ES2708996T3

ES2708996T3 - Formulaciones estables de péptido glucagón

Info

Publication number: ES2708996T3
Application number: ES14838450T
Authority: ES
Inventors: Mahmoud Ameri; Peter Daddona; Yi Ao
Original assignee: ZP OPCO Inc
Current assignee: ZP OPCO Inc
Priority date: 2013-08-22
Filing date: 2014-08-22
Publication date: 2019-04-12
Anticipated expiration: 2034-08-22
Also published as: EP3035952A1; EP3035952B1; US9173924B2; US20150057605A1; WO2015027173A1; EP3035952A4

Abstract

Una formulación farmacéutica líquida que comprende a. 15-20% (p/p) de glucagón; b. 7,5-10% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir de un tensioactivo catiónico o neutro; c. 3,75-5% (p/p) de un aminoácido seleccionado a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina; d. 3,75-5% (p/p) de un ácido orgánico seleccionado a partir del grupo que consiste en ácido metanoico, ácido etanoico, ácido tartárico, ácido malónico, ácido glicólico, ácido málico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido caproico, ácido benzoico, ácido láctico, ácido propiónico y ácido sórbico; y e. un diluyente farmacéuticamente aceptable; y en donde la formulación tiene un pH entre 2 y 3.

Description

DESCRIPCION

Formulaciones estables de peptido glucagon

Campo tecnico

La presente invencion se refiere a la administracion de farmacos y mas particularmente a formulaciones de glucagon para administrar a traves de la piel.

Tecnica anterior

El glucagon se produce en los seres humanos a traves del pancreas. El glucagon se une a receptores espedficos en las celulas del higado e incrementa la liberacion de glucosa en el torrente sangumeo. Por lo tanto, se utiliza en el tratamiento de la diabetes como una medicacion de rescate cuando el nivel de azucar en sangre baja demasiado. El glucagon es un peptido corto que tiene 29 aminoacidos y un peso molecular de 3.483 kilodalton (kDa). La secuencia de aminoacidos en el glucagon es:

His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gin

1 5 10 15 20

Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr (SEQ ID NO: 1)

21 25 29

El glucagon tiene una conformacion altamente helicoidal en estado cristalino, pero forma una espiral aleatoria en una solucion diluida con aproximadamente 15% de helice alfa en el extremo C-terminal. En concentraciones mas altas, generalmente precipita y forma fibrillas. El glucagon se disuelve facilmente en solucion acuosa a pH inferior a 3 o superior a 9, pero precipita facilmente a pH entre 4 y 8. Las formulaciones hquidas de glucagon son altamente inestables y experimentan hidrolisis y desamidacion en varias posiciones (aminoacidos en la posicion 3, 9, 15, 20, 21 y 24) y por lo tanto las preparaciones farmaceuticas se proporcionan generalmente en recipientes dobles: polvos de glucagon en un lado y un diluyente hquido en el otro. Una solucion de glucagon se prepara entonces justo antes del uso. Los procedimientos que se llevan a cabo en general para mitigar la inestabilidad del glucagon en formulaciones hquidas incluyen el uso de dispersiones solidas, disolventes aproticos, tensioactivos, procesos realizados a baja temperatura y envasado en forma seca.

Las formulaciones diluidas se han preparado de forma que son estables hasta durante 6 dias y son utiles para el suministrar con una bomba (documento US2011/0097386). La concentracion de glucagon en esas formulaciones esta entre 0,8 mg/mL a 5 mg/mL y el pH esta entre 4 y 7. Los agentes estabilizantes son una combinacion de con centraciones bajas de un tensioactivo, tales como 1 mg/mL de LMPC y concentraciones elevadas de sacarido tales como 45 mg/mL de glucosa.

Compendio de las realizaciones

La invencion comprende nuevas formulaciones de glucagon adecuadas para la administracion transdermica. Se describen formulaciones hquidas estables con una concentracion elevada de glucagon. Estas formulaciones no forman geles o fibrillas y se pueden depositar facilmente sobre sustratos para formar un recubrimiento uniforme. Una vez depositado sobre un sustrato y seco, el glucagon en los recubrimientos tiene una estabilidad mejorada a lo largo del tiempo. El glucagon se puede reconstituir facilmente (como con fluidos corporales) sin formar un gel. Estas for mulaciones son adecuadas por ello para uso como recubrimientos sobre sustratos tales como parches de microagujas para la administracion transdermica de glucagon para el tratamiento de la hipoglucemia.

En un primer aspecto de la invencion, se proporciona una formulacion farmaceutica hquida que comprende 15-20% (p/p) de glucagon, 7,5-10% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado entre un tensioactivo cationico o neutro, 3,75-5% (p/p) de un aminoacido, 3,75-5% (p/p) de un acido organico y un diluyente farmaceuticamente aceptable; en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3. En algunas realizaciones, el tensioactivo es un fosfohpido. En algunas realizaciones, el fosfohpido es liso-miristoil fosfatidilcolina. En otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa. El aminoacido se selecciona a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina. El acido organico se selecciona a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico, acido dtrico, acido caproico, acido benzoico, acido lactico, acido propionico y acido sorbico. En ciertas realizaciones, la formulacion farmaceutica tiene una viscosidad en el intervalo de 20-200 centipoise (cP).

En ciertas realizaciones, en la formulacion farmaceutica, el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido tartarico. En otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico. En aun otras realizaciones, el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido tartarico. Todavia en otras realizaciones, el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico.

En un segundo aspecto de la invencion, se proporciona una formulacion farmaceutica solida que comprende 40-50% (p/p) de glucagon, 20-25% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir de un tensioactivo cationico o neutro, 10-12,5% (p/p) de un aminoacido, 10-12,5% (p/p) de un acido organico; en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3. En algunas realizaciones, el tensioactivo es un fosfoftpido. En algunas realizaciones, el fosfoftpido es liso-miristoil fosfatidilcolina. En otras realizaciones, el tensioactivo se selecciona a partir del grupo que consiste en glucosa, sacarosa, trehalosa y dextrosa, sustituido con una cadena de alquilo C8-C12. En otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa. El aminoacido se selecciona a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina. El acido organico se selecciona a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico y acido cftrico.

En aun otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido tartarico. En otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico. En otras realizaciones, el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es gluta mina y el acido organico es acido tartarico. En otras realizaciones, el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico.

En un tercer aspecto de la invencion, se proporciona un dispositivo medico para la administracion de un agente farmaceutico a traves de la piel, comprendiendo el dispositivo una matriz de microagujas que tiene recubriendolas, una composicion ftquida que comprende 15-20% (p/p) de glucagon, 7,5-10% (p/p) de un agente estabilizante selec cionado a partir de un tensioactivo cationico o neutro, 3,75-5% (p/p) de un aminoacido, 3,75-5% (p/p) de un acido organico y un diluyente farmaceuticamente aceptable; en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3. En algunas realizaciones, el dispositivo medico es portador de una dosis terapeutica de glucagon de o bien 1 mg para una dosis de adulto, o de 0,5 mg para una dosis pediatrica. En algunas realizaciones, el tensioactivo es un fosfoftpido. En al gunas realizaciones, el fosfoftpido es liso-miristoil fosfatidilcolina. En otras realizaciones, el tensioactivo se seleccio na a partir del grupo que consiste en glucosa, sacarosa, trehalosa, dextrosa, sustituido con una cadena de alquilo C8-C12. En otras realizaciones, el tensioactivo es decanoil sacarosa. En algunas otras realizaciones, el aminoacido se selecciona a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina. En algunas otras realizaciones, el acido organico se selecciona a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico y acido cftrico.

En un cuarto aspecto de la invencion, se proporciona un dispositivo medico para la administracion de un agente farmaceutico a traves de la piel, comprendiendo el dispositivo una matriz de microagujas que tiene recubriendolas, una composicion solida que comprende 40-50% (p/p) de glucagon, 20-25% (p/p) de un agente estabilizante selec cionado a partir de un tensioactivo cationico o neutro, 10-12,5% (p/p) de un aminoacido, 10-12,5% (p/p) de un acido organico; en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3. En algunas realizaciones, el dispositivo medico es porta dor de una dosis terapeutica de glucagon de o bien 1 mg para una dosis de adulto, o de 0,5 mg para una dosis pediatrica. En algunas realizaciones, el tensioactivo es un fosfoftpido. En algunas realizaciones, el fosfoftpido es lisomiristoil fosfatidilcolina. En otras realizaciones, el tensioactivo se selecciona a partir del grupo que consiste en gluco sa, sacarosa, trehalosa, dextrosa, sustituido con una cadena de alquilo C8-C12. En otras realizaciones, el tensioacti vo es decanoil sacarosa. En algunas otras realizaciones, el aminoacido se selecciona a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina. En algunas otras realizaciones, el acido organico se selecciona a partir del grupo que consis te en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico y acido cftrico.

En alguna realizacion, la formulacion solida es de tal modo que una vez aplicada sobre la piel de un paciente, el recubrimiento es disuelto por los fluidos corporales del paciente en menos de 30 minutos. En otras realizaciones, el recubrimiento es disuelto por los fluidos corporales del paciente en menos de 20 minutos. En otras realizaciones, el recubrimiento es disuelto por los fluidos corporales del paciente en menos de 10 minutos.

En un quinto aspecto de la invencion, se proporciona un procedimiento para recubrir un dispositivo medico que com prende el recubrimiento con una composicion farmaceutica ftquida de acuerdo con la invencion descrita en el pre sente documento, sobre un dispositivo medico y el secado de la composicion farmaceutica.

En un sexto aspecto de la invencion, se proporcionan metodos de tratamiento de un paciente que tiene un nivel bajo de azucar que comprende aplicar el dispositivo medico que tiene una formulacion solida aplicada sobre el mismo de acuerdo con la invencion descrita en la presente memoria, sobre la piel del paciente. En algunas realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon se alcanza en menos de 30 minutos. En otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon se alcanza en aproximadamente 10 min. En aun otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon asciende al menos a 5 ng/mL. En otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon asciende al menos a 10 ng/mL. En todavfa otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon asciende a aproximadamente 20 ng/mL.

En otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon de al menos 5 ng/mL se alcanza en menos de 20 minutos despues de la aplicacion del dispositivo sobre la piel del paciente. En aun otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon de al menos 5 ng/mL se alcanza en aproximadamente 10 minutos despues de la apli cacion del dispositivo sobre la piel del paciente. En aun otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de gluca gon de aproximadamente 10 ng/mL se alcanza en aproximadamente 10 minutos despues de la aplicacion del dispo sitivo sobre la piel del paciente. En todavfa otras realizaciones, una concentracion en suero sangumeo de glucagon es inferior a 10 ng/mL aproximadamente 60 minutes despues de la aplicacion del dispositivo sobre la piel del paciente.

En todavfa otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon de al menos 5 ng/mL se alcanza en menos de 20 minutos y la concentracion en suero sangumeo de glucagon es inferior a 10 ng/mL aproximadamente 40 minutos despues de la aplicacion del dispositivo sobre la piel del paciente. En todavfa otras realizaciones, una Cmax en suero sangumeo de glucagon de al menos 10 ng/mL se alcanza en menos de 20 minutos y la concentracion en suero sangumeo de glucagon es inferior a 10 ng/mL aproximadamente 30 minutos despues de la aplicacion del dispositivo sobre la piel del paciente.

Breve descripcion de los dibujos

Las caractensticas anteriores de las realizaciones se entenderan mas facilmente haciendo referencia a la siguiente descripcion detallada, tomada como referencia para los dibujos adjuntos, en los que:

La Figura 1 es una vista en perspectiva de una porcion de un ejemplo de un parche de microagujas, de acuerdo con la invencion.

La Figura 2 es una vista en perspectiva del parche de microagujas que se muestra en la Figura 1 que tiene un recubrimiento depositado sobre las microagujas, de acuerdo con la invencion.

La Figura 3 es una vista en seccion lateral de un parche de microagujas que tiene un soporte adhesivo, de acuerdo con la invencion.

La Figura 4 es una vista en seccion lateral de un anillo de retencion que tiene un parche de microagujas dispuesto en el mismo, de acuerdo con la invencion.

La Figura 5 es una vista en perspectiva del reten mostrado en la Figura 4.

La Figura 6 es una vista detallada en perspectiva de un aplicador y un reten, de acuerdo con la invencion.

La Figura 7 es una fotograffa SEM de un parche de microagujas recubiertas con glucagon de acuerdo con las reali zaciones de la invencion.

Las Figuras 8A y 8B son representaciones esquematicas del procedimiento de recubrir con formulaciones de gluca gon parches de microagujas de acuerdo con una realizacion de la invencion.

La Figura 9 es una grafica del tiempo frente a la viscosidad que compara el tiempo de gelificacion de las formulacio nes de glucagon utilizando diversos agentes estabilizantes preparados segun el Ejemplo 1.

La Figura 10 es una grafica del tiempo frente a la viscosidad que compara el tiempo de gelificacion de las formula ciones de glucagon utilizando diversas concentraciones de los agentes estabilizantes de liso-miristoil fosfatidilcolina (LMPC) preparados segun el Ejemplo 2.

La Figura 11 es una grafica del tiempo frente a la viscosidad que compara el tiempo de gelificacion de las formula ciones de glucagon con y sin glutamina, preparadas segun el Ejemplo 3.

La Figura 12 es una grafica del tiempo frente a la viscosidad que compara el tiempo de gelificacion de las formula ciones de glucagon con acido metanoico o tartarico, preparadas segun el Ejemplo 4.

La Figura 13 es una grafica del tiempo frente a la pureza que compara la estabilidad de las formulaciones de gluca gon con glutamina, LMPC y acido metanoico o tartarico, preparadas segun el Ejemplo 5 a 25°C y 40°C.

La Figura 14 es una grafica del tiempo frente a la pureza que compara la estabilidad de las formulaciones de gluca gon con glutamina, decanoil sacarosa y acido metanoico o tartarico, preparadas segun el Ejemplo 6 a 25°C y 40°C. La Figura 15 es una grafica que compara la farmacocinetica de las formulaciones de glucagon sobre el parche de microagujas, preparadas de acuerdo con una realizacion de la invencion, frente a la inyeccion subcutanea en el conejillo de indias sin pelo, que se detalla en el Ejemplo 7.

La Figura 16 es una grafica que compara la pureza frente al tiempo para la Formulacion 1. La grafica muestra la estabilidad de los sistemas de glucagon, en donde la matriz de titanio se habfa recubierto con la Formulacion 1 con 0,5 mg de glucagon, ensamblada con un anillo de retencion de policarbonato con un agente desecante comoldeado y un parche adhesivo de 5 cm2 y sellada termicamente en una bolsa de papel de aluminio purgada con nitrogeno. La Figura 17 es una grafica que compara la pureza frente al tiempo para la Formulacion 2. La grafica muestra la estabilidad de los sistemas de glucagon, en donde la matriz de titanio se habfa recubierto con la Formulacion 1 con 0,5 mg de glucagon, ensamblada con un anillo de retencion de policarbonato con un agente desecante comoldeado y un parche adhesivo de 5 cm2 y sellada termicamente en una bolsa de papel de aluminio purgada con nitrogeno.

La Figura 18 muestra los espectros de UV lejano (FUV) y dicrcusmo circular (CD) para glucagon extrafdo del Parche C y del Parche D. Los parches de glucagon ZP se evaluaron para analizar la fibrilacion del glucagon mediante CD despues de la disolucion de glucagon. Estos espectros de CD son compatibles con un peptido de tipo de glucagon en una conformacion predominantemente a-helicoidal como un tnmero soluble o un monomero helicoidal soluble, a diferencia de la estructura rica en lamina p en las fibrillas de glucagon. Como todavfa hay una cantidad significativa de estructura de espiral aleatoria, esto tambien es compatible con el glucagon monomerico.

Descripcion detallada de realizaciones especificas

Definiciones. A menos que se defina lo contrario, todos los terminos tecnicos y cientificos usados en esta descrip cion y las reivindicaciones adjuntas, tienen el mismo significado que el que entiende comunmente un experto ordinario en la tecnica a la que pertenece esta invencion.

Un alquil sacarido de acuerdo con la invencion significa un compuesto que comprende un resto carbohidrato del tipo R-CxH2y+zOy, en donde x e y son numeros enteros que vanan de 3-12, z es un numero que vana de -1 a 1, R puede ser un hidrogeno o un alquilo lineal o ramificado C1-C22 o grupos alquilo saturados o parcialmente insaturados, incluyendo metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octil-, nonil-, decil-, undecil-, dodecil-, tridecil-, tetradecil-, pentadecil-, hexadecil-, heptadecil-, octadecil-, nonadecil-, eicosanil-, heneicosanil-, docosanil-, etoil-, propoil-, butoil-, pentoil-, hexoil-, heptoil-, capriloil-, caproil-, lauroil-, miristoil-, palmitoil, estearoil-, araquidoil-, behenoil-, miristoleoil-, palmitoleoil-, oleoil-, linoleoil-, linolenoil- y araquidoneoil-; y el carbohidrato puede ser un resto de glucosa, dextrosa, maltosa, galactosa, lactosa, sacarosa, fructosa o ribosa. Un alquil sacarido preferido es decanoil sacarosa. Un tensioactivo cationico de acuerdo con la invencion significa un compuesto seleccionado a partir de una fosfatidilcolina y liso fosfatidilcolina, incluyendo liso-miristoil fosfocolina (LMPC).

Un acido organico significa acidos presentes en la naturaleza, incluyendo los acidos metanoico (formico), acetico, caproico, tartarico, cttrico, benzoico, lactico, propionico, sorbico, malonico, malico, glicolico y gluconico.

Un diluyente farmaceuticamente aceptable significa agua con o sin tampones, sales y similares.

El termino "transdermico" significa la administracion de un agente en y/o a traves de la piel para una terapia local o sistemica.

La expresion "flujo transdermico" significa la tasa de administracion transdermica.

El termino "coadministracion", tal y como se usa en esta memoria, significa que uno o unos agentes complementarios se administran por via transdermica, ya sea antes de que se administre el agente, antes y durante el flujo trans dermico del agente, durante el flujo transdermico del agente, durante y despues del flujo transdermico del agente, y/o despues del flujo transdermico del agente. Ademas, se pueden recubrir los microsalientes con dos o mas agen tes dando lugar a una coadministracion de los agentes.

La expresion "agente biologicamente activo" o "agente activo" tal y como se usa en esta memoria, se refiere a un compuesto de materia o una mezcla que contiene un farmaco que es farmacologicamente eficaz cuando se administra en una cantidad terapeuticamente eficaz.

La expresion "cantidad biologicamente eficaz" o "tasa biologicamente eficaz" se utiliza cuando el agente biologica mente activo es un agente farmaceuticamente activo y se refiere a la cantidad o a la tasa del agente farmacologicamente activo necesaria para efectuar el efecto terapeutico deseado, con frecuencia beneficioso. La cantidad de agente empleada en los recubrimientos sera la cantidad necesaria para administrar una cantidad terapeuticamente eficaz del agente para conseguir el resultado terapeutico deseado. En la practica, esto variara ampliamente dependiendo del agente farmacologicamente activo particular que esta siendo administrado, el sitio de administracion, la gravedad de la afeccion a tratar, el efecto terapeutico deseado y la disolucion y la cinetica de liberacion para la ad ministracion del agente desde el recubrimiento en los tejidos de la piel. No resulta util definir un intervalo preciso para la cantidad terapeuticamente eficaz del agente farmacologicamente activo incorporado en las microagujas y administrado por via transdermica, de acuerdo con los metodos descritos en este documento.

El termino "estabilidad" se refiere a la propiedad de una formulacion para conservar su nivel de pureza (% (p/p)), dentro de un 3% de su nivel de pureza de partida despues de un penodo de tiempo, preferiblemente 0-24 meses, 0 12 meses o 0-6 meses; a una temperatura de 0-50°C, preferentemente 4-42°C, mas preferiblemente 25-40°C; y a una humedad relativa (HR) de 0-100%, preferiblemente 25-85%, mas preferiblemente 60-75%. El termino "microagu jas" se refiere a elementos de perforacion que estan adaptados para perforar o cortar a traves del estrato corneo hasta la capa epidermica subyacente, o capas de la epidermis y dermis, de la piel de un animal vivo, particularmente un ser humano. Normalmente los elementos de perforacion tienen una longitud de hoja de menos de 500 pm y pre feriblemente menos de 400 pm. Los microsalientes tienen normalmente una anchura de aproximadamente 50 a 200 pm y un espesor de aproximadamente 5 a 50 pm. Los microsalientes pueden tener diversas formas, tales como agujas, agujas huecas, cuchillas, pivotes, punzones y combinaciones de las mismas.

La expresion "matriz de microagujas" o "parche de microagujas" tal y como se usa en esta memoria, se refiere a un sustrato que es portador de una pluralidad de microagujas dispuestas en una matriz para perforar el estrato corneo. El parche de microagujas se puede formar mediante el grabado o punzonado de una pluralidad de microagujas desde una lamina delgada y el plegado o doblado de las microagujas fuera del plano de la lamina para formar una configuracion tal como la mostrada en la Figura 1. El parche de microagujas tambien se puede formar de otras maneras conocidas, tales como mediante la formacion de una o varias tiras que tienen microagujas a lo largo de un borde de cada una de la o las tiras, como se describe en el documento patente de EE.UU. n° 6.050.988 de ALZA Corporation. El parche de microagujas tambien puede incluir agujas huecas que retienen un agente farmacologicamente activo seco.

Las formulaciones lfquidas y solidas secas de acuerdo con la invencion para aplicar a los parches de microagujas se preparan segun los procedimientos generales de la publicacion Pharm. Res. 27, 303-313 (2010). Una formulacion de glucagon lfquido que contiene un tensioactivo, un aminoacido y un acido organico se prepara de acuerdo con el siguiente procedimiento a modo de ejemplo. Se anaden trescientos mg de glucagon a 1,5 mL de solucion madre que contiene 50 mg/mL de acido tartarico, 50 mg/mL de glutamina y 100 mg/mL de agente tensioactivo. La suspension resultante se mezcla a continuacion durante 2-3 horas o hasta que se obtenga una solucion transparente de la for mulacion lfquida.

Una formulacion farmaceutica lfquida de acuerdo con la invencion puede contener 15-20% (p/p) de glucagon, 7,5 10% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir del grupo que consiste en un tensioactivo cationico o alquil sacarido, 3,75-5% (p/p) de un aminoacido; 3,75-5% (p/p) de un acido organico y un diluyente farmaceuticamente aceptable. El pH de la formulacion se ajusta a un valor entre 2 y 3.

La formulacion farmaceutica seca sobre los parches recubiertos, listos para envasar, de acuerdo con la invencion, puede contener 40-50% (p/p) de glucagon, 20-25% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir de o bien un tensioactivo cationico o un alquil sacarido, 10-12,5% (p/p) de un aminoacido, 10-12,5% (p/p) de un acido organi co. El pH de la formulacion es de 2 a 3.

El tensioactivo puede ser un fosfolfpido cationico tal como liso-miristoil fosfatidilcolina. El alquil sacarido puede ser sacarosa con una cadena de alquilo C8-C12 tal como decanoil sacarosa. El aminoacido puede ser glutamina o glicina. El acido organico puede ser acido metanoico o acido tartarico.

Las realizaciones de la presente invencion proporcionan una formulacion que contiene un agente biologicamente activo, glucagon, que cuando ha recubierto y se ha secado sobre una o varias microagujas de un parche de micro agujas, tal y como se muestra en la Figura 1, forma un recubrimiento estable con una mayor solubilizacion del farmaco despues de la insercion en la piel para una liberacion veloz en el torrente sangumeo del paciente y un comienzo rapido del tratamiento. Haciendo referencia a la Figura 1, las realizaciones de la presente invencion incluyen un dispositivo 22 que tiene una pluralidad de microagujas 24 que perforan el estrato corneo que se extiende bajo las mismas. Las microagujas estan adaptadas para perforar a traves del estrato corneo hasta la capa epidermica subyacente, o las capas de la epidermis y la dermis, pero no penetran tan profundamente como para alcanzar los lechos capilares y causar una hemorragia significativa. Haciendo referencia a la Figura 2, las microagujas son portadoras de un recubrimiento 26 de la formulacion seca del agente biologicamente activo, glucagon. Al perforar la capa del estrato corneo de la piel, el recubrimiento es disuelto por los fluidos corporales (fluidos intracelulares y fluidos extracelulares tales como el fluido intersticial) liberando de este modo el agente biologicamente activo, glucagon, en la piel para una absorcion en la corriente sangumea.

El recubrimiento solido se obtiene mediante el secado de una formulacion lfquida sobre las microagujas, tal y como se describe en el documento patente de EE.UU. n° 7.537.795 de ALZA Corporation. La formulacion lfquida es generalmente una formulacion acuosa. En un recubrimiento solido sobre un parche de microagujas, el farmaco esta pre sente normalmente en una cantidad de 1-2 mg por dosis unitaria. Con la adicion de los agentes de formulacion, la masa total del recubrimiento solido es menor de 4 mg por dosis unitaria. La matriz de microagujas 22 normalmente esta presente sobre un adhesivo 30 con un soporte 40 como se muestra en la Figura 3, que esta fijado a un anillo de retencion polimerico desechable 50 como se muestra en las Figuras 4 y 5. Este conjunto se envasa individualmente en una bolsa o una cubierta polimerica. El parche de microagujas 22 se aplica sobre la piel de un paciente con el uso de un dispositivo de despliegue 60, que se muestra en la Figura 6, sobre el que esta montado el anillo de reten cion 50 con el parche de microagujas 22. El dispositivo de despliegue se presiona, desprendiendose el parche 22 desde el anillo de retencion y empujando las microagujas 24 dentro de la piel del paciente. Alternativamente, el par che se puede montar en un aplicador de un solo uso, listo para que lo aplique el paciente, como se describe en el documento de solicitud de patente de EE.UU., 61/864.857 presentado el 12 de agosto de 2013.

Los parches de microagujas recubiertos para la administracion de glucagon se pueden preparar del modo siguiente. Los recubrimientos sobre las microagujas se pueden realizar por una variedad de metodos conocidos tales como recubrimiento por inmersion o pulverizacion. El recubrimiento por inmersion consiste en sumergir parcial o totalmente las microagujas en una formulacion preparada de acuerdo con la invencion. Alternativamente, se puede sumergir el dispositivo entero en la formulacion. En muchos casos, puede ser preferible recubrir solo las puntas de las micro agujas. Los aparatos y metodos para el recubrimiento de la punta de microagujas se describen en el documento patente de EE.UU. n° 6.855.372 de ALZA Corporation.

Un esquema del procedimiento se muestra en la Figura 8A. El aparato para el recubrimiento solo aplica recubrimientos a las propias microagujas y no sobre el sustrato que proyecta las microagujas. Una formulacion lfquida 10 preparada de acuerdo con la invencion se coloca en un deposito 12. Un tambor giratorio 14 esta sumergido parcialmente en el Kquido y se hace girar. El Kquido 10 forma una pelfcula delgada sobre el tambor de recubrimiento 16. Una cuchilla 18 controla el espesor de la pelfcula para que coincida con la longitud de las microagujas o ajusta la dosificacion sobre los parches. Un deslizador 20 que es portador del sustrato 22 con las microagujas 24 se coloca en el tambor 14 de manera que las microagujas 24 se banan o se sumergen en la pelfcula 16 (que se muestra en la seccion en la Figura 8B). A medida que el tambor 14 gira, el sustrato 22 se mueve de un lado a otro como para recubrir las microagujas de forma secuencial. El proceso se puede realizar de una manera continua, introduciendo una serie de sustratos en el aparato. El proceso se puede repetir para aumentar el espesor de los recubrimientos y de este modo variar la dosificacion de los parches. Esta tecnica de recubrimiento tiene la ventaja de formar un recubrimiento liso que no se desplaza facilmente de las microagujas durante la perforacion de la piel. Otras tecnicas de recubri miento tales como tecnicas de pulverizacion o impresion de microfluidos se pueden utilizar para depositar con preci sion un recubrimiento sobre las microagujas 24.

La dosificacion del glucagon sobre los parches de microagujas se puede controlar mediante la variacion de una serie de caractensticas, tales como el tamano del parche, el tamano de las microagujas, el espesor del recubrimiento sobre las microagujas y el area superficial de los recubrimientos sobre las microagujas. Los parches se pueden preparar por lo tanto para la administracion transdermica de glucagon en los intervalos de dosis y dosis siguientes: 0,25-2,0 mg/parche, preferiblemente 0,5-1,0 mg/parche; el tamano del parche puede ser de 5 cm2 a 10 cm2 con una matriz de microagujas de 2,5 cm2 a 8 cm2. El tratamiento de niveles bajos de azucar en sangre en un paciente puede requerir la aplicacion de un parche por incidente. Tambien se puede requerir la aplicacion de varios parches de for ma simultanea o secuencial hasta que el nivel de azucar en sangre ha alcanzado el intervalo normal de concentracion en suero de glucosa.

Las tecnicas para la aplicacion de los parches sobre la piel se han descrito en el documento de patente de EE.UU. n° 6.855.131. Para aplicar un parche de microagujas de acuerdo con la presente invencion, un envoltorio de papel de aluminio esteril que contiene el parche cargado con glucagon en un aplicador para un unico uso, listo para el empleo. El extremo proximal del sistema de parche/aplicador se presiona contra la piel para activar la liberacion del parche sobre la piel. Al cabo de 1-30 minutos, el glucagon se libera completamente desde el parche. A continuacion, el parche se puede retirary desechar.

La estabilizacion ffsica, especialmente minimizando la exposicion de las formulaciones de agentes biologicamente activos a lo largo del tiempo a la oxidacion y la hidrolisis, es una etapa importante para asegurar la eficacia de los agentes terapeuticos, en particular cuando el modo de administracion del agente terapeutico es mediante un dispositivo de administracion transdermica que tiene una pluralidad de microagujas recubiertas con un agente que contiene un recubrimiento biocompatible.

Por lo tanto, la preparacion y/o el envasado de las formulaciones en una atmosfera inerte seca o un vacfo parcial, sustancialmente exento de oxfgeno y agua, reduce sustancialmente o elimina un deterioro indeseable del agente biologicamente activo.

Las formulaciones de la presente invencion muestran una estabilidad superior y han demostrado conservar una pureza sustancial despues de un almacenamiento de hasta seis meses, cuando se almacenan bajo diversas condiciones de temperatura y humedad relativa. Ademas, las formulaciones de la presente invencion han demostrado que permanecen en una conformacion predominantemente a-helicoidal como un tnmero soluble o un monomero soluble o soluble helicoidal, en contraposicion a las estructuras ricas en lamina p que se encuentran en las fibrillas de gluca gon. La estabilidad superior y la limitada formacion de fibrillas de las formulaciones presentadas en este documento, ofrecen una mejora significativa sobre la terapeutica con glucagon actualmente disponible.

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ble, que se prepara y/o envasa en una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno o argon.

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompatible que recubre al menos una microaguja que perfora el estrato corneo, preferiblemente una pluralidad de microagujas que perforan el estrato corneo, de un dispositivo de administracion de microagujas, y se prepara y/o envasa en una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno o argon.

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ble, que se prepara y/o envasa en una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno o argon, y en presencia de un agente desecante.

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologicamente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ble, que se prepara y/o envasa en una camara revestida con papel de aluminio en una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno y un agente desecante.

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ^{ble, que se prepara y/o envasa en un va}d ^{o parcial.}

En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ble, que se prepara y/o envasa en una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno o en un vado parcial. En una realizacion, las composiciones, y los metodos para la formulacion y la administracion, de agentes biologica mente activos son particularmente adecuados para la administracion transdermica usando un dispositivo de adminis tracion con microagujas, en el que los agentes biologicamente activos se incluyen en un recubrimiento biocompati ble, que se prepara y/o envasa en una camara revestida con papel de aluminio que tiene una atmosfera inerte seca, preferiblemente de nitrogeno y un agente desecante.

Ejemplos

Materiales y Procedimientos Generales

El glucagon fue adquirido en BACHEM y fue producido por smtesis qrnmica con una pureza del 98,8% (p/p). Las formulaciones de glucagon se prepararon siguiendo los procedimientos de la publicacion Pharm. Res. 27, 303-313 (2010). Se preparo una formulacion ffquida que contema un tensioactivo, un aminoacido y un acido organico. Se anadieron trescientos mg de glucagon a 1,5 mL de solucion madre que contema 50 mg/mL de acido tartarico, 50 mg/mL de glutamina y 100 mg/mL de tensioactivo. A continuacion se mezclo la suspension resultante durante 2-3 horas o hasta que se obtuvo una solucion transparente de la formulacion ffquida.

Las pruebas de estabilidad ffsica de las formulaciones ffquidas de glucagon se llevaron a cabo utilizando un reometro (modelo CVOR150, Bohlin Instrument, Cranbury, NJ) configurado con una geometna de cono y placa (un angulo de cono de 1° y un radio de 10 mm). Setenta pL de la formulacion ffquida de glucagon se utilizaron para cada experimento. Para determinar el punto de gelificacion de una formulacion ffquida de glucagon particular, la muestra se sometio a cizallamiento a 2667 s'1 y las viscosidades se registraron cada 30 segundos. El punto de gelificacion se observo en la inflexion de la curva de la viscosidad frente al tiempo, es decir, en el punto en que se observo un rapido aumento de la viscosidad.

Ejemplo 1: Estudio del efecto de los tensioactivos sobre la estabilidad ffsica de las formulaciones ffquidas de gluca gon.

Un resumen de las diversas formulaciones se muestra a continuacion en la Tabla 1. Una comparacion de los perfiles de gelificacion entre las formulaciones se muestra en la Figura 9 y los resultados de punto de gelificacion se muestran en la Tabla 1 a continuacion.

Tabla 1:

Formulacion/Tensioactivo Glucagon Tensioactivo Glutamina Acido organico Punto(s) de gelifi

(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) cacion Decanoil sacarosa 200 100 N/A 50 1800 LMPC 200 100 N/A 50 1800 Polisorbato 20 200 2 N/A 50 1300

En un ffquido sometido a una tasa de cizallamiento fija, su viscosidad debe ser constante en el tiempo al principio y luego aumentar rapidamente, lo que indica el punto de gelificacion. Cuanto mas tiempo se tarda en gelificar, menor es la tendencia a la gelificacion de una formulacion. Los perfiles de viscosidad para las tres formulaciones que incorporan decanoil sacarosa, LMPC o polisorbato 20 como tensioactivo se presentan en la Figura 9. Las tres formulacio nes se sometieron a cizallamiento con una tasa de cizallamiento de 2667 s_1 a 8°C. El punto de inflexion (en donde la viscosidad empieza a aumentar) es de 1800 segundos, tanto para las formulaciones de decanoil sacarosa como de LMPC y 1300 segundos para la formulacion de polisorbato 20. Se sugiere que las formulaciones de decanoil sacarosa y LMPC son menos propensas a la gelificacion.

Ejemplo 2: Estudio del efecto de la concentracion del tensioactivo sobre la estabilidad ffsica de las formulaciones l^quidas de glucagon.

Un resumen de las diversas formulaciones se muestra en la Tabla 2 a continuacion. Una comparacion de los perfiles de gelificacion entre las formulaciones se muestra en la Figura 10 y los resultados de punto de gelificacion se muestran en la Tabla 2 a continuacion.

Tabla 2:

Formulacion Glucagon Tensioactivo Glutamina Acido organico Punto(s) de gelifica-(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) cion Glucagon:LMPC

1:1 200 200 50 50 2200

1:0,5 200 100 50 50 2200

1:0,25 200 50 50 50 1200

Resultados: Los perfiles de viscosidad para las tres formulaciones que incorporan concentraciones de LMPC a 50 mg/mL, 100 mg/mL y 200 mg/mL se presentan en la Figura 10. Las tres formulaciones se sometieron a cizallamiento con una tasa de cizallamiento de 2667 s-1 a 8°C. El punto de inflexion (en donde la viscosidad empieza a aumentar) es de 2200 segundos para las formulaciones que contienen concentraciones de LMPC de 100 mg/mL y 200 mg/mL (a una concentracion constante de glucagon de 200 mg/mL) y de 1200 segundos para la formulacion que contiene LMPC a una concentracion de 50 mg/mL. Esto sugiere que se requiere una concentracion minima de LMPC de 100 mg/mL (a una concentracion de glucagon de 200 mg/mL) para una formulacion que es menos susceptible a la gelificacion.

Ejemplo 3: Estudio del efecto de la glutamina sobre la estabilidad ffsica de las formulaciones lfquidas de glucagon. Un resumen de las diversas formulaciones se muestra en la Tabla 3 a continuacion. Una comparacion de los perfiles de gelificacion entre las formulaciones se muestra en la Figura 11 y los resultados de punto de gelificacion se muestran en la Tabla 3 a continuacion.

Tabla 3:

Formulacion/Aminoacido Glucagon Tensioactivo Glutamina Acido organico Punto(s) de gelifi

(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) cacion Sin 200 100 N/A 50 1400 Con glutamina 200 100 50 50 2200

Resultados: Los perfiles de viscosidad para las dos formulaciones que evaluan el efecto de la glutamina se presen tan en la Figura 11. Las dos formulaciones se sometieron a cizallamiento con una tasa de cizallamiento de 2667 s-1 a 8°C. El punto de inflexion (en donde la viscosidad empieza a aumentar) es de 2200 segundos para la formulacion que contiene glutamina y 1400 segundos para la formulacion que no contiene glutamina. Este resultado indica que se requiere glutamina para una formulacion que es menos susceptible a la gelificacion.

Ejemplo 4: Estudio del efecto del acido organico sobre la estabilidad ffsica de las formulaciones lfquidas de gluca gon.

Una comparacion de los perfiles de gelificacion entre las formulaciones se muestra en la Figura 12 y los resultados de punto de gelificacion se muestran en la Tabla 4 a continuacion.

Tabla 4:

Formulacion Glucagon LMPC Glutamina Acido organico Punto(s) de gelifica-(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) cion

(mg/mL)

Formulacion Glucagon LMPC Glutamina Acido organico Punto(s) de gelifica-(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) cion (mg/mL)

Acido metanoico 200 100 50 50 2200 Acido tartarico 200 100 50 50 2200

Los perfiles de viscosidad para las dos formulaciones que evaluan el efecto del acido tartarico y el acido metanoico, se presentan en la Figura 12. Las dos formulaciones se sometieron a cizallamiento con una tasa de cizallamiento de 2667 s-1 a 8°C. El punto de inflexion (en donde la viscosidad empieza a aumentar) es de 2200 segundos para ambas formulaciones. Este resultado indica que el acido metanoico y el acido tartarico no afectan negativamente a la estabilidad ffsica de las formulaciones de glucagon.

Ejemplo 5: Estabilidad de los recubrimientos de glucagon en parches de microagujas, efecto del acido organico con LMPC.

Un resumen de las diversas formulaciones se muestra en la Tabla 5 a continuacion.

La pureza del recubrimiento de glucagon se midio a dos temperaturas: 25°C y 40°C. La comparacion entre las for mulaciones se muestra en la Figura 13 y los resultados se muestran en las Tablas 6 y 7 a continuacion. Estos resultados demuestran que la formulacion que contiene acido tartarico muestra una mayor estabilidad despues de tres meses que la formulacion con acido metanoico, tanto a temperaturas de 25°C como de 40°C.

Tabla 5:

Formulacion Glucagon (mg/mL) LMPC (mg/mL) Glutamina (mg/mL) Acido organico % A (Acido metanoico) 200 100 50 5 C (Acido tartarico) 200 100 50 5

Tabla 6: Formulacion A

% (p/p) de pureza

Tiempo (meses)

25°C 40°C

0 99,1% ± 0,3 99,1 ± 0,3

1 98,4 ± 0,5 95,7 ± 1,5

3 97,5 ± 0,1 94,5 ± 0,6

Tabla 7: Formulacion C

% (p/p) de pureza

Tiempo (meses)

25°C 40°C

0 99,6% ± 0,13 99,6 ± 0,13

1 99,6 ± 0,13 99,4 ± 0,02

3 99,6 ± 0,03 99,4 ± 0,06

Ejemplo 6: Estabilidad de los recubrimientos de glucagon sobre parches de microagujas, efecto del acido organico con decanoil sacarosa.

Un resumen de las diversas formulaciones se muestra en la Tabla 8 a continuacion.

La pureza del recubrimiento de glucagon se midio a dos temperaturas: 25°C y 40°C. La comparacion entre las for mulaciones se muestra en la Figura 14 y los resultados se muestran en las Tablas 9 y 10 a continuacion. Estos resultados demuestran que la formulacion que contiene acido tartarico muestra una mayor estabilidad despues de un mes que la formulacion con acido metanoico a ambas temperaturas.

Tabla 8:

Formulacion Glucagon (mg/mL) Decanoil sacarosa (mg/mL) Glutamina (mg/mL) Acido organico % B (Acido metanoico) 200 100 50 5 D (Acido tartarico) 200 100 50 5

Tabla 9: Formulacion B

% (p/p) de pureza

Tiempo (meses)

25°C 40°C

0 99,5% ± 0,19 99,5 ± 0,19

1 98,2 ± 0,06 92,9 ± 0,31

3 92,9 ± 0,31 92,4 ± 0,17

Tabla 10: Formulacion D

% (p/p) de pureza

Tiempo (meses)

25°C 40°C

0 99,7% ± 0,0 99,7 ± 0,0

1 99,6 ± 0,02 99,5 ± 0,05

3 99,4 ± 0,07 99,2 ± 0,06

Ejemplo 7: Estudio farmacocinetico de parches de microagujas recubiertas con glucagon en comparacion con una inyeccion subcutanea.

La administracion in vivo de glucagon se realizo en un modelo de cobaya sin pelo siguiendo los protocolos para animales aprobados por el comite “ Institutional Animal Care and Use Committee” (IACUC). Las formulaciones C y D se recubrieron sobre los parches con microagujas a 0,5 mg/3 cm2. Los parches se aplicaron sobre la piel y se retiraron despues de 1 hora. Una inyeccion subcutanea (SC) de glucagon se preparo de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Lilly - Glucagon Rescue Kit®). Tanto el parche como la inyeccion se administraron a una dosis de 1 mg/kg.

Como se muestra en la Figura 15, los recubrimientos con la formulacion C y D proporcionan una liberacion rapida y elevada de glucagon tal y como se mide en los niveles sericos. La Tabla 11 muestra que la biodisponibilidad de la administracion de glucagon con el parche de microagujas recubiertas con la formulacion C o D, es un 83% y 86%, respectivamente, de la observada con la inyeccion SC. Esto indica que las formulaciones de glucagon se pueden volver a solubilizar eficazmente en la piel y el glucagon administrado es comparable a la inyeccion de glucagon disponible comercialmente.

Tabla 11:

Dosis por kg de Eficacia de la

Tratamiento ^Dosispeso corporal administracion Tmax media Cmax media AUCt media _(pg)/Animal(minutos) (ng/mL) (ng ■ h/ml)

(pg/kg) (%)

Inyeccion SC 424 1000 N/A 9 95 91

Parche de Glucagon

ZP, C

0,5 mg/3 cm2 497 956 69 13 135 76

Parche de Glucagon

ZP, D

0,5 mg/3 cm2 536 957 65 10 202 79

Las realizaciones de la invencion descritas anteriormente se entiende que son meramente ejemplares; numerosas variaciones y modificaciones seran evidentes para los expertos en la tecnica. Todas esas variaciones y modificaciones se entiende que estan dentro del alcance de la presente invencion, tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplo 8: Estabilidad de los recubrimientos de glucagon sobre un parche de microagujas

Se prepararon dos formulaciones lfquidas de glucagon. La Formulacion 1 comprende 200 mg/mL de glucagon, 100 mg/mL de LMPC (1-miristoil-2-hidroxi-sn-glicero-3-fosfocolina), 50 mg/mL de glutamina y 50 mg/mL de acido tartarico; la Formulacion 2 comprende 200 mg/mL de glucagon, 100 mg/mL de decanoil sacarosa (DS), 50 mg/mL de glu tamina y 50 mg/mL de acido tartarico.

Se recubrio una matriz de microagujas con cada formulacion lfquida de glucagon usando un metodo de recubrimiento por inmersion. Despues de recubrir con glucagon, se prepararon los sistemas para estudios de estabilidad, usan do componentes de parche que implicaban un anillo de retencion de policarbonato con un agente desecante comoldeado y un parche adhesivo de 5 cm2. El parche recubierto se termosello en una bolsa de papel de aluminio purgada con nitrogeno. Los sistemas finales se almacenaron bajo dos condiciones, 25°C/60% de humedad relativa (HR) y 40°C/75% de HR. Los parches recubiertos se evaluaron en tanto a la pureza en momentos determinados, inicial, 1 mes, 3 meses y 6 meses.

Se empleo una RP-HPLC para cuantificar la pureza del glucagon. Las impurezas relacionadas con el glucagon se separaron del glucagon natural usando una columna C18 ACE (3,0 mm iD x 150 mm, 3 pm) mantenida a 45°C. El glucagon eluido se detecto mediante UV a 214 nm. La fase movil implicaba una elucion en gradiente. La fase movil A comprendfa un 80% de tampon fosfato 0,15 M a pH = 2,7, un 20% de acetonitrilo; la fase movil B comprendfa un 60% de agua y un 40% de acetonitrilo. La cromatograffa se realizo con un sistema de HPLC (Waters 2695 Alliance, Milford MA) provisto de una bomba binaria, un cargador de muestras automatico termostatizado, un compartimento de columna termostatizado y un PAD 996. Los datos fueron recogidos y analizados empleando Empower.

Los datos de estabilidad se muestran en las Figuras 16 y 17 para las Formulaciones 1 y 2 respectivamente. La Tabla 12 resume los datos de pureza de las dos formulaciones en las dos condiciones de almacenamiento. En las condi ciones aceleradas de 40°C/75% de HR y cuando se almacenaban a 25°C/60% de HR, el glucagon conservaba una excelente estabilidad dentro del penodo de estudio.

Tabla 12: Resumen de los datos de estabilidad de los sistemas recubiertos con glucagon

Formulacion Composicion de la Formulacion Temperatura Pureza del glucagon (% (p/p))

(cantidades respectivas (mg/mL)) (°C)

Inicial 1 mes 3 meses 6 meses

Acido tartarico Glutamina LMPC 25 99,6 ± 0,1 99,6 ± 0,1 99,6 ± 0,0 99,4 ± 0,14 1

(50 mg/mL 50 mg/mL 100 mg/mL) 40 99,6 ± 0,1 99,4 ± 0,0 99,4 ± 0,1 99,0 ± 0,08

Acido tartarico Glutamina DS 25 99,7 ± 0,0 99,6 ± 0,0 99,4 ± 0,1 99,4 ± 0,02 2

(50 mg/mL 50 mg/mL 100 mg/mL) 40 99,7 ± 0,0 99,5 ± 0,1 99,2 ± 0,1 98,8 ± 0,02 Ejemplo 9: Espectros de dicrofsmo circular UV lejano de parches recubiertos con glucagon

El Parche C recubierto con la Formulacion 1 y el Parche D recubierto con la Formulacion 2, fueron colocados cada uno en un recipiente de extraccion por separado y se anadio 1,0 mL de solucion de la disolucion a cada recipiente. A continuacion, cada solucion se agito durante 2 minutos y se tomo una muestra para la espectroscopfa de dicrofsmo circular (CD). Cada muestra se analizo tambien para la DO280 (densidad optica a una longitud de onda de 280 nm) en una cubeta de cuarzo de 1 mm.

Concentracion de protema NKTT120 mediante mediciones de la DO280

La concentracion de protema en solucion se determino mediante la medicion de la DO280. Un coeficiente de extincion se calculo basandose en el peso molecular y las contribuciones de los aminoacidos aromaticos. Todas las me diciones se realizaron en un espectrofotometro Varian Cary 100 UV/Vis. El coeficiente de extincion molar calculado de 8480 M-1 cm'1 se utilizo para determinar un coeficiente de extincion espedfico estimado de E2 asf, tcm = 2,43 (basandose en un peso molecular de 3482,8 kDa). Se realizo una correccion de la dispersion de la luz restando la absorbancia a 320 nm.

Espectroscopfa del dicrofsmo circular

Un Modelo Aviv 202 con una celda controlada con temperatura controlada por peltier se utilizo para recoger todos los espectros de CD. Todos los espectros se recogieron a 25°C en cubetas de cuarzo. Las cubetas de cuarzo se analizaron usando acido canforsulfonico (CSA) para medir longitudes de trayectoria precisa de todas las celdas utilizadas. La celda de 0,1 mm se midio a 0,089 mm y la celda de 0,01 mm se midio a 0,0165 mm. Todos los espec tros de CD se indican en unidades de elipticidad residual media (0) usando un peso molecular de 3482,8 kDa y 29 residuos.

Los espectros de dicrofsmo circular (CD) de UV lejano (FUV) para glucagon extrafdo a partir de dos parches (Parche C y Parche D), mostrados en la Figura 18, son compatibles con un peptido de glucagon en una conformacion predominantemente a-helicoidal en forma de un tnmero soluble o un monomero helicoidal soluble, a diferencia de la estructura rica en lamina p en las fibrillas de glucagon. Los espectros tambien son compatibles con un peptido en un tnmero soluble o un monomero helicoidal soluble. Como todavfa hay una cantidad significativa de estructura de espiral aleatoria, esto tambien es compatible con el glucagon monomerico.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulacion farmaceutica ftquida que comprende

a. 15-20% (p/p) de glucagon;

b. 7,5-10% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir de un tensioactivo cationico o neutro;

c. 3,75-5% (p/p) de un aminoacido seleccionado a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina;

d. 3,75-5% (p/p) de un acido organico seleccionado a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico, acido cftrico, acido caproico, acido benzoico, acido lactico, acido propionico y acido sorbico; y

e. un diluyente farmaceuticamente aceptable; y

en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3.

2. La formulacion farmaceutica segun la reivindicacion 1, en donde la formulacion tiene una viscosidad en el intervalo de 20-200 cP.

3. Una formulacion farmaceutica solida que comprende

a. 40-50% (p/p) de glucagon;

b. 20-25% (p/p) de un agente estabilizante seleccionado a partir de un tensioactivo cationico o neutro;

c. 10-12,5% (p/p) de un aminoacido seleccionado a partir del grupo que consiste en glutamina y glicina; d. 10-12,5% (p/p) de un acido organico seleccionado a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico, acido cftrico, acido caproico, acido benzoico, acido lactico, acido propionico y acido sorbico; y

en donde la formulacion tiene un pH entre 2 y 3.

4. La formulacion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que tiene uno o varios de los siguientes casos:

(i) en donde el tensioactivo es un fosfoftpido, en donde el fosfoftpido es preferiblemente liso-miristoil fosfatidilcolina,

(ii) en donde el tensioactivo es decanoil sacarosa,

(iii) en donde el aminoacido es glutamina,

(iv) en donde el acido organico se selecciona a partir del grupo que consiste en acido metanoico y acido tartarico,

(v) en donde el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido tartarico,

(vi) en donde el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido metanoico,

(vii) en donde el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido tartarico, o

(viii) en donde el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glutamina y el acido organico es acido metanoico.

5. La formulacion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde se aplica uno o varios de los siguientes casos:

(ii) en donde el tensioactivo se selecciona a partir del grupo que consiste en glucosa, sacarosa, trehalosa y dextrosa, en donde dicho tensioactivo esta sustituido con una cadena de alquilo C8-C12,

(iii) en donde el aminoacido es glicina,

(iv) en donde el acido organico se selecciona a partir del grupo que consiste en acido metanoico, acido etanoico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido malico, acido gluconico y acido cftrico,

(v) en donde el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido metanoico,

(vi) en donde el tensioactivo es decanoil sacarosa, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico,

(vii) en donde el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido metanoico, y

(viii) en donde el tensioactivo es liso-miristoil fosfatidilcolina, el aminoacido es glicina y el acido organico es acido tartarico.

6. Un dispositivo medico para la administracion de un agente farmaceutico a traves de la piel, comprendiendo el dispositivo una matriz de microagujas que esta recubierta con una composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, siendo portador de una dosis terapeutica de glucagon de 0,25 - 2,0 mg, preferiblemente 0,5 -1 mg.

7. El dispositivo medico segun la reivindicacion 6, en el que la matriz de microagujas tiene un tamano de 2,5 cm2 a 8 cm2.

8. El dispositivo medico segun la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, que comprende ademas un dispositivo de despliegue y un anillo de retencion, en donde cuando se presiona el dispositivo de despliegue, la matriz de micro agujas se desprende del anillo de retencion.

9. El dispositivo medico segun cualquiera de las reivindicaciones 6-8, preparado por medio de:

a. un recubrimiento con una formulacion farmaceutica segun la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 sobre la matriz de microagujas; y

b. un secado de la composicion farmaceutica.

10. El dispositivo medico segun la reivindicacion 9, en donde el recubrimiento se selecciona a partir de:

a: un recubrimiento por inmersion

b: una pulverizacion.

11. La formulacion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o el dispositivo medico segun cualquie ra de las reivindicaciones 6-10, en donde la estabilidad de dicha formulacion farmaceutica se conserva despues de un almacenamiento a una temperatura seleccionada a partir de un intervalo que consiste en (i) de 0-50°C, (ii) 4-42°C y (iii) 25-40°C y una humedad relativa seleccionada a partir de un intervalo que consiste en (i) de 0-100%, (ii) 25 85% y (iii) 60-75%.