ES2711906T3

ES2711906T3 - Compuestos de 1-(beta-d-glucopiranosil)-1h-indol

Info

Publication number: ES2711906T3
Application number: ES14796332T
Authority: ES
Inventors: Todd Fields
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2013-10-17
Filing date: 2014-10-16
Publication date: 2019-05-08
Anticipated expiration: 2034-10-16
Also published as: TW201605884A; TWI633113B; JP2016536355A; US9145435B2; CN105593229B; US20150111846A1; WO2015057953A1; AR097890A1; HK1221954A1; EP3057971B1; JP6153670B2; CA2923763C; CA2923763A1; CN105593229A; EP3057971A1

Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCION

Compuestos de 1-(beta-d-glucopiranosil)-1h-indol

Novedosos compuestos de urea.

La presente invencion se refiere a novedosos compuestos de urea, a composiciones farmaceuticas que comprenden los compuestos, a metodos para usar los compuestos para tratar trastornos fisiologicos, y a productos intermedios y procesos utiles en la smtesis de los compuestos.

La presente invencion se encuentra en el campo del tratamiento de la diabetes y otras enfermedades y trastornos asociados con la hiperglucemia. La diabetes es un grupo de enfermedades que se caracteriza por altos niveles de glucosa en la sangre. Afecta a aproximadamente 25 millones de personas en los Estados Unidos y tambien es la septima causa de muerte en los EE. UU. De acuerdo con la Hoja informativa nacional sobre la diabetes de 2011 2011 National Diabetes Fact Sheet (U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention). Los cotransportadores de glucosa acoplados al sodio (SGLT) son uno de los transportadores conocidos como responsables de la absorcion de carbohidratos, tal como la glucosa. Mas espedficamente, SGLT1 es responsable del transporte de glucosa a traves de la membrana del borde en cepillo del intestino delgado. La inhibicion de SGLT1 puede dar como resultado absorcion reducida de glucosa en el intestino delgado, proporcionando asf un enfoque util para tratar la diabetes.

La Publicacion de Solicitud de Patente U.S. No. 2008/0139484 A1 divulga compuestos heterodclicos que contienen nitrogeno de 1-(p-D-glicopiranosil)-3-sustituidos que tienen actividad inhibidora de SGLT1 y/o SGLT2 que se divulgan adicionalmente como utiles para la prevencion o el tratamiento de enfermedad asociada a la hiperglucemia, tal como la diabetes. Ademas, la Patente U.S. No. 7.851.617 divulga derivados de indol que son inhibidores de SGLT y se divulgan adicionalmente como utiles para el tratamiento o prevencion de diabetes y condiciones relacionadas.

Existe la necesidad de medicamentos alternativos y tratamiento para la diabetes. La presente invencion proporciona ciertos novedosos inhibidores de SGLT1 que pueden ser adecuados para el tratamiento de la diabetes.

Por consiguiente, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I:

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente invencion tambien proporciona un metodo para tratar la diabetes en un paciente que comprende administrar a un paciente que necesita tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. La presente invencion proporciona ademas un metodo para tratar la diabetes tipo 1 en un paciente que comprende administrar a un paciente que necesita tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. Ademas, la presente invencion proporciona un metodo para tratar la diabetes tipo 2 en un paciente que comprende administrar a un paciente que necesita tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. La presente invencion tambien proporciona un metodo para tratar la tolerancia alterada a la glucosa (IGT), la glucosa alterada en ayunas (IFG) o el smdrome metabolico en un paciente que comprende administrar a un paciente que necesita tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Adicionalmente, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en terapia, en particular para el tratamiento de diabetes. Ademas, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de la diabetes tipo 1. Ademas, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de la diabetes tipo 2. La presente invencion tambien proporciona el uso de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la diabetes. Adicionalmente, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la diabetes tipo 1. La presente invencion tambien proporciona el uso de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la diabetes tipo 2. La invencion tambien proporciona el uso de un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de IGT, IFG o smdrome metabolico.

La invencion proporciona ademas una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, con uno o mas vehmulos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. La presente invencion tambien abarca novedosos intermedios y procesos para la smtesis del compuesto de Formula I.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos "tratar" o "para tratar" incluyen restringir, hacer mas lento, detener o revertir la progresion o gravedad de un smtoma o trastorno existente.

Como se usa en el presente documento, el termino "paciente" se refiere a un mairnfero, tal como un raton, un cobayo, una rata, un perro o un humano. Se entiende que el paciente preferido es un humano.

Como se usa en el presente documento, el termino "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad o dosis del compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo que, despues de la administracion de una dosis unica o multiple al paciente, proporciona el efecto deseado en el paciente bajo diagnostico o tratamiento.

El especialista a cargo del diagnostico, como experto en la tecnica, puede determinar facilmente una cantidad efectiva mediante el uso de tecnicas conocidas y observando los resultados obtenidos bajo circunstancias analogas. Al determinar la cantidad efectiva para un paciente, el medico encargado del tratamiento considera varios factores, entre los que se incluyen, pero no se limitan a: la especie de mamffero; su tamano, edad y salud general; la enfermedad o trastorno espedfico involucrado; el grado de o implicacion o la gravedad de la enfermedad o trastorno; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular administrado; el modo de administracion; las caractensticas de biodisponibilidad de la preparacion administrada; el regimen de dosis seleccionado; el uso de medicacion concomitante; y otras circunstancias relevantes.

Los compuestos de Formula I son generalmente efectivos en un amplio intervalo de dosificacion. Por ejemplo, las dosificaciones por dfa normalmente caen dentro del intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, los niveles de dosificacion por debajo del lfmite inferior del intervalo mencionado anteriormente pueden ser mas que adecuados, mientras que en otros casos se pueden emplear dosis aun mayores sin causar ningun efecto secundario perjudicial, y por lo tanto el intervalo de dosificacion anterior no pretende limitar el alcance de la invencion de ninguna manera.

Los compuestos de la invencion se formulan preferiblemente como composiciones farmaceuticas administradas por cualquier via que hace que el compuesto sea biodisponible. Lo mas preferiblemente, tales composiciones son para administracion oral. Tales composiciones farmaceuticas y procedimientos para prepararlas son bien conocidos en la tecnica. (Vease, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition., Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).

En un aspecto adicional de la invencion, los presentes compuestos se administran en combinacion con uno o mas agentes terapeuticos, tales como agentes antidiabeticos. Administracion en combinacion incluye administracion simultanea o secuencial. Ademas, la administracion simultanea de la combinacion puede ser como una dosis de combinacion unica o dosis separadas de cada agente terapeutico. Ejemplos de agentes antidiabeticos incluyen metformina; un inhibidor de la DPPIV, tal como sitagliptina o linagliptina; una sulfonilurea, tal como glimepirida; una tiazolidindiona, tal como pioglitazona; una insulina basal, tal como glargina; una insulina de accion rapida, tal como HUMALOG o NOVOLOG; Un agonista de GLP-1, tal como exenatida o liraglutida; un inhibidor de SGLT2, tal como dapagliflozina o empagliflozina; un antagonista del receptor de glucagon, tal como LY2409021; y similares.

Los compuestos de Formula I se preparan como se ilustra en las preparaciones, ejemplos y esquemas a continuacion. Los reactivos y los materiales de partida estan facilmente disponibles para un experto en la tecnica. Todos los sustituyentes, a menos que se especifique otra cosa, son como se definio previamente. Se entiende que estos esquemas, preparaciones y ejemplos no pretenden limitar de ninguna manera el alcance de la invencion. Ejemplos de resoluciones incluyen tecnicas de cristalizacion selectiva o cromatograffa quiral. (Vease, por ejemplo, J J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, and E.l. Eliel and S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994). Un experto en la tecnica debe dejar en claro que la separacion y el aislamiento, por cromatograffa, cromatograffa quiral o cristalizacion selectiva, de diastereomeros individuales o isomeros geometricos de Formula I o diastereomeros individuales o isomeros geometricos de intermedios que conducen a la Formula I, pueden presentarse en cualquier punto conveniente de la smtesis.

Como se usa en el presente documento, "8" se refiere a parte por millon de campo descendente de tetrametilsilano; "min" se refiere a minutos o minutos; "hrs" se refiere a horas; "THF" se refiere a acido tetrahidrofurano; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "MeOH" se refiere a metanol o alcohol metilico; "TFA" se refiere a acido trifluoroacetico; "DPPA" se refiere a difenilfosforilazida; "HATU" se refiere a hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'tetrametiluronio; "CDI" se refiere a 1,1-carbonildiimidazol; "DDQ" se refiere a 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona "Xphos" se refiere a 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo; "MTBE" se refiere a metil tert-butil eter; "mins" se refiere a minutos; "HPLC" se refiere a cromatograffa Uquida de alto rendimiento; "Ac" se refiere a un sustituyente acetilo de la siguiente estructura:

y el termino "BOC" se refiere a un grupo protector t-butiloxicarbonilo.

Las sales farmaceuticamente aceptables y la metodologfa comun para prepararlas son bien conocidas en la tecnica. Vease, por ejemplo, Gould, P.l., "Salt selection for basic drugs," International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities," Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); and S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977. Un experto en la tecnica de la smtesis apreciara que los compuestos de Formula I como aminas son bases organicas, y que se convierten y afslan facilmente como sales farmaceuticamente aceptables usando tecnicas y condiciones bien conocidas por una persona de experiencia en la tecnica.

Preparation 1

3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-1H-indol.

Esquema I, Etapa A: Se agregan TFA (114,4 mmol) a una solucion de 4-bromobenzaldetido (76,2 mmol), 4 metilindol (76,2 mmol) y trietilsilano (228,4 mmol) en diclorometano (10 ml) previamente enfriado en un bano de hielo. Se deja que la mezcla se caliente hasta temperatura ambiente y se agita durante 2 horas. Se anade trietilsilano adicional (228,4 mmol) y se calienta la mezcla hasta 30 °C durante la noche en un bano de aceite. Se diluye la reaccion con agua (100 ml) y se extrae con diclorometano (2 x 100 ml). Se separa y lava la fase organica con agua (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml). Se seca la fase organica sobre sulfato de sodio, se filtra y se concentra bajo presion reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografia instantanea sobre silica gel (120 g de cartucho) eluyendo con acetato de etilo al 0-10 % en eter de petroleo para producir el compuesto del fitulo (8 g, 26,6 mmol): MS (m/z): 301 (M+1)

Preparacion 2

3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indolina.

Esquema I, Etapa B: Se agregan cianoborohidruro de sodio (13,3 mmol) a una solucion de 3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-1H-indol (26,6 mmol) en acido acetico (20 ml) y se agita a temperatura ambiente durante la noche. Diluir la reaccion con agua (200 ml) y se agregan bicarbonato de sodio hasta lograr un pH = 6. Extraer con acetato de etilo (3 x 100 ml) y se lavan los extractos organicos combinados con agua (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida. Se purifica por cromatografia instantanea (120 g de cartucho de silica gel) eluyendo con acetato de etilo al 0-15 % en eter de petroleo para producir el compuesto del fitulo (2,2 g, 7,3 mmol): MS (m/z): 302 (M+1).

Preparacion 3

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indolin-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema I, Etapa C: Se agregan acetato de [(2R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraacetoxitetrahidropiran-2-il]metilo (10,6 mmol) y 3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indolina (10,6 mmol) a una solucion de acido acetico (69,8 mmol) en metanol (80 ml). Se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se filtra la mezcla de reaccion a traves de una frita de vidrio y se lava la torta del filtro con metanol (2 x 10 ml). Se seca la torta del filtro bajo vado para obtener el compuesto del fitulo (2,3 g, 3,6 mmol): MS (m/z): 632 (M+H).

Preparacion 4

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema I, Etapa D: Se agregan oxido de manganeso (IV) (172,5 mmol) a una solucion de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indolin-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (5,85 mmol) en diclorometano (20 ml). Se agita a temperatura ambiente durante 48 horas. Se filtra la reaccion a traves de tierra de diatomeas y se concentra bajo presion reducida. Tratar el producto crudo con diclorometano/metanol (30 ml de 10:1) y se agita durante 15 minutos. Se filtra el precipitado resultante y enjuagar la torta del filtro con metanol (2 x 10 ml). Se seca la torta del filtro bajo vado para producir el compuesto del trtulo como un solido incoloro (2,5 g 3,97 mmol): MS (m/z): 630 (M+H).

Preparacion 5

Aceto de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-hidroxibut-1-enil]fenil]metil] -4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema I, Etapa E: Se combina acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metilindol-1- il]tetrahidropiran-2-il] metilo (1,67 mmol), 3-buten-1-ol (5 mmol), trietilamina (35,8 mmol) y acetonitrilo (10 ml) y se purga con nitrogeno durante 10 minutos. A esta mezcla, se agrega acetato de paladio (0,17 mmol) y tri-otoluilfosfina (0,33 mmol). Se calienta esta mezcla a 80 °C durante 2 horas, luego se enfria hasta temperatura ambiente. Se diluye con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml). Se separa y lava la fase organica con salmuera (50 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida. Se purifica por cromatograffa instantanea (40 g de cartucho de sflica gel) eluyendo con 5-80 % de acetato de etilo en diclorometano para producir el compuesto del trtulo en forma de una espuma de color bronce (0,8 g, 1,2 mmol): MS (m/z): 622,0 (M+H).

Preparation 6

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[4-metil-3-[[4-[(E)-4-metilsulfoniloxibut-1-enil]fenil]metil]indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema II, Etapa A: A una solucion de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-hidroxibut-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (1,2 mmol) en diclorometano (50 ml) y trietilamina (3,6 mmol) a temperatura ambiente, se agrega cloruro de metanosulfonilo (1,56 mmol) gota a gota durante 5 minutos. Se agita a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se diluye la reaccion con diclorometano (100 ml). Se lavan los extractos organicos con agua (2 x 100 ml) seguido de salmuera (100 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida para producir el compuesto del tftulo en forma de una espuma de color amarillo claro (0,84 g, 1,2 mmol). Se usa este material en la siguiente etapa (Esquema II, etapa B) sin purificacion adicional.

Preparacion 7

1-[2-(4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2-oxo-etil]-3-isobutil-urea.

Preparacion de 2-(isobutilcarbamoilamino) acetato de bencilo.

Se carga acido 3-metilbutanoico (106,36 g), tolueno (800 ml) y trietilamina (126,46 g) en un matraz de 3 bocas (R1). Se calienta R1 hasta 90 °C. Se agrega una solucion de DPPA (289,3g) en tolueno (400 ml) lentamente (Cuidado: N2 liberado). Se agita R1 a 90 °C durante 30-60 minutos, luego se enfna hasta 20-30 °C. En un matraz separado (R2), se carga hidrocloruro de 2-aminoacetato de bencilo (200 g), trietilamina (150,54 g) y tolueno (1000 ml) y se agita a 20-30 °C durante 1-2 horas. Se agrega la mezcla R1 en R2 gota a gota lentamente a traves de un embudo de adicion a 20-30 °C y se agita durante 1-2 horas. Se agrega lentamente la mezcla de reaccion al agua (2000 ml) con agitacion vigorosa. Se separa la capa organica y se extrae la capa acuosa con EtOAc (2 x 1000 ml). Se combina las capas organicas y se lava con acido clortftdrico 1 N (1000 ml), luego con 7 % de NaHCO3 ac. (1000 ml), luego con agua (1000 ml), luego con 15 % de salmuera (1000 ml). Se concentra bajo presion reducida. Se suspende el residuo con heptano (1000 ml) y luego se filtra el solido. Se seca la torta del filtro bajo presion reducida por debajo de 40 °C para dar acetato de 2-(isobutilcarbamoilamino)bencilo (218 g; ensayo del 98,1 %; rendimiento del 81,5 %).

Preparacion de acido 2-(isobutilcarbamoilamino)acetico.

Se carga acetato de 2-(isobutilcarbamoilamino)acetato de bencilo (200 g; ensayo del 98,1 %), Pd/C seco (20 g; 10 % p/p) y alcohol isopropflico (2000 ml) en un autoclave. Se desgasifica bajo vado y se purga con hidrogeno tres veces. Se agita a 60 °C bajo 50-60 psi de H2 durante 4 horas. Se enfna la mezcla hasta 20-30 °C y se filtra a traves de tierra de diatomeas y se concentra el filtrado bajo presion reducida a 45-50 °C a 1-2Vol. Se anade acetonitrilo (1000 ml) y se concentra bajo presion reducida a 45-50 °C a 2-3Vol. Se enfna la mezcla hasta 5-10 °C y se filtra. Se seca la torta bajo presion reducida a 45-50 °C para obtener acido 2-(isobutilcarbamoilamino)acetico (112 g; ensayo del 95,2 %; rendimiento del 82,5 %).

Preparacion del compuesto del tftulo final.

A un matraz de fondo redondo se agrega clorhidrato de 4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (1,38 mmol), acido 2-(isobutilcarbamoilamino)acetico (1,15 mmol), dimetilformamida (3,8 ml), trietilamina (1,72 mmol)) y HATU (1.26 mmol. Se agita a temperatura ambiente durante 16 horas, luego se diluye con agua (50 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se lava la fase organica con cloruro de amonio concentrado (50 ml) y salmuera (50 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y concentran bajo presion reducida. Se purifica el intermedio mediante cromatograffa instantanea (40 g de cartucho de silica gel) eluyendo con metanol al 0-10 % en acetato de etilo para obtener 9-[2-(isobutilcarbamoilamino)acetil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de tertbutilo (0,38 g, 0,93 mmol): MS (m/z): 411,2 (M+H).

A una solution de 9-[2-(isobutilcarbamoilamino)acetil]-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-4-carboxilato de tert-butilo (0,38 g, 0,93 mmol) en 1,4-dioxano (1,75 ml), se agrega HCl 4 M en 1,4-dioxano (8,77 mmol). Se agita la reaction a temperatura ambiente durante 5 horas, luego se concentra bajo presion reducida. Se purifica el residuo disolviendolo en metanol y cargando en una columna SCX (intercambio ionico). Se enjuaga la columna cargada con metanol (3 x 25 ml) y luego se enjuaga la columna con amoniaco 2N en metanol. Se combinan y concentran los lavados de amoniaco para obtener el compuesto del trtulo final, 1-[2-(4,9-diazaespiro [5.5]undecan-9-il)-2-oxo-etil]-3-isobutil-urea (0,25g, 0,81 mmol): MS (m/z): 311,0 (M+H).

Ejemplo 1a

1-isobutil-3-[2-[4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il]-2-oxo-etil]urea.

Esquema II, Etapa B: A una solucion de 1-[2-(4,9-diazaespiro [5.5]undecan-9-il)-2-oxo-etil]-3-isobutil-urea (0,21 mmol) en acetonitrilo (2,5 ml), se agregan acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[4-metil-3-[[4-[(E)-4-metilsulfoniloxibut-1-enil]fenil]metil]indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (0,17 mmol) seguido de diisopropiletilamina (0,69 mmol). Se calienta la mezcla de reaccion sellada a 80 °C durante 16 horas. Se concentra la reaccion cruda bajo presion reducida, luego se disuelve el intermedio crudo en metanol (5 ml) y se agrega metoxido de sodio (0,53 mmol como una solucion al 30 % en metanol). Se agita a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se inactiva la reaccion agregando un pequeno trozo de hielo seco. Se concentra la reaccion cruda bajo presion reducida. Se purifica por cromatografia instantanea (120 g de columna C18) eluyendo con 5 - 70 % de agua (0,1 % de acido formico)/acetonitrilo (0,1 % de acido formico). Se combina el producto que contiene fracciones y se concentra bajo presion reducida. Se disuelve el producto en agua (50 ml) y se neutraliza la solucion acuosa con bicarbonato de sodio concentrado. Se decanta la fase acuosa y se disuelvge el aceite restante en diclorometano/metanol (50 ml de 10: 1). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida para producir el compuesto del trtulo como una espuma blanquecina (0,08 g, 0,63 mmol): MS (m/z): 746,5 (M+1).

Preparation 9

4-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tertbutilo.

Preparacion de 4-(3-cloropropil)-4-ciano-piperidin-1-carboxilato de tert-butilo.

Se cargan 1780 g de THF y 86,6 g de diisopropilamina a R1. Se enfria la mezcla en R1 hasta -40 °C - -60 °C. Se agregan gota a gota 210,5 g de n-BuLi (1,6 eq) en R1 y se agita la mezcla durante 0,5- 1 hora. Se cargan 890 g de THF y luego 100,0 g de 4-cianopiperidin-1-carboxilato de tert-butilo en R2. Se agrega la solucion de 4-cianopiperidin-1-carboxilato de tert-butilo en R2 gota a gota a R1, controlando la temperatura a -40 °C - -60 °C. Se agita la mezcla en R1 durante 1 - 2 horas. Se cargan 890 g de THF y 130,5 g de 1-bromo-3-cloropropano en R2. Se agrega la solucion de 1-bromo-3-cloro-propano en R2 gota a gota a R1, se controla la temperatura a -40- -60 °C. Se agita la mezcla en R1 durante 3 horas a -40- -60 °C, luego se calienta lentamente la mezcla hasta 20-25 °C y se agita durante 13-16 horas. Se enfria la mezcla a 0 -5 °C. Se agregan gota a gota 525 g de NH4G (solucion acuosa saturada) y luego 500 g de agua en R1. Se concentra la mezcla hasta un peso total de 1000 - 1100 g por debajo de 40 °C y luego se agregan 380 g de MTBE. Se agita la mezcla a 10-20 °C durante 20-40 minutos y luego se deja reposar durante 30-60 minutos. Se separa la capa acuosa y se lava la capa organica con 2 x 500 g de H2O. Se concentra la mezcla a 300 g de peso total por debajo de 50 °C. Se agrega 136 g de n-heptano y luego concentre la mezcla hasta 300 g de peso total por debajo de 50 °C. Se enfria la mezcla a 0 -5 °C, luego se agregan gota a gota 340 g de n-heptano. Se agita la mezcla durante 5-10 horas, luego se filtra la suspension. Se enjuaga el matraz con 68,0 g de n-heptano, luego se lava la torta para obtener 4-(3-cloropropil)-4-ciano-piperidin-1-carboxilato de tert-butilo (118 g, 87,2 % de Ensayo, 75,4 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 231 (M+H-tBu). Se transfiere la torta a un matraz y se agregan 610,0 g de tolueno. Se concentra la mezcla hasta 500 g de peso total por debajo de 50 °C. El producto se almacena como una solucion de tolueno hasta que es requerida.

Preparacion de 4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo.

Se cargan 435 g de tolueno y luego 302,1 g de hidruro de sodio bis (2-metoxietoxi) aluminio a R1. Se enfria la mezcla hasta -5 °C-5 °C. Se cargan 652,5 g de tolueno y 50 g de 4-(3-cloropropil)-4-ciano-piperidin-1-carboxilato de tert-butilo en R2 y se agita la mezcla hasta que este transparente. Se agrega la solucion de 4-(3-cloropropil)-4-cianopiperidin-1-carboxilato de tert-butilo en R2 gota a gota a R1, se controla la temperatura por debajo de 5 °C. Se agita la mezcla en R1 durante 0,5 horas a -5 °C ~5 °C, luego se calienta la mezcla hasta 15-20 °C y se agita durante 1-3 horas. Se cargan 25 g de carbonato de sodio en R2, luego se agregan 1500 g de agua y se enfria la mezcla hasta 0-10 °C. Se agrega la mezcla en R1 gota a gota a R2, controlando la temperatura por debajo de 10 °C. Se calienta la mezcla hasta 20-40 °C y se agita durante 10-20 minutos, luego se deja reposar durante 40-60 minutos. Se separa la capa acuosa y se lava la capa organica con 2 x 250 g de agua, luego 297,5 g de una solucion acuosa de cloruro de sodio al 25 %. Se concentra la capa organica hasta 100 g de peso total por debajo de 50 °C y luego se agregan 273,0 g de acetonitrilo. Se concentra la capa organica hasta 250 g de peso total por debajo de 50 °C del compuesto del titulo, 4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo, que se almacena como una solucion: espectro de masas (m/z): 255 (M+H).

Preparacion de 4-but-3-inil-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo; acido oxalico.

Se cargan en orden, 23,7 g de CH³CN, 10 g de tert-butil 4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato, 9,2 g de K²CO³y luego 8,4 g de 4-bromobut-1-ino a R1. Se calienta la mezcla hasta 65-70 °C y se agita la mezcla a 65-70 °C durante 12-18 horas. Se concentra la mezcla hasta un peso total de 30-40 g por debajo de 50 °C, luego se agregan 76 g de MTBE y 50 g de agua. Se agita la mezcla a 20-25 °C durante 30 minutos y luego se deja reposar hasta 30 minutos. Se separa la capa acuosa. Se prepara una solucion de 1 g de KOH en 49 g de agua y se agrega esta a la capa organica a 20-25 °C. Se agita la mezcla a 20-25 °C durante 30 minutos y luego se deja reposar durante 20-30 minutos a 20-25 °C. Se separa la capa acuosa y se lava la fase organica con 50 g de agua. Se concentra la fase organica a 40-50 g de peso total por debajo de 50 °C en R1. Se prepara una solucion de 7,4 g de dihidrato de acido oxalico en 39,5 g de acetona, luego se agregan gota a gota la solucion de acido oxalico/acetona en R1 a 20-25 °C. Se agita la suspension a 20-25 °C durante 2-3 horas y luego se filtra. Se lava la torta con 15,2 g de MTBE. Se suspende la torta en 89 g de THF y se agita la mezcla a 50 °C durante 6-8 horas. Se enfria la mezcla hasta 20-25 °C y se filtra. Se lava la torta con 17,8 g de THF. Nuevamente, se suspende la torta en 89 g de THF y se agita la mezcla a 50 °C durante 6-8 horas. Se enfria la mezcla hasta 20-25 °C y se filtra. Se lava la torta con 17,8 g de THF. Se seca la torta bajo vado a 50-60 °C durante 16-18 horas para proporcionar el compuesto del trtulo, 4-but-3-inil-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo; acido oxalico.

Preparacion del compuesto del trtulo final.

Se cargan un recipiente de 20 l equipado con una valvula de salida inferior con 4-but-3-inil-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo; acido oxalico (2,56 moles; 1,02 kg), hidroxido de potasio (solucion acuosa al 10 % p/p; 7,69 moles; 4,31 kg) y MTBE (34,19 moles; 4,06 l; 3,01 kg). Se agita la mezcla hasta que se formen dos fases claras. Se retira la capa organica y se extrae la capa acuosa con MTBE (1,5 l). Se combinan las capas organicas y se lavan con agua (4 l), luego con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio (4 l) y se concentran bajo presion reducida. Se anade tolueno (2 l) al residuo y se concentra bajo presion reducida. De nuevo, se agrega tolueno (2 l) al residuo y se concentra bajo presion reducida para obtener 8-but-3-inil-3,8-diazaespiro[5.5]undecano-3-carboxilato de tert-butilo (787 g; contiene aproximadamente 2 % p/p tolueno; rendimiento del 98 %)

A una mezcla de 8-but-3-inil-3,8-diazaespiro [5.5]undecano-3-carboxilato de tert-butilo (2,41 moles; 750,86 g), cloruro de zirconoceno (240,73 mmoles; 62,08 g), trietilamina (240,73 mmoles); 33,55 ml; 24,36 g), y 2-metiltetrahidrofurano (738 ml), se agregan 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (2,53 moles; 323,49 g). Se calienta la mezcla hasta 60 °C y se agita durante la noche. Se enfria la mezcla y se pasa a traves de un tapon de silica eluyendo con diclorometano. Se concentra el filtrado bajo presion reducida para obtener el compuesto del trtulo final, 4-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (1072 g, aproximadamente 94 % de pureza, 96 % de rendimiento).

Preparacion alternativa del compuesto del tUulo final.

Se anade clorhidrato de 4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (46,07 mmol) y carbonato de cesio (115,2 mmol) a una solucion de acetonitrilo (200 ml). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, se agregan 4-bromobutina (69,1 mmol) y se calienta la mezcla hasta reflujo con agitacion durante la noche. Se enfria a temperatura ambiente y se diluye con acetato de etilo (200 ml). Se filtra la reaccion a traves de una frita de vidrio enjuagando con acetato de etilo (2 x 100 ml). Se concentra la mezcla cruda bajo presion reducida, luego se agregan acetato de etilo (200 ml) y se lavan los extractos organicos con agua (200 ml) y salmuera (200 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida para producir 4-but-3-inil-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo crudo (13,6 g, 44,4 mmol): MS (m/z): 307,2 (M+H). A un matraz de fondo redondo bajo nitrogeno, se agregan 4-but-3-inil-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (44,4 mmol), trietilamina (4,44 mmol), cloruro de zirconoceno (4,44 mmol) y 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (48,8 mmol). Se calienta esta mezcla hasta 60 °C durante 3 horas, luego se agita durante la noche a temperatura ambiente. Se disuelve la mezcla en diclorometano (20 ml) y se purifica por cromatografia instantanea (330 g de cartucho de silica gel) eluyendo con acetato de etilo al 15 - 85 % en hexanos para producir el compuesto del trtulo final, 4-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (29,9 mmol) como aceite de color amarillo claro: MS (m/z): 435,2 (M+H).

Preparacion 10

4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo.

Esquema III, Etapa A: Se anaden acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metilindol-1- il]tetrahidropiran-2-il]metilo (27,8 mmol), 4-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (29,9 mmol) y carbonato de potasio (83,3 mmol) a una solucion de THF (150 ml) y agua (20 ml). Se purga la solucion con nitrogeno, luego se agregan acetato de paladio (1,1 mmol) y Xphos (1,1 mmol). Se calienta la mezcla hasta 65 °C durante 16 horas. Se enfna hasta temperatura ambiente y se diluye con acetato de etilo (200 ml) y agua (200 ml). Se separa y se lava la fase organica con agua (200 ml) y salmuera (200 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida. Se purifica el residuo mediante cromatograffa instantanea (330 g de cartucho de sflica gel) eluyendo con acetato de etilo al 10 - 100 % en diclorometano para producir el compuesto del trtulo (19,4 g, 22,6 mmol): MS (m/z): 858,0 (M+H).

Preparation 11

Aetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-[9-[2-(tert-butoxicarbonilamino)acetil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il]but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema III, Etapa B: Se agregan HCl 4N en 1,4-dioxano (112,5 mmol) a una solucion de 4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R)]3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro [5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (22,5 mmol) en diclorometano (200 ml) a temperatura ambiente. Se agita durante 3 horas, luego se concentra bajo presion reducida para producir clorhidrato de acetato de [[2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[[E]-4-(4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)but-1-enil]fenil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (22,5 mmol): MS (m/z): 758,0 (M+H). Se anade trietilamina (112,5 mmol) a una solucion de clorhidrato de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-(4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indo1-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (22,5 mmol) en diclorometano (200 ml). En un matraz separado, se agregan CDI (28,1 mmol) en porciones a una solucion de acido 2-(tert-butoxicarbonilamino)acetico (27 mmol) en diclorometano (50 ml). Despues de agitar durante 45 minutos a temperatura ambiente, se agrega la solucion a la solucion de amina preparada previamente y se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. Se lava con una solucion concentrada de bicarbonato de sodio (200 ml) y salmuera (200 ml). Se secan los compuestos organicos sobre sulfato de sodio, se filtran y se concentran bajo presion reducida para producir el compuesto del tftulo crudo (21,6 g, 22,5 mmol): MS (m/z): 915,2 (M+H).

Preparation 12

Clorhidrato de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-[9-(2-aminoacetil)-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il]but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema IV, Etapa A: Se agregan HCl 4N 1,4-dioxano (113,3 mmol) a una solucion de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-[9-[2-(tert-butoxicarbonilamino)acetil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il]but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (22,5 mmol) en diclorometano (200 ml). Se agita a temperatura ambiente durante 4,5 horas, luego se concentra bajo presion reducida para producir el compuesto del trtulo crudo (22,6 g, 22,5 mmol) como un solido color bronce: MS (m/z): 815,2 (M+H).

Ejemplo 1b

Smtesis alternativa de 1-isobutil-3-[2-[4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il]-2-oxo-etil]urea.

Esquema IV, Etapa B: Se agregan isocianato de isobutilo (30,6 mmol) a una solucion de clorhidrato de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-[9-(2-aminoacetil)-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il]but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (22,5 mmol) y diisopropiletilamina (113,3 mmol) en diclorometano (300 ml) y se enfna hasta 0 °C. Se calienta hasta temperatura ambiente y se agita durante 2 horas. Se dilue con agua (200 ml) y se separa la fase organica. Se lava la fase organica con salmuera (200 ml). Se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se concentra bajo presion reducida. Se anade metanol (100 ml) y metoxido de sodio (11,3 mmol). Se agita a temperatura ambiente durante 16 horas, luego se inactiva agregando un pequeno trozo de hielo seco. Se concentra bajo presion reducida. Se purifica por cromatograffa instantanea (400 g de cartucho C18) eluyendo con 5 - 80 % de acetonitrilo (0,1 % de acido formico) en agua (0,1 % de acido formico) en tres porciones. Se concentra bajo presion reducida para obtener el compuesto del titulo (13,4 g, 18 mmol) como una sal de acido formico que contiene pequenas impurezas. Se disuelve la sal (12 g) en agua (500 ml). Se neutraliza la solucion con una solucion concentrada de bicarbonato de sodio. Se recoge el precipitado resultante en una frita de vidrio y se enjuaga con agua (2 x 100 ml). Se purifica por cromatograffa instantanea (330 g de cartucho de silica gel) eluyendo con metanol al 15 % en diclorometano. Se concentran las fracciones del producto bajo presion reducida para producir el compuesto del tftulo (8,8 g, 11,8 mmol): MS (m/z): 746,6 (M+H). H1 RMN (400,31 MHz, DMSO-d6): 8 7,29 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,93 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 6,26 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,15 (dt, J = 16,0, 6,4 Hz, 1H), 5,88 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,09 (dd, J = 11,6, 6,0 Hz, 2H), 5,01 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,47 (t, 5,6 Hz, 1H), 4,13 (bs, 2H), 3,78 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,59 - 3,15 (m, 11H), 3,12 (d, 5,2 Hz, 1H), 2,76 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,34 - 2,08 (m, 9H), 1,61-1,17 (m, 10H), 0,78 (d, J = 6,8 Hz, 6H)

Preparacion 13

4-metilindolina

Metodo A

Esquema V, Etapa A: Se cargan 4-metiMH-indol (500 g; 1,0 equiv; 3,811 moles) y acido acetico (2000 ml) a un matraz de 20 l a temperatura ambiente. Se enfna la solucion hasta 0 °C (temperatura interna) y luego se agregan cianoborohidruro de sodio (359,2 g; 1,5 equiv; 5,71 moles) en 5 porciones iguales, mientras que no se permite que la mezcla de reaccion se caliente por encima de 10 °C. Cuando se completa la adicion, se agita la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante 2 horas. Se enfna la mezcla de reaccion hasta 0 °C y se agrega hielo (5 Kg). Se agrega una solucion de hidroxido de sodio (4 M) previamente enfriada (5 °C) muy lentamente para lograr un pH de mezcla de reaccion de 14. Se extrae la mezcla de reaccion con acetato de etilo (2X10L). Se combinan las capas organicas y se lavan con agua (1 X 10 l) y salmuera (1 X 10 l). Se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra bajo presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (460 g, 90 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 134 (M+1).

Metodo B

Esquema V, Etapa A: Se cargan acido trifluoroacetico (7,62 moles; 576,42 ml) en un matraz de 3 ml de 2000 ml, equipado con termometro, agitador magnetico, lrnea de nitrogeno y embudo de goteo. Se coloca el matraz en un bano de hielo/agua y se enfna la mezcla hasta 13 °C (temperatura interna). Se agrega 4-metil-1H-indol (762,33 mmoles; 94,25 ml; 100,00 g) durante 3 minutos, sin permitir que la temperatura de la mezcla de reaccion exceda los 25 °C. Se agita la mezcla durante aproximadamente 1 minuto despues de que se complete la adicion, permitiendo que la temperatura de la mezcla de reaccion alcance los 20 °C, luego se retira el matraz del bano de hielo y se agita durante 10 minutos a 20 °C. Se agrega trietilsilano (876,68 mmoles; 140,47 ml; 101,94 g) gota a gota a la reaccion durante 41 minutos, permitiendo que la temperatura suba hasta 25 °C, luego se mantiene la temperatura entre 25 °C y 30 °C usando un bano de agua fna segun sea necesario. Cuando la adicion este completa, se agita la mezcla de reaccion durante 80 minutos. Se enfna la mezcla de reaccion hasta 10 °C, luego se vierte en una mezcla de hielo (1000 g), acido clorhfdrico 5M (800 ml) y MTBE (2000 ml) con agitacion. Tenga en cuenta que es importante inactivar en un sistema bifasi

extractos organicos con acido clorhfdrico (400 ml; 2 M), luego acido clorhfdrico (2 x 200 ml; 2 M). Se combinan los extractos acuosos y se enfrain en agua helada. Se agrega 50 % p/p de NaOH para lograr un pH> 10 manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. Se extrae la mezcla acuosa con MTBE (1000 ml, luego 200 ml). Se combinan los extractos organicos, se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se concentran bajo presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (73 g; 68 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 134 (M+1).

Metodo C

Esquema V, Etapa A: se agrega una solucion de 4-metil-1H-indol, (114,35 mmoles; 15,00 g) en tetrahidrofurano (75,00 ml) a una solucion de monohidrato de acido p-toluensulfonico (137,22 mmoles; 23,63 g) en agua (75,00 ml) con agitacion a temperatura ambiente. Se agrega un 5 % de platino sobre carbono (Johnson Matthey Type 103; 1,50 g) bajo una manta de dioxido de carbono. Se coloca la mezcla bajo una atmosfera de hidrogeno (4,2 bar) y se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se diluye la mezcla de reaccion con hidroxido de sodio (solucion acuosa 2 M; 148,65 mmoles; 74,33 ml) y se agita con MTBE (150,00 ml). Se filtra la mezcla a traves de tierra de diatomeas y se lava la almohadilla con MTBE (50 ml). Se separa el filtrado y se extrae el acuoso con MTBE (100 ml). Se combinan las fases organicas, se secan sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtran y concentran bajo presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (14,80 g; 97,17 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 134 (M+1).

Preparacion 14

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindolin-1-il) tetrahidropiran-2-il]metilo.

Metodo A

Esquema V, Etapa B: Se carga en un matraz de tres bocas de 20 litros una solucion de 4-metilindolina (1000 g; 7,51 moles) en etanol:agua (8000 ml: 1000 ml) y D-glucosa (1480 g; 8,25 moles). Se calienta la mezcla durante 6 horas a 80 °C. Se concentra la mezcla bajo presion reducida y se disuleve el residuo en piridina: diclorometano (8000 ml: 8000 ml). Se anade dimetilaminopiridina (91,79 g; 0,75 moles) y se enfria la mezcla de reaccion hasta 10 °C (temperatura interna). Se anade anddrido acetico (9000 ml) gota a gota. Cuando se complete la adicion, se agita la mezcla de reaccion durante 1 hora a 45 °C y luego se agita durante la noche a temperatura ambiente. Se concentra la mezcla bajo presion reducida. Se anade acetato de etilo (20 l) y agua (10 l) al residuo. Se separa la capa organica y se extrae la capa acuosa con acetato de etilo (2 X 10 l). Se combinan las capas organicas y se lavan con una solucion saturada de acido dtrico (5 Kg) en agua. Se seca la capa organica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra bajo presion reducida. Se cristaliza el residuo en etanol para dar el compuesto del ritulo (3205,5 g; rendimiento del 92,11 %): espectro de masas (m/z): 464,2 (M+1).

Metodo B

Esquema V, Etapa B: D-glucosa humeda (517,30 mmoles; 93,20 g) con agua (66 ml) y luego se agregan 4-metilindolina (65,62 g; 492,67 mmoles) en etanol (394 ml). Se purga la mezcla con nitrogeno y se calienta hasta reflujo bajo atmosfera de nitrogeno durante la noche. Luego se enfrua hasta temperatura ambiente y se concentra bajo presion reducida. Al residuo resultante, se agregan diclorometano (394 ml), trietilamina (2,82 moles; 393,72 ml) y N,N-dimetil-4-piridinamina (24,63 mmoles; 3,01 g). Se enfria la mezcla en un bano de hielo y luego se agrega anhidrido de acido acetico (3,94 moles; 372,57 ml) gota a gota durante 30 minutos. Se concentra la mezcla bajo presion reducida, se diluye el residuo con acetato de etilo (984 ml) y se lava la mezcla con acido dtrico (solucion acuosa saturada; 50 ml) en agua (200 ml). Se separan las capas y se extrae la capa acuosa con acetato de etilo (600 ml y luego 300 ml). Se combinan los compuestos organicos, se lava con salmuera (600 ml) y se concentra bajo presion reducida. Se anade etanol (656 ml) y se mecla a 50 °C durante 10 minutos. Se enfria la mezcla a temperatura ambiente y luego en hielo/agua. Se filtra la mezcla resultante y se seca bajo presion reducida para obtener el compuesto del titulo (112,2 g; 49,14 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 464,2 (M+1).

Preparacion 15

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindol-1-il)tetrahidropiran-2-il]metilo.

Metodo A

Esquema V, Etapa C: Se carga acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindolin-1-il) tetrahidropiran-2-il]metilo (4200 g; 9,08 moles) a un matraz de 20 l. Se anade 1,4 dioxano (42000 ml) y se enfria la solucion hasta 10 °C. Se agrega DDQ (2057 g; 9,08 moles) en 5 porciones iguales manteniendo la temperatura a 10 °C. Despues de completar la adicion, se calienta la mezcla hasta temperatura ambiente y se agita durante 2 horas. Se filtra la mezcla de reaccion y se lava el solido con 1,4-dioxano (3 veces). Se concentra el filtrado bajo presion reducida y se purifica el residuo mediante cromatografia de columna eluyendo con acetato de etilo al 0 % -20 % en hexano. Se combinan fracciones puras con un lote separado de material preparado de manera similar a partir de 2500 g de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindolin-1-il)tetrahidropiran-2-il]metilo y se concentra bajo presion reducida. Se dicuelve el residuo en acetato de etilo (50 l) y se lava con una solucion saturada de bicarbonato de sodio (2 x 20 l) y luego agua (1 x 10 l). Se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra, se concentra bajo presion reducida y se cristaliza en etanol (10 l) para dar el compuesto del trtulo (4,632 kg; rendimiento 69 %): espectro de masas (m/z): 462,5 (M+1).

Metodo B

Esquema V, Etapa C: Se disuelve acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindolin-1-il)tetrahidropiran-2-ilmetilo (112,2 g ; 242,08 mmoles) en 1,4-dioxano (1,68 l) a temperatura ambiente. Se enfria la mezcla en un bano de hielo/agua, luego se agrega 4,5-dicloro-3,6-dioxo-ciclohexa-1,4-dieno-1,2-dicarbonitrilo (244,50 mmoles; 55,50 g) en porciones manteniendo la temperatura de la mezcla de reaccion por debajo de 15 °C. Cuando la adicion esta completa, se agita la mezcla durante 5 minutos, luego se retira del bano de hielo y se agita durante 5 minutos adicionales. Se filtra la mezcla y se lava el solido con 1,4-dioxano (561,00 mL). Se concentra el filtrado bajo presion reducida, luego se agrega etanol (561,00 mL) al residuo y se agita a 40 °C durante 20 minutos. Se enfria la mezcla en agua con hielo durante 15 min, se filtra y se lava el solido obtenido con etanol frio (100 ml). Se seca el solido bajo presion reducida para dar el compuesto del trtulo (82,5 g; rendimiento del 73,9 %): espectro de masas (m/z): 462,0 (M+1).

Preparation 16

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-(4-bromobenzoil)-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema V, Etapa D: A un reactor agitado de 20 l, purgado con nitrogeno, se carga en orden: tricloruro de aluminio (4,42 moles; 589,45 g) y diclorometano (3,40 l). Se enfria la camisa del reactor hasta 0 °C, luego se deja que la mezcla de reaccion se enfrie por debajo de 10 °C. Se anade cloruro de 4-bromobenzoilo (1,77 moles; 388,07 g) manteniendo la temperatura por debajo de 10 °C. Se agrega lentamente una solution de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(4-metilindol-1-il) tetrahidropiran-2-il]metilo (1,47 moles; 680,00 g) en diclorometano (3,40 l) manteniendo la temperatura de la mezcla de reaccion por debajo de 15 °C. Cuando se complete la adicion, se calienta la camisa del reactor hasta temperatura ambiente. Despues de 8 horas, se enfria la camisa del reactor hasta 4 °C y se agita la mezcla durante la noche. Se enfria la camisa hasta 0 °C y se bombea lentamente la mezcla en un segundo recipiente agitado que contiene agua helada (6,80 kg). Una vez completada la adicion, se deja que las fases se separen. Se concentra la fase organica bajo presion reducida. Al residuo resultante, se agrega MTBE (7,48 l) y se lava con acido clorhidrico (0,5 M; 5,10 l), luego con agua (7,48 l) y luego con bicarbonato de sodio (solucion al 5 % p/p en agua; 3,40 l). Se filtra la capa organica a traves de una capa de tierra de diatomeas (200 g), luego se concentra el filtrado bajo presion reducida. Se diluye el residuo con MTBE para obtener un volumen total de 4000 ml, luego se agrega esta solucion con agitation rapida, a una tasa de 35 ml/min a iso-hexano frio (0 °C) (13,60 l). Cuando la adicion esta completa, se agita la mezcla durante 15 minutos, luego se filtra. Se deja que el producto se seque con aire aspirado a traves de la torta del producto durante la noche. Se seca adicionalmente el solido bajo presion reducida para dar el compuesto del trtulo con una pureza del 63 % segun lo juzgado por LCMS (898,4 g; 59,60 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 644,2/646,2 (M+1).

Preparacion 17

Acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)-hidroxi-metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo

Esquema V, Etapa E: En un reactor agitado de 20 l, purgado con nitrogeno, se carga tetrahidroborato de sodio (2,15 moles; 81,36 g), luego tetrahidrofurano (3,50 l). Se colca la camisa del reactor hasta 0 °C y, cuando la mezcla de reaccion esta en 2 °C, se carga cloruro de cerio (III) heptahidratado (2,15 moles; 530 g). Se agrega lentamente una solucion de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-(4-bromobenzoil)-4-metil-indoM-il]tetrahidropirano-2-il]metilo (716,86 mmoles; 700,00 g) en tetrahidrofurano (3,01 l) no permitiendo que la temperatura de la mezcla de reaccion exceda los 10 °C. Se agrega una mezcla de tetrahidrofurano (504,00 mL) y etanol (504,00 mL) lentamente, luego se agregan etanol (504,00 mL) lentamente con la temperatura de la mezcla de reaccion que no exceda los 10 °C. (Nota: ambas adiciones de etanol deben hacerse lentamente y con cuidado, ya que puede verse una exotermia latente). Se agita la mezcla durante 10 minutos. En un recipiente separado, cargar acido clorhfdrico (2M; 7,00 l), agua (10,5 l) y hielo (10,5 kg), luego se bombea lentamente la mezcla de reaccion en la mezcla fria de acido clorhfdrico. Se extrae la mezcla con acetato de etilo (5,07 l, luego 2,66 l) y se combinan los extractos organicos. Se lavan los extractos organicos combinados con bicarbonato de sodio (solucion acuosa al 5 % p/v; 3,50 l), luego cloruro de sodio (solucion acuosa al 10 % p/v; 3,50 l), se secan sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentran bajo presion reducida. Se disuelve el residuo resultante en MTBE (1,00 l) y se concentra bajo presion reducida para obtener el compuesto del trtulo en forma de una mezcla de diastereomeros con suficiente pureza para usarlos sin purification adicional en la siguiente etapa: espectro de masas (m/z): 628,2/630,2 (M+1-18).

Preparation 18

Esquema V, Etapa F: A un reactor de temperatura controlada de 20 l cargar acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)-hidroxi-metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (1492,5 g; pureza del 65 %; 1,506 moles), luego acetonitrilo (4,87 l) y luego diclorometano (4,87 l). Se enfna la mezcla hasta 0 °C. Se anade trietilsilano (3,77 moles; 437,83 g) durante 5 minutos. Ajustar la camisa del reactor hasta -5 °C. Cuando la temperatura de la mezcla de reaccion sea de -2 °C, se comienza la adicion de eterato de trifluoruro de boro (3,77 moles; 534,4 g). Nota: al comienzo, esta adicion da como resultado una exotermia significativa (la temperatura aumenta hasta 8 °C durante los primeros ~10 ml de adicion). Una vez que el evento exotermico inicial haya tenido lugar, se agrega el resto del eterato de trifluoruro de boro a una tasa para mantener la temperatura entre 5 °C y 7 °C. Cuando la adicion esta completa, se agita la mezcla de reaccion a 5 °C durante 50 minutos. Se carga un matraz de vidrio de 50 l equipado con una valvula de salida inferior con hielo (6 kg) y luego agua (~15C; 3,74 Kg). Se anade bicarbonato de sodio (11,16 moles; 937,55 g) y se agita la mezcla durante 5 minutos. Se bombea la mezcla de reaccion en la mezcla de bicarbonato de sodio durante aproximadamente 5 minutos. Se observa un poco de efervescencia, pero no hay tendencia a formar espuma. Se anade acetato de etilo (17,04 l) y se agita la mezcla durante 10 minutos. Se detiene la agitation y se deja reposar la mezcla durante 30 minutos. Se separan las capas, se lava la fase organica con salmuera (4,87 l) y se concentra bajo presion reducida. Se divide la mezcla en dos porciones aproximadamente iguales y se purifica cada una a traves de una almohadilla de sflica de 4,5 kg eluyendo con diclorometano. Se concentran las fracciones apropiadas para obtener el compuesto del trtulo (990 g, aproximadamente 70 % de pureza (segun lo determinado por RMN cuantitativa; 73 % de rendimiento de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-(4-bromobenzoil)-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo): espectro de masas (m/z): 630,2/632,2 (M+1).

Preparacion 19

4-[(E)-4-[4-[[4-metil-l-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo.

Esquema V, Etapa G: A un reactor de temperatura controlada de 20 l cargar acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[(4-bromofenil)metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (1,37 moles; 1,18 kg; 73 % de pureza), 8-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-3-enil]-3,8-diazaespiro[5.5]undecano-3-carboxilato (1,79 moles; 776,46 g), carbonato de potasio (3,85 moles; 532,03 g), THF (11,80 l) y agua (1,18 l). Se desgasifica la mezcla por purga subsuperficial con nitrogeno durante 30 minutos y luego se agregan Pd(OAc)2 (54,99 mmoles; 12,35 g) y XPhos (54,99 mmoles; 26,22 g). Se calienta la mezcla hasta 65 °C y se agita durante la noche. Se cargan XPhos (13,75 mmoles; 6,55 g) y Pd(OAc)2 (13,75 mmoles; 3,09 g) adicionales y se continua agitando a 65 °C durante aproximadamente 1 hora. Se prepara una solucion de 8-[(E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) but-3-enil]-3,8- diazaespiro [5.5]undecano-3-carboxilato de tert-butilo (343,71 mmoles; 149,32 g) en THF (500 ml) y se desgasifica mediante purga subsuperficial con nitrogeno durante 5 minutos. Se agrega esta solucion a la mezcla de reaccion principal y se continua agitando a 65 °C durante aproximadamente 3 horas. Se enfria la mezcla de reaccion hasta temperatura ambiente y se bombea en un recipiente de 50 l equipado con una valvula de salida inferior. Se diluye la mezcla con isohexano (11,80 l) y se lava con salmuera (11,80 l). Se separan las capas y se filtra la fase organica a traves de una almohadilla de silica gel (2,95 kg). Se lava la almohadilla dos veces con una mezcla de THF (5,90 l) e iso-hexano (5,90 l). Se concentra el filtrado bajo presion reducida para obtener el compuesto del trtulo (1,695 kg; pureza del 62 % segun la RMN cuantitativa; rendimiento del 88 %), espectro de masas (m/z): 858,4 (M+1).

Preparation 20

Dihidrocloruro de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-(4,9-diazoniaspiro[5.5]undecan-4-il)but-1-enil]fenil]metil]-4-metil-indol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo.

Esquema V, Etapa H: Se disuelve 4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi -6-(acetoximetil) tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de tert-butilo (1,22 moles; 1,68 kg) en diclorometano (8,36 l) y se agrega cloruro de hidrogeno (4M en dioxano; 8,52 moles; 2,13 l) manteniendo la reaccion por debajo de 30 °C. Se agita la reaccion a temperatura ambiente durante la noche. Se concentra la mezcla bajo presion reducida. Al residuo se agrega diclorometano (1,04 l) con agitation. Se agrega la solucion resultante lentamente a MTBE (10,45 l) con agitacion. Se recoge el solido resultante por filtration y se lava la torta con MTBE (2 l). Se seca el solido bajo presion reducida para dar el compuesto del trtulo (1,49 kg, 66 % de pureza; 97,19 % de rendimiento): espectro de masas (m/z): 758,4 [M (base libre)+1].

Ejemplo 1c

Smtesis alternativa de 1-isobutil-3-[2-[4-[(E)-4-[4-[[4-metil-1-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidropiran-2-il]indol-3-il]metil]fenil]but-3-enil]-4,9-diazaespiro [5.5]undecan-9-il]-2-oxo-etil]urea.

Esquema V, Etapa I: a un reactor de 10 l con camisa ajustada a 25 °C, se agrega: dihidrocloruro de acetato de [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetoxi-6-[3-[[4-[(E)-4-(4,9-diazoniaespiro[5.5]undecan-4-il)but-1-enil]fenil]metil]-4-metilindol-1-il]tetrahidropiran-2-il]metilo (782,34 mmoles; 650,0 g), diclorometano (2,35 l) y luego trietilamina (3,91 moles; 545,22 ml). Se agita la mezcla durante 10 minutos. Se marca este reactor A. Se carga un matraz de 20 l separado con acido 2-(isobutilcarbamoilamino)acetico (899,69 mmoles; 183,30 g) y diclorometano (2,35 l), y luego se agrega 1,1'-carbonildiimidazol (938,80 mmoles) durante 1 minuto. Nota: Hay una cierta evolution del gas en la adicion de CDI. Se agita la mezcla durante 5 minutos. Se marca este reactor B. Se bombea la mezcla en el reactor B al reactor A a una tasa de -3800 ml/min. Se agita la reaccion a temperature ambiente durante aproximadamente 2 horas. En un matraz limpio, se agregan acido 2-(isobutilcarbamoilamino)acetico (89,97 mmoles; 18,33 g) y diclorometano (234,7 ml) y luego 1,1'-carbonildiimidazol (93,88 mmoles; 15,22 g). Se agita la mezcla durante 5 minutos y luego se agrega al reactor A. Se agita la mezcla durante aproximadamente 10 minutos. Se bombea la mezcla de reaccion en agua (5,04 l) y se agita. Se detiene la agitacion, se separa la fase organica y se concentra bajo presion reducida. Se disuelve el residuo en metanol (38,66 moles; 1,56 l; 1,24 kg) y se agrega metoxido de sodio (25 % p/p en MeOH; 1,56 moles; 352,21 ml) durante 10 minutos. Se agita la mezcla durante 30 minutos. Se concentra la mezcla de reaccion bajo presion reducida. Se dicuelve el residuo en metanol (250,00 ml) y se agrega diclorometano (1,50 l). Se agrega la solucion a MTBE agitado rapidamente (10,00 l) durante 5 minutos. Se filtra la suspension resultante y se seca al aire durante la noche. Se disuelve el solido en MeOH al 20 % en diclorometano (5 l) y se pasa a traves de una almohadilla de silica de 6 kg eluyendo con MeOH al 15 % v/v en diclorometano. Se combinan las fracciones apropiadas y se concentran bajo presion reducida. Luego, se purifica el residuo por cromatograffa instantanea (columna C18) eluyendo con acetonitrilo al 25 - 80 % en hidrogenocarbonato de amonio acuoso (10 mM) y luego se combinan las fracciones apropiadas para obtener el compuesto del tftulo; [a]D²⁰= -6,6 ° (C = 0,976, metanol).

Ensayos de transportador 1 de glucosa dependiente de sodio (SGLT1)

El ADNc que codifica SGLT1 humano (slc5a1, NM 000343) y SGLT1 de raton (slc5a1, NM 019810.4) se adquieren de Openbiosystems. El ADNc se clona en pcDNA3.1 para la expresion en mairnferos y se transfecta de manera estable en celulas de ovario de hamster chino (CHO)-K1 utilizando procedimientos estandar de transfeccion en mamnferos. Se selecciona un subclon que expresa SGLT de cada lmea celular que sobreexpresa con base en la resistencia a la neomicina (Geneticin, Invitrogen) y la actividad en el ensayo de captacion de ¹⁴C-a-metil-D-glucopiranosida (¹⁴C-AMG) (vease mas abajo). Las celulas estables que expresan SGLT se mantienen utilizando tecnicas estandar de cultivo celular.

La actividad de SGLT se mide como la captacion de ¹⁴C-AMG dependiente de sodio en las lmeas celulares anteriores que se describen a continuacion. Se siembran cien ml de medio de cultivo que contiene 30.000 celulas en cada pocillo de una placa BioCoat poli-D-lisina de 96 pocillos (Becton Dickson) y se cultivan a 37 °C durante la noche. El medio de cultivo se aspira y las celulas se lavan dos veces con 200 ml de tampon de reaccion (140 mM NaCl, 2 mM KCl, 1 mM CaCl², MgC^hy 14 mM acido N-2-hidroetilpiperrazina-N-2-etanosulfonico (Hepes), pH 7,5). El exceso de tampon se extrae sobre toallas de papel. Se anaden treinta y cinco ml de tampon de reaccion a cada pocillo. Se dispensan cinco ml de un 10 % de dimetilsulfoxido (DMSO) en tampon de reaccion que contiene concentraciones variables de compuesto de prueba o ningun compuesto como control, en cada pocillo. La reaccion se inicia al agregar 10 ml de ¹⁴C-AMG en el tampon de reaccion para obtener una concentracion final de 4 mM. La placa se incuba a 37 °C durante 125 minutos. La reaccion se termina aspirando el tampon de reaccion y luego se lava tres veces con 200 ml de tampon de reaccion enfriado con hielo. La aspiracion manual se aplica para garantizar la eliminacion completa del tampon de reaccion. Se anaden diez ml de NaOH 0,1 N a cada pocillo y luego se agregan 100 ml de coctel de centelleo Supermix (PerkinElmer). Despues de mezclar, la senal de centelleo en la placa se cuenta en un MicroBeta (PerkinElmer). Se ajusta una curva de respuesta de diez dosis a un modelo empmco de cuatro parametros utilizando ActivityBase (ID Business Solution) para determinar la concentracion de inhibidor en la inhibicion media maxima (IC⁵⁰).

El compuesto del Ejemplo 1 de este documento se prueba esencialmente como se describe anteriormente y muestra una IC⁵⁰para SGLT1 humano de 17,4 ± 14,6 nM (n = 9) y una IC⁵⁰para SGLT1 de raton de 13,6 ± 7,3 nM (n = 6). Estos datos demuestran que el compuesto del Ejemplo 1 inhibe SGLT1 humano y de raton in vitro.

Efectos reductores de la glucosa en la prueba oral de tolerancia a la glucosa (OGTT)

El compuesto de prueba se formula agregando un vehmulo de hidroxietilcelulosa al 1 %, Tween® 80 al 0,25 % p/antiespumante al 0,05 % al compuesto de prueba previamente pesado para obtener una solucion de 1 mg/ml. La mezcla se somete a sonicacion con sonda durante aproximadamente 1 minuto. Se agrega una barra de agitacion, y la suspension resultante se agita continuamente a lo largo de la dosificacion.

Uno de los dos conjuntos de ratones C57B1/6 alojados en una unica unidad se pesaron y los pesos corporales se utilizaron para determinar los grupos de estudio (n = 5), dentro de un intervalo de trabajo de 26-30 g. Despues del agrupamiento, los ratones se alimentan por via oral con 10 ml/kg de preparacion de compuesto de prueba o vehmulo, separados por treinta segundos. Estos ratones se utilizan para demostrar los efectos del compuesto en un OGTT, 18 horas despues. Ambos conjuntos de ratones se ponen en ayunas durante la noche al eliminar el acceso a los alimentos, al final de la tarde, antes del dfa de la prueba. A la manana siguiente, los ratones restantes, se pesan y se sangran (a traves de un corte de cola) para la glucosa. Los grupos de estudio (n = 5) se determinan utilizando valores de glucosa en ayunas, dentro de un intervalo de trabajo de 80-100 mg/dl. Despues del agrupamiento, los ratones son alimentados por via oral utilizando el mismo protocolo que el dfa anterior.

A las ocho y a las dieciocho horas despues de comenzar cada tratamiento con el compuesto respectivo, se toma una muestra de sangre de lmea base para medir la glucosa (del primer animal). El animal recibe inmediatamente una dosis oral de dextrosa al 50 % (Hospira®) a 3 g/kg. Las muestras de sangre se toman para la glucosa, exactamente treinta segundos de diferencia, por la vena de la cola, de tal manera que la sangre se recoge en cada animal a los 20, 40 y 60 minutes despues de la dosis de dextrosa.

Tabla 1. Efectos reductores de la glucosa en OGTT.

Resultados de la prueba de tolerancia a la glucosa oral Media ± SEM

ANOVA / Dunnett de 1 via en comparacion con el vehteulo *p<0,05, **p<0,01

Vehteulo @ 8 Ejemplo 1 10 Vehteulo @ 18 Ejemplo 1 10 horas despues mg/kg @ 8 horas horas despues mg/kg @ 18 horas de la dosis despues de la de la dosis despues de la dosis dosis

Glucosa (mg/dl)

0 Minutos 72,10 ± 5,47 70,2 ± 5,47 79,0 ± 1,17 87,7 ± 3,36

20 Minutos 327,9 ± 39,1 119,1 ± 11,4** 257,8 ± 19,1 116,1 ± 2,71**

40 Minutos 271,1 ± 47,7 127,7 ± 8,32** 202,8 ± 5,38 130,7 ± 4,47**

60 Minutos 176,5 ± 11,8 132,6 ± 8,85* 154,7 ± 5,32 124,1 ± 1,42**

AUC ajustada a la 10140± 1662 2752 ± 507** 6809± 419 1792 ± 254**

lmea base

Glucosa (mg/dl)

Glucosa Cmax 334,7 ± 40,9 134,7 ± 8,31** 261 ± 16,3 132,7 ± 3,27** Tiempo (minutos)

Glucosa Tmax 24 ± 4 48 ± 8* 24 ± 4 48 ± 4.9

Como se muestra en la tabla 1, el compuesto del Ejemplo 1 proporciona una disminucion en la excursion de la glucosa cuando se administra un bolo oral de dextrosa al 50 % (Hospira®) a un raton glicemico normal C57B1/6 ocho o dieciocho horas despues de la administracion. El ejemplo 1 tambien demuestra una disminucion en el area de glucosa ajustada en la lmea base bajo la curva (AUC) durante ambas OGTT. Ademas, el Ejemplo 1 reduce la concentracion maxima promedio de glucosa en plasma (Cmax) durante las OGTT mientras aumenta el tiempo promedio que tarda la glucosa en alcanzar la concentracion maxima (Tmax).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de formula:

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, que es:

3. Un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 para uso en terapia.

4. Un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 para uso en el tratamiento de la diabetes.

5. Un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 para uso en el tratamiento de la diabetes tipo 1.

6. Un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 para uso en el tratamiento de la diabetes tipo 2.

7. Una composition farmaceutica que comprende un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 con uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.