ES2770438T3 - Péptidos novedosos - Google Patents

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Abstract

Una molécula de péptido aislado o recombinante que consiste en una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo: (i) DGSVVVNKVSELPAGH; (ii) GLNVNTLSYGDLAAD; y (iii) SELPAGHGLNVNTLS.

Description

DESCRIPCIÓN
Péptidos novedosos
La presente invención se refiere a péptidos novedosos derivables del polipéptido chaperonina 60.1 y a su uso en medicina, tal como para la prevención y/o tratamiento de condiciones inflamatorias.
Los polipéptidos de choque de calor son una familia de moléculas halladas en todos los organismos, cuya función es ayudar al procesamiento biológico y estabilidad de moléculas biológicas (Zugel & Kauffman (1999) Role of heat shock polypeptides in protection from and pathogenesis of infectious diseases infectious diseases. Clin. Microbiol. Rev. (12)1: 19-39; Ranford et al. (2000) Chaperonins are cell signalling polypeptides: - the unfolding biology of molecular chaperones. Exp. Rev. Mol. Med., 15 septiembre, www.ermn.cbcu.cam.ac.uk/).
Los polipéptidos de choque de calor están localizados en todo compartimiento celular, y poseen la habilidad para interactuar con un amplio espectro de moléculas biológicas. En particular, los polipéptidos de choque de calor ayudan e influencian el plegamiento de polipéptido y translocación de polipéptido en cualquier tiempo, desde el ensamble a través del desensamble del polipéptido y cualesquier complejos de ellos. La naturaleza de ayudador de los polipéptidos de choque de calor ha conducido a que ellos sean conocidos también como chaperonas moleculares (Laskey et al. (1978) Nucleosomes are assembled by an acidic polypeptide, which binds histones and transfers them to DNA. Nature (275): 416-420).
Los polipéptidos de choque de calor son sintetizados por las células en respuesta a la tensión ambiental, lo cual incluye, pero no está limitado a cambios en la temperatura (tanto incrementos como descensos), y señales patofisiológicas tales como citoquinas. En respuesta a la tensión ambiental, los polipéptidos de choque de calor usan su habilidad para procesar otros polipéptidos para proteger tales polipéptidos de cualquier desnaturalización que pueda ocurrir debida a la presencia de la tensión. Este mecanismo sirve también para proteger células que contienen la proteína.
Los polipéptidos de chaperoninas son un subgrupo de polipéptidos de choque de calor cuyo papel en el plegamiento de polipéptidos es bien conocido. Existen dos familias de polipéptidos de chaperonina, las familias de chaperonina 60 (aproximadamente 60 kDa) y chaperonina 10 (aproximadamente 10 kDa) (Ranford, 2000). Las chaperoninas mejor caracterizadas son aquellas derivadas de E. coli, de las cuales se ha establecido la estructura característica de chaperonina 60 y chaperonina 10. Los complejos de chaperonina de la mayoría de otros organismos también están conformes sustancialmente con esta estructura característica.
La estructura característica de chaperoninas es un complejo formado por dos anillos de heptámero (compuestos de siete monómeros de chaperonina 60) que están uno frente a otro y están tapados por un anillo de heptámero compuesto por monómeros de chaperonina 10.
Convencionalmente, las chaperoninas ayudan al plegamiento del polipéptido cuando el polipéptido objetivo entra al núcleo central de los heptámeros de anillo, y en la subsiguiente liberación de energía del ATP, el polipéptido objetivo es liberado desde el núcleo central por un cambio en la conformación de la estructura de la chaperonina (Ranson et al. (1998) Review Article: Chaperones. Biochem. J (333): 233-242).
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) produce chaperonina 60.1 (Cpn60.1), un polipéptido que es nombrado sobre la base de su identidad de secuencia de aminoácidos, respecto a otras chaperoninas conocidas. Además, los polipéptidos de chaperonina de M. tuberculosis son chaperonina 10 (Cpn10) y chaperonina 60.2 (Cpn60.2). Cpn60.2 exhibe 59.6% de identidad de secuencia de aminoácidos y 65.6% de identidad de secuencia de ácido nucleico frente a Cpn60.1.
La Solicitud de Patente Internacional, Número de Publicación WO02/040037 divulga composiciones farmacéuticas que comprenden Cpn60.1 de M. tuberculosis (MtCpn60.1) y sus moléculas que codifican ácido nucleico. Este documento también divulga varios fragmentos de péptido especifico derivables de la totalidad de la longitud de polipéptido que poseen actividad biológica similar. También se divulga una variedad de usos terapéuticos de estas moléculas, incluyendo el tratamiento y/o prevención de desórdenes autoinmunes, condiciones alérgicas, condiciones tipificadas por una respuesta inmune de tipo Th2 y condiciones asociadas con eosinofilia.
La Solicitud de Patente Internacional, Número de Publicación WO2009/106819 divulga una serie de péptidos novedosos derivables de MtCpn60.1 que incluye un péptido (designado como “Péptido 4”) que tiene una secuencia de aminoácidos: DGSVVVNKVSELPAGHGLnVnTlSy Gd La Ad . El Péptido 4 exhibe actividad antiinflamatoria y se ha mostrado que reduce de manera significativa el reclutamiento de eosinófilos en un modelo animal de inflamación alérgica de las vías respiratorias.
La presente invención se basa en el hallazgo inesperado según el cual ciertos subfragmentos novedosos de Péptido 4 (DGSVVVNKVSELPAGHGLNVNTLSYGDLAAD) exhiben actividad biológica, en particular una habilidad para inhibir la diapedesis de leucocitos. Los péptidos novedosos de la presente invención son particularmente adecuados para desarrollo como farmacéuticos, debido a su longitud de cadena de aminoácidos comparativamente corta, lo cual los hace convenientes para la preparación y aislamiento en elevado rendimiento. También se indicó que poseen estabilidad biológica in vivo mejorada respecto a MtCpn60.1 y fragmentos conocidos de péptido de la misma.
Así, en un primer aspecto, la presente invención suministra una molécula de péptido aislado o recombinante, que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo:
(i) DGSVVVNKVSELPAGH;
(ii) GLNVNTLSYGDLAAD; y
(iii) SELPAGHGLNVNTLS.
Se entiende por “funcionalmente equivalente” cualquier péptido descrito y/o variante o fragmento del mismo, que posee una función (por ejemplo actividad biológica) que es idéntica o sustancialmente similar a cualquier función desplegada por o atribuida a una o más de las secuencias (i) a (iii) definidas de aminoácidos. Por ejemplo, péptidos que consisten en las secuencias de aminoácidos definidas en (i) a (iii) exhiben propiedades antiinflamatorias que permiten su uso en la prevención y/o tratamiento de una variedad de enfermedades y desórdenes, incluyendo artritis y dolor. La equivalencia funcional respecto a una actividad biológica particular puede ser medida usando modelos y métodos convencionales; por ejemplo, midiendo la latencia de pata sobre una placa calentada o midiendo la liberación de citoquinas antiinflamatorias in vivo o in vitro.
Se entiende por “variante” un péptido descrito que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene 70% o más, tal como 75%, 80%, 85%, 90% o 95% de identidad respecto a una secuencia definida en cualquiera de los listados (i) a (vi) de secuencia anteriores. Así, el término “variante” se refiere a polipéptidos y péptidos que difieren de moléculas de ocurrencia natural por inserciones, eliminaciones y sustituciones de aminoácidos, creadas usando, por ejemplo, técnicas de ADN recombinante. La guía en la determinación de cuáles residuos de aminoácidos pueden ser reemplazados, añadidos o borrados sin eliminar actividades de interés, puede ser hallada mediante comparación de la secuencia del polipéptido particular con la de péptidos homólogos y minimizando el número de cambios de secuencia de aminoácidos, hechos en regiones de elevada homología (regiones conservadas) o reemplazando aminoácidos con secuencia de consenso.
De modo alternativo, las variantes recombinantes descritas que codifican estos mismos polipéptidos o similares, pueden ser sintetizadas o seleccionadas haciendo uso de la “redundancia” en el código genético. Pueden introducirse diferentes sustituciones de codón, tales como los cambios silenciosos que producen diferentes sitios de restricción, para optimizar la clonación hasta un plásmido o un vector viral o expresión en un sistema procariota o eucariota particular. Las mutaciones en la secuencia de polinucleótido pueden reflejarse en el polipéptido o dominios de otros péptidos añadidos al polipéptido para modificar las propiedades de cualquier parte del polipéptido, para cambiar características tales como afinidades de unión de ligando, afinidades entre cadenas, o tasa de degradación/rotación.
Las “sustituciones” de aminoácidos descritas son el resultado del reemplazo de un aminoácido con otro aminoácido que tiene propiedades estructurales y/o químicas similares, es decir reemplazos conservadores de aminoácidos. Las sustituciones “conservadoras” de aminoácidos pueden ser hechas sobre la base de similitud en polaridad, carga, solubilidad, carácter hidrófobo, carácter hidrofílico y/o la naturaleza anfipática de los residuos involucrados. Por ejemplo, los aminoácidos no polares (hidrófobos) incluyen alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano, y metionina; los aminoácidos polares neutros incluyen glicina, serina, treonina, cisteina, tirosina, asparagina, y glutamina; los aminoácidos con carga positiva (básicos) incluyen arginina, lisina e histidina; y los aminoácidos con carga negativa (ácidos) incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. Las “inserciones” o “eliminaciones” descritas están preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 1 a 10 aminoácidos, más preferiblemente 1 a 5 aminoácidos, tales como 1, 2, 3, 4 o 5 aminoácidos. La variación descrita puede ser determinada experimentalmente haciendo de manera sistemática inserciones, eliminaciones o sustituciones de aminoácidos en una molécula de polipéptido, usando técnicas de ADN recombinante y determinando la actividad biológica de las variantes recombinantes resultantes.
También se describe que cuando se desea alteración de la función, pueden diseñarse inserciones, eliminaciones o alteraciones no conservadoras, para producir polipéptidos alterados. por ejemplo, tales alteraciones pueden alterar una o más de las funciones biológicas o características bioquímicas de los polipéptidos de la invención. Por ejemplo, tales alteraciones pueden cambiar características del polipéptido tales como afinidades de unión de ligando, afinidades entre cadenas, o tasa de degradación/rotación. Además, tales alteraciones pueden ser seleccionadas de modo que generen polipéptidos que están mejor adecuados para la expresión, escalamiento y similares en las células anfitrión elegidas para la expresión.
La presente invención suministra además una molécula de ácido nucleico aislado o recombinante que consiste en una secuencia de polinucleótido que codifica un péptido que consiste en una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo:
1. DGSVVVNKVSELPAGH;
2. GLNVNTLSYGDLAAD; y
3. SELPAGHGLNVNTLS.
El término “polinudeótido” se refiere a un heteropolímero de nucleótidos o la secuencia de estos nucleótidos. También se refiere a ADN o ARN de origen genómico o sintético, que puede ser de cuerda simple o cuerda doble y puede representar la cuerda en sentido o la cuerda antisentido, para ácido nucleico de péptido (ANP) o para cualquier material similar a ADN o a ARN. En las secuencias de esta memoria A es adenina, C es citosina, T es timina, G es guanina y N es A, C, G o T (U). Se contempla que donde el polinucleótido es ARN, la T (timina) en las secuencias suministradas en esta memoria, es sustituida con U (uracilo). Generalmente, los segmentos de ácido nucleico suministrados por esta invención pueden ser ensamblados a partir de fragmentos del genoma y agentes de enlace de oligonucleótido cortos, o de una serie de oligonucleótidos, o de nucleótidos individuales, para suministrar un ácido nucleico sintético que es capaz de ser expresado en una unidad transcripcional recombinante que comprende elementos reguladores derivados de un operón microbiano o viral, o un gen eucariota.
Los polinucleótidos de la invención incluyen ADN de ocurrencia natural o total o parcialmente sintéticos, por ejemplo, cADN y ADN genómico, y ARN, por ejemplo, mARN. Los polinucleótidos pueden incluir la totalidad de la región que codifica del cADN o pueden representar una porción de la región que codifica del cADN.
La presente invención también suministra genes que corresponden a las secuencias de cADN divulgadas en esta memoria. Los correspondientes genes pueden ser aislados de acuerdo con métodos conocidos usando la información de secuencia divulgada en esta memoria. Tales métodos incluyen la preparación de sondas o cebadores de la información de secuencia divulgada, para identificación y/o amplificación de genes en bibliotecas genómicas apropiadas u otras fuentes de materiales genómicos. Además, puede obtenerse la secuencia 5' y 3' usando métodos conocidos en la técnica por ejemplo, pueden obtenerse cADN de longitud completa o ADN genómico que corresponde a cualquiera de los polinucleótidos de la invención, discriminando bibliotecas apropiadas de cADN o ADN genómico bajo condiciones adecuadas de hibridación, usando como sonda cualquiera de los polinucleótidos de la invención o una porción de ellos. De modo alternativo, los polinucleótidos de la invención pueden ser usados como la base para cebador(es) adecuado(s) que permitan la identificación y/o amplificación de genes en bibliotecas adecuadas de ADN genómico o cADN.
Las secuencias de ácido nucleico de la invención pueden ser ensambladas a partir de ESTs y secuencias (incluyendo secuencias de cADN y genómicas) obtenidas de una o más bases de datos públicas, tales como dbEST, gbpri, y UniGene. Las secuencias EST pueden suministrar información de secuencia de identificación, información de fragmento representativo o de segmento, o información de segmento novedoso para la totalidad de la longitud del gen.
MtCpn60.1 puede ser clonada y expresada usando los métodos descritos en T.H. Kong et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 1993, 90, 2608-2612 y J.C. Lewthwaite et al, Infection and Immunity, 2001, 69(12), 7349-7355. MtCpn60.1 está disponible comercialmente de Lionex (Alemania).
Los péptidos de la presente invención pueden ser preparados y/o aislados usando métodos convencionales conocidos en la técnica. Por ejemplo, mediante síntesis en solución o fase sólida usando métodos tradicionales o usando un sintetizador automatizado en fase sólida, por ejemplo como se describe en I. Coin, Nature Protocols, 2007, 2, 3247-3256. Preferiblemente, los péptidos de la presente invención son preparados mediante síntesis en fase sólida Fmoc usando métodos análogos a aquellos descritos en G.B. Fields y R.L. Noble, Int. J. Peptide Protein Res., 1990, 35(3), 161-214.
De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se suministra una molécula de péptido o de ácido nucleico como se define en esta memoria, para uso en medicina.
En una realización, la invención suministra el uso de una molécula de péptido o ácido nucleico como se define en esta memoria, para la modulación de diapedesis, es decir movimiento o paso de células sanguíneas, preferiblemente células sanguíneas blancas, a través de las paredes capilares intactas hacia los alrededores del tejido corporal, en un sujeto humano.
Las moléculas de péptido y ácido nucleico de la presente invención están indicadas también como útiles en la prevención y/o tratamiento de cualquier condición, enfermedad y/o desorden en un sujeto humano que está asociada con un incremento en el flujo de células sanguíneas blancas, a través del endotelio. Ejemplos de tales condiciones incluyen, pero no están limitados a, condiciones inflamatorias agudas y/o crónicas tales como daño por isquemia-reperfusión (incluyendo trombosis coronaria y bloqueo de las arterias cerebrales), enfermedades autoinmunes tales como esclerosis múltiple, condiciones alérgicas tales como asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y enfermedad de altura.
Preferiblemente, la molécula de péptido o ácido nucleico de la presente invención es usada para el tratamiento y/o prevención de condiciones inflamatorias agudas y/o crónicas, en particular inflamación no alérgica. Los ejemplos de condiciones inflamatorias que pueden ser prevenidas y/o tratadas con las moléculas de péptido o ácido nucleico de la presente invención incluyen condiciones asociadas con eosinofilia y/o neutrofilia. Los ejemplos preferidos de condiciones inflamatorias agudas y/o crónicas incluyen indicios asociados con infección (tales como choque séptico, sepsis o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS)), daño por isquemia-reperfusión incluyendo trombosis coronaria y bloqueo de la arteria cerebral, síndrome de choque de pulmón, letalidad de endotoxina, artritis (en particular artritis reumatoide o artritis inflamatoria crónica), rechazo hiperagudo mediado por complemento, nefritis, daño de pulmón inducido por citoquina o quimioquina, asma no alérgica, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn.
También se describe un método para la prevención y/o tratamiento de una condición inflamatoria aguda y/o crónica, que comprende la administración a un mamífero, incluyendo el hombre, de una molécula de péptido o ácido nucleico, como se define en esa memoria.
Además, se describe el uso de una molécula de péptido o ácido nucleico como se describe en esta memoria en la manufactura de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una condición inflamatoria aguda y/o crónica. En una realización alternativa, la presente invención suministra el uso de una molécula de péptido o ácido nucleico como se define en esta memoria, para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
En una realización alternativa, la presente invención suministra el uso de una molécula de péptido o ácido nucleico como se define en esta memoria, para la prevención y/o tratamiento de desórdenes autoinmunes.
Dentro del término “desórdenes autoinmunes” como se usa en esta memoria se incluyen condiciones donde puede mostrarse que el proceso autoinmune contribuye a la patogenesis de una enfermedad. Tales desórdenes están asociados típicamente con una respuesta inmune tipo linfocito-1 ayudador T (Th-1).
Los ejemplos de desórdenes autoinmunes que pueden ser prevenidos y/o tratados con las moléculas de péptido o ácido nucleico de la presente invención incluyen desórdenes autoinmunes, tales como anemia hemolítica, trombocitopenia, anemia perniciosa, enfermedad de Addison, diabetes autoinmune, diabetes mellitus dependiente de insulina, miastenia gravis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, aterosclerosis, encefalitis autoinmune, enfermedad del tejido conectivo, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, inflamación pulmonar autoinmune, síndrome de Guillain-Barre, tiroiditis autoinmune, miastenia gravis, enfermedad de injerto-versus-huésped y enfermedad inflamatoria autoinmune del ojo. los desórdenes autoinmunes preferidos incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple.
Los efectos inmunosupresores de las moléculas de péptido o ácido nucleico de la presente invención contra la artritis reumatoide pueden ser determinados en un sistema de modelo experimental animal. El sistema de modelo experimental es artritis inducida con adyuvante en ratas, y el protocolo es descrito por J. Holoshitz, et at., 1983, Science, 219:56, o por B. Waksman et al., 1963, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 23:129. la inducción de la enfermedad puede ser causada por una inyección individual, generalmente intradérmica, de una suspensión de Mycobacterium tuberculosis muerto en adyuvante completo de Freund (CFA). La ruta de inyección puede variar, pero las ratas pueden ser inyectadas en la base de la cola con una mezcla adyuvante. El polipéptido es administrado en solución amortiguada de fosfato (PBS) a una dosificación de aproximadamente 1-5 mg/kg. El control consiste en administrar solamente PBS.
El procedimiento para probar los efectos del compuesto de prueba consistiría en la inyección intradérmica de Mycobacterium tuberculosis muerto en CFA seguido por la administración inmediata del compuesto de prueba y subsiguiente tratamiento día de por medio, hasta el día 24. En los días 14, 15, 18, 20, 22, y 24 después de la inyección de Mycobacterium CFA, puede obtenerse una calificación total de artritis, como describió J. Holoskitz anteriormente. Un análisis de los datos revelaría que el compuesto de prueba tendría un efecto dramático sobre el hinchamiento de las articulaciones, como se mide por un descenso en la calificación de artritis.
En una realización alternativa, la presente invención suministra el uso de una molécula de péptido o ácido nucleico como se define en esta memoria, para la prevención y/o tratamiento de condiciones de alergia. Los ejemplos de condiciones y desórdenes alérgicos que pueden ser prevenidos y/o tratados con las moléculas de péptido o ácido nucleico de la presente invención incluyen eczema, dermatitis, rinitis alérgica (fiebre del heno), enfermedades alérgicas de las vías respiratorias, síndrome hipereosinofílico, dermatitis de contacto; enfermedades respiratorias caracterizadas por inflamación eosinofílica de vías respiratorias e hiperrespuesta de las vías respiratorias, tales como asma, incluyendo asma alérgica y asma intrínseca, aspergillosis broncopulmonar alérgica, pneumonía eosinofílica, bronquiectasia por bronquitis alérgica, asma ocupacional, síndrome de enfermedad reactiva de vías respiratorias, enfermedad intersticial del pulmón, síndrome hipereosinofílico, enfermedad parasítica del pulmón; anafilaxis, enfermedad del suero, reacciones a los fármacos, alergias alimentarias, alergias al veneno de los insectos, mastocitosis, pneumonitis hipersensible, urticaria, angioedema, eczema, dermatitis atópica, dermatitis de contacto alérgico, eritema multiforme, síndrome de Stevens-Johnson, conjuntivitis alérgica, queratoconjuntivitis atópica, queratoconjuntivitis venérea y conjuntivitis papilar gigante.
Otras condiciones en las cuales es deseada la supresión inmune (incluyendo, por ejemplo, transplante de órganos), pueden ser tratables también usando una molécula de péptido o ácido nucleico de la presente invención. los desórdenes y condiciones alérgicos preferidos incluyen asma, rinitis alérgica, eczema y anafilaxis.
Dentro de los términos “desórdenes alérgicos” y “condiciones alérgicas” como se usa en esta memoria se incluyen condiciones asociadas con una respuesta inmune tipo linfocito-2 (Th-2) ayudador T. En la reacción alérgica, ocurren elevados niveles de IgE y predominan las respuestas inmunes a Th-2 sobre las respuestas Th-1, dando como resultado la respuesta inflamatoria.
Los efectos terapéuticos de los polipéptidos o antagonistas de ellos sobre reacciones alérgicas, pueden ser evaluados mediante modelos animales in vivo como la prueba de mejora por contacto acumulado (Lastborn et al., Toxicology 125: 59-66, 1998), prueba de pinchazo en la piel (Hoffmann et al., Allergy 54: 446-54, 1999), prueba de sensibilización de piel en cobayos (Vohr et al., Arch. Toxocol. 73: 501-9), y ensayo de nodo de linfa local de murina (Kimber et al., J. Toxicol. Environ. Health 53: 563-79).
Los ensayos adecuados para citotoxicidad de timocitos o esplenocitos incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Current Protocols in Immunology, Ed by J. E. Coligan et al., Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (capítulo 3, in vitro assays for Mouse Lymphocite Function 3.1-3.19; capítulo 7, Immunologic studies in Humans); Herrmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128:1968-1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai et al., I. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988; Bowman et al., J. Virology 61:1992-1998; Bertagnolli et al., Cellular Immunology 133:327-341, 1991; Brown et al., J. Immunol. 153:3079-3092, 1994.
Los ensayos para respuestas de inmunoglobulina dependiente de células T e intercambio de isotipo (que identificarán, entre otros, proteínas que modulan la respuesta de anticuerpo dependiente de células T y que afectan los perfiles Th1/Th2) incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Maliszewski, J. Immunol. 144:3028-3033, 1990; y Assays for B cell function: in vitro antibody production, Mond, J. J. y Brunswick, M. en Current Protocols in Immunology. J. E. Coligan et al., eds. vol 1 pp. 3.8.1-3.8.16, John Wiley and Sons, Toronto. 1994.
Los ensayos de reacción mixta de linfocito (MLR) (que identificarán, entre otras, proteínas que generan predominantemente respuestas a Th1 y CTL) incluyen, sin limitación, aquellas descritas en: Current Protocols en Immunology, ed. por J. E. Coligan et al., Pub. Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (capítulo 3, In vitro assays for Mouse Lymphocite Function 3.1-3.19; capítulo 7, Immunologic studies en Humans); Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988; Bertagnolli et al., J. Immunol.
149:3778-3783, 1992.
Los ensayos dendríticos dependientes de célula (que identificarán, entre otras, proteínas expresadas por células dendríticas que activan células T ingenuas) incluyen, sin limitación, aquellas descritas en: Guery et al., J. Immunol.
134:536-544, 1995; Inaba et al., J. Experimental Medicin 173:549-559, 1991; Macatonia et al., J. Immunol. 154:5071-5079, 1995; Porgador et al., J. Experimental Medicin 182:255-260, 1995; Nair et al., J. Virology 67:4062-4069, 1993; Huang et al., Science 264:961-965, 1994; Macatonia et al., J. Experimental Medicin 169:1255-1264, 1989; Bhardwaj et al., J. Clinical Investigation 94:797-807, 1994; y Inaba et al., J. Experimental Medicin 172:631-640, 1990.
Los ensayos para supervivencia/apoptosis de linfocitos (que identificarán, entre otras, proteínas que previenen la apoptosis después de inducción de superantígeno y proteínas que regulan la homeostasis de linfocitos) incluyen, sin limitación, aquellas descritas en: Darzynkiewicz et al., Citometry 13:795-808, 1992; Gorczyca et al., Leukemia 7:659-670, 1993; Gorczyca et al., Cancer Research 53:1945-1951, 1993; Itoh et al., Cell 66:233-243, 1991; Zacharchuk, J. Immunol. 145:4037-4045, 1990; Zamai et al., Citometry 14:891-897, 1993; Gorczyca et al., Int. J. Oncol. 1:639-648, 1992.
Los ensayos para proteínas que influyen en los pasos previos de compromiso y desarrollo de célula T incluyen, sin limitación aquellos descritos en: Antica et al., Blood 84:111-117, 1994; Fina et al., Cellular Immunology 155:111-122, 1994; Galy et al., Blood 85:2770-2778, 1995; Toki et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 88:7548-7551, 1991.
Como se usa en esta memoria “tratamiento” indica la reducción, alivio o eliminación de uno o más síntomas de la condición que está siendo tratada, respecto a los síntomas previos al tratamiento. Por ejemplo, síntomas que pueden ser afectados incluyen eosinofilia, reducción en la secreción de citoquinas particulares, una respuesta inmune basada en Th2, respuesta alérgica y la presencia de autoanticuerpos.
Como se usa en esta memoria “prevención” indica el retardo o prevención del inicio de una condición o reducción de su severidad, como se evalúa por la aparición o extensión de uno o más síntomas de dicha condición.
En un aspecto adicional, la invención suministra una composición farmacéutica que comprende o que consiste en una molécula de péptido o ácido nucleico de la presente invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser entregadas usando un sistema de entrega de fármaco inyectable de liberación sostenida. Estos son diseñados específicamente para reducir la frecuencia de las inyecciones. Un ejemplo de tal sistema es Nutropin Depot, el cual encapsula la hormona recombinante de crecimiento humano (rhGH) en microesferas biodegradables que, una vez inyectadas, liberan rhGH lentamente sobre un periodo sostenido. Preferiblemente, la entrega es ejecutada por vía intramuscular (i.m.) y/o subcutánea (s.c.) y/o intravenosa (i.v.).
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser administradas mediante un dispositivo implantado quirúrgicamente, que libera el fármaco directamente en el sitio requerido. Por ejemplo, Vitrasert libera ganciclovir directamente dentro del ojo para tratar retinitis CMV. La aplicación directa de este agente tóxico en el sitio de la enfermedad, logra terapia efectiva sin los efectos laterales sistémicos significativos del fármaco.
Los sistemas de terapia de electroevaporación (EPT) pueden ser empleados también para la administración de los agentes, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención. Un dispositivo que entrega un campo eléctrico pulsante a las células aumenta la permeabilidad de las membranas celulares, frente al fármaco, dando como resultado una mejora significativa de la entrega intracelular del fármaco.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser entregadas también mediante electroincorporación (EI). La EI ocurre cuando pequeñas partículas de hasta 30 micrones de diámetro sobre la superficie de la piel, experimentan pulsos eléctricos o similares a aquellos usados en la electroevaporación. En la EI, estas partículas son conducidas a través del stratum corneum y dentro de las capas más profundas en la piel. Las partículas pueden ser cargadas o recubiertas con fármacos o genes o simplemente pueden actuar como “balas” que generan poros en la piel, a través de los cuales pueden entrar los fármacos.
Un método alternativo para la entrega de las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención es el sistema inyectable ReGel que es termosensible. Por debajo de la temperatura corporal, ReGel es un líquido inyectable, mientras a temperatura ambiente forma inmediatamente un reservorio de gel que se erosiona lentamente y se disuelve dentro de polímeros biodegradables conocidos, seguros. La sustancia activa es entregada a lo largo del tiempo, a medida que el biopolímero se disuelve.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser entregadas también oralmente. El proceso puede emplear un proceso natural para la ingesta oral de vitamina B12 y/o vitamina D en el cuerpo para coentrega de proteínas y péptidos. Montando en el sistema de ingesta de vitamina B12 y/o vitamina D, los ácidos nucleicos, moléculas y formulaciones farmacéuticas de la invención pueden moverse a través de la pared intestinal. Se sintetizan complejos entre análogos de vitamina B12 y/o análogos de vitamina D y el fármaco, que retienen tanto la afinidad significativa por el factor intrínseco (IF) en la porción de vitamina B12/porción de vitamina D del complejo como la bioactividad significativa de la sustancia activa del complejo.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser introducidos en las células mediante “péptidos troyanos”. Estos son una clase de polipéptidos denominados penetratinas que tienen propiedades de translocación y son capaces de llevar compuestos hidrofílicos a través de la membrana plasmática. este sistema permite la focalización directa de oligopéptidos al citoplasma y núcleo, y puede ser no específico del tipo de célula y altamente eficiente. Véase Derossi et al. (1998), Trends Cell Biol 8, 84-87.
Preferiblemente, el medicamento y/o composición farmacéutica de la presente invención es una unidad de dosificación que contiene una dosificación diaria o unitaria, subdosificación diaria o una fracción apropiada de ella, del ingrediente activo.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención serán administradas normalmente en forma oral o mediante cualquier ruta parenteral, en la forma de una composición farmacéutica que comprende el ingrediente activo, opcionalmente en la forma de un ácido o base orgánico o inorgánico, sal de adición, no tóxico, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del desorden y el paciente que va a ser tratado, así como la ruta administración, las composiciones pueden ser administradas en dosificaciones variables. En terapia humana, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administrados solos, pero generalmente serán administrados en mezcla con un excipiente farmacéutico, diluyente o vehículo adecuado, seleccionado de acuerdo a la ruta pretendida de administración y práctica farmacéutica estándar.
Por ejemplo, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas en forma oral, bucal o sublingual en la forma de comprimidos, cápsulas, óvulos, elíxires, soluciones o suspensiones, que pueden contener agentes saborizantes o colorantes, para aplicaciones de liberación inmediata, retrasada o controlada. Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administrados también mediante inyección vía intracavernosa.
Tales comprimidos pueden contener excipientes tales como celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dibásico de calcio y glicina, agentes de desintegración tales como almidón (preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), glicolato de almidón de sodio, croscarmelosa de sodio y ciertos silicatos complejos, y aglutinantes y granulación tales como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxi-propilcelulosa (HPC), sacarosa, gelatina y acacia. Adicionalmente, pueden incluirse agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato de glicerilo y talco.
Pueden emplearse también composiciones sólidas de un tipo similar, como agentes de relleno en cápsulas de gelatina. Los excipientes preferidos a este respecto incluyen lactosa, almidón, celulosa, azúcar de leche o polietilenglicoles de alto peso molecular. Para suspensiones acuosas y/o elíxires, los agentes de la invención pueden ser combinados con diferentes agentes edulcorantes o saborizantes, materia colorante o pigmentos, con agentes emulsificantes y/o agentes de suspensión y con diluyentes tales como agua, etanol, propilen glicol y glicerina, y combinaciones de ellos.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administrados también por vía parenteral, por ejemplo, de modo intravenoso, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intraesternal, intracraneal, intramuscular o subcutánea, o pueden ser administrados mediante técnicas de infusión. Son mejor usadas en la forma de una solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo, suficientes sales o glucosa para hacer la solución isotónica con la sangre. Las soluciones acuosas deberían estar amortiguadas de manera adecuada (preferiblemente a un pH de 3 a 9), si es necesario. La preparación de formulaciones parenterales adecuadas bajo condiciones estériles es lograda fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándar bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.
Los medicamentos y composiciones farmacéuticas adecuados para administración parenteral incluyen soluciones para inyección acuosas y no acuosas, estériles, que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos, que hacen a la formulación isotónica respecto a la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Los medicamentos y composiciones pueden ser presentados en contenedores de dosificación unitaria o de varias dosificaciones, por ejemplo ampollas y viales cerrados, y pueden ser almacenados en una condición seca por congelación (liofilizados) requiriendo solamente la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes del uso. Las soluciones y suspensiones de inyección extemporánea pueden ser preparadas a partir de polvos gránulos y comprimidos estériles del tipo descrito previamente.
Para administración oral y parenteral para pacientes humanos, el nivel diario de dosificación de las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención será usualmente de 0.1 a 100 mg por adulto por día, administrado en dosificaciones individuales o divididas.
Así, por ejemplo, los comprimidos o cápsulas de las moléculas de la invención pueden contener de 0.1 mg a 100 mg de agente activo para administración individualmente o dos o más a la vez, según sea apropiado. En cualquier evento, el médico determinará la dosificación real que será la más adecuada para cualquier paciente individual y variará con la edad, peso y respuesta del paciente particular. Las dosificaciones anteriores son ejemplares del caso promedio. Desde luego, puede haber casos individuales donde ameritan intervalos de dosificación mayor o menor y ellos están dentro del alcance de esta invención.
Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas también por vía intranasal o mediante inhalación y son entregadas de manera conveniente en la forma de un inhalador de polvo seco o una presentación de atomizador en aerosol desde un contenedor a presión, bomba atomizador o nebulizador con el uso de un agente propelente adecuado, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, un hidrofluoroalcano tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134A3 o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano (HFA 227EA3), dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol a presión, la unidad de dosificación puede ser determinada suministrando una válvula para entregar una cantidad medida. El contenedor a presión, bomba, atomizador o nebulizador puede contener una solución o suspensión del agente activo, por ejemplo usando una mezcla de etanol y el agente propelente como el solvente, que puede contener adicionalmente un lubricante, por ejemplo trioleato de sorbitano. Las cápsulas y cartuchos (hechos, por ejemplo, de gelatina) para uso en un inhalador o para insuflar, pueden ser formulados para contener una mezcla en polvo de un agente de la invención y una base en polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.
Las formulaciones en aerosol o polvo seco son arregladas preferiblemente de modo que cada dosificación o “puff” contiene por lo menos 0.1 mg de una molécula de la invención para entregar al paciente. Se notará que la dosificación total diaria con un aerosol variará de paciente a paciente, y puede ser administrada en una dosificación individual o, más usualmente, a través del día en dosificaciones divididas.
De modo alternativo, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas en la forma de un supositorio o pesario, o pueden ser aplicadas de manera tópica en la forma de una loción, solución, crema, gel, ungüento o polvo para espolvorear. Las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas también por vía transdérmica, por ejemplo, mediante el uso de un parche en la piel. Pueden ser administradas también por la ruta ocular, particularmente para el tratamiento de enfermedades del ojo.
Para uso oftálmico, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser formuladas como suspensiones micronizadas en soluciones salinas isotónicas, con pH ajustado, estériles, o, preferiblemente, como soluciones en soluciones salinas isotónicas, con pH ajustado, estériles, opcionalmente en combinación con un agente conservante tal como cloruro de bencilalconio. De modo alternativo, pueden ser formuladas en ungüento tal como un petrolato.
Para aplicación tópica en la piel, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser formuladas como un ungüento adecuado que contiene el agente activo suspendido o disuelto en, por ejemplo, una mezcla con uno o más de los siguientes: aceite mineral, petrolato líquido, petrolato blanco, propilen glicol, agentes de polioxietilen polioxipropileno, cera emulsificante y agua. De modo alternativo, pueden ser formuladas como una loción o crema adecuadas, suspendidas o sueltas en, por ejemplo, una mezcla de uno o más de los siguientes: aceite mineral, monoestearato de sorbitano, un polietilen glicol, parafina líquida, Polysorbate 60, cera de cetil ésteres, cetearil alcohol, 2-octildodecanol, bencil alcohol y agua.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado.
Generalmente, en humanos, la administración oral o parenteral de las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de los agentes de la invención es la ruta preferida, siendo la más conveniente.
Para uso veterinario, las moléculas, medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención son administradas como una formulación aceptable adecuada, de acuerdo con la práctica veterinaria normal, y el cirujano veterinario determinará el régimen de dosificación y ruta de administración que serán los más apropiados para un animal particular.
De manera conveniente, la formulación es una formulación farmacéutica. De manera ventajosa, la formulación es una formulación veterinaria.
De manera ventajosa, en el uso de acuerdo con la invención, el nivel de dosificación diaria será de 0.0001 a 100,000 mg, administrada en dosificaciones individuales o divididas; preferiblemente, el nivel de dosificación diaria es 0.0001 a 1000 mg.
Las formulaciones farmacéuticas preferidas incluyen aquellas en las cuales el ingrediente activo está presente en por lo menos 1% (tal como por lo menos 10%, preferiblemente en por lo menos 30% y más preferiblemente en por lo menos 50%) en peso. Esto es, la relación de ingrediente activo a los otros componentes (es decir la adición de adyuvante, diluyente y vehículo) de la composición farmacéutica es por lo menos 1:99 (por ejemplo por lo menos 10:90, preferiblemente por lo menos 30:70 y más preferiblemente por lo menos 50:50) en peso.
Típicamente, el tiempo entre administración de dosificaciones al paciente está entre seis y doce horas; en una realización preferida, el tiempo entre administración de dosificaciones al paciente está entre nueve y doce horas después de la dosificación previa; más preferiblemente, el tiempo entre administración de dosificaciones al paciente está entre doce horas y doce días; incluso más preferiblemente, el tiempo entre administración de dosificaciones al paciente está entre doce días y seis meses.
En una realización preferida, la invención suministra un uso en el que el medicamento de la invención es usado para aliviar el dolor en un paciente humano o animal.
Preferiblemente, la composición farmacéutica o el medicamento de la invención son formulados para permitir la administración mediante por lo menos una ruta seleccionada del grupo que comprende o consiste en: rutas intranasal; oral; parenteral; tópica; oftálmica; supositorio; pesario; o inhalación. Las formulaciones adecuadas para tales rutas de administración son bien conocidas por aquellos en la técnica de la farmacia y medicina, y ejemplos de formulaciones fueron descritos anteriormente y se describen en los ejemplos acompañantes.
En un aspecto adicional, la invención suministra el uso de una molécula de péptido de acuerdo con la invención y/o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la invención, como un adyuvante.
El término “adyuvante” indica cualquier sustancia que, cuando es incorporada dentro o administrada simultáneamente con antígeno, potencia la respuesta inmune.
En un aspecto adicional, la invención suministra un sistema adyuvante que comprende (i) una molécula de péptido de acuerdo con la invención y/o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la invención y (ii) un antígeno. Preferiblemente, el antígeno es seleccionado del grupo que comprende o consiste en: antígeno de ántrax; antígeno de cólera; antígeno de difteria; antígeno de influenza b (Hib); antígeno de hepatitis A; antígeno de hepatitis B; antígeno de influenza; antígeno de encefalitis japonesa; antígeno de sarampión, paperas y rubéola (MMR); antígeno contra el meningococo; antígeno de la tosferina; antígeno del pneumococo; antígeno de la poliomielitis; antígeno de la rabia; antígeno en la rubéola; antígeno de la viruela y/o vaccinia; antígeno del tétano; antígeno de encefalitis transmitida por garrapatas; antígeno de tuberculosis; antígeno tifoide; antígeno de varicela/herpes zoster; antígeno de fiebre amarilla; y antígeno de vaccina veterinaria.
Descripción de las figuras
Figura 1
La secuencia de nucleótidos y aminoácidos de chaperonina 60.1 de M. tuberculosis.
Figura 2
Péptidos que cubren el dominio ecuatorial de chaperonina 60.1 de M. tuberculosis.
Figura 3
Efecto de fragmentos de péptido de chaperonina 60.1 de M. tuberculosis en un modelo de lipopolisacárido (LPS) de inflamación no alérgica.
Ejemplos
En los ejemplos se usan las siguientes abreviaturas, para referirse a péptidos de la presente invención:
F1 - DGSVVVNKVSELPAGH
F2 - GLNVNTLSYGDLAAD
F3 - SELPAGHGLNVNTLS
Sección experimental
Se sintetizaron y se aislaron los péptidos F1-F3 de acuerdo con los siguientes procedimientos:
F1
El péptido fue sintetizado sobre resina Fmoc-His(trt)-Wang LL (200mg) de Merck Chemicals. Para añadir los residuos remanentes de aminoácido, se usó un equipo para síntesis Protein Technologies Symphony Automated. Todas las reacciones de acoplamiento fueron acoplamientos dobles de 10 minutos con agente de acoplamiento HBTU. El péptido fue escindido en ácido trifluoroacético al 100 % en presencia de una mezcla de captación que contenía 1:1 v/v de triisopropilsilano:agua. El péptido fue purificado sobre una columna LC-ABZ+ (Supelcosil), con tamaño de partícula de 5 micrones, tamaño de poro de 110 Angstrom, 250 mm x 10 mm, de Supelco. El análisis fue ejecutado con los mismos amortiguadores, pero usando una columna C-18, de 3.5 micrones, tamaño de poro de 90 angstrom, 4.6mm X 150 mm, de Agilent. Las condiciones de carrera fueron:
Absorción 216 nm, tasa de flujo 1 mL/ min
t=0, 0% B
t=2, 0% B
t=22, 80% B
% de rendimiento = 31%
F2
El péptido fue sintetizado sobre resina Fmoc-Asp(OtBu)-Wang LL (150mg) de Merck Chemicals. Para añadir los residuos remanentes de aminoácido, se usó un equipo para síntesis Protein Technologies Symphony Automated. Todas las reacciones de acoplamiento fueron acoplamientos dobles de 10 minutos con agente de acoplamiento HBTU. El péptido fue escindido en ácido trifluoroacético al 100 % en presencia de una mezcla de captación que contenía 1:1 v/v de triisopropilsilano:agua. El péptido fue purificado sobre una columna LC-ABZ+ (Supelcosil), con tamaño de partícula de 5 micrones, tamaño de poro de 110 Angstrom, 250 mm x 10 mm, de Supelco. El análisis fue ejecutado con los mismos amortiguadores, pero usando una columna C-18, de 3.5 micrones, tamaño de poro de 90 angstrom, 4.6mm X 150 mm, de Agilent. Las condiciones de carrera fueron:
Absorción 216 nm, tasa de flujo 1 mL/ min
t=0, 0% B
t=2, 0% B
t=22, 80% B
% de rendimiento = 23%
F3
El péptido fue sintetizado sobre resina Fmoc-Ser(tBu)-Wang LL (150mg) de Merck Chemicals. Para añadir los residuos remanentes de aminoácido, se usó un equipo para síntesis Protein Technologies Symphony Automated. Todas las reacciones de acoplamiento fueron acoplamientos dobles de 10 minutos con agente de acoplamiento HBTU. El péptido fue escindido en ácido trifluoroacético al 100 % en presencia de una mezcla de captación que contenía 1:1 v/v de triisopropilsilano:agua. El péptido fue purificado sobre una columna LC-ABZ+ (Supelcosil), con tamaño de partícula de 5 micrones, tamaño de poro de 110 Angstrom, 250 mm x 10 mm, de Supelco. El análisis fue ejecutado con los mismos amortiguadores, pero usando una columna C-18, de 3.5 micrones, tamaño de poro de 90 angstrom, 4.6mm X 150 mm, de Agilent. Las condiciones de carrera fueron:
Absorción 216 nm, tasa de flujo 1 mL/ min
t=0, 0% B
t=2, 0% B
t=22, 80% B
% de rendimiento = 34%
Ejemplo 1
Efecto de fragmentos F1, F2 y F3 de péptido en un modelo de lipopolisacárido (LPS) de una inflamación no alérgica Propósito
El propósito de estos experimentos fue determinar si los péptidos F1, F2 y F3 son capaces de inhibir el reclutamiento de neutrófilos en un sistema in vivo.
Método
Se trataron previamente ratones hembra Balb/c (Charles River, Reino Unido) por vía intranasal con F1, F2 o F3 (5pg o 0.5pg). Después de 15 minutos, se administró por vía intranasal LPS (25 |jg). Se determinó el influjo de neutrófilos en los pulmones, mediante lavado broncoalveolar 4 horas más tarde.
Resultados
En la figura 3 se resumen los resultados obtenidos. LPS indujo un incremento en los neutrófilos dependiente de la dosificación, comparado con el control. Se observó un descenso significativo en la migración de neutrófilos hacia el pulmón, para todos los péptidos F1 - F3, a ambas concentraciones de dosificación.
Conclusiones
Los péptidos de la presente invención (F1 - F3) han mostrado inhibir la migración celular in vivo de neutrófilos. La actividad biológica observada indica un efecto antiinflamatorio directo en inflamación no alérgica.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Una molécula de péptido aislado o recombinante que consiste en una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo:
(i) DGSVVVNKVSELPAGH;
(ii) GLNVNTLSYGDLAAD; y
(iii) SELPAGHGLNVNTLS.
2. Una molécula de péptido aislado o recombinante de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en una secuencia de aminoácido DGSVVVNKVSELPAGH.
3. Una molécula de péptido aislado o recombinante de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en una secuencia de aminoácido GLNVNTLSYGDLAAD.
4. Una molécula de péptido aislado o recombinante de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en una secuencia de aminoácido SELPAGHGLNVNTLS.
5. Una molécula de ácido nucleico aislado o recombinante que consiste en una secuencia de polinucleótido que codifica un péptido que consiste en una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo:
1. DGSVVVNKVSELPAGH;
2. GLNVNTLSYGDLAAD; and
3. SELPAGHGLNVNTLS.
6. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina.
7. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el uso en medicina es la modulación de diapedesis en un sujeto humano.
8. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina de acuerdo con la reivindicación 6 en el que el uso en medicina es la prevención y/o tratamiento de una condición, enfermedad y/o desorden en un sujeto humano que está asociado con un incremento en el flujo de células sanguíneas blancas a través del endotelio.
9. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el uso en medicina es el tratamiento y/o prevención de condiciones inflamatorias agudas y/o crónicas, preferiblemente el tratamiento y/o prevención de enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
10. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina de acuerdo con la reivindicación 9 en el que la condición inflamatoria está asociada con eosinofilia y/o neutrofilia.
11. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina, de acuerdo con la reivindicación 9 en el que la condición inflamatoria es seleccionada del grupo que consiste en inflamación asociada con infección (tal como choque séptico, sepsis o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS)), daño por reperfusión de isquemia, letalidad por endotoxina, artritis, rechazo hiperagudo mediado por complemento, nefritis, daño de pulmón inducido por citoquina o quimioquina, asma no alérgica, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn.
12. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina, de acuerdo con la reivindicación 6 en el que el uso en medicina es el tratamiento y/o prevención de desórdenes autoinmunes, preferiblemente en el que el desorden autoinmune es seleccionado del grupo que consiste en anemia hemolítica, trombocitopenia, anemia perniciosa, enfermedad de Addison, diabetes autoinmune, diabetes mellitus dependiente de insulina, miastenia gravis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, aterosclerosis, encefalitis autoinmune, enfermedad del tejido conectivo, esclerosis múltiple, inflamación pulmonar autoinmune, síndrome de Guillain-Barre, tiroiditis autoinmune, enfermedad de injerto-huésped y enfermedad inflamatoria autoinmune del ojo.
13. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en medicina de acuerdo con la reivindicación 6 en el que el uso en medicina es el tratamiento y/o prevención de desórdenes alérgicos, preferiblemente en el que el desorden alérgico es seleccionado del grupo que consiste en eczema, dermatitis, rinitis alérgica (fiebre del heno), enfermedades alérgicas de las vías respiratorias, síndrome hipereosinofílico, dermatitis de contacto; enfermedades respiratorias caracterizadas por inflamación eosinofílica de vías respiratorias e hiperrespuesta de las vías respiratorias, tales como asma, incluyendo asma alérgica y asma intrínseca, aspergillosis broncopulmonar alérgica, pneumonía eosinofílica, bronquiectasia por bronquitis alérgica, asma ocupacional, síndrome de enfermedad reactiva de vías respiratorias, enfermedad intersticial del pulmón, síndrome hipereosinofílico, enfermedad parasítica del pulmón; anafilaxis, enfermedad del suero, reacciones a los fármacos, alergias alimentarias, alergias al veneno de los insectos, mastocitosis, pneumonitis hipersensible, urticaria, angioedema, eczema, dermatitis atópica, dermatitis de contacto alérgico, eritema multiforme, síndrome de Stevens-Johnson, conjuntivitis alérgica, queratoconjuntivitis atópica, queratoconjuntivitis venérea y conjuntivitis papilar gigante.
14. Una composición farmacéutica que comprende una molécula de péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
15. Un sistema adyuvante que comprende (i) una molécula de péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 y (ii) un antígeno.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201700557D0 (en) * 2017-01-12 2017-03-01 Peptinnovate Ltd Novel peptides
GB201700555D0 (en) 2017-01-12 2017-03-01 Peptinnovate Ltd Method for the treatment of a relapsing-remitting condition
CN111944060B (zh) * 2020-07-29 2022-02-25 中国农业大学 一种兼具抗菌、抗炎、解毒活性的多功能杂合肽及其应用
WO2023223015A1 (en) 2022-05-16 2023-11-23 Revolo Biotherapeutics Limited Methods and compositions for preventing or treating food allergies

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6887481B1 (en) * 1998-12-16 2005-05-03 Agency For Science, Technology And Research Bacterial-derived molecules and therapeutic and diagnostic uses therefor
GB0028122D0 (en) 2000-11-17 2001-01-03 St Georges Entpr Ltd Method
GB0226105D0 (en) * 2002-11-08 2002-12-18 St Georges S Entpr Ltd Pain relief agents
WO2007096388A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Polypeptides, pharmaceutical compositions and methods for the prevention and the therapeutic treatment of inflammatory disorders
GB0803369D0 (en) 2008-02-25 2008-04-02 Helperby Therapeutics Ltd Biological materials and uses thereof
CA2728909A1 (en) * 2008-07-08 2010-01-14 Abbott Laboratories Prostaglandin e2 binding proteins and uses thereof

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