ES2644962T3

ES2644962T3 - Cápsulas que contiene composiciones líquidas basadas en aceite de agentes terapéuticos combinados para tratar la diabetes

Info

Publication number: ES2644962T3
Application number: ES13733831.5T
Authority: ES
Inventors: Miriam Kidron
Original assignee: Oramed Ltd
Current assignee: Oramed Ltd
Priority date: 2012-01-03
Filing date: 2013-01-03
Publication date: 2017-12-01
Anticipated expiration: 2033-01-03
Also published as: EP3260131A1; HK1203826A1; US20210077588A1; US10398762B2; US20230210956A1; NO2898107T3; CN104159598A; EP2800579A4; HK1251796A1; CN108904810A; US20190374615A1; EP2800579B1; JP6174601B2; US11395848B2; JP2015503578A; US20150017238A1; EP2800579A1; WO2013102899A1; US20240299503A1; DK2800579T3

Abstract

Una composición farmacéutica oral, comprendiendo la composición (a) una formulación líquida basada en aceite, comprendiendo dicha composición farmacéutica oral una insulina, un análogo de GLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde dicha formulación líquida basada en aceite está rodeada por un recubrimiento que resiste la degradación en el estómago; o (b) una combinación de i) una primera formulación líquida basada en aceite, comprendiendo dicha primera formulación líquida basada en aceite una insulina, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes; y ii) una segunda formulación líquida basada en aceite, comprendiendo dicha segunda formulación líquida basada en aceite un análogo de GLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde cada una de dicha primera formulación líquida basada en aceite y dicha segunda formulación líquida basada en aceite está rodeada por un recubrimiento que resiste la degradación en el estómago.

Description

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DESCRIPCION

Capsulas que contiene composiciones Ifquidas basadas en aceite de agentes terapeuticos combinados para tratar la diabetes

Campo de la invencion

Se describen en la presente memoria metodos y composiciones para tratar la diabetes mellitus.

Antecedentes

La diabetes, espedficamente la variedad de tipo II (NIDDM), ha surgido en el siglo veintiuno como una epidemia de proporciones globales. Numerosas complicaciones a largo plazo, que incluyen las que afectan a rinones, piernas, pies, ojos, corazon, nervios y circulacion sangumea, pueden ser resultado de la diabetes no controlada. La prevencion de estas afecciones requiere el tratamiento integral, que requiere la modificacion del estilo de vida y medicacion. Estan disponibles una serie de farmacos antidiabeticos eficaces y en general son seguros y bien tolerados. Todas los medicamentos se convierten en menos eficaces cuando la enfermedad avanza, y la mayona de los pacientes finalmente requieren insulina. La mayona de los medicamentos estan asociados con riesgos de hipoglucemia y aumento de peso, aunque no alteran el inexorable avance de la diabetes.

Los autores de la presente invencion estan desarrollando formulaciones administradas por via oral para farmacos basados en protemas tales como la insulina (Ziv et al. 1994; Nissan et al. 2000, Kidron et al. 2004, Eldor et al. 2010B, Eldor et al. 2010C). Uno de dichos productos de insulina oral esta programado para probar en ensayos en fase II y actualmente se esta revisando su estado de PEI.

La hormona incretina peptido similar al glucagon de tipo 1 (GLP-1), secretado en minutos despues de ingerir alimento, esta asociada con la induccion de la liberacion de insulina. Las terapias basadas en GLP-1 son opciones de tratamiento para la diabetes mellitus tipo 2 (DMT2) que actuan a traves de una variedad de mecanismos complementarios. El aspecto mas curioso de las incretinas es el hecho de que producen la liberacion de insulina de una forma dependiente de glucosa y se cree que tienen un riesgo bajo de inducir hipoglucemia. Ademas, parece que las incretinas son neutras para el peso (o reductoras de peso), preservan la masa de celulas beta y posiblemente tambien inducen la neogenesis de celulas que segregan insulina.

Sin embargo, el uso clmico del GLP-1 natural esta limitado debido a su rapida inactivacion enzimatica que da como resultado una semivida de 2-3 minutos. Para superar este obstaculo, se han disenado y ensayado peptidos resistentes a la degradacion de accion prolongada, tanto naturales como sinteticos, denominados analogos o agentes mimeticos de GLP-1.

Hasta la fecha, los analogos de GLP-1 solo estan disponibles como formas farmaceuticas inyectables. Los autores de la presente invencion estan desarrollando una capsula del analogo de GLP-1 exenatida oral. Un primer ensayo en seres humanos (n=4) probando la seguridad en seres humanos demostro que retema la funcionalidad biologica de la exenatida administrada por via oral (Eldor et al. 2010A).

El documento US 2011/014247 A describe composiciones que incluyen una protema y al menos dos inhibidores de proteasa. El documento WO 2009/136392 A describe composiciones que comprenden Byetta, aceite de pescado y un inhibidor de proteasa. El documento US 2004/097410 A describe un metodo de preparacion de una formulacion de insulina en aceite administrada por via oral. El documento EP 0351651 A describe la absorcion en el torrente sangumeo de insulina administrada por via no parenteral.

Resumen

Segun el conocimiento de los autores de la invencion, no se han probado formulaciones de insulina oral en combinacion con formulaciones de analogo de GLP-1 oral. Los datos proporcionados en la presente invencion ilustran una interaccion cooperativa fuerte, no reconocida previamente, entre estos componentes cuando se formulan como se describe en la presente memoria. Esto permite un potente efecto antidiabetico en una forma conveniente que facilita la observancia del paciente y tambien imita el metabolismo fisiologico de primer paso de la insulina y gLP-1. Estos resultados proporcionan una ruta a una clase completamente nueva de modalidades terapeuticas.

Los terminos "protema" y "peptido" se usan de forma intercambiable en la presente memoria. Ninguno de los terminos pretende conferir una limitacion del numero de aminoacidos presente, excepto donde se indique explfcitamente una limitacion.

Breve descripcion de los dibujos

Las siguientes figuras son a modo de ejemplo ilustrativo y no se pretende que se tomen como limitantes de la invencion reivindicada.

Figura 1. Ensayo de diferentes formulaciones emulsionantes. La puntuacion de acumulacion de espuma era de 1-5;

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donde 1 indica que no hay espuma, y 5 indica que no hay Ifquido visible debido a la espuma. Para el ensayo de suspension, los numeros 1-5 indican separacion de fase completa; separacion de fase parcial con algunas burbujas de aceite mas grandes; consistencia lechosa, burbuja de aceite pequena; no hay burbujas inicialmente, con posterior separacion de fase; y emulsion estable, respectivamente.

Figuras 2A y 2B. Perfiles de glucosa en la sangre despues de administracion de formulaciones de insulina oral que contienen diferentes emulsionantes. 2A: Formulacion A (superior izquierda), B (inferior izquierda), C (superior derecha) y D (inferior derecha), 2B: Formulaciones E (izquierda) y F (derecha).

Figura 3. Perfiles de glucosa en la sangre despues de administracion de exenatida oral e insulina oral a cerdos. Cerdos comerciales en ayunas se trataron con 150 mcg de exenatida, 8 mg de insulina o la combinacion de los mismos, 30 minutos antes de la ingestion calorica. Se extrajeron muestras de 1 ml de sangre periodicamente a lo largo del periodo de observacion de 180 minutos para determinar las concentraciones de glucosa.

Descripcion detallada de las realizaciones

Se proporciona en la presente memoria una composicion farmaceutica para el suministro oral, que comprende una formulacion lfquida basada en aceite, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un analogo de gLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago.

Otra realizacion proporciona una composicion farmaceutica oral multicomponentes, que comprende: (a) una primera formulacion lfquida basada en aceite, comprendiendo la primera formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes; y (b) una segunda formulacion lfquida basada en aceite, comprendiendo la segunda formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes; en donde cada una de la primera formulacion lfquida basada en aceite y la segunda formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. En algunas realizaciones, las dos formulaciones lfquidas pueden estar en formas farmaceuticas separadas. En otras realizaciones, las dos formulaciones lfquidas estan en la misma forma farmaceutica; por ejemplo, en compartimientos encerrados separados dentro de la misma pfldora.

"Lfquido" como se usa en la presente memoria se refiere a una fase que fluye libremente y tiene un volumen constante en condiciones ambiente. El aceite de pescado, por ejemplo, es un lfquido en condiciones ambiente. El termino incluye soluciones, suspensiones basadas en aceite y combinaciones de las mismas. En realizaciones alternativas, el termino se puede referir a una composicion que tiene una viscosidad dentro del intervalo de 1-1000 milipascal.segundo, inclusive, a 20°C.

En algunas realizaciones, los diferentes componentes de la composicion farmaceutica multicomponentes estan indicados para la coadministracion juntos. "Coadministracion" en relacion con esto, se puede referir a la administracion simultanea o, en otra realizacion, a la administracion en el espacio de 30 minutos uno de otro. En otras realizaciones mas, los diferentes componentes estan indicados para la administracion en un orden particular, separados por un intervalo de tiempo fijado que tfpicamente sera 30 minutos o menos. Por ejemplo, la forma farmaceutica que contiene insulina puede estar indicada para la administracion 2-10 minutos despues de la forma farmaceutica que contiene exenatida; en otras realizaciones, 10-20 minutos despues de la forma farmaceutica que contiene exenatida; en otras realizaciones, 20-30 minutos despues de la forma farmaceutica que contiene exenatida; y en otras realizaciones, 30-60 minutos despues de la forma farmaceutica que contiene exenatida. Las formas farmaceuticas orales tales como las proporcionadas en la presente memoria se prestan a la administracion secuencial mas que a las formas farmaceuticas inyectadas, puesto que los regfmenes que requieren inyecciones repetidas es probable que esten asociadas con tasas de observancia bajas.

De acuerdo con otros aspectos, se proporciona un medicamento de combinacion para el tratamiento de la diabetes tipo 2, comprendiendo dicho medicamento de combinacion

- insulina, al menos un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, y

- un analogo de GLP-1 del grupo que consiste en exenatida, liraglutida, AC3174, taspoglutida, lixisenatida, semaglutida, albiglutida, exendina-9, LY2189265 y CJC-1134-PC,

todos comprendidos conjuntamente en una formulacion lfquida basada en aceite en una forma farmaceutica para suministro oral.

Protemas de insulina y analogos de GLP-1

Las protemas de insulina y los analogos de GLP-1 para usar como se describe en la presente memoria, en algunas realizaciones, se afslan antes de su introduccion en las composiciones farmaceuticas prescritas. "Aislado" en relacion con esto excluye la provision de la insulina y/o el analogo de GLP-1 como una preparacion tisular homogeneizada u otra forma que contiene cantidades sustanciales de protemas contaminantes. Un ejemplo de una protema o peptido aislado es una protema o peptido recombinante. Una realizacion alternativa es una protema o

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peptido sintetico.

Un experto en la tecnica apreciara a la luz de la presente descripcion que son adecuados diferentes tipos de insulina para los metodos y composiciones descritos. Las protemas de insulina de ejemplo incluyen, pero no se limitan a tanto protemas de insulina de tipo natural como mutadas, incluyendo insulina humana sintetica, insulina bovina sintetica, insulina porcina sintetica, insulina de ballena sintetica y complejos metalicos de insulina tales como complejos de cinc de insulina, insulina-protamina-cinc, y globina-cinc.

Tambien se pueden usar diferentes tipos de insulina, por ejemplo, insulina de accion rapida, insulina lenta, insulina semilenta, insulina ultralenta, insulina NPH, insulina glargina, insulina lispro, insulina aspart o combinaciones de dos o mas de los tipos anteriores de insulina.

En algunas realizaciones, la insulina de los metodos y composiciones descritos es insulina humana de tipo natural (Uniprot ID P01308). En algunas realizaciones, la insulina humana se produce como una protema recombinante en celulas bacterianas. En otras realizaciones la insulina humana se produce de forma sintetica.

Los analogos de GLP-1 se denominan tambien en la tecnica mimeticos de GLP-1. Un experto en la tecnica apreciara que las composiciones descritas pueden incluir al menos uno de los siguientes analogos de GLP-1: exenatida (Byetta™; n° CAS 141732-76-5; SEQ ID NO: 4), lixisenatida (n° CAS 320367-13-3), liraglutida (n° CAS 204656-202), exendina-9 (n° CAS 133514-43-9), AC3174 ([Leu(14)]exendina-4, Amylin Pharmaceuticals, Inc.), taspoglutida (n° CAS 275371-94-3), albiglutida (n° CAS 782500-75-8), semaglutida (n° CAS 910463-68-2), LY2189265 (dulaglutide™; n° CaS 923950-08-7), y CJC-1134-PC (un analogo de Exendina-4 conjugado con la albumina humana recombinante fabricado por ConjuChem™). Todos los registros CAS con entrada el 19 de diciembre, 2011. Por lo tanto, en algunas realizaciones, el metodo o composicion descritos usa cualquiera de los analogos de GLP-1 citados antes. En otras realizaciones, se selecciona uno de los analogos de GLP-1 citados antes. Los expertos en la tecnica apreciaran a la luz de los hallazgos descritos en la presente memoria, que tambien se pueden usar otros analogos de GLP-1.

La protemas de insulina y GLP-1 terapeuticas adecuadas para usar en la presente invencion incluyen derivados que estan modificados (es decir, por union covalente de un resto no aminoacido a la protema). Por ejemplo, pero no a modo de limitacion, las protemas incluyen protemas que se han modificado, p. ej., por glucosilacion, acetilacion, PEGilacion, fosforilacion, amidacion o derivatizacion por grupos protectores/bloqueadores conocidos. Se puede unir PEG de alto PM a protemas terapeuticas con o sin un conector multifuncional sea por conjugacion espedfica de sitio del PEG a su extremo N o C o por grupos epsilon-amino presentes en restos de lisina. Ademas, el derivado puede contener uno o mas aminoacidos no clasicos, por ejemplo isomeros D de los aminoacidos comunes, acido 2,4- diaminobutmco, acido a-amino-isobutmico, acido A-aminobutmco, Abu, acido 2-amino butmco, Y-Abu, £-Ahx, acido 6- amino-hexanoico, Aib, acido 2-aminoisobutmco, acido 3-amino-propionico, ornitina, norleucina, norvalina, hidroxiprolina, sarcosina, citrulina, homocitrulina, acido cisteico, t-butilglicina, t-butilalanina, fenilglicina, ciclohexilalanina, p-alanina, fluoro-aminoacidos, aminoacidos disenados tales como p-metil-aminoacidos, Ca-metil- aminoacidos, y Na-metil-aminoacidos.

Emulsionantes

En algunas realizaciones, en una formulacion lfquida basada en aceite usada en los metodos y composiciones farmaceuticas descritos, o en otras realizaciones, cada una de las formulaciones lfquidas basadas en aceite que esta presente, comprende ademas un componente proporcionado como una mezcla de (a) un monoacilglicerol (monoglicerido), un diacilglicerol (diglicerido), un triacilglicerol (triglicerido), o una mezcla de los mismos; y (b) un ester de polietilenglicol (PEG) de un acido graso. En relacion con esto, cada uno de los terminos "monoacilglicerol", "diacilglicerol" y "triacilglicerol" no es necesario que se refiera a un solo compuesto, sino mas bien puede incluir mezclas de compuestos, por ejemplo mezclas de monoacilgliceroles, diacilgliceroles o triacilgliceroles que tienen acidos grasos de diferentes longitudes. En algunas realizaciones preferidas, los monoacilgliceroles, diacilgliceroles, o triacilgliceroles usados en los metodos y composiciones descritos, por ejemplo los usados en los esteres de PEG generales, son de una fuente que es Generalmente reconocida como segura (GRAS).

Los ejemplos de fuentes GRAS son aceite de coco, aceite de mafz, aceite de cacahuete, aceite de soja, Myvacet 945 (monogliceridos diacetilados de acidos grasos C-18).

Una realizacion mas espedfica de (a) es una mezcla de monoacilgliceroles, diacilgliceroles y triacilgliceroles Cs-C-is. Una realizacion mas espedfica del componente (b) es una mezcla de monoesteres y diesteres de PEG de una mezcla de acidos grasos C8-C18.

En otras realizaciones mas espedficas, la formulacion lfquida comprende ademas un PEG libre.

En realizaciones alternativas, la formulacion lfquida basada en aceite usada en los metodos y composiciones farmaceuticas descritos, o en otras realizaciones, cada una de las formulaciones lfquidas basadas en aceite que esta presente, comprende ademas un ester de PEG de un monoacilglicerol, un diacilglicerol, un triacilglicerol, o una mezcla de los mismos. En relacion con esto, cada uno de los terminos "monoacilglicerol", "diacilglicerol" y "triacilglicerol" no es necesario que se refiera a un solo compuesto, sino mas bien puede incluir mezclas de

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compuestos, por ejemplo mezclas de monoacilgliceroles, diacilgliceroles o triacilgliceroles que tienen acidos grasos de diferentes longitudes. En realizaciones mas espedficas, esta presente un detergente no ionico adicional, por ejemplo un detergente basado en polisorbato, ademas del ester de PEG. En otras realizaciones mas espedficas, tambien esta presente un PEG libre. En realizaciones todavfa mas espedficas, estan presentes tanto un detergente no ionico adicional como un PEG libre.

En una realizacion todavfa mas espedfica de los metodos y composiciones descritos, una formulacion Kquida usada en la presente memoria comprende: (a) una mezcla de monoacilgliceroles, diacilgliceroles y triacilgliceroles C8-C18; (b) monoesteres y diesteres de PEG-32 de una mezcla de acidos grasos C8-C18; y (c) pEG-32 libre. Incluso mas espedficamente, la relacion en peso/peso del componente (a) a los componentes (b) + (c) es entre 10:90-30:70 inclusive; mas espedficamente entre 15:85-25:75 inclusive; mas espedficamente 20:80. En algunas realizaciones, los componentes (a)-(c) juntos constituyen 8-16% en peso/peso inclusive, de la formulacion lfquida basada en aceite. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 9-15% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 10-14% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 11-13% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 12%.

En otras realizaciones, una formulacion lfquida basada en aceite usada en los metodos y composiciones farmaceuticas descritos comprende ademas un componente autoemulsionante, que puede ser o no una de las mezclas de componentes descritas en los parrafos precedentes. "Componente autoemulsionante" en algunas realizaciones se refiere a un componente que forma espontaneamente una emulsion. Tfpicamente, dichos componentes formaran una emulsion en contacto con el medio acuoso, formando una dispersion fina, es decir, una microemulsion (SMEDDS). Algunas realizaciones de dichos componentes comprenden una mezcla de triacilgliceroles y un equilibrio hidrofilo/lipofilo alto (HLB; vease Griffin WC: "Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants," J Soc Cosmetic Chemists 5:259 (1954)). Otras realizaciones del componente autoemulsionante tienen una consistencia cerea, semisolida.

Preferiblemente, el HLB de un componente autoemulsionante usado en los metodos y composiciones descritos es 10 o mayor. En otras realizaciones, es entre 11-19 inclusive. En otras realizaciones, es entre 12-18 inclusive. En otras realizaciones, es entre 12-17 inclusive. En otras realizaciones, es entre 12-16 inclusive, lo cual es indicativo de un emulsionante de aceite en agua (Ac/Ag). En otras realizaciones, es entre 13-15 inclusive. En otras realizaciones, es 14. Realizaciones todavfa mas espedficas de los componentes autoemulsionantes tienen un HLB de 12-16 inclusive y comprenden triacilgliceroles de cadena media y larga conjugados con PEG, triacilgliceroles libres y PEG libre. En otras realizaciones, el componente autoemulsionante tiene un HLB de 12-16 inclusive y consiste en una mezcla de triacilgliceroles de cadena media y larga conjugados con PEG, triacilgliceroles libres y PEG libre. En otras realizaciones, el componente autoemulsionante tiene un HLB de 14 y comprende triacilgliceroles de cadena media y larga conjugados con PEG, triacilgliceroles libres y PEG libre. En otras realizaciones, el componente autoemulsionante tiene un HLB de 14 y consiste en una mezcla de triacilgliceroles de cadena media y larga conjugados con PEG, triacilgliceroles libres y PEG libre.

Algunas realizaciones mas espedficas usan componentes autoemulsionantes que comprenden (a) un monoacilglicerol, un diacilglicerol, un triacilglicerol, o una mezcla de los mismos; y (b) un ester de polietilenglicol (PEG) de un acido graso. En relacion con esto, cada uno de los terminos "monoacilglicerol", "diacilglicerol" y "triacilglicerol" no es necesario que se refiera a un solo compuesto, sino mas bien puede incluir mezclas de compuestos, por ejemplo mezclas de monoacilgliceroles, diacilgliceroles o triacilgliceroles que tienen acidos grasos de diferentes longitudes. Una realizacion mas espedfica es una mezcla de monoacilgliceroles, diacilgliceroles, y triacilgliceroles C8-C18.

Una realizacion mas espedfica del componente (b) es una mezcla de monoesteres y diesteres PEG de una mezcla de acidos grasos C8-C18.

En otras realizaciones mas espedficas, el componente autoemulsionante comprende ademas moleculas de PEG libres.

Las longitudes preferidas de los restos de PEG para usar en las composiciones y metodos descritos contienen entre 5-100 monomeros. En realizaciones mas espedficas, el PEG puede contener entre 15-50 monomeros. En realizaciones todavfa mas espedficas, el PEG puede contener entre 25-40 monomeros. En realizaciones mas espedficas, el PEG puede contener 32 monomeros.

En una realizacion todavfa mas espedfica de los metodos y composiciones descritos, un componente autoemulsionante usado en la presente memoria comprende: (a) una mezcla de monoacilgliceroles, diacilgliceroles y triacilgliceroles C8-C18; (b) monoesteres y diesteres de PEG-32 de una mezcla de acidos grasos C8-C18; y (c) PEG- 32 libre; y la relacion en peso/peso del componente (a) a los componentes (b) + (c) es 20:80. En algunas realizaciones, dicho componente constituye 8-16% en peso/peso inclusive de la formulacion lfquida basada en aceite. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 9-15% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 10-14% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 11-13% inclusive. En realizaciones mas espedficas, la cantidad es 12%.

Los ejemplos de componentes autoemulsionantes que cumplen las especificaciones anteriores son Gelucire™ 44/14, Gelucire™ 53/l0 y Gelucire™ 50/13. Un ejemplo particularmente preferido es Gelucire™ 44/14. Los sufijos 44 y 14 se refieren respectivamente a su punto de fusion y su equilibrio hidrofilo/lipofilo (HLB). Gelucire™ 44/14 (Gattefosse SAS, Saint-Priest, Francia) se obtiene por poliglucolisis de aceite de coco hidrogenado (triacilgliceroles 5 de cadena media y larga) con PEG-32. Tiene un equilibrio hidrofilo/lipofilo de 14. Esta compuesto de una mezcla definida de mono-, di- y triacilgliceroles Cs-C-is (20% en p/p); mono- y diesteres de PEG-32 y PEG-32 libre (80% en p/p). El acido graso principal presente es el acido laurico, que da cuenta de 45% en promedio del contenido total de acidos grasos. Es una dispersion solida compuesta de una fraccion de ester de PEG en una fase laminar de 120 A con una conformacion helicoidal y una fraccion de acilglicerol en un empaquetamiento hexagonal. Los productos 10 principales de la lipolisis gastrointestinal simulada de Gelucire™ 44/14 son mono y diesteres de PEG-32.

Detergentes no ionicos

En algunas realizaciones, la formulacion lfquida basada en aceite usada en los metodos y composiciones farmaceuticas descritos comprende ademas un detergente no ionico ademas del componente autoemulsionante. En algunas realizaciones, el detergente no ionico se selecciona del grupo que consisten en polisorbato-20, polisorbato- 15 40, polisorbato-80, lauromacrogol 400, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenico 10, 50

y 60, monoestearato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 y 80, ester de acido graso y sacarosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, n-octilglucosido, n-dodecilglucosido, n-dodecilmaltosido, octanoil-N-metilglucamida, decanoil-N- metilglucamida, Triton™-X-100, Triton™-X-114, Tesit™, Isotridecipoli(etileneglicol eter)n, 3-[(3-

colamidopropil)dimetilaminio]-1-propanosulfonato (CHAPS), 3-[(3-colamidopropil)dimetilaminio]-2-hidroxi-1- 20 propanosulfonato (CHAPSO), y N-dodecil=N,N-dimetil-3-amonio-1-propanosulfonato. En otras realizaciones, se selecciona uno de los detergentes no ionicos citados antes.

En algunas realizaciones mas espedficas, un detergente no ionico usado en los metodos y composiciones descritos es un detergente basado en polisorbato. Los ejemplos de detergente basado en polisorbato son detergentes obtenidos por union covalente de sorbitan polietoxilado a un acido graso. Realizaciones mas espedficas de 25 detergentes basados en polisorbato son polisorbato-20, polisorbato-40 y polisorbato-80.

Por ejemplo, el polisorbato 80 (Tween-80) es un detergente no ionico, suave, obtenido a partir de sorbitan polietoxilado y acido oleico y que tiene la siguiente estructura:

H0{CH2CH2O)w (OCHsCH^OH

W"

Sy^CH(OCH2CH2)yOH

CH20-{CH2CH20);.1

O

II

CH2CH20-C-CH2(CH2)5CH2CHsCHCH2(CH2)6CH3

Suma de w + x + y + z = 20

30 En el caso del polisorbato 80, el resto mostrado en el lado derecho es una mezcla de acidos grasos, que contienen 60-70% de acido oleico (representado), siendo el resto principalmente acidos linoleico, palmftico y estearico.

En una realizacion mas espedfica, el polisorbato 80 constituye 3-10% en peso/peso inclusive de una formulacion lfquida basada en aceite usada en los metodos y composiciones descritos. En una realizacion mas espedfica, el porcentaje es 4-8% inclusive. En una realizacion mas espedfica, el porcentaje es 4,5-6% inclusive. En una 35 realizacion mas espedfica, el porcentaje es 5%.

Dosificaciones

Alternativamente o ademas, la insulina o analogo de GLP-1 presente en las composiciones descritas o usado en los metodos descritos, esta presente en una cantidad subclmica. La expresion "cantidad subclmica" en este contexto se refiere a una cantidad menor de la que es necesaria para producir un efecto fisiologico deseado completo, por

40 ejemplo, el control de los niveles de glucosa en la sangre posprandiales, en el contexto de su formulacion y el

paciente. Por consiguiente, una dosis subclmica de insulina sena menor que la requerida usando formulaciones similares a las descritas en la presente memoria que contienen insulina pero carecen de un analogo de GLP-1; o, en una realizacion mas espedfica, una formulacion identica excepto por la ausencia del analogo de GLP-1. Igualmente, una dosis subclmica de un analogo de GLP-1 sena menor de la que es necesaria usando formulaciones similares a 45 las descritas en la presente memoria que contienen un analogo de GLP-1 pero carecen de insulina; o en una realizacion mas espedfica, una formulacion identica excepto por la ausencia de la insulina.

Los expertos en la tecnica apreciaran, a la luz de la presente descripcion, que la caracterizacion de una dosis como subclmica dependera del peso y estado de salud (incluyendo la resistencia a la insulina, si es relevante) del paciente, las circunstancias de la administracion, coadministracion de otros medicamentos para la diabetes, la 50 robustez del principio activo y los excipientes, y el efecto fisiologico deseado. Por ejemplo, los estudios hasta la

fecha de formulaciones orales similares a las descritas en la presente memoria, pero que contienen solo insulina,

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han mostrado que 8 mg de una formulacion oral encapsulada en combinacion con un inhibidor de proteasa y EDTA, en aceite de pescado (similar a la descrita en la presente memoria pero que carece de exenatida) es una dosis subclmica para pacientes diabeticos tipo 2 humanos, adultos, en ayunas, si el objetivo es un cambio robusto en los niveles de glucosa en la sangre; mientras que 16 mg es una dosis clmica en las mismas circunstancias. Las dosis de la misma formulacion necesarias para lograr la modulacion de fluctuaciones de glucosa posprandiales en los mismos pacientes no se han determinado, pero es probable que sean ligeramente mas altas. Sin embargo, dosis tales como estas tambien dependen de la potencia de la formulacion, y por lo tanto el umbral de dosis clmica puede ser ligeramente inferior si se usa un inhibidor de proteasa mas potente, por ejemplo. La determinacion de una dosis subclmica para un conjunto particular de circunstancias, por ejemplo por ensayo empmco, esta en la experiencia del experto en la tecnica.

En realizaciones mas espedficas, la cantidad subclmica de insulina de los metodos y composiciones descritos es entre 6-16 mg inclusive para un paciente adulto que tiene diabetes mellitus, por ejemplo diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), por ejemplo, para prevenir las fluctuaciones de glucosa posprandial cuando se administra entre 30-60 minutos (min) antes de una comida, en realizaciones mas espedficas 30 min, 45 min o 60 min antes de una comida. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 6-14 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 6-12 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 6-10 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 8 mg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 12 mg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 8-16 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 8-14 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 8-12 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 8-10 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 16 mg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 10-16 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 10-14 mg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 10-18 mg inclusive.

En otras realizaciones, la cantidad subclmica de insulina de los metodos y composiciones descritos es entre 0,060,16 mg/kg (miligramos por kilogramo de peso corporal) inclusive para un paciente adulto que tiene DMT2, por ejemplo, para prevenir las fluctuaciones de glucosa posprandial cuando se administra antes de una comida. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,06-0,14 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,06-0,12 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,06-0,10 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,08 mg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,12 mg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,16 mg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,08-0,16 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,08-0,14 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,08-0,12 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,08-0,10 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100,16 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,10-0,18 mg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,10-0,14 mg/kg inclusive.

En otras realizaciones mas, la cantidad subclmica de insulina es una cantidad que corresponde a una de las cantidades o intervalos anteriores para un adulto, ajustado por peso corporal para un paciente pediatrico. En otras realizaciones, la insulina esta presente en una cantidad subclmica ajustada para un paciente pediatrico, y el analogo de GLP-1 tambien esta presente en una cantidad subclmica ajustada para un paciente pediatrico.

Las cantidades anteriores pueden ser para insulina humana de tipo natural, o en otra realizacion para uno de los otros tipos de insulina conocidos en la tecnica.

En otras realizaciones mas espedficas, esta presente una cantidad subclmica de un analogo de GLP-1 en una forma farmaceutica de los metodos y composiciones descritos. En algunas realizaciones, 150 microgramos (mcg), 200 mcg, 250 mcg o 300 mcg se considera una dosis subclmica para sujetos humanos adultos con DMT2 por ejemplo, para prevenir las fluctuaciones de glucosa posprandial cuando se administra 30-60 min antes de una comida, en realizaciones mas espedficas 30 min, 45 min o 60 min antes de una comida. En otras realizaciones, la cantidad subclmica de analogo de GLP-1 es entre 100-400 mcg inclusive para un paciente adulto que tiene DMT2. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 100-300 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 100-250 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 100-200 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 100-150 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 100 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 150 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 200 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 250 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 300 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 150-400 mcg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 150-300 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 150-250 mcg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 150-200 mcg inclusive.

En otras realizaciones, la cantidad subclmica de analogo de GLP-1 de los metodos y composiciones descritos es entre 0,100-0,400 mcg/kg inclusive para un paciente adulto que tiene DT2, por ejemplo, para prevenir las fluctuaciones de glucosa posprandial cuando se administra antes de una comida. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100-0,300 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100-0,250 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100-0,200 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100-0,150 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,100 mcg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,150 mcg/kg. En otras realizaciones, la

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cantidad subclmica es 0,200 mcg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,250 mcg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es 0,300 mcg/kg. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,1500,400 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,150-0,300 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,150-0,250 mcg/kg inclusive. En otras realizaciones, la cantidad subclmica es entre 0,100-0,200 mcg/kg inclusive.

En otras realizaciones, la cantidad subclmica de analogo de GLP-1 es una cantidad que corresponde a una de las cantidades o intervalos anteriores para un adulto, ajustado por peso corporal para un paciente pediatrico. En otras realizaciones, el analogo de GLP-1 esta presente en una cantidad subclmica ajustada para un paciente pediatrico, y la insulina tambien esta presente en una cantidad subclmica ajustada para un paciente pediatrico, por ejemplo, una cantidad que corresponde a 4-12 mg inclusive para un paciente adulto, ajustado para el peso de un paciente pediatrico.

Las cantidades anteriores pueden ser para la exenatida, o en otra realizacion, para uno de los otros analogos de GLP-1 conocidos en la tecnica.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive, o 150-250 mcg inclusive; junto con 8-16 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 8-12 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 12-16 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 16-24 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 24-32 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 12-16 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 8 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 12 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg

inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 16 mg de insulina

inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 20 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 24 mg de insulina inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100-600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg

inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 28 mg de insulina

inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene exenatida en una cantidad de entre 100600 mcg inclusive, 100-500 mcg inclusive, 100-400 mcg inclusive, 100-300 mcg inclusive, 200-600 mcg inclusive, 200-500 mcg inclusive, 200-400 mcg inclusive, 200-300 mcg inclusive, 150-300 mcg inclusive o 150-250 mcg inclusive; junto con 32 mg de insulina inclusive.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 150-300 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32

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mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 300-450 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 450-600 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 1620 mg inclusive; junto con 100-150 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 150-200 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 200-250 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 1620 mg inclusive; junto con 250-300 mcg de exenatida inclusive.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 100 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 1224 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 200 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 250 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 300 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 400 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 500 mcg de exenatida inclusive. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene insulina en una cantidad de 8-32 mg inclusive, 8-28 mg inclusive, 8-24 mg inclusive, 8-20 mg inclusive, 8-16 mg inclusive, 8-12 mg inclusive, 12-32 mg inclusive, 16-32 mg inclusive, 20-32 mg inclusive, 24-32 mg inclusive, 12-24 mg inclusive, 16-24 mg inclusive, 12-20 mg inclusive o 16-20 mg inclusive; junto con 600 mcg de exenatida inclusive.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-16 mg de insulina inclusive y 150-300 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-12 mg de insulina inclusive y 150-300 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 12-16 mg de insulina inclusive y 150-300 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 6-16 mg de insulina inclusive y 150-300 mcg de exenatida.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-16 mg de insulina inclusive y 100-400 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-12 mg de insulina inclusive y 100-400 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 12-16 mg de insulina inclusive y 100-400 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 6-16 mg de insulina inclusive y 100-400 mcg de exenatida.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-16 mg de insulina inclusive y 100-200 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-12 mg de insulina inclusive y 100-200 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 12-16 mg de insulina inclusive y 100-200 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 6-16 mg de insulina inclusive y 100-200 mcg de exenatida.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-16 mg de insulina inclusive y 200-400 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-12 mg de insulina inclusive y 200-400

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mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 12-16 mg de insulina inclusive y 200-400 mcg de exenatida. En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 6-16 mg de insulina inclusive y 200-400 mcg de exenatida.

En otras realizaciones, la forma farmaceutica descrita contiene 8-16 mg de insulina inclusive y 150-300 mcg de exenatida.

En otras realizaciones, el paciente que recibe la composicion farmaceutica descrita recibe un agente terapeutico para la DM tipo molecula pequena tal como metformina y/o una tiazolidinadiona (TZD). En otras realizaciones, el paciente no recibe un agente terapeutico para la DM tipo molecula pequena. Se cree que las composiciones descritas son eficaces en cualquier caso.

Inhibidores de proteasa

Como se usa en la presente memoria, la expresion "inhibidor de proteasa" se refiere a cualquier agente capaz de inhibir la accion de la tripsina sobre un sustrato. La capacidad de un agente para inhibir la tripsina se puede medir usando ensayos bien conocidos en la tecnica. Por ejemplo, en un ensayo tfpico, una unidad corresponde a la cantidad de inhibidor que reduce la actividad de la tripsina por una unidad de ester de etilo de la benzoil-L-arginina (BAEE-U). Una BAEE-U es la cantidad de enzima que aumenta la absorbancia a 253 nm en 0,001 por minuto a pH 7,6 y 25°C. Vease, por ejemplo, K. Ozawa, M. Laskowski, 1966, J. Biol. Chem. 241:3955; and Y. Birk, 1976, Meth. Enzymol. 45:700.

Algunos inhibidores de tripsina conocidos en la tecnica son espedficos para la tripsina, mientras que otros inhiben la tripsina y otras proteasas tales como la quimotripsina. Los inhibidores de tripsina se pueden obtener de fuentes vegetales animales o vegetales: por ejemplo, soja, mafz, judfa de lima y otras judfas, calabaza, girasol, pancreas y pulmon bovino y de otros animales, clara de huevo de gallina y pavo, formulas infantiles basadas en soja y sangre de marnffero. Los inhibidores de tripsina tambien pueden ser de origen microbiano; por ejemplo, anitpama; vease, por ejemplo, H. Umezawa, 1976, Meth. Enzymol. 45, 678. Un inhibidor de tripsina tambien puede ser un mimetico de arginina o lisina u otro compuesto sintetico: por ejemplo arilguanidina, benzamidina, 3,4-dicloroisocumarina, diisopropilfluorofosfato, mesilato de gabexato o fluoruro de fenilmetanosulfonilo. Como se usa en la presente memoria, un mimetico de arginina o lisina es un compuesto capaz de unirse al bolsillo P1 de la tripsina y/o interferir con la funcion del sitio activo de la tripsina.

En algunas realizaciones, el inhibidor de tripsina usado en metodos y composiciones de la presente invencion se selecciona del grupo que consiste en inhibidor de tripsina de judfa de lima, aprotinina, (tambien conocido como inhibidor de tripsina pancreatico o inhibidor de tripsina pancreatico basico [BPTI]; Uniprot N° P00974 [entrada en la base de datos el 2 de enero, 2013]), inhibidor Kazal (inhibidor de tripsina secretora pancreatica), ovomucoid, Alfa 1- antitripsina, globulina fijadora de cortisol, Centerin ([SERPINA9/GCET1 (transcrito 1 expresado en celulas B del centro germinal)], PI-6 (Sun et al. 1995), PI-8 (Sprecher et al. 1995), Bomapina, una serpina de clado A [por ejemplo Serpina3 (ID de gen de NCBI: 12; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012), Serpina6 (ID de gen de NcBl: 866; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012), Serpina12 (ID de gen de NCBI: 145264; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina10 (ID de gen de NCBI: 51156; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina7 (ID de gen de nCbI: 6906; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina9 (ID de gen de NcBi: 327657; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina11 (ID de gen de NcBI: 256394; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina13 (ID de gen de NCBI: 388007; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); Serpina2 (ID de gen de NCBI: 390502; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012); y Serpina4 (ID de gen de nCbI: 5104; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012)] Yukopin (SerpinB12; Gene ID: 89777; entrada en la base de datos el 27 de diciembre, 2012), antipama, benzamidina, 3,4-dicloroisocumarina, diisopropilfluorofosfato, y mesilato de gabexato. En otras realizaciones, se selecciona mas de uno, por ejemplo 2, 3 o 4, de los inhibidores anteriores.

Una secuencia precursora representativa de la aprotinina es:

MKMSRLC.LSV ALLVLLGTLA ASTPGCDTSN QAKAQRPDFC. LEPPYTGPCK ARTIRYFYNA KAGFCQTFVY GGCRAKRNNF KSAEDCMRTC GGATGPWRNF (SFQ TD NO: 1).

De estos 100 restos, los restos 1-21 son el peptido senal, 22-35 y 94-100 son propeptidos y la cadena madura BBI esta compuesta de los restos 36-93 (58 AA).

En otras realizaciones, el inhibidor de tripsina se obtiene de la soja. Los inhibidores de tripsina derivados de soja (Glycine max) estan facilmente disponibles y se considera que son seguros para el consumo humano. Incluyen, pero no se limitan a SBTI, KTI (inhibidor de tripsina Kunitz), por ejemplo KTI3, y BBI (inhibidor Bowman-Birk; Uniprot numero P01055 [entrada en la base de datos el 3 de enero, 2013]). SBTI esta compuesto de KTI, que inhibe la tripsina, y BBI, que inhibe la tripsina y quimotripsina. Dichos inhibidores de tripsina estan disponibles, por ejemplo,

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en Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., EE.UU.

Una secuencia precursora representativa de BBI es:

MVVEKVCEVE EFEVGGT'l SA NERESKEGEE MKSDHQHSND CACTKSNPPQ CRCSDMRLNS CI1SACKSCIC ALSYPAQCEC CKPSEDDKEN (SEQ ID NO: 2).

DESSKPCCDQ

VDITDECYEP

De estos 110 restos, los restos 1-19 son el peptido senal, 20-39 son un propeptido y la cadena madura BBI esta compuesta de los restos 40-110 (71 AA).

KTI3 tiene el numero Uniprot P01070 (entrada en la base de datos el 3 de enero, 2013). Una secuencia precursora representativa de KTI3 es:

MKSTIl ’ELl L ECAETTSYLP SAIADEVLDN EGNPLENGGT YYILSDITAE GGIRAAPTGN ERCPLTVVQS RNELDKGIGT IISSPYRIRE IAEGIIPLSLK FDSFAVIMEC VGIPTEWSVV EDEPEGPAVK IGENKDAMDG WFREERVSDD

EENNYKLVEC PQQAEDDKCG DIGLSIDHDD GTRRLVVSKN KPLVVQEQKL

DKESLAKKNH GLSRSE SEQ ID NO: 3)

De la secuencia anterior, los restos 1-24 son el peptido senal, 206-216 son un propeptido y la cadena madura KTI esta compuesta de los restos 25-205 (181 AA).

En otras realizaciones, un metodo o composicion farmaceutica oral descrita en la presente memoria usa dos inhibidores de tripsina. En otras realizaciones, estan presente mas de dos inhibidores de tripsina. En otras realizaciones, estan presente tres inhibidores de tripsina. En otras realizaciones, estan presente cuatro inhibidores de tripsina. En otras realizaciones, dos de los inhibidores de tripsina son SBTI y aprotinina. En otras realizaciones, los unicos dos inhibidores de tripsina son SBTI y aprotinina. En otras realizaciones mas, los unicos dos inhibidores de tripsina son BBI aislado y aprotinina aislada.

En otras realizaciones, esta presente un inhibidor de quimotripsina junto con un inhibidor de tripsina. En otras realizaciones, cuando el inhibidor de quimotripsina es tambien un inhibidor de tripsina, tambien esta presente otro inhibidor de tripsina. Los ejemplos no limitantes de un inhibidor de tripsina y un inhibidor de tripsina/quimotripsina son KTI aislado, que inhibe la tripsina, y BBI aislado (inhibidor Bowman-Birk), que inhibe la tripsina y quimotripsina; estos estan presentes juntos en la composicion, en algunas realizaciones.

Agentes quelantes de cationes divalentes

El agente quelante de cationes divalentes usado en los metodos y composiciones descritos es, en una realizacion, cualquier compuesto fisiologicamente aceptable que tiene una alta afinidad por al menos uno de iones calcio, magnesio y manganeso. En otra realizacion, el agente quelante se selecciona del grupo que consiste en citrato o una de sus sales; acido etilendiaminatetraacetico (EDTA) o una de sus sales (por ejemplo EDTA de disodio y EDTA de calcio y disodio); EGTA (acido etilenglicoltetraacetico) o una de sus sales; acido dietilentriaminapentaacetico (DTPA) o una de sus sales; y BAPTA (acido 1,2-bis(o-aminofenoxi)etano-N,N,N',N'-tetraacetico) o una de sus sales. En otras realizaciones, se usa uno de los agentes quelantes citados antes. En realizaciones mas espedficas, el agente quelante es EDTA.

Aceites

Las composiciones farmaceuticas y metodos descritos en la presente memoria usan uno o mas aceites como la base de su fase lfquida. En algunas realizaciones, el aceite puede ser cualquier aceite fisiologicamente aceptable que sea lfquido a temperatura ambiente.

En realizaciones mas espedficas, el aceite comprende un acido graso omega-3. En otras realizaciones, el acido graso omega-3 es un acido graso poliinsaturado omega-3. En otra realizacion, el acido graso omega-3 es DHA, un acido graso, poliinsaturado, omega-3, de 22 carbonos, denominado tambien acido 4,7,10,13,16,19- docosahexaenoico. En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido —linolenico (acido 9,12,15- octadecatrienoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido estearidonico (acido 6,9,12,15- octadecatetraenoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido eicosatrienoico (ETA; acido 11,14,17- eicosatrienoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido eicosatetraenoico (acido 8,11,14,17-

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eicosatetraenoico). En una realizacion, el acido graso omega-3 es acido eicosapentaenoico (EPA; acido 5,8,11,14,17-eicosapentaenoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido eicosahexaenoico (tambien denominado acido 5,7,9,11,14,17-eicosahexaenoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido docosapentaenoico (DPA; acido 7, 10, 13, 16, 19-docosapenatenoico). En otra realizacion, el acido graso omega-3 es acido tetracosahexaenoico (acido 6,9,12,15,18,21-tetracosahexaenoico).

En otras realizaciones, el aceite es un aceite natural que comprende un acido graso omega-3. En realizaciones mas espedficas, el aceite se selecciona del grupo que consiste en un aceite de pescado, aceite de canola, aceite de semilla de lino, aceite de algas y aceite de semilla de canamo. En realizaciones mas espedficas, el aceite es un aceite de pescado. Se han ensayado varios tipos de aceite de pescado en las composiciones descritas en la presente memoria y se ha encontrado que funcionan todos igualmente bien.

Formulaciones espedficas representativas

En realizaciones todavfa mas espedficas, una formulacion lfquida en el metodo o composicion descritos comprende insulina, exenatida, Gelucire 44/14, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. En otras realizaciones, la formulacion lfquida consiste esencialmente en insulina, exenatida, Gelucire 44/14, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. "Consiste esencialmente en" para este proposito indica que la formulacion lfquida no contiene ningun otro componente que afecte de forma apreciable a sus caractensticas fisiologicas. En otras realizaciones, la formulacion lfquida consiste en insulina, exenatida, Gelucire 44/14, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. En otras realizaciones incluso mas espedficas, las cantidades de insulina, exenatida, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado por forma farmaceutica son 8-16 mg, 150-300 mcg, 100-200 mg, 50-100 mg, 20-30 mg, y 0,4-0,7 ml, respectivamente, y la cantidad de Gelucire 44/14 es 8-16%. En realizaciones todavfa mas espedficas, las cantidades de insulina, exenatida, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado por forma farmaceutica son 8-16 mg, 150-300 mcg, 150 mg, 75 mg, 24 mg, y 0,5-0,7 ml, respectivamente, y la cantidad de Gelucire 44/14 es 8-16%. En otras realizaciones, la composicion anterior comprende ademas un detergente no ionico. En realizaciones mas espedficas, el detergente no ionico es un detergente basado en polisorbato. En realizaciones incluso mas espedficas, el detergente basado en polisorbato es polisorbato 80. Preferiblemente, el polisorbato 80 constituye 310% en peso/peso inclusive de la formulacion lfquida basada en aceite. En otras realizaciones, la composicion anterior se recubre mediante un recubrimiento que resiste la degradacion en el estomago.

En realizaciones todavfa mas espedficas, una formulacion lfquida usada en el metodo o composicion descritos comprende insulina, exenatida, un componente autoemulsionante, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. En otras realizaciones, la formulacion lfquida consiste esencialmente en insulina, exenatida, un componente autoemulsionante, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. "Consiste esencialmente en" para este proposito indica que la formulacion lfquida no contiene ningun otro componente que afecte de forma apreciable a sus caractensticas fisiologicas. En otras realizaciones, la formulacion lfquida consiste en insulina, exenatida, un componente autoemulsionante, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado. En otras realizaciones incluso mas espedficas, las cantidades de insulina, exenatida, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado por forma farmaceutica son 8-16 mg, 150-300 mcg, 100-200 mg, 50-100 mg, 20-30 mg, y 0,4-0,7 ml, respectivamente, y la cantidad del componente autoemulsionante es 8-16%. En realizaciones todavfa mas espedficas, las cantidades de insulina, exenatida, EDTA, SBTI, aprotinina y aceite de pescado por forma farmaceutica son 8-16 mg, 150-300 mcg, 150 mg, 75 mg, 24 mg, and 0,5-0,7 ml, respectivamente, y la cantidad del componente autoemulsionante es 8-16%. En otras realizaciones, la composicion anterior comprende ademas un detergente no ionico. En realizaciones mas espedficas, el detergente no ionico es un detergente basado en polisorbato. En realizaciones incluso mas espedficas, el detergente basado en polisorbato es polisorbato 80. Preferiblemente, el polisorbato 80 constituye 310% en peso/peso inclusive de la formulacion lfquida basada en aceite. En otras realizaciones, la composicion anterior se recubre mediante un recubrimiento que resiste la degradacion en el estomago.

Los porcentajes en "peso/peso" a los que se hace referencia en la presente memoria usan la cantidad de base de aceite en la formulacion, por ejemplo aceite de pescado, como el denominador; por lo tanto, 60 mg de Gelucire en 500 mg aceite de pescado se considera como 12% en p/p, independientemente del peso de los otros componentes. Igualmente, 50 mg de Tween-80 mezclado con 500 mg aceite de pescado se considera como 10% de Tween-80.

En otras realizaciones, una formulacion lfquida usada en el metodo o composicion descritos esta exenta de agua. Si esta presente mas de una formulacion lfquida, por ejemplo, en una composicion multicomponentes, cada formulacion lfquida puede estar exenta de agua. "Exenta de agua" se refiere en algunas realizaciones, a una formulacion en la que no se han anadido deliberadamente componentes acuosos. No excluye la presencia de cantidades en trazas de agua que han sido absorbidas de la atmosfera en sus componentes. En otra realizacion, la formulacion lfquida esta exenta de componentes acuosos. Si esta presente mas de una formulacion lfquida, por ejemplo, en una composicion multicomponentes, cada formulacion lfquida puede estar exenta de componentes acuosos. En otras realizaciones mas, uno o mas aceites son los unicos componentes lfquidos de cada una de las una o mas formulaciones lfquidas. En otra realizacion mas, el aceite de pescado es el unico componente lfquido de cada una de las una o mas formulaciones lfquidas.

Recubrimientos

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Los expertos en la materia apreciaran, dada la presente descripcion, que se pueden usar diferentes recubrimientos sensibles al pH en los metodos y composiciones descritos. En algunas realizaciones, se puede usar cualquier recubrimiento que inhiba la digestion de la composicion en el estomago de un sujeto. ^picamente, dichos recubrimientos no se disolveran en jugos gastricos humanos en el espacio de 2 horas, y se disolveran en el espacio de 30 minutos en fluido duodenal.

En otras realizaciones, el recubrimiento comprende un polisacarido biodegradable. En otras realizaciones, se usa un hidrogel. En otras realizaciones, el recubrimiento comprende uno de los siguientes excipientes: chitosan, un recubrimiento Aquacoat ECD, un polfmero azo-reticulado, acetato ftalato de celulosa, acetato trimelitato de celulosa (CAT), acetato butirato de celulosa, ftalato de hidroxcipropilmetilcelulosa o poli(acetato ftalato de vinilo).

En otras realizaciones, se usa un sistema de liberacion en el tiempo tal como Pulsincap™.

En realizaciones preferidas, las formas farmaceuticas recubiertas descritas en la presente memoria liberan el nucleo (que contiene la formulacion basada en aceite) cuando el pH alcanza el intervalo encontrado en los intestinos, que es relativamente alcalino respecto al del estomago. En realizaciones mas espedficas, el recubrimiento comprende un polfmero sensible al pH. En varias realizaciones, se pueden usar recubrimientos monocapa o multicapas.

En una realizacion, el recubrimiento es un recubrimiento enterico. Los metodos para el recubrimiento enterico son bien conocidos en la tecnica (vease, por ejemplo, Siepmann F et al. 2005). En realizaciones mas espedficas, se usa un recubrimiento de Eudragit™, como el recubrimiento enterico. Los recubrimientos de Eudragit™ son polfmeros acnlicos, cuyo uso es bien conocido en la tecnica.

En otra realizacion, se usa la miceroencapsulacion como un recubrimiento resistente al estomago en las composiciones descritas en la presente memoria. Los metodos para la microencapsulacion son bien conocidos en la tecnica, y se describen, entre otros, en la publicacion de solicitud de patente de Estados Unidos n° 2011/0305768.

En otras realizaciones, el recubrimiento es una capsula. Las capsulas de gelatina son las mas preferidas. Los metodos para insertar una formulacion basada en aceite en una capsula de gelatina tambien son bien conocidos en la tecnica.

Composiciones farmaceuticas y metodos para hacerlas

En otro aspecto, se proporciona una composicion farmaceutica descrita en la presente memoria, para el tratamiento de la diabetes mellitus, por ejemplo, la diabetes mellitus tipo 2, en un ser humano.

En otro aspecto mas, se proporciona un uso de una combinacion de los ingredientes descritos en la presente memoria en la preparacion de un medicamento para tratar la diabetes mellitus en un ser humano.

Otro aspecto mas, proporciona un metodo para tratar la diabetes mellitus en un ser humano, comprendiendo el metodo la etapa opcional de seleccionar un sujeto mediante el diagnostico de la diabetes mellitus, seguido de la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en la presente memoria, tratando asf la diabetes mellitus en un ser humano.

Otro aspecto mas, proporciona un metodo de fabricacion de una composicion farmaceutica, que comprende las etapas de fundir un componente autoemulsionante, cereo; anadir el componente fundido a aceite de pescado, opcionalmente enfriar la mezcla resultante; anadir al aceite EDTA, SBTI en forma de polvo, aprotinina en forma de polvo, insulina cristalina y exenatida en forma de polvo, en algunas realizaciones en el orden citado; y mezclar y homogeneizar el lfquido resultante, en algunas realizaciones en un molino de rodillos.

Otro aspecto mas proporciona un metodo de fabricacion de una composicion farmaceutica, que comprende las etapas de fundir un componente autoemulsionante, cereo; anadir el componente fundido a aceite de pescado, opcionalmente enfriar la mezcla resultante; anadir al aceite EDTA, SBTI aislado en forma de polvo, KTI3 aislado en forma de polvo, insulina cristalina y exenatida en forma de polvo, en algunas realizaciones en el orden citado; y mezclar y homogeneizar el lfquido resultante, en algunas realizaciones en un molino de rodillos.

Otro aspecto mas proporciona un metodo de fabricacion de una composicion farmaceutica, que comprende las etapas de fundir un componente autoemulsionante, cereo; anadir el componente fundido a aceite de pescado, opcionalmente enfriar la mezcla resultante; anadir al aceite EDTA, KTI3 aislado en forma de polvo, aprotinina en forma de polvo, insulina cristalina y exenatida en forma de polvo, en algunas realizaciones en el orden citado; y mezclar y homogeneizar el lfquido resultante, en algunas realizaciones en un molino de rodillos.

Otro aspecto mas proporciona un uso de una combinacion de ingredientes descritos en lo que antecede en la preparacion de un medicamento para tratar la diabetes inestable, tambien conocida como labilidad glucemica (Ryan et al., 2004) en un ser humano. Otro aspecto mas proporciona un metodo para tratar la diabetes inestable, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica como se ha descrito en lo que antecede, tratando asf la diabetes inestable.

Se proporciona en otra realizacion un uso de una combinacion de ingredientes descritos en lo que antecede, en la

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preparacion de un medicamento para tratar un nivel elevado de glucosa en la sangre en ayunas en un ser humano. Se proporciona en otra realizacion un metodo para tratar un nivel elevado de glucosa en la sangre en ayunas, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede, tratando de esta forma un nivel elevado de glucosa en la sangre en ayunas. En algunas realizaciones preferidas, el sujeto es un sujeto humano. En varias realizaciones, el nivel elevado de glucosa en la sangre en ayunas se considera que existe en un sujeto que tiene un nivel de glucohemoglobina [HgA1c] de 8-10% o un nivel de azucar en el plasma en ayunas de 100 a 125 mg/dl o de 5,6 a 6,9 mmol/l.

Se describe en la presente memoria, en otra realizacion, un metodo para tratar el colesterol total elevado, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede, tratando de esta forma el colesterol total elevado.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la hipertrigliceridemia, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede, tratando de esta forma la hipertrigliceridemia.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la apolipoprotema B (ApoB) en el suero elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de colesterol total/HDL elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de apolipoprotema B/apolipoprotema A1 elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede, tratando de esta forma una relacion de apolipoprotema B/apolipoprotema A1 elevada.

Los metodos para medir cada uno de los parametros de lfpidos mencionados antes son bien conocidos para los expertos en la tecnica. Se describen metodos de ejemplo, entre otros en Chiquette E et al. y Martinez-Colubi M et al.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tatar una potenciacion deteriorada de las respuestas vasodilatadoras inducidas por insulina en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en lo que antecede, tratando de esta forma una potenciacion deteriorada de las respuestas vasodilatadoras inducidas por insulina, en un sujeto con smdrome metabolico. Los metodos para medir las respuestas vasodilatadoras inducidas por insulina se conocen en la tecnica, e incluyen, por ejemplo, medir las respuestas del flujo sangumeo (por ejemplo en el antebrazo) a la acetilcolina (ACh) y nitroprusiato sodico (SNP) (Tesauro et al).

El smdrome metabolico se considera que esta presente si estan presentes al menos tres de los siguientes factores:

1. Una cintura grande (obesidad abdominal).

2. Un nivel de trigliceridos alto (o un nivel de trigliceridos alto en ausencia de medicacion para tratar los trigliceridos altos).

3. Un nivel de colesterol HDL bajo (o colesterol HDL bajo en ausencia de medicacion para tratar el colesterol HDL bajo.

4. Hipertension (o hipertension en ausencia de medicacion para tratar la hipertension).

5. Azucar en sangre en ayunas alto (o azucar en sangre en ayunas alto en ausencia de medicacion para tratar el azucar en sangre en ayunas alto).

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la esteatohepatitis no alcoholica en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una composicion farmaceutica descrita en la presente memoria, tratando de esta forma la esteatohepatitis no alcoholica en un sujeto con smdrome metabolico. Los metodos de diagnostico y medicion de la esteatohepatitis no alcoholica son bien conocidos en la tecnica, e incluyen, por ejemplo, medir los niveles plasmaticos de aspartato transaminasa (AST), niveles plasmaticos de alanina transaminasa (ALT), niveles de ARNm hepaticos de genes implicados en la lipogenesis, y niveles de diacilglicerol aciltransferasa-2 (DGAT2) en el hugado (Miyashita T et al).

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar el colesterol total elevado, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la

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presente memoria, un metodo para tratar el colesterol total elevado, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion Uquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la hipertrigliceridemia, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la hipertrigliceridemia, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la ApoB en el suero elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la ApoB en el suero elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de colesterol total/HDL elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de colesterol total/HDL elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de apolipoprotema B/apolipoprotema A1 elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una relacion de apolipoprotema B/apolipoprotema A1 elevada, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

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Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una potenciacion deteriorada de las respuestas vasodilatadoras inducidas por insulina en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar una potenciacion deteriorada de las respuestas vasodilatadoras inducidas por insulina en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la esteatohepatitis no alcoholica en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. Tambien se describe en la presente memoria, un metodo para tratar la esteatohepatitis no alcoholica en un sujeto con smdrome metabolico, comprendiendo el metodo la etapa de administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una formulacion lfquida basada en aceite oral, comprendiendo la formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un, o en otra realizacion mas de un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde la formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento o capsula que resiste la degradacion en el estomago. El aceite, insulina, analogo de GLP-1, inhibidor(es) de tripsina, agente quelante, recubrimiento y otros ingredientes opcionales de las composiciones anteriores, pueden ser cualquiera de los descritos en la presente memoria; cada alternativa se puede combinar libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

Dondequiera que se presenten alternativas para caractensticas separables individuales tales como, por ejemplo, una protema de insulina o su dosificacion, un analogo de GLP-1 o su dosificacion, un inhibidor de proteasa, un agente quelante, un emulsionante, o un recubrimiento, en la presente memoria como "realizaciones" debe entenderse que dichas alternativas pueden combinarse libremente para formar realizaciones discretas de la invencion descritas en la presente memoria.

La invencion se ilustra ademas por los siguientes ejemplos y las figuras, de los cuales se pueden extraer mas realizaciones y ventajas. Se pretende que estos ejemplos ilustren la invencion pero no que limiten su alcance.

Seccion experimental detallada

Ejemplo 1: Identificacion de emulsionantes eficaces para preparaciones de protema/aceite de pescado terapeuticas homogeneas

Se encontro que las formulaciones previas de insulina en aceite de pescado presentan precipitacion con el paso del tiempo; por lo tanto no eran conveniente para la preparacion de formas farmaceuticas a gran escala. Se ensayaron nuevas formulaciones que conteman 3,375 g de SBTI por 22,5 g de aceite de pescado y que conteman los siguientes emulsionantes: lecitina (secuencia de ensayo 1), Polisorbato 80 (Tween-80) (secuencia 2) o Gelucire® 44/14 (secuencia 3), solos o en combinacion entre sf o monoestearato de glicerol (GMS) (Figura 1). Posteriormente, las formulaciones mas prometedoras (indicadas con un asterisco) se produjeron de nuevo por fusion de Gelucire® (que era un solido cereo a temperatura ambiente), adicion despues del mismo al aceite de pescado. Despues de enfriar la mezcla, se anadieron los componentes solidos en forma de polvo en el siguiente orden: EDTA, SBTI, aprotinina e insulina; y el lfquido resultante se mezclo y homogeneizo en un molino de rodillos.

Ejemplo 2: Ensayo in vivo de diferentes formulaciones de emulsionantes

Materiales y metodos experimentales

Formulaciones

Las formulaciones ensayadas en los experimentos 2A y 2B se muestran a continuacion en la tabla 1. Los porcentajes de emulsionantes se expresan en peso/peso con respecto al peso de los lfquidos presentes.

Tabla 1

Nombre de la formulacion: Emulsionantes Otros ingredientes

Experimento 2A

GMS 2%: GMS 2% solo 3,375 g de SBTI, 6,75 mg de EDTA, 1,08 mg de aprotinina, 0,39 mg de insulina humana, 22,5 g. de aceite de pescado

2%-2%: 2% de GMS, 2% de lecitina Igual que antes.

2%-10%: 2% de GMS, 10% de lecitina Igual que antes.

10% lec.: 10% de lecitina solo Igual que antes.

Experimento 2B

A: 5% de lecitina, 2% de GMS Igual que antes.

B: 3% de lecitina, 12% de Gelucire 44/14 Igual que antes.

C: 6% de lecitina, 12% de Gelucire 44/14 Igual que antes.

D: 5% de Tween-80, 12% de Gelucire 44/14 Igual que antes.

E: 10% de Tween-80, 12% de Gelucire 44/14 Igual que antes.

F: 12% de Gelucire 44/14 solo Igual que antes.

Cna de animales

Salud animal: se usaron solo cerdos sanos, certificado por un veterinario clmico para el estudio. Alojamiento: 5 Aislados cuando tienen el CVC y agrupados en otros momentos. Lecho: hormigon + virutas de madera. Iluminacion: ciclo de luz de 12-12 h. Temperatura: 19-25 °C

Identificacion

Cada animal se identifico de forma unica por etiquetas en las orejas.

Diseno experimental

10 Los animales se privaron de alimento 24-36 h antes del ensayo. El acceso al agua era a voluntad.

Los animales se anestesiaron con ketamina 20 mg/kg + xilazina 20 mg/kg. Los cerdos en ayunas y anestesiados se colocaron sobre su lado izquierdo antes de administrar las formulaciones lfquidas mediante grna endoscopica, directamente al duodeno. Despues de inyeccion de la formulacion, se inyecto 1 ml de aceite de pescado, seguido de 10 ml de aire, para lavar el aparato, asegurando asf la administracion de la formulacion entera. Despues los cerdos 15 se devolvieron a su corral para la recuperacion completa del tratamiento de anestesia, que requirio 10-15 min. Se extrajeron periodicamente muestras de sangre (0,5 ml de las cuales se analizaron) del cateter de la lmea central (CVC) a lo largo del siguiente periodo de vigilancia de 240 min. Se determinaron las concentraciones de glucosa en la sangre de cada muestra, en cada tiempo de medicion. Los cochinillos se trataron por via intravenosa con gentamicina (100 mg/10 kg) despues de cada dfa del experimento para evitar la infeccion. En los casos en los que 20 las concentraciones de glucosa disminuyeron por debajo de 30 mg/dl, se dio a los cochinillos comida comercial para cerdos, y se vigilaron las concentraciones de glucosa a continuacion durante 30 minutos adicionales.

Se impuso un periodo de lavado de al menos 2 dfas entre los dfas de ensayo.

Resultados

Se ensayo la actividad in vivo de 10 formulaciones de insulina-aceite de pescado con diferentes emulsionantes en 25 los niveles de glucosa en la sangre en 2 experimentos separados. Los resultados se describen a continuacion.

Tabla 2. Resultados del experimento 2A. Los tres numeros en cada celda indican el valor inicial, el valor mas bajo y final (20 mg/dl). "Bajo" indica un valor menor de 20 mg/dl.

Formulacion: Cerdo 1 Cerdo 2 Cerdo 3 Cerdo 4 Cerdo 5 (estoma) Puntuacion

GMS 2%: 78 ^ 48 ^ 65 72 ^ bajo ^ bajo r CO CM r CO OO CD CM 67 ^ 32 ^ 60 55 ^ 21 ^ 58 3

2% de GMS, 2% de lecitina: 82 ^ Bajo ^ 65 r LO r OO CD h- h- r o CO r lO OO OO CD 78 ^ 23 ^ 61 2

2% de GMS, 10% de lecitina: 76 ^ Bajo ^ 77 76 ^ bajo ^ 21 76 ^ bajo ^ bajo r o aT _Q r ^ o h- h- 4

10% de lecitina: 51 ^ 63 ^ 71 50 ^ bajo ^ bajo 57 ^ bajo ^ bajo 61 ^ bajo ^ bajo 5

Los resultados del experimento 2B se indican en la figura 2.

Ejemplo 3: Una combinacion de insulina oral/exenatida oral reduce fuertemente los niveles de glucosa en la sangre y previene las fluctuaciones de glucosa posprandial

Material y metodos experimentales

5 Animales

Se usaron cerdos sanos de 25-30 kg, 3-4 meses de edad.

Diseno experimental

Se privo de alimento a los cerdos durante 24-36 horas antes de inicio del estudio. Los CVC se sustituyeron cada cinco dfas, salvo que las circunstancias requirieran la sustitucion mas temprano. Los animales se anestesiaron por 10 administracion de isoflurano mediante una mascara antes de intubacion de la traquea y conexion al respirador (2 litros de O2 por minuto y 3-5% de isoflurano, cuando fuera necesario), despues se colocaron sobre su costado izquierdo y se administraron capsulas directamente al duodeno, usando una cesta endoscopica mediante grna endoscopica. Cuando se administraron la insulina oral y la exenatida oral, la exenatida oral se suministro primero, seguido de la insulina oral en el espacio de 2-10 minutos. Los cerdos se devolvieron a su corral para dejar que se 15 recuperaran completamente del tratamiento anestesico y 30 minutos despues de la administracion de la capsula se les dio 10 g/kg de leche en polvo comercial para cerdo (Denkapig Premium (Denkavit)) preparado en un volumen igual de agua. Las comidas tipicamente se consumieron en el espacio de 7-15 minutos. Se extrajeron periodicamente muestras de sangre del CVC para el ensayo de la concentracion de glucosa a lo largo del siguiente periodo de vigilancia de 240 min. Los cochinillos se trataron por via intravenosa con gentamicina (100 mg/10 kg) 20 despues de cada dfa de experimento para evitar la infeccion. En los casos en los que las concentraciones de glucosa disminuyeron por debajo de 30 mg/dl, se dio a los cochinillos comida comercial para cerdos, y se vigilaron las concentraciones de glucosa a continuacion durante 30 minutos adicionales. Los cerdos de control no se trataron. Se usaron tres cerdos, cada uno de los cuales recibio cada formulacion un numero de veces. El numero de ensayos era n=5 para la insulina oral, n=5 para la exenatida oral, n=7 para la combinacion y n=6 para el control.

25 Formulaciones

La formulacion de insulina oral contema 8 mg de insulina, 12% de Gelucire 44/14, 150 mg de EDTA, 75 mg de SBTI, y 24 mg de aprotinina en 0,5-0,7 ml de aceite de pescado. El lfquido se recubrio mediante una capsula de recubrimiento enterico, de gel blando. La forma farmaceutica se fabrico en Swiss Caps AG.

La formulacion de exenatida oral contema 150 microgramos (mcg) de exenatida, 150 mg de EDTA, 75 mg de SBTI, 30 y 24 mg de aprotinina en 0,5-0,7 ml de aceite de pescado. El lfquido se recubrio mediante una capsula de recubrimiento enterico, de gel blando. La forma farmaceutica se fabrico en Swiss Caps AG.

Analisis estadfstico

Los p valores se calcularon usando una prueba t unilateral de datos emparejados.

Resultados

35 Como se esperaba, los cerdos tratados con placebo experimentaron fluctuaciones de glucosa despues de la ingestion calorica. Los cerdos tratados con exenatida oral 30 minutos antes de la ingestion calorica evitaron las fluctuaciones de glucosa a lo largo de 150 minutos despues de la ingestion calorica (figura 3). La insulina oral tambien detuvo las fluctuaciones de glucosa, pero no previno totalmente una subida de las concentraciones de glucosa en la sangre a lo largo de todo el periodo de vigilancia. Se observo un fuerte efecto mayor tras el tratamiento 40 combinado con exenatida oral e insulina oral. Ademas de prevenir completamente las fluctuaciones de glucosa, el tratamiento combinado redujo las concentraciones de glucosa a un mmimo de mas de 50% por debajo de los valores iniciales durante todo el periodo desde el tiempo de medicion de 70 minutos hasta el final de la sesion de vigilancia de 180 minutos. La diferencia en los niveles de glucosa en la sangre era estadfsticamente significativa comparado con el no tratamiento o tratamiento con insulina o exenatida solos (p valores: combinacion frente a control: 5,3 x 10'5;

'1 5

45 combinacion frente a insulina oral: 0,00015, y combinaciones frente a exenatida oral: 1,6 x 10 ).

Ejemplo 4: Ensayo de una combinacion de insulina oral/exenatida oral en sujetos humanos

Se administra a voluntarios, diabeticos o no diabeticos, antes de una comida, una o mas formas farmaceuticas que tienen un recubrimiento o capsula sensible al pH, que contienen una formulacion lfquida que contiene uno o mas inhibidores de proteasa, EDTA, insulina y exenatida. Una formulacion representativa es 50-200 mg por capsula de 50 SBTI; 20-30 mg por capsula de aprotinina; 75-200 mg de EDTA; 8-32 mg por capsula de insulina; 150-600 mcg por capsula de exenatida; y 0,5 - 0,7 ml de aceite de pescado, opcionalmente con un emulsionante (p. ej., 8-20% de Gelucire® 44/14). En otros experimentos, se administraron a los sujetos dos formulaciones lfquidas encapsuladas, una que contema inhibidor(es) de proteasa, EDTA, e insulina y la otra que contema inhibidor(es) de proteasa, EDTA, y exenatida. Una formulacion representativa es una primera capsula que contiene uno o mas inhibidores de

18

5

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45

proteasa, EDTA e insulina en una formulacion Ifquida, opcionalmente con un emulsionante (p. ej., Gelucire® 44/14), junto con una segunda capsula que contiene inhibidores de proteasa, emulsionante, EDTa y exenatida en una formulacion lfquida, opcionalmente con un emulsionante (p. ej., Gelucire® 44/14).

Los sujetos se estimulan con una carga de glucosa oral de 75 g despues de la administracion de la capsula (por ejemplo 30-60 minutos despues) y posteriormente se vigilan los parametros fisiologicos relevantes por recoleccion de muestras de sangre.

El siguiente protocolo es un protocolo de ejemplo que se puede usar. Los expertos en la tecnica apreciaran que se pueden modificar detalles no esenciales del protocolo sin comprometer su capacidad par proporcionar la informacion deseada.

Esquema general

Etapa I: La etapa I consiste en dos segmentos. El segmento 1 evaluara la seguridad, tolerabilidad y la farmacocinetica/farmacodinamia (PK/PD) del aumento de la dosis de la exenatida oral en ocho (8) voluntarios sanos. En el primer segmento, las dos dosis menores de exenatida oral (150 y 300 |jg de exenatida) se ensayaran aleatoriamente entre todos los sujetos sanos, en ayunas. Si se consideran seguras, se autorizara el aumento de la dosis adicional (450 y 600 jg de exenatida) en el segmento 2. La dosis mas alta tolerable se administrara entonces a los sujetos 60 minutos antes de una comida estandar (Consulta 5).

Etapa II: Esta etapa evaluara la respuesta del paciente con DMT2 al aumento de dosis de exenatida cuando se suministra 60 min antes de una comida estandar. Se incluiran controles con placebo en el estudio, asf como el tratamiento con un control activo de Byetta® (5 jg) suministrado por via subcutanea 30 min antes de una comida estandar. Ademas, los sujetos con DMT2 se trataran con una capsula oral de insulina que contiene 16 mg de insulina y con una combinacion de insulina oral/exenatida oral, en dos consultas del estudio independientes, 60 minutos antes de una comida estandar.

Ademas de la exenatida y/o insulina, todas las formulaciones conteman 75 mg de SBTI, 24 mg de aprotinina y 150 mg de EDTA, todos en aceite de pescado, en capsulas con recubrimiento enterico.

Interpretacion:

Se calculara y comparara el AUC de las reducciones de glucosa y fluctuacion de insulina entre los diferentes tratamientos.

Poblacion del estudio:

Sanos: Individuos sanos, varones.

DMT2: La presencia de DMT2 se determina por los criterios de la OMS. Los sujetos pueden ser de cualquier genero, entre 18 y 60 anos de edad, con control glucemico estable, que opcionalmente toman medicacion antidiabetes oral (p. ej., metformina y/o TZD), y no embarazadas o lactantes. Los sujetos continuaran con sus medicamentos y posologfas habituales hasta la noche anterior al estudio. Los pacientes reanudaran su medicacion habitual despues de completarse cada sesion del estudio (el mismo dfa). Aparte de la diabetes, los sujetos deben tener un buen estado de salud, con niveles de enzimas hepaticas estables (inferior a 2x el intervalo superior normal)

Procedimientos

Etapa I: El segmento I de la fase de tratamiento consistira en dos consultas, que evaluan 150 jg y 300 jg de exenatida oral frente al tratamiento con placebo en sujetos sanos, administrados por la manana despues de un ayuno de 8 h. El aumento de dosis adicional al segmento II sera autorizado si se demuestran seguridad y tolerabilidad y que no hay efectos secundarios graves. En el segmento II, se administrara a los sujetos en ayunas 450 y/o 600 jg de exenatida oral y/o placebo a individuos en ayunas (Apendice 1). La dosis tolerable mas alta se suministrara entonces 60 minutos antes de la ingestion de una comida estandar.

A cada administracion de dosis le seguira un periodo de lavado de al menos 72 horas.

Fase de seleccion:

Se pueden llevar a cabo las siguientes evaluaciones:

- Anamnesis

- Exploracion ffsica

- Antecedentes farmaceuticos

- ECG

5

10

15

20

25

30

35

40

- Signos vitales (presion sangumea, frecuencia cardiaca). Los signos vitales se mediran en posicion sentada despues de al menos 5 minutos de reposo.

- Evaluaciones de laboratorio clmico (bioqmmica, hematolog^a, HgAIC)

Fase de tratamiento:

1. Las muestras de sangre se obtendran a los -45, -30, -15, 0, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135, 150 min, donde tiempo=0 es el momento en el que se ingiere la capsula, y se lleva a cabo ensayo de glucosa, insulina, peptido C, asf como contenido de analogo de GLP-1.

2. Se servira una comida estandar 60 minutos despues de la administracion de la exenatida oral a pacientes sanos solo en la consulta 5.

3. Se pueden evaluar los smtomas gastrointestinales.

Etapa II:

Se administraran 300 y 600 microgramos de exenatida, o las dos dosis mas altas tolerables determinadas en la etapa I, en paralelo y en combinacion con 16 mg de insulina, por ejemplo como 16 mg combinados con 300 microgramos, 60 minutos antes de una comida estandar. En las consultas del estudio en las que se administra una inyeccion de Byetta® (5 |jg), se servira una comida 30 minutos despues de la administracion de la dosis.

Fase de seleccion:

Igual que para la etapa I.

Fase de tratamiento:

1. Las muestras de sangre se extraeran a los -15, 0, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135, 150 y 240 min, donde tiempo=0 es el momento en el que se ingiere la capsula, y se lleva a cabo ensayo de glucosa, insulina, peptido C, asf como niveles de analogo de GLP-1 (Cmax, Tmax y/o AUC)

2. Se servira una comida estandar 60 minutos despues de la administracion oral o 30 minutos despues de la administracion subcutanea de Byetta®.

3. Se pueden evaluar los smtomas gastrointestinales.

Tratamientos (suministrados en un orden aleatorio):

a. 300 o 600 mcg de exenatida oral o placebo o 5 mcg de

b. 300 o 600 mcg de exenatida oral o placebo o 5 mcg de

c. 300 o 600 mcg de exenatida oral o placebo o 5 mcg de

d. 16 mg de insulina oral

e. 300 mcg de exenatida oral + 16 mg de insulina oral Evaluaciones de seguridad:

- Se recogeran los acontecimientos adversos a lo largo del estudio empezando en el momento en el que el sujeto firma el formulario de consentimiento hasta el final de las evaluaciones del estudio.

- Se registraran los medicamentos/tratamientos concomitantes a lo largo de la duracion del estudio, empezando en el momento en el que el sujeto firma el consentimiento informado.

- Los signos vitales (presion sangumea, frecuencia cardiaca) se mediran en posicion sentada despues de al menos 5 minutos de reposo en los siguientes tiempos:

- Seleccion

- Aproximadamente 20 minutos antes de la administracion del farmaco del estudio

- Aproximadamente 1 y 2,5 horas despues de la administracion del farmaco del estudio

- Las evaluaciones de laboratorio clmico (qmmica, hematologfa) se llevaran a cabo en la seleccion y al final del estudio o interrupcion temprana.

- Exploracion ffsica en la seleccion y al final del estudio o interrupcion temprana.

exenatida subcutanea exenatida subcutanea exenatida subcutanea

- Electrocardiogramas (ECG) en la seleccion. Se llevara a cabo un ECG al final del estudio o interrupcion temprana, solamente si el investigador considera que es necesario.

Ejemplo 5: Ensayo de una combinacion de insulina oral/exenatida oral en el tratamiento de la diabetes inestable

Se hace el seguimiento de sujetos con niveles de glucosa en ayunas elevados (por ejemplo, sujetos que tienen un 5 nivel de glucohemoglobina [HgA1c] de 8-10% o un nivel de azucar en plasma en ayunas de 100 a 125 mg/dl o de 5,6 a 6,9 mmol/l) durante varios dfas usando una monitorizacion continua de glucosa (CGM) con enmascaramiento para establecer un valor inicial. Durante varios dfas posteriores se les administra una formulacion descrita en la presente memoria, opcionalmente antes de comidas. El CGM con enmascaramiento se lleve a cabo para determinar la eficacia de las formulaciones.

10 En las reivindicaciones, la palabra “comprenden”, y variaciones de la misma tales como “comprende”, “que comprende” y similares, indican que los componentes citados estan incluidos, pero no en general la exclusion de otros componentes.

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Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

REIVINDICACIONES

1. Una composicion farmaceutica oral, comprendiendo la composicion

(a) una formulacion Kquida basada en aceite, comprendiendo dicha composicion farmaceutica oral una insulina, un analogo de GLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde dicha formulacion Kquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento que resiste la degradacion en el estomago;

o

(b) una combinacion de i) una primera formulacion lfquida basada en aceite, comprendiendo dicha primera formulacion lfquida basada en aceite una insulina, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes; y ii) una segunda formulacion lfquida basada en aceite, comprendiendo dicha segunda formulacion lfquida basada en aceite un analogo de GLP-1, un inhibidor de tripsina y un agente quelante de cationes divalentes, en donde cada una de dicha primera formulacion lfquida basada en aceite y dicha segunda formulacion lfquida basada en aceite esta rodeada por un recubrimiento que resiste la degradacion en el estomago.
2. La composicion farmaceutica oral de la reivindicacion 1, en donde dicha formulacion lfquida basada en aceite, o tanto dicha primera formulacion lfquida basada en aceite como dicha segunda formulacion lfquida basada en aceite, comprende ademas un componente proporcionado como una mezcla de (a) un monoacilglicerol, un diacilglicerol, un triacilglicerol, o una mezcla de los mismos; y (b) un ester de polietilenglicol (PEG) de un acido graso.
3. La composicion farmaceutica oral de la reivindicacion 1, en donde dicha formulacion lfquida basada en aceite, o tanto dicha primera formulacion lfquida basada en aceite como dicha segunda formulacion lfquida basada en aceite, comprende ademas un componente autoemulsionante.
4. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicha insulina esta presente en una cantidad entre 4-12 mg inclusive para un paciente adulto o una cantidad correspondiente por peso corporal para un paciente pediatrico.
5. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicho analogo de GLP-1 esta presente en una cantidad entre 100-300 microgramos inclusive para un paciente adulto o una cantidad correspondiente por peso corporal para un paciente pediatrico.
6. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde dicho inhibidor de tripsina se selecciona del grupo que consiste en inhibidor de la tripsina de soja (SBTI), inhibidor Bowman-Birk (BBI) y aprotinina.
7. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que ademas comprende un segundo inhibidor de tripsina.
8. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde dicha agente quelante es EDTA.
9. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde dicha aceite es aceite de pescado.
10. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde dicha formulacion lfquida basada en aceite esta exenta de agua.
11. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde dicho analogo de GLP-1 es exenatida.
12. La composicion farmaceutica oral de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde dicho recubrimiento es una capsula sensible al pH.
13. La composicion farmaceutica oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para usar para reducir la fluctuacion de glucosa preprandial en un ser humano o no humano que tiene diabetes mellitus tipo 2.
14. La composicion farmaceutica oral para el uso de la reivindicacion 13, en donde dicha insulina esta presente en una cantidad entre 4-12 mg inclusive, dicho analogo de GLP-1 es exenatida, y dicha exenatida esta presente en una cantidad de 100-300 microgramos inclusive.
15. La composicion farmaceutica oral de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para usar en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2 en un ser humano o animal no humano.