ES2713092T3 - Uso de antioxidantes novedosos para piensos y alimentos como conservantes basados en enzimas antioxidantes extraídos de la sangre de animales - Google Patents
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Abstract
Uso de un antioxidante para conservar un producto alimentario o de pienso, en el que el antioxidante se extrae de sangre de un animal, en el que el antioxidante procede de eritrocitos (hematíes) de la sangre del animal tras la retirada del plasma de la sangre del animal, en el que el antioxidante comprende superóxido dismutasa (SOD), catalasa, glutatión, glutatión reductasa y glutatión peroxidasa.
Description
DESCRIPCION
Uso de antioxidantes novedosos para piensos y alimentos como conservantes basados en enzimas antioxidantes extrafdos de la sangre de animales
Antecedentes de la invencion
Los antioxidantes son componentes vitales de la industria alimentaria, que tiene una influencia principal sobre la salud y el bienestar globales. Los antioxidantes evitan la rancidez provocada por la oxidacion de lfpidos. Otras industrias tambien utilizan antioxidantes, incluyendo, pero sin limitarse a, las que producen colorantes, pinturas y otros materiales basados en aceite. La mayona de los antioxidantes usados actualmente son sustancias qmmicas sinteticas, y existe una preocupacion global entre las autoridades normativas y los clientes con respecto a la seguridad de estos compuestos. Existe un cambio principal hasta antioxidantes de procedencia natural en respuesta a estas y otras cuestiones de salud relativas a los antioxidantes sinteticos. No obstante, los antioxidantes naturales actualmente disponibles en el mercado son mucho mas caros y, con frecuencia, no tan eficaces como sus contrapartes sinteticas. De este modo, existe demanda de antioxidantes naturales capaces y no costosos.
Muchos productos alimentarios incluyendo alimentos para humanos, alimentos para mascotas y piensos para animales, contienen grasas y aceites procedentes de materiales clarificados. La clarificacion es el procedimiento de conversion de los tejidos animales incomestibles tales como tendones, huesos y organos en materiales estables con valor anadido. La mayona del material procesado procede de mataderos pero tambien puede proceder de restaurantes, carnicenas o tiendas de ultramarinos. Las fuentes mas comunes de material clarificado son cerdo, vacuno, pollo, pavo, oveja y pescado. La clarificacion incluye un procedimiento de separacion del material de partida en dos corrientes por separado de materiales clarificados - (1) materiales de alto contenido en grasa y (2) materiales de bajo contenido en grasa que contienen hueso, ceniza y protemas. De este modo, se pueden obtener dos rendimientos por separado tras completar el procedimiento de clarificacion - un producto de alto contenido en grasa y un producto de bajo contenido en grasa, tal como un alimento proteico. El material clarificado se puede usar en mas de 3.000 aplicaciones industriales. Por ejemplo, el componente de alto contenido en grasa se puede comercializar como manteca o sebo o se puede usar como fuente de biocombustible. Adicionalmente, el componente de alto contenido en grasa se puede usar en jabones, lubricantes, detergentes, productos cosmeticos, otros productos de higiene personal o piensos mejorados para animales. Al mismo tiempo, el componente de bajo contenido en grasa, tal como alimento proteico, tambien se puede usar como pienso para animales. Existen mas de 250 instalaciones de clarificacion en Norte America que producen mas de 20.000 millones de libras (9,1 millones de toneladas) de material clarificado al ano. Aproximadamente un 50 % de la cantidad total del material clarificado constituye grasas y aceites.
Las grasas y aceites clarificados son componentes importantes en los piensos para animales. No obstante, las grasas y aceites clarificados se pueden degradar por medio de procesos de auto-oxidacion de lfpidos que pueden disminuir el valor nutritivo de los piensos para animales preparados con grasas y aceites clarificados. Ademas, la oxidacion puede afectar al aroma, color, olor y textura de los piensos, lo cual puede afectar a la palatabilidad. Por ejemplo, determinados acidos grasos tales como acido linoleico y acido linolenico contienen enlaces carbonocarbono insaturados que pueden ser inestables y muy susceptibles a la auto-oxidacion de lfpidos.
<Xueming Xu et al., "Antioxidant activity of hydrolysates derived from porcine plasma", Journal of the Science of Food and Agriculture, Vol. 89, No. 11, 30 Agosto 2007, p. 1897-1903 describen que la recuperacion de la sangre porcina y la conversion en productos de alto valor resulta deseable desde un punto de vista ambiental y de rentabilidad. En su estudio, se investigaron las propiedades antioxidantes de los hidrolizados de plasma porcino PPE y PPA preparados con pepsina y papama.
En Liu Q. et al., "Antioxidant activity and functional properties of porcine plasma protein hydrolysate as influenced by the degree of hydrolysis", Food chemistry, Elsevier Ltd., NL, Vol. 118, No. 2, 15 Enero 2010, paginas 403-410, se investigaron la actividad antioxidante y las propiedades funcionales de los hidrolizados de protema de plasma sangumeo porcino preparados con alcalasa a un 6,2 %, 12,7 % y un 17,6 % de grado de hidrolisis. Encontraron que el peptido con la actividad antioxidante mas intensa tuvo la secuencia de aminoacidos His-Asn-Gly-Asn. Ademas, estos resultados indican que los hidrolizados de protema de plasma sangumeo porcino se podfan usar como antioxidante, pero que estos hidrolizados fueron de utilidad limitada como agentes emulsionantes y espumantes. Jin-Zhi Wang et al., "Antioxidant activity of hydrolysates and peptide fractions of porcine plasma albumin and globulin", Journal of Food Biochemistry, Vol. 32, 12 Mayo 2007, paginas 693-707 investigaron las propiedades antioxidantes de hidrolizados de albumina de plasma porcino y globulina obtenidos por medio de hidrolisis con alcalasa. Se separaron los peptidos obtenidos en cinco grupos de acuerdo con su peso molecular por medio de ultrafiltracion. Encontraron que las fracciones de peptido con menor peso molecular (< 3 kDa) tuvieron una potencia de reduccion mayor en comparacion con las fracciones de peptido que teman un peso molecular mayor.> Aunque se anadieron antioxidantes como conservantes alimentarios para evitar la degradacion de las grasas y lfpidos presentes en los componentes del pienso para animales procedentes de materiales clarificados, muchos de estos antioxidantes, tales como etoxiquina, tocoferoles mixtos (vitamina E), vitamina C e hidroxitolueno
butilado/hidroxianisol butilado, son costosos y se deben obtener a partir de una fuente externa a la industria de la clarificacion. Ademas, la FDA y otras agencias normativas, as ^ como los consumidores, han expresado su preocupacion sobre la seguridad de los antioxidantes sinteticos tales como etoxiquina. Como tal, la industria de clarificacion busca disoluciones naturales para ampliar el penodo de caducidad de sus productos de manera permitida al tiempo que se mantiene la frescura y calidad del producto. De este modo, lo que se demanda en la tecnica es un potente antioxidante que se pueda usar como conservante alimentario procedente de la industria de clarificacion, tal como subproductos de origen animal, de manera rentable y se pueda obtener de forma sencilla y eficaz. Mas ampliamente, resulta necesario y existe demanda por parte del cliente de un antioxidante natural potente y no costoso que se pueda usar en diversos tipos de alimentos, incluyendo alimentos para humanos, alimentos para mascotas y piensos para animales. Tambien se demanda un procedimiento de extraccion de antioxidantes a partir de subproductos de origen animal sin el uso de disolventes organicos, que sea rentable y supere los problemas de seguridad.
Sumario de la invencion
En terminos generales, la presente divulgacion va destinada al uso de una forma antioxidante de una fuente natural como conservante para alimentos o piensos.
La presente divulgacion va destinada al uso de un antioxidante para conservacion de un producto alimentario de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el antioxidante se extrae a partir de la sangre de un animal. El antioxidante comprende superoxido dismutasa (SOD), catalasa, glutation, glutation reductasa y glutation peroxidasa. Ademas, el antioxidante puede estar generalmente libre de hemoglobina. Se debena comprender que el antioxidante no tiene que purificarse por completo y puede contener otros componentes de la sangre y otros compuestos anadidos durante el procesado de la sangre para lograr una purificacion parcial, tal como compuestos anadidos para retirar la hemoglobina o para aumentar la concentracion de antioxidante.
La extraccion del antioxidante de la sangre del animal puede incluir la obtencion de una muestra de sangre del animal, en la que la sangre del animal contiene eritrocitos; someter a lisis los eritrocitos para formar una disolucion que contiene el antioxidante; y tratar la disolucion para retirar la hemoglobina de la disolucion, tal como por medio de tratamiento de la disolucion con al menos un compuesto o retirada de la hemoglobina por un medio ffsico, tal como ultrafiltracion o electroforesis. En algunas realizaciones, el compuesto puede ser un compuesto inorganico. El compuesto inorganico puede ser una sal metalica, tal como, por ejemplo una sal de cinc, u otro compuesto que contiene cinc. El compuesto inorganico se puede anadir a una concentracion que vana de un 0,1 % en peso/volumen hasta aproximadamente un 20 % en peso/volumen del volumen de la disolucion. En algunas realizaciones, el antioxidante puede estar en forma de una disolucion aplicada a una concentracion que vana de aproximadamente 0,1 microlitros por gramo de producto alimentario a aproximadamente 100 microlitros por gramo de producto alimentario. El antioxidante puede estar en estado purificado, y el producto alimentario puede ser un alimento para mascotas, pienso para animales o un alimento para consumo humano.
Breve Descripcion de las Figuras
Una divulgacion completa y util de la presente materia objetivo, incluyendo el modo mejor de la misma para el experto comun en la tecnica, se explica mas particularmente en el resto de la memoria descriptiva, incluyendo la referencia a las figuras adjuntas en las que:
La Figura 1 ilustra un procedimiento de extraccion de un antioxidante (es decir, superoxido dismutasa no purificada (SOD)) procedente de un subproducto animal (es decir, sangre) como se divulga en la presente memoria.
La Figura 2 muestra la actividad SOD de sangre de pollo no purificada de diversas muestras tras 20 semanas a 25 °C, en comparacion con un control a 4 °C.
La Figura 3 muestra la actividad SOD de sangre de pollo no purificada de diversas muestras tras 40 semanas a 25 °C, en comparacion con un control a 4 °C.
La Figura 4 es un grafico que compara la actividad antioxidante de SOD no purificado extrafdo de subproductos de origen animal en comparacion con la de los antioxidantes conservantes alimentarios usados actualmente por medio de un ensayo colorimetrico de sustancias reactivas de acido tiobarbiturico (TBARS).
La Figura 5 ilustra otro procedimiento de extraccion de antioxidantes naturales no purificados ("protema bruta" o CP) procedente de una fuente de animal (es decir, sangre).
La Figura 6 es un grafico que compara la capacidad de los antioxidantes naturales en la protema bruta de la presente divulgacion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario actualmente usados para evitar la oxidacion en hamburguesas de pollo triturado. Se ha usado el ensayo de oxidacion ferrosa - naranja de xilenol (FOS) para evaluar el grado de oxidacion de las hamburguesas de pollo. La "protema bruta" o CP en este caso y a continuacion hace referencia a una mezcla no purificada de antioxidantes naturales, presente junto con otras biomoleculas y sustancias, obtenida por medio del procedimiento general ilustrado en la Figura 5.
La Figura 7 es un grafico que compara la capacidad de los antioxidantes naturales en la "protema bruta" de la presente divulgacion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario actualmente usados para evitar la oxidacion de grasa de pollo usando un ensayo FOX.
La Figura 8 es un grafico que compara la capacidad de los antioxidantes naturales en la protema bruta de la
presente divulgacion anadidos en diferente concentracion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario usado actualmente para evitar la oxidacion en hamburguesas de pollo triturado usando ensayo FOX. Se encontro que un valor tan bajo como 17 microgramos de CP por gramo de alimento, o aproximadamente 17 litros de CP por tonelada de alimento era tan eficaz como 1000 ppm de PET-OXTM (basado en el contenido de grasa), una concentracion actualmente empleada en la industria.
La Figura 9 es un grafico que muestra la capacidad de los antioxidantes naturales en la "protema bruta" de la presente divulgacion para seguir siendo eficaz tras el envejecimiento acelerado a 50 °C durante 10 dfas en un modelo de carne de pollo triturada. Esto corresponde a aproximadamente 3 meses de penodo de caducidad a temperatura ambiente.
La Figura 10 es un grafico que muestra la capacidad de los antioxidantes naturales en la "protema bruta" de la presente divulgacion para seguir siendo eficaz tras el envejecimiento acelerado a 50 °C en un modelo de grasa de pollo.
La Figura 11 es un grafico que compara la actividad antioxidante de una disolucion de protema bruta, concentrado SOD, 1000 U/ml
catalasa, PET-OXTM y agua (sin actividad antioxidante) cuando se aplica a hamburguesas de ternera usando un ensayo fluorometrico TBARS.
La Figura 12 es un grafico que compara la actividad antioxidante de una disolucion de protema bruta, concentrado de SOD obtenido usando el procedimiento mostrado en la Figura 1, 1000 U/ml SOD, 1000 U/ml de catalasa, PET-OXTM y agua (sin antioxidante) cuando se aplica a grasa de pollo usando un ensayo de FOX. Descripcion detallada de realizaciones preferidas
En general, se divulga en la presente memoria un antioxidante que se usa como conservante alimentario. En particular, los antioxidantes procedente de eritrocitos (hematfes) de la sangre, como RBC son vehmulos naturales de oxfgeno y estan equipados con un sistema antioxidante altamente eficaz que incluye un numero de enzimas y compuestos antioxidantes. Estos antioxidantes incluyen glutation, enzimas superoxido dismutasa, catalasa, glutation peroxidasa y glutation reductasa y otras biomoleculas y compuestos, algunos de los cuales pueden resultar aun desconocidos. Estos antioxidantes se pueden aislar a partir de la sangre en forma purificada pero en muchas circunstancias se pueden usar en forma parcialmente purificada, en una mezcla con otros componentes de la sangre. En muchos casos, el uso de mezclas de antioxidante parcialmente purificada puede resultar beneficioso debido a los costes de produccion mas bajos. Una vez que se ha producido la extraccion de los antioxidantes, tal como en forma de "protema bruta" parcialmente purificada, los antioxidantes se anaden posteriormente al pienso para animales, pienso para mascotas, alimento para consumo humano, aceites o cualquier otro producto alimentario en el que la oxidacion constituye un problema.
Uno de los antioxidantes objeto de extraccion es la superoxido dismutasa (SOD) que puede proceder de la industria de clarificacion, tal como procedente de subproductos de origen animal. Los antioxidantes no purificados se extraen de sangre de animal y se usan como conservante alimentario. SOD es una enzima que funciona como agente de neutralizacion de radicales libres. A nivel celular, SOD compite con las reacciones de oxidacion perjudiciales, protegiendo a las celulas de este modo frente a la toxicidad por oxidacion. SOD puede catalizar la dismutacion de superoxido en agua oxigenada y oxfgeno menos toxicos. La dismutacion catalizada por SOD de superoxido se puede escribir con las siguientes semi-reacciones:
M(n+1)-SOD O2" ^ Mn+-SOD O2
Mn+-SOD O2" 2H+ ^ M(n+1)+-SOD H2O2
en las que M = Cu (n=1); Mn (n=2); Fe (n=2); Ni (n=2). En la presente reaccion, el estado de oxidacion del cation metalico oscila entre n y n+1. La reaccion de oxidacion tiene lugar de forma rapida en la celula para proteger las dianas celulares sensibles y cnticas, tales como lfpidos en la membrana celular.
De manera beneficiosa, SOD se puede extraer de la sangre del animal a coste relativamente bajo. SOD se extrae y se almacena en forma de un concentrado de enzima no purificado de manera que mantiene al menos un 50 % o mas de su actividad antioxidante inicial. Ademas, dicho concentrado de enzima no purificado tambien exhibe actividad catalasa - otra enzima eficaz frente a agua oxigenada, que puede actuar sinergicamente con SOD, y reducir el peroxido, formado a partir del superoxido. Una revision general del procedimiento de extraccion no de acuerdo con la invencion se muestra en el diagrama de flujo de la Figura 1. En el procedimiento 100 de la Figura 1, en primer lugar, el tejido animal bruto se puede obtener a partir de cualquier fuente, tal como una planta de pollo/matadero. El tejido animal bruto es sangre, ya que la sangre se puede procesar de forma sencilla de acuerdo con un procedimiento de extraccion. Se puede utilizar cualquier fuente de sangre incluyendo, sin limitacion, vacuno, porcino, aves, oveja, pollo o cualquier otra fuente de origen animal.
La fuente de sangre se puede procesar para concentrar aquellos componentes de la sangre que contienen SOD. Por ejemplo, en aquellas realizaciones en las que se utiliza sangre bruta, se puede procesar esta para obtener un material que tenga una concentracion elevada de hematfes. A modo de ejemplo, la sangre bruta se puede centrifugar, por ejemplo a una tasa de aproximadamente 250 kg (fuerza centnfuga relativa) hasta aproximadamente 750 g, tal como una tasa de aproximadamente 500 g, con el fin de separar la sangre y obtener un producto que
tenga una concentracion elevada de hematfes (RBC) en forma de granulo. El sobrenadante (es decir, plasma y otros factores de coagulacion) se pueden descartar o se pueden usar para otros fines. El granulo que presenta elevado contenido de SOD se puede procesar de forma adicional para extraer el SOD. Por ejemplo, los hematies se pueden lavan con Disolucion Salina Tamponada de Fosfato 1x (PBS) para retirar cualquier plasma restante y/o factores de coagulacion. A continuacion, se puede someter el granulo de RBC a lisis en una disolucion de lisis, usando un volumen de disolucion que sea el doble del volumen del granulo de RBC. La disolucion de lisis generalmente puede incluir cloruro de amonio 0,15 M (NH4Cl), bicarbonato potasico 10 mM (KHCO3), acido etilendiaminotetracetico 0,1 mM (EDTA) y eter fenil octflico de polioxietileno al 1 % (Triton X-100) en agua destilada. El tratamiento del granulo RBC en la disolucion de lisis, produce la lisis de los hematies y libera la enzima SOD junto con otros componentes de las celulas. La lisis se puede llevar a cabo durante aproximadamente 20-30 minutos, tal como aproximadamente 25 minutos, bajo agitacion intensa. La disolucion de lisis puede incluir agua desionizada fna (4 °C) con o sin adicion de tensioactivos tales como TritonX u otros tensioactivos apropiados.
La fraccion de hemolisis que contiene SOD se puede separar a continuacion de los otros componentes de la mezcla. Por ejemplo, se pueden desnaturalizar otras protemas sometiendo la fraccion de hemolisis a tratamiento de Tsuchihashi donde el sobrenadante de la fraccion de hemolisis se mezcla con etanol (aproximadamente 0,25 volumenes del sobrenadante) y cloroformo (aproximadamente 0,15 volumenes del sobrenadante). Durante el tratamiento, la fraccion de hemolisis se agita intensamente durante aproximadamente 25 minutos, dando como resultado una disolucion rojo-ladrillo. Posteriormente, se puede centrifugar la disolucion a una tasa de aproximadamente 3000 g a aproximadamente 5000 g, tal como una tasa de aproximadamente 4000 g, durante aproximadamente 10-20 minutos, tal como durante aproximadamente 15 minutos, con el fin de separar las protemas desnaturalizadas y la hemoglobina de los otros contenidos de hematfes sometidos a lisis en la fase de cloroformo. Tambien se puede recoger el sobrenadante relativamente transparente (fase de etanol). A continuacion, se pueden anadir aproximadamente 300 gramos/litro de fosfato de potasio (K2HPO4) al sobrenadante para mover la enzima SOD de la fase organica hasta la fase acuosa, donde se puede reactivar en un entorno ionico. Esta disolucion se puede centrifugar a una tasa de aproximadamente 4000 g a aproximadamente 6000 g, tal como una tasa de aproximadamente 5000 g, para precipitar las protemas extranas adicionales y retirar el cloroformo que queda. A continuacion, se puede recoger el sobrenadante amarillo claro que contiene el SOD.
Posteriormente, se pueden anadir acetona (almacenada a -20 °C) u otro disolvente organico al sobrenadante a una relacion en volumen de 2:1, y se puede centrifugar la disolucion resultante a una tasa de aproximadamente 4000 g a aproximadamente 6000 g, tal como de aproximadamente 5000 g, durante aproximadamente 10-20 minutos, tal como aproximadamente 15 minutos, para garantizar la precipitacion de la protema deseada de interes. En este momento, el SOD puede precipitar fuera de la acetona u otra disolucion de disolvente, dando como resultado un precipitado de color crema. La acetona se puede recuperar a continuacion, dejando la enzima SOD, que no se purifica, lo que significa que no experimenta purificacion por medio de cromatograffa o filtracion de gel tras la precipitacion a partir de la disolucion. Posteriormente, la enzima SOD no purificada se puede lavar dos veces en PBS Dulbecco 1x, se centrifuga a una tasa de aproximadamente 4000 g a aproximadamente 6000 g, tal como una tasa de aproximadamente 5000 g, y se almacena en una disolucion que puede incluir un estabilizador y/o un crioprotector tal como, sin limitacion, trehalosa, sacarosa, dextrosa, manitol, glicerol, etc., o el SOD se puede liofilizar para uso futuro. La actividad SOD se puede medir en Unidades/mililitro de volumen inicial de sangre (U/ml de volumen inicial de sangre) por medio de un ensayo de actividad de SOD WST (sal de tetrazolio soluble en agua, (2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disulfofenil)-2H-tetrazolio, sal de monosodio)) y puede variar de aproximadamente 150 a aproximadamente 300 U/ml de sangre inicial. Ademas, la actividad de catalasa se puede medir usando un ensayo de actividad de catalasa y puede ser de aproximadamente 125 U/ml.
Debena comprenderse que el procedimiento descrito anteriormente es una manera de extraer enzimas antioxidativas no purificadas a partir de sangre de animales, aunque es posible simplificar el procedimiento incluso mas, tal como por medio de la eliminacion de disolventes organicos del procedimiento. Por ejemplo, en algunos casos, se pueden procesar las aves de corral vivas en una planta de aves de corral/pavo enviando las aves de corral/pavo a traves de la camara en una atmosfera controlada de CO2. Dicho tratamiento proteger la sangre de las aves de corral frente a la coagulacion, lo cual permite la retirada del EDTA (agente anti-coagulacion) del procedimiento descrito con anterioridad. Ademas, se puede usar agua destilada para producir la lisis de RBC en lugar de Triton X, y el cloroformo usado en el tratamiento de suchihashi T se puede sustituir por un disolvente alternativo.
La extraccion de protema bruta se puede simplificar para evitar el uso de dichos disolventes organicos tales como acetona y cloroformo, que pueden resultar toxicos. Dicho procedimiento tambien puede proporcionar ahorro de costes y puede tener como resultado la extraccion simultanea de diversas biomoleculas que estan implicadas en los mecanismos antioxidantes, incluyendo, superoxido dismutasa (SOD), catalasa, glutation, glutation reductasa y glutation peroxidasa. La composicion de protema bruta que contiene estas biomoleculas se puede extraer en primer lugar mediante la obtencion de una fuente de origen animal, como se muestra en el procedimiento 200 de la Figura 5. La sangre se puede adquirir, por ejemplo, en una planta de procesado de aves de corral o de carne o matadero, tras el suministro/transporte o en cualquier otro momento durante el cual se procesa la fuente de origen animal en la instalacion de clarificacion.
A continuacion, como se muestra de forma adicional en el procedimiento 200 de la Figura 5, despues de obtener la sangre, se puede procesar, tal como por medio de centrifugacion, para separar los eritrocitos/hematies de los otros componentes, tales como plasma y factores de coagulacion. Tras la retirada del sobrenadante, se puede anadir agua desionizada a RBC para facilitar la lisis celular. Estas etapas de separacion y lisis se pueden omitir, por ejemplo si se somete a lisis los eritrocitos por via mecanica durante el procesado (por ejemplo, durante el transporte o el bombeo). En la alternativa o junto con la adicion de agua desionizada, se puede utilizar agitacion mecanica o tratamiento por ultrasonidos para provocar la lisis de RBC. Ademas, aunque se muestra la lisis celular en la Figura 5 que se lleva a cabo tras la separacion de RBC a partir de la sangre del animal, debe comprenderse que la lisis tambien se puede llevar a cabo en la sangre sin la separacion previa de RBC con respecto a los otros componentes. Independientemente de si la lisis se lleva a cabo en la sangre o RBC unicamente, una vez que se ha completado la lisis celular, se puede anadir un compuesto o mezcla de dos o mas compuestos a RBC sometidos a lisis para precipitar la hemoglobina y facilitar su retirada de los RBC sometidos a lisis. El compuesto de precipitacion de hemoglobina puede ser un compuesto inorganico tal como cualquier sal metalica apropiada. En una realizacion, la sal metalica puede ser sal de cinc. La sal de cinc puede ser cloruro de cinc, sulfato de cinc, acetato de cinc, etc. En otras realizaciones, se puede utilizar un disolvente organico tal como etanol, 1-butanol, 2-butanol, isobutanol, tercbutanol o una combinacion de los mismos, para separar la hemoglobina de los RBC sometidos a lisis. Tambien se puede usar otro medio qmmico (cambio de pH, fuerza ionica, etc.) o ffsico (cambio de temperatura, separacion por densidad, etc.) para precipitar la hemoglobina. Ademas, se comprende que se puede utilizar cualquier medio ffsico para retirar la hemoglobina, tal como filtracion a traves de una membrana de separacion por tamano o campos electromagneticos, ultrafiltracion o electroforesis. En cualquier caso, la disolucion resultante de RBC sometidos a lisis contiene la protema bruta que incluye biomoleculas que tienen actividad antioxidante, tal como superoxido dismutasa (SOD), catalasa, glutation, glutation reductasa y glutation peroxidasa. Si se desea, cuando el compuesto de precipitacion de hemoglobina es un compuesto inorganico tal como una sal metalica, dicho compuesto se puede retirar de la disolucion y se puede recoger la protema bruta en forma de polvo por medio de la adicion de, por ejemplo, una disolucion concentrada de sulfato de amonio o nitrato de amonio.
Por ejemplo, se puede centrifugar aproximadamente 1 litro de sangre de animal a aproximadamente 1000 g a aproximadamente 10.000 g durante un penodo de tiempo que vana de aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 30 minutos para obtener los RBC empaquetados, que podnan alterarse qmmicamente con posterioridad por medio de mezcla con una disolucion de agente de lisis (por ejemplo, agua desionizada o tensioactivo) o podnan someterse a lisis mecanica por medio de agitacion intensa o aplicacion de presion. A continuacion, el compuesto de precipitacion de hemoglobina se puede anadir a la fraccion de lisis celular. El compuesto de precipitacion de hemoglobina puede ser un disolvente organico tal como etanol, 1-butanol, 2-butanol, isobutanol, (2-metil-1-propanol), terc-butanol (2-metil-2-propanol) u otros disolventes similares que conducen a la precipitacion de hemoglobina, como se conoce por los expertos en la tecnica. El disolvente se puede anadir a la sangre a una concentracion que vana de aproximadamente un 1 % en peso/volumen a aproximadamente un 50 % en peso/volumen, basado en el volumen de la disolucion de sobrenadante. Por ejemplo, el disolvente se puede anadir a una concentracion que vana de aproximadamente 2,5 % en peso/volumen a aproximadamente un 25 % en peso/volumen, tal como de aproximadamente un 5 % en peso/volumen a aproximadamente un 20 % en peso/volumen, tal como de aproximadamente un 7,5 % en peso/volumen a aproximadamente un 15 % en peso/volumen, basado en el volumen de la disolucion. En una realizacion, el disolvente organico puede ser 1-butanol, que se puede anadir a una concentracion de aproximadamente un 7 % en peso/volumen. En otra realizacion, el disolvente organico puede ser terc-butanol, que se puede anadir a una concentracion de aproximadamente un 9 % en peso/volumen. En otra realizacion, se pueden anadir dos compuestos, en los cuales el primer compuesto puede ser etanol y el segundo compuesto puede ser 1-butanol, 2-butanol o isobutanol (2-metil-1-propanol). En dicha realizacion, el primer compuesto se puede anadir a una concentracion que vana de aproximadamente un 5 % en peso/volumen a aproximadamente un 50 % en peso/volumen, mientras que el segundo compuesto se puede anadir a una concentracion que vana de aproximadamente un 0,5 % en peso/volumen a aproximadamente un 30 % en peso/volumen, basado en el volumen de la disolucion.
En otra realizacion, el compuesto de precipitacion de hemoglobina puede ser un compuesto inorganico, tal como una sal de cinc u otra sal metalica apropiada. Cuando el compuesto de precipitacion de hemoglobina es una sal de cinc u otro metal, se puede aplicar a una concentracion de aproximadamente un 0,1 % en peso/volumen a aproximadamente un 20 % en peso/volumen, tal como de aproximadamente un 0,5 % en peso/volumen a aproximadamente un 15 % en peso/volumen, tal como de aproximadamente un 1 % en peso/volumen a aproximadamente un 10 % en peso/volumen, basado en el volumen del sobrenadante. Despues de anadir el compuesto de precipitacion de hemoglobina, se puede incubar la disolucion resultante durante aproximadamente 15 minutos, con agitacion ocasional. La hemoglobina puede precipitar y posteriormente se puede retirar por medio de decantacion o centrifugacion a aproximadamente 1000 g a aproximadamente 5000 g durante un penodo de aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 15 minutos. Tambien debe comprenderse que se pueden ejecutar procedimientos analogos en un sistema de flujo pasante.
Tras la extraccion de los antioxidantes de protema bruta en una disolucion o forma de polvo, se aplica la disolucion o el polvo a un producto alimentario para mascotas, un producto de pienso para animales, o un producto alimentario para consumo humano con el fin de evitar la oxidacion. Por ejemplo, cuando estan en forma de disolucion, los antioxidantes extrafdos de la sangre se pueden aplicar al producto en una concentracion de aproximadamente 0,1
microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto hasta aproximadamente 100 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto, tal como de aproximadamente 2,5 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto hasta aproximadamente 90 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto, tal como de aproximadamente 5 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto hasta aproximadamente 75 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto. En una realizacion, el producto se puede aplicar a una concentracion de aproximadamente 6,25 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo hasta aproximadamente 50 microlitros de disolucion de antioxidante por gramo de producto.
Ademas, debe comprenderse que la propia disolucion de antioxidante de protema bruta se puede concentrar tras la extraccion a partir de la sangre. Por ejemplo, en algunos casos, la disolucion de antioxidante puede ser una disolucion concentrada de aproximadamente 1,5 veces a aproximadamente 10 veces, tal como de aproximadamente 2 veces a aproximadamente 8 veces, tal como de aproximadamente 3 veces a aproximadamente 6 veces. En una realizacion, por ejemplo, la disolucion de antioxidante aplicada al producto puede ser una disolucion concentrada 5 veces.
Los procedimientos de extraccion de antioxidante y los antioxidantes no purificados resultantes que se usan (es decir, un antioxidante que no se ha purificado usando cromatograffa o filtracion de gel) como conservante para alimentos o piensos, como se divulga en la presente memoria, se puede comprender mejor con referencia a los siguientes ejemplos.
Ejemplo comparativo 1
Haciendo referencia a la Figura 2, se determino la actividad en U/ml de SOD extraido por medio del procedimiento de la Figura 1, que se almaceno en diversas disoluciones durante 20 semanas a una temperatura de 25 °C, en comparacion con una muestra de control almacenada a 4 °C, de la siguiente forma. Con el fin de determinar la actividad antioxidante de SOD no purificado en unidades por mililitro (U/ml), se puede usar un ensayo de SOD con sal de tetrazolio soluble en agua, WST-1 (2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disulfofenil)-2H-tetrazolio, sal de monosodio). En este ensayo, WST-1 produce un colorante de formazano soluble en agua tras la reduccion con el anion de superoxido. La tasa de reduccion de WST-1 con O2- esta linealmente relacionada con la actividad de xantina oxidasa (XO) y esta reduccion esta inhibida por SOD.
A modo de control, se determino que la actividad de una muestra de SOD en disolucion y mantenida a 4 °C fue de 100 U/ml. Al mismo tiempo, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de trehalosa al 1 % fue de aproximadamente 100 U/ml hasta aproximadamente 125 U/ml, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de trehalosa al 10 % fue de aproximadamente 125 U/ml a aproximadamente 150 U/ml, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de sacarosa al 10 % fue de aproximadamente 100 U/ml a aproximadamente 125 U/ml, y la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de sacarosa al 1 % fue de aproximadamente 0 U/ml a aproximadamente 10 U/ml. La actividad de una muestra de SOD almacenada en disolucion sin aditivos fue de aproximadamente 100 U/ml a aproximadamente 125 U/ml.
Ejemplo comparativo 2
A continuacion, como se muestra en la Figura 3, se determino la actividad en U/ml de SOD almacenado en diversas disoluciones durante 40 semanas a una temperatura de 25 °C, en comparacion con una muestra de control almacenada a 4 °C, de la misma manera que se describe en el Ejemplo 1 anterior. A modo de control, se determino que la actividad de una muestra de SOD en disolucion y mantenida a 4 °C fue de 100 U/ml. Al mismo tiempo, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de trehalosa al 1 % fue de aproximadamente 90 U/ml hasta aproximadamente 105 U/ml, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de trehalosa al 10 % fue de aproximadamente 70 U/ml a aproximadamente 80 U/ml, la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de sacarosa al 10 % fue de aproximadamente 90 U/ml a aproximadamente 150 U/ml, y la actividad de una muestra de SOD almacenada en una disolucion de sacarosa al 1 % fue de aproximadamente 100 U/ml a aproximadamente 150 U/ml. La actividad de una muestra de SOD almacenada en disolucion sin aditivos fue de aproximadamente 100 125 U/ml. Los Ejemplos 1 y 2 muestran que los extractos de SOD obtenidos usando el procedimiento mostrado en la Figura 1 y almacenados sin ningun estabilizador permanecen estables y activos durante al menos 40 semanas si se almacenan a temperatura ambiente.
Ejemplo comparativo 3
Ademas, como se muestra en la Figura 4, se determino la eficacia antioxidante de extractos SOD en un sistema alimentario modelo. En este ensayo particular, se ha usado un modelo de lfpido-aceite de cartamo. Se determinaron los niveles de oxidacion de las muestras de aceite de cartamo tratadas con SOD usando un ensayo de acido tiobarbiturico (TBA) y se compararon con los de las muestras de aceite de cartamo tratadas por medio de tres antioxidantes comercialmente disponibles actualmente usados en conservantes alimentarios - PET-OX™ (Pet), NATUROX™ (Na) y NATUROX PLUS™ (Na-TX). PET-OX™ es un antioxidante sintetico actualmente usado en alimentacion animal que contiene hidroxianisol butilado e hidroxitolueno butilado. Generalmente, se usa en alimentacion animal a una concentracion de aproximadamente 150 partes por millon (ppm) a aproximadamente 500
ppm. Al mismo tiempo, NATUROX™ y NATUROX PLUS™ son antioxidantes naturales que contienen tocoferoles mixtos. Tras el tratamiento de las muestras de alimentacion animal con diversas concentraciones de tres tipos de antioxidantes, se llevo a cabo el ensayo de acido barbiturico (TBA), y se midio el nivel de TBA presente como absorbancia a 532 nm que correspondfa al nivel de oxidacion de lfpidos. Ademas, una muestra que tema una absorbancia menor correspondio a una cantidad menor de oxidacion de la muestra alimentaria.
En primer lugar, la muestra de control no se trato con un antioxidante y tuvo una absorbancia de 0,7 a aproximadamente 0,8. Una muestra tratada con 10 ppm de NATUROX™ y una muestra tratada con 10 ppm de NATUROX PLUS™ tuvieron ambas una absorbancia de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 0,7. Al mismo tiempo, una muestra tratada con 10 ppm de PET-OX™ tuvo una absorbancia de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,4. Aumentando la concentracion de PET-OX™ hasta 100 ppm, se redujo la absorbancia hasta una nivel de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 0,1, indicando un nivel menor de oxidacion. Cuando se trato una muestra con 6,2 ppm de extracto de SOD, la muestra tuvo una absorbancia de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 0,1. De este modo, una muestra tratada con unicamente 6,2 ppm de SOD exhibe una cantidad similar de oxidacion que una muestra tratada con 100 ppm del antioxidante PET-OXTM.
De este modo, aunque el antioxidante SOD de la presente divulgacion no se purifique por medio de cromatograffa o procedimientos de filtracion de gel, el grafico de la Figura 4 demuestra que el procedimiento descrito en la presente memoria da lugar todavfa a un antioxidante potente que puede evitar la oxidacion de, por ejemplo, grasas y aceites en alimentacion para animales. No obstante, se comprende que el producto de SOD no purificado descrito en la presente memoria, asf como el procedimiento de extraccion del producto de SOD no purificado, tambien se puede usar en otros productos ademas de los alimentos o piensos para animales, tales como pinturas, masillas, plasticos o cualesquiera otros productos que presenten riesgo de oxidacion.
Ejemplo 1
El Ejemplo 1 hace referencia a la Figura 6, que compara la capacidad de los antioxidantes naturales en la protema bruta de la presente divulgacion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario actualmente usados para evitar la oxidacion en hamburguesas de pollo triturado. Se obtuvo la protema bruta por medio del procedimiento de la Figura 5, donde se uso cloruro de cinc para separar la hemoglobina de los RCB a partir de la disolucion de protema bruta, que contiene los antioxidantes. Posteriormente, se aplico la protema bruta a una primera muestra de carne de pollo a una concentracion de 50 microlitros por gramo, una segunda muestra de carne de pollo a una concentracion de 25 microlitros por gramo, una tercera muestra de carne de pollo a una concentracion de 12,5 microlitros por gramo, y una cuarta muestra de carne de pollo a una concentracion de 6,25 microlitros por gramo. La concentracion de cinc en todas las muestras de protema bruta fue de 250 ppm. Con fines de comparacion, se aplico etoxiquina a una quinta muestra de carne de pollo a una concentracion de 150 partes por millon (ppm) basado en el peso total, se aplico PET-OX™ a una sexta de carne de pollo a una concentracion de 1000 ppm basado en contenido de grasa, y se aplico agua a una septima muestra de carne de pollo como control. Se sometieron estas siete muestras a oxidacion a 50 °C durante 12 horas. Se dejo una octava muestra que no tema tratamiento como control no oxidado y se almaceno en un frigonfico a 4 °C.
Trascurridas 12 horas, se llevo a cabo un ensayo ferroso de xilenol-oxidacion (FOX) sobre las muestras para determinar la absorbancia (densidad optica) de la disolucion restante a 560 nanometros, donde una lectura de absorbancia menor corresponde con un nivel menor de oxidacion. Como se muestra, las disoluciones de protema bruta de la presente invencion tuvieron una absorbancia menor de aproximadamente 0,3, que fue similar a las lecturas de los antioxidantes actualmente disponibles (etoxiquina y p ET-OXtm), que no son seguros y son mas costosos. La absorbancia de las cuatro muestras de protema bruta fue tambien similar a la absorbancia de la muestra que no se sometio a oxidacion, lo cual indica que las disoluciones de protema bruta extrafdas por medio del procedimiento de la presente divulgacion y aplicadas a carne de pollo a concentraciones que vanan de aproximadamente 6,25 microlitros por gramo a aproximadamente 50 microlitros por gramo resultan eficaces para evitar la oxidacion de la carne de pollo.
Ejemplo 2
El Ejemplo 2 se resume por medio de la Figura 7, que es un grafico que compara la capacidad de los antioxidantes naturales de la protema bruta de la presente divulgacion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario actualmente usados para evitar la oxidacion en grasa de pollo lfquida. Se extrajo la protema bruta de acuerdo con el procedimiento descrito en la Figura 5, presentando la disolucion resultante biomoleculas de antioxidante natural. La disolucion de protema bruta se mezclo con grasa de pollo lfquida de forma que la protema bruta estuviera presente en una primera muestra a una concentracion de 250 microlitros por gramo de grasa, en una segunda muestra a una concentracion de 100 microlitros por gramo de grasa, y en una tercera muestra a una concentracion de 20 microlitros por gramo de grasa. Con fines de comparacion, se aplico PET-OX™ a una cuarta muestra de grasa de pollo a una concentracion de 500 ppm. No se trato una quinta muestra de grasa de pollo con un antioxidante (por ejemplo, control oxidado). Se sometieron estas cinco muestras a oxidacion a 50 °C durante 12 horas. Se dejo una sexta muestra que no tema tratamiento como control no oxidado y se almaceno en un frigonfico a
Trascurridas 12 horas, se llevo a cabo un ensayo ferroso de xilenol-oxidacion (FOX) sobre las muestras para determinar la absorbancia (densidad optica) de la disolucion restante a 560 nanometros, donde una lectura de absorbancia menor corresponde con un nivel menor de oxidacion. Como se muestra, las disoluciones de protema bruta de la presente invencion tuvieron una absorbancia menor de aproximadamente 0,125, que fue similar a las lecturas de PET-OXTM), que no son seguros y son mas costosos. La absorbancia de las tres muestras de protema bruta fue tambien similar a la absorbancia de la muestra que no se sometio a oxidacion y mucho menor que la muestra no tratada que se sometio a oxidacion, lo cual indica que las disoluciones de protema bruta extrafdas por medio del procedimiento de la presente divulgacion y aplicadas a carne de pollo a concentraciones que vanan de aproximadamente 20 microlitros por gramo a aproximadamente 250 microlitros por gramo resultan eficaces para evitar la oxidacion de la grasa de pollo lfquida.
Ejemplo 3
El Ejemplo 3 hace referencia a la Figura 8, que compara la capacidad de los antioxidantes naturales en la protema bruta de la presente divulgacion con la capacidad de los antioxidantes de conservante alimentario actualmente usados para evitar la oxidacion en hamburguesas de pollo triturado. Se extrajo la protema bruta de acuerdo con el procedimiento descrito en la Figura 5, presentando la disolucion resultante biomoleculas de antioxidante natural. La disolucion de protema bruta se mezclo con hamburguesas de pollo triturado de forma que la protema bruta estuviera presente en una primera muestra a una concentracion de 50 microlitros por gramo de carne triturada, en una segunda muestra a una concentracion de 25 microlitros por gramo de hamburguesa de pollo triturado y en una tercera muestra a una concentracion de 17 microlitros por gramo de hamburguesa de pollo triturado. Con fines de comparacion, se aplico PET-OXTM a una cuarta muestra de hamburguesa de pollo triturado a una concentracion de 500 ppm. No se trato una quinta muestra de hamburguesa de pollo triturado con un antioxidante (por ejemplo, control oxidado). Se sometieron estas cinco muestras a oxidacion a 50 °C durante 12 horas. Se dejo una sexta muestra que no tema tratamiento como control no oxidado y se almaceno en un frigonfico a 4 °C.
Trascurridas 12 horas, se llevo a cabo un ensayo ferroso de xilenol-oxidacion (FOX) sobre las muestras para determinar la absorbancia (densidad optica) de la disolucion restante a 560 nanometros, donde una lectura de absorbancia menor corresponde con un nivel menor de oxidacion. Como se muestra, las disoluciones de protema bruta de la presente invencion tuvieron una absorbancia menor de aproximadamente 0,2, que fue similar a las lecturas de PeT-OXtm), que no son seguros y son mas costosos. La absorbancia de las tres muestras de protema bruta fue tambien similar a la absorbancia de la muestra que no se sometio a oxidacion y mucho menor que la muestra no tratada que se sometio a oxidacion, lo cual indica que las disoluciones de protema bruta extrafdas por medio del procedimiento de la presente divulgacion y aplicadas a hamburguesas de pollo triturado a concentraciones que vanan de aproximadamente 17 microlitros por gramo a aproximadamente 50 microlitros por gramo resultan eficaces para evitar la oxidacion de las hamburguesas de pollo triturado.
Ejemplo 4
El Ejemplo 4, que hace referencia a la Figura 9, muestra la capacidad de los antioxidantes naturales de la protema bruta de la presente divulgacion para seguir siendo eficaces tras el envejecimiento acelerado durante 10 dfas a 50 °C, que es equivalente a 3-4 meses a temperatura ambiente de aproximadamente 25 °C, y mas de 1 ano a temperatura refrigerada de aproximadamente 4 °C. Se envejecieron las muestras de protema bruta durante 4 dfas, 8 dfas y 10 dfas, y se incubo con carne de pollo triturado; se sometieron las muestras a oxidacion a 50 °C durante 12 horas. Se evaluaron los niveles de oxidacion usando un ensayo FOX; cada muestra tratada por medio de la protema bruta tuvo una absorbancia de menos de 0,3 cuando se determino a una longitud de onda de 560 nanometros. Esto fue similar a la absorbancia de la muestra incubada con PET-OX™ (1000 ppm basado en el contenido de grasa), que no se sometio a envejecimiento acelerado que experimentaron las disoluciones de antioxidante de protema bruta.
Los resultados del Ejemplo 4 muestra que la protema bruta sometida a extraccion por medio del procedimiento de la presente divulgacion pueden tener un penodo de caducidad de al menos aproximadamente 3-4 meses a temperatura ambiente, lo cual resulta apreciable ya que muchas protemas y enzimas son fragiles y tienen un penodo de caducidad limitado.
Ejemplo 5
El Ejemplo 5, que hace referencia a la Figura 10, demuestra la capacidad de los antioxidantes naturales de la protema bruta de la presente divulgacion para seguir siendo eficaces tras el envejecimiento acelerado a 50 °C durante hasta 10 dfas cuando se usa para tratar grasa de pollo. Igual que en el Ejemplo 4, la muestra tratada con PET-OX™ no se incubo a 50 °C. Al mismo tiempo, la disolucion de protema bruta de la presente divulgacion se envejecio durante 1 dfa, 2 dfas, 3 dfas 4 dfas, 5 dfas y 10 dfas, despues de lo cual se mezclaron 25 microlitros de la protema bruta con 475 microlitros de la grasa de pollo. A continuacion, se incubo la mezcla durante 12 horas a 50 °C, y se llevo a cabo el ensayo de FOX donde se determino la absorbancia de cada una de las disoluciones a 560 nanometros.
Como se muestra, incluso despues de 10 dfas de envejecimiento acelerado, las disoluciones de protema bruta de la presente divulgacion exhibieron una absorbancia menor de 0,25, lo que demuestra que la protema bruta fue capaz de evitar la oxidacion de la grasa de pollo, y su eficiencia no se degrado durante el envejecimiento acelerado.
Ejemplo 6
El Ejemplo 6, que hace referencia a la Figura 11, compara la actividad antioxidante de una disolucion de protema bruta, concentrado SOD, 1000 U/ml de catalasa, PET-OXTM, y agua cuando se aplica a hamburguesas de ternera usando un ensayo de TBARS. Se obtuvo la protema bruta usando el procedimiento de la Figura 5, en el que se obtuvo 1 milfmetro entre 5 milfmetros de sangre, donde la concentracion de cinc fue de aproximadamente 4800 ppm. (No obstante, notese que tras la adicion de la disolucion a la muestra de hamburguesa de ternera, se redujo el contenido final de cinc a aproximadamente 240 ppm). A continuacion, se concentro la protema bruta 5 veces usando filtracion a traves de una membrana con un valor lfmite de peso molecular de 3.000 Da para dar lugar a un concentrado de 5 veces. Se obtuvo el SOD usando el procedimiento de la Figura 1, donde se precipito la hemoglobina por medio de una mezcla de etanol-cloroformo. Para el ensayo, se mezclaron 1,5 gramos de ternera triturada con 75 microlitros de antioxidantes y se incubo durante 12 horas a 37 °C, de forma que la concentracion de antioxidantes por gramo de carne fuera de 50 microlitros por gramo. Tras tratar las hamburguesas de ternera con diversos antioxidantes, agua o control no incubado, se llevo a cabo el ensayo de TBA como se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 1; no obstante, se midio el contenido de TBA usando fluorescencia con una longitud de onda de excitacion de 520 nm y una longitud de onda de emision de 560 nm. El nivel de TBA presente en la muestra correspondio al nivel de oxidacion presente en base a la lectura de fluorescencia. Ademas, una lectura de fluorescencia mas baja correspondio a una cantidad menor de TBA en la muestra, lo cual correspondio a una cantidad menor de oxidacion del pienso para animales.
Como se muestra, el concentrado de 5 veces de protema bruta de la presente divulgacion mostro la cantidad mas baja de oxidacion, seguido de 1000 ppm de PET-OX™, a continuacion el concentrado de SOD y a continuacion 1000 U/ml de catalasa.
Ejemplo 7
El Ejemplo 7, que hace referencia a la Figura 12, compara la actividad de antioxidante de una disolucion de protema bruta obtenida usando el procedimiento de la Figura 5, concentrado de SOD obtenido usando el procedimiento de la Figura 1, 1000 U/ml de SOD, 1000 U/ml de catalasa, PETOXTM y agua cuando se aplica a grasa de pollo. Se uso agua como control negativo mientras que una muestra almacenada a 4 °C fue el control positivo. Se midieron los niveles de oxidacion usando un ensayo FOX.
Como se muestra, la protema bruta, el concentrado SOD, y PET-OXTM tuvieron absorbancias menores de 0,21 a 560 nanometros y, de este modo, fueron eficaces en la prevencion de la oxidacion. La grasa de pollo tratada con agua unicamente exhibio el nivel de mas alta de oxidacion, mientras que 1000 U/ml de SOD bovino comercial y 1000 U/ml de catalasa evitaron la oxidacion en menor medida que la protema bruta, concentrado de SOD y PET-OX™. La protema bruta, concentrado SOD y PET-OXTM inhibieron aproximadamente un 85 % de la oxidacion, mientras que 1000 U/ml de SOD disminuyo la oxidacion en aproximadamente un 34 % y 1000 U/ml de catalasa disminuyo la oxidacion en aproximadamente un 13 %.
Claims (4)
1. Uso de un antioxidante para conservar un producto alimentario o de pienso, en el que el antioxidante se extrae de sangre de un animal, en el que el antioxidante procede de eritrocitos (hematies) de la sangre del animal tras la retirada del plasma de la sangre del animal, en el que el antioxidante comprende superoxido dismutasa (SOD), catalasa, glutation, glutation reductasa y glutation peroxidasa.
2. Uso del antioxidante de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la sangre de animal es sangre porcina, bovina o aviar.
3. Uso del antioxidante de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el antioxidante esta generalmente libre de hemoglobina.
4. Uso del antioxidante de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el antioxidante esta en forma de una disolucion aplicada a una concentracion que vana de 0,1 microlitros por gramo de producto alimentario a 100 microlitros por gramo de producto alimentario.
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