,536.
Por tanto, en conclusión, Ang-1 mostró un rendimiento beneficioso frente a Ang-2 solo en la detección de FA paroxística en la cohorte de pacientes analizada. Las sensibilidades observadas para la detección de FA paroxística con una especificidad de un 60 % fueron de un 61,5 %, 46,2 % y 30,8 % para Ang-1, Ang-2 y la proporción Ang-2:Ang-1, respectivamente.
El ABC observada para la proporción Ang-2:Ang-1 para la detección de FA persistente fue de 0,80 para los pacientes analizados en el presente documento (sensibilidad de un 86,7 % con una especificidad de un 60 %, valor de p 0,001). Se detectó Ang-1 en sujetos con fibrilación auricular persistente con una sensibilidad y especificidad de un 60 % y un ABC de 0,657. Los pacientes con FA persistente se encontraron con un ABC de 0,757 y una sensibilidad de un 66,7 % con una especificidad de un 60 % con Ang-2.
En conclusión, se observó que ambos biomarcadores Ang-1 o Ang-2 son adecuados para la detección de pacientes con FA persistente. Con la proporción Ang-2:Ang-1 se puede lograr una mejora en el rendimiento en la detección de FA persistente frente al uso de cualquiera de ambos biomarcadores, Ang-1 o Ang-2 sola. Las sensibilidades observadas para la detección de FA persistente con una especificidad de un 60 % fueron de un 86,7 %, 66,7 % y 60,0 % para la proporción Ang-2:Ang-1, Ang-2 y Ang-1 respectivamente.
El ABC observada de NTproBNP para la detección de FA paroxística fue de 0,64 y para FA persistente 0,9 en los pacientes analizados en el presente documento.
Se concluye que la proporción Ang-2 (regulada por incremento)/Ang-1 (regulada por disminución) muestra un rendimiento beneficioso frente a Ang-2 sola y, por tanto, individualmente y/o en combinación con NTproBNP puede ayudar en la detección de episodios de fibrilación auricular. Se sospecha que los pacientes con niveles de Ang-2 por encima de un valor de referencia en combinación con niveles de Ang-1 por debajo de un valor de referencia tienen fibrilación auricular y se pueden beneficiar de la anticoagulación.
Por tanto, el diagnóstico de fibrilación auricular en pacientes en riesgo se puede lograr con la proporción Ang-2/Ang-1 sola o en combinación con NT-proBNP.

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la determinación de la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma del sujeto.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sujeto es humano.
3. El procedimiento de las reivindicaciones 1 y 2, en el que se determinan las cantidades de un péptido de tipo BNP y angiopoyetina-2.
4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende además la etapa de comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) del/de los biomarcador(es) con una cantidad de referencia (o con cantidades de referencia).
5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que una cantidad del biomarcador (o cantidades de los biomarcadores) por encima de la(s) cantidad(es) de referencia es/son indicativa(s) de un sujeto que está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular y/o en el que una cantidad de el biomarcador (o cantidades de los biomarcadores) por debajo de la(s) cantidad(es) de referencia es/son indicativa(s) de un sujeto que no está en riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
6. El procedimiento de las reivindicaciones 1 y 2, en el que se determinan las cantidades de angiopoyetina-2 y angiopoyetina-1, y opcionalmente en el que se calcula una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1 y en el que se compara dicha proporción calculada con una proporción de referencia.
7. Un procedimiento para diagnosticar fibrilación auricular en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y de la cantidad de angiopoyetina-1 (Ang-1) en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, en el que se calcula una proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 y la cantidad de angiopoyetina-1 y en el que se compara dicha proporción calculada con una proporción de referencia.
8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la proporción es la proporción de la cantidad de angiopoyetina-2 con respecto a la cantidad de angiopoyetina-1.
9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que una proporción de la cantidad de Ang-2 con respecto a la cantidad de Ang-1 por encima de la proporción de referencia es indicativa de un sujeto que padece fibrilación auricular.
10. Un procedimiento para realizar un seguimiento de un tratamiento que tiene como objetivo reducir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular, comprendiendo dicho procedimiento
(a) determinar la cantidad del biomarcador angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente la cantidad de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una primera muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto,
(b) determinar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) como se determina en la etapa (a) en una segunda muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, y
(c) comparar la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) como se determina en la primera muestra de sangre, suero o plasma con la(s) cantidad(es) de dicho(s) biomarcador(es) en dicha segunda muestra de sangre, suero o plasma.
11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que el tratamiento es la administración de al menos un anticoagulante.
12. El procedimiento de la reivindicación 10 u 11, en el que el al menos otro biomarcador se selecciona de un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca.
13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que un incremento de la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la segunda muestra en comparación con la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la primera muestra es indicativo de un sujeto que no responde al tratamiento, o en el que una disminución de la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la segunda muestra en comparación con la(s) cantidad(es) del/de los biomarcador(es) en la primera muestra es indicativa de un sujeto que responde al tratamiento.
14. El procedimiento de la reivindicación 10 u 11, en el que el al menos otro biomarcador es Ang-1.
15. Uso de i) angiopoyetina-2 (Ang-2) como biomarcador y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-Mb (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto para predecir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
16. Uso de i) angiopoyetina-2 (Ang-2) como biomarcador y opcionalmente de al menos otro biomarcador seleccionado del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-MB (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca y/o ii) el uso de un agente que se une específicamente a angiopoyetina-2 (Ang-2) y opcionalmente al menos otro agente que se une específicamente a un biomarcador seleccionado de angiopoyetina-1 (Ang-1), un péptido de tipo BNP, CK-Mb (creatina cinasa de tipo muscular-cerebral), IGFBP-7 (proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7) y una troponina cardíaca en una primera y segunda muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto para realizar el seguimiento de un tratamiento que tiene como objetivo reducir el riesgo de recidiva de fibrilación auricular.
ES17733406T 2016-06-17 2017-06-19 Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular Active ES2823124T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16174910 2016-06-17
PCT/EP2017/064970 WO2017216387A1 (en) 2016-06-17 2017-06-19 Circulating angiopoietin-2 (ang-2) for the prediction of recurrence of atrial fibrillation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2823124T3 true ES2823124T3 (es) 2021-05-06

Family

ID=56148182

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES17733406T Active ES2823124T3 (es) 2016-06-17 2017-06-19 Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11644472B2 (es)
EP (1) EP3472622B1 (es)
JP (1) JP6768847B2 (es)
KR (1) KR102149593B1 (es)
CN (1) CN109328303B (es)
BR (1) BR112018073214A2 (es)
ES (1) ES2823124T3 (es)
WO (1) WO2017216387A1 (es)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112020011454A2 (pt) 2017-12-13 2021-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag métodos para prever o risco de acidente vascular, para prever o risco de acidente vascular cerebral e para aprimorar a precisão da previsão e usos do (i) biomarcador ang-2 e/ou do biomarcador igfbp7
EP3837549A1 (en) * 2018-08-16 2021-06-23 Roche Diagnostics GmbH Circulating tfpi-2 (tissue factor pathway inhibitor 2) in the assessment of atrial fibrillation and anticoagulation therapy
EP3841382A1 (en) * 2018-08-24 2021-06-30 Roche Diagnostics GmbH Circulating fgfbp-1 (fibroblast growth factor-binding protein 1) in the assessment of atrial fibrillation and for the prediction of stroke
KR102250719B1 (ko) 2020-01-07 2021-05-11 고려대학교 산학협력단 발작성 심방세동 환자의 재발 위험도 예측을 위한 바이오 마커
KR102300527B1 (ko) 2020-02-24 2021-09-10 주식회사 테스비 유사 삼원계 열전재료, 그의 제조방법, 열전소자 및 열전모듈
JP2023537749A (ja) 2020-08-14 2023-09-05 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 無症候性脳梗塞及び認知低下の評価のためのｉｇｆｂｐ７

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4424279A (en) * 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
WO1994009371A1 (en) * 1992-10-09 1994-04-28 Massachusetts Institute Of Technology Antemortem diagnostic test for alzheimer's disease
CN105085678B (zh) * 2004-12-21 2019-05-07 阿斯利康公司 血管生成素-2的抗体及其应用
WO2007109733A2 (en) * 2006-03-21 2007-09-27 The Johns Hopkins University Diagnostic and prognostic markers and treatment strategies for multiple sclerosis
WO2008085895A2 (en) * 2007-01-04 2008-07-17 Musc Foundation For Research Development Predicting atrial fibrillation recurrence by protease and protease inhibitor profiling
WO2008089994A1 (en) * 2007-01-25 2008-07-31 Roche Diagnostics Gmbh Use of igfbp-7 in the assessment of heart failure
EP1995596B1 (en) * 2007-05-24 2011-12-14 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for assessing heart failure in patients with atrial fibrillation using GDF-15
WO2009018580A1 (en) * 2007-08-02 2009-02-05 Transoma Medical, Inc. Periodic sampling of cardiac signals using an implantable monitoring device
US20110008804A1 (en) * 2007-11-05 2011-01-13 Kain Kevin C Angiopoietin-1 and -2 biomarkers for infectious diseases that compromise endothelial integrity
GB2458025A (en) * 2008-03-05 2009-09-09 Singulex Inc Methods of detecting cardiac troponin using a single molecule detector
EP2166358A1 (en) * 2008-09-17 2010-03-24 Fundacio Institut de Recerca de l'Hospital Universitari Vall d'Hebron Differential diagnostic biomarkers of stroke mimicking conditions and methods of use thereof
US20100124756A1 (en) * 2008-10-10 2010-05-20 Sandip Ray Collection of biomarkers for diagnosis and monitoring of alzheimer's disease in body fluids
EP2293071A1 (en) * 2009-09-07 2011-03-09 Universität Zu Köln Biomarker for colorectal cancer
US20130338194A1 (en) * 2010-11-11 2013-12-19 Medical University Of South Carolina Predicting Atrial Fibrillation Recurrence by Protease and Protease Inhibitor Profiling
BR112013019503B1 (pt) * 2011-02-09 2021-05-25 F. Hoffmann-La Roche Ag composto quimioluminescente à base de irídio, conjugado, usos de um composto e método para medir um analito
US9733261B2 (en) * 2012-04-24 2017-08-15 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of stroke or other cerebral injury
JP6366594B2 (ja) 2012-11-09 2018-08-01 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 発作性心房細動をＴｎＴに基づいて診断するためのデータを提供する方法
WO2014152828A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 AI Cure Technologies, Inc. Apparatus and method for recognition of suspicious activties
GB201404998D0 (en) * 2014-03-20 2014-05-07 Univ Birmingham Atrial fibrillation therapy
GB201413081D0 (en) * 2014-07-23 2014-09-03 Univ Birmingham Markers for AF
US20170121774A1 (en) * 2015-10-28 2017-05-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for assessing predicting responsiveness to a tnf inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
JP6768847B2 (ja) 2020-10-14
BR112018073214A2 (pt) 2019-04-16
CN109328303B (zh) 2022-08-09
KR20190009341A (ko) 2019-01-28
US20190353666A1 (en) 2019-11-21
WO2017216387A1 (en) 2017-12-21
JP2019526041A (ja) 2019-09-12
KR102149593B1 (ko) 2020-08-31
EP3472622B1 (en) 2020-08-05
CN109328303A (zh) 2019-02-12
US11644472B2 (en) 2023-05-09
EP3472622A1 (en) 2019-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2823124T3 (es) Angiopoyetina-2 (Ang-2) circulante para la predicción de recidiva de fibrilación auricular
ES2817087T3 (es) ESM-1 (endocan) circulante en la evaluación de la fibrilación auricular
US20210239712A1 (en) Circulating fgfbp-1 (fibroblast growth factor-binding pro-tein 1) in the assessment of atrial fibrillation and for the prediction of stroke
US11946938B2 (en) Circulating Angiopoietin-2 (Ang-2) and insulin-like growth factor-binding protein 7 (IGFBP7) for the prediction of stroke
ES2954321T3 (es) Proteína 3 de unión a ácidos grasos para la evaluación de fibrilación auricular (FA)
US20210172962A1 (en) Ces-2 (carboxylesterase-2) for the assessment of afib related stroke
JP7518061B2 (ja) 心房細動および抗凝固療法の評価における循環ｔｆｐｉ－２（組織因子経路阻害剤２）
JP7333384B2 (ja) 心房細動の評価における循環ｓｐｏｎ－１（スポンジン－１）
JP7419341B2 (ja) 心房細動の評価における循環ＤＫＫ３（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質３）